CN107108609B

CN107108609B - 稠合杂芳族吡咯烷酮的固态形式

Info

Publication number: CN107108609B
Application number: CN201580068971.2A
Authority: CN
Inventors: 陈荣亮; 一番友则; 马春荣; 克里斯多佛·马修斯; 本吉甫; 科林·欧布莱恩; 宫路健太郎; 吉川直树
Original assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2014-12-18
Filing date: 2015-12-17
Publication date: 2020-02-18
Anticipated expiration: 2035-12-17
Also published as: JP6778195B2; EA032291B1; KR102037502B1; JP2022017477A; US11352355B2; IL252941B; AU2015365580B2; ZA201701800B; JP2017537969A; GEP20197050B; TN2017000080A1; CN107108609A; JP6974534B2; PL3233857T3; BR112017013149A2; US20230348461A1; AU2015365580A1; CA2970864A1; PH12017501123A1; SG11201701911QA

Abstract

公开了作为脾酪氨酸激酶(SYK)抑制剂的化学实体，即，包含6‑((1R,2S)‑2‑氨基环己基氨基)‑7‑氟‑4‑(1‑甲基‑1H‑吡唑‑4‑基)‑1H‑吡咯并[3,4‑c]吡啶‑3(2H)‑酮的化学实体及其某些固态形式。还公开了使用这些化学实体治疗诸如癌症的病症的方法。

Description

稠合杂芳族吡咯烷酮的固态形式

相关申请的交叉引用

本申请依据35U.S.C.§119(e)要求2014年12月18日提交的美国临时申请号62/093,564、2015年2月12日提交的美国临时申请号62/115,223及2015年6月16日提交的美国临时申请号62/180,222的权益。前述申请各自的完整内容以引用的方式整体并入本文中。

领域

本发明涉及用于治疗各种病症，特别是包括癌症在内的细胞增殖病症和炎症性病症的化合物、组合物及方法。确切地说，本发明提供了抑制脾酪氨酸激酶(SYK)活性的稠合杂芳族吡咯烷酮化合物。

背景

脾酪氨酸激酶(SYK)是一种72kDa的非受体胞质酪氨酸激酶。SYK的一级氨基酸序列类似于ζ相关蛋白-70(ZAP-70)的一级序列并且涉及到受体介导的信号转导。SYK的N末端结构域含有两个Src同源区2(SH2)结构域，这些结构域结合至在许多免疫受体复合物的胞质信号传导结构域中所见的二磷酸化的免疫受体酪氨酸活化基序(ITAM)。C末端含有催化结构域，并且包括若干个催化环自体磷酸化位点，这些位点负责受体诱导的SYK活化及随后的下游信号传播。SYK在适应性免疫和先天性免疫所涉及的许多细胞类型中表达，包括淋巴细胞(B细胞、T细胞及NK细胞)、粒细胞(嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞及嗜酸性粒细胞)、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞及肥大细胞。SYK在其它细胞类型中也有表达，包括上呼吸系统中的气道上皮细胞和成纤维细胞。参见例如，Martin Turner等人,Immunology Today(2000)21(3):148-54；及Michael P.Sanderson等人,Inflammation&Allergy--DrugTargets(2009)8:87-95。

SYK在ITAM依赖性信号传导中的作用及其在许多细胞类型中的表达表明，抑制SYK活性的化合物可用于治疗涉及免疫系统的病症和炎症。此类病症包括I型过敏反应(过敏性鼻炎、过敏性哮喘及特应性皮炎)；自身免疫性疾病(类风湿性关节炎、多发性硬化、全身性红斑狼疮、银屑病及免疫性血小板减少性紫癜)；及肺部炎症(慢性阻塞性肺病)。参见例如，Brian R.Wong等人,Expert Opin.Investig.Drugs(2004)13(7):743-62；Sanderson等人(2009)；Jane Denyer&Vipul Patel,Drug News Perspective(2009)22(3):146-50；Esteban S.Masuda&Jochen Schmitz,Pulmonary Pharmacology&Therapeutics(2008)21:461-67；Malini Bajpai等人,Expert Opin.Investig.Drugs(2008)17(5):641-59；及AnnaPodolanczuk等人,Blood(2009)113:3154-60。其它病症包括恶性血液病，如急性髓性白血病、B细胞慢性淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤(例如套细胞淋巴瘤)及T细胞淋巴瘤(例如外周T细胞淋巴瘤)；以及上皮癌，如肺癌、胰腺癌及结肠癌。参见例如，Cynthia K.Hahn等人,Cancer Cell(2009)16:281-294；D.H.Chu等人,Immunol.Rev.(1998)165:167-180；A.L.Feldman等人,Leukemia(2008)22:1139-43；A.Rinaldi等人,Br.J.Haematol.(2006)132:303-316；B.Streubel等人,Leukemia(2006)20:313-18；Maike Buchner等人,CancerResearch(2009)69(13):5424-32；A.D.Baudot等人,Oncogene(2009)28:3261-73；及AnuragSingh等人,Cancer Cell(2009)15:489-500。

发明概述

在某些实施方案中，本发明涉及包含6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮的化学实体。在某些实施方案中，本发明涉及6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐。

在某些实施方案中，本发明涉及药物组合物，所述药物组合物包含含6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮的化学实体及一种或多种药学上可接受的载体。在某些实施方案中，本发明涉及药物组合物，所述药物组合物包含6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐及一种或多种药学上可接受的载体。

在某些实施方案中，本发明涉及包含6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮的化学实体的固态形式。在某些实施方案中，本发明涉及6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐的固态形式。

在某些实施方案中，本发明涉及治疗癌症的方法，所述方法包括向癌症患者施用包含6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮的化学实体。在某些实施方案中，本发明涉及治疗癌症的方法，所述方法包括向癌症患者施用6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐。

在某些实施方案中，本发明涉及制备6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮或其药学上可接受的盐的方法。

附图简述

图1显示结晶形式1的高分辨率X射线粉末衍射(XRPD)图。

图2显示结晶形式1的差示扫描量热法(DSC)热谱图。

图3显示结晶形式1的热重分析(TGA)热谱图。

图4显示结晶形式1的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。

图5显示非晶形式2的高分辨率XRPD图。

图6显示非晶形式2的DSC热谱图。

图7显示非晶形式2的TGA热谱图。

图8显示非晶形式2的GVS等温曲线。

图9显示结晶形式3的高分辨率XRPD图。

图10显示结晶形式3的DSC热谱图。

图11显示结晶形式3的TGA热谱图。

图12显示结晶形式3的GVS等温曲线。

图13显示结晶形式4的高分辨率XRPD图。

图14显示结晶形式4的DSC热谱图。

图15显示结晶形式4的TGA热谱图。

图16显示结晶形式4的GVS等温曲线。

图17显示结晶形式5的高分辨率XRPD图。

图18显示结晶形式5的DSC热谱图。

图19显示结晶形式5的TGA热谱图。

图20显示结晶形式5的GVS等温曲线。

图21显示非晶形式6的高分辨率XRPD图。

图22显示非晶形式6的DSC热谱图。

图23显示非晶形式6的TGA热谱图。

图24显示非晶形式6的GVS等温曲线。

图25显示结晶形式7的低分辨率XRPD图。

图26显示结晶形式7的DSC热谱图。

图27显示结晶形式7的TGA热谱图。

图28显示结晶形式7的GVS等温曲线。

图29显示结晶形式8的高分辨率XRPD图。

图30显示结晶形式8的DSC热谱图。

图31显示结晶形式8的TGA热谱图。

图32显示结晶形式8的GVS等温曲线。

图33显示结晶形式9的高分辨率XRPD图。

图34显示结晶形式9的DSC热谱图。

图35显示结晶形式9的TGA热谱图。

图36显示结晶形式10的低分辨率XRPD图。

图37显示结晶形式10的DSC热谱图。

图38显示结晶形式10的TGA热谱图。

图39显示结晶形式11的低分辨率XRPD图。

图40显示结晶形式11的DSC热谱图。

图41显示结晶形式11的TGA热谱图。

图42显示结晶形式12的XRPD图。

图43显示结晶形式12的DSC热谱图。

图44显示结晶形式12的TGA热谱图。

图45显示结晶形式12的GVS等温曲线。

图46显示结晶形式13的XRPD图。

图47显示结晶形式13的DSC热谱图。

图48显示结晶形式13的TGA热谱图。

图49显示结晶形式13的GVS等温曲线。

图50显示结晶形式14的XRPD图。

图51显示结晶形式14的DSC热谱图。

图52显示结晶形式14的TGA热谱图。

图53显示结晶形式14的GVS等温曲线。

图54显示结晶形式15的XRPD图。

图55显示结晶形式15的DSC热谱图。

图56显示结晶形式15的TGA热谱图。

图57显示结晶形式15的GVS等温曲线。

图58显示结晶形式16的XRPD图。

图59显示结晶形式16的DSC热谱图。

图60显示结晶形式16的TGA热谱图。

图61显示结晶形式16的GVS等温曲线。

图62显示结晶形式17的XRPD图。

图63显示结晶形式17的DSC热谱图。

图64显示结晶形式17的TGA热谱图。

图65显示结晶形式17的GVS等温曲线。

图66显示化合物1盐酸盐形式之间的相互转化。

发明详述

在某些实施方案中，本文公开了有效作为脾酪氨酸激酶(SYK)抑制剂的化学实体。在某些实施方案中，本文所公开的化学实体在体外和体内有效作为SYK活性抑制剂，并且可用于治疗细胞增殖病症(例如癌症)。在某些实施方案中，这些化学实体包含美国专利号8,440,689中公开的化合物中的一种或多种，该案以引用的方式并入本文中。确切地说，美国专利号8,440,689公开了稠合杂芳族吡咯烷酮，如吡咯并嘧啶酮(例如6,7-二氢-5H-吡咯并[3,4-c]嘧啶-5-酮)和吡咯并吡啶酮(例如1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮)化合物，这些以引用的方式并入本文中。

在某些实施方案中，该化学实体包含6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(“化合物1”)：

及非共价连接的分子实体。因此，包含化合物1的化学实体包括例如游离碱；化合物1的药学上可接受的盐、化合物1的药学上可接受的溶剂化物；化合物1的药学上可接受的盐的药学上可接受的溶剂化物。在一些实施方案中，该化学实体是化合物1的游离碱或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，该化学实体是化合物1的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，该化学实体是化合物1的游离碱的溶剂化物。在一些实施方案中，该化学实体是化合物1的药学上可接受的盐的药学上可接受的溶剂化物。

术语“约”在本文中用于指近似地、在……左右、大略地或大约。当术语“约”与数字范围结合使用时，通过扩大所陈述的数字范围的上下限值来对该范围进行修饰。除非另外说明，否则术语“约”在本文中用于以10％方差的数字值修饰所陈述的值的上限和下限。

除非另外说明，否则术语“包括(include/including)”等意图作为非限制性的。举例来说，除非另作指示，否则“包括”意指包括但不限于。

在限定了相对立体化学的本文所描述的化合物中，此类化合物的非对映异构体纯度可以是至少80％、至少90％、至少95％或至少99％。如本文所使用，术语“非对映异构体纯度”是指以占存在的所有非对映异构体总量的百分含量表示的具有所描绘的相对立体化学的化合物的量。

在本文所描述的某些实施方案中，化合物的对映异构体纯度可以是至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或至少99.9％。如本文所使用，术语“对映异构体纯度”是指以占的所描绘的化合物和其对映异构体的总量的百分含量表示的具有所描绘的绝对立体化学的化合物的量。

本领域中众所周知用于测定非对映异构体和对映异构体纯度的方法。非对映异构体纯度可以通过能够定量区别化合物与其非对映异构体的任何分析方法测定。适合分析方法的实例包括但不限于，核磁共振波谱法(NMR)、气相色谱法(GC)及高效液相色谱法(HPLC)。类似地，对映异构体纯度可以通过能够定量区别化合物与其对映异构体的任何分析方法测定。适合分析方法的实例包括但不限于，使用手性色谱柱填充材料进行的GC或HPLC。如果先用光学增浓的衍生化试剂，例如Mosher酸衍生化，则也可以利用NMR区别对映异构体。

如本文所使用，“结晶”是指组成原子、分子或离子以规则有序的重复三维模式填充并具有高度规则的化学结构的固体。确切地说，制造的结晶化学实体(例如药学上可接受的盐)可以呈一种或多种结晶形式。出于本申请的目的，术语“结晶形式”与“多晶型物”同义；这些术语区别具有不同特性(例如不同XRPD图和/或不同DSC扫描结果)的晶体。假多晶型物典型地是一种材料的不同溶剂化物，并因此其特性彼此不同。因此，每一不同的多晶型物和假多晶型物在本文中被认为是不同的结晶形式。

“基本上结晶”是指化学实体是至少特定重量百分比的结晶。特定重量百分含量包括50％、60％、70％、75％、80％、85％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％及99.9％。在一些实施方案中，基本上结晶是指化学实体是至少70％的结晶。在一些实施方案中，基本上结晶是指化学实体是至少80％的结晶。在一些实施方案中，基本上结晶是指化学实体是至少85％的结晶。在一些实施方案中，基本上结晶是指化学实体是至少至少90％的结晶。在一些实施方案中，基本上结晶是指化学实体是至少95％的结晶。

术语“溶剂化物或溶剂化”意指本发明的化合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合。此物理缔合包括氢键。在某些情况下，例如当将一个或多个溶剂分子并入结晶固体的晶格中时，溶剂化物将能够分离。“溶剂化物”或“溶剂化”涵盖溶液相与可分离溶剂化物。代表性溶剂化物包括但不限于，水合物、乙醇化物及甲醇化物。

术语“水合物”是指溶剂分子是水并且以确定的化学计算量存在的溶剂化物，并且包括例如半水合物、单水合物、二水合物及三水合物。

术语“混合物”是指混合物中组合的组分，不管该组合的相态如何(例如，液体或液体/结晶)。

术语“接晶种”是指将结晶材料添加至溶液或混合物中以起始结晶。

在某些实施方案中，包含如本文所述的结晶形式的化学实体基本上不含该化学实体的非晶形式，其中以重量计至少特定百分含量的化学实体是结晶。在某些此类实施方案中，该化学实体是至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或至少99.9％结晶。当以重量计特定百分含量的化学实体是结晶时，该化学实体的其余部分是非晶形材料。

在某些实施方案中，包含如本文所述的结晶形式的化学实体基本上不含该化学实体的其它化学实体(例如其它多晶型物或非晶形材料)，其中该化学实体是以重量计至少特定百分含量的特定结晶形式。在某些此类实施方案中，化学实体包含至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或至少99.9％的特定结晶形式。当以重量计特定百分含量的化学实体是指定结晶形式时，该化学实体的其余部分可以是非晶形材料与该化学实体的除该特定结晶形式以外的一种或多种其它结晶形式的某种组合。在一些实施方案中，该化学实体是以重量计至少90％的特定结晶形式。在一些实施方案中，该化学实体是以重量计至少95％的特定结晶形式。在一些实施方案中，该化学实体是以重量计至少85％的特定结晶形式。在一些实施方案中，该化学实体是以重量计至少80％的特定结晶形式。

在某些实施方案中，如本文所描述的包含结晶形式的化学实体不具有吸湿性或是非吸湿的。在某些此类实施方案中，如重量法蒸气吸附(gravimetric vapor sorption，GVS)等温曲线所示，在90％相对湿度(RH)下的水吸附量小于约0.5％，小于约0.4％，小于约0.3％，或小于约0.2％。在某些此类实施方案中，当RH从约0％增加至约90％时，如重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线所示，包含如本文所述的结晶形式的化学实体展现的质量增加小于约0.5％，小于约0.4％，小于约0.3％，或小于约0.2％。在某些实施方案中，包含如本文所述的结晶形式的化学实体的XRPD图在水分吸附分析之后基本上不变。

除非另外说明，否则当使用以2θ角度提供的一个或多个XRPD峰来鉴别化学实体的特定结晶形式时，这些2θ值各自应理解为指给定值±0.2度。

在说明书和权利要求书通篇，当使用DSC特征曲线中的一个或多个温度(例如，吸热转换起始温度、熔融温度等)鉴别化学实体的结晶形式时，所述温度值各自应理解为指给定值±2℃。

固态形式

形式1

本文提供了用于描述化合物1柠檬酸盐的结晶形式(“形式1”)的特征信息汇集。

图1显示了使用CuKα辐射获得的形式1的X射线粉末衍射(XRPD)图。图1中标识的峰包括表1中所列的那些。

表1

在一些实施方案中，形式1的特征在于在9.4°、16.6°、17.4°、18.9°及19.2°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式1的特征在于在9.4°、16.6°、17.4°、18.9°、19.2°及20.7°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式1的特征在于在4.7°、9.4°、16.6°、17.4°、18.9°、19.2°、20.7°及23.0°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式1的特征在于在4.7°、9.4°、13.0°、13.8°、14.1°、16.6°、17.4°、18.4°、18.9°、19.2°、20.7°、23.0°、23.3°、23.6°及25.0°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式1的特征在于基本上如图1中所示的XRPD图。

图2显示形式1的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图2显示了起始温度是约233.4℃的吸热事件及在约242.2℃的峰。在一些实施方案中，形式1的特征在于基本上如图2中所示的DSC特征曲线。

图3显示了形式1的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图3显示在样品加热期间无显著重量损失，表明形式1未溶剂化。图3还显示形式1的分解起始温度在约226.9℃。在一些实施方案中，形式1的特征在于基本上如图3中所示的TGA特征曲线。

图4显示形式1的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示小于0.3％w/w的变化，表明形式1在湿度条件下不具有吸湿性。在一些实施方案中，形式1的特征在于基本上如图4中所示的GVS特征曲线。

在某些实施方案中，形式1是单斜晶型。在某些实施方案中，形式1属于空间群P2₁。在某些实施方案中，形式1具有以下晶胞尺寸：

α＝90°,β＝92.90°,γ＝90°。

形式2

本文提供了用于描述化合物1柠檬酸盐的结晶形式(“形式2”)的特征信息汇集。

图5显示了使用CuKα辐射获得的形式2的X射线粉末衍射(XRPD)图。在一些实施方案中，形式2的特征在于基本上如图5中所示的XRPD图。

图6显示形式2的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。在一些实施方案中，形式2的特征在于基本上如图6中所示的DSC特征曲线。

图7显示了形式2的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图7显示，形式2含有约3.3％的水。在一些实施方案中，形式2的特征在于基本上如图7中所示的TGA特征曲线。

图8显示形式2的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示，形式2在40-80％相对湿度(RH)范围内吸附水分并在超过80％RH下经历结晶事件。在介于80％与90％RH之间，该结晶事件伴随7％重量损失。在一些实施方案中，形式2的特征在于基本上如图8中所示的GVS特征曲线。

形式3

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐二水合物的结晶形式(“形式3”)的特征信息汇集。

图9显示了使用CuKα辐射获得的形式3的X射线粉末衍射(XRPD)图。图9中标识的峰包括表2中所列的那些。

表2

在一些实施方案中，形式3的特征在于7.6°、12.4°、15.2°、16.3°、21.2°及23.4°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式3的特征在于在7.6°、11.3°、12.4°、15.2°、16.3°、20.1°、21.2°及23.4°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式3的特征在于基本上如图9中所示的XRPD图。

图10显示形式3的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图10显示起始温度在约98.3℃的较宽吸热事件和在约124.6℃的峰以及在约290℃的固态-固态转变。在一些实施方案中，形式3的特征在于基本上如图10中所示的DSC特征曲线。

图11显示了形式3的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图11显示重量损失约8.4％，表明形式3是二水合物。图11还显示在约290℃发生固态-固态转变。在一些实施方案中，形式3的特征在于基本上如图11中所示的TGA特征曲线。Karl Fischer测量法显示含水量是约8.4％，进一步表明，在TGA特征曲线中观察到的重量损失是由水损失引起，并且形式3是二水合物。

图12显示形式3的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示，形式3在低于20％RH下发生脱水。在0-20％之间的RH下观察到约6.5％质量变化，表明水可以从晶格中去除。在某些实施方案中，形式3可以脱水成单水合物。在某些实施方案中，形式3可以脱水成无水形式。在一些实施方案中，形式3的特征在于基本上如图12中所示的GVS特征曲线。

形式4

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐的结晶形式(“形式4”)的特征信息汇集。

图13显示了使用CuKα辐射获得的形式4的X射线粉末衍射(XRPD)图。图13中标识的峰包括表3中所列的那些。

表3

在一些实施方案中，形式4的特征在于6.8°、9.9°、16.4°、18.3°、20.6°、23.1°及25.6°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式4的特征在于在6.8°、9.9°、16.4°、16.9°、18.3°、18.6°、19.3°、19.8°、20.6°、23.1°、23.8°、24.6°、24.8°及25.6°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式4的特征在于基本上如图13中所示的XRPD图。

图14显示形式4的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图14显示放热事件在约353℃发生。在一些实施方案中，形式4的特征在于基本上如图14中所示的DSC特征曲线。

图15显示了形式4的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图15显示分解起始温度在约347℃。在一些实施方案中，形式4的特征在于基本上如图15中所示的TGA特征曲线。

图16显示形式4的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示，形式4在湿度条件下不具有吸湿性。在一些实施方案中，形式4的特征在于基本上如图16中所示的GVS特征曲线。

形式5

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐的结晶形式(“形式5”)的特征信息汇集。

图17显示了使用CuKα辐射获得的形式5的X射线粉末衍射(XRPD)图。图17中标识的峰包括表4中所列的那些。

表4

在一些实施方案中，形式5的特征在于6.7°、14.1°、16.3°、18.3°、25.0°及25.8°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式5的特征在于在6.7°、9.9°、14.1°、16.3°、16.9°、18.3°、20.5°、25.0°、25.8°及27.5°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式5的特征在于在6.7°、9.9°、14.1°、16.3°、16.9°、18.3°、18.6°、20.5°、23.0°、23.4°、25.0°、25.8°及27.5°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式5的特征在于基本上如图17中所示的XRPD图。

图18显示形式5的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图18显示在约334℃发生熔融事件。在一些实施方案中，形式5的特征在于基本上如图18中所示的DSC特征曲线。

图19显示了形式5的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图19显示分解起始温度在约335℃。在一些实施方案中，形式5的特征在于基本上如图19中所示的TGA特征曲线。

图20显示形式5的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示，形式5在湿度条件下不具有吸湿性。在一些实施方案中，形式5的特征在于基本上如图20中所示的GVS特征曲线。

形式6

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐的非晶形式(“形式6”)的特征信息汇集。

图21显示了使用CuKα辐射获得的形式6的X射线粉末衍射(XRPD)图。在一些实施方案中，形式6的特征在于基本上如图21中所示的XRPD图。

图22显示形式6的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图22显示在约241℃发生较宽放热。在一些实施方案中，形式6的特征在于基本上如图22中所示的DSC特征曲线。

图23显示了形式6的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图23显示样品在约300℃开始降解之前，重量损失8.5％。在一些实施方案中，形式6的特征在于基本上如图23中所示的TGA特征曲线。

图24显示形式6的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示在40-60％之间RH下水分吸收5％w/w并且在70-90％之间的RH下重量损失3％。在一些实施方案中，形式6的特征在于基本上如图24中所示的GVS特征曲线。

形式7

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐的结晶形式(“形式7”)的特征信息汇集。

图25显示了使用CuKα辐射获得的形式7的X射线粉末衍射(XRPD)图。图25中标识的峰包括表5中所列的那些。

表5

在一些实施方案中，形式7的特征在于在7.1°、14.2°、15.8°、19.6°、20.9°、21.2°、22.2°、22.8°、25.2°、26.2°、27.8°、28.4°及29.7°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式7的特征在于在7.1°、14.2°、15.3°、15.8°、16.2°、17.0°、17.5°、18.9°、19.6°、20.9°、21.2°、21.7°、22.2°、22.8°、23.6°、25.2°、26.2°、27.8°、28.4°及29.7°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式7的特征在于基本上如图25中所示的XRPD图。

图26显示形式7的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图26显示在305℃发生固态-固态放热转变。在约340℃观察到分解。在一些实施方案中，形式7的特征在于基本上如图26中所示的DSC特征曲线。

图27显示了形式7的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图27显示分解起始温度在约343℃。在一些实施方案中，形式7的特征在于基本上如图27中所示的TGA特征曲线。

图28显示形式7的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示，形式7吸收10.5％的水分，表明形式7水合成为2.5当量水合物。在一些实施方案中，形式7的特征在于基本上如图28中所示的GVS特征曲线。

形式8

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐水合物的结晶形式(“形式8”)的特征信息汇集。

图29显示了使用CuKα辐射获得的形式8的X射线粉末衍射(XRPD)图。图29中标识的峰包括表6中所列的那些。

表6

在一些实施方案中，形式8的特征在于在8.1°、14.6°、16.3°、16.6°及26.1°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式8的特征在于在8.1°、14.6°、16.3°、16.6°、18.7°、19.1°、20.5°、24.8°、25.2°及26.1°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式8的特征在于基本上如图29中所示的XRPD图。

图30显示形式8的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图30显示与水损失有关的较宽吸热峰及在约280℃下发生的固态-固态放热转变。在约340℃观察到分解。在一些实施方案中，形式8的特征在于基本上如图30中所示的DSC特征曲线。

图31显示了形式8的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图31显示与水损失有关的4.1％重量损失。在约342℃观察到分解起始。在一些实施方案中，形式8的特征在于基本上如图31中所示的TGA特征曲线。

图32显示形式8的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示，在10％与90％之间的RH下，形式8具有最小重量变化。在一些实施方案中，形式8的特征在于基本上如图32中所示的GVS特征曲线。

形式9

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐水合物的结晶形式(“形式9”)的特征信息汇集。

图33显示了使用CuKα辐射获得的形式9的X射线粉末衍射(XRPD)图。图33中标识的峰包括表7中所列的那些。

表7

在一些实施方案中，形式9的特征在于在5.8°、9.3°、19.5°、25.7°及26.4°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式9的特征在于在5.8°、9.3°、11.7°、13.1°、14.7°、15.3°、18.7°、19.5°、25.7°、26.4°及31.4°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式9的特征在于基本上如图33中所示的XRPD图。

图34显示形式9的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图34显示与水损失有关的较宽吸热峰。在一些实施方案中，形式9的特征在于基本上如图34中所示的DSC特征曲线。

图35显示了形式9的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图35显示与水损失(1.5摩尔当量)有关的6％重量损失。在约333℃观察到分解起始。在一些实施方案中，形式9的特征在于基本上如图35中所示的TGA特征曲线。

形式10

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐水合物的结晶形式(“形式10”)的特征信息汇集。

图36显示了使用CuKα辐射获得的形式10的X射线粉末衍射(XRPD)图。图36中标识的峰包括表8中所列的那些。

表8

在一些实施方案中，形式10的特征在于在7.7°、12.5°、16.5°、21.3°、23.0°、23.6°、24.9°、25.4°、25.7°、26.3°、26.8°及29.3°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式10的特征在于在7.7°、8.5°、11.5°、12.5°、15.4°、16.1°、16.5°、17.1°、19.9°、21.3°、21.8°、23.0°、23.6°、24.9°、25.4°、25.7°、26.3°、26.8°、28.1°、28.7°及29.3°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式10的特征在于基本上如图36中所示的XRPD图。

图37显示形式10的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。在一些实施方案中，形式10的特征在于基本上如图37中所示的DSC特征曲线。

图38显示了形式10的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。在一些实施方案中，形式10的特征在于基本上如图38中所示的TGA特征曲线。

形式11

本文提供了用于描述化合物1盐酸盐水合物的结晶形式(“形式11”)的特征信息汇集。

图39显示了使用CuKα辐射获得的形式11的X射线粉末衍射(XRPD)图。图36中标识的峰包括表9中所列的那些。

表9

在一些实施方案中，形式11的特征在于在7.7°、8.4°、15.9°、19.9°、21.2°、23.3°、24.8°、25.2°、26.1°及27.5°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式11的特征在于在7.7°、8.4°、12.4°、15.9°、16.5°、16.9°、19.9°、21.2°、21.7°、22.9°、23.3°、24.0°、24.8°、25.2°、26.1°及27.5°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式11的特征在于基本上如图39中所示的XRPD图。

图40显示形式11的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。在一些实施方案中，形式11的特征在于基本上如图40中所示的DSC特征曲线。

图41显示了形式11的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。在一些实施方案中，形式11的特征在于基本上如图41中所示的TGA特征曲线。

形式12

本文提供了用于描述化合物1的游离碱的结晶形式(“形式12”)的特征信息汇集。

图42显示了使用CuKα辐射获得的形式12的X射线粉末衍射(XRPD)图。图42中标识的峰包括表10中所列的那些。

表10

在一些实施方案中，形式12的特征在于6.8°、9.2°、16.3°、16.7°、18.6°、25.9°及26.8°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式12的特征在于在6.8°、9.2°、11.3°、16.3°、16.7°、17.4°、18.6°、25.9°、26.8°及27.9°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式12的特征在于基本上如图42中所示的XRPD图。

图43显示形式12的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图43显示了起始温度是约226.5℃的吸热事件及在约228.4℃的峰。在一些实施方案中，形式12的特征在于基本上如图43中所示的DSC特征曲线。

图44显示了形式12的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图44显示在达到70℃时的1.0％损失，对应于0.04当量的叔丁基甲基醚。在一些实施方案中，形式12的特征在于基本上如图44中所示的TGA特征曲线。

图45显示形式12的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示在0与90％之间的RH下，形式12的重量变化约6％。在40％与60％之间的RH下观察到滞后现象(Hysterisis)，表明可能转化成水合物。在一些实施方案中，形式12的特征在于基本上如图45中所示的GVS特征曲线。

形式13

本文提供了用于描述化合物1的游离碱的结晶形式(“形式13”)的特征信息汇集。

图40显示了使用CuKα辐射获得的形式13的X射线粉末衍射(XRPD)图。图46中标识的峰包括表11中所列的那些。

表11

在一些实施方案中，形式13的特征在于在9.4°、13.9°、16.5°、18.5°、18.8°、19.3°、21.4°、23.0°、23.3°、23.9°及27.0°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式13的特征在于在9.4°、13.9°、16.1°、16.5°、18.5°、18.8°、19.1°、19.3°、19.6°、21.4°、23.0°、23.3°、23.9°、26.5°、27.0°及30.6°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式13的特征在于基本上如图46中所示的XRPD图。

图47显示形式13的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图47显示了起始温度是约163.6℃的吸热事件及起始温度是约228.2℃的吸热事件。在一些实施方案中，形式13的特征在于基本上如图47中所示的DSC特征曲线。

图48显示了形式13的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图48显示在150℃与190℃之间重量损失约1.8％。在一些实施方案中，形式13的特征在于基本上如图48中所示的TGA特征曲线。

图49显示形式13的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示在0至90％之间的RH下，形式13的总重量变化小于0.6％，表明形式13在湿度条件下不具有吸湿性。在一些实施方案中，形式13的特征在于基本上如图49中所示的GVS特征曲线。

形式14

本文提供了用于描述化合物1游离碱半水合物的结晶形式(“形式14”)的特征信息汇集。

图50显示了使用CuKα辐射获得的形式14的X射线粉末衍射(XRPD)图。图50中标识的峰包括表12中所列的那些。

表12

在一些实施方案中，形式14的特征在于6.7°、16.4°、18.0°、18.6°、25.8°及26.2°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式14的特征在于在6.7°、7.7°、11.3°、14.0°、14.9°、16.4°、17.6°、18.0°、18.6°、19.3°、25.8°、26.2°及27.1°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式14的特征在于基本上如图50中所示的XRPD图。

图51显示形式14的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图51显示了起始温度是约55.4℃的去溶剂化吸热事件及起始温度是约227.7℃的明显熔融吸热事件。在一些实施方案中，形式14的特征在于基本上如图51中所示的DSC特征曲线。

图52显示了形式14的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图52显示在40℃与130℃之间重量损失3.0％，其中2.9％的重量损失是归于水的损失，表明形式14是半水合物。在一些实施方案中，形式14的特征在于基本上如图52中所示的TGA特征曲线。Karl Fischer测量法显示含水量是约2.7％，进一步表明，在TGA特征曲线中观察到的重量损失是由水损失引起，并且形式14是半水合物。

图53显示形式14的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示在0与90％之间的RH下，形式14的总重量变化是1.5％。在一些实施方案中，形式14的特征在于基本上如图53中所示的GVS特征曲线。

形式15

本文提供了用于描述化合物1游离碱单水合物的结晶形式(“形式15”)的特征信息汇集。

图54显示了使用CuKα辐射获得的形式15的X射线粉末衍射(XRPD)图。图54中标识的峰包括表13中所列的那些。

表13

在一些实施方案中，形式15的特征在于在9.3°、18.7°、23.6°及26.4°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式15的特征在于在9.3°、14.6°、18.7°、23.6°及26.4°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式15的特征在于基本上如图54中所示的XRPD图。

图55显示形式15的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图55显示了起始温度是约110.2℃的去溶剂化吸热事件及起始温度是约225.1℃的明显熔融吸热事件。在一些实施方案中，形式15的特征在于基本上如图55中所示的DSC特征曲线。

图56显示了形式15的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图50显示在60℃与180℃之间重量损失5.0％，其中4.5％归于水损失，表明形式15是单水合物。在一些实施方案中，形式15的特征在于基本上如图56中所示的TGA特征曲线。Karl Fischer测量法显示含水量是约3.6％，进一步表明，在TGA特征曲线中观察到的重量损失是由水损失引起，并且形式15是单水合物。

图51显示形式15的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示在0与90％之间的RH下，形式15的总重量变化是2.0％。在一些实施方案中，形式15的特征在于基本上如图51中所示的GVS特征曲线。

形式16

本文提供了用于描述化合物1游离碱三水合物的结晶形式(“形式16”)的特征信息汇集。

图58显示了使用CuKα辐射获得的形式16的X射线粉末衍射(XRPD)图。图58中标识的峰包括表14中所列的那些。

表14

在一些实施方案中，形式16的特征在于在7.8°、8.5°、14.4°、15.4°及23.5°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式16的特征在于7.8°、8.5°、14.4°、15.4°、21.4°、21.6°及23.5°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式16的特征在于基本上如图58中所示的XRPD图。

图59显示形式16的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图59显示起始温度是约37.4℃的重叠吸热峰、起始温度是约190.1℃的宽吸热峰及在约228.1℃与熔融有关的明显吸热事件。在一些实施方案中，形式16的特征在于基本上如图59中所示的DSC特征曲线。

图60显示了形式16的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图60显示在40℃与85℃之间重量损失13.1％，表明形式16是三水合物。在一些实施方案中，形式16的特征在于基本上如图60中所示的TGA特征曲线。Karl Fischer测量法显示含水量是约13.3％，进一步表明，在TGA特征曲线中观察到的重量损失是由水损失引起，并且形式16是三水合物。

图61显示形式16的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。GVS显示在低于30％RH下发生脱水。在一些实施方案中，形式16的特征在于基本上如图61中所示的GVS特征曲线。

形式17

本文提供了用于描述化合物1游离碱单水合物的结晶形式(“形式17”)的特征信息汇集。

图62显示了使用CuKα辐射获得的形式17的X射线粉末衍射(XRPD)图。图56中标识的峰包括表15中所列的那些。

表15

在一些实施方案中，形式17的特征在于在6.7°、12.5°、18.2°、20.3°、23.8°、24.1°、24.7°及29.3°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式17的特征在于在6.7°、12.5°、17.3°、18.2°、20.3°、23.8°、24.1°、24.7°、25.7°及29.3°的2θ角度处具有峰的XRPD图。在一些实施方案中，形式17的特征在于基本上如图62中所示的XRPD图。

图63显示形式17的差示扫描量热法(DSC)特征曲线。DSC热谱图将样品热流量作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图63显示在约37℃下起始的吸热事件，随后是在约78℃下起始的第二吸热事件及在约228℃与熔融有关的明显吸热事件。在一些实施方案中，形式17的特征在于基本上如图63中所示的DSC特征曲线。

图64显示了形式17的热重分析(TGA)特征曲线。TGA热谱图将样品重量损失百分比作为温度的函数作图，温度变化速率是约10℃/min。图64显示在室温与170℃之间重量损失5.1％，表明形式17是单水合物。在一些实施方案中，形式17的特征在于基本上如图64中所示的TGA特征曲线。Karl Fischer测量法显示含水量是约6.5％，进一步表明，在TGA特征曲线中观察到的重量损失是由水损失引起，并且形式17是单水合物。

图65显示形式17的重量法蒸气吸附(GVS)等温曲线。在一些实施方案中，形式17的特征在于基本上如图65中所示的GVS特征曲线。

合成方法

包涵化合物1的化学实体可以通过本领域技术人员已知的方法和/或参照以下所示的方案和以下实施例制备。方案1至8中以及以下实施例中陈述了示例性合成途径。

方案1

方案1描述了化合物1柠檬酸盐的合成，下文实施例1中将作进一步例证。用硫酸处理2,6-二氯-3-氰基-5-氟吡啶(1)以得到羧酰胺(2)，用LiHMDS和DMF处理该羧酰胺得到(3)，用三乙基硅烷和TFA对其进行还原以得到4,6-二氯-7-氟-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(4)。随后使(4)与二氨基环己烷(6)偶联进行Boc保护得到(7)。二氨基环己烷(6)的合成可以见于美国专利8,440,689，该案整体并入本文中。(7)与硼烷(8)发生铃木偶合(Suzuki coupling)得到(9)。(9)脱保护得到化合物1二盐酸盐(10)，将其转化成化合物1柠檬酸盐。

方案2

方案2描述了化合物1柠檬酸盐的合成，下文实施例2中将作进一步例证。用氟化钾处理2,6-二氯-3-氰基-5-氟吡啶(1)以得到2-氯-3-氰基-4,5-二氟吡啶(11)。接着，用乙酰胺处理2-氯-3-氰基-4,5-二氟吡啶(11)以得到羧酰胺(12)。用LiHMDS和4-甲酰基吗啉处理羧酰胺(12)以得到(13)，用三乙基硅烷和TFA对其进行还原以得到4-氯-6,7-二氟-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(14)。与二氨基环己烷(6)偶合并与硼烷(8)发生铃木偶合，得到(16)。(16)脱保护得到化合物1二盐酸盐(10)，将其转化成化合物1柠檬酸盐。

方案3

方案3描述了(10)的另一替代性合成方法，下文实施例3中将作进一步例证。如上文所述制备4-氯-6,7-二氟-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(14)，接着对其进行Boc保护并与二氨基环己烷(6)偶合得到(7)。如上文所述，(7)与硼烷(8)发生铃木偶合得到(9)。(9)脱保护得到化合物1二盐酸盐(10)，将其转化成化合物1柠檬酸盐。

方案4

方案4描述了化合物1柠檬酸盐的另一替代性合成方法，下文实施例4中将作进一步例证。用二异丙基乙胺(DIPEA)和Boc二氨基环己烷(18)处理2,6-二氯-3-氰基-5-氟吡啶(1)得到(19)。接着，用多聚甲醛和甲酸处理((1S,2R)-2-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(19)得到受保护的(20)。用过氧化氢和碳酸钾处理(20)，得到羧酰胺(21)。用LiHMDS和DMF处理，得到(22)，对其进行还原以得到(23)。接着，对(23)进行Boc保护，得到(24)。与硼烷(8)发生铃木偶合，得到(25)，使其脱保护得到化合物1三氟乙酸盐(26)，将其转化成化合物1柠檬酸盐。

方案5

方案5描述了化合物1游离碱的合成以及化合物1柠檬酸盐的另一替代性合成方法，下文实施例5中将作进一步例证。如上文所述制备Boc保护的(25)，接着脱保护并用氢氧化钠处理得到化合物1游离碱(27)，将其转化成化合物1柠檬酸盐。

方案6

方案6描述了化合物1柠檬酸盐的另一替代性合成方法，下文实施例5中将作进一步例证。如上文所述制备Boc保护的(25)，接着脱保护得到化合物1盐酸盐(28)，将其转化成化合物1柠檬酸盐。

方案7

方案7描述了化合物1盐酸盐二水合物的合成，下文实施例7中将作进一步例证。用草酰氯处理2,6-二氯-5-氟烟酸(29)，随后用异丙醇处理以得到(30)。使酯(30)与二氨基环己烷(6)偶合得到(31)，用多聚甲醛和甲酸处理得到(32)。对酯进行皂化，得到(33)，用二异丙基氨基锂和二甲基甲酰胺处理以得到(34)。接着将羟基促肾上腺皮质激素(34)转化成2,4-二甲氧基苯甲基保护的内酰胺(35)。(35)与硼烷(8)发生铃木偶合得到(36)。用三氟乙酸使(36)脱保护，得到化合物1三氟乙酸盐(26)，接着Boc保护，随后转化成化合物1盐酸盐二水合物。

方案8

方案8描述了化合物1游离碱的另一替代性合成方法，下文实施例8中将作进一步例证。如上文所述制备化合物1柠檬酸盐，接着用NaOH处理得到化合物1游离碱。

在某些实施方案中，本发明涉及一种制备式I化合物

或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括使式Ia化合物

或其药学上可接受的盐与甲酰化试剂反应。

在某些实施方案中，该甲酰化试剂是式Ib化合物

或其药学上可接受的盐，其中R¹是NR^aR^b，其中R^a和R^b各自独立地是烷基或R^a和R^b与其所连接的氮一起形成五元至七元环。在某些实施方案中，R^a和R^b独立地是烷基。在某些实施方案中，R^a和R^b都是甲基。在某些实施方案中，R^a和R^b与其所连接的氮一起形成五元至七元环。在某些实施方案中，R^a和R^b与其所连接的氮一起形成六元环。在某些实施方案中，R^a和R^b与其所连接的氮一起形成吗啉环。因此，在某些实施方案中，该甲酰化试剂是4-甲酰基吗啉。

在某些实施方案中，所述使式Ia化合物与甲酰化试剂反应是在碱存在下进行。在某些此类实施方案中，碱选自六甲基二硅烷基氨基锂(LiHMDS)、六甲基二硅烷基氨基钠(NaHMDS)及六甲基二硅烷基氨基钾(KHMDS)。在某些实施方案中，碱是LiHMDS。

在某些实施方案中，本发明涉及式I化合物

或其药学上可接受的盐。

在某些实施方案中，本发明涉及一种制备式II化合物

或其药学上可接受的盐(其中R²是保护基)的方法，所述方法包括

使式IIa化合物

或其药学上可接受的盐与式IIb化合物

或其药学上可接受的盐(其中R²是保护基)反应。

在某些实施方案中，R²是N-酰基保护基。在某些实施方案中，R²选自甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基(Boc)、苯甲氧基羰基(Cbz)、烯丙基氧基羰基(Aloc)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、2-(三甲基硅烷基)乙氧基羰基(Teoc)及2,2,2-三氯乙氧基羰基(Troc)。在某些实施方案中，R²是Boc。

在某些实施方案中，所述使式IIa化合物与式IIb化合物反应是在碱存在下进行。在某些此类实施方案中，碱选自三乙胺、二异丙基乙胺及N-甲基吗啉。在某些实施方案中，碱是三乙胺。

在某些实施方案中，本发明涉及式II化合物

或其药学上可接受的盐，其中R²是保护基。

在某些实施方案中，本发明涉及一种制备式III化合物

使式II化合物

或其药学上可接受的盐(其中R²是保护基)与式IIIa化合物

或其药学上可接受的盐反应。

在某些实施方案中，所述使式II化合物与式IIIa化合物反应是在钯催化剂存在下进行。在某些此类实施方案中，钯催化剂选自Pd(PCy₃)₂Cl₂,Pd(dppf)Cl₂、Pd(dtbpf)Cl₂及Pd(PPh₃)₂Cl₂。在某些实施方案中，钯催化剂是Pd(PPh₃)₂Cl₂。

在某些实施方案中，本发明涉及式III化合物

或其药学上可接受的盐，其中R²是保护基。

在某些实施方案中，本发明涉及一种制备包含化合物1(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的化学实体的方法，该方法包括使式III化合物

或其药学上可接受的盐(其中R²是保护基)与脱保护剂反应。

在某些实施方案中，脱保护剂是酸。在某些此类实施方案中，酸选自盐酸和三氟乙酸。在某些此类实施方案中，酸是盐酸。在某些此类实施方案中，酸是三氟乙酸。

在某些实施方案中，所述方法另外包括形成化合物1柠檬酸盐。在某些此类实施方案中，形成化合物1柠檬酸盐包括(i)用碱处理，由此得到化合物1游离碱，随后处理柠檬酸。在某些此类实施方案中，碱是氢氧化钠。在某些替代性此类实施方案中，形成化合物1柠檬酸盐包括用柠檬酸二氢钠处理。

因此，在某些实施方案中，本发明涉及一种制备化合物1或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括

(i)使式IIa化合物

或其药学上可接受的盐与式IIb化合物

或其药学上可接受的盐(其中R²是保护基)反应，得到式II化合物

或其药学上可接受的盐，其中R²是保护基；

(ii)使式II化合物与式IIIa化合物

或其药学上可接受的盐反应，得到式III化合物；

或其药学上可接受的盐，其中R²是保护基；

(iii)使式III化合物与脱保护剂反应。

在某些实施方案中，本发明涉及一种用于制备式IV化合物

或其药学上可接受的盐的方法，其中R³和R⁴各自独立地是保护基或R³和R⁴一起是保护基并且R⁵是保护基，所述方法包括使式IVa化合物

或其药学上可接受的盐(其中R³和R⁴各自独立地是保护基或R³和R⁴一起是保护基并且R⁵是保护基)与甲酰化试剂反应。

在某些实施方案中，R³和R⁴各自独立地是保护基。在某些实施方案中，R³和R⁴一起是保护基。在某些此类实施方案中，R³和R⁴一起是C_1-4亚烷基，如亚甲基(-CH₂-)、二甲基亚甲基(-C(CH₃)₂-)或苯亚甲基。在某些实施方案中，R³和R⁴一起是亚甲基。

在某些实施方案中，R⁵是N-酰基保护基。在某些实施方案中，R⁵选自甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基(Boc)、苯甲氧基羰基(Cbz)、烯丙基氧基羰基(Aloc)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、2-(三甲基硅烷基)乙氧基羰基(Teoc)及2,2,2-三氯乙氧基羰基(Troc)。在某些实施方案中，R⁵是Boc。

在某些实施方案中，所述使式IVa化合物与甲酰化试剂反应是在碱存在下进行。在某些此类实施方案中，碱选自六甲基二硅烷基氨基锂(LiHMDS)、六甲基二硅烷基氨基钠(NaHMDS)、六甲基二硅烷基氨基钾(KHMDS)及二异丙基氨基锂(LDA)。在某些实施方案中，碱是LiHMDS。在某些实施方案中，该甲酰化试剂是N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。

在某些实施方案中，本发明涉及式IV化合物

或其药学上可接受的盐，其中R³和R⁴各自独立地是保护基或R³和R⁴一起是保护基并且R⁵是保护基。

在某些实施方案中，本发明涉及一种用于制备式V化合物

或其药学上可接受的盐(其中R³和R⁴各自独立地是保护基或R³和R⁴一起是保护基并且R⁵是保护基)的方法，所述方法包括在还原条件下还原式(IV)化合物

在某些实施方案中，还原条件包含将羟基转化成离去基团，随后用还原剂处理。在某些实施方案中，该离去基团选自烷羧酸酯基、芳基羧酸酯基、甲酸酯基、磷酸酯基、碳酸酯基和硫酸酯基。在某些实施方案中，离去基团是乙酸酯基。在某些实施方案中，还原剂选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、硼氢化锂、氢化锂铝及三乙酰氧基硼氢化钠。在某些实施方案中，还原剂是硼氢化钠。

在某些实施方案中，本发明涉及式V化合物

在某些实施方案中，本发明涉及一种制备包含化合物1(例如化合物1或其药学上可接受的盐)的化学实体的方法，所述方法包括在脱保护条件下，使式VI化合物

或其药学上可接受的盐(其中R³和R⁴各自独立地是保护基或R³和R⁴一起是保护基并且R⁵和R⁶各自独立地是保护基)脱保护。

在某些实施方案中，R⁵和R⁶各自独立地是N-酰基保护基。在某些实施方案中，R⁵和R⁶各自独立地选自甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基(Boc)、苯甲氧基羰基(Cbz)、烯丙基氧基羰基(Aloc)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、2-(三甲基硅烷基)乙氧基羰基(Teoc)及2,2,2-三氯乙氧基羰基(Troc)。在某些实施方案中，R⁵是Boc。在某些实施方案中，R⁶是Boc。

在某些实施方案中，脱保护条件包含用酸处理式VI化合物，随后用碱处理。在某些此类实施方案中，酸选自三氟乙酸、氢碘酸及三甲基碘硅烷。在某些实施方案中，三甲基碘硅烷可以通过使三甲基氯硅烷与碘盐反应产生。在某些此类实施方案中，酸是三氟乙酸。在某些此类实施方案中，酸是三甲基氯硅烷、碘化钠与氢碘酸的混合物。在某些实施方案中，碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、羟胺及肼。在某些此类实施方案中，碱是氢氧化钠与肼的混合物。

在某些实施方案中，所述方法另外包括形成化合物1柠檬酸盐。在某些此类实施方案中，形成化合物1柠檬酸盐包括用碱处理，由此得到化合物1游离碱，随后用柠檬酸处理。在某些此类实施方案中，碱是氢氧化钠。在某些替代性此类实施方案中，形成化合物1柠檬酸盐包括用柠檬酸二氢钠处理。

在某些实施方案中，本发明涉及式VI化合物

或其药学上可接受的盐，其中R³和R⁴各自独立地是保护基或R³和R⁴一起是保护基，并且R⁵和R⁶各自独立地是保护基。

用途

在某些实施方案中，本发明的化学实体可用作SYK抑制剂。因此，可以根据本文详细提供的方法，或本领域中已知的方法测定本发明化学实体在体外或体内，或在细胞或动物模型中抑制SYK的能力。可以直接评估这些化学实体结合SYK酶或介导SYK酶活性的能力。或者，可以通过间接细胞测定，或测量SYK活化的下游影响以评估SYK抑制的下游影响的抑制的测定来评估化学实体的活性。

如果药学上可接受的盐是用于这些组合物中的本发明的化学实体，那么这些盐优选衍生自无机或有机酸和碱。有关适合盐的评述，参见例如，Berge等人,J.Pharm.Sci.66:1-19(1977)；及Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第20版,A.Gennaro(ed.),Lippincott Williams&Wilkins(2000)("Remington's")。

适合的酸加成盐的实例包括下述：乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基-丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫代氰酸盐、甲苯磺酸盐及十一烷酸盐。

此外，碱性含氮基团可以用以下试剂季铵化：低级烷基卤化物，如甲基、乙基、丙基及丁基氯化物、溴化物及碘化物；硫酸二烷酯，如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯及硫酸二戊酯；长链卤化物，如癸基、月桂基、棕榈基及硬脂基氯化物、溴化物及碘化物；芳烷基卤化物，如苯甲基和苯乙基溴化物等。由此获得水或油可溶或可分散的产物。

在某些实施方案中，本发明涉及一种包含含化合物1的化学实体的药物组合物。本发明的药物组合物优选呈适于施用给受体对象，优选哺乳动物，更优选人类的形式。术语“药学上可接受的载体”在本文中用于指这样一种材料，该材料与受体对象相容，并且适于将活性剂递送到目标部位，同时不会终止该药剂的活性。与该载体相关的毒性或副作用(如果存在)优选与用于活性剂预定用途的合理风险/效益比相称。本领域中已知许多此类药学上可接受的载体。参见例如，Remington's；Handbook of Pharmaceutical Excipients,第6版,R.C.Rowe等人(编),Pharmaceutical Press(2009)。

本发明的药物组合物可以通过本领域众所周知的方法，如常规制粒、混合、溶解、囊封、冻干或乳化法等制造。组合物可以被制成各种形式，包括颗粒、沉淀物或微粒、粉末(包括冻干的粉末、旋转干燥的粉末或喷雾干燥的粉末、无定形粉末)、片剂、胶囊、糖浆、栓剂、注射液、乳液、酏剂、悬浮液或溶液。配制物可以任选含有稳定剂、pH调节剂、表面活性剂、增溶剂、生物利用率调节剂及其组合。

可以用于这些组合物中的药学上可接受的载体包括离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白，如人血清白蛋白；缓冲物质，如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾；饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐；胶状二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；纤维素类物质；聚乙二醇；羧甲基纤维素钠；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚氧化丙烯嵌段聚合物；聚乙二醇；及羊毛脂。

在某些实施方案中，本发明的组合物可以被配制用于向哺乳动物，如人类施用药物。此类本发明的药物组合物可以经口、胃肠外、通过吸入喷雾、表面、直肠、经鼻、经颊、阴道或经由植入储集器施用。如本文所使用，术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、腹膜内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内及颅内注射或输注技术。优选地，所述药物组合物是经口、静脉内或皮下施用。在某些实施方案中，医药组合物适于经口施用。本发明的药物组合物可以被设计成短效、快速释放或长效的。又另外，药物组合物可以适于局部施用或全身施用。

药物组合物可以施用液体，如油、水、醇及其组合制备为液体悬浮液或溶液形式。可以包括增溶剂，如环糊精。对于经口或胃肠外施用，可以添加药学上适合的表面活性剂、悬浮剂或乳化剂。悬浮液可以包括油，如花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油及橄榄油。悬浮液制剂还可以含有脂肪酸酯，如油酸乙酯、棕榈树异丙酯、脂肪酸甘油酯及乙酰基化脂肪酸甘油酯。悬浮液配制物可以博阿奎醇类，如乙醇、异丙醇、十六烷醇、甘油及丙二醇。悬浮液配制物中还可以使用醚类，如聚(乙二醇)；石油烃类，如矿物油和矿脂；及水。

本发明组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域中已知的技术，使用适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制。无菌可注射制剂也可以是于胃肠外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如于1.3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的媒剂和溶剂有水、林格氏溶液及等渗氯化钠溶液。此外，还通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。为此，可以采用任何温和的不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。脂肪酸(如油酸)和其甘油酯衍生物，以及天然的药学上可接受的油，如橄榄油或蓖麻油，尤其是其聚氧乙基化形式，可用于制备可注射制剂。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素，或常用于配制包括乳液和悬浮液在内的药学上可接受的剂型的类似分散剂。常用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型的其它常用表面活性剂，如Tweens、Spans及其它乳化剂或生物利用率增强剂，也可用于配制目的。化合物可以被配制用于通过注射，如通过推注或连续输注胃肠外施用。注射用单位剂型可以在安瓿或多剂量容器中。

经口施用的本发明的药物组合物可以呈任何口服可接受的剂型，包括胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液，优选胶囊或片剂。在某些实施方案中，口服剂型是片剂。在某些实施方案中，口服剂型是囊片。当口服使用需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。必要时，也可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。在某些固体剂型中，将活性化学实体与至少一种药学上可接受的惰性赋形剂或载体混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，和/或a)填充剂或增量剂，包括但不限于，乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、微晶纤维素及硅酸；b)粘合剂，包括但不限于，羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、蔗糖及阿拉伯胶；c)保湿剂，包括但不限于，甘油；d)崩解剂，包括但不限于，琼脂、碳酸钙、聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素、羟基乙酸淀粉钠、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠；e)溶解延迟剂，包括但不限于，石蜡；f)吸收促进剂，包括但不限于，季铵化合物；g)润湿剂，包括但不限于，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸附剂，包括但不限于，高岭土和膨润土；和/或i)润滑剂，包括但不限于，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、硬脂基反丁烯二酸钠、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠、二氧化硅及其混合物。在胶囊、锭剂及丸剂的情况下，这些剂型还可以包含缓冲剂。在某些实施方案中，片剂可以使用湿式制粒方法制造。在某些实施方案中，片剂可以使用干式制粒方法制造。在某些实施方案中，片剂可以使用直接压片方法制造。

在某些实施方案中，本发明涉及一种包含含化合物1的化学实体的药物组合物。在某些实施方案中，本发明涉及一种适于经口施用的包含含化合物1的化学实体的药物组合物，如片剂或胶囊。在某些此类实施方案中，含化合物1的化学实体选自形式1、形式2、形式3、形式4、形式5、形式6、形式7、形式8、形式9、形式10、形式11、形式12、形式13、形式14、形式15、形式16及形式17，或其任何组合。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的柠檬酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式1。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的盐酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式3。因此，在某些实施方案中，本发明涉及一种包含化合物1柠檬酸盐，如形式1的片剂。在某些此类实施方案中，该片剂包含约20mg、约60mg或约100mg的化合物1柠檬酸盐，如形式1。

在某些实施方案中，包含化合物1的化学实体的剂量是约1mg至约3000mg，约1mg至约1000mg，约1mg至约500mg，约10mg至约200mg，约50mg至约150mg，约60mg至约120mg，或约60mg至约100mg。在某些实施方案中，包含化合物1的化学实体的剂量是约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg或约150mg。此类剂量可以包含一粒或多粒片剂或胶囊(例如，60mg总日剂量可以包含一粒60mg片剂，或者可以包含三粒20mg片剂)。在某些实施方案中，剂量是包含化合物1的化学实体的总日剂量。在某些实施方案中，该总日剂量可以每天一次给与，或者可以分次给与，以每天两次或每天三次给与包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，含化合物1的化学实体选自形式1、形式2、形式3、形式4、形式5、形式6、形式7、形式8、形式9、形式10、形式11、形式12、形式13、形式14、形式15、形式16及形式17，或其任何组合。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的柠檬酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式1。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的盐酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式3。

活性化学实体也可以是与一种或多种上述赋形剂一起微囊封的形式。固体剂型片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂及颗粒剂可以利用包衣及外壳，如肠衣、控释包衣及其它药物配制领域中众所周知的包衣制备。在这些固体剂型中，可以将活性化合物与至少一种惰性稀释剂，如蔗糖、乳糖或淀粉混合。与常规实践相同，这些剂型也可以包含除惰性稀释剂外的其它物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、锭剂及丸剂的情况下，这些剂型还可以包含缓冲剂。这些剂型可以任选地含有遮光剂并且还可以具有使其任选地以延迟的方式仅在或优先在肠道某一部分中活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。

或者，施用的本发明药物组合物也可以呈供直肠施用的栓剂的形式。这些组合物可以通过将药剂与适合的非刺激性赋形剂混合来制备，所述适合的非刺激性赋形剂在室温下是固体，但在直肠温度下是液体，并因此会在直肠中熔融，从而释放出药物。此类物质包括可可脂、蜂蜡及聚乙二醇。

本发明的药物组合物还可以局部施用，尤其是在治疗目标包括通过局部施用容易达到的区域或器官时，包括眼部、皮肤或下肠道的疾病。易于制备适合的表面配制物用于这些区域或器官中的每一种。

下肠道的局部施用可以用适于通过直肠栓剂施用的组合物或用适合灌肠配制物实现。还可以使用局部施用的透皮贴片。对于局部施用，药物组合物可以被配制成含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分的适合油膏形式。用于局部施用本发明化合物的载体包括矿物油、液体矿油、白矿油、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡及水。或者，药物组合物可以被配制成含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的适合洗液或乳膏形式。适合的载体包括矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇及水。

对于眼部应用，药物组合物可以在等渗、pH调节的无菌生理盐水配制成微粉化悬浮液形式，或优选在等渗、pH调节的无菌生理盐水中配制成溶液形式，其中添加或不添加防腐剂，如苯扎氯铵。或者，对于眼部应用，药物组合物可以被配制成油膏形式，如矿脂。

本发明的药物组合物还可以通过鼻用气雾剂或吸入剂施用。此类组合物是根据药物配制物领域中众所周知的技术制备，并且可以采用苯甲醇或其它适合的防腐剂、用以增强生物利用率的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂，在生理盐水中制备成溶液形式。

本发明的药物组合物特别适用于涉及本文所描述的病症(例如增生性病症，例如癌症、炎症、神经退化性病症)的治疗应用。如本文所使用，术语“对象”是指动物，优选哺乳动物，最优选人类。如本文所使用，术语“患者”是指人类。优选地，该组合物被配制成向患有待治疗的相关病症或有发生该病症的风险或经历该病症的复发的患者或对象施用。本发明的药物组合物优选是被配制成口服、静脉内或皮下施用的那些。然而，含有本发明化学实体的上述剂型中的任一种刚好在常规实验的范围内，并因此，刚好在本发明的范围内。在某些实施方案中，本发明的药物组合物可以另外包含另一治疗剂。优选地，此类其它治疗剂是常施用给患有待治疗病症、疾病或疾患的患者的治疗剂。

本发明的化学实体可以用于治疗适合抑制SYK的病症、疾病及疾患。这些病症、疾病及疾患一般与对象的任何不健康或异常状态有关，对于病症、疾病及疾患来说，抑制SYK将提供治疗益处。更确切地说，此类病症、疾病及疾患可能涉及免疫系统和炎症，包括I型过敏反应(过敏性鼻炎、过敏性哮喘及特应性皮炎)；自身免疫性疾病(类风湿性关节炎、多发性硬化、全身性红斑狼疮、银屑病及免疫性血小板减少性紫癜)；肺部炎症(慢性阻塞性肺病)及血栓。本发明的化学实体还可以用于治疗与异常细胞生长有关的病症、疾病及疾患，包括恶性血液病，如急性髓性白血病、B细胞慢性淋巴细胞性白血病、B细胞淋巴瘤(例如套细胞淋巴瘤)及T细胞淋巴瘤(例如外周T细胞淋巴瘤)，以及上皮癌(即，癌瘤)，如肺癌、胰腺癌及结肠癌。

如本文所使用，术语“治疗(treating/treatment)”包括以改善或稳定对象的疾患的方式逆转、减轻或停滞疾患的症状、临床征象及潜在病理学。

除上文所述的恶性血液病和上皮癌外，本发明的化学实体还可以用于治疗其它类型癌症，包括白血病(慢性粒细胞性白血病和慢性淋巴细胞性白血病)；乳腺癌、泌尿生殖道癌症、皮肤癌、骨癌、前列腺癌及肝癌；脑癌；喉癌、胆囊癌、直肠癌、副甲状腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、神经组织癌症、膀胱癌、头癌、颈癌、胃癌、支气管癌及肾癌；基底细胞癌、鳞状细胞癌、转移性皮肤癌、骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、骨网状细胞肉瘤及卡波西氏肉瘤(Kaposi’s sarcoma)；骨髓瘤、巨细胞瘤、胰岛细胞瘤、急慢性礼拜那细胞和粒细胞肿瘤、毛细胞肿瘤、腺瘤、髓样癌、嗜铬细胞瘤、粘膜神经瘤、肠神经节瘤、增生性角膜神经肿瘤、马方氏症体型肿瘤、威尔姆氏肿瘤(Wilms’tumor)、精原细胞瘤、卵巢肿瘤、平滑肌瘤、子宫颈非典型增生、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、骨髓增生异常综合症、横纹肌肉瘤、星形细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、恶性高钙血症、真性红细胞增多症、腺癌、多形性成胶质细胞瘤、神经胶质瘤、淋巴瘤及恶性黑色素瘤等。

除癌症外，本发明的化学实体还可以用于治疗其它与异常细胞生长有关的疾病，包括非恶性增生性疾病，如良性前列腺肥大、再狭窄、增生、滑膜增生病症、视网膜病或眼部其它新生血管病症等。

除上文所列的那些外，本发明的化学实体还可以用于治疗自身免疫性病症。这些病症、疾病及疾患包括克隆氏病(Crohns disease)、皮肌炎、1型糖尿病、古德帕斯彻综合症(Goodpasture’s syndrome)、格雷夫氏病(Graves’disease)、格-巴二氏综合症(Guillain-Barrésyndrome)、桥本氏病(Hashimoto’s disease)、混合型结缔组织损伤、重症肌无力、发作性睡病、寻常性天疱疮、恶性贫血、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、修格连氏综合症(

syndrome)、颞动脉炎、溃疡性结肠炎、脉管炎及韦格纳氏肉芽肿(Wegener’sgranulomatosis)等。

另外，本发明的化学实体还可以用于之了炎症性病症，包括哮喘、慢性炎症、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、过敏、炎症性肠病(溃疡性结肠炎和克隆氏病)、盆腔炎、再灌注损伤、移植排斥反应、脉管炎及全身炎症反应综合症。

本发明的化学实体也可以用于治疗在一种或多种上述普通病症范围内的特定疾病，包括关节炎。除类风湿性关节炎、修格连氏综合症、全身性红斑狼疮、儿童和青少年型SLE外，本发明的化学实体还可以用于之了其它关节炎疾病，包括强直性脊柱炎、无血管性坏死、白塞特氏病(Bechet’s disease)、滑囊炎、二水合焦磷酸钙晶体沉积病(假性痛风)、腕管综合症、Ehlers-Danlos综合症、纤维肌痛、传染性红斑、巨细胞动脉炎、痛风、幼年型皮肌炎、幼年型类风湿性关节炎、幼年型脊柱关节病、莱姆氏病(Lyme disease)、马凡氏综合症(Marfan syndrome)、肌炎、骨关节炎、成骨不全症、骨质疏松症、佩吉特氏病(Paget’sdisease)、银屑病关节炎、雷诺现象(Raynaud’s phenomenon)、反应性关节炎、反射性交感神经营养不良综合症、硬皮病、脊柱狭窄、斯蒂尔氏病(Still’s disease)及腱炎等。

因此，在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，该方法包括向癌症患者施用包含化合物1的化学实体。在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，该方法包括向癌症患者施用包含含化合物1的化学实体的药物组合物。在某些此类实施方案中，含化合物1的化学实体选自形式1、形式2、形式3、形式4、形式5、形式6、形式7、形式8、形式9、形式10、形式11、形式12、形式13、形式14、形式15、形式16及形式17，或其任何组合。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的柠檬酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式1。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的盐酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式3。

在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗血液癌症的方法，该方法包括向血液癌症患者施用包含化合物1的化学实体。在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗血液癌症的方法，该方法包括向癌症患者施用包含含化合物1的化学实体的药物组合物。在某些此类实施方案中，含化合物1的化学实体选自形式1、形式2、形式3、形式4、形式5、形式6、形式7、形式8、形式9、形式10、形式11、形式12、形式13、形式14、形式15、形式16及形式17，或其任何组合。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的柠檬酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式1。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的盐酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式3。

在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗白血病或淋巴瘤的方法，该方法包括向白血病或淋巴瘤患者施用包含化合物1的化学实体。在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，该方法包括向白血病或淋巴瘤患者施用包含含化合物1的化学实体的药物组合物。在某些此类实施方案中，含化合物1的化学实体选自形式1、形式2、形式3、形式4、形式5、形式6、形式7、形式8、形式9、形式10、形式11、形式12、形式13、形式14、形式15、形式16及形式17，或其任何组合。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的柠檬酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式1。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的盐酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式3。

在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的患者施用包含化合物1的化学实体。

在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的患者施用包含化合物1的化学实体。

在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的患者施用包含含化合物1的化学实体的药物组合物。

在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的患者施用包含含化合物1的化学实体的药物组合物。

在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自iNHL、MCL、PT-LPD、DLBCL、CLL及AML的癌症的方法。在某些此类实施方案中，该癌症选自iNHL、MCL、PT-LPD、DLBCL及AML。在某些此类实施方案中，该癌症选自DLBCL、CLL及AML。在某些此类实施方案中，该癌症选自DLBCL和AML。在某些实施方案中，该癌症是PTCL。在某些实施方案中，该癌症是DLBCL。在某些实施方案中，该癌症是FL。在某些实施方案中，该癌症是MCL。在某些实施方案中，该癌症是CLL。在某些实施方案中，该癌症是AML。在某些实施方案中，该癌症是MDS。在某些实施方案中，该癌症是鼻咽癌。在某些实施方案中，该癌症是淋巴瘤。在某些实施方案中，该癌症是胃癌。在某些实施方案中，该癌症是乳腺癌。在某些实施方案中，该癌症是卵巢癌。在某些实施方案中，该癌症是肺癌(例如小细胞肺癌)。在某些实施方案中，该癌症是移植后淋巴组织增生病症。在某些实施方案中，该癌症是iNHL。

在某些此类实施方案中，含化合物1的化学实体选自形式1、形式2、形式3、形式4、形式5、形式6、形式7、形式8、形式9、形式10、形式11、形式12、形式13、形式14、形式15、形式16及形式17，或其任何组合。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的柠檬酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式1。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的盐酸盐。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是形式3。

在某些此类实施方案中，本发明涉及一种治疗选自外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的患者施用约1mg至约3000mg、约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约10mg至约200mg、约50mg至约150mg、约60mg至约120mg或约60mg至约100mg剂量，如总日剂量的包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，该剂量是经口施用的。

在某些此类实施方案中，本发明涉及一种治疗选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的患者施用约1mg至约3000mg、约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约10mg至约200mg、约50mg至约150mg、约60mg至约120mg或约60mg至约100mg剂量，如总日剂量的包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，该剂量是经口施用的。

在某些此类实施方案中，本发明涉及一种治疗选自外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、淋巴瘤、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的患者施用约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg或约150mg的包含化合物1的化学实体剂量，如总日剂量的包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，该剂量是经口施用的。

在某些此类实施方案中，本发明涉及一种治疗选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(例如小细胞肺癌)及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)的癌症的患者施用约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg或约150mg的包含化合物1的化学实体剂量，如总日剂量的包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，该剂量是经口施用的。

在某些此类实施方案中，该癌症选自iNHL、MCL、PT-LPD、DLBCL、CLL及AML。在某些此类实施方案中，该癌症选自iNHL、MCL、PT-LPD、DLBCL及AML。在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自DLBCL、CLL及AML的癌症的方法，所述方法包括向患有选自DLBCL、CLL及AML的癌症的患者施用包含化合物1的化学实体。在某些实施方案中，本发明涉及一种治疗选自DLBCL、CLL及AML的癌症的方法，所述方法包括向患有选自DLBCL、CLL及AML的癌症的患者施用包含含化合物1的化学实体的药物组合物。在某些实施方案中，该癌症选自DLBCL和AML。在某些实施方案中，该癌症是CLL。在某些实施方案中，该癌症是AML。在某些实施方案中，该癌症是DLBCL。在某些实施方案中，该癌症是PTCL。在某些实施方案中，该癌症是FL。在某些实施方案中，该癌症是MCL。在某些实施方案中，该癌症是MDS。在某些实施方案中，该癌症是鼻咽癌。在某些实施方案中，该癌症是淋巴瘤。在某些实施方案中，该癌症是胃癌。在某些实施方案中，该癌症是乳腺癌。在某些实施方案中，该癌症是卵巢癌。在某些实施方案中，该癌症是肺癌(例如小细胞肺癌)。在某些实施方案中，该癌症是移植后淋巴组织增生病症。在某些实施方案中，该癌症是iNHL。

在某些此类实施方案中，含化合物1的化学实体选自形式1、形式2、形式3、形式4、形式5、形式6、形式7、形式8、形式9、形式10、形式11、形式12、形式13、形式14、形式15、形式16及形式17，或其任何组合。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的柠檬酸盐(例如形式1或形式2)。在某些此类实施方案中，化合物1的柠檬酸盐是形式1。在某些实施方案中，含化合物1的化学实体是化合物1的盐酸盐(例如形式3或形式4)。在某些此类实施方案中，化合物1的盐酸盐是形式3。

在某些此类实施方案中，本发明涉及一种治疗选自DLBCL、CLL及AML的癌症的方法，所述方法包括向患有选自DLBCL、CLL及AML的癌症的患者施用约1mg至约3000mg、约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约10mg至约200mg、约50mg至约150mg、约60mg至约120mg或约60mg至约100mg剂量，如总日剂量的包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，该剂量是经口施用的。

在某些此类实施方案中，本发明涉及一种治疗选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、套细胞淋巴瘤、移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)及急性髓性白血病(AML)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、套细胞淋巴瘤、移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)及急性髓性白血病(AML)的癌症的患者施用约1mg至约3000mg、约1mg至约1000mg、约1mg至约500mg、约10mg至约200mg、约50mg至约150mg、约60mg至约120mg或约60mg至约100mg剂量，如总日剂量的包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，该剂量是经口施用的。

在某些此类实施方案中，本发明涉及一种治疗选自DLBCL、CLL及AML的癌症的方法，所述方法包括向患有选自DLBCL、CLL及AML的癌症的患者施用约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg或约150mg包含化合物1的化学实体的剂量，如总日剂量的包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，该剂量是经口施用的。

在某些此类实施方案中，本发明涉及一种治疗选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、套细胞淋巴瘤、移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)及急性髓性白血病(AML)的癌症的方法，所述方法包括向患有选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、套细胞淋巴瘤、移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)及急性髓性白血病(AML)的癌症的患者施用约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg或约150mg包含化合物1的化学实体的剂量，如总日剂量的包含化合物1的化学实体。在某些此类实施方案中，该剂量是经口施用的。

为了更完全地了解本发明，陈述以下制备和测试实施例。这些实施例只是用于说明目的，并且不打算解释为以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1.合成6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐(化合物1柠檬酸盐).

步骤1. 2,6-二氯-5-氟烟酰胺(2).

将2,6-二氯-5-氟烟腈(1)装入装备有顶置式搅拌器、热电偶及N₂进口和出口的50L带夹套的圆柱形反应器中。将浓硫酸(27.22kg，4.93体积)添加至烧瓶中并开始搅拌。将褐色混合物加热至65℃并搅拌1小时，并获得澄清褐色溶液。接着，将褐色混合物冷却至环境温度，然后冷却至<10℃。冷却时，向一个单独的100L带夹套的反应器中装入去离子(DI)水(74.0L，24.7体积)并将水冷却至0–5℃。接着经一小时三十五分钟将反应混合物转移至冷却的水中并保持内温低于20℃。由此得到的浆液经带有聚丙烯(PP)滤布的18”HastelloyNutsche漏斗过滤。该50L反应器用水(3×12L，3×4体积)冲洗并将冲洗液转移至漏斗中以洗涤滤饼。调节滤饼16小时并转移至干燥的盘中。在高真空下，在40–50℃干燥固体29小时，得到2.856kg呈米色固体状的(2)，产率87％。¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.23(d,J＝7.9Hz,1H),8.10(s,1H),7.94(s,1H)。

步骤2. 4,6-二氯-7-氟-1-羟基-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(3).

在外部冷却至–3℃情况下，向装备有数据记录器、热电偶及氮气进口和出口的50L带夹套的反应器中装入双(三甲基硅烷基)氨基锂(LiHMDS，20.22kg，2.50当量)于四氢呋喃(THF)中的1M溶液。在环境温度下，向一个100L带夹套的反应器中装入(2)、无水THF(18L，11.85kg，7.0体积)及N,N-二甲基甲酰胺(DMF，1.99kg，3.0当量)。将该100L反应器中的批料装入该50L反应器中的LiHMDS中，同时将内部批料温度维持在5℃以下，保持1小时。1小时后，在0℃下，在含有2N盐酸(HCl，4.8L)于DI水(24.0L，6.25体积)中的溶液的100L反应器中使反应物缓慢骤冷，同时内温在20℃以下保持2小时。将批料萃取至乙酸异丙酯(IPAc)(38.0L，20.0体积)中并在38℃下将有机萃取物减压浓缩至约8.0L(5.0体积)。再装入一份IPAc(28.5L，15.0体积)并且再次将批料减少至约5.0体积(9.0L)，得到黄色浆液。经1小时将庚烷(38.0L，20.0体积)装入批料中并使用装备有PP布和真空接收器的18”HastelloyNutsche过滤器分离固体。滤饼用庚烷(2×9.50L，5.0体积)冲洗两次并在氮气层下调节30分钟。再在25℃下，在真空下干燥固体24小时，得到(3)(1.9358kg)，产率89.8％。¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ9.52(s,1H),6.91(d,J＝9.6Hz,1H),6.10(dd,J₁＝2.6Hz,J₂＝9.5Hz,1H)。

步骤3. 4,6-二氯-7-氟-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(4).

在环境温度下，向装备有数据记录器、热电偶及氮气进口和出口的一个50L带夹套的反应器中装入(3)(1.92kg，8.10mol)和二氯甲烷(DCM，9.60L，5.0体积)。经10分钟装入三氟乙酸(10.86kg，11.76当量)和三乙基硅烷(4.68kg，4.97当量)，同时保持内温低于20℃。将反应物加热至40℃内温并保持10h。反应物接着冷却至10℃，经2小时缓慢添加甲基叔丁基醚(MTBE，28.80L，15.0体积)。使所得浆液在10℃下老化15分钟并经装备有PP布和真空接收器的18”Hastelloy Nutsche过滤器过滤。滤饼用MTBE(2×7.68L，4.0体积)冲洗两次并调节2小时。再在25℃下，在真空下干燥固体，得到呈白色固体状的(4)(1.699kg)，95％产率。¹H NMR(300MHz,d₆-DMSO)δ9.16(s,1H),4.55(s,2H)。

步骤4. 4,6-二氯-7-氟-3-氧代-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2(3H)-甲酸叔丁酯(5).

在环境温度下，向一个装备有数据记录器、热电偶及氮气进口和出口的50L带夹套的反应器中装入(4)(3.4kg)、DCM(13.7L，4.0体积)及4-二甲基氨基吡啶(DMAP，38g，0.02当量)。经15分钟时间装入Boc-酸酐(3.91kg，1.1当量)于DCM(3.4L，1.0体积)中的溶液，同时保持内温低于25℃。含有Boc酸酐溶液的烧瓶用DCM(3.4L，1体积)冲洗，放入批料中。在环境温度下搅拌反应17小时，接着减压浓缩至9L保留在反应器中。添加乙醇(34.0L，10.0体积)并将混合物减压蒸馏至约6.0体积(21L)。将批料温度调至18℃并通过用装备有PP布和真空接收器的18”Hastelloy Nutsche过滤器真空过滤来分离所得浆液。滤饼用EtOH(3×6.8L，3×2.0体积)冲洗三次并调节23小时。固体被认为是干燥的，得到呈粉色固体状的(5)(4.184kg)，84％产率。¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ4.91(s,2H),1.53(s,9H)。

步骤5. 6-(((1R,2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)氨基)-4-氯-7-氟-3-氧代-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2(3H)-甲酸叔丁酯(7).

向氮气吹扫的30L带夹套的圆柱形反应器中装入MTBE(6.84L)和(6)扁桃酸酯(1.703kg)并在20±5℃下搅拌。将2N NaOH装入该反应器中，同时保持批料温度<25℃。搅拌混合物30分钟，随后分离各相并将其转移至烧瓶中。将水相放回反应器中并用反MTBE(6.84L)萃取。将所得有机相与先前的有机相合并，并依序用DI水(6L)和盐水(6L)洗涤。用设置为50℃、7.6inHg真空及24.2–24.3℃批料温度的夹套将批料浓缩至5L。释放真空并将7.2L异丙醇(IPA)装入反应物中。在35.9℃初始内部温度(夹套温度50℃)下，对反应器再施加6inHg真空。从12L浓缩至8L之后，使真空增加至2.9inHg，再保持一小时，并再次增加至2.5inHg，直到达到3L的终点。在20±5℃下，在氮气下保持批料过夜，随后再次蒸馏。接着，将7.2L IPA装入批料中并将夹套加热至50℃。施加2.4inHg真空3.5小时，直到达到目标终点5L。在整个蒸馏过程中，批料保持在温度35–40℃。去除真空并将夹套冷却至20±5℃。

将(5)(1.2kg)、IPA(1.2L)、DIPEA(0.85L)及DMSO(1.2L)装入30L反应器中。将批料加热至76℃并搅拌总计46小时。接着通过添加IPA(3.8L)将DMSO/IPA的体积比调至6:1。经由输送泵将H₂O(4.8L)添加至反应物中，同时保持批料温度高于65℃。添加后，未观察到固体沉淀。用(7)(7.5g)接种反应器并经3小时将反应物冷却至25℃。2小时后，观察到批料呈悬浮液形式。接着在25℃下搅拌批料1小时并通过真空过滤分离产物。固体用6:4:1IPA/H₂O/DMSO(2.4L)和3:2IPA/H₂O(2×2.4L)洗涤。调节产物30分钟并在真空下，在45℃下干燥2天，得到呈亮粉色固体状的(7)(798g，43％产率)。

将(7)(22.6kg)、异丙醇(17.7kg)及正庚烷(46.5kg)装入400L Hastelloy反应器中并用氮气净化该反应器。经2-3小时将批料加热至75±5℃，然后在75±5℃下搅拌至少3-6小时。将批料温度调至20±5℃并搅拌最少12小时，同时保持20±5℃。过滤批料并用3:1正庚烷/IPA(23.0kg/9.2kg)洗涤两次，然后调节至少1小时。然后，在真空烘箱中，在50±5℃下干燥过滤的固体，得到20.3kg(7)，96％产率。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ6.18–5.98(m,1H),4.94–4.76(m,1H),4.28–4.15(m,1H),4.11–3.96(m,1H),2.08–1.92(m,1H),1.80–1.67(m,2H),1.66–1.53(m,11H),1.53–1.32(m,13H),1.21(d,J＝10Hz,1H)。

步骤6. 6-(((1R,2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧代-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2(3H)-甲酸叔丁酯(9).

向氮气吹扫的30L带夹套的圆柱形反应器中装入(7)(660g)、(8)(330g)、K₂CO₃(370g)及80％(2.8L)含有二甲基乙酰胺(DMAc，3.3L)和H₂O(0.23L)的预混合溶液。混合物在22±5℃下搅拌。在真空下使反应器脱气至50毫巴并回填N₂(×5)。将Pd-118(8.6g)和残留的20％(1L)DMAc/H2O溶液装入反应器中。在真空下使反应器脱气至50毫巴并回填N₂(×5)。批料加热至80℃并搅拌8小时。接着将批料冷却至65℃并将N-乙酰半胱氨酸(22g)于H₂O(0.2L)中的溶液装入反应器中。批料在65℃下搅拌1小时。经1小时将H₂O(5.3L)装入反应器中，同时保持批料温度在60±5℃。批料在60℃下搅拌1.5小时，经3小时至25℃，并在25℃下搅拌过夜。通过真空过滤分离产物并用H₂O(3体积)和1:1IPA/H₂O(2×3体积)洗涤。在真空下在58℃下干燥固体，得呈浅褐色固体状的到(9)(616g，86％产率)。

向装备有顶置式机械搅拌器、热电偶及N₂进口的12L三颈圆底烧瓶中装入(9)(488g)和4.9L(10体积)1:4的THF/MTBE(预先混合)。混合物在环境温度(24℃)下搅拌18小时。通过真空过滤分离产物并用1:4THF/MTBE(2×5体积)洗涤固体并调节2.5小时。在真空下，在60℃下干燥分离的固体，得到呈褐色固体状的(9)(416g，85％产率)。¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.67(s,1H),8.23(s,1H),6.75(dd,J₁＝6.8Hz,J₂＝39.3Hz,2H),4.73(s,2H),4.38–4.27(m,1H),3.91(s,3H),3.90–3.82(m,1H),1.88–1.74(m,2H),1.65–1.53(m,13H),1.43–1.28(m,11H)。

步骤7. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮二盐酸盐(10).

向50L带夹套的玻璃反应器中装入(9)(708g)、MeCN(12L，17体积)及THMS-05树脂(70g，0.1wt％)。将混合物加热至65℃并搅拌16小时。批料在烧结玻璃漏斗上经硅藻土过滤并经由1微米串联过滤器转移至30L反应器中。过滤完成后，用MeCN(2.1L，3体积)冲洗50L反应器和过滤器管路。将过滤批料加热至65℃并形成深色溶液。将批料冷却至45℃并经1小时将2N HCl(2L，3当量)装入批料中。添加后，使一部分(10)晶种(2.7g，0.5wt％)在MeCN(54mL)中形成浆液并将其装入批料中。批料在45℃下搅拌1小时并逐渐形成悬浮液。使批料经1小时升温至65℃并在65℃下搅拌1小时，随后冷却至25℃并搅拌18h。通过真空过滤分离产物并用MeCN(5体积)洗涤固体，并调节1.5小时。在真空下，在60℃下干燥分离的固体，得到呈灰白色固体状的(10)(377g，69％产率)。¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.83(s,1H),8.36(s,1H),8.29(s,1H),7.88(br,1H),6.75(d,J＝6.5Hz,1H),4.45–4.34(m,6H),3.89(s,3H),3.67(m,1H),1.91–1.81(m,3H),1.70–1.63(m,3H),1.46–1.45(m,2H)。

步骤8. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐(化合物1柠檬酸盐).

向装备有顶置式机械搅拌器、热电偶、回流冷凝器及N₂进口的12L带半管夹套的圆底反应器中装入(10)(275g)、THMS-05树脂(28g，0.1wt％)及H₂O(4.68L，17体积)。将批料加热至85℃并搅拌19小时。组装过滤装置，包括台式烧结玻璃过滤器和1微米串联过滤器，并使用85℃水预加热。经由两个过滤器将批料转移至30L反应器中，其中夹套预加热至85℃。将水(280mL，1体积)以冲洗液形式装入该12L反应器中并经由过滤器装置转移至该30L反应器中。转移之后，批料温度是71℃并且重新加热至85℃。清洁该12L反应器并装柠檬酸氢钠(320g，2.1当量)和H₂O(830mL，3体积)。将此混合物加热至60℃并形成溶液。将该柠檬酸氢钠溶液经5分钟转移至带夹套的反应器中。在添加期间时，批料开始结晶。在85℃下搅拌悬浮液2小时，冷却至25℃，并搅拌16小时。通过真空过滤分离产物并用H₂O(3体积)洗涤固体，并调节3小时。在真空下，在55℃下干燥分离的固体，得到呈灰白色固体状的化合物1柠檬酸盐(297g，94％产率)。¹H NMR(500MHz,d-TFA)δ8.10(s,1H),8.00(s,1H),3.95(s,1H),3.72(s,2H),3.30(s,3H),2.98–2.96(m,1H),2.24(d,J＝16.5Hz,2H),2.17(d,J＝16.5Hz,2H),1.10–0.95(m,5H),0.93–0.76(m,3H)。

实施例2.合成6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐(化合物1柠檬酸盐).

步骤1. 2-氯-3-氰基-4,5-二氟吡啶(11).

在25±10℃下，在惰性气氛下将(1)(100g，524mmol)溶解于DMSO(150mL)中。添加氟化钾(36.5g，628mmol)并用DMSO(100mL)冲洗。在25±5℃下，将所得悬浮液搅拌18小时。经2小时向反应混合物中添加水(1.0L)。使由此得到的浆液老化3小时，然后过滤。滤饼用水(500mL)洗涤并在过滤器(离心)上干燥。湿滤饼不经进一步干燥即用于下一反应中。获得83.0g呈白色固体状的(11)(91％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)7.90-7.95(m,1H)。

步骤2. 2-氯-5,6-二氟吡啶-3-甲酰胺(12).

在25±10℃下，在惰性气氛下向THF(138mL)和水(86mL)的搅拌溶液中添加(11)(69.0g，395mmol)和乙酰胺(93.4g，1.58mol)。反应容器用THF(121mL)冲洗。通过反复抽空并回填氮气使所得混合物脱气。添加氯化钯(II)(1.40g，7.91mmol)并使混合物在60～65℃下反应6小时。将反应混合物冷却至25±10℃，然后用EtOAc(518mL)和10％NaCl溶液(345mL)稀释。分离有机层并用10％NaCl溶液(345mL)洗涤两次。接着，利用溶剂追逐技术将溶剂转变成EtOAc(155mL)，然后加热至55±5℃。在55±5℃下，经2.5小时向所得溶液中添加正庚烷(690mL)。所得浆液经1小时冷却至20～25℃，在此温度下老化3小时，然后过滤。滤饼用正庚烷(138mL)洗涤并在40±10℃下真空干燥3小时。获得64.2g呈灰白色固体状的(12)(84％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃):δ(ppm)6.34(br s,1H),6.80(br s,1H),8.25(t,J＝8.4Hz,1H)。

步骤3. 4-氯-6,7-二氟-1-羟基-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(13).

在-5±5℃下，在惰性气氛下经1.5小时向冷却的(-5±5℃)LiHMDS溶液(1.0M的THF溶液，46.7mL，46.7mmol)中添加预混合的(12)(30.0g，156mmol)和4-甲酰基吗啉(17.2mL，171mmol)于THF(150mL)中的溶液。用THF(15mL)冲洗容器。反应混合物在-5±5℃下搅拌30分钟，然后以使得内温保持在低于5℃的速率(经约30分钟)将其转移至预先冷却(0～5℃)并充分搅拌的乙酸异丙酯(IPAc，510mL)和2M HCl水溶液(630mL)的混合物上。在-5±5℃下，将所得混合物搅拌15分钟，然后使其在25±10℃下静置。分离有机层并用10％NaCl溶液(300mL)洗涤两次。利用溶剂追逐技术将溶剂转变成IPAc(150mL)。在20～25℃下，经1小时向由此得到的浆液中添加正庚烷(300mL)。所得浆液在此温度下老化3小时，然后过滤。滤饼用正庚烷(60mL)洗涤并在40±10℃下真空干燥3小时。获得29.9g呈灰白色固体状的(13)(87％).¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)6.12(d,J＝8.5Hz,1H),6.97(d,J＝9.5Hz,1H),9.48(s,1H)。

步骤4. 4-氯-6,7-二氟-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(14).

在室温下，经3小时向(13)(27.0g，122mmol)于三氟乙酸(108mL)中的加热的(55±5℃)浆液中添加三乙基硅烷(97.5mL，612mmol)。反应混合物在55±5℃下搅拌2小时，然后冷却至0±5℃。在0±5℃下，经2小时将MTBE(702mL)添加至混合物。使由此得到的浆液在此温度老化2小时，然后过滤。滤饼用MTBE(81mL)洗涤并在40±10℃真空干燥3小时。获得20.8g呈灰白色固体状的(14)(83％).¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)4.57(s,2H),9.10(br s,1H)。

步骤5.((1S,2R)-2-((4-氯-7-氟-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(15).

在25±10℃下，在惰性气氛下，在搅拌下将(2S)-羟基(苯基)乙酸和[(1S,2R)-2-氨基环己基]氨基甲酸叔丁酯(18.8g，51.3mmol)的1:1盐混合物(可以如美国专利8,440,689中所公开制备，该案整体并入本文中)悬浮于MTBE(75mL)中。然后添加水(94mL)和2MNaOH水溶液(51.3mL)。在25±10℃下剧烈搅拌所得混合物30分钟，然后使其静置。分离各相并用MTBE(75mL)萃取水层。合并这些有机层并依序用水(75mL)和5％NaCl溶液(75mL)洗涤。此时，选择两种替代性方法之一：(A)使用溶剂追逐技术将溶剂转变成DMAc(50mL)并且所得DMAc溶液不经进一步纯化即用于下一反应；或(B)溶液在高真空下蒸发至干，得到呈无色油状的(6)，不经进一步纯化即用于下一反应。

在25±10℃下，在惰性气氛下用DMAc(30mL)稀释以上获得的(6)的DMAc溶液(50mL)，随后在搅拌下，在30±15℃下添加(14)(10.0g，48.9mmol)并用DMAc(20mL)冲洗容器。在室温下搅拌10分钟后，添加三乙胺(8.18mL，58.7mmol)。所得混合物在30±15℃下反应30分钟，在65±5℃下反应5小时，然后冷却至50±5℃。在50±5℃下经30分钟向反应混合物中添加水(70mL)。在此温度下老化3小时后，经30分钟再添加一份水(70mL)。使所得浆液老化在50±5℃下30分钟并在25±10℃下老化过夜，然后过滤。滤饼用预混合DMAc-水的溶液(1:4，50mL)及水(100mL，×2)洗涤。所得潮湿固体在40±10℃下真空干燥3小时。获得17.2g呈灰色固体状的(15)(88％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)1.10-1.85(m,8H),1.36(s,9H),3.83(br s,1H),4.09(br s,1H),4.34(s,2H),6.68(br d,J＝7.5Hz,1H),6.83(br d,J＝7.0Hz,1H),8.39(s,1H)。

步骤6.((1S,2R)-2-((7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(16).

在惰性气氛下，在25±10℃下向2-丁醇(120mL)和水(90mL)的搅拌溶液中添加(15)(30.0g，75.2mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-吡唑(22.0g，105mmol)和碳酸钾(22.9g，166mmol)。接着用2-丁醇(30mL)冲洗容器。通过反复抽空并回填氮气使所得混合物脱气。添加Pd(PPh₃)₂Cl₂(528mg，0.75mmol，1mol％)，并用2-丁醇(30mL)冲洗容器。再进行脱气。所得混合物加热至95±10℃，并使其在室温下反应4小时。反应混合物冷却至60±10℃，并在室温下，一次性添加L-半胱氨酸(911mg，7.52mmol)于水(270mL)中的溶液。搅拌1小时后，在60±10℃下经1小时添加正庚烷(360mL)。经1小时将由此得到的浆液冷却至25±5℃，使其在室温下老化18小时，并过滤。滤饼用预混合的正庚烷与2-丁醇的溶液(5:1，90mL)及水(150mL)洗涤。所得潮湿固体在50±10℃下真空干燥10小时。获得28.4g呈灰白色固体状的(16)(85％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)1.10-1.85(m,8H),1.34(s,9H),3.87(br s,1H),3.89(s,3H),4.28(br s,1H),4.35(s,2H),6.44(br d,J＝6.5Hz,1H),6.72(br d,J＝7.5Hz,1H),8.27(s,2H),8.77(s,1H)。

在惰性气氛下，向THF(1500mL)和水(200mL)的溶液中添加(16)(50.0g，113mmol)和除钯树脂(5g)。用THF(50mL)冲洗容器并将所得混合物加热至65±5℃并搅拌3小时。过滤该树脂并用THF(100mL)洗涤，并且合并滤液和洗涤液。使用溶剂追逐技术将溶剂转变成乙腈(500mL)。由此得到的浆液用乙腈(1000mL)稀释并在搅拌下，在惰性气氛下加热至45±5℃。接着经40分钟添加4M HCl溶液(84.4mL，338mmol)并将所得混合物加热至65±5℃并搅拌5小时。所得浆液冷却至25±5℃，在搅拌下，使其在此温度老化过夜，然后过滤。滤饼用乙腈(250mL)洗涤。所得潮湿固体在50±10℃下真空干燥3小时。获得51.3g呈灰白色固体状的(10)(105％)。此化合物具有1.5–2eq缔合水。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)1.45(d,J＝7.6Hz,2H),1.68(d,J＝7.6Hz,3H),1.79-1.92(m,2H),1.92-1.99(m,1H),3.65(br s,1H),3.89(s,3H),4.37(d,J＝3.8Hz,2H),4.44(br s,1H),6.80(d,J＝5.7Hz,1H),8.10(br s,3H),8.30(s,1H),8.36(br s,1H),8.83(s,1H)。

在25±10℃下，向(10)(10.0g，23.0mmol)于水(170mL)中的悬浮液中添加除钯树脂(1.0g)。将所得混合物加热至85±5℃并在室温下搅拌15小时。过滤树脂并用热水(10mL)洗涤。合并滤液和洗涤液，将其冷却至50±5℃，然后用THF(60mL)稀释。在搅拌下，在50±5℃下经15分钟向所得混合物中添加4M NaOH溶液(12.1mL，48.2mmol)。搅拌5分钟后，在50±5℃下经4小时添加单水合柠檬酸(10.1g，48.2mmol)于水(20mL)中的溶液。所得浆液在50±5℃下搅拌3小时，然后在25±5℃下搅拌19小时。过滤浆液，并用预混合的THF-水溶液(1:1，30mL)洗涤滤饼。所得潮湿固体在50±10℃下真空干燥18小时。获得10.2g呈白色固体状的化合物1柠檬酸盐(86％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)1.42-1.50(m,2H),1.57-1.65(m,1H),1.65-1.73(m,2H),1.78-1.92(m,3H),2.50(dd,J＝15,15Hz,4H),3.66(br s,1H),3.89(s,3H),4.37(d,J＝5.0Hz,2H),4.44(br s,1H),6.74(d,J＝6.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.36(br s,1H),8.83(s,1H)。

实施例3.合成6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮二盐酸盐(化合物1二盐酸盐).

步骤1. 4-氯-6,7-二氟-3-氧代-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2(3H)-甲酸叔丁酯(17).

在搅拌下，在惰性气氛下向冷却的(5±5℃)(14)(500mg，2.44mmol)于二氯甲烷(2mL)中的悬浮液中添加三乙胺(0.68mL，4.89mmol)和4-二甲基氨基吡啶(6.0mg，0.049mmol)。经20分钟添加(Boc)₂O(0.63ml，2.93mL)于二氯甲烷(0.5mL)中的溶液并用二氯甲烷(0.5mL)冲洗。所得混合物升温至25±5℃并在室温下搅拌24小时。接着经30分钟添加2-丙醇(20mL)。使由此得到的浆液老化5小时，然后过滤。滤饼用2-丙醇(1.0mL×3)洗涤。所得潮湿固体在40±10℃下真空干燥2小时。获得562mg呈浅粉色固体状的(17)(75％)。¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)1.53(s,9H),4.94(s,2H)。

步骤2. 6-(((1R,2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)氨基)-4-氯-7-氟-3-氧代-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2(3H)-甲酸叔丁酯(7).

在25±5℃下，向(6)(粗油状物，373mg，1.74mmol)于2-丙醇(2.3mL)中的溶液中添加(17)(500mg，1.64mmol)和N-甲基吗啉(0.22mL，1.97mmol)。将反应混合物加热至65±5℃并在室温下搅拌18小时。经40分钟添加水(4mL)。使由此得到的浆液在65±5℃下老化1小时，并在25±5℃下老化3小时。过滤浆液后，用预混合的2-丙醇-水溶液(1:2,2mL)及水(2mL)洗涤滤饼。所得潮湿固体在40±10℃下真空干燥6小时。获得690mg呈白色固体状的(7)(84％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)1.10-1.81(m,8H),1.36(br s,9H),1.50(s,9H),3.83(br s,1H),4.12(br s,1H),4.72(s,2H),6.68(br d,J＝7.5Hz,1H),7.18(br d,J＝5.5Hz,1H)。

步骤3. 6-(((1R,2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧代-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2(3H)-甲酸叔丁酯(9).

在惰性气氛下，在25±10℃下向DMAc(2.0mL)和水(0.14mL)的溶液中添加(7)(500mg，1.00mmol)、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼戊环-2-基)-1H-吡唑(250mg，1.20mmol)及碳酸钾(277mg，2.00mmol)。通过反复抽空并回填氮气使所得混合物脱气。接着添加1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁二氯化钯(Pd-118催化剂，6.5mg，0.010mmol，1mol％)，并用DMAc(0.5mL)和水(0.04mL)的溶液冲洗容器。再进行脱气。将所得混合物加热至85±5℃，并在室温下搅拌3小时。将反应混合物冷却至60±5℃，并在室温下一次性添加N-乙酰基-L-半胱氨酸(16mg，0.10mmol)于水(0.15mL)中的溶液。搅拌1小时后，在60±5℃下经1小时添加水(4mL)。由此得到的浆液在60±5℃下搅拌1小时，然后在25±5℃下搅拌18小时。过滤浆液后，滤饼用水(1.5mL)和预混合的2-丙醇-水溶液(1:1，1.5mL，×2)洗涤。所得潮湿固体在40±10℃下真空干燥5小时。获得554mg呈褐色固体状的(9)(102％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆):δ(ppm)1.34(s,9H),1.47-1.57(m,13H),1.58-1.66(m,2H),1.72-1.86(m,2H),3.86(br s,1H),3.91(s,3H),4.31(br s,1H),4.73(s,2H),6.71(d,J＝10Hz,1H),6.79(d,J＝10Hz,1H),8.23(s,1H),8.67(s,1H)。

步骤4. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮二盐酸盐(10).

将(9)(10.0g，18.4mmol)悬浮于乙腈(200mL)中并在搅拌下加热至50±5℃。接着经14分钟添加4M HCl溶液(13.8mL，55.1mmol)。反应混合物在50±5℃下搅拌1小时，然后在70±5℃下搅拌16小时。将所得浆液冷却至25±5℃，使其在室温下老化5小时，并过滤。滤饼用乙腈(30mL)洗涤。所得潮湿固体在50±10℃下真空干燥18小时。获得8.04g呈灰白色固体状的标题化合物(105％)。发现此化合物具有1.5–2eq缔合水。

实施例4.合成6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐(化合物1柠檬酸盐)

步骤1.((1S,2R)-2-((6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(19).

在室温下，向如美国专利8,440,689(整体并入本文中)中所公开而制备的(18)(102.5g，1.2eq)于IPA(228mL)中的溶液中添加DMSO(152mL)、DIPEA(97.3mL，1.4eq)及(1)(76.11g，0.399mol)。所得溶液在室温下搅拌25分钟并经40分钟逐渐加热至70℃，随后在70℃下搅拌2小时。接着，将反应混合物冷却至室温并用IPA(152mL)和H₂O(76mL)稀释。对所得溶液接晶种并在室温下搅拌1小时，得到浓稠浆液。在室温下经40分钟添加H₂O(228mL)，并在室温下搅拌由此得到的浆液20分钟。经30分钟添加H₂O(76mL)，随后在室温下搅拌2小时。通过过滤收集固体，用2:3(v/v)IPA/H₂O(532mL)洗涤，并在真空烘箱中干燥，得到140.82g呈浅黄色固体状的(19)。分离产率96％。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.14-1.25(m,2H),1.35(s,9H),1.45-1.65(m,4H),1.70-1.80(m,2H),3.87(br s,0.85H),3.98(br s,0.30H),4.08(br s,0.85H),6.32(br s,0.15H),6.67(d,J＝7.9Hz,0.85H),7.49(d,J＝5.7Hz,0.85H),7.79(br s,0.15H),7.95(d,J_HF＝10.4Hz,1H)。

步骤2.(3aR,7aS)-3-(6-氯-5-氰基-3-氟吡啶-2-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(20).

将(19)(140.14g，0.380mol)、MeCN(700.7mL)、多聚甲醛(22.82g，2eq)及甲酸(57.35mL，4eq)的混合物在室温下搅拌1小时，然后加热至60℃，随后在60℃下搅拌16小时。反应物接着冷却至室温，随后添加H₂O(140.1mL)。对所得溶液接晶种并在室温下搅拌30分钟，以形成晶种床。在室温下经1.5小时添加H₂O(560.6mL)，并在室温下搅拌由此得到的浆液3.5小时。通过过滤收集固体，用2:3(v/v)MeCN/H₂O(560mL)洗涤并在真空烘箱中干燥，得到136.31g呈浅黄色固体状的(20)。分离产率94％。¹H NMR(CDCl₃,500MHz):δ(ppm)1.31-1.39(m,1H),1.43-1.50(m,2H),1.50(s,9H),1.56-1.72(m,3H),1.86-1.93(m,1H),2.43(brs,1H),4.91(dd,J＝8.5,1.3Hz,1H),5.11(d,J＝6.9Hz,1H),7.38(d,J＝11.7Hz,1H)。

步骤3.(3aR,7aS)-3-(5-氨甲酰基-6-氯-3-氟吡啶-2-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(21).

在室温下，经30分钟向(20)(131.79g，0.3461mol)、IPA(659mL)、DMSO(264mL)及K₂CO₃(35.88g，0.75eq)的搅拌的混合物中添加过氧化氢(30％,53.0mL，1.5eq)，同时保持内温介于16℃与23℃之间(放热)。在17-18℃下搅拌40分钟后，使反应经80分钟升温至26℃(适度放热)。在室温下再搅拌反应20小时，并经5分钟添加H₂O(527mL)，同时保持批料温度介于23℃与28℃之间(放热)。对所得浑浊溶液接晶种并在室温下搅拌1小时，得到晶种床。在室温下经1小时添加H₂O(791mL)，并将由此得到的浆液冷却至4℃，随后在4℃下搅拌20分钟。通过过滤收集固体，用1:3(v/v)IPA/H₂O(395mL)洗涤，在室温下抽吸干燥，并在真空烘箱中(40℃)进一步干燥4小时，得到135.25g呈无色固体状的(21)。分离产率98％(未校正)。¹HNMR(CDCl₃,500MHz):δ(ppm)1.30-1.38(m,1H),1.43-1.47(m,2H),1.50(s,9H),1.55-1.60(m,1H),1.66-1.74(m,2H),1.83-1.90(m,1H),2.36(br s,1H),4.00(dt,J＝5.4,5.0Hz,1H),4.40(dt,J＝7.9,5.7Hz,1H),4.90(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),5.08(d,J＝6.9Hz,1H),5.95(br s,1H),7.05(br s,1H),7.98(d,J＝12.9Hz,1H)。

步骤4.(3aR,7aS)-3-(4-氯-7-氟-1-羟基-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(22).

在氮气氛下，向LiHMDS的THF溶液(1035mL，1.0M，3.3eq)中经15分钟添加(22)(125.15g，0.3138mol)和无水DMF(72.89mL，3eq)于THF(325mL+50mL冲洗)中的脱气溶液，在此期间，在无外部冷却情况下，内温从20℃增加至31℃(适度放热)。所得溶液在25-30℃下搅拌2小时并经40分钟倒入THF(250.3mL)和1M HCl水溶液(1.41L，4.5eq)的搅拌的混合物中，同时保持温度低于10.5℃(放热)。添加乙酸异丙酯(375mL)后，在搅拌下使所得两相溶液升温至室温，随后添加乙酸异丙酯(375mL)。分离有机层，用乙酸异丙酯(375mL)稀释，并用5％NaCl水溶液(625mL)洗涤。在旋转蒸发器上将溶液溶剂转变成乙酸异丙酯，同时馈送总计1.2L乙酸异丙酯。通过添加乙酸异丙酯将由此得到的浆液的净重调至789g。经1.5小时添加庚烷(1.0L)，并在室温下搅拌所得浆液过夜。接着在室温下经20分钟添加庚烷(251mL，2体积)，在室温下搅拌浆液1小时。通过过滤收集固体，用1:2(v/v)乙酸异丙酯/庚烷(625mL)洗涤，并在室温下抽吸干燥，得到111.8g呈非对映异构体混合物(1:1)形式的(22)。分离产率84％。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.25-1.40(m,3H),1.44(s,9H),1.45-1.51(m,1H),1.53-1.70(m,2H),1.74-1.82(m,1H),2.27(br s,1H),3.95-3.99(m,1H),4.36-4.41(m,1H),4.84-4.87(m,1H),4.96(dd,J＝7.6,1.9Hz,0.5H),4.98(dd,J＝7.9,2.2Hz,0.5H),5.96(br s,0.5H),5.98(br s,0.5H),6.60(d,J＝9.5Hz,0.5H),6.69(d,J＝9.1Hz,0.5H),8.95(br s,1H)。

步骤5.(3aR,7aS)-3-(4-氯-7-氟-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(23).

在5℃下，向(22)(111.01g，0.260mol)于THF(555mL)中的溶液中添加4-二甲基氨基吡啶(DMAP)(635mg，0.02eq)、吡啶(27.3mL，1.3eq)及Ac₂O(27.0mL，1.1eq)，同时保持内温低于5℃。在0-5℃下搅拌所得浑浊溶液1小时。接着用甲基叔丁基醚(MTBE)(555mL)稀释反应混合物，同时保持内温低于5℃并通过添加5％NaCl水溶液(333mL)淬灭反应。在搅拌下，经10分钟使所得两相溶液升温至室温，随后在室温下搅拌30分钟。分离有机层并用5％NaCl水溶液(333mL)和15％柠檬酸水溶液(333mL)洗涤。通过馈入总计3.8LTHF，在旋转蒸发器上共沸干燥该溶液。通过添加THF将溶液的净重调至802g。将溶液冷却至3℃，并添加无水DMAc(111mL)。经36分钟分四份添加NaBH₄(11.8g，1.2eq)(放热)，同时保持内温低于8.5℃。所得混合物在0-5℃下搅拌3.5小时。添加NaBH₄(0.49g，0.05eq)，并在0-5℃下再搅拌反应45分钟。通过经7分钟小心地添加5％NaCl水溶液(333mL)，同时保持内温低于15℃(放热并有气体放出)淬灭反应。在室温下搅拌所得混合物，直至气体放出大致停止(20-30min)。丢弃水层。有机层用IPA(555mL)稀释并在旋转蒸发器上浓缩至约777mL，得到稀悬浮液。通过馈入总计888mL IPA再所得悬浮液溶剂转变成IPA。通过添加IPA将所得浆液的净重调至634g。在室温下经1小时添加H₂O(333mL)并在室温下搅拌所得浆液20小时。通过过滤收集固体，用1:1(v/v)IPA/H₂O(444mL)洗涤，在真空烘箱中干燥，得到96.4g(23)。分离产率90％。¹HNMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.25-1.40(m,3H),1.44(s,9H),1.45-1.51(m,1H),1.60-1.72(m,2H),1.75-1.82(m,1H),2.25(br s,1H),3.97(q,J＝5.0Hz,1H),4.36(dt,J＝6.9,6.3Hz,1H),4.40(s,2H),4.84(d,J＝7.3Hz,1H),4.97(dd,J＝7.6,1.9Hz,1H),8.56(br s,1H)。

步骤6.(3aR,7aS)-3-(2-(叔丁氧基羰基)-4-氯-7-氟-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(24).

在3℃下向(23)(93.38g，0.2267mol)于THF(654mL)中的搅拌溶液中经1小时添加DMAP(1.38，0.05eq)及(Boc)₂O(51.95g，1.05eq)于THF(80mL+13mL冲洗)中的溶液。所得粉色浑浊溶液在0℃下搅拌40分钟。用IPA稀释反应物并在旋转蒸发器上通过馈入总计1.3LIPA将溶剂转变成IPA。通过添加IPA将溶液的净重调至556g。接着对溶液接晶种(115mg)并在室温下搅拌1小时，得到晶种床。经1小时添加H₂O(560mL)并在室温下搅拌所得浆液17小时。通过过滤收集固体，用1:2(v/v)IPA/H₂O(466mL)洗涤并在室温下抽吸干燥3小时，得到108.62g呈灰白色到浅粉色固体状的(24)。分离产率94％。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.27-1.41(m,4H),1.44(s,9H),1.51(s,9H),1.58-1.70(m,2H),1.78-1.84(m,1H),2.31(brs,1H),3.97(dt,J＝5.4,5.0Hz,1H),4.39-4.43(m,1H),4.76(s,2H),4.88(d,J＝7.3Hz,1H),5.02(dd,J＝7.9,2.5Hz,1H)。

步骤7.(3aR,7aS)-3-(2-(叔丁氧基羰基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(25).

向含有(24)(105.16g)的烧瓶中添加DMAc/H₂O(525.8mL/36.8mL，预混合)、K₂CO₃(56.89g，2eq)及(8)(51.38g，1.2eq)。通过重复抽空-N₂回填循环五次使所得悬浮液脱气，随后添加二氯[1,1'-双(二叔丁基膦基)二茂铁]钯(II)(939mg，0.7mol％)。再次使混合物脱气(×5)并经20分钟将其加热至80℃，随后加热至80℃，保持70分钟。反应混合物冷却至5℃并用EtOAc(1050mL)稀释。添加H₂O(735mL)，同时保持批料温度低于25℃(放热)。分离有机层，用H₂O(525mL)洗涤，经硅藻土垫过滤(用150mL EtOAc冲洗)，并在旋转蒸发器上通过馈入总计1.5L IPA将溶剂转变成IPA。通过添加IPA将溶液的净重调至775g。将溶液加热至45℃，并经5分钟添加H₂O(420mL)。对所得溶液接晶种(115mg)并在45℃下搅拌1.5小时以形成晶种床。在45℃下经1小时添加H₂O(630mL)并使所得浆液冷却至室温，随后在室温下搅拌过夜。通过过滤收集固体，用2:3(v/v)IPA/H₂O(525mL)洗涤，并在真空烘箱中干燥，得到106.15g(25)。分离产率93％。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.45(s,9H),1.53(s,9H),1.31-1.65(m,4H),1.67-1.76(m,2H),1.81-1.88(m,1H),2.24(br s,1H),3.92(s,3H),3.99(q,J＝5.3Hz,1H),4.44-4.49(m,1H),4.75(s,2H),4.91(d,J＝7.0Hz,1H),5.06(dd,J＝7.9,2.2Hz,1H),8.18(s,1H),8.69(s,1H)。

步骤8. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮三氟乙酸盐(26).

向含有(25)(2.00g)的烧瓶中添加TFA(8.00mL，30eq)，无需搅拌。所得混合物在室温下搅拌30分钟，得到均质溶液。在冷却至4℃后，经10分钟逐滴添加单水合肼(1.74mL，10eq)于EtOH(6.0mL)中的溶液，随后经10分钟缓慢添加8N NaOH水溶液(11.2mL，25eq)，同时保持内温低于10℃。经15分钟将所得浑浊溶液逐渐加热至55℃并且在52-57℃下再搅拌6.5小时。使所得悬浮液冷却至室温并在室温下搅拌1小时。通过过滤收集固体，用20％EtOH/H₂O(12mL)洗涤并在空气下，在室温下抽吸干燥3小时，得到(26)(1.57g)。分离产率97％(针对输出纯度校正)。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.42-1.50(m,2H),1.60-1.73(m,3H),1.80-1.95(m,3H),3.66-3.70(m,1H),3.89(s,3H),4.37(d,J＝17.7Hz,1H),4.38(d,J＝17.7Hz,1H),4.45-4.50(m,1H),6.78(d,J＝6.6Hz,1H),7.88(br s,3H),8.30(s,1H),8.35(s,1H),8.82(s,1H)。

步骤9. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(化合物1柠檬酸盐).

将(26)(1.00g，76.4wt％游离碱)于40％MeCN/H₂O(20.0mL)中的悬浮液加热至72-74℃，保持30分钟，得到含有少量黑色颗粒的澄清溶液。溶液经由针头式过滤器趁热过滤至独立烧瓶中(用2mL的40％MeCN/H₂O冲洗)。将合并的滤液加热回到70℃，然后冷却至55℃，得到稀悬浮液。经5分钟添加柠檬酸二氢钠单水合物(0.618g，1.2eq，在高温下溶解)于H₂O(2.0mL)中的溶液。所得浆液在55-57℃下搅拌2小时，经4小时逐渐冷却至4℃，并在1-4℃下搅拌2小时。通过过滤收集固体，用H₂O(10mL和6mL)洗涤并抽吸干燥，得到化合物1柠檬酸盐(1.09g)。分离产率92％(针对输入和输出纯度校正)。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.42-1.50(m,2H),1.58-1.73(m,3H),1.79-1.95(m,3H),2.49(d,J＝15.1Hz,2H),2.55(d,J＝15.1Hz,2H),3.65-3.69(m,1H),3.89(s,3H),4.38(d,J＝17.7Hz,1H),4.39(d,J＝17.7Hz,1H),4.43-4.49(m,1H),6.75(d,J＝6.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.35(s,1H),8.82(s,1H),9.61(brs,5H)。

实施例5.合成6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐(化合物1柠檬酸盐).

步骤1. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(27，化合物1游离碱).

向含有(25)(2.00g)的烧瓶中添加TFA(8.00mL，30eq)，无需搅拌。所得混合物在室温下搅拌30分钟，得到均质溶液。在冷却至4℃后，经20分钟逐滴添加单水合肼(1.74mL，10eq)于EtOH(2.0mL)中的溶液，随后经15分钟缓慢添加8N NaOH水溶液(11.2mL，25eq)，同时保持内温低于10℃(两次添加都放热)。经15分钟将所得浑浊溶液逐渐加热至58℃并在58-60℃下再搅拌22小时。使悬浮液冷却至41℃，并在相同温度下，经5分钟逐滴添加8NNaOH水溶液(1.7mL，3.8eq)，得到浑浊溶液，该溶液在一分钟内再次变为浆液。使该浆液在41℃下老化20分钟后，在相同温度下，经10分钟逐滴添加8N NaOH水溶液(0.55mL，1.2eq)。在41℃下搅拌所得浆液，使其冷却至室温，并在室温下搅拌3小时，得到浓稠浆液。通过过滤收集固体，用5％EtOH/H₂O(12mL)洗涤并在空气下，在室温下抽吸干燥5小时，得到(27，化合物1游离碱)(1.29g)。分离产率96％(针对输出纯度校正)。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.32-1.41(m,2H),1.55-1.74(m,6H),3.11-3.15(m,1H),3.31(br s,4H),3.89(s,3H),4.06-4.12(m,1H),4.35(s,2H),6.38(d,J＝6.9Hz,1H),8.24(s,1H),8.25(s,1H),8.78(s,1H)。

步骤2. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(化合物1柠檬酸盐).

向50mL烧瓶中装入(27，化合物1游离碱)(1.00g，91.0wt％，0.910g测定)和95％EtOH/H₂O(14.0mL)。将所得混合物加热至57℃，得到紫红色溶液，在57℃下老化10分钟后，该溶液变为含有少量黑色颗粒的浅黄色溶液。在57℃下再搅拌溶液20分钟，然后加热至67℃，保持20分钟。经由针头式过滤器将溶液趁热过滤至单独的50mL烧瓶中(用4mL的95％EtOH/H₂O冲洗)。将合并的滤液加热至57℃并经10分钟逐滴添加单水合柠檬酸(0.666g，1.2eq)于95％EtOH/H₂O(3.0mL)中的溶液。用95％EtOH/H₂O(2mL)稀释所得浓稠浆液以帮助搅拌，并在55-60℃下搅拌2小时。接着经1小时将浆液逐渐冷却至室温并在室温下搅拌1小时。通过过滤收集固体，用95％EtOH/H₂O(15mL)洗涤并抽吸干燥，得到化合物1柠檬酸盐(1.36g)。HPLC分析揭露，游离碱含量是65.9wt％(理论值：64.2wt％)。分离产率98％(针对输入和输出纯度校正)。

实施例6.合成6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐(化合物1柠檬酸盐).

步骤1. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮氢碘酸盐(28).

向50mL圆底烧瓶中装入(25)(1.00g)、NaI(1.62g，6eq)及MeCN(7.0mL)。将所得混合物冷却至0℃，随后添加57％HI(0.040mL，0.17eq)和TMSCl(1.37mL，6eq)。在0℃下搅拌所得悬浮液20分钟并使其升温至室温，随后在室温下搅拌50分钟。接着将反应物冷却至0℃并通过添加单水合肼(1.74mL，20eq)和H₂O(10mL)的混合物淬灭反应。在室温下搅拌所得两相溶液100分钟，得到稀悬浮液。在室温下添加H₂O(11mL)，并将所得浆液冷却至0℃并在相同温度下搅拌2小时。通过过滤收集固体并抽吸干燥，得到0.810g呈灰白色固体状的(28)。LC测定以游离碱计是67.6wt％。分离产率88％。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.40-1.49(m,2H),1.57-1.70(m,3H),1.76-1.90(m,3H),3.60-3.64(m,1H),3.89(s,3H),4.37(d,J＝18.0Hz,1H),4.39(d,J＝18.0Hz,1H),4.40-4.44(m,1H),6.68(d,J＝6.6Hz,1H),7.23(brs,3H),8.29(s,1H),8.33(s,1H),8.82(s,1H)。

向20mL小瓶中装入(28)(200mg，以游离碱计67.6wt％)和H₂O(3.4mL)并加热至80℃，得到悬浮液。添加柠檬酸二氢钠单水合物(147mg，1.6eq)于H₂O(1.2mL)中的溶液。将所得浆液加热至80℃，保持15分钟，并使其冷却至室温，随后在室温下老化过夜。通过过滤收集固体，用H₂O(2mL)洗涤并抽吸干燥，得到0.19g呈精细浅黄色粉末状的化合物1柠檬酸盐。LC测定以游离碱计是66.3wt％。分离产率93％(经校正)。

实施例7.合成6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮盐酸盐二水合物(化合物1盐酸盐二水合物).

步骤1. 2,6-二氯-5-氟烟酸异丙酯(30).

在0℃下，向(29)(200g，952.43mmol)于THF(无水)(2000mL)中的溶液中逐滴添加草酰氯(86ml，1000.05mmol)和DMF(0.696g，9.52mmol)。混合物在0℃下搅拌30分钟，然后升温至室温并搅拌1小时。接着真空浓缩反应混合物。将残余物溶解于THF(无水)(2000mL)和异丙醇(109mL，1428.64mmol)中并在0℃下，将吡啶(92mL，1142.91mmol)添加至该溶液在。在室温下搅拌混合物1小时，然后在0℃下，用1N HCl水溶液(150mL)淬灭并用EtOAc(400mL)、水(400mL)和盐水(400mL)萃取。分离有机层，用盐水(600mL×2)洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。残余物通过柱色谱法(NH-硅胶，用20％EtOAc/己烷洗脱)纯化，浓缩并干燥，得到呈无色油状的(30)(225g，894mmol，94％)。

步骤2. 6-(((1R,2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)环己基)氨基)-2-氯-5-氟烟酸异丙酯(31).

在室温下，向(30)(106g，419.96mmol)于2-丙醇(1.5L)中的溶液中添加(18)(108g，503.96mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.219L，1259.89mmol)。混合物在回流下搅拌3.5天。接着在真空中去除反应溶剂并将残余物溶解于EtOAc(1000mL)中。用1N HCl、饱和NaHCO₃水溶液及盐水洗涤该溶液，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。将所得残余物溶解于异丙基醚(500mL)和己烷(100mL)中并对溶液接晶种。通过过滤收集所得沉淀并用异丙基醚洗涤，得到(31)(99.6g，232mmol，55.2％)。

步骤3.(3aR,7aS)-3-(6-氯-3-氟-5-(异丙氧基羰基)吡啶-2-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(32).

在室温下，向异丙基(31)(129.3g，300.76mmol)于THF(1.4L)中的溶液中添加多聚甲醛(45.2g，1503.79mmol)和甲酸(280mL，7300.32mmol)。在回流下搅拌混合物3小时，然后在25℃下用4NNaOH(1.8L)中和。分离有机层并用EtOAc(×500mL)萃取水层。合并的有机层用0.5N NaOH(1L)、盐水(1L)洗涤，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩，得到(32)，不经进一步纯化即用于下一反应。

步骤4. 6-((3aS,7aR)-3-(叔丁氧基羰基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-2-氯-5-氟烟酸(33).

在室温下，向(32)(300.76mmol)于THF(600mL)、MeOH(600mL)及水(150mL)的混合物中的溶液中添加4M氢氧化锂溶液(113ml，451.14mmol)。混合物在相同温度下搅拌1天。接着用EtOAc(500ml)稀释混合物，用1N HCl(400mL)溶液酸化并用EtOAc萃取。有机层用水和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。粗产物用异丙基醚洗涤并通过过滤收集，得到呈白色固体状的(33)(111.9g，280mmol，2个步骤93％)。

步骤5.(3aR,7aS)-3-(4-氯-7-氟-1-羟基-3-氧代-1,3-二氢furo[3,4-c]吡啶-6-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(34).

在N₂下，在-40℃下向正丁基锂(419mL，670.46mmol)于THF(无水)(1120mL)中的溶液中添加二异丙基胺(96mL，684.43mmol)于THF(无水)(110mL)中的溶液。接着在-40℃下搅拌混合物10分钟。在-40℃下，向反应混合物中添加(33)(111.7g，279.36mmol)于THF(无水)(670ml)中的溶液。混合物在-25℃下搅拌30分钟。在-60℃下向反应混合物中添加DMF(87mL，1117.43mmol)并在-40℃下搅拌混合物1小时。在0℃下将反应混合物接着倒入1NHCl(1680mL)中并用EtOAc(600mL)萃取。分离有机层并用EtOAc(400mL)萃取水层。用水和盐水洗涤合并的有机层，经MgSO₄干燥并真空浓缩。通过柱色谱法(硅胶，用50％EtOAc/己烷洗脱)纯化残余物并真空浓缩。残余物接着自25％EtOAc/己烷(480mL)结晶，得到呈浅黄色固体状的(34)(109g，255mmol，91％)。

步骤6.(3aR,7aS)-3-(4-氯-2-(2,4-二甲氧基苯甲基)-7-氟-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(35).

在室温下，向2,4-二甲氧基苯甲胺(33.2mL，220.87mmol)于MeOH(1100mL)和AcOH(11.11mL)中的溶液中添加(34)(90g，210.35mmol)。在水浴中搅拌混合物2小时。接着分数小份添加氰基硼氢化钠(26.4g，420.70mmol)。混合物再搅拌2小时。接着用水(360mL)和盐水(360mL)淬灭混合物。用EtOAc(500mL×3)萃取混合物并用盐水洗涤合并的有机层，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩，并且不经进一步纯化即用于下一反应。

在室温下，向(3aR,7aS)-3-(4-氯-2-(2,4-二甲氧基苯甲基)-7-氟-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(210.35mmol)于DMF(1.2L)中的溶液中添加1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(EDCI，54.4g，283.97mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(HOBt，43.5g，283.97mmol)。在相同温度下搅拌混合物过夜。用水(1.2L)淬灭混合物并用EtOAc(1.2L×2)萃取。分离有机层，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。用异丙基醚冲洗残余物，得到(35)(105.7g，188mmol，2个步骤90％)。

步骤7.(3aR,7aS)-3-(2-(2,4-二甲氧基苯甲基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)八氢-1H-苯并[d]咪唑-1-甲酸叔丁酯(36).

在室温下，向(35)(155.9g，277.87mmol)于二甲氧基乙烷(DME，1500mL)和水(750mL)中的溶液中添加(8)(69.4g，333.45mmol)、碳酸钠(70.7g，666.90mmol)及反-二氯双(三苯基膦)钯(II)(7.80g，11.11mmol)。在Ar下，在90℃下搅拌混合物4小时。接着用EtOAc(1000mL)和水(500mL)处理反应混合物并用EtOAc萃取混合物。用1N NaOH水溶液和盐水洗涤合并的有机层并经Na₂SO₄干燥。使溶液通过NH硅胶垫以去除Pd残余物并真空浓缩滤液，得到(36)，不经进一步纯化即用于下一反应。

在室温下，将(36)(171g，281.86mmol)溶解于三氟乙酸(860mL，11162.63mmol)和水(9mL)中。在回流下搅拌混合物过夜。接着在真空中去除反应溶剂，得到(26)，不经进一步纯化即用于下一反应。

步骤9.((1S,2R)-2-((7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(16).

在0℃下，向(26)(95g，207.24mmol)于DMF(950mL)中的溶液中添加三乙胺(43.2mL，310.86mmol)和Boc₂O(52.4mL，227.96mmol)。在0℃下搅拌10分钟后，用EtOAc(1L)、1M柠檬酸(210mL)和水(1L)处理反应混合物。分离有机层，用水和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥。使溶液通过硅胶(500g)并用EtOAc洗涤硅胶。真空浓缩洗出液并用异丙基醚洗涤残余物。接着将残余物溶解于THF(2100mL)和MeOH(700mL)中并在室温下添加1N氢氧化钠(370mL，370.00mmol)。在相同温度下搅拌30分钟后，用EtOAc和盐水处理反应混合物并分离有机层。用EtOAc(×2)萃取水层并用盐水洗涤合并的有机层，经Na₂SO₄干燥并真空浓缩。将残余物悬浮于丙酮(1100mL)和水(220mL)中。在回流下搅拌混合物6小时并经由滤纸过滤。用异丙基醚洗涤沉淀，得到(16)(64.3g，145mmol，86％)。

步骤10. 6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮盐酸盐二水合物(化合物1盐酸盐二水合物).

将(16)(146.5g，329.58mmol)于2-丙醇(1450mL)中的悬浮液加热至70℃，此时添加2M盐酸(675mL，1350.00mmol)。在65℃下加热反应混合物3小时，然后在冰水浴中冷却1小时。过滤所得固体，用冷异丙醇冲洗并通过气流干燥，得到化合物1盐酸盐二水合物(132.3g，317mmol，96％)。¹H NMR(300MHz,d₆-DMSO)δ(ppm)1.36-2.02(m,8H),3.62-3.71(m,1H),3.89(s,3H),4.32-4.53(m,3H),6.79(d,J＝6.4Hz,1H),7.96(brs,3H),8.37(s,1H),8.84(s,1H)。

实施例8.合成6-(((1R,2S)-2-氨基环己基)氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮(化合物1游离碱)。

步骤1.向装备有顶置式搅拌器的1L圆底烧瓶中装入化合物1柠檬酸盐、MeCN(120mL，6体积)及水(46mL)。在环境温度下搅拌混合物5分钟，随后经5分钟添加NaOH(2N，74mL，4当量)，产生略带橙色的悬浮液。搅拌混合物并将其加热至60℃，保持1小时，产生橙色溶液。在60℃下经20分钟添加水并在60℃下搅拌反应20分钟，并经2小时冷却至环境温度。使悬浮液在环境温度下老化16小时并过滤。用水(50mL)冲洗固体并在真空下干燥16小时，得到呈略带粉色的固体状的化合物1游离碱(11.4g，88％产率)。¹H NMR(DMSO-d₆,500MHz):δ(ppm)1.32-1.41(m,2H),1.55-1.74(m,6H),3.11-3.15(m,1H),3.31(br s,4H),3.89(s,3H),4.06-4.12(m,1H),4.35(s,2H),6.38(d,J＝6.9Hz,1H),8.24(s,1H),8.25(s,1H),8.78(s,1H)。

通用方法—X射线粉末衍射法(XRPD)

在Bruker AXS C2GADDS衍射计上，使用Cu-Kα辐射(40kV，40mA)、自动XYZ载物台、用于自动样品定位的激光视频显微镜(laser video microscope)及HiStar二维区域检测器收集X射线粉末衍射图。X射线光学器件由单个

多层镜与0.3mm针孔视准仪耦接而组成。使用鉴定合格的标准品NIST 1976刚石(平板)进行每周性能检查。

光束发散度，即样品上X射线束的有效尺寸，是约4毫米。采用θ-θ连续扫描模式，其中样品-检测器的距离是20cm，由此得到3.2°–29.7°的有效2θ范围。典型地，将样品曝露于X射线束120秒。用于数据收集的软件是适于XP/2000 4.1.36的GADDS病使用Diffrac PlusEVA v13.0.0.2或v15.0.0.0分析并呈现数据。

使用未研磨的原样粉末制备在环境条件下执行的样品作为平板试样。将约1-2mg样品轻轻地压在玻璃载片上以获得平坦表面。

将在非环境条件下执行的样品安装于具有导热化合物的硅晶片上。接着，样品以20℃/分钟加热至适当温度，随后等温保持1分钟，之后开始收集数据。

或者，在Bruker D8衍射计上，使用Cu-Kα辐射(40kV，40mA)、θ-2θ测角仪以及发散V4及接收狭缝(divergence of V4and receiving slit)、Ge单色器及Lynxeye检测器收集X射线粉末衍射图。使用鉴定合格的刚石标准品(NIST 1976)检查仪器性能。用于数据收集的软件是Diffrac Plus XRD Commander v2.6.1并且使用Diffrac Plus EVA v13.0.0.2或v15.0.0.0分析并呈现数据。

使用原样粉末制备在环境条件下执行的样品作为平板试样。将样品小心包装于在抛光的零背景(510)硅晶片中切出的空腔中。分析期间，样品在其自身平面内旋转。收集数据具体如下：角度范围：2至42°2θ；步长(Step size)：0.05°2θ；及收集时间：0.5秒/步。

差示扫描量热法(DSC)

在装备有50位自动取样器的TA Instruments Q2000上收集DSC数据。使用蓝宝石进行热容量的校准并使用鉴定合格的铟进行能量及温度的校准。典型地，将0.5–3mg各样品在带针孔的铝盘中以10℃/分钟自25℃加热至270℃。在样品上维持50ml/min的干燥氮气吹扫。

使用2℃/分钟加热速率及每60秒(周期)±0.318℃(振幅)的温度调节参数来进行温度调节DSC。

仪器控制软件是Advantage的Q系列v2.8.0.394以及Thermal Advantage v5.2.6，并使用Universal Analysis v4.7A或v4.4A分析数据。

在装备有34位自动取样器的Mettler DSC 823E上收集DSC数据。使用鉴定合格的铟对所述仪器进行能量及温度的校准。典型地，将0.5–3mg各样品在带针孔的铝盘中以10℃/分钟自25℃加热至270℃。在样品上维持50ml/min的氮气吹扫。

仪器控制及数据分析软件是STARe v9.20。

热重分析(TGA)

在装备有34位自动取样器的Mettler TGA/SDTA 851e上收集TGA数据。仪器温度使用鉴定合格的铟进行校准。典型地，将5 30mg各样品装载到预先称重的铝制坩埚上并以10℃/分钟自环境温度加热至300℃。在样品上维持50mL/min的氮气吹扫。

仪器控制及数据分析软件是STARe v9.20。

重量法蒸气吸附(GVS)

使用由DVS Intrinsic Control软件v1.0.0.30控制的SMS DVS Intrinsic型水分吸附分析仪获得吸附等温线。通过仪器控制将样品温度维持在25℃。通过混合干湿氮气流来控制湿度，其中总流速是200ml/min。利用校准的Rotronic探针测量样品附近的相对湿度(1.0％-100％RH的动态范围)。利用微量天平(精度±0.005mg)持续监测样品重量变化(质量减轻(mass relaxation))与％RH的关系。

典型地，将5-20mg样品在环境条件下放于配衡的网状不锈钢篮中。在40％RH和25℃(典型室内条件)下装载并取出样品。如以下略述来进行水分吸附等温分析(2次扫描得到1个完整的循环)。在25℃下，在0％-90％RH范围内以10％RH间隔进行标准等温分析。使用DVS分析套件v6.0在Microsoft Excel中采取数据分析。

SMS DVS Intrinsic实验的方法参数.

参数	值
		吸附-扫描1	40-90
解吸附/吸附–扫描2	90-0,0-40
		间隔(％RH)	10
扫描次数	2
		流动速率(ml/min)	200
温度(℃)	25
		稳定性(℃/min)	0.2
吸附时间(小时)	6小时中断

在等温分析结束后回收样品并通过XRPD进行再分析。

实施例9.化合物1柠檬酸盐的结晶形式(“形式1”)的表征

收集有关如上文所描述制备的化合物1柠檬酸盐的特征数据。DSC分析显示单一吸热事件，而TGA热谱图显示在开始分解前无重量损失。该物质不具有吸湿性。

高分辨率XRPD数据(图1)显示，该物质是结晶，该物质称为形式1。收集的热数据(图2和3)表明，此形式是非溶剂化样品，并且在TGA中加热样品期间，未观察到明显重量损失。在TGA上，分解在226.9℃起始，与在DSC上的熔融起始温度(233.4℃)相符。

GVS分析(图4)显示，该物质在湿度条件(各种RH水平)下不具有吸湿性。在0-90％之间的RH下观察到低于0.3％的微小质量变化，表明该物质表面上存在水分。在GVS分析后，在40℃/75％RH和25℃/97％RH下储存1周均未观察到形式改变。

提交形式1的样品进行单晶X射线衍射。分析表明，形式1是具有

体积的空间群P2₁单斜晶系，并且晶胞尺寸如下：

实施例10.非晶形化合物1柠檬酸盐(“形式2”)

在室温下将形式1溶解于水(50mL)中并过滤溶液以去除任何潜在的晶种。该系统经片冰/丙酮冷冻并进行冷冻干燥。利用XRPD检查所得固体并发现基本上未发生衍射(不存在Bragg峰，图5)。

如基于TGA观察到重量损失(图7)，非晶形化合物1柠檬酸盐的批料含有约3.3％水。DSC曲线显示在100℃以下存在水，随后是复杂的热特征曲线(图6)。该物质可能在高于140℃时分解(在TGA和DSC曲线中都观察到)。GVS分析显示，在40-80％RH范围内，该物质吸附大量的水分(9％w/w)并且在超过80％RH下经历结晶事件(图8)。在介于80％与90％之间的RH下，这一再结晶事件伴随7％重量损失。利用XRPD分析暴露于湿度后的非晶形物质，并显示转变成形式1。

实施例11.化合物1盐酸盐的结晶形式(“形式3”)的表征

收集有关如上文所描述制备的化合物1盐酸盐二水合物的特征数据。高分辨率XRPD数据(图9)显示，该物质是结晶，该物质称为形式3。收集的热数据(图10和11)表明，此形式是二水合物，因为在TGA数据中，在50℃-120℃之间观察到8.4％重量损失，相当于2摩尔的水。DSC数据含有起始温度是98.3℃的较宽吸热峰，与所观察到的重量损失相符。KarlFischer分析证实，样品实际上是含水量为8.4％的二水合物。离子色谱法表明，该物质是单盐酸盐(0.91当量)。

GVS分析(图12)显示，该物质在低于20％RH下经历脱水。在0-20％之间的RH下观察到约6.5％质量变化，表明水可以从晶格中去除。通过使样品降到0％所去除的水量不等于二水合物的全部当量。这可能是因为该系统在360分钟后未达到平衡。如果在这最后一个步骤中分配更长的干燥时间，则该物质很可能会失去所有的水。在第一次吸附扫描期间，当达到90％RH水平时，结晶物质经历水吸收并且恢复到初始质量。该现象是可逆的，不过在第一次吸附扫描时观察到等温曲线的差异。在GVS分析后，在40℃/75％RH和25℃/97％RH下储存1周均未观察到形式改变。

提交形式3的样品进行单晶X射线衍射。结果示于表14中。分析表明，形式3是具有

体积的空间群P2(1)2(1)2(1)的晶体，并且晶胞尺寸如下：

通过直接方法，对F ²的完全矩阵最小二乘法精修，并利用权重w^-1＝²(F_o ²)+(0.0319P)²+(0.9419P)(其中P＝(F_o ²+2F_c ²)/3)、各向异性位移(anisotropicdisplacement)参数、使用在SCALE3ABSPACK缩放算法中执行的球面调和函数进行的经验吸收校正(empiricalabsorption correction)，绝对结构参数＝-0.027(19)来解析结构。最后，对于所有数据，wR²＝{[w(F_o ²-F_c ²)²]/[w(F_o ²)²]^1/2}＝0.096，对于3278次反射的F值，常规R₁＝0.0428，其中对于所有数据及290个参数，F_o>4(F_o)，S＝1.053。最终/(最大值)0.000，/(平均值),0.000。最终差异图介于+0.231与

之间。

实施例12.关于形式3的多晶型现象研究

将25mg形式3放入HPLC小瓶中并使用20mL溶剂。这些值由溶解度评估得出。所有浆液用声波处理5秒。在5℃下，以500rpm搅拌浆液六天时间。利用XRPD分析由此实验获得的固体，随后在40℃下，于真空烘箱中干燥过夜。本实验的实验结果可见于表14。

表16

每个小瓶使用25mg形式3及适当体积的溶剂。这些值由溶解度评估得出。所有浆液用声波处理5秒。在25℃与50℃之间循环(每种温度4小时)下，以500rpm搅拌浆液六天。然后，在室温下使任何所得溶液蒸发。利用XRPD分析由此实验获得的固体，随后在40℃下，于真空烘箱中干燥过夜。本实验的实验结果可见于表15。

表17

实施例13.化合物1盐酸盐的结晶形式(“形式4”)的表征

使用300mg形式3，向其中添加20体积DMF来制备形式4。通过在25℃与50℃之间循环(在每一温度下4小时，保持48小时)来使实验成熟。过滤所得物质并抽吸干燥，随后进行。

XRPD分析显示，通过在DMF中使形式3浆液成熟，形式4是可再现的(图13)。利用热分析对形式4进行分析(图14和15)。TGA数据显示无明显重量损失，表明该物质是无水的。在25℃/97％RH、40℃/75％RH、40℃/97％RH下储存10天期间，这些物质无变化，表明它对于水分稳定。溶解度曲线类似于形式3的溶解度曲线。如由GVS证实，发现形式4不具有吸湿性(图16)。

实施例14.化合物1盐酸盐的结晶形式(“形式5”)的表征

使用干式加热方法获得形式5。将形式3加热至250℃并在N₂下，将样品在此温度保持900分钟，或将形式3加热至290℃并在N₂下，将样品在此温度保持10分钟。利用XRPD分析回收的固体(图17)。

发现形式5是HCl盐的非溶剂化形式。如由平坦TGA曲线证实，该物质是无水的(图19)。相较于形式4，该物质具有类似的溶解度曲线(11mg/ml)。在GVS分析期间或在40℃/97％RH下储存期间(10天)，该物质无变化，表明它对水分稳定(图20)。

实施例15.非晶形化合物1盐酸盐(“形式6”)的表征

在室温下将形式3(41mg)溶解于水(100体积，4.1mL)中并过滤溶液以去除任何潜在的晶种。该系统经片冰和丙酮冷冻并进行冷冻干燥。利用XRPD检查所得固体并发现未发生衍射(不存在Bragg峰)。

XRPD分析通过冻干产生的物质被认为基本上是非晶形的(图21)。在约8°2θ下的宽峰不是衍射峰，因为利用高分辨率XRPD未观察到Bragg峰。该物质含有约10％的水(通过KF观察)，因为未应用真空烘箱干燥。借助TGA证实水的存在(图23)。在高于200℃发生玻璃态转变，并且在230℃观察到可能的再结晶(图22)。GVS分析显示，在高于70％RH下，该物质吸附水分并且经历结晶事件(图24)。非晶形物质如果暴露于高湿度水平，则看来会经历相转化，由此可能产生形式9。

实施例16.结晶化合物1盐酸盐(“形式7”)的表征

非晶形的形式7对湿度不稳定并且重新转化成水合形式(形式9)。利用XRPD表征形式7(图25)。另外，对形式7进行热分析(图26和27)。GVS分析显示于图28中。

实施例17.结晶化合物1盐酸盐(“形式8”)的表征

发现另一水合形式(形式8)。当将形式3加热至高温(200℃)时，它在250℃产生水合形式(形式8)和一种无水形式(形式5)。

利用XRPD表征形式8(图29)。另外，对形式7进行热分析(图30和31)。GVS分析显示于图32中。

实施例18.结晶化合物1盐酸盐(“形式9”)的表征

非晶形物质如果暴露于高湿度水平，则看来会经历相转化，由此可能产生形式9。非晶形的形式7对湿度不稳定并且重新转化成水合形式(形式9)。利用XRPD表征形式9(图33)。另外，对形式7进行热分析(图34和35)。

实施例19.结晶化合物1盐酸盐(“形式10”)的表征

形式3干式加热至70℃，得到形式10。利用XRPD表征形式10(图36)。另外，对形式10进行热分析(图37和38)。

实施例20.结晶化合物1盐酸盐(“形式11”)的表征

形式3干式加热至80℃，得到形式11。利用XRPD表征形式11(图39)。另外，对形式11进行热分析(图40和41)。

实施例21.结晶化合物1游离碱的表征

如上文所述制备化合物1游离碱，并使用多种技术表征以研究固体形式和化学性质。发现化合物1游离碱是甲醇溶剂化物与无水形式的混合物。热分析显示，甲醇溶剂化物在约120℃脱溶剂并且无水形式在约203℃转化成新的无水形式，即形式10。在GVS实验条件下及40℃-75％RH下，甲醇溶剂化物脱溶剂，但发现无水形式稳定。

实施例22.结晶化合物1游离碱(“形式12”)的表征

使用约500mg如上文所述制备的化合物1游离碱作为起始物质获得非晶形化合物1游离碱。24mL该溶液在圆底烧瓶中冷冻干燥。

在环境条件下，使约70mg非晶形物质在20体积叔丁基甲基醚中形成浆液，保持2天，然后过滤并在玻璃载片上空气干燥，随后进行分析。XRPD分析证实形成形式12(图42)。发现形式12是无水形式，熔点是226.5℃(图43)。在40℃/75％RH下未观察到明显的稳定性问题；不过，在25℃/97％RH下，它不稳定。GVS分析表明，形式12可能转化成水合形式(图45)。发现该形式的水中溶解度是0.58mg/mL(pH 9.41)。

实施例23.结晶化合物1游离碱(“形式13”)的表征

在少量形式13晶种存在下，使约35mg非晶形物质在10体积2-甲基THF中形成浆液，保持过夜。在相同条件下再使该浆液继续成熟一天，并且XRPD分析过滤并干燥的样品，证实形成形式13(图46)。发现形式13是无水形式。在高温(在140℃与210℃之间)下，形式13转化成形式12。在GVS实验期间，形式13不具有吸湿性并且未观察到转化成水合物(图49)。发现该形式在40℃/75％RH和25℃/97％RH下稳定。发现该形式的水中溶解度是0.19mg/mL(pH9.05)。

实施例24.结晶化合物1游离碱(“形式14”)的表征

在50℃下，使约50mg化合物1游离碱在10体积含20％水的乙腈中形成浆液，保持过夜。过滤样品并空气干燥，随后进行XRPD分析，证实该样品是形式14，一种半水合物(图50)。发现形式14在约55℃下脱水并转化成形式12(图51)。该形式在40℃/75％RH和25℃/97％RH下稳定。在0与90％之间的RH下，形式14与0.25当量水交换；然而，在GVS分析结束时分离样品，未观察到XRPD图的变化(图53)。

实施例25.结晶化合物1游离碱(“形式15”)的表征

在50℃下，将约60mg化合物1游离碱溶解于100体积二甲氧基乙烷中。过滤所得浑浊溶液并在室温下蒸发至干。XRPD分析样品证实形成形式15，一种单水合物(图54)。发现形式15在110℃下脱水并在进一步加热时转化成形式12(图55)。该形式在40℃/75％RH和25℃/97％室温下稳定。在0与90％之间的RH下，该形式与0.4当量水交换；然而，在GVS分析结束时分离样品，未观察到XRPD图的变化(图57)。发现该形式的水中溶解度是0.71mg/mL(pH9.41)。

实施例26.结晶化合物1游离碱(“形式16”)的表征

在室温下，使约60mg化合物1游离碱于水中形成浆液，保持4小时，随后在50℃下再保持4小时，并进行加热/冷却循环两天。过滤样品并空气干燥，随后进行XRPD分析(图58)。分析证实形式16，一种三水合物。发现形式16在约37℃脱溶剂(图59)。在25℃下，该形式在30％及以上RH下稳定，并且在低于30％RH下脱溶剂。在40℃/75％RH和25℃/97％RH下未观察到XRPD图变化。发现该形式的水中溶解度是0.13mg/mL(pH 9.27)。

实施例27.结晶化合物1游离碱(“形式17”)的表征

在环境条件下，使约50mg非晶形物质在10体积含5％水的THF中形成浆液，保持2天，然后过滤并在玻璃载片上空气干燥，随后进行XRPD分析，表明形式15与形式17的混合物。在25℃下，使约20mg此混合物在10体积含5％水的THF中形成浆液，保持3天，过滤并空气干燥，随后进行XRPD分析(图62)。证实该样品是形式17，一种单水合物。发现形式17在约50℃脱溶剂，随后发生一系列转化(图63)。该形式在40℃/75％RH和25℃/97％RH下稳定。在0与90％之间的RH下，该形式与0.3当量水交换；然而，在GVS分析结束时分离样品，未观察到XRPD图的变化(图65)。发现该形式的水中溶解度是0.18mg/ml(pH 9.33)。

实施例28.施用化合物1柠檬酸盐(“形式1”)

使疾病用标准疗法失败的年满18岁的晚期实体肿瘤/淋巴瘤患者在28天疗程内每天(QD，60–120mg)接受口服化合物1柠檬酸盐(形式1)为了确定最大耐受剂量，在第1个疗程期间，通过基于剂量限制性毒性或等级≥2的任何药物相关不良事件(AE)改进滴定设计来进行剂量递增。在给药前以及给药后在第1个疗程的第1天和第15天收集血液样品进行血浆药物动力学评估。在第2、4及6个疗程及之后每3个疗程的第22天与第29天(给药前)之间，根据RECIST对实体肿瘤进行反应评估并根据IWG标准对淋巴瘤进行评估。

在数据截止点，登记15位患者(60mg，11位患者，7例实体肿瘤[4例弥漫性大B细胞淋巴瘤，DLBCL]及120mg，4位患者，都是实体肿瘤患者)；患者接受平均2个疗程的60mg并且所有患者接受1个疗程的120mg。第1个疗程的剂量限制性毒性在60mg发生于1位患者(3级无症状性天冬氨酸转氨酶升高)及在120mg发生于2位患者(3级和4级无症状性脂肪酶升高)。等级≥3的药物相关性AE在60mg发生于2位(18％)患者并且在120mg发生于3位(75％)患者。总计在>1位患者中仅观察到贫血(60mg有1位，120mg有2位)和脂肪酶增加(0位和2位患者)；3位患者因不良事件而退出(60mg有1位，120mg有2位)并且4位患者在研究中死亡(3位和1位患者；死亡与研究药物无关)。在60mg和120mg下评价11位患者血浆药物动力学数据。化合物1柠檬酸盐(形式1)的药物动力学特征在于，快速吸收(中值T最大值：2小时)、在稳态暴露下适度的变化(对于d15AUCτ，47％变异系数)、在稳态下平均峰谷比是2.7及持续15天每日一次重复给药后2.7倍的平均累积量。在由数据截止点确定的5位有可评价反应的患者(4例DLBCL)中，在60mg的2位DLBCL患者在2个疗程后显示反应迹象，1位部分反应及1位患者肿瘤减小25％。数据截止点后，1位DLBCL患者在80mg下于1个疗程后实现部分反应。

每日一次60mg化合物1柠檬酸盐(形式1)看来具有可接受的安全性和药物动力学曲线。药物动力学结果支持每日一次连续口服施用化合物1柠檬酸盐(形式1)。

实施例29片剂配方

使用湿式制粒方法制备以下口服剂型：

本文中提到的专利和科技文献确定了本领域技术人员可用的知识。除非另作定义，否则本文中使用的所有科技术语都具有与本发明所属领域的技术人员通常所了解相同的含义。本文中引用的颁布的专利、申请和参考文献都通过引用并入本文中，其引用程度就如同具体并且个别地指示其各自通过引用并入一般。在相矛盾的情况下，将以本公开(包括定义在内)为准。

尽管已经描述本发明的多个实施方案，但很明显，所提供的基础实施例可以改变以传达利用本发明化合物、方法等的其它实施方案。因此，应理解，本发明的范围在本文中是借助于实施例呈现，并且不打算受具体实施方案限制。

Claims

1.6-((1R,2S)-2-氨基环己基氨基)-7-氟-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-3(2H)-酮柠檬酸盐的结晶形式，其特征在于使用Cu Kα辐射的x射线粉末衍射(XRPD)图在9.4、16.6、17.4、18.9及19.2°±0.2°的2θ角度处包含峰，且其中所述结晶形式不具有吸湿性。

2.如权利要求1所述的结晶形式，其特征在于使用Cu Kα辐射的XRPD图在9.4、16.6、17.4、18.9、19.2及20.7°±0.2°的2θ角度处包含峰。

3.如权利要求1所述的结晶形式，其特征在于使用Cu Kα辐射的XRPD图在4.7、9.4、16.6、17.4、18.9、19.2、20.7及23.0°±0.2°的2θ角度处包含峰。

4.如权利要求1所述的结晶形式，其特征在于使用Cu Kα辐射的XRPD图在4.7、9.4、13.0、13.8、14.1、16.6、17.4、18.4、18.9、19.2、20.7、23.0、23.3、23.6及25.0°±0.2°的2θ角度处包含峰。

5.一种药物组合物，其包含如权利要求1至4中任一项所述的结晶形式及一种或多种药学上可接受的载体。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其适于口服施用。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其为选自胶囊和片剂的剂型。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其中所述剂型是片剂。

9.如权利要求1至4中任一项所述的结晶形式在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

10.如权利要求5至8中任一项所述的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。

11.如权利要求9或10所述的用途，其中所述癌症是白血病或淋巴瘤。

12.如权利要求9或10所述的用途，其中所述癌症选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合症(MDS)、鼻咽癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌及移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)。

13.如权利要求9或10所述的用途，其中所述癌症选自惰性非霍奇金氏淋巴瘤(iNHL)、套细胞淋巴瘤、移植后淋巴组织增生病症(PT-LPD)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)及急性髓性白血病(AML)。

14.如权利要求9或10所述的用途，其中所述癌症选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)及急性髓性白血病(AML)。