CN107118089A - 一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用 - Google Patents

一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107118089A
CN107118089A CN201710343279.7A CN201710343279A CN107118089A CN 107118089 A CN107118089 A CN 107118089A CN 201710343279 A CN201710343279 A CN 201710343279A CN 107118089 A CN107118089 A CN 107118089A
Authority
CN
China
Prior art keywords
paeonol
prepared
extraction
temperature
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201710343279.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107118089B (zh
Inventor
李吉来
傅国华
刘少勇
郑泽苗
刘文丽
赵家禾
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Guerlain Cosmetics Co Ltd
Original Assignee
Guangzhou Guerlain Cosmetics Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Guerlain Cosmetics Co Ltd filed Critical Guangzhou Guerlain Cosmetics Co Ltd
Priority to CN201710343279.7A priority Critical patent/CN107118089B/zh
Publication of CN107118089A publication Critical patent/CN107118089A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107118089B publication Critical patent/CN107118089B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/78—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/35—Ketones, e.g. benzophenone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C45/00—Preparation of compounds having >C = O groups bound only to carbon or hydrogen atoms; Preparation of chelates of such compounds
    • C07C45/78—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C45/81—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by change in the physical state, e.g. crystallisation

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明公开了一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用。本发明通过用水温浸提取牡丹酚，最大限度地提取并保留了牡丹酚的含量与活性；通过加入低浓度乙醇水溶液热溶冷析的方法精制纯化牡丹酚单体成分，不仅可将杂质有效祛除，而且牡丹酚的转移率高，约98％。本发明所提供的方法，工艺流程简单，操作方便，产品质量控制方便，有可操作性，是适合于工业生产的安全可靠的制备方法。得到的牡丹酚单体成分纯度高，在将其用于制备化妆品时，先溶解或加热溶解于制备化妆品允许的药物赋形剂或载体中，无需包合步骤，即可克服现有技术中牡丹酚使用产生的撮泥感及活性成分难被皮肤吸收的不足之处。

Description

一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用
技术领域
本发明涉及植物提取物领域和化妆品领域，特别涉及一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用。
背景技术
牡丹酚(paeonol)又称丹皮酚，是芍药科植物牡丹(Paeoniamoutan Sim.)的牡丹皮、牡丹种皮和牡丹果荚中及萝摩科植物徐长卿(Pycnostelmapaniculatum K.Schum)的全草中的主要活性成分。其化学式为2-羟基-4-甲氧基苯乙酮，分子式为C9H10O3，相对分子质量为166.18。牡丹酚为白色结晶或结晶性粉末，有特异性气味，味微辣，易溶于乙醇和甲醇，在热水中溶解，不溶于冷水，能随水蒸汽挥发，熔点48℃～51℃。牡丹酚药理活性广泛，研究表明牡丹酚具有抑菌抗炎、解热镇痛、镇静催眠、解痉、抗过敏、活血化瘀、增强免疫功能等作用，临床多用于心脑血管、变态反应、炎症、免疫系统、呼吸系统、循环系统、内分泌系统等多种疾病，同时还具有明显的抗肿瘤、逆转MDR、抗血栓、抗动脉粥样硬化、抗心律失常的作用。在日化方面，现研究发现，牡丹酚还具有卓越的抗过敏、美白、抗皱、淡斑、去粉刺等作用，它能够有效地抑制组胺的释放、抑制抗体生产细胞活化CD40单抗、重组白介素-4和重组组胺释放因子；有较强的抗氧化与自由基清除作用，抑制细胞内O2 -自由基产生，能促进皮肤血液循环，活化皮肤衰老的表皮细胞，防皮肤老化、消除皱纹；能将皮肤中沉积色素还原退色，使皮肤增白，消淤化斑；能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等细菌，抑制各种炎症因子的形成，具有很好地抗炎、促进皮肤新陈代谢，去粉刺作用；对色斑、肌肉痛、皮肤瘙痒、牛皮癣、带状疮疹、湿疹具有较好的治疗和保健效果，此外，在牙膏、含漱液、牙粉、牙痛水中有较好的作用。
随着人们群众生活水平的日益提高，对医药保健及化妆品产品需求的大副增长，目前国内牡丹酚需求量也在大副增长，但大部分依赖进口。为了适应牡丹酚日益增长的需要，如发明专利CN201310577900.8-丹皮酚萃取方法：公开了从牡丹皮或徐长卿中CO2超临界萃取牡丹酚的方法；现有牡丹酚的提取分离方法有：醇提法、水蒸气蒸馏法、CO2超临界流体萃取法。醇提法、水蒸气蒸馏法存在能耗高、生产周期长、收率低的缺陷；特别是牡丹酚对温度的不稳定性，在较长时间加热蒸馏时易氧化变色。CO2超临界流体萃取法虽然提取效率高，但是由于设备造价高，工业化生产难度大，成本高。本发明采用的水温浸提取牡丹酚的方法可克服上述不足，采用该方法生产，收率高，操作简单，能耗低，易实现产业化放大，目前还未见有报道。
又由于牡丹酚气味特异，挥发性强，对光照、温度和湿度均不稳定，水溶性差，不利于直接应用于医药和日化方面，常采用包合的方式对其进行处理。如发明专利CN201410124917.2-一种丹皮酚制剂的制备方法：公开了用水蒸气蒸馏法从牡丹皮中提取牡丹酚的方法并提供了一种牡丹酚的包合物的包合方法。本发明牡丹酚在制备化妆品中的应用，巧妙利用了牡丹酚的特性及化妆品制备的多相组成，其牡丹酚无需包合，即能达到克服上述不足，大大地节约了成本。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种从植物中制备牡丹酚的方法。
本发明的另一目的在于提供通过上述方法得到的牡丹酚单体成分。
本发明的再一目的在于提供所述的牡丹酚单体成分在制备化妆品中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种从植物中制备牡丹酚的方法，包括如下步骤：
(1)牡丹酚的提取：以牡丹皮、牡丹种皮、牡丹果荚或徐长卿全草为原料，进行净选、干燥，粉碎，得到的粉末用水温浸提取或用水温浸超声提取；提取完后，保温趁热固液分离，取液体，得到含牡丹酚的提取液；
(2)牡丹酚粗体的分离：将步骤(1)得到的含牡丹酚的提取液放冷至室温，于1～25℃的条件下静置24小时以上，固液分离，弃去液体，收集固体，得到牡丹酚粗提物；
(3)牡丹酚单体成分的精制纯化：通过步骤①或步骤①和②进行精制纯化；
①第一次结晶：往步骤(1)得到的牡丹酚粗提物中加入浓度为体积百分比20～40％的乙醇水溶液，加热溶解，保温趁热固液分离，取液体，液体置25℃以下环境中搅拌降温，至有针状结晶析出，于1～25℃的条件下静置24小时以上，固液分离，弃去液体，收集结晶，为牡丹酚单体成分；
②重结晶；将得到的结晶再按照步骤①重结晶，得到纯度更高的牡丹酚单体成分。
步骤(1)中所述的粉碎的程度优选为粉碎成5～10目的粗粉；优选为粉碎成5～8目的粗粉。
步骤(1)中所述的用水温浸提取或用水温浸超声提取中的温度为40～80℃；优选50～70℃；更优选为60～65℃；最优选为60℃。
步骤(1)中所述的用水温浸超声提取中的超声的条件优选为200～300Hz；更优选为250Hz。
步骤(1)中所述的用水温浸提取或用水温浸超声提取的次数优选为2～3次，具体步骤优选如下：提取次数为2次时：第一次加入相当于粉末质量10倍量的水，充分搅拌混匀，加热温浸提取1～3小时，或加热温浸超声提取0.5～2.0小时；第二次加入相当于粉末质量8倍量的水，加热温浸提取0.5～2小时，或加热温浸超声提取0.5～1.5小时；提取次数为3次时：前两次与提取次数为2次时的步骤相同，第三次加入相当于粉末质量8倍量的水，加热温浸提取0.5～2小时，或加热温浸超声提取0.5～1.5小时；提取完后，保温趁热固液分离，合并2～3次分离得到的液体，弃去固体；具体步骤更优选如下：提取次数为2次时：第一次加入相当于粉末质量10倍量的水，充分搅拌混匀，加热温浸提取2～3小时，或加热温浸超声提取1～2小时；第二次加入相当于粉末质量8倍量的水，加热温浸提取1～2小时，或加热温浸超声提取0.5～1.5小时；提取次数为3次时：前两次与提取次数为2次时的步骤相同，第三次加入相当于粉末质量8倍量的水，加热温浸提取1～2小时，或加热温浸超声提取0.5～1.5小时；提取完后，保温趁热固液分离，合并2～3次分离得到的液体，弃去固体。
步骤(2)中所述的室温指的是5～35℃；优选为10～30℃；更优选为20～28℃；最优选为25℃。
步骤(2)中所述的静置的条件优选为于3～5℃静置24小时。
步骤(3)①中所述的加热的温度优选为40～80℃；优选50～70℃；更优选为60～65℃；最优选为60℃。
步骤(3)①和②中所述的乙醇水溶液的浓度优选为体积百分比25～35％；更优选为体积百分比30％。
步骤(3)①中所述的乙醇水溶液的用量优选为每克牡丹酚粗提物配比60～150ml乙醇水溶液；更优选为配比70～120ml乙醇水溶液；最优选为配比75～80ml乙醇水溶液。
步骤(3)①中所述的搅拌降温的环境温度优选为20～23℃。
步骤(3)①中所述的静置的条件优选为于2～5℃静置24小时。
步骤(3)②中所述的重结晶步骤中乙醇水溶液的用量优选为每克结晶配比60～150ml乙醇水溶液；更优选为配比80～120ml乙醇水溶液；最优选为配比90～110ml乙醇水溶液。
步骤(3)②中所述的重结晶步骤中所述的加热的温度优选为40～80℃；优选50～70℃；更优选为60～65℃；最优选为60℃。
步骤(3)②中所述的重结晶步骤中所述的静置的条件优选为于2～5℃静置24小时。
步骤(3)②中所述的重结晶的次数优选为1次，得到的牡丹酚单体成分纯度含量≥98％。
本发明中所述的固液分离可通过过滤或离心进行。
所述的方法在制备化妆品中的应用。
一种牡丹酚单体成分，通过上述制备方法得到，纯度含量≥98％。
所述的牡丹酚单体成分在制备化妆品中的应用。
所述的化妆品是具有抗过敏、美白、抗皱、淡斑和去粉刺作用的化妆品。
抗过敏作用是指牡丹酚制备的化妆品可抑制组胺的释放、显著抑制抗体生产细胞活化CD40单抗、重组白介素-4(ril-4)和重组组胺释放因子(rhrf)，有效下调表达IL-4在细胞活化的逆转录聚合酶链反应，可以显著抑制过敏性细胞因子白细胞介素33(IL-33)与来自人嗜碱性粒细胞(KU812细胞)的CC族趋化因子2(CCL-2)、CC族趋化因子5(CCL-5)、人白介素-8(CXCL-8)以及人白介素-6(IL-6)的释放，从而发挥抗过敏的作用；美白、抗皱、淡斑刺是指牡丹酚制备的化妆品有较强的抗氧化与自由基清除作用，能促进皮肤血液循环，活化皮肤衰老的表皮细胞，防皮肤老化、消除皱纹，抑制细胞内O2-自由基产生，将皮肤中沉积色素还原退色，使皮肤增白，消淤化斑；去粉刺是指牡丹酚制备的化妆品有较强的抗菌消炎作用，能抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌等细菌，能显著抑制各种炎症因子的形成，具有很好地抗炎、促进皮肤新陈代谢，去粉刺作用。
所述的牡丹酚单体成分在制备化妆品中的应用，包括如下步骤：将所述的牡丹酚单体成分需要先溶解或加热溶解于制备化妆品允许的药物赋形剂或载体中，再与其他成分混合。
所述的牡丹酚单体成分在所述的化妆品中的含量是治疗有效量。
所述的制备化妆品允许的药物赋形剂或载体可以选自：溶剂、增溶剂、防腐剂、抗氧剂、pH调节剂、促渗剂、脂质体、保湿剂、增稠剂、螯合剂、肤感调节剂、表面活性剂、乳化剂、推进/抛射剂、香精、色素，以及其他功效添加剂。
所述的化妆品的形式是乳化体系、表面活性剂体系、水剂、水凝胶、泡沫凝胶、巴布剂、膜剂、外用搽剂、软膏剂。
所述的乳化体系和所述的表面活性剂体系可以为洗面奶、沐浴露、化妆水、护肤啫喱、护肤乳液、护肤霜、精华液、眼霜、气雾或喷雾形式。这些形式可通过本领域技术人员熟知的方法制备。
为了说明从植物中制备牡丹酚及其在化妆品中的应用的有益效果，本发明以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌为研究对象，通过药敏纸片法、二倍稀释法实验证明本发明的制备的牡丹酚具有显著的抗菌消炎作用；以酪氨酸酶为研究对象，通过牡丹酚对酪氨酸酶的抑制试验，证明本发明的牡丹酚具有显著的美白作用。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明从植物中制备牡丹酚的方法，克服了牡丹酚的现已有醇提法、水蒸气蒸馏法、CO2超临界流体萃取法等方法的缺点，根据牡丹酚的性质与特点，发明了用水温浸提取的新方法，最大限度地提取并保留了牡丹酚的含量与活性。
(2)本发明从植物中制备牡丹酚的方法中，牡丹酚单体成分的精制纯化，首次发明了通过加入低浓度乙醇水溶液热溶冷析的方法，不仅可将杂质有效祛除，而且牡丹酚的转移率高(约98％)。
(3)由于牡丹酚气味特异，挥发性强，对光照、温度和湿度均不稳定，水溶性差，不利于直接应用于化妆品，常采用包合的方式对其进行处理，否则其制备的化妆品易产生撮泥感及活性成分难被皮肤吸收。本发明巧妙利用了牡丹酚的特性及化妆品制备的多相组成，将牡丹酚先溶解或加热溶解于制备化妆品允许的脂溶性的赋形剂或载体中，其牡丹酚无需包合，即能达到克服上述不足，大大地节约了成本。
(4)采用本发明所提供的方法，工艺流程简单，操作方便，产品质量控制方便，有可操作性，是适合于工业生产的安全可靠的制备方法。
附图说明
图1是从牡丹皮中制备得到的牡丹酚照片图。
图2是从牡丹皮中制备得到的牡丹酚HPLC色谱图；其中，图A为牡丹酚对照品，图B为牡丹皮中制备的牡丹酚样品。
图3是从牡丹果荚中制备得到的牡丹酚照片图。
图4是从牡丹果荚中制备得到的牡丹酚HPLC色谱图；其中，图A为牡丹酚对照品，图B为牡丹果荚中制备的牡丹酚样品。
图5是从徐长卿的根及根茎中制备得到的牡丹酚照片图。
图6是从徐长卿的根及根茎中制备得到的牡丹酚HPLC色谱图；其中，图A为牡丹酚对照品，图B为徐长卿的根及根茎中制备的牡丹酚样品。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：从牡丹皮中提取制备牡丹酚
(1)牡丹酚的提取
以牡丹皮为原料，进行净选，经过干燥，粉碎成约8目的粗粉。取牡丹皮粗粉1000g，加入10倍量(10kg)的加热至60℃的温水，充分搅拌混匀，加热并保持水温60℃，温浸提取2.5小时并不时搅拌，在保温条件下趁热过滤，滤液待用；滤渣继续加入8倍量(8kg)的加热至60℃的温水，充分搅拌混匀，加热并保持水温60℃，温浸提取1.5小时并不时搅拌，在保温条件下趁热过滤，滤液待用；滤渣继续加入8倍量(8kg)的加热至60℃的温水，充分搅拌混匀，加热并保持水温60℃，温浸提取1.5小时并不时搅拌，在保温条件下趁热过滤，滤液与前二次的滤液合并得牡丹酚的提取液，待用；滤渣弃去。
(2)牡丹酚粗体的分离
取上述牡丹酚的提取液，放冷至室温(约25℃)，置约5℃冷藏室中，静置24小时，离心分离，弃去上清液，收集沉淀，得牡丹酚的粗提物沉淀约62g。
(3)牡丹酚单体成分的精制纯化
取上述牡丹酚的粗提物沉淀，加入浓度为体积百分比30％的乙醇水溶液4960ml，60℃加热，搅拌溶解后，60℃保温趁热过滤，弃去沉淀，滤液置23℃环境中搅拌降温，并继续搅拌至有针状结晶析出，置2-5℃冷藏室中，静置24小时，过滤，弃去滤液，收集结晶，得牡丹酚粗晶25.2g；所得粗晶加入浓度为体积百分比30％的乙醇水溶液2500ml，60℃加热，搅拌溶解后，60℃保温趁热过滤，弃去沉淀，滤液置22℃环境中搅拌降温，并继续搅拌至有针状结晶析出，置2-5℃冷藏室中，静置24小时，过滤，弃去滤液，收集结晶，得牡丹酚精制结晶23.1g。按药典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量测定方法测定，测得牡丹酚的纯度含量为99.3％，其牡丹酚照片图及测定色谱图分别见图1与图2。
实施例2：从牡丹果荚中提取制备牡丹酚
(1)牡丹酚的提取
以牡丹果荚为原料，进行净选，经过干燥，粉碎成约5目的粗粉。取牡丹果荚粗粉1000g，加入10倍量(10kg)的加热至60℃的温水，充分搅拌混匀，加热并保持水温60℃，温浸提取2.5小时并不时搅拌，在保温条件下趁热过滤，滤液待用；滤渣继续加入8倍量(8kg)的加热至60℃的温水，充分搅拌混匀，加热并保持水温60℃，温浸提取1.5小时并不时搅拌，在保温条件下趁热过滤，滤液待用；滤渣继续加入8倍量(8kg)的加热至60℃的温水，充分搅拌混匀，加热并保持水温60℃，温浸提取1.5小时并不时搅拌，在保温条件下趁热过滤，滤液与前二次的滤液合并得牡丹酚的提取液，待用；滤渣弃去。
(2)牡丹酚的粗体的分离
取上述牡丹酚的提取液，放冷至室温(约25℃)，置约5℃冷藏室中，静置24小时，离心分离，弃去上清液，收集沉淀，得牡丹酚的粗提物沉淀约33g。
(3)牡丹酚单体成分的精制纯化
取上述牡丹酚的粗提物沉淀，加入浓度为体积百分比30％的乙醇水溶液2500ml，60℃加热，搅拌溶解后，60℃保温趁热过滤，弃去沉淀，滤液置20℃环境中搅拌降温，并继续搅拌至有针状结晶析出，置2-5℃冷藏室中，静置24小时，过滤，弃去滤液，收集结晶，得牡丹酚粗晶10.3g；所得粗晶加入浓度为体积百分比30％的乙醇水溶液1200ml，60℃加热，搅拌溶解后，60℃保温趁热过滤，弃去沉淀，滤液置20℃环境中搅拌降温，并继续搅拌至有针状结晶析出，置2-5℃冷藏室中，静置24小时，过滤，弃去滤液，收集结晶，得牡丹酚精制结晶9.1g。
按药典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量测定方法测定，测得牡丹酚的纯度含量为99.6％，其牡丹酚照片图及测定色谱图分别见图3与图4。
实施例3：从徐长卿中提取制备牡丹酚
(1)牡丹酚的提取
以徐长卿的根及根茎为原料，进行净选，经过干燥，粉碎成约8目的粗粉。取牡丹皮粗粉1500g，加入12倍量(18kg)的加热至65℃的温水，充分搅拌混匀，加热并保持水温60℃，超声(250Hz)提取1.5h，在保温条件下趁热过滤，滤液待用；滤渣继续加入8倍量(12kg)的加热至60℃的温水，充分搅拌混匀，加热并保持水温60℃，超声(250Hz)提取1.0h，在保温条件下趁热过滤，滤液与前次的滤液合并得牡丹酚的提取液，待用；滤渣弃去。
(2)牡丹酚的粗体的分离
取上述牡丹酚的提取液，放冷至室温(约25℃)，置约3℃冷藏室中，静置24小时，离心分离，弃去上清液，收集沉淀，得牡丹酚的粗提物沉淀约75g。
(3)牡丹酚单体成分的精制纯化
取上述牡丹酚的粗提物沉淀，加入浓度为体积百分比30％的乙醇水溶液6000ml，60℃加热，搅拌溶解后，60℃保温趁热过滤，弃去沉淀，滤液置23℃环境中搅拌降温，并继续搅拌至有针状结晶析出，置2-5℃冷藏室中，静置24小时，过滤，弃去滤液，收集结晶，得牡丹酚粗晶33.2g；所得粗晶加入浓度为体积百分比30％的乙醇水溶液3500ml，60℃加热，搅拌溶解后，60℃保温趁热过滤，弃去沉淀，滤液置20℃环境中搅拌降温，并继续搅拌至有针状结晶析出，置2-5℃冷藏室中，静置24小时，过滤，弃去滤液，收集结晶，得牡丹酚精制结晶31.1g。
按药典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量测定方法测定，测得牡丹酚的纯度含量为99.5％，其牡丹酚照片图及测定色谱图分别见图5与图6。
实施例4：本发明方法提取分离的牡丹酚体外抑菌作用研究
牡丹皮又名丹皮，是我国传统中药，性寒，味苦，凉，微寒。《本草纲目》记载:“滋阴降火，解斑毒，利咽喉，通小便血滞。”牡丹皮化学成分复杂，主要包括牡丹酚、芍药苷、芍药酚、挥发油、没食子酸、甾醇生物碱及植物甾醇类等。其中牡丹酚为主要活性成分，化学名为2-羟基-4-甲氧基苯乙酮。牡丹酚水溶液有较好的抗菌消炎作用，能抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌等细菌；具有很好地抗炎、促进皮肤新陈代谢作用，实验方法和结果如下：
1材料与方法
1.1仪器
DY6000Ⅱ电热恒温培养箱(天津泰斯特仪器有限公司)；HT-20-5MT双人超净台(苏州安泰空气技术有限公司)；微量移液器(上海热电仪器有限公司)；LDZX-50K高压灭菌器(上海三申医疗器械有限公司)。
1.2试药
牡丹酚按本发明方法由实施例1从牡丹皮中提取制备而得，经丹皮酚(牡丹酚)对照品的HPLC对照，并按药典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量测定方法测定，测得牡丹酚的纯度含量为99.3％，其牡丹酚照片图及测定色谱图分别见图1与图2。
1.3菌种
金黄色葡萄球菌(CMCC26003)、表皮葡萄球菌(ATCC12228)、大肠杆菌(JM110)、痢疾志贺氏菌(CMCC51252)、鼠伤寒沙门氏菌(CMCC50115)、乙型副伤寒沙门氏菌(CMCC50094)均从广东省微生物菌种保藏中心购买。
2方法与结果
2.1牡丹酚水溶液的制备
将实施例1制备的牡丹酚1.5g加入100ml的加热至50℃的蒸馏水，50℃水浴中加热至牡丹酚完全容解，得到15mg·mL-1牡丹酚水溶液，备用。
2.2菌液的制备
将不同菌种的单个菌落分别接种于LB培养液中，37℃恒温摇床增菌培养18～24h。再取出少量菌液，用灭菌的浓度为质量百分比0.9％的氯化钠溶液稀释至107～108CFU·mL-1。
2.3抑菌实验
2.3.1药敏纸片法
制作含有不同浓度牡丹酚且直径为5mm的药敏纸片。将不同的菌种100μL涂布于LB培养基上，当培养基表面干燥后，将纸片贴于培养基表面，37℃培养24h后，观察并测定抑菌环直径，重复3次，阴性对照组用浓度为质量百分比0.9％氯化钠溶液纸片。
2.3.2二倍稀释法
在5mL带塞灭菌试管中分别加入各菌种所需培养基2.0mL，每种菌种各8管。按1～8编号，分别在第1管中加入丹皮酚溶液2mL，混匀后取出2.0mL放入第2管，采用二倍稀释法，依次将药液吸收成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64系列溶液，即含药量分别为7.50、3.75、1.88、0.94、0.47、0.24mg·mL-1。各管均加入浓度约为5×105CFU·mL-1的各病原指示菌菌液0.2mL，同时分别设阴性对照管(含药液不含菌液)，阳性对照管(含菌液不含药物)。37℃培养箱中培养24h后观察菌种生长情况。病原菌浓度计算方法：观察平板上的菌落形成的单位(CFU)。CFU≤5的浓度为抑菌浓度，标记“-”号，CFU≥5的浓度为无抑菌浓度，标记“+”，产生抑菌作用的最小浓度表示该管药量即是受试药的最低抑菌浓度(MIC)。
2.4结果与讨论
2.4.1结果
纸片法测定牡丹酚对6种菌的抑菌活性见表1；二倍稀释法测定丹皮酚对6种菌的MIC值见表2。
表1丹皮酚对6种菌的平均抑菌环直径mm
表2丹皮酚对6种菌的MIC值n＝3，mg·mL-1
由表1，2可知，牡丹酚对6种菌均有明显的抑菌作用，并随着浓度的增加抑菌作用增强。其中对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌作用最强，MIC均为0.94mg·mL-1；对鼠伤寒沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌抑菌作用其次，MIC为1.88mg·mL-1；对变形杆菌抑菌作用最弱，MIC为3.75mg·mL-1。
2.4.2讨论
本发明用药敏纸片法和试管二倍稀释法考察了牡丹酚对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌抑菌作用。研结果显示牡丹酚对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大肠杆菌抑菌作用最强，其次是鼠伤寒沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌，对变形杆菌作用较弱。结果提示：牡丹酚及其化妆品制剂在临床有较强的抗菌消炎作用，能抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌等细菌；有显著的抗菌消炎、促进皮肤新陈代谢，去粉刺作用。
实施例5：本发明方法提取分离的牡丹酚对酪氨酸酶活性抑制实验
牡丹酚水溶液有较好的抗菌消炎作用，能抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌；此外，牡丹酚对酪氨酸酶活性有抑制作用。本试验通过牡丹酚溶液对酪氨酸酶的抑制试验，证明本发明的牡丹酚具有显著的美白作用，实验方法和结果如下：
1、实验原理
在皮肤黑色素生物合成中，酪氨酸酶是关键酶，作用于多巴，形成多巴醌，后者自发进行一系列反应最后形成黑色素。酪氨酸酶在pH6.8的磷酸缓冲液中，可催化多巴转化成多巴醌(呈肾上腺素红色)，在分光光度计475nm处可测定吸光值。具有抑制酪氨酸酶活性作用的物质可以减少多巴转化成多巴醌，从而降低吸光值，根据吸光值的变化，评估被测物质对酪氨酸酶的抑制作用。
2材料与方法
2.1仪器与试药
2.1.1仪器
DK-98-IIA数显电热恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司)；THERMOMULTISKAN酶标仪(山东省科学院生物研究所)；微量移液器(上海热电仪器有限公司)。
2.1.2试药
牡丹酚按本发明方法由实施例1从牡丹皮中提取制备而得，经丹皮酚(牡丹酚)对照品的HPLC对照，并按药典牡丹皮中丹皮酚(牡丹酚)的含量测定方法测定，测得牡丹酚的纯度含量为99.3％，其牡丹酚照片图及测定色谱图分别见图1与图2；酪氨酸酶溶液(购自Sigma公司)；多巴L-DOPA(购自Sigma公司)；PBS溶液(pH6.8，0.1M)。
2.2试验溶液的制备与试验方法
2.2.1试验溶液的制备
牡丹酚溶液：精密称取牡丹酚1.5g，加入加热至50℃的PBS溶液(pH6.8)100ml，50℃水浴中加热至牡丹酚完全容解，得15mg·mL-1牡丹酚PBS溶液(pH6.8)；再分别吸取一定量的牡丹酚PBS溶液，分别加入对应量的溶液(pH6.8)，分别制成对应浓度的牡丹酚溶液，备用。
2.2.1试验方法
在样品管和样品对照管中各加入1.0ml对应浓度的牡丹酚溶液，阴性对照管和空白对照管则分别加入1.0mlPBS。在样品管和阴性对照管中各加入0.5ml(100U/ml)酪氨酸酶溶液，样品对照与空白对照管以0.5mlPBS溶液代替。振摇混匀，30℃水槽孵育10分钟。在各管中加入2.0ml的5×10-4g/ml的多巴L-DOPA，继续孵育5分钟，即刻测定在475nm处的吸光值(Abs)。
计算对酪氨酸酶活性的抑制率：抑制率(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中：T-样品管Abs；T0-样品对照管Abs；C-阴性对照管Abs；C0-空白对照Abs。
3结果与讨论
3.1结果
牡丹酚溶液对酪氨酸酶活性的抑制作用试验结果见表3，结果表明：本发明方法提取制备的牡丹酚具有抑制酪氨酸酶活性的作用。
表3牡丹酚溶液对酪氨酸酶活性的抑制作用
实验浓度(mg/ml) 3.75 0.94 0.24 IC50(mg/ml)
抑制率(％) 96.76 46.51 0.00 0.96
3.2讨论
本发明方法提取分离的牡丹酚具有抑制酪氨酸酶活性的作用，且这种抑制作用与浓度呈依赖关系；在3.75mg/ml的浓度下对酪氨酸酶的抑制率高达96.76％，证实本发明方法提取分离的牡丹酚具有显著美白功效。
实施例6：牡丹酚化妆品制备实例
(1)面霜的制备
组方：
制备工艺：
①取牡丹酚、鲸蜡硬脂基葡糖苷、十六-十八醇、辛酸/癸酸三甘油酯、霍霍巴油、棕榈酸异丙酯、甘油混合加热至60℃，作为A相，保温备用；
②取甘草酸二钾、加入汉生胶、卡波940、透明质酸钠、去离子水，混合加热至60℃，分散均匀，作为B相，保温备用；
③将A相在均质下慢慢加入到预先分散均匀并加热至80℃的B相中，加入环二甲基硅油345均质3分钟，加入氢氧化钠调节pH6-7，搅拌冷却到50℃，加入香精，搅拌、冷却到35℃即得。
(2)乳液的制备
组方：
制备工艺：
①取牡丹酚、环戊硅甲基氧烷995、凡士林、吐温-80、维生素E醋酸酯、甘油混合加热至60℃，作为A相，保温备用；
②取甘草酸二钾，加入汉生胶、CarbopolUltrez 10、1,3-丁二醇、去离子水，混合加热至60℃，分散均匀，作为B相，保温备用；
③将A相在均质下慢慢加入到预先分散均匀并加热至80℃的B相中，均质3分钟，加入三乙醇胺调节pH6-7，搅拌冷却到50℃，加入香精和防腐剂Phenonip，搅拌、冷却到35℃即得。
(3)眼霜的制备
组方：
制备工艺:
①取甘草酸二钾，加入1,3-丁二醇、绿茶提取物、乙二胺四乙酸二钠、去离子水，分散均匀，加热至50℃，搅拌直至清澈；在搅拌下缓慢加入有机硅弹性体，作为A相，备用；
②取牡丹酚、DC245、霍霍巴油、维生素E醋酸酯、维生素A棕榈酸酯混合加热至60℃，作为B相，保温备用；
③将A相在均质下慢慢加入到预先分散均匀并加热至60℃的B相中，均质3分钟，冷却到35℃即得。
(4)啫喱的制备
组方：
制备工艺:
①取牡丹酚、甘草酸二钾，加入聚丙烯酸、甘油、1,3-丁二醇、岩藻聚糖硫酸酯、透明质酸钠，搅拌分散均匀，作为A相，备用；
②取去离子水加入A相，分散均匀，加热至60℃，加入三乙醇胺调节pH6-7，搅拌，冷却到50℃加入香精、甲基异噻唑琳酮，搅拌、冷却到35℃即得。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种从植物中制备牡丹酚的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)牡丹酚的提取：以牡丹皮、牡丹种皮、牡丹果荚或徐长卿全草为原料，进行净选、干燥，粉碎，得到的粉末用水温浸提取或用水温浸超声提取；提取完后，保温趁热固液分离，取液体，得到含牡丹酚的提取液；
(2)牡丹酚粗体的分离：将步骤(1)得到的含牡丹酚的提取液放冷至室温，于1～25℃的条件下静置24小时以上，固液分离，弃去液体，收集固体，得到牡丹酚粗提物；
(3)牡丹酚单体成分的精制纯化：通过步骤①或步骤①和②进行精制纯化；
①第一次结晶：往步骤(1)得到的牡丹酚粗提物中加入浓度为体积百分比20～40％的乙醇水溶液，加热溶解，保温趁热固液分离，取液体，液体置25℃以下环境中搅拌降温，至有针状结晶析出，于1～25℃的条件下静置24小时以上，固液分离，弃去液体，收集结晶，为牡丹酚单体成分；
②重结晶；将得到的结晶再按照步骤①重结晶，得到纯度更高的牡丹酚单体成分；
步骤(1)中所述的用水温浸提取或用水温浸超声提取中的温度为40～80℃。
2.根据权利要求1所述的从植物中制备牡丹酚的方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的用水温浸提取或用水温浸超声提取中的温度为50～70℃；
步骤(1)中所述的用水温浸超声提取中的超声的条件为200～300Hz。
3.根据权利要求1所述的从植物中制备牡丹酚的方法，其特征在于：
步骤(1)中所述的用水温浸提取或用水温浸超声提取的次数为2～3次，具体步骤如下：提取次数为2次时：第一次加入相当于粉末质量10倍量的水，充分搅拌混匀，加热温浸提取1～3小时，或加热温浸超声提取0.5～2.0小时；第二次加入相当于粉末质量8倍量的水，加热温浸提取0.5～2小时，或加热温浸超声提取0.5～1.5小时；提取次数为3次时：前两次与提取次数为2次时的步骤相同，第三次加入相当于粉末质量8倍量的水，加热温浸提取0.5～2小时，或加热温浸超声提取0.5～1.5小时；提取完后，保温趁热固液分离，合并2～3次分离得到的液体，弃去固体。
4.根据权利要求1所述的从植物中制备牡丹酚的方法，其特征在于：
步骤(2)中所述的静置的条件为于3～5℃静置24小时；
步骤(3)①中所述的静置的条件为于2～5℃静置24小时；
步骤(3)②中所述的重结晶步骤中所述的静置的条件为于2～5℃静置24小时。
5.根据权利要求1所述的从植物中制备牡丹酚的方法，其特征在于：
步骤(3)①中所述的加热的温度为40～80℃；
步骤(3)②中所述的重结晶步骤中所述的加热的温度为40～80℃。
6.根据权利要求1所述的从植物中制备牡丹酚的方法，其特征在于：
步骤(3)①中所述的乙醇水溶液的用量为每克牡丹酚粗提物配比60～150ml乙醇水溶液；
步骤(3)②中所述的重结晶步骤中乙醇水溶液的用量为每克结晶配比60～150ml乙醇水溶液。
7.权利要求1～6任一项所述的方法在制备化妆品中的应用。
8.一种牡丹酚单体成分，其特征在于：通过权利要求1～6任一项所述的方法得到，纯度含量≥98％。
9.权利要求8所述的牡丹酚单体成分在制备化妆品中的应用，其特征在于：所述的化妆品是具有抗过敏、美白、抗皱、淡斑和去粉刺作用的化妆品。
10.根据权利要求9所述的牡丹酚单体成分在制备化妆品中的应用，其特征在于包括以下步骤：将所述的牡丹酚单体成分需要先溶解或加热溶解于制备化妆品允许的药物赋形剂或载体中，再与其他成分混合。
CN201710343279.7A 2017-05-16 2017-05-16 一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用 Active CN107118089B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710343279.7A CN107118089B (zh) 2017-05-16 2017-05-16 一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710343279.7A CN107118089B (zh) 2017-05-16 2017-05-16 一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107118089A true CN107118089A (zh) 2017-09-01
CN107118089B CN107118089B (zh) 2021-03-23

Family

ID=59728178

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710343279.7A Active CN107118089B (zh) 2017-05-16 2017-05-16 一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107118089B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108721192A (zh) * 2018-09-06 2018-11-02 厦门洋妈制生物科技有限公司 一种天然植物提取精华面膜液及其提取工艺
CN110106028A (zh) * 2019-04-26 2019-08-09 南京康之源农业科技发展有限公司 一种牡丹洗衣液及其制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20060084083A (ko) * 2005-01-17 2006-07-24 경북대학교 산학협력단 목단피내 파에오놀의 정제방법
CN103804166A (zh) * 2014-01-17 2014-05-21 宣城市百草植物工贸有限公司 一种牡丹皮有效成份丹皮酚的提取方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20060084083A (ko) * 2005-01-17 2006-07-24 경북대학교 산학협력단 목단피내 파에오놀의 정제방법
CN103804166A (zh) * 2014-01-17 2014-05-21 宣城市百草植物工贸有限公司 一种牡丹皮有效成份丹皮酚的提取方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
雷学军: "丹皮酚的提取及其在化妆品中的应用", 《香料香精化妆品》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108721192A (zh) * 2018-09-06 2018-11-02 厦门洋妈制生物科技有限公司 一种天然植物提取精华面膜液及其提取工艺
CN108721192B (zh) * 2018-09-06 2021-08-20 厦门洋妈制生物科技有限公司 一种天然植物提取精华面膜液及其提取工艺
CN110106028A (zh) * 2019-04-26 2019-08-09 南京康之源农业科技发展有限公司 一种牡丹洗衣液及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN107118089B (zh) 2021-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20080131384A1 (en) External Preparation for Skin Whitening, Whitening Agent, Whitening Method and Method of Production of External Preparation for Skin Whitening
JP2013023487A (ja) 抗糖化作用剤
AU2012286357A1 (en) Eucommia extract, preparation method therefor and use thereof
US8268366B2 (en) Cosmetic composition containing salt-fermented extract of natural materials
CN112704712A (zh) 一种用于眼部护理的中药组合物及其制备方法和应用
KR101000695B1 (ko) 항염 및 피부자극완화 효과가 있는 천연 식물의혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR20050102686A (ko) 플라보노이드-함유 조성물의 제조방법 및 그 용도
CN107118089A (zh) 一种从植物中制备牡丹酚的方法及在制备化妆品中的应用
WO2009135352A1 (zh) 梅树提取物及其制备方法和用途
CN113288836A (zh) 一种祛痘复合物的制备方法与应用
CN113274455A (zh) 中药组合物及其应用
CN114478196A (zh) 一种从春榆根里提取补骨脂酚并纯化的方法及在化妆品中的应用
CN112266825A (zh) 一种复配精油、其制备方法及其在美白抗皱化妆品中的应用
JP2009132651A (ja) 紫外線防御剤
CN104761445A (zh) 一种从蒙药达乌里芯芭根部提取分离化学成分的方法
CN111419940B (zh) 一种祛痘的中草药组合物
KR100670530B1 (ko) 철현채 추출물, 유엽 추출물에서 선택되는 1종 이상을유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
JPH11193243A (ja) 皮膚外用剤
JP4105498B2 (ja) アトピー性疾患の症状の予防・緩和に有効な組成物
WO2015078398A1 (zh) 一种用于紫外损伤修复的中草药复方及其在化妆品中应用
KR100789635B1 (ko) 멜라닌 생성 억제 활성을 갖는 식물 추출물을 함유하는피부미백용 화장료
JP3113009B2 (ja) 美白化粧料
JP2009114146A (ja) トランスグルタミナーゼ−１産生促進剤及びインボルクリン産生促進剤
KR101581285B1 (ko) 생약재 추출물을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물
KR20020029181A (ko) 로로통 추출물, 백미 추출물에서 선택되는 1종 이상을유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant