CN107137448A - 一种短果杜鹃抗氧化提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,包括以下步骤:(1)将短果杜鹃植株浸入甲醇溶液中,超声提取,过滤;(2)将步骤(1)得到的提取液经过减压蒸馏,得到浓缩物;(3)将步骤(2)得到的浓缩物溶于水,得到混合溶液;采用正己烷对混合溶液进行多次萃取,直至正己烷萃取相澄清为止;所得水相采用乙酸乙酯进行多次萃取,直到乙酸乙酯萃取相澄清为止,将所得乙酸乙酯萃取相进行浓缩,干燥,得到短果杜鹃抗氧化提取物。该制备方法制备工艺简单,所得的短果杜鹃抗氧化提取物具有较强的抗氧化性质,可应用于抗氧化剂的合成。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取技术领域,尤其涉及一种短果杜鹃抗氧化提取物及其制备方法和应用。
背景技术
人体衰老与恶性肿瘤的发生均于人体细胞中过量的自由基,特别是与活性氧自由基有关。人体每个细胞的DNA每天都要受到104次氧化攻击而引起损伤。自由基摧毁细胞膜,使细胞不能吐故纳新,并丧失了对细菌和病毒的抵御能力;自由基攻击正在复制中的基因,造成基因突变,诱发癌症的发生。而癌症的发病率以每年在3%到5%的速度在提高,以癌症引起的死亡率已经成为世界第一的死亡率。因此,寻找有效的抗氧化的药物仍是全球性的严峻课题。
短果杜鹃(Rhododendron brachycarpum)为杜鹃花科多年生常绿小灌木,株高10-25cm,径横卧。主要生长于长白山海拔1300-2650m,属长白山高山苔原带生态系统中的优势种群。目前,对短果杜鹃大多集中在遗传结构、组织培养和植株解剖等方面的研究。关于短果杜鹃提取物生理活性方面鲜有报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足,提供一种制备工艺简单的短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,所得的短果杜鹃抗氧化提取物具有较强的抗氧化性质,可应用于抗氧化剂的合成。
为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:
一种短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将短果杜鹃植株浸入甲醇溶液中,超声提取,过滤;
(2)将步骤(1)得到的提取液经过减压蒸馏,得到浓缩物;
(3)将步骤(2)得到的浓缩物溶于水,得到混合溶液;采用正己烷对混合溶液进行多次萃取,直至正己烷萃取相澄清为止;所得水相采用乙酸乙酯进行多次萃取,直到乙酸乙酯萃取相澄清为止,将所得乙酸乙酯萃取相进行浓缩,干燥,得到短果杜鹃抗氧化提取物。
优选地,所述步骤(1)还包括:将滤渣浸入甲醇溶液中,超声,过滤;重复滤渣浸没-超声-过滤过程多次,合并滤液得到提取液。
优选地,所述步骤(1)中,所述短果杜鹃植株为干燥后的短果杜鹃植株,所述甲醇溶液的质量浓度为95%,所述干燥后的短果杜鹃植株与甲醇溶液的质量比为1∶5。
优选地,所述步骤(1)中,超声提取功率为100W,提取时间为1h。
优选地,所述步骤(2)中,所述减压蒸馏的真空度0.04~0.06Mpa,温度为43℃~48℃;减压蒸馏至无醇味,结束减压蒸馏,得到所述浓缩物。
优选地,所述步骤(3)中,所述浓缩物与水的质量比为1∶1;每次正己烷萃取中,所述混合溶液与正己烷的体积比为1∶1;每次水相萃取中,所述水相与乙酸乙酯的体积比为1∶1。
优选地,所述步骤(3)中,所述浓缩的具体工艺为:在40℃、0.06Mpa条件下对乙酸乙酯萃取相进行减压蒸馏浓缩。
作为一个总的发明构思,本发明还提供一种短果杜鹃抗氧化提取物,所述短果杜鹃抗氧化提取物由上述的制备方法所制得。
优选地,所述短果杜鹃抗氧化提取物中的主要抗氧化成分包括杜鹃素、芦丁、单宁酸、香草酸和丁香酸。
作为一个总的发明构思,本发明还提供一种上述的制备方法所制得的短果杜鹃抗氧化提取物在制备抗氧化剂中的应用。
与现有技术相比,本发明的优点在于:
本发明短果杜鹃抗氧化提取物的制备工艺简单实用,制得的提取物主要抗氧化成分包括杜鹃素、芦丁、单宁酸、香草酸和丁香酸等,抗氧化活性好;实验结果显示:短果杜鹃提取物具有较强的抗氧化性质,其中还原能力与清除DPPH自由基的能力比合成抗氧化剂BHT要好。
附图说明
图1为本发明不同浓度的短果杜鹃抗氧化提取物溶液与BHT溶液对DPPH·自由基的清除能力的对照图。
图2为本发明不同浓度的短果杜鹃抗氧化提取物溶液与BHT溶液对Fe3+还原抗氧化能力的对照图。
具体实施方式
以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述,但并不因此而限制本发明的保护范围。
实施例1:
一种本发明的短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将干燥后的40g短果杜鹃植株(包括根茎和枝叶部分)浸入200g质量百分比浓度95%的甲醇溶液中超声提取,超声功率为100W,时间为1h,过滤,滤渣中再添加200g甲醇溶液超声提取1h,重复提取3次后,合并滤液得到提取液;
(2)提取液在45℃、真空度0.05Mpa条件下减压蒸馏浓缩至无醇味;
(3)按照质量比1∶1的比例在浓缩后的提取物中添加蒸馏水,混和均匀,按混合溶液与正己烷的体积比1∶1的比例,在混合溶液中加入正己烷进行萃取,按上述方法反复多次萃取,直到正己烷萃取相澄清为止,分得两层,上层为正己烷萃取相。下层为水层。按水层与乙酸乙酯的体积比1∶1的比例,在水层中加入乙酸乙酯进行萃取,按上述方法反复多次萃取,直到乙酸乙酯萃取相澄清为止,分得两层,上层为乙酸乙酯萃取相。下层为水层。收集乙酸乙酯萃取相,在40℃、真空度0.06Mpa条件下减压蒸馏浓缩乙酸乙酯萃取相,浓缩物先在40℃下常压干燥12h后,再在50℃下真空干燥8h,得到短果杜鹃抗氧化提取物。
实施例2:
本发明的短果杜鹃抗氧化提取物对DPPH·自由基的清除能力测定
试剂以及仪器来源为:硫酸亚铁、三氯化铁、磷酸钠、1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)等购自沈阳化学试剂厂;723型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司制造);RE-52旋转式蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);电热恒温水浴锅(北京西城区医疗器械厂);SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。
试验过程如下:
将实施例1所得的短果杜鹃抗氧化提取物溶于甲醇,得到三组浓度为10μg/ml、30μg/ml和50μg/ml的短果杜鹃抗氧化提取物溶液各3.0mL作为实验组,另外采用三组等体积的10μg/ml、30μg/ml和50μg/ml的2,6-二叔丁基对甲酚甲醇溶液作为对照组。在每个实验组和对照组中加入1.0mL 0.2mmol/L的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼甲醇溶液启动反应,使每个反应体系中DPPH的终浓度为0.05mmol/L。摇匀后于室温下避光放置30min,然后以甲醇为参比,测定每个反应体系在517nm处的吸光度。每个反应体系对DPPH的抑制率采用下式计算:
抑制率(%)=(1-A样/A0)×100%,其中,A0表示未加样的DPPH溶液的吸光度,A样表示样品与DPPH·反应后的吸光度。
结果见图1,结果表明,随着短果杜鹃抗氧化提取物浓度的增加,对DPPH自由基的抑制率也相应呈上升趋势。当短果杜鹃抗氧化提取物浓度为30μg/ml及以上时,对DPPH自由基的可以达到75%以上,且比相应体积浓度的BHT抑制效果要好。
实施例3:
本发明的短果杜鹃抗氧化提取物对Fe3+还原抗氧化能力测定
试验过程如下:
将实施例1所得的短果杜鹃抗氧化提取物溶于甲醇,得到三组浓度为10μg/ml、30μg/ml和50μg/ml的短果杜鹃抗氧化提取物溶液各1.0mL作为实验组,另外采用三组等体积的10μg/ml、30μg/ml和50μg/ml的2,6-二叔丁基对甲酚甲醇溶液作为对照组。在每个实验组和对照组中加入1.0mL浓度为0.2mol/L,pH为6.6的磷酸钠缓冲液及1.0mL质量浓度1%的铁氰化钾溶液,将每个反应体系于50℃水浴反应20min后急速冷却,分别加入10%的三氯乙酸溶液1.0mL,3000r/min离心10min;再分别取上清液2.5mL,每个上清液中加入蒸馏水2.0mL及0.1%三氯化铁溶液0.5mL,混合均匀,10min后于700nm测定其吸光值,吸光值越大表示还原能力越强。结果如图2所示。
从图2中可以看出:还原能力随着短果杜鹃抗氧化提取物浓度的增加呈线性上升趋势,当短果杜鹃抗氧化提取物浓度为30μg/ml及以上时,吸光度为2.233以上,比相同体积浓度的BHT的还原能力还要强。
最后有必要在此说明的是:以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明,不能理解为对本发明保护范围的限制,本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)将短果杜鹃植株浸入甲醇溶液中,超声提取,过滤;
(2)将步骤(1)得到的提取液经过减压蒸馏,得到浓缩物;
(3)将步骤(2)得到的浓缩物溶于水,得到混合溶液;采用正己烷对混合溶液进行多次萃取,直至正己烷萃取相澄清为止;所得水相采用乙酸乙酯进行多次萃取,直到乙酸乙酯萃取相澄清为止,将所得乙酸乙酯萃取相进行浓缩,干燥,得到短果杜鹃抗氧化提取物。
2.根据权利要求1所述的短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)还包括:将滤渣浸入甲醇溶液中,超声,过滤;重复滤渣浸没-超声-过滤过程多次,合并滤液得到提取液。
3.根据权利要求2所述的短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述短果杜鹃植株为干燥后的短果杜鹃植株,所述甲醇溶液的质量浓度为95%,所述干燥后的短果杜鹃植株与甲醇溶液的质量比为1:5。
4.根据权利要求3所述的短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,超声提取功率为100W,提取时间为1h。
5.根据权利要求1所述的短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述减压蒸馏的真空度0.04~0.06Mpa,温度为43℃~48℃;减压蒸馏至无醇味,结束减压蒸馏,得到所述浓缩物。
6.根据权利要求1~5任一项所述的短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述浓缩物与水的质量比为1∶1;每次正己烷萃取中,所述混合溶液与正己烷的体积比为1∶1;每次水相萃取中,所述水相与乙酸乙酯的体积比为1∶1。
7.根据权利要求1~5任一项所述的短果杜鹃抗氧化提取物的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述浓缩的具体工艺为:在40℃、0.06Mpa条件下对乙酸乙酯萃取相进行减压蒸馏浓缩。
8.一种短果杜鹃抗氧化提取物,其特征在于,所述短果杜鹃抗氧化提取物由权利要求1~7任一项所述的制备方法所制得。
9.根据权利要求8所述的短果杜鹃抗氧化提取物,其特征在于,所述短果杜鹃抗氧化提取物中的主要抗氧化成分包括杜鹃素、芦丁、单宁酸、香草酸和丁香酸。
10.一种如权利要求1~7任一项所述的制备方法所制得的短果杜鹃抗氧化提取物在制备抗氧化剂中的应用。
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