CN107108560A

CN107108560A - 化合物、组合物及其方法

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Publication number: CN107108560A
Application number: CN201580070348.0A
Authority: CN
Inventors: R·马扎里; D·梅扎克; B·M·佩特森; J·沃尔诺夫; R·M·加纳; T·纳尔逊
Original assignee: Cerecor Inc
Current assignee: Avalo Therapeutics Inc
Priority date: 2014-12-23
Filing date: 2015-12-18
Publication date: 2017-08-29
Anticipated expiration: 2035-12-18
Also published as: WO2016106135A1; TW201817725A; CA2970958A1; EP3237399B1; US10202363B2; EP3237399A4; TW201630902A; RU2017126462A3; AU2015369903B2; EP3237399A1; US20210107892A1; AR103209A1; US20230257363A1; MX2017008373A; US20190177299A1; RU2017126462A; US20170369469A1; US10710976B2; AU2015369903A1; JP2018506514A

Abstract

本发明的目的是提供化合物(I)的某些多晶型以及包含化合物(I)或所述多晶型的药物组合物，以及使用或制备所述化合物和药物组合物的方法。

Description

化合物、组合物及其方法

相关申请的交叉引用

本申请要求根据35U.S.C.§119(e)的提交于2014年12月23日的美国临时申请号62/096,077的权益，其通过援引并入本文。

背景技术

US专利号7,592,360(授权日2009年9月22日)公开了化合物(I)：

或(3S,4R)-3-氟-4-[(嘧啶-2-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸4-甲基苄基酯(在专利‘360中称为(3S,4R)-4-甲基苄基3-氟-4-[(嘧啶-2-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸酯，并且在别处称为MK-0657或CERC-301)。作为N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位2B(NMDA-GluN2B或NR2B)的有效选择性拮抗剂，化合物(I)首先被研发用于治疗帕金森病(Addy et al.，J.Clin.Psychopharmacol.，49:856-864(2009))。化合物(I)在罹患治疗抗性重度抑郁症的患者的初步研究显示，在17项汉密尔顿(Hamilton)抑郁评定量表和贝克(Beck)抑郁自评问卷中显示抗抑郁的作用(Ibrahim et al.，J.Clin.Psychopharmacol.，32(4):551-557(2012))。由于研究的小样本，不能从研究的初步数据中得到关于化合物(I)的潜在功效或安全性的确定性结论。

发明内容

本发明的主题提供化合物(I)的某些多晶型，

和包含化合物(I)或所述多晶型的药物组合物，以及使用或制备所述组合物和药物组合物的方法。

已发现化合物(I)可以多种晶型(多晶型)存在。已发现一种特别的晶型，形式II，其相比于其他晶型，为更加热力学稳定且从而可能更适合于批量制备和处理。已开发有效且经济的方法大规模、高纯度地制备化合物(I)和形式II。在动物实验中，形式II已显示出在治疗抑郁症上的安全性和有效性，且当微粒化时，相比于非微粒化的形式II，具有改善的吸收。

本发明的一方面提供一种化合物，其是化合物(I)的基本上纯的晶型II，其显示出以下项的至少一种：

(i)通过使用铜Kα辐射获得的X-射线粉末衍射图包含约5.9和8.8度的2θ角的峰；

(ii)通过使用铜Kα辐射获得的X-射线粉末衍射图基本上如图1A所示；

(iii)使用甲醇作为稀释剂获得的紫外吸收光谱图基本上如图2所示；

(iv)红外光谱图基本上如图3所示；

(v)在约600MHz下在CD₃CN中的质子核磁共振谱图基本上如图4所示；

(vi)在约150MHz下在CD₃CN中的¹³C核磁共振谱图基本上如图5所示；

(vii)热重分析曲线基本上如图6所示；以及

(viii)差示扫描量热图基本上如图7所示。

在此也提供如图1B描述的化合物(I)的晶型I。

本发明的另一方面提供本发明的药物组合物，其包含X90粒度为约10μm或更小的化合物(I)的颗粒。化合物(I)的适合的颗粒例如包括微米颗粒和纳米颗粒。

本发明的另一方面提供治疗对NR2B拮抗剂应答的病症的方法。该方法包括向有此需要的患者给药有效量的本发明的化合物或药物组合物。

本发明的另一方面提供治疗自杀意念的方法，其包括向患有、怀疑患有或已诊断患有自杀意念的患者给药化合物(I)的形式I或II。

本发明的另一方面提供靶向于在细胞上表达的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚单位2B(GluN2B)的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的本发明的化合物或药物组合物。

本发明的另一方面提供降低化合物(I)的吸收速率的方法，其包括向有此需要的患者与食物一起给药有效量的本发明的化合物(I)，其中该化合物基本上在与给予食物同时、或至多给予食物后约2小时、或至多给予食物前约30分钟给药。

本发明的另一方面提供制备化合物(I)、衍生物及相关的中间体的方法。

本发明的另一方面提供制备化合物(I)的方法：

(i)使化合物(8)与三氟甲磺酸酐反应生成三氟甲磺酸酯；

(ii)使上述三氟甲磺酸酯与氨反应生成化合物(9)

(iii)使化合物(9)与2-氯嘧啶反应生成化合物(I)。

本发明的另一方面提供制备化合物(I)的形式II的方法。在水中悬浮纯化的化合物(I)的形式I充足的时间或加热固体的形式I，由此可容易地完成向形式II的转化。

附图简述

图1A示出化合物(I)的晶型II的X-射线粉末衍射图。

图1B示出化合物(I)的晶型I和晶型II的X-射线粉末衍射图。

图2示出化合物(I)的晶型II的紫外吸收光谱图。

图3示出化合物(I)的晶型II的红外光谱图。

图4示出化合物(I)的晶型II的质子核磁共振谱图。

图5示出化合物(I)的晶型II的¹³C核磁共振谱图。

图6示出化合物(I)的晶型II的热重分析曲线。

图7示出化合物(I)的晶型II的差示扫描量热图。

图8示出化合物(I)的晶型II在大鼠中相比于其活动效应的抗抑郁效应的剂量应答曲线。

图9示出化合物(I)的晶型II在大鼠中的对高血压作用的剂量应答曲线。

图10A示出化合物(I)的晶型II在健康的人中在禁食状态下的药代动力学特征(血浆浓度)。

图10B示出化合物(I)的晶型II在健康的人中在进食或禁食下药代动力学的差异。

图11示出在化合物(I)的单口服剂量对收缩压的影响。

图12示出在具有或不具有哌唑嗪下化合物(I)的单口服剂量对收缩压的影响。

图13示出在给药24小时后化合物(I)和氯胺酮对大鼠强制游泳测试的影响(*p<0.05，相比于载体组～p>0.05)。

具体实施方式

定义

除非明确另有说明，文中所使用的以下术语具有以下表示的含义。

“微粒化”指颗粒的直径在微米的范围。制备微粒化的颗粒的方法包括基于摩擦的技术，例如研磨(如喷射研磨)和碾磨，以及基于超临界流体的技术，例如超临界溶液的快速膨胀法(RESS)、超临界反溶剂法(SAS)和气体饱和溶液制粒法(PGSS)。在一些实施方案中，化合物(I)颗粒是由喷射研磨微粒化的。

“粒度”指如由激光衍射粒度分析确定的，例如使用分析仪如Malvern、Sympatec、Microtac或Horibe完成的活性药物成分(API)例如化合物(I)或化合物(I)的形式(II)的颗粒尺寸。

“X90”指对应于90体积％的筛下物累计分布的粒度。

“X50”指对应于50体积％的筛下物累计分布的粒度。

“X10”指对应于10体积％的筛下物累计分布的粒度。

“平均粒度”或“平均PS”包括D43粒度。

“D43”指依据体积平均直径或DeBroukere平均值计算的粒度。

“药学上可接受的赋形剂”指非其自身作为治疗剂，用作载体、稀释剂、辅料、粘合剂和/或媒介以将治疗剂递送至患者或者添加至药物组合物中以改善其操作或储存特性的或者允许或促进化合物或药物组合物形成用以给药的单元剂型的任何物质。药学上可接受的赋形剂在药学领域中是已知的且公开于例如Remington：The Science and Practice ofPharmacy，第21版(Lippincott Williams&Wilkins，Baltimore，MD，2005)和Handbook ofPharmaceutical Excipients，American Pharmaceutical Association，Washington，D.C.，(例如分别出版于1986、1994和2000年的第1版、第2版和第3版)。如本领域技术人员会知晓，药学上可接受的赋形剂可提供各种功能且可描述为湿润剂、缓冲剂、悬浮剂、润滑剂、乳剂、崩解剂、吸收剂、防腐剂、表面活性剂、着色剂、调味剂和甜味剂。药学上可接受的赋形剂的实例包括但不限于(1)糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、醋酸纤维素、羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素；(4)粉末状黄芪胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，例如可可脂及栓剂蜡；(9)油，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)无热原的水；(17)等渗盐水；(18)林格式溶液；(19)乙醇；(20)pH缓冲溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯和/或聚酸酐；以及(22)在药物制剂中使用的其他无毒的可相容的物质。

“单位剂型”指适合作为单位剂量用于人类或动物的物理离散单位。各单位剂型可包含经计算以产生期望的效果的预定量的治疗剂。

“患者”指动物，例如哺乳动物，包括但不限于人类。因此，本文公开的方法可用于人类治疗和兽医应用。在一个实施方案中，患者是哺乳动物。在其他实施方案中，患者是人类。

“有效量”或“治疗有效量”指基于功效及潜在毒性的参数和本领域技术人员的知识产生期望的效果如治疗或预防病症的化合物或药物组合物的量。有效量可以以例如每天或每周1次、2次、3次、4次或更多剂量给药。

“治疗”指达到或获得有益的或期望的结果，例如临床结果。在一些实施方案中，有益的或期望的结果是下述的任何一种或多种：抑制或遏制病症的发作或发展、减少病症的严重性、减少与病症相关的症状的数目或严重性、改善罹患病症的患者的生活质量、减少治疗病症的另一种需要的药物的剂量、增强患者服用另一种药物对病症的效果以及延长患有病症的患者的存活期。例如，在重度抑郁症(MDD)的情况下，治疗可包括MDD的至少一个可测量指标或症状的临床的显著降低。可测量指标包括脑电波图(EEG)慢波活动(SWA)及脑源性神经营养因子(BDNF)。MDD的严重程度可以例如使用Montgomery-Asberg抑郁等级量表(MADRS)、汉密尔顿抑郁等级量表(HAM-D或HRSD，例如HAM-D17)、贝克抑郁自评问卷(BDI)、VAS-抑郁症、汉密尔顿焦虑等级量表(HAM-A)、简明精神病等级量表-阳性症状(BPRS)、临床医师专用分裂状态量表(CADSS)、杨氏狂躁等级量表(YMRS)、Snaith Hamilton快感量表-经修改评分系统(SHAPS-M)、Wechsler抑郁等级量表、Raskin抑郁等级量表、抑郁症状问卷(IDS)、抑郁症状快速问卷(QIDS)或本领域中已知用于MMD评级的任何其他量表来评定。

“预防”指减小患者罹患该患者没有患有但有风险罹患病症的可能性。“有风险”指患者具有一种或多种风险因子，其是与病症的罹患相关的测量参数且在现有技术中是已知的。具有一种或多种风险因子的患者相比于没有这样的风险因子的患者具有更高的罹患该病症的可能性。

“辅剂”指与至少一种额外的治疗结合使用的化合物或药物组合物。作为辅剂，化合物或药物组合物可改善至少一种另外的治疗的疗效，例如通过完成对至少一种另外的治疗的快速应答，减少病症的严重性，减少与病症相关的症状的数目或严重性，或减少至少一种另外的治疗的剂量。辅剂可与至少一种另外的治疗剂一起以单一的组合物给药，或以独自的组合物(的形式)基本上同时或在不同的时间分别给药。

“对NR2B拮抗剂应答”的病症包括如下任何病症，其中给药N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位2B(NR2B)拮抗剂治疗或预防该病症，这样的术语为本文所定义。在此，通过NMDANR2B拮抗剂给药症状减弱的病症是对NR2B拮抗剂应答的病症。对NR2B拮抗剂应答的病症的实例包括帕金森病、神经性疼痛(例如疱疹后遗神经痛、神经损伤、痛(dynias)、外阴疼痛、幻肢痛、根部撕裂、疼痛性糖尿病神经病变、疼痛性创伤单神经病变、疼痛性多发性神经病变、中枢性疼痛综合征和手术后疼痛综合征、乳房切除术后综合征、剖胸术后综合征、残端疼痛)、骨骼及关节疼痛(例如骨关节炎)、反覆性运动疼痛、牙痛、癌症疼痛、肌筋膜疼痛(肌肉损伤、纤维肌痛)、手术期间疼痛(一般手术、妇科手术)、慢性疼痛、痛经、以及与心绞痛相关的疼痛，和各种来源的炎性痛(例如骨关节炎、类风湿性关节炎、风湿病、腱鞘炎及痛风)、头痛、偏头痛和丛集性头痛、精神分裂症、中风、创伤性脑损伤、阿兹海默症、大脑局部缺血、肌肉萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、感觉神经性听力损失、耳鸣、青光眼、由癫痫发作或由神经毒素度化或由葡萄糖和/或氧气对脑的损伤引起的神经损伤、由视通路的神经退化引起的视力损失、下肢不宁综合征、多系统萎缩、非血管性头痛、慢性(或慢性持续性)、亚慢性或急性咳嗽、原发性痛觉过敏、继发性痛觉过敏、原发性触模痛、继发性触摸痛、或由中枢敏感化引起的其他疼痛、运动障碍(例如伴随正常剂量的L-多巴的副作用)、抑郁症(例如重度抑郁症(MDD)、和难治性抑郁症(MDD)、与创伤和压力相关的病症(例如急性压力症和创伤后压力症(PTSD))、具有抑郁特征的躁郁症、焦虑症和强迫症以及相关病症。关于抑郁症、躁郁症、焦虑症和强迫症基相关病症和其他病症的额外的实例参见Diagnostic andStatistical Manual of Mental Disorders，第5版(American PsychiatricAssociation，Arlington，VA，2013)。

“抗高血压剂”指降低血压的任何药剂。抗高血压剂的实例包括钙离子通道阻断剂、血管收缩素转化酶抑制剂(ACE抑制剂)、血管收缩素II受体拮抗剂(A-II拮抗剂)、利尿剂、β-肾上腺素能受体阻断剂(β-阻断剂)、血管扩张剂及α-肾上腺素能受体阻断剂(α-阻断剂)。

“间歇给药”指在全部例如24小时时间段或7天时间段中或根据需求以不规律时间段给药。

“使…反应”指在适合的条件下结合或混合两种或更多种药剂以制备所指示的或期望的产品。所指示的或期望的产品可不必直接得自于使所述药剂反应；使所述药剂反应可产生一种或多种中间体，其最终导致形成所指示的或期望的产品。

“重结晶”指纯化步骤，其中固体化合物以适合溶剂溶解且再结晶以提供更高纯度的固体。再结晶的类型包括单一溶剂、多个溶剂、热过滤和播晶种。

“浆化”指化合物的晶体悬浮于适当溶剂中，搅拌悬浮液且分离所述晶体的纯化过程。

“例如”具有与“例如但不限于”相同的含义。类似地，“包括”具有与“包括但不限于”相同的含义，而“包含”具有与“包含但不限于”相同的含义。

“在约X与约Y之间”指值在约X和约Y之间，包括约X和约Y。

除了在实施例中或另外指出，本文中所使用的表达成分的数量、反应条件等的所有的数目均应理解为由术语“约”修饰。因此，除非有相反的指示，这样的数目是可取决于想要获得的期望的性能而改变的近似值。最低吸纳度地，且不试图限制将等效物原则应用于权利要求的范围，各数值参数应根据有效位数的数目和一般舍入技术来理解。

尽管阐述本发明主题的广泛范畴的数值范围和参数为近似值，但尽可能精确地报道实施例中阐述的数值。然而任何数值均固有地包含由其对应测试测量中发现的标准偏差必然引起的某些误差。

化合物

已发现化合物(I)可以多种结晶或多晶型存在。至今已识别的化合物(I)的多晶型为：形式I、形式II和形式III。形式I是由针状颗粒(棒状)组成，而形式II具有似片状的形貌。已测定形式III仅为多晶型混合物。化合物(I)的多晶型或其多晶型中的任何(一种)均未在美国专利号7,592,360中公开。

三种多晶型中热力学最稳定的形式II是白色结晶粉末。该形式是熔点为123-124℃的无水物。形式I和III已显示出均以固体状态和以含水悬液热转化成形式II。

本发明的一个方面提供化合物(I)的晶型II

展现出以下项中的至少一种：

(iv)红外光谱图基本上如图3所示；

(vii)热重分析曲线基本上如图6所示；以及

(viii)差示扫描量热图基本上如图7所示。

在一个实施方案中，化合物(I)的晶型II是基本上纯的。“基本上纯的”指化合物(I)的晶型II为至少约90重量％纯或不含包括其他多晶型的杂质的分离形式。在一个实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约95重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约96重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约97重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约98重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约99重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约99.5重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约99.6重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约99.7重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约99.8重量％纯。在另一实施方案中，化合物(I)的基本上纯的晶型II是至少约99.9重量％纯。纯度百分比可由本领域中已知的的任何方法来评定，例如气相色谱(GC)、柱色谱(CC)、液相色谱(LC)、高压液相色谱(HPLC)、薄层色谱(TLC)、质谱(MS)和/或高分辨率质谱(HRMS)。

在另一实施方案中，该化合物显示出包含约5.9和8.8度的2θ角的峰的X-射线粉末衍射图，其2θ角分别对应于约14.9和10.0埃的晶格面距(d-spacing)。

在另一实施方案中，该化合物显示出基本上如图1A所示的X-射线粉末衍射图。在另一实施方案中，该化合物还显示出以下项中的至少一种：基本上如图2示出的紫外吸收光谱图，基本上如图3示出的红外光谱图，基本上如图4示出的质子核磁共振谱图，基本上如图5示出的¹³C核磁共振谱图，基本上如图6示出的热重分析曲线，以及基本上如图7示出的差示扫描量热图。

在另一实施方案中，该化合物显示出基本上如图2所示的紫外吸收光谱图。在另一实施方案中，该紫外吸收光谱图包含在约236±2nm处的最大吸收。

在另一实施方案中，该化合物显示出基本上如图3所示的红外光谱图。

在另一实施方案中，该化合物显示出基本上如图4所示的质子核磁共振谱图。在另一实施方案中，该质子核磁共振谱图包含基本上列于表1的峰。

在另一实施方案中，该化合物显示出基本上如图5所示的¹³C核磁共振谱图。在另一实施方案中，该¹³C核磁共振谱图包含基本上列于表2的峰。

在另一实施方案中，该化合物显示出基本上如图6所示的热重分析曲线。在另一实施方案中，该热重分析曲线对应于直至约250℃的约0.16％的重量损失。

在另一实施方案中，该化合物显示出基本上如图7所示的差示扫描量热图。在另一实施方案中，该差示扫描量热图包含在温度约124℃处的吸热峰。

本发明还提供如图1B描述的化合物(I)的晶型I。形式I的纯度可至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％或至少约95％。

药物组合物

本发明的另一方面提供包含有效量的如上述任一实施方案的化合物(I)的晶型II的药物组合物。在一个实施方案中，化合物(I)的晶型II是如上述任一实施方案的基本上纯的。本文也提供包含有效量的如文中描述的化合物(I)的晶型I的药物组合物。

本发明的另一方面提供包含有效量的X90粒度为约10μm或更低的微粒形式的化合物(I)的药物组合物。在一个实施方案中，X90粒度是约8μm以下。在另一实施方案中，X90粒度是约6μm或更低。在另一实施方案中，X90粒度是约5μm或更低。在另一实施方案中，X90粒度是约1-10μm。在另一实施方案中，X90粒度是约2-8μm。在另一实施方案中，X90粒度是约3-6μm。在另一实施方案中，X90粒度是约4-5μm。在另一实施方案中，X90粒度是约4.5μm。X90粒度的其他示例性实施方案包括约4μm、约3.5μm、约3μm、约2.5μm、约2μm、约1.5μm、约1μm、约0.9μm、约0.8μm、约0.7μm、约0.6μm、约0.5μm、约0.4μm、约0.3μm、约0.2μm以及约0.1μm。在另一实施方案中，化合物(I)是晶型II。在另一实施方案中，化合物(I)是基本上纯的晶型II。在另一实施方案中，化合物(I)是晶型I。

本发明的另一方面提供包含有效量的X50粒度为约5μm或更低的微粒形式的化合物(I)的药物组合物。在一个实施方案中，X50粒度是约4μm或更低。在另一实施方案中，X50粒度是约3μm或更低。在另一实施方案中，X50粒度是约2μm或更低。在另一实施方案中，X50粒度是约1-5μm。在另一实施方案中，X50粒度是约1-4μm。在另一实施方案中，X50粒度是约1-3μm。在另一实施方案中，X50粒度是约1-2μm。在另一实施方案中，X50粒度是约2μm。在另一实施方案中，X50粒度是约1.9μm。

本发明的另一方面提供包含有效量的X10粒度为约2μm或更低的微粒形式的化合物(I)的药物组合物。在一个实施方案中，X10粒度是约1μm或更低。在另一实施方案中，X10粒度是约0.1-1μm。在另一实施方案中，X10粒度是约0.1-0.9μm。在另一实施方案中，X10粒度是约0.5-0.9μm。在另一实施方案中，X10粒度是约0.7-0.8μm。在另一实施方案中，X10粒度是约0.8μm。在另一实施方案中，X50粒度是约7.9μm。

在本文公开的药物组合物的实施方案中，药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂的实例包括以上描述的那些，例如载体、表面活性剂、增稠或乳化剂、固体粘合剂、分散或悬浮助剂、增溶剂、着色剂、调味剂、包衣、崩解剂、润滑剂、甜味剂、防腐剂、等张力剂及其任意组合。药学上可接受的赋形剂的选择和使用在例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版(Lippincott Williams&Wilkins，Baltimore，MD，2005)中有教导。

在本文公开的药物组合物的一些实施方案中，药物组合物还包含至少一种额外的活性剂。这样的活性剂的实例包括：(1)非甾体抗炎剂；(2)COX-2抑制剂；(3)缓激肽B1受体拮抗剂；(4)钠通道阻断剂和拮抗剂；(5)一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂；(6)甘氨酸位点拮抗剂；(7)钾通道开放剂；(8)AMPA/红藻氨酸受体拮抗剂；(9)钙通道拮抗剂；(10)GABA-A受体调节剂(例如GABA-A受体激动剂)；(11)基体金属蛋白酶(MMP)抑制剂；(12)血栓溶解剂；(13)类阿片药物例如吗啡；(14)嗜中性粒细胞抑制因子(NIF)；(15)L-多巴；(16)卡比多巴；(17)左旋多巴/卡比多巴；(18)多巴胺激动剂如溴麦角环肽、培高利特、普拉克索、罗匹尼罗；(19)抗胆碱药物；(20)金刚烷胺；(21)卡比多巴；(22)儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)抑制剂如恩他卡朋及托卡朋；(23)单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂；(24)阿片制剂激动剂或拮抗剂；(25)5HT受体激动剂或拮抗剂；(26)NMDA受体激动剂或拮抗剂；(27)NK1拮抗剂；(28)选择性血清素再吸收抑制剂(SSRI)以及选择性血清素和去甲肾上腺素再吸收抑制剂(SSNRI)；(29)三环抗抑郁药物；(30)去甲肾上腺素调节剂；(31)锂；(32)丙戊酸盐；(33)D-丝氨酸；(34)neurontin(加巴喷丁)；(35)止咳药；(36)抗组胺剂(例如第一代抗组胺剂)；(37)解充血剂；(38)祛痰剂；(39)粘液溶解剂；(40)退热剂；(41)镇痛剂。

在本文公开的药物组合物的一些实施方案中，药物组合物还包含抗高血压剂。在一些实施方案中，抗高血压剂是α₁-肾上腺素受体拮抗剂或α₂-肾上腺素受体拮抗剂。α₁-肾上腺素受体拮抗剂的非限制性实例包括多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、吲哚拉明及其代谢物和其类似物。α₂-肾上腺素受体拮抗剂的非限制性实例包括可乐定、胍那苄、胍诺沙苄及其代谢物和其类似物。

药物组合物可以制备为任何适合的单位剂型。例如，药物组合物可以经调配以固体或液体的形式给药，包括适用于以下的药物组合物：(1)例如以灌药、片剂(例如目的是经颊、舌下及全身性吸收者，包括经包胶的片剂)、胶囊(例如干式填充的硬明胶、软明胶或经包胶的胶囊)、囊片、大丸剂、粉剂、药囊、颗粒剂、糊剂、口腔喷雾剂、糖锭、口含锭、丸粒、糖浆、悬浮液、酏剂、液体、脂质体、乳液和微乳液形式口服给药；(2)由例如无菌溶液或悬浮液形式皮下、肌肉内、静脉内或硬膜外注射的肠胃外给药。此外，药物组合物可经调配以用于立即、持续、延长、延迟或控制释放。

在一个实施方案中，调配药物组合物以口服给药。在另一实施方案中，药物组合物为片剂或胶囊的形式。在另一实施方案中，药物组合物为片剂的形式。在另一实施方案中，药物组合物为胶囊的形式。在另一实施方案中，配制立即释放的片剂或胶囊。在另一实施方案中，配制持续、延长、延迟或控制释放的片剂或胶囊。

片剂可以通过任选地与一种或多种助剂压缩或模制制备。压缩片剂可通过在合适的机器中压缩任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合的呈自由流动形式的如粉末或颗粒的化合物(I)来制备。模制片剂可以通过在合适的机器中用惰性液体稀释剂湿润的粉末化合物的混合物模压来制备。片剂可任选地进行包衣或刻痕且可经调配以提供持续、延长、延迟或可控释放的化合物(I)。配制此等持续、延长、延迟或可控释放的组合物的方法是本领域中已知的且公开于已授权的美国专利中，包括但不限于美国专利号4,369,174、4,842,866及其引用的参考文献。可使用包衣递送化合物至肠道(见例如美国专利号6,638,534、5,217,720、6,569,457及其引用的参考文献)。除了片剂，可配制其他剂型例如胶囊、颗粒及凝胶胶囊，以提供持续、延长、延迟或可控释放的化合物(I)。

在另一实施方案中，配制药物组合物用于肠胃外给药。适合肠胃外给药的药物组合物的实例包括无菌注射水溶液和无菌注射非水溶液，各包含例如抗氧剂、缓冲液、抑菌剂和/或使得制剂与预期接受者的血液等张的溶质；以及含水无菌悬浮液和非水无菌悬浮液，其各自包含例如悬浮剂和/或增稠剂。所述制剂可存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿或小瓶中，且可储存在冷冻干燥(冻干)条件下，在使用前仅需要立即加入无菌液体载体例如水。在一个实施方案中，配制药物组合物用于静脉给药。

在另一实施方案中，化合物(I)或化合物I的晶型(I)或(II)的有效量是约1mg-200mg。在另一实施方案中，有效量是约4mg-16mg。在另一实施方案中，有效量是约4mg-12mg。在另一实施方案中，有效量是约4mg-8mg。在另一实施方案中，有效量是约8mg-20mg。在另一实施方案中，有效量是约12mg-20mg。在另一实施方案中，有效量是约16mg-20mg。在另一实施方案中，有效量是约8mg-20mg。在另一实施方案中，有效量是约8mg-16mg。在另一实施方案中，有效量是约8mg-12mg。在另一实施方案中，有效量是约12mg-20mg。在另一实施方案中，有效量是约12mg-16mg。在另一实施方案中，有效量是约4mg。在另一实施方案中，有效量是约8mg。在另一实施方案中，有效量是约12mg。在另一实施方案中，有效量是约16mg。在另一实施方案中，有效量是约20mg。

结合本文的实施例，在此还提供包含上述公开的化合物(I)及辅助药剂的套组。在示例性实施方案中，该套组包含化合物(I)和选自以下的一种或多种辅助药剂：选择性血清素再吸收抑制剂(SSRI)、选择性血清素和去肾上腺素再摄取抑制剂(SSNRI)、三环抗抑郁药物、去甲肾上腺素调节剂、止咳剂、抗组胺剂、解充血剂、祛痰剂、粘液溶解剂、退热剂、镇痛剂以及抗高血压剂。在一些实施方案中，两种或更多种成分(化合物(I)和辅助药剂)可同时给药。

在一些实施方案中，该套组可包含抗高血压剂作为辅助药剂。在一些实施方案中，抗高血压剂是α₁-肾上腺素受体阻断剂。α₁-肾上腺素受体拮抗剂的非限制性实例包括多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、吲哚拉明、其代谢物、药学上可接受的盐及其类似物。

在一些实施方案中，这些药剂可依次给药。特定的给药模式和给药方案可通过本领域普通技人员(例如实习医师)无须过多的实验即可确定。

使用方法

本发明的另一方面提供治疗或预防对NR2B拮抗剂应答的病症的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的化合物(I)的晶型I或II或者包含化合物(I)的晶型I或II的药物组合物。在一个实施方案中，所述方法是治疗对NR2B拮抗剂应答的病症。在另一实施方案中，晶型II如上述任何实施方案所描述是基本上纯的。

在另一实施方案中，对NR2B拮抗剂应答的病症是抑郁症。在另一实施方案中，该病症是重度抑郁症(MDD)。在另一实施方案中，该病症是难治性抑郁症。在另一实施方案中，该病症是具有抑郁特征的躁郁症。在另一实施方案中，该病症是焦虑症。在另一实施方案中，该病症是创伤后压力症(PTSD)。在另一实施方案中，该病症是具有自杀意念的抑郁症、MDD或TRMDD。

在另一实施方案中，所述化合物或药物组合物与食物一起给药。在另一实施方案中，该化合物或药物组合物不与食物一起给药。

本发明也提供靶向于在细胞上表达的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚单位2B(GluN2B)的方法，其通过向有此需要的个体给药治疗有效量的化合物I的形式I或形式II，使得时间足以使所述化合物结合至GluN2B。如上述所解释，GluN2B在各种各样的疾病中起到关键作用，所述疾病包括精神分裂症、中风、创伤性脑损伤、阿兹海默症、大脑局部缺血、肌肉萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、感觉神经性听力损失、耳鸣、青光眼、由癫痫发作或由神经毒素毒化或由葡萄糖和/或氧气对脑的损伤引起的神经损伤、由视通路的神经退化引起的视力损失、下肢不宁综合征、多系统萎缩、非血管性头痛、慢性(或慢性持续性)、亚慢性或急性咳嗽、原发性痛觉过敏、继发性痛觉过敏、原发性异常性痛、继发性异常性痛、或由中枢敏感化引起的其他疼痛、运动障碍(例如伴随正常剂量的L-多巴的副作用)、抑郁症(例如重度抑郁症(MDD)、和难治性抑郁症(MDD)、与创伤和压力相关的病症(例如急性压力症和创伤后压力症(PTSD))、具有抑郁特征的双相障碍、焦虑症和强迫症以及相关病症。通过用化合物I(形式I或II)拮抗GluN2B，本发明提供治疗GluN2B相关疾病的新颖的方法。

本发明的另一方面提供治疗或预防对NR2B拮抗剂应答的病症的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的微粒形式的化合物(I)(形式I或形式II)，该微粒形式的X90、X50或X10粒度如上文所述任何实施方案。在一个实施方案中，该方法是治疗对NR2B拮抗剂应答的病症。在另一实施方案中，化合物(I)是上述任何实施方案中描述的晶型II。在另一实施方案中，晶型II是如上述任何实施方案中描述的基本上纯的。在另一实施方案中，对NR2B拮抗剂应答的病症是抑郁症。在另一实施方案中，该病症是重度抑郁症(MDD)。在另一实施方案中，该病症是难治性抑郁症(TRMDD)。在另一实施方案中，该病症是具有自杀意念的抑郁症、MDD或TRMDD。在一个实施方案中，所述化合物或药物组合物与食物一起给药。在另一实施方案中，所述化合物或药物组合物不与食物一起给药。

本发明的另一方面提供治疗或预防自杀意念的方法，其包括向具有或疑似具有或已经患有自杀意念的患者给药有效量的化合物(I)(形式I或II)。在一个实施方案中，该方法是治疗自杀意念。在另一实施方案中，化合物(I)是微粒形式的并具有如上文任何实施方案所述的X90、X50或X10粒度。在另一实施方案中，化合物(I)是如上文任何实施方案所述的晶型II。在另一实施方案中，晶型II是如上文任何实施方案所述的基本上纯的。在另一实施方案中，化合物(I)是如上文任何实施方案所述的晶型I。

在另一实施方案中，在给药所述化合物前，所述患者已被诊断患有自杀意念约4周。在另一实施方案中，该患者还被诊断患有抑郁症。在另一实施方案中，该患者还被诊断患有重度抑郁症(MDD)。在另一实施方案中，该患者还被诊断患有难治性抑郁症(TRMDD)。在一个实施方案中，所述化合物或药物组合物与食物一起给药。在另一实施方案中，所述化合物或药物组合物不与食物一起给药。

本发明的另一方面提供降低化合物(I)的吸收速率的方法，包括与食物一起给药有效量的化合物(I)(形式I或形式II)至有此需要的患者，其中化合物(I)基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约2小时、或至多给予食物前约30分钟给药。在一个实施方案中，化合物(I)是微粒形式的并具有如上文任何实施方案所述的X90、X50或X10粒度。在另一实施方案中，化合物(I)是如上文任何实施方案所述的晶型II。在另一实施方案中，晶型II是如上文任何实施方案所述的基本上纯的。

在另一实施方案中，相比于包括不与食物一起给药化合物(I)的方法，上述方法导致更低的C_max或更高的T_max。在另一实施方案中，化合物(I)基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约90分钟、或至多给予食物前约15分钟给药。在另一实施方案中，化合物(I)基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约60分钟、或至多给予食物前约10分钟给药。在另一实施方案中，化合物(I)基本上在与给予食物的同时给药。

在本文提供的任何方法中，所述化合物或药物组合物可通过现有技术中已知的任何可接受的模式给药，例如口服或肠胃外。术语“肠胃外”包括但不限于皮下、静脉内、肌肉内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内、颅内、由骨内注射和由输注技术。在一个实施方案中，所述化合物或药物组合物口服给药。在另一实施方案中，所述化合物或药物组合物肠胃外给药。在另一实施方案中，所述化合物或药物组合物静脉给药。

在本文提供的任何方法中，所述方法可还包括监测患者的血压，且若测得高血压，则向该患者给药抗高血压剂。

在本文提供的任何方法中，所述化合物或药物组合物可与至少一种另外的上述公开的活性剂组合使用。该化合物或药物组合物可与至少一种另外的上述公开的活性剂一起以单个组合物给药或以独立组合物在基本上相同或不同的时间内(例如：依次)分别给药。这样的活性剂的实例包括：(1)非甾体抗炎剂；(2)COX-2抑制剂；(3)缓激肽B1受体拮抗剂；(4)钠通道阻断剂和拮抗剂；(5)一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂；(6)甘氨酸位点拮抗剂；(7)钾通道开放剂；(8)AMPA/红藻氨酸受体拮抗剂；(9)钙通道拮抗剂；(10)GABA-A受体调节剂(例如GABA-A受体激动剂)；(11)基体金属蛋白酶(MMP)抑制剂；(12)血栓溶解剂；(13)类阿片药物例如吗啡；(14)嗜中性粒细胞抑制因子(NIF)；(15)L-多巴；(16)卡比多巴；(17)左旋多巴/卡比多巴；(18)多巴胺激动剂如溴麦角环肽、培高利特、普拉克索、罗匹尼罗；(19)抗胆碱药物；(20)金刚烷胺；(21)卡比多巴；(22)儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)抑制剂如恩他卡朋及托卡朋；(23)单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂；(24)阿片制剂激动剂或拮抗剂；(25)5HT受体激动剂或拮抗剂；(26)NMDA受体激动剂或拮抗剂；(27)NK1拮抗剂；(28)选择性血清素再吸收抑制剂(SSRI)以及选择性血清素和去甲肾上腺素再吸收抑制剂(SSNRI)；(29)三环抗抑郁药物；(30)去甲肾上腺素调节剂；(31)锂；(32)丙戊酸盐；(33)D-丝氨酸；和(34)neurontin(加巴喷丁)；(35)止咳药；(36)抗组胺剂(例如第一代抗组胺剂)；(37)解充血剂；(38)祛痰剂；(39)粘液溶解剂；(40)退热剂；(41)镇痛剂。在一些实施方案中，所述化合物或药物组合物与下述至少一种另外的活性剂一起给药：止咳药、第一代抗组胺剂、解充血剂、祛痰剂、粘液溶解剂、退热剂、镇痛剂。

在一些实施方案中，所述化合物或药物组合物作为选择性血清素再吸收抑制剂(SSRI)以及选择性血清素和去甲肾上腺素再吸收抑制剂(SSNRI)的佐剂给药。SSRI和SSNRI的实例包括苯奈达林、间氯哌嗪、西酞普兰、度洛西汀、依托哌酮、非莫西汀、氟西汀、氟伏沙明、吲达品、茚氯秦、米那普仑、奈法唑酮、奥沙氟生(oxaflazone)、帕罗西汀、普罗林坦、利坦色林、舍曲林、坦度螺酮、文拉法辛和齐美定(zimeldine)。在另一实施方案中，所述方法改善SSRI或SSNRI在治疗或预防对NR2B拮抗剂应答的病症的功效。在另一实施方案中，所述方法减少患者对SSRI或SSNRI的治疗应答所花费的时间。在另一实施方案中，所述方法减少患者会另外需要的SSRI或SSNRI的剂量。在另一实施方案中，所述方法减少病症的严重性或与病症有关的症状的数目或严重性。在另一实施方案中，所述病症是抑郁症。在另一实施方案中，该病症是重度抑郁症(MDD)。在另一实施方案中，该病症是难治性抑郁症(TRMDD)。在另一实施方案中，该病症是具有自杀意念的抑郁症、MDD或TRMDD。所述佐剂可与至少一种另外的治疗剂一起以单一的组合物给药，或以独自的组合物(的形式)基本上同时或在不同的时间分别给药。

在本发明提供的任何的方法中，化合物(I)(形式I或形式II)可与抗高血压剂结合给药。化合物(I)的使用可与升高的血压相关联，其可能归因于由去甲状腺素循环介导的周边小动脉的α₁-肾上腺素能紧张度增加。由于相比于高血压的其他常见原因如心脏刺激、动脉壁肥大、盐潴留和体液过载，其与小动脉血管收缩有关，血压的升高大多为暂时的。

因此，在一些实施例中，所述抗高血压剂是阻断周边α₁-肾上腺素能受体的α₁-肾上腺素受体。α₁-肾上腺素受体拮抗剂的非限制性实例包括但不限于多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、吲哚拉明及其代谢物、药学上可接受的盐及其类似物。这些药剂对α₁-肾上腺素受体亚型(α1A、α1B、α1D)是高度选择性的。当用大剂量给药时，其并不抑制α₂-肾上腺素受体(α2A、α2B、α2C)、β-肾上腺素受体(β1、β2、β3)或其他受体例如乙酰胆碱(蕈毒碱)、多巴胺及5-羟基色胺(5-HT，血清素)受体。在一些实施方案中，所述抗高血压剂是减少中枢肾上腺素能流出物的α₂-肾上腺素受体拮抗剂。该α₂-肾上腺素受体拮抗剂的非限制性实例包括可乐定、胍那苄、胍诺沙苄，其代谢物及其类似物。化合物(I)和所述抗高血压剂可以同时给药或分别给药。这些药剂刺激α₂-肾上腺素受体且抑制脑干血管舒缩中枢介导的去甲肾上腺素释放。

其他适合的抗高血压剂包括钙离子通道阻断剂、利尿剂和血管收缩素转化酶(ACE)抑制剂。钙离子通道阻断剂的非限制性实例包括地尔硫、氨氯地平、维拉帕米、地尔硫、硝苯地平、氨氯地平、非洛地平、伊拉地平、尼卡地平、桂利嗪、尼索地平及其药学上可接受的盐。利尿剂的非限制性实例包括噻嗪类利尿剂、保钾(potassium-sparing)利尿剂、环利尿剂及其药学上可接受的盐。血管收缩素转化酶(ACE)抑制剂的非限制性实例包括阿拉普利、贝那普利、贝那普利拉、卡托普利、西罗普利、西拉普利、地拉普利、依那普利、依那普利拉、福辛普利、咪达普利、赖诺普利、莫西普利、莫福普利(moveltopril)、培哚普利、喹那普利、喹那普利拉(quinaprilat)、雷米普利、雷米普利拉、螺普利、替莫普利、群多普利、佐芬普利及其药学上可接受的盐。

本文所述的抗高血压剂可以任何适合的形式使用。实例包括甲磺酸多沙唑嗪、盐酸哌唑嗪和盐酸特拉唑嗪。

由于血压暂时升高与去甲肾上腺素循环介导的周边小动脉的α1-肾上腺素能紧张性增加有关，故阻断α1-肾上腺素受体或α2-肾上腺素受体能有效缓解血压效应。在一些实施方案中，所述抗高血压剂的活性成分基本上由α1-肾上腺素受体拮抗剂、α2-肾上腺素受体拮抗剂或二者组成。在一些实施方案中，该抗高血压剂的活性成分基本上由α1-肾上腺素受体拮抗剂组成。以上描述的α1-肾上腺素受体拮抗剂或α2-肾上腺素受体拮抗剂可在化合物(I)的给药前、化合物(I)的给药期间或化合物(I)给药后给药。在示例性的实施方案中，所述抗高血压剂是在化合物(I)给药前1、2、5、10、15、20、30、60、100分钟时给药。在另一实施方案中，所述抗高血压剂是在化合物(I)给药后1、2、5、10、15、20、30、60、100分钟时给药。在一些实施方案中，所述抗高血压剂是与化合物(I)给药大致相同的时间或依次给药。在一些实施方案中，所述α1-肾上腺素受体拮抗剂或α2-肾上腺素受体拮抗剂仅在上述时间框架里给药以控制化合物(I)的暂时血压效应。在一些实施方案中，所述α1-肾上腺素受体拮抗剂或α2-肾上腺素受体拮抗剂在化合物(I)给药的5、10、20、30或60分钟内给药。

抗高血压剂的有效量或单位剂量可为约0.001-100mg/kg体重。在一些示例性实施方案中，有效量会是约0.5-2500mg，而在一些其他实施方案中为约5-50mg。

在本文提供的任何方法中，所述化合物或药物组合物可间歇给药。在一些实施方案中，所述化合物、辅助药剂、药剂的组合或药物组合物可每天独立地给药一次、两次、三次、四次或更多次。在一些实施方案中，所述化合物、辅助药剂、药剂的组合或药物组合物可独立地每1、2、3、4、5、6、7、10、14、15、10或30天给药一次。

在本文提供的任何方法中，化合物(I)的有效量或单位剂量可为每日、每周或间歇地约1-2000mg。对于每日给药，有效量可分为两次、三次或更多次以便一天多次给药。在一个实施方案中，有效量是约1-60mg/天。在一个实施方案中，有效量是约4-20mg/天。在另一实施方案中，有效量是约4-8mg/天。在另一个实施方案中，有效量是约4mg/天。在另一个实施方案中，有效量是约8mg/天。在另一个实施方案中，有效量是约16mg/天。在另一个实施方案中，有效量是约20mg/天。在另一个实施方案中，有效量间歇地是约4-60mg。在另一个实施方案中，有效量在24小时时间段内间歇地是约4-60mg。在另一个实施方案中，有效量在24小时时间段内间歇地是约4-20mg/天。在另一实施方案中，有效量在24小时时间段内间歇地是约4-8mg/天。

化合物(I)在本发明描述的任何方法中可间歇给药。如图13所示，在给药化合物(I)24小时后显示出在不动、攀爬和游泳上的显著的效果。因此，可间歇给药化合物(I)以实现持续的治疗效果。在一些实施方案中，治疗有效量或单位剂量的化合物(I)间歇地在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天期间是约4-2000mg。间歇给药的实例包括治疗有效量或单位剂量地在每1、2、3、4、5、7、10、14、15、20、或30的时间段给药一次约1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400或500mg的化合物(I)。在一些实施方案中，化合物(I)基本上以形式II存在。在另一实施方案中，这样的有效量或单位剂量是每天、每7天、每2周、每3周或每个月给药一次。在另一实施方案中，有效量在7天的时间段间歇地是约8-200mg。在另一实施方案中，有效量在7天的时间段间歇地是约12-60mg。在另一实施方案中，有效量在7天的时间段间歇地是约16-60mg。有在另一实施方案中，效量在7天的时间段间歇地是约20-60mg。

在化合物(I)给药的天数间可存在约1-30天的间隔。取决于疾病状况，治疗应答和治疗阶段，该间隔的长度可相应地变化。例如，各间隔可独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天长。在示例性实施方案中，在第一天初始给药所述化合物后，可在第三天的第二次给药前间隔2天，随后可在第三次给药前间隔6天。

在本文公开的方法的一些实施方案中，所述化合物或药物组合物以基于体重的剂量给药。因此，在一些实施方案中，有效量是每天或间歇地约0.01-1mg/kg。

对于静脉给药可调整剂量水平。在这样的情况下，所述化合物或药物组合物可以以约0.01-100μg/kg/min的量给药。

在一些实施方案中，给药方案包括第一起始阶段和第二维持阶段。在第一阶段的剂量用以达到期望的治疗水平，而第二阶段的剂量提供可持续的治疗疗效。第一起始阶段的每日剂量可以为多于、少于或等于维持阶段的剂量。各阶段的化合物(I)的有效量可以是例如每天或间歇地约4-60mg。所述化合物或药物组合物在各阶段期间可独立地在给药日给药1次、2次、3次、4次或更多次。起始阶段的长度可为1天至1周或1个月的任何适合的时间段，包括例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或15天。维持阶段可持续数天至数年或长至所需。在示例性实施方案中，起始阶段和维持阶段的间歇给药方案独立地包括每2天、每3天、每4天、每5天、每6天、每周、每10天、每2周或每月给药所述化合物。起始阶段和维持阶段的有效量是独立地选自以上关于每日或间歇给药的范围或值。

在以上每一个阶段，可进行剂量和给药方案的调整。该调整将取决于具体的情况(例如，是否容易患所治疗的疾病或病症，疾病的严重性或预期严重性，或患者的年纪或一般健康状况)，甚至前述范围以外的剂量可为合适的。例如，第一阶段可以以相比于给药方案剩余的剂量更高的日剂量开始。给药也可包括耐受阶段，其中按一定剂量将所述化合物给药至个体且持续足以使个体/患者耐受该剂量而不显示任何副作用的时间段。随后该剂量可在所选时间间隔下增加直到完成治疗剂量。医师或具有一般技能的其他卫生保健专业人士能够确定特定情况下的特定剂量。

本发明的这些组合物可包含立即释放、持续或延长释放、延迟释放组分，或其组合。本领域技术人员根据本发明的公开知道药物或药理学组合物的制备。制剂和给药的一般技术见“Remington：The Science and Practice of Pharmacy，Twentieth Edition,”Lippincott Williams&Wilkins，Philadelphia，Pa。片剂、胶囊、丸剂、粉剂、颗粒剂、糖衣药丸、凝胶、浆料、软膏、溶液剂、栓剂、注射剂、吸入剂和气溶胶是此等制剂的实例。例如延长或改进释放的口服制剂可通过本领域中已知的方法制备。药物组合物的延长释放形式可以是基质片剂或胶囊组合物。

本发明的另一方面提供增加化合物(I)之生物利用度的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的化合物(I)、或包含化合物(I)的药物组合物，其中所述化合物(I)是以微粒形式具有如上文任何实施方案所述的X90、X50或X10粒度。在另一实施方案中，化合物(I)是如上文任何实施方案所述的晶型II。在另一实施方案中，晶型II是如上文任何实施方案所述的基本上纯的。在另一实施方案中，化合物(I)是如上文任何实施方案所述的晶型I。

在另一实施方案中，该方法与包括给药X90粒度为约10μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。在另一实施方案中，该方法与包括给药X90粒度为约11μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。在另一实施方案中，该方法与包括给药X90粒度为约12μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。在另一实施方案中，该方法与包括给药X90粒度为约13μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。在另一实施方案中，该方法与包括给药X90粒度为约14μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。

在另一实施方案中，该方法与包括给药D43粒度为约10μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。在另一实施方案中，该方法与包括给药D43粒度为约11μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。在另一实施方案中，该方法与包括给药D43粒度为约12μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。在另一实施方案中，该方法与包括给药D43粒度为约13μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。在另一实施方案中，该方法与包括给药D43粒度为约14μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。

在一个实施方案中，所述化合物或药物组合物与食物一起给药。在另一实施方案中，所述化合物或药物组合物不与食物一起给药。

制备方法

本发明的另一方面提供在过渡金属催化加氢条件下化合物A转化为化合物B的方法：

其中R'是

1).OH；

2).NH2或

3).NHHet，其中Het是包含1或2个氮环原子的5或6元杂芳环、噻唑基或噻二唑基，NH连接至Het环上氮邻位的碳上，且Het是任选地被1或2个取代基取代，各取代基独立地为C1-4烷基、氟、氯、溴或碘。

化合物A的实例包括：

除Bn(苄基)和Bz(苯甲酰基)外，也可使用其他保护基团来制备化合物A的类似物。

各种过渡金属，包括例如钯和钌，可用作催化剂。催化剂可从过渡前体络合物和适合的配体来制备。例如，钌的前体络合物包括[(COD)]RhCl]2和使用阳离子型OTf^-和BF₄ ^-盐的类似络合物。适合的配体包括例如Josiphos和Walphos：

在一些实施方案中，化合物A可以以酸例如HCl盐、甲苯磺酸(TSA)盐和甲磺酸(MSA)盐的形式存在。在加氢反应中可使用各种溶剂，包括两种或多种溶剂的共溶剂。本领域普通技术人员在无需过多实验的情况下能够确定精确条件，例如催化剂与底物的比例以及配体的量。

已研发新的方法大规模制备高纯度的化合物(I)和化合物(I)的晶型I或II。本发明提供的方法在多方面不同于美国专利号7,592,360和PCT国际公开号WO 2006/069287中公开的方法，包括反应物的类型和量、中间体、反应条件、以及包括或省略特定步骤。例如，在‘360专利及‘287PCT公开中公开的方法均没有包括将化合物(I)的形式I转化为形式II的步骤。此外，本文提供的方法使用中间化合物(8)

‘360专利中公开的方法使用中间体(±)-((cis)-3-氟-1-{[(4-甲基苄基)氧基]羰基}哌啶-4-基)乙酸

此外，本文提供的方法使用与‘287PCT公开中所引用的不同的反应物、反应物的量和反应条件。

本发明的一方面提供制备化合物(I)的方法，其包括：

(i)使化合物(8)与三氟甲磺酸酐反应，生成三氟甲磺酸酯；

(ii)使三氟甲磺酸酯与氨反应生成化合物(9)

(iii)使化合物(9)与2-氯嘧啶反应，生成化合物(I)的形式I。

在一个实施方案中，该方法还包括向化合物(I)的形式I播以化合物(I)的形式II的晶种。

在另一实施方案中，该方法还包括使化合物(6)与羰基二咪唑和化合物(7)反应，以生成化合物(8)。

在另一实施方案中，该方法还包括用氢气经钯使化合物(5)脱苄基以生成化合物(6)。

在另一实施方案中，该方法还包括在氢气气氛下用氯(1,5-环辛二烯)铑的二聚体还原化合物(4)以生成化合物(5)。

在另一实施方案中，该方法还包括纯化化合物(I)。在另一实施方案中，纯化包括浆化或重结晶。在另一实施方案中，化合物(I)的形式I通过在适合的溶剂中例如乙酸乙酯或包含乙酸乙酯和庚烷的共溶剂中重结晶而进行纯化。

化合物(I)的形式I可以不同的方式转化为形式II。在一些实施方案中，固体状态的化合物(I)的形式I被加热至高于室温期望的时间段。促进这样的转化的示例性温度包括约50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、105℃、110℃、115℃、120℃、125℃、130℃、135℃、140℃和150℃。在一些实施方案中，该温度为约90-135℃，包括所有子范围。在一些更多示例性实施例中，该温度是约100-105℃、100-110℃或100-115℃。加热可保持一段时间，例如约1分钟-30小时，包括所有的子范围。示例性的加热时长包括约10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、1小时、2小时、3小时、5小时、10小时和24小时。

化合物(I)的形式II也可通过形式I在适合的溶剂或共溶剂中浆化获得。可施用搅拌或加热。在示例性实施方案中，化合物(I)的形式I可在室温下悬浮于水溶超过24小时。若需要，该时间可进一步延长以使得完成形式I向形式II的完全转化。

在化合物(I)的形式I的转化后，可用常规步骤分离形式II。在一些实施方案中，该分离包括过滤和/或用适合的溶剂洗涤。

形式II的大规模生产可通过向形式I播以形式II的晶种来实现。播晶种是诱导结晶材料从小的目标形式的晶体生长的重要步骤。可使用单个溶剂或多个溶剂的体系播晶种及晶体生长。在一些实施方案中，该体系包含甲醇和乙酸的共溶剂。

实施例

以下呈现的实施例是说明性的且不应用以限制本发明目标的范围。

实施例1：化合物(I)和晶型II的制备

流程I

本文所用的缩写指代如下：

ACN＝乙腈

AcOH＝乙酸

BnBr＝苄基溴

CDI＝1,1'-羰基二咪唑

Darco G＝活性炭

DCM＝二氯甲烷

DIPA＝二异丙胺

DMF＝二甲基甲酰胺

EtOAc＝乙酸乙酯

HCl＝氯化氢

iProAc＝乙酸异丙酯

MeOH＝甲醇

NaBH₄＝硼氢化钠

NaCl＝氯化钠

NaOH＝氢氧化钠

NH₃＝氨

Pd/C＝钯/碳

[RhCODCl]₂＝氯(1,5-环辛二烯)铑(I)二聚体(也称为氯化1,5-环辛二烯铑(I)二聚体、二氯化双(1,5-环辛二烯)二铑(I)、二-μ-氯双[(1,2,5,6-η)-1,5-环辛二烯]二铑、氯化铑(I)1,5-环辛二烯络合物二聚体，以及[Rh(COD)Cl]₂)

RT＝室温

THF＝四氢呋喃

步骤1

用LDA处理化合物I且随后与DMF反应以制备原位的醛中间体，其用NaBH₄还原以产生化合物2。通过重结晶完成化合物2的纯化。

步骤2

化合物2与苄基溴反应生成化合物3。

步骤3

用NaBH₄还原化合物3以生成化合物4，其为HCl盐。通过重结晶完成化合物4的纯化。

步骤4

在氢气氛下使用Walphos不对称还原化合物4制备化合物5。

步骤5

随后化合物5在使用氢气经钯的另一还原步骤中脱保护(脱苄基)以生成化合物6。

步骤6

化合物6与4-甲基苄基醇(化合物7)和羰基二咪唑偶合以制备化合物8。

步骤7

随后将化合物8转化成原位三氟甲磺酸酯，其与氨进一步反应以生成化合物9。

步骤8

化合物9与氯嘧啶反应以制备形式I的化合物(I)或(3S,4R)-3-氟-4-[(嘧啶-2-基氨基)甲基]哌啶-1-羧酸4-甲基苄基酯的粗产物。在形式I的化合物(I)中加入化合物(I)的形式II晶种。在Darco G60存在下浆化并随后重结晶，由此进行纯化，制备纯化的形式II，其经共研磨形成期望的粒度分布。

实施例2：X-射线粉末衍射

使用X射线粉末衍射(XRPD)表征化合物(I)的晶型II(图1A)。XRPD图对应表示为高度结晶的形式II的无水形式。除了形式II，化合物(I)可作为表示为形式I的另外的无水多晶型存在。这些相的XRPD图显示于图1B中。在室温下向甲基-叔-丁基醚中加入约等比例的两种无水相，由此进行浆化实验。从浆料中过滤的固体的XRPD显示出相转变为形式II。从加热形式I至115℃回收的固体的XRPD分析显示相转变为形式II。基于这些实验，形式II是室温至121℃之间的热力学稳定的形式。

实施例3：紫外吸收光谱

使用Cary 300Bio UV-Vis分光光度计以及甲醇作为稀释剂获得如图2所示的化合物(I)的晶型II的紫外(UV)吸收光谱。光谱通过236±2nm处的最大值表征。

实施例4：红外透射光谱

使用Nicolet Nexus 670FTIR光谱仪由ATR附件获得如图3所示的化合物(I)的晶型II的红外(IR)透射光谱。

实施例5：质子核磁共振谱

使用在600.13MHz的频率下操作的Bruker DRX-600核磁共振(NMR)光谱仪获得如图4所示的化合物(I)的晶型II的质子核磁共振(¹H NMR)谱。样品浓度约为3.1％(w/v)于CD₃CN中。参比化合物为CHD₂CN(1.94ppm)。在0℃获得光谱以使得在环境温度下宽的信号锐化。按照以下化合物(I)的编号结构式的信号分配提供于表1。

表1.¹H NMR信号分配

*多重性：s＝单峰；d＝二重峰；br＝宽峰；t＝三重峰；m＝多重峰；o＝重叠；J＝以赫兹为单位的耦合常数。

在溶液中，L-001067743-005K以氨基甲酸酯旋转异构体的1:1混合物存在。除了由(旋转异构体)标注外，分配经分组。

^#2.26ppm处的信号归因于H₂O。

^$在3.36ppm处的多重峰归属为低含量未知物。

实施例6：¹³C核磁共振谱

使用在150.90MHz的频率下操作的Bruker DRX-600NMR光谱仪获得如图5所示的化合物(I)的晶型II的核磁共振(¹³C NMR)谱。样品浓度约为3.1％(w/v)于CD₃CN中。参比化合物为CD₃CN(1.39ppm为CD₃基团，118.45ppm处观察到–CN基团。在0℃获得光谱以使得在环境温度下宽的信号锐化。按照以下化合物(I)的编号结构式的信号分配提供于表2。

表2.¹³C NMR信号分配

实施例7：热重分析曲线

在氮气流下，在加热速率为10℃/分钟下获得化合物(I)的形式II的热重(TG)分析曲线。直到150℃观察到0.04％的重量损失。在150℃以上的进一步的重量损失归因于分解。

实施例8：差示扫描量热法

在氮气流下，在加热速率为10℃/分钟下在曲卷盘中获得化合物(I)的形式II的差示扫描量热(DSC)曲线。DSC曲线呈现出熔融吸热峰，其外推起始温度为121℃，峰值温度为123℃，且热焓为112.7J/g。

实施例9：粒度评估

评估微粒化的化合物(I)的晶型II的样品的粒度以及粒度分析方法的研发。

使用配备有RODOS/M分配模块、VIBRI振动进料器和R2镜头的Sympatec HELOS/KF粒度分析仪获得粒度信息。将微粒化的化合物(I)的形式II的100±10mg样品转移至VIBRI中且均匀散布以确保一致的进给速率。使用25％的进料率和3.0bar的进料压力进行分析。触发条件如下：时基-100ms；开始-c.opt≥1.0％；有效–始终；停止-5s，c.opt≤1.0％或10s即时。使用Sympatec的WINDOX 5软件分析数据。结果提供于表3中。

表3.微粒化的形式II的X10、X50和X90粒度

基于研发，认为适合于微粒化的化合物(I)的样品的常规粒度分析的方法参数如下：

实施例10：粒度对药物吸收的影响

为了测试粒度(PS)对吸收的影响，在90-mg/kg剂量下进行猴研究以比较在0.5％甲基纤维素中悬浮液形式的未研磨的化合物(I)以及经喷射研磨的化合物(I)。向雄性恒河猴给药在0.5％基纤维素中悬浮液形式的未研磨的和经喷射研磨的化合物(I)的晶型II。在给药前约1小时给猴进食。如表4所示，相对于平均PS为14μm的未研磨形式II，平均PS为4.5μm的经喷射研磨的形式II增加1.43倍的药物暴露。

表4.在已进食的雄性恒河猴中的粒度影响

*在给药前给约1小时给猴进食10块饼干。

**使用原料药物粉末测量PS。

实施例11：NMDA-GluN2B受体的亲和力

在室温(或37℃)下在96孔微量滴定板中在包含150mM NaCl的20mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中进行放射性配体结合分析，最终分析体积为1.0mL。在二甲基亚砜(DMSO)中制备化合物(I)的晶型II 10mM且用DMSO连续稀释以产生各20μL浓度相差3倍的10个溶液(Mosser et al.，2003)。使用N-(3-氯苄基)-4-碘benzimidamide(最终浓度10μM)评估非特异性结合，且通过加入DMSO(最终浓度2％)测量总结合。将表达人类GluN1a/GluN2B受体的L(tk-)细胞膜(最终浓度40pM)和[³H]-[(E)-N1-(2-甲氧基苄基)-肉桂脒](最终浓度1nM)加入至微量滴定板的所有孔中。在室温(或37℃)下培养3h(24h或48h后，通过Packard GF/B过滤器过滤样品(在0.05％聚乙烯亚胺[PEI；Sigma P-3143]中预浸)且每次用1mL冷的20mMHEPES缓冲液冲洗。在过滤器板真空干燥后，加入50μL Packard Microscint-20且在Packard TopCount中测定结合放射活性。

也使用全脑匀浆(大鼠)、额叶皮质匀浆(狗和恒河猴)及颞叶皮质匀浆(人类)进行与上文所述类似的在L(tk-)细胞中表达的克隆的人类受体的结合实验。

形式II有效地抑制放射性配体([³H]化合物-2)结合至在L(tk-)细胞中表达的人类NMDA-GluN1a/GluN2B受体以及所有测试物种(大鼠、狗、恒河猴、人类)的脑组织匀浆。使用人类颞叶皮质匀浆测定的形式II的结合亲和力分别在室温和37℃下得到3.1nM(0.0031μM)和8.1nM(0.0081μM)的K_i值。在其他物种中的研究结果与人类的数据一致(表5)。

表5.在L(tk-)膜中表达的人类GluN1a/GluN2B受体和脑组织匀浆的结合亲和力

数值为几何平均值。

实施例12：NMDA受体的功能活性和选择性

测量对钙流入表达GluN1a/GluN2B或GluN1a/GluN2A人类受体的L(tk-)细胞中的抑制，以确定化合物(I)抑制NMDA受体功能的IC₅₀。

将GluN1a/GluN2B(或GluN1a/GluN2A)受体转染的L(tk-)细胞以每孔3×10⁴个细胞铺板于96孔型式的板上，并使其在正常生长培养基(具有丙酮酸钠、4500mg葡萄糖、青霉素/链霉素、谷氨酰胺、10％胎牛血清和0.5mg/mL遗传霉素的Dulbecco改良Eagle培养基)中生长1天。在500μM氯胺酮存在下通过加入10nM地塞米松诱导GluN1a/GluN2B(GluN1a/GluN2A)在这些细胞中的表达16-24h。在DMSO中制备化合物(I)的晶型II且连续地用DMSO稀释以产生10个浓度相差3倍的溶液。稀释DMSO溶液250倍至分析缓冲液(包含20mM HEPES、2mM CaCl₂、0.1％牛血清蛋白以及250μM丙磺舒的不含Mg²⁺Hanks平衡盐溶液)，由此制备96孔药物板。诱导后，将细胞用分析缓冲液冲洗2次(Labsystem细胞清洗器；3-倍稀释液保留100μL)且在包含Pluronic F-127和100μM氯胺酮的分析缓冲液中在37℃下负载钙荧光指示剂fluo-3AM进行1h。细胞随后用分析缓冲液冲洗8次，在各孔中保留100μL缓冲液。在FLIPR(荧光成像板读取器；Molecular Devices，Sunnyvale，CA)中使用488nm的激发和530nm处的发射立即测量荧光强度。在开始记录荧光强度后的5秒，加入50μL激动剂溶液(40μM谷氨酸/甘氨酸；最终浓度10μM)且在1分钟后，当荧光信号稳定时，从药物板中加入50μL形式II和对照溶液，并另记录荧光强度30分钟。

形式II抑制钙流入激动剂刺激的NMDA-GluN1a/GluN2B L(tk-)细胞，其IC₅₀为3.6nM(0.0036μM)，但在高达30,000nM(30μM)的浓度下对钙流入激动剂刺激的NR1a/NR2A细胞没有影响。结果证明形式II是包含GluN2B亚单位的NMDA受体的有效的高选择性拮抗剂。

实施例13：大鼠及猴(体内)的单次剂量药代动力学(口服和IV)

使用重量约250–280g的雄性Sprague-Dawley大鼠(N＝8；N＝4口服和N＝4静脉内[IV])以及约6.0–8.8kg的雄性恒河猴(N＝4，互换)进行PK研究。在大鼠中，以推注形式给药2mg/kg(0.4mL/kg)的化合物(I)的晶型II的IV剂量，并通过灌胃给药15mg/kg(5mL/kg)的口服剂量。在猴中，以缓慢推注的形式给药2mg/kg(0.1mL/kg)的化合物(I)的晶型II的IV剂量，并通过鼻胃管给药15mg/kg(5mL/kg)的口服剂量。在给药前及给药后0.083(仅IVonly)、0.25、0.50、1、2、4、6、8、10、24、48、72和96h连续采集血液样品。使用加热的喷雾器界面在阳离子模式通过LC/MS/MS分析在大鼠和猴血浆内的形式II的浓度。定量的下限是2.5ng/mL(约0.00697μM)。

表6总结PK参数。在口服给药至大鼠和猴后，形式II快速被吸收(对大鼠Tmax<1h，而对猴约2h)，并且在两物种中显示出良好的生物利用度(大鼠60％，且猴50％)。在IV给药后评估分布体积(Vdss)，并在大鼠中超过体内体内水总量(mean Vdss＝3.1L/kg)且在猴中为中等的(平均Vdss＝2.9L/kg)。在IV给药后在两个物种中都显示出高血浆清除率(CLp)(在大鼠中平均CLp＝28.4mL/min/kg以及在猴中平均CLp＝15.1mL/min/kg)。在IV剂量后计算半衰期(t1/2)，相比于大鼠(平均t1/2＝1.7h)，在猴中有更长的半衰期(平均t1/2＝4.2h)。

表6.在2和15mg/kg剂量下在口服(PO)和静脉内(IV)给药期间大鼠及猴体内的药代动力学

^a数据以平均值(S.D.)形式呈现

^a在IV和PO给药后基于AUC0–∞(剂量归一化)值(非互换型研究设计)

^c在IV和PO给药后基于AUC0–∞(剂量归一化)值(互换型研究设计)

AUC，曲线下面积；CL_p，总血浆清除率；C_max，药物的最大血浆浓度；T_max，到达C_max的时间；t_1/2，半衰期；Vd_ss，稳态的分布体积。

实施例14：急性抑郁症模型-强迫游泳测试

将幼年、成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分配在治疗组中，并给药载体(0.5％MC/0.02％SLS)、溶解于无菌水中的参照化合物地昔帕明(20mg/kg；三环抗抑郁剂；Sigma，Lot#078K1326)、或悬浮于0.5％MC/0.02％SLS中的化合物(I)的晶型II(0.1、0.3、1、3、10和30mg/kg)，在第一天(给药)2次(在适应之后；测试前～24h，且在暗循环之前)及在第2天1次(地昔帕明，测试前30分钟；及形式II及载体，测试前45分钟)。

由透明的丙烯酸构建各强迫游泳室(高，40cm；直径，20.3cm)。大鼠在包含23℃±1℃的水的筒中进行一个15分钟阶段的给药前游泳测试，随后在约24h后进行实验性5分钟(游泳)阶段。在适应期间水为16cm深，而在测试中为30cm深。每5s记录每个个体的不动、攀爬和游泳行为，总计每个个体记录60个数。当动物不能保持使其鼻子保持在水面上的姿势时，将其直接从水中移除并从研究中排除。在完成游泳测试进程后采集血液且分析血浆中形式II的浓度。

相比于载体对照，形式II(1、3、10和30mg/kg)的不动频率显著降低且显著增加游泳行为(对于1、3和30mg/kg，P<0.01；对于10mg/kg，P<0.05)(图8)，但是除了剂量为3mg/kg(P<0.05)外，没有影响攀爬行为。相比于载体对照，地昔帕明(20mg/kg)显著降低不动(P<0.001)且显著增加攀爬行为(P<0.01)，在游泳行为中没有变化。在大鼠中在取样时形式II血浆水平约为15、120、390、1420、4700和14110nM，分别对应于约5、29、56、83、94和98％RO。增加游泳频率及减少不动的ED₅₀分别为～0.3和0.7mg/kg，对应于～30％和50％的RO。

实施例15:急性抑郁症模型-运动分析

为了证明在强迫游泳测试中形式II的影响不是由于活动水平的常规的增加，大鼠在口服给药形式II后进行运动分析。将成年雄性Sprague-Dawley大鼠(N＝42)随机分配在至治疗组中(载体或0.1、0.3、1、3、10和30mg/kg的化合物(I)；N＝6/组)。在亮循环期间，在光电池监测的笼具中(Hamilton Kinder，San Diego，CA)评定运动活动。各笼由不锈钢框架围绕的标准塑料大鼠笼(24×45.5cm)组成。红外光电池光束位于框架长轴两端以测量行进的走动距离。第二套光束放在地板上且用于测量直立活动。通过电脑系统记录光电池光束的中断。在测试中顶部过滤器放置于测试封闭体的顶部。大鼠通过口服灌胃给药载体或测试化合物，在第1天2次(在测试前约24h及在暗循环前)且在第2天1次(在放置于运动笼中进行60分钟测试之前45分钟)。在5分钟的频段中捕捉运动活动。

在第一个5分钟测试期间(时间与强迫游泳测试的时间相关)，与载体对照相比，形式II(1、3、10和30mg/kg)显著增加行进距离(对于1和3mg/kg，P<0.01；对于10和30mg/kg，P<0.001)。60分钟的测试总计，相比于载体对照，形式II(1、3、10和30mg/kg)显著增加行进距离(对于1mg/kg，P<0.01；对于3、10和30mg/kg，P<0.001)。运动活动增加的ED₅₀是～2mg/kg，转译成～75％RO，其高于游泳频率增加的和不动减少的ED₅₀。对于0.1和0.3mg/kg剂量组没有观察到运动影响(图8)。

实施例16：长期测试大鼠的血压概况

使用6只(n＝6)大鼠研究化合物(I)的晶型II对全身性血压和心率的影响。给药单次口服灌胃剂量(体积：5mL/kg)。在给药前，记录24小时基线。记录化合物(I)的晶型II的影响24小时。使用3个剂量(0.3、1和3mg/kg)的化合物(I)的晶型II和相应的载体组(每组n＝6)进行Latin方。在Latin方完成后，评估两个额外剂量浓度(0.6和10mg/kg，每组n＝3)。

使用三(3)只大鼠研究MK-801(地佐环平)的影响。在第1天，在给药前记录基线读数24h。在第2天，向大鼠给药0.9％生理盐水的单次静脉(尾静脉)推注剂(体积～0.2mL)且连续监控(通过遥测)至少24h。在第3天，向大鼠给药MK-801的单次静脉(尾静脉)推注剂(200μg/kg；体积～0.2mL)且连续监控(通过遥测)至少24h。

为了探究化合物(I)的晶型II的潜在的机理，化合物(I)的晶型II与不同的药理学上的抑制剂联合给药。在化合物(I)的晶型II(1mg/kg)给药前30分钟给药阿替洛尔(β1阻断剂，1mg/kg，IV推注)和哌唑嗪(α1肾上腺素能受体拮抗剂，200μg/kg，IV推注)。所有的IV剂量由尾静脉穿刺给药人工制约的大鼠。应注意载体对照组也给药。

单次口服灌胃剂量后1小时，化合物(I)的晶型II引起平均动脉压(MAP)剂量依赖性增加(对于0.3、0.6、1、3和10mg/kg分别为4.2±0.9、6.8±1.2、15.7±3.2、17.1±2.3和19.1±2.4mmHg)。在剂量范围内心率(HR)也增加。但是，这些剂量依赖性效应不是显而易见的，因为在3和10mg/kg时观察到明显较大但类似的效应(例如在0.3、0.6和1mg/kg时15±10和10±15，和34±13bpm相比于3和10mg/kg时66±9和71±25bpm)(图9)。因此，化合物(I)的晶型II(当作为单次剂量口服给药时)引起与MK-801(公认的NMDA拮抗剂)一致的(即使在较低程度上明显)血液动力学反应。后者的发现对于化合物(I)的晶型II是出人意料的。

大鼠的活动(由遥测记录)遵循与心率反应类似的趋势。即，3和10mg/kg剂量具有相比于较低剂量更大的影响(在0.3、0.6和1mg/kg时0.012±0.025、0.003±0.033和0.049±0.037相比于在3和10mg/kg时0.174±0.048和0.232±0.057)。值得关注的是，在给药后第一个3.5小时期间血液动力学变化与活动水平线性相关(如遥测记录所估算)；特别地，活动是HR(R²＝0.67)的极好的预报器，且因此化合物(I)的晶型II的兴奋性影响可解释在大鼠中观察到的HR的增加(特别是在较高剂量水平下)。

为了研究化合物(I)的晶型II-药用血液动力学变化的潜在的机理，化合物(I)的晶型II与阿替洛尔(β1AR阻断剂，1mg/kg)或哌唑嗪(α1AR拮抗剂，200μg/kg)联合给药。如预期，阿替洛尔最低程度地影响MAP(-3.3±3.1mmHg)但显著降低HR(-87±11bpm)，而哌唑嗪降低MAP(18±2mmHg)但最低限度地降低(-9±24bpm)。在这些设定中(即β1AR或α1AR阻断)，给药化合物(I)的晶型II(1mg/kg PO)且给药后1h研究血液动力学反应。在β1AR阻断的动物中，当相比于阻断前的值，化合物(I)的晶型II(1mg/kg)对MAP(5.8±4.8mmHg)和HR(-7±17bpm)的影响可忽略；但是，给药后HR的确增加53±17bpm。在α1AR阻断设定中，相比于阻断前的值(即，基线)化合物(I)的晶型II(1mg/kg)增加HR(118±20bpm)但缺乏MAP变化(-3.8±2.0bpm)；但是在给药下MAP的确增加(11.3±2.0mmHg)。

表7.化合物(I)的晶型II单次口服灌胃给药1小时后全身性血液动力学峰值变化；以由受时间控制的基线减去载体的变化的形式呈现

数值是平均值±平均值的标准偏差(n＝6)，*n＝3.

实施例17：人类药代动力学研究

将24个健康、青年男性个体分配至3个顺序治疗组(A、B和C)中的1组。对于每组的8个个体，2个个体接受安慰剂，并向6个个体给药单次上升的口服剂量的化合物(I)的晶型II，在各剂量之间存在最少7天的清除期：组A(0.1、0.2、0.5、1和2mg)；组B(2、4、8和15mg，且4mg与食物一起)；以及组C(15和20mg)。给药前以及给药0.5、1、1.5、2、3、4、6、9、12、18、24、30、48和72h后采集血液样品。使用反相高效液相色谱串联质谱检测(Merck ResearchLaboratories)分析血浆样品的形式II浓度。分析的范围是0.5-500nM(0.180-180ng/mL)。

形式II快速被吸收(图10A)，其中在所有禁食剂量中平均T_max在1h内，而在4-20mg剂量范围内的最终消除半衰期为约12-17h。在研究的剂量范围内，C_max和AUC以与剂量成比例的方式呈现。4mg剂量为在禁食及进食状态下给药。在进食状态下给药使得T_max延迟约1h且C_max减少约56％，但不影响吸收的整体程度(AUC)(图10B，表8)。

表8.在健康男性志愿者中血浆药代动力学参数

数据呈现为平均值(S.D.)

AUC，曲线下面积；C_max，药物最大血浆浓度；T_max,至C_max的时间；t_1/2,半衰期。

实施例18：安全药理学研究

在一连串安全药理学研究中评估化合物(I)的形式II对神经系统、心血管系统及呼吸系统的功能的潜在影响，其中所述研究包括体外人类ether-a-go-go相关基因(humanether-a-go-go-related gene，hERG)分析和在大鼠、狗和猴的体内研究。在大鼠内测试15、75和225mg/kg单剂量对CNS的影响。

在若干研究中测试形式II对心血管系统的影响。在体内和体外测试潜在的QTc影响。形式II体外抑制hERG电流，其IC₅₀为约13μM(4660ng/mL)。在通过增加的速率连续IV输注90分钟给药麻醉狗中，尽管在输注结束时形式II的浓度为约74μM(25450ng/mL)，形式II不影响心率或任何ECG参数，包括QT c间期。向有意识、受椅子制约的猴给药单次口服剂量15、75和150mg/kg且在给药后监测6h，即使在最高剂量水平血浆浓度峰约为15μM(5375ng/mL)，在任何剂量水平上形式II均没有影响心率或ECG。

在狗和猴中测试血液动力学影响。在向麻醉的狗以增加的速率连续IV输注90分钟给药中，形式II不影响心率、动脉血压或股动脉血流量。但是，在向有意识、受椅子制约的猴给药单次口服剂量15、75和150mg/kg且在给药后监测6h，形式II使得收缩压(12–15mm Hg)、舒张压(7–10mm Hg)和平均动脉压(9–12mm Hg)产生非依赖性增加。在这些剂量水平上，C_max分别为约3、9和15μM(1075、3225和5375ng/mL)。

在大鼠和狗中研究呼吸的影响。以15、75和225mg/kg单次口服给药形式II在雄性大鼠中产生呼吸刺激，反映于增加的呼吸速率、潮气量及每分钟通气量的增加和PenH(气道阻力的指标)的减少。在以15mg/kg给药5-6h后呼吸功能恢复至基线，但在以≥75mg/kg给药后6h监测结束时仍在变化。在向麻醉的狗以3mg/kg剂量IV输注5分钟且间隔监控60分钟中，形式II不影响肺内压、峰值呼气流、气道阻力、肺顺应性、潮气量、呼吸速率或血液pH、pCO₂或pO₂。在输注结束时形式II的血浆浓度约为30μM(10600ng/mL)，而在输注后60分钟约为4μM(1250ng/mL)。

实施例19：大鼠中的神经毒性

向4组24只Sprague-Dawley鼠(12/性别)以10mL/kg的剂量经口服灌胃给药单次剂量的载体(0.5％甲基纤维素[MC]和0.02％月桂基硫酸钠[SLS]于去离子水中)或10、30或100mg/kg的化合物(I)的晶型II。以2mL/kg的剂量体积通过皮下注射向另外一组12只雄性大鼠单次给药10mg/kg的(5S,10R)-(+)-5-甲基-10,11-二氢-5H-二苯并-[a,d]环庚烯-5,10-亚胺马来酸盐；NBF，中性缓冲福尔马林(“MK-801”，NMDA受体的非竞争性拮抗剂；阳性对照)。在各组中每一性别的6只大鼠在给药后4-6h杀死并进行尸体解剖，而各组剩余的大鼠在给药3天后(第4天)杀死并进行尸体解剖。存活时的观测结果和测量包括体重和临床观察。杀死时麻醉大鼠且灌注固定。在尸体解剖时，采集脑用于组织病理学评估。

以预定尸体解剖间隔(给药后4-6h或第4天)杀死在形式II和MK-801评定组中的动物。所有的动物用异氟醚/氧气混合物麻醉，然后通过左心室用含肝素化0.001％亚硝酸钠的生理盐水灌注。生理盐水冲洗后用10％中性缓冲的福尔马林(NBF)灌注。采集脑，称重且储存于10％NBF中。

将脑切成2mm的冠状切片以在各动物的3个区块产生多个切片。以下脑区域染色：新皮质、旧皮质、基底核、边缘系统、丘脑/下丘脑、中脑区、小脑、脑桥区和延髓。将给药后4-6小时处死的和给药后3天处死的所有动物的所有脑切片包埋在石蜡中，用5μm切片，用苏木精和伊红染色且用显微镜检查。对于在第4天(给药后3天)处死的大鼠，来自区域1和2的连续切片用Fluoro-Jade B(增加评估脑神经元退化灵敏性的染色剂)和神经胶质原纤维酸性蛋白(用于星型神经胶质细胞反应的染色剂)染色且用显微镜检查。另外3组大鼠(每组4只雄性和3只磁性)以同样的方式用形式II口服给药，且获得24h连续血液样品且分析化合物(I)的血浆浓度和评估全身性暴露。

在任何剂量水平或时间点没有与形式II相关的形态学影响。在大鼠中，形式II的单次剂量(10、30和100mg/kg)在所有检查的脑区中没有产生液泡形成或坏死。在这些剂量中，平均C_max分别约为4、14和26μM(1433、5018和9319ng/mL)。相反地，所有给药MK-801(10mg/kg)的动物在扣带回神经元中具有液泡形成和坏死，与之前的报道一致(Fix etal.，Brain Res，696:194-204(1995))。在4-6h时间点，用MK-801处理的动物(6只雄性；第5组)在大脑皮质扣带回区的皮质层3和4中均具有许多液泡的神经元。MK-801处理的雄性的外观与之前公开的描述完全一致。受影响的神经元的特征在于许多紧密堆积的略微不同的填充细胞质的液泡。在4-6h时间点，载体对照和形式II处理的动物在扣带回的任何神经元中均没有任何细胞质液泡的迹象。

在第4天，所有用MK-801(6只雄性；第5组)处理的动物在大脑皮质扣带回区的皮质层3和4中均具有坏死的神经元。MK-801处理的雄性的外观与之前公开的描述完全一致(Fixet al.，1996)。使用Fluoro-Jade B染色，在所有的第4天经MK-801处理的动物中容易目测到坏死的神经元。在MK-801处理的动物中，神经胶质原纤维酸性蛋白染色(免疫组织化学)的切片显示在扣带回区显示非常轻微的染色增加。在第4天，载体对照和形式II处理的动物在扣带回中均没有任何坏死神经元的迹象。

实施例20：在健康个体中的药效学影响

在患者研究中进行随机、双盲、安慰剂对照、平行剂量组(分组)以研究在健康个体中化合物(I)的晶型II的药效学(PD)影响。

研究设计为三部分的顺序研究。研究的顺序性确保在健康人群和比较人群(中年及老年)中进行到更高剂量(部分2和3)之前在青年、健康的人群中首先研究剂量范围(部分1)。出于该研究的目的，“青年”指个体为18-45岁，“中年”指个体为46-64岁，而“老年”指个体为65岁以上。

部分1:

在长达21天的筛选期间(第-23天至-3天)，将16名健康的男性和女性个体随机分配至表9所示的剂量组。

表9.部分1平行剂量组(第1-7天给药)

*随机分组为分层的，使得三名男性个体和3名女性个体随机分至各剂量组。

注：在第-1天(匹配时间的基线天)，所有的个体在进食状态接受安慰剂。

各平行剂量组为性别平衡的(约相等数目的男性和女性)。随机分组的个体在第1-8天居于指定的地点。在第-1天，个体在进食状态接受安慰剂片剂且进行动态血压监测(ABPM)和安全性评估以建立匹配时间的基线。在第1-7天，个体在进食状态接受研究药物且进行安全的药代动力学(PK)的和药效学(PD)的评估。在第8-11天，进行随访PK和安全性评估。

安全性评估包括临床医师专用的分裂状态量表(CADSS)，哥伦比亚-自杀严重程度等级量表(C-SSRS)，伴随用药，不良事件(AE)和生命迹象评估。在PK评估中，获取和分析血液样品以确定PK参数例如C_max、T_max、AUC_0-24、和t_1/2。PD评估包括ABPM、血浆脑源性神经营养因子(BDNF)测量和心境状态量表(POMS)评估。由于BDNF水平已显示出与重度抑郁症(MDD)的严重性相关且对抗抑郁剂治疗的应答而改变，在此研究中测量BDNF水平作为药物活性的生物标志物。

部分1安全性回顾：

在完成部分1后，回顾第-1天至第8天的安全性数据。做出进行部分2或可替代的给药方案(例如通过改变剂量水平、给药间隔和进食状态的任意组合)的决定。

部分2：

在长达21天的筛选期间(第-23天至第-3天)，将16名个体(8名健康、青年男性和女性个体，以及8名健康中年男性和女性个体)随机分配至剂量组，如表10所示。

表10.部分2平行剂量组(第1-7天给药)

*随机分组为分层的，使得相等数目的男性和女性个体随机分至各剂量组。**给药方案可基于部分1的安全性回顾的结果改变。方案可通过改变剂量水平、给药间隔或进食状态的任意组合改变；或重复剂量水平改变。

计划的剂量水平可基于部分1的安全性回顾的结果改变。在青年个体中最大剂量是16mg且在中年个体中最大剂量是12mg。

如在部分1中，在第-1天，随机分组的个体在进食状态接受安慰剂给药且进行匹配时间的基线ABPM和安全性评估，随后在第8-11天，进行每日一次给药的药物研究且进行药代动力学(PK)的和药效学(PD)的评估，且在第8-11天，进行随访PK和安全性评估。各平行剂量组为性别平衡的(约相等数目的男性和女性)。

部分2安全性回顾:

在完成部分2后，回顾从第-1天至第8天的安全性数据。做出进行部分3和可替代的给药方案的决定。

部分3：

在长达21天的筛选期间(第-23天至第-3天)，将16名个体(8名健康、青年男性和女性个体，以及8名健康老年男性和女性个体)随机分配至剂量组，如表11所示。

表11.Part 3平行剂量组(第1-7天给药)

*随机分组为分层的，使得相等数目的男性和女性个体随机分至各剂量组。**给药方案可基于部分2的安全性回顾的结果改变。方案可通过改变剂量水平、给药间隔或进食状态的任意组合改变；或重复剂量水平改变。

计划的剂量水平可基于部分2的安全性回顾的结果改变。在青年个体中最大剂量是20mg且在中年个体中最大剂量是16mg。

如在部分1和部分2中，在第-1天，随机分组的个体在进食状态接受安慰剂给药且进行匹配时间的基线ABPM和安全性评估，随后在第1-7天，进行每日一次给药的药物研究且进行药代动力学(PK)的和药效学(PD)的评估，然后在第8-11天，进行随访PK和安全性评估。各平行剂量组为性别平衡的(约相等数目的男性和女性)。

第3部分完成后，回顾从第-1天至第8天的安全性数据。做出是否增加另外的给药组以探究可替代的给药方案或重复方案的决定。

随后对所有的数据分析PD效果、PK概况、安全性和耐受性以及年龄和性别对PK、血压和其他安全参数如AE的影响。

在重复化合物(I)的晶型II的日剂量后，在研究第5天达到稳态给药前的化合物(I)的晶型II的血浆浓度。化合物(I)的晶型II为经口可生物利用的，其平均Tmax值在第1天为2.00-3.00小时，且在给药第7天为1.50-3.00小时。在第1天和第7天，Cmax和AUC值在化合物(I)的晶型II的8-20mg研究剂量范围内以约与剂量成比例的方式增加。在第7天化合物(I)的晶型II的平均血浆浓度在中年和老年小组中分别在给药后2-24小时比青年小组高约20-40％，而女性个体在给药后2-24小时比于男性个体高约20％。

在第7天，平均t1/2为约17-25小时，平均表观口服清除率值为约3-4L/h，且平均表观分布体积为约83-116L。在7天化合物(I)的晶型II的每日给药下观察适度积累，因为观察到的积累指数平均为约1.6-1.9且稳态积累指数平均为1.1。平均第7天比第1天的Cmax的比率为1.3-1.4。

与青年个体相比，在中年和老年个体中观察到PK参数的临床适度的差异，且相比于男性个体，在女性个体中观察到PK参数的临床适度的差异。在第7天，相比于青年组，在中年和老年小组平均Cmax值高出约30％。在第1天，相比于青年组，在中年和老年小组平均AUC值高出约25％-37％且相比于男性个体，女性个体的平均AUC值高出约6％-29％。在第7天，相比于青年组，老年组的平均AUC值高出约48％-74％，且相比于男性个体，女性个体的平均AUC值高出约19％-38％。在第7天，相比于青年组，在中年和老年组中表观口服清除率值分别低约平均18％和30％，且相比于男性个体，女性个体的表观口腔清除率值低约平均15％。在第7天，在中年和老年组中平均t1/2约为20-28小时且相比于青年组，分别高出约27％和38％。在第7天，女性个体的平均t1/2约为21-24小时，且相比于男性个体，女性个体的平均t1/2约高出16％。

表12.青年个体的化合物(I)的晶型II依据剂量和天数的血浆药代动力学参数的总结

表13.在12mg剂量下青年、中年和老年个体的化合物(I)的晶型II依据剂量和天数的血浆药代动力学参数的总结

表14.汇集的化合物(I)的晶型II的所有剂量的依据性别和天数的化合物(I)的晶型II的血浆药代动力学参数的总结

化合物(I)的晶型II对动脉血压的影响如下。简而言之，与安慰剂相比，在化合物(I)的晶型II的所有剂量下，平均24小时和日间收缩压(SBP)和舒张压(DBP)升高，在第4天观察到最大增加，除了20mg剂量的化合物(I)的晶型II在第4天-第7天进一步升高以外。化合物(I)的晶型II对平均夜间SBP和DBP的影响较小且较少一致地观察到。化合物(I)的晶型II对血压的影响出现相似且与年龄小组无关。在第7天，化合物(I)的晶型II对SBP的影响在女性中相比于男性呈现出略微更明显。但是整体上化合物(I)的晶型II在男性和女性中表现出类似的对BP的影响。

在本研究中血浆BDNF测量存在高度变化性。然而，与安慰剂组相比，在16和20mg两个较高剂量下似乎存在平均7天BDNF值增加的趋势。

实施例21：在患有MDD和自杀意念的个体中的抗抑郁效果

进行随机、双盲、安慰剂对照、顺序平行研究以评估化合物(I)的晶型II在治疗7天后的抗抑郁效果。

在长达14天的筛选期间，约135名个体(男性和女性，18-70岁，尽管目前用SSRI或SNRI稳定的治疗，仍患有MMD且经历严重的抑郁发作，最近具有主动自杀意念)以如表15所示的不等分布随机分配至三个治疗顺序中的一个。

表15.治疗顺序

随机个体参加两个治疗期(第1期和第2期)且随访安全性评估。在第1期，个体在第0天接受其研究药物的第一次给药且进行安全性、PK和功效评估。在第4天(±1天)，个体进行给药前安全性、PK和效力评估，随后为给药程序以及给药后安全性和功效评估。在第7天(±1天)，个体进行安全性、PK和效力评估，从而完成第1期。在完成第1期研究评估时，个体在同一天(第7天±1天)接受其第2期的第一次研究药物给药且进行给药后安全性和效力评估。在第11、14、21和28天(±1天)，个体进行给药前安全性、PK和效力评估，随后进行给药程序以及给药后安全性和效力评估。在第35天(±1天)，个体进行安全性、PK和效力评估，从而结束第2期。在第49天(±2天)，个体进行随访安全性评估。

效力基于以下评估：

●MDD：HAM-D17，临床总体印象-严重程度(CGI-S)以及临床总体印象-改进(CGI-I)；

●自杀倾向：贝克自杀意念量表(BSSI)；

●生物标志物：血浆BDNF；及

●基因型：BDNF多形现象。

安全性基于以下评估：

●生命迹象(半伏卧血压、心率和口腔体温)；

●在各时间点重复三次进行血压测量(在5分钟内)且确定平均值；

●12导联心电图(ECG)；

●临床实验室测试(血液学、临床化学和尿分析)

●体检

●不良事件(AE)评估

●哥伦比亚-自杀严重程度等级量表(C-SSRS，“基线/筛选”版本和“自上次问诊”版本)

●简明精神病等级量表(BPRS)

●伴随用药评估

评估安全性、PK和效力数据(例如HAM-D17中自基线的变化，HAM-D17应答的持续时间，至符合HAM-D17应答者准则(自基线减少≥50％)的时间、BSSI评分及自基线的变化、BDNF水平及自基线的变化、CGI-S和CGI-I评分、血压及自基线的变化，以及化合物(I)的晶型II的最低浓度)，以评价化合物(I)的晶型II的抗抑郁效果，以及其作为辅助治疗剂对患有MDD的个体的安全性和耐受性、其作为辅助疗法对自杀意念的效果、其对特定抑郁症状的效果、其对血浆BDNF的效果、对加载剂量的需要、在患有MDD的个体中抗抑郁效果开始与血浆BDNF之间的关系、在患有MDD的个体中基线症状与应答速率和量值之间的关系、以及具有BDNF Val66Val的个体相对于具有Val66Met多形现象的个体的抗抑郁效果的差异。

实施例22：在患有MDD的个体中的抗抑郁效果

进行随机、双盲、安慰剂对照、顺序平行研究以评估在单次剂量的治疗后单次剂量的化合物(I)的晶型II的抗抑郁效果。

在长达14天的筛选期间，约60名个体(男性和女性，18-65岁，诊断患有无精神病特征的MDD且用SSRI或SNRI进行稳定的治疗)以如表16所示的不等分布随机分配至三个治疗顺序中的一个。

表16.治疗顺序

随机个体参加两个治疗期(第1期和第2期)且随访安全性和效力评估。在第1期第0天，个体进行基线评估，接受其第1期的研究药物，且进行给药后安全性、PK和效力评估。在第1期的第1天，个体进行额外的安全性、PK和效力评估，在此之后个体重新随机分组至第2期治疗顺序。在第2期的第3天，个体进行基线评估，接受其第2期药物，且进行给药后安全性、PK和效力评估。在第2期的第4天，个体进行额外的安全性、PK和效力评估。在第2期后，在第6天、第10天(±1天)和第17天(±1天)个体进行随访安全性和效力评估。

评估安全性、PK和效力数据以评估单次剂量的化合物(I)的晶型II的抗抑郁效果，以及其作为辅助治疗在患有MDD的个体治疗中的安全性和耐受性，其对特定抑郁症状的影响，在患有MDD的个体中的抗抑郁效果和血浆BDNF的关系，在患有MDD的个体中的基线症状与应答速率及量值之间的关系，以及具有BDNF Val66Val的个体相对于具有Val66Met多形现象的个体的抗抑郁效果的差异。

实施例23：化合物(I)的血液动力学效应的研究

为了研究其全身性血液动力学效应，化合物(I)以0.3、0.6、1、3和10mg/kg的剂量单次口服灌胃给药至6只(n＝6)长期遥测大鼠(在给药前至少7天植入)，且记录全身性血压和心率值(图11)。将血液动力学效应与以0.2mg/kg的剂量静脉给予(在0.9％生理盐水中的)地佐环平(MK-801)相比。在各动物中，给药化合物(I)或载体(0.5％MC/0.02％SLS)的单次口服灌胃剂量(体积：5mL/kg)。在给药前(仅载体)和每次口服给药后进行24小时记录。在另一系列研究中，将化合物(I)(1mg/kg)与α1-肾上腺素能受体拮抗剂哌唑嗪(α1-肾上腺素能受体拮抗剂，200μg/kg，IV推注)联合给药以阐明高血压的潜在机理。分析数据且与基线比较，相对于24小时给药前载体对照校正。

有意识地遥测大鼠的研究证明当口服给药时，化合物(I)使动脉血压短暂升高，且在0.3-1mg/kg之间呈剂量依赖性方式，且此效应在1-10mg/kg时处于平台期。值得关注的是，血压效应的ED50类似于强迫游泳测试的ED50。使用化合物(I)的血液动力学的变化幅度显著低于MK-801(广谱NMDA受体拮抗剂)。此外，化合物(I)在0.3和0.6mg/kg剂量时适当地增加心率且在1-10mg/kg之间按剂量比例增加HR。另外，在运动活动等级与心率变化之间观测到强相关(R²＝0.67)。心率的改变可通过化合物(I)的中枢神经系统兴奋效应部分解释。在大鼠中化合物(I)的运动效应的研究中也观察到相似的剂量依赖性移动效应(在1-10mg/kg之间与剂量成比例)。

如图12所示，在具有或不具有哌唑嗪时，探究化合物(I)的单次剂量对收缩压的影响。该研究显示α1-肾上腺素能阻断提供避免化合物(I)介导的血压升高的保护。α1-肾上腺素受体在引起血管收缩及后负荷增加的血管平滑肌神经支配中起主要作用。交感神经系统的肾上腺素能神经传导素--去甲肾上腺素通过结合至血管中的这些肾上腺素受体而产生其血管效应。给予阻断周边α1-肾上腺素能受体的药剂例如哌唑嗪喹唑啉化合物有效阻断且可用于治疗化合物(I)的血压效应。此外，在以高达20mg的剂量口服给予化合物(I)的人类研究中，初步血液动力学观测结果为收缩和舒张血压的暂时升高，其中最大值和最小值倾向于与TMAX及再分布时间相关。尚未观察到心率增加至临床上或统计学上的任何显著程度。在缺少心率增加的情况下血压的增加表明化合物(I)的血管收缩效应(α₁-肾上腺素能活性)，其中对心肌收缩性或收缩变力性影响有限(几乎没有至没有β₁-肾上腺素能效应)。用α₁-激动剂直接诱导或用增加去甲肾上腺素活性的药物间接诱导动物和人类α₁-肾上腺素能系统的紧张性增加可容易且安全地用阻断血管中α₁-肾上腺素能受体的药剂或α₁-肾上腺素能阻断剂抵消。

实施例24：给药24h后化合物(I)和氯胺酮对大鼠强迫游泳测试中的行为的影响

本研究旨在使用强迫游泳测试评估化合物(I)的形式II在雄性Sprague-Dawley鼠中抗抑郁效应的持续时间。在进行该测试的啮齿动物中临床上有效的抗抑郁化合物减少不动时间且增加游泳。大鼠接受化合物(I)(10mg/kg，p.o.)或氯胺酮(10mg/kg，i.p.)且在24h后进行测试。如图13所示，氯胺酮和化合物(I)的形式II在此行为程序中显著减少不动且增加游泳时间(p<0.05)。数据代表平均值±SEM。与氯胺酮类似，这些数据与化合物(I)的长期持续抗抑郁效应一致。

实施例25：片剂的制备

步骤1：准备碾压

分配和去块：

1.将以下组分分配至单独容器中：

a.微晶纤维素( PH 102)

b.单水合乳糖(310)

c.交联羧甲基纤维素钠(Ac-Di-)

d.硬脂酸镁(植物来源)

e.化合物(I)的晶型II

2.除硬脂酸镁外的所有成分通过20目手工筛去块。硬脂酸镁通过60目手工筛去块。

混合和碾压前润滑

1.将所述成分按以下次序装载于v型混合器中：

a.约一半微晶纤维素

b.化合物(I)的晶型II

c.剩余一半微晶纤维素

d.材料在30rpm下混合8.5分钟

2.随后加入交联羧甲基纤维素钠，接着为单水合乳糖且在30rpm下混合17分钟。

3.将硬脂酸镁加入v-混合器中且另外在30rpm下混合4.5分钟。

4.混合物放于低密度聚乙烯(LDPE)袋中。

步骤2:制备碾压颗粒

碾压：

1.将混合物手动载入料斗中。调整进料器螺杆和碾压机参数以产生期望密度的带状物。在预设时间间隔下记录参数。

2.将该带状物收集于双层LDPE袋中。

3.带状物调和。评估产生带状物密度的带状物厚度、重量和长度。

研磨

通过装配有圆孔(直径，0.039)和圆形叶轮的Comil在800±300rpm下研磨所收集的带状物。

碾压后润滑

将颗粒装载于v型混合器中，随后(加入)去块的硬脂酸镁且在30rpm下混合4.5分钟。

步骤3：制备成品片剂

制片

将所述混合物手工装入料斗中。调节模具填充量和压缩参数(压制速度、填充深度、压缩前厚度设定、压缩厚度设定及强制进料器速度)，以产生具有目标重量和和硬度的片剂。所有的成品片剂收集于双层LDPE袋中。

片剂的组成于表17提供。

表17.片剂的组成

具体实施方案

1.一种化合物，其为基本上纯的化合物(I)的晶型II，

展现以下中至少一项：

(iv)基本上如图3所示的红外光谱图；

(v)在约600MHz下的在CD₃CN中的质子核磁共振谱图基本上如图4所示；

(vi)在约150MHz下的在CD₃CN中的¹³C核磁共振谱图基本上如图5所示；

(vii)基本上如图6所示的热重分析曲线；以及

(viii)基本上如图7所示的差示扫描量热图。

2.如实施方案1的化合物，其中所述化合物显示出包含2θ角为约5.9和8.8度的峰的X射线粉末衍射图，其分别对应于约14.9和10.0埃的晶格面距。

3.实施方案1或2的化合物，其中所述化合物显示出基本上如图1A所示的X-射线粉末衍射图。

4.实施方案2和3之一的化合物，其中所述化合物还显示出以下项的至少一种：基本上如图2示出的紫外吸收光谱图，基本上如图3示出的红外光谱图，基本上如图4示出的质子核磁共振谱图，基本上如图5示出的¹³C核磁共振谱图，基本上如图6示出的热重分析曲线，以及基本上如图7示出的差示扫描量热图。

5.实施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物显示出基本上如图2所示的紫外吸收光谱图。

6.实施方案5的化合物，其中所述紫外吸收光谱图包含在约236±2nm处的最大吸收。

7.实施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物显示出基本上如图3所示的红外光谱图。

8.实施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物显示出基本上如图4所示的质子核磁共振谱图。

9.实施方案8的化合物，其中所述质子核磁共振谱图包含基本上如表1所列的峰。

10.实施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物显示出基本上如图5所示的¹³C核磁共振谱图。

11.实施方案10的化合物，其中所述¹³C核磁共振谱图包含基本上如表2所列的峰。

12.实施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物显示出基本上如图6所示的热重分析曲线。

13.实施方案12的化合物，其中所述热重分析曲线对应于直至约250℃的约0.16％的重量损失。

14.实施方案1-4之一的化合物，其中所述化合物显示出基本上如图7所示的差示扫描量热图。

15.实施方案14的化合物，其中所述差示扫描量热图包含在温度约124℃处的吸热峰。

16.一种药物组合物，其包含有效量的实施方案1-15之一的化合物。

17.实施方案16的药物组合物，其还包含药学上可接受的赋形剂。

18.实施方案16和17之一的药物组合物，其中所述化合物(I)是X90粒度为约10μm或更低的微粒形式。

19.实施方案18的药物组合物，其中X90粒度为约8μm或更低。

20.实施方案18的药物组合物，其中X90粒度为约6μm或更低。

21.实施方案18的药物组合物，其中X90粒度为约5μm或更低。

22.实施方案18的药物组合物，其中X90粒度为约1-10μm之间。

23.实施方案18的药物组合物，其中X90粒度为约2-8μm之间。

24.实施方案18的药物组合物，其中X90粒度为约3-6μm之间。

25.实施方案18的药物组合物，其中X90粒度为约4-5μm之间。

26.实施方案18的药物组合物，其中X90粒度为约4.5μm之间。

27.实施方案16-26之一的药物组合物，其中所述药物组合物配制为口服给药的剂型。

28.实施方案27的药物组合物，其中所述药物组合物是片剂或胶囊的形式。

29.一种治疗对NR2B拮抗剂应答的病症的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的实施方案1-15之一的化合物或实施方案16-28之一的药物组合物。

30.实施方案29的方法，其中所述病症是抑郁症。

31.实施方案29的方法，其中所述病症是重度抑郁症。

32.实施方案29的方法，其中所述病症是难治性重度抑郁症。

33.实施方案29-32之一的方法，其中所述化合物作为血清素再吸收抑制剂或血清素以及去甲肾上腺素再吸收抑制剂的辅剂给药。

34.实施方案29-33之一的方法，其中所述化合物为间歇给药。

35.实施方案29-34之一的方法，其中所述有效量是每日或间歇地为约4-60mg。

36.实施方案29-35之一的方法，其中所述化合物不与食物一起给药。

37.实施方案29-35之一的方法，其中所述化合物与食物一起给药。

38.一种药物组合物，其包含化合物(I)的颗粒，

其具有约10μm或更低的X90粒度。

39.实施方案38的药物组合物，其中所述X90粒度为约8μm或更低。

40.实施方案38的药物组合物，其中所述X90粒度为约6μm或更低。

41.实施方案38的药物组合物，其中所述X90粒度为约5μm或更低。

42.实施方案38的药物组合物，其中所述X90粒度为约1-10μm。

43.实施方案38的药物组合物，其中所述X90粒度为约2-8μm。

44.实施方案38的药物组合物，其中所述X90粒度为约3-6μm。

45.实施方案38的药物组合物，其中所述X90粒度为约4-5μm。

46.实施方案38的药物组合物，其中所述X90粒度为约4.5μm。

47.实施方案38-46之一的药物组合物，其还包含药学上可接受的赋形剂。

48.实施方案38-47之一的药物组合物，其中所述药物组合物配制为口服给药的剂型。

49.实施方案38-47之一的药物组合物，其中所述药物组合物是片剂或胶囊的形式。

50.实施方案38-49之一的药物组合物，其中所述化合物(I)为如实施方案1-15之一所表征的晶型II。

51.一种提高化合物(I)的生物利用度的方法，

其包括向有此需要的患者给药有效量的实施方案38-50之一的药物组合物。

52.实施方案51的方法，其中所述方法与包括给药X90粒度为约10μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。

53.实施方案51的方法，其中所述方法与包括给药X90粒度为约11μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。

54.实施方案51的方法，其中所述方法与包括给药X90粒度为约12μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。

55.实施方案51的方法，其中所述方法与包括给药X90粒度为约13μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。

56.实施方案51的方法，其中所述方法与包括给药X90粒度为约14μm或更高的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。

57.一种治疗对NR2B拮抗剂应答的病症的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的实施方案38-50之一的药物组合物。

58.实施方案57的方法，其中所述病症是抑郁症。

59.实施方案57的方法，其中所述病症是重度抑郁症。

60.实施方案57的方法，其中所述病症是难治性重度抑郁症。

61.实施方案57-60之一的方法，其中所述化合物作为血清素再吸收抑制剂或血清素以及去甲肾上腺素再吸收抑制剂的辅剂给药。

62.一种治疗自杀意念的方法，其包括向患有、疑似患有或已经诊断具有自杀意念的患者给药有效量的化合物(I)

(I)。

63.实施方案62的方法，其中所述患者在给药所述化合物前约4周内已经被诊断具有自杀意念。

64.实施方案62和63之一的方法，其中所述患者还被诊断具有抑郁症。

65.实施方案62和63之一的方法，其中所述患者还被诊断具有重度抑郁症。

66.实施方案62和63之一的方法，其中所述患者还被诊断具有难治性重度抑郁症。

67.实施方案62-66之一的方法，其中所述化合物(I)为如实施方案1-15之一所表征的晶型II。

68.实施方案62-67之一的方法，其中所述化合物(I)为如实施方案38-50之一所表征的药物组合物。

69.实施方案51-68之一的方法，其中所述化合物(I)或药物组合物不与食物一起给药。

70.实施方案51-68之一的方法，其中所述化合物(I)或药物组合物与食物一起给药。

71.一种降低化合物(I)的吸收速率的方法，

其包括向有此需要的患者与食物一起给药有效量的所述化合物(I)，其中所述化合物基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约2小时、或至多给予食物前约30分钟给药。

72.实施方案71的方法，其中所述方法与包括不与食物一起给药化合物(I)的方法相比，导致更低的C_max或更高的T_max。

73.实施方案71和72之一的方法，其中所述化合物(I)基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约90分钟、或至多给予食物前约15分钟给药。

74.实施方案71和72之一的方法，其中所述化合物(I)基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约60分钟、或至多给予食物前约10分钟给药。

75.实施方案71和72之一的方法，其中所述化合物(I)基本上在与给予食物的同时给药。

76.实施方案71-75之一的方法，其中所述化合物口服给药。

77.实施方案71-76之一的方法，其中所述化合物为如实施方案1-15之一所表征的晶型II。

78.实施方案71-77之一的方法，其中所述化合物为如实施方案38-50之一所表征的药物组合物。

79.实施方案51-78之一的方法，其中所述有效量是每日或间歇地约4-60mg。

80.实施方案29-38和51-79之一的方法，还包括监测患者的血压；且若检测到高血压，则向该患者给药抗高血压剂。

81.一种制备化合物(I)的方法

其包括：

(i)使化合物(8)与三氟甲磺酸酐反应生成三氟甲磺酸酯

(ii)使所述三氟甲磺酸酯与氨反应生成化合物(9)

(iii)使化合物(9)与2-氯嘧啶反应生成化合物(I)的晶型I。

82.实施方案81的方法，还包括向化合物(I)的晶型I播以化合物(I)的晶型II的晶种。

83.实施方案81或82的方法，还包括使化合物(6)与羰基二咪唑和化合物(7)反应，以生成化合物(8)。

84.实施方案82的方法，其还包括用氢气经钯使化合物(5)脱苄基以生成化合物(6)。

85.实施方案84的方法，其还包括在氢气气氛下用氯(1,5-环辛二烯)铑的二聚体还原化合物(4)以生成化合物(5)。

86.实施方案81-85之一的方法，还包括纯化化合物(I)。

87.实施方案86的方法，其中所述纯化包含浆化或重结晶。

88.实施方案85的方法，其中所述纯化包括浆化，随后重结晶。

本领域技术人员应清楚上述主题的具体实施方案可指向任何组合形式的一种或多种上下文指出的实施方案。

虽然本发明已出于清楚理解的目的而以说明及示例的方式详细公开，但本领域技术人员容易得知在不背离本发明的真正精神和范畴的情况下进行各种改变且可取代等效物。因此，描述及实例不应视为限制本发明的范围。

本文公开的所有的参考文献、公开、专利和专利申请通过整体援引并入本文。

Claims

1.一种化合物，其为基本上纯的化合物(I)的晶型II，

显示出以下至少一项：

a.通过使用铜Kα辐射获得的X-射线粉末衍射图包含约5.9度的2θ角的峰；

b.基本上如图2所示的使用甲醇作为稀释剂获得的紫外吸收光谱图；

c.基本上如图3所示的红外光谱图；

d.基本上如图6所示的热重分析曲线；以及

e.基本上如图7所示的差示扫描量热图。

2.权利要求1的化合物，其中所述X射线粉末衍射图包含2θ角为约5.9和8.8度的峰。

3.权利要求1-2之一的化合物，其中所述X-射线粉末衍射图基本上如图1A所示。

4.权利要求1-3之一的化合物，其中所述热重分析曲线基本上如图6所示。

5.权利要求1-3之一的化合物，其中所述化合物的热重分析曲线对应于直至约250℃的约0.16％的重量损失。

6.权利要求1-5之一的化合物，其中所述化合物的差示扫描量热图包含在温度约124℃处的吸热峰。

7.权利要求1-5之一的化合物，其中所述化合物的差示扫描量热图基本上如图7所示。

8.权利要求1-7之一的化合物，其具有至少超过95％的纯度。

9.一种药物组合物，其包含有效量的权利要求1-8之一的化合物。

10.权利要求9的药物组合物，其包含基本上由权利要求1-8之一的化合物组成的活性成分。

11.权利要求9的药物组合物，其中所述化合物是X90粒度为10μm或更低的微粒形式。

12.权利要求9的药物组合物，其中所述X90粒度为约3-6μm。

13.权利要求9的药物组合物，其中所述X90粒度为约4.5μm。

14.权利要求9的药物组合物，其中所述药物组合物是片剂或胶囊的形式。

15.一种药物组合物，其包含化合物(I)的颗粒，

其中X90粒度为约10μm或更低。

16.权利要求15的药物组合物，其中所述X90粒度为约3-6μm。

17.权利要求15的药物组合物，其中所述X90为约4.5μm。

18.权利要求15的药物组合物，其中所述药物组合物是片剂或胶囊的形式。

19.权利要求9-18之一的药物组合物，还包含选自以下的辅剂：(1)非载体抗炎剂；(2)COX-2抑制剂；(3)缓激肽B1受体拮抗剂；(4)钠通道阻断剂和拮抗剂；(5)一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂；(6)甘氨酸位点拮抗剂；(7)钾通道开放剂；(8)AMPA/红藻氨酸受体拮抗剂；(9)钙通道拮抗剂；(10)GABA-A受体调节剂(例如GABA-A受体激动剂)；(11)基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂；(12)血栓溶解剂；(13)类阿片药物例如吗啡；(14)嗜中性粒细胞抑制因子(NIF)；(15)L-多巴；(16)卡比多巴；(17)左旋多巴/卡比多巴；(18)多巴胺激动剂如溴麦角环肽、培高利特、普拉克索、罗匹尼罗；(19)抗胆碱药物；(20)金刚烷胺；(21)卡比多巴；(22)儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)抑制剂如恩他卡朋及托卡朋；(23)单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂；(24)阿片制剂激动剂或拮抗剂(25)5HT受体激动剂或拮抗剂；(26)NMDA受体激动剂或拮抗剂；(27)NK1拮抗剂；(28)选择性血清素再吸收抑制剂(SSRI)以及选择性血清素和去甲肾上腺素再吸收抑制剂(SSNRI)；(29)三环抗抑郁药物；(30)去甲肾上腺素调节剂；(31)锂；(32)丙戊酸盐；(33)D-丝氨酸；(34)neurontin(加巴喷丁)；(35)止咳药；(36)抗组胺剂(例如第一代抗组胺剂)；(37)解充血剂；(38)祛痰剂；(39)粘液溶解剂；(40)退热剂；(41)镇痛剂。

20.一种治疗对NR2B拮抗剂应答的病症的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的权利要求1-8之一的化合物或权利要求9-19之一的药物组合物。

21.权利要求20的方法，其中所述病症是抑郁症。

22.权利要求20的方法，其中所述病症是重度抑郁症。

23.权利要求20的方法，其中所述病症是难治性重度抑郁症。

24.权利要求20-23之一的方法，其中所述化合物作为血清素再吸收抑制剂或血清素和去甲肾上腺素再吸收抑制剂的辅剂给药。

25.权利要求20-24之一的方法，其中所述化合物是间歇给药。

26.权利要求20-25之一的方法，其中所述有效量是每日或间歇地约4-60mg。

27.权利要求20-26之一的方法，其中所述化合物不与食物一起给药。

28.权利要求20-26之一的方法，其中所述化合物与食物一起给药。

29.一种治疗自杀意念的方法，其包括向患有、疑似患有或已经诊断具有自杀意念的患者给药有效量的化合物(I)

30.权利要求29的方法，其中所述患者在给药所述化合物前约4周内已经被诊断具有自杀意念。

31.权利要求29-30之一的方法，其中所述患者还被诊断具有抑郁症。

32.权利要求29-30之一的方法，其中所述患者还被诊断具有重度抑郁症。

33.权利要求29-30之一的方法，其中所述患者还被诊断具有难治性重度抑郁症。

34.权利要求29-33之一的方法，其中所述化合物(I)为如权利要求1-8之一所表征的晶型II。

35.权利要求29-33之一的方法，其中所述化合物(I)为如权利要求9-19之一所表征的药物组合物。

36.权利要求29-35之一的方法，其中所述化合物(I)或药物组合物不与食物一起给药。

37.权利要求29-35之一的方法，其中所述化合物(I)或药物组合物与食物一起给药。

38.权利要求20-29之一的方法，其中所述有效量为每日或间歇地约4-60mg。

39.权利要求20-29之一的方法，其中所述有效量为每日或间歇地约4-20mg。

40.一种靶向于在细胞上表达的N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚单位2B(GluN2B)的方法，其包括向有此需要的患者给药有效量的权利要求1-8之一的化合物或权利要求9-19之一的药物组合物。

41.权利要求40的方法，其中所述患者罹患选自以下的病症：帕金森病、神经性疼痛、骨骼及关节疼痛、反覆性运动疼痛、牙痛、癌症疼痛、肌筋膜疼痛、手术期间疼痛、慢性疼痛、痛经以及与心绞痛相关的疼痛、和各种来源的炎性痛、头痛、偏头痛和丛集性头痛、精神分裂症、中风、创伤性脑损伤、阿兹海默症、大脑局部缺血、肌肉萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病、感觉神经性听力损失、耳鸣、青光眼、由癫痫发作或由神经毒素毒化或由葡萄糖和/或氧气对脑的损伤引起的神经损伤、由视通路的神经退化引起的视力损失、下肢不宁综合征、多系统萎缩、非血管性头痛、慢性、亚慢性或急性咳嗽、原发性痛觉过敏、继发性痛觉过敏、原发性异常性痛、继发性异常性痛、或由中枢敏感化引起的其他疼痛、运动障碍、抑郁症、与创伤和压力相关的病症、具有抑郁特征的双相障碍、焦虑症和强迫症以及相关病症。

42.权利要求40的方法，其中所述患者罹患重度抑郁症。

43.权利要求40的方法，其中所述患者罹患难治性重度抑郁症。

44.权利要求40-43的方法，其中所述化合物作为血清素再吸收抑制剂或作为血清素和去甲肾上腺素再吸收抑制剂的辅剂给药。

45.一种提高化合物(I)的生物利用度的方法，

其包括向有此需要的患者给药有效量的权利要求15-17之一的药物组合物。

46.权利要求45的方法，其中所述方法与包括给药X90粒度为大于约10μm的化合物(I)的方法相比产生更大的曲线下面积。

47.一种降低化合物(I)的吸收速率的方法，

其包括与食物一起向有此需要的患者给药有效量的所述化合物(I)，其中所述化合物基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约2小时、或至多给予食物前约30分钟给药。

48.权利要求47的方法，其中所述方法与包括不与食物一起给药化合物(I)的方法相比，导致更低的C_max或更高的T_max。

49.权利要求47的方法，其中所述化合物(I)基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约90分钟、或至多给予食物前约15分钟给药。

50.权利要求47的方法，其中所述化合物(I)基本上在与给予食物的同时、或至多给予食物后约60分钟、或至多给予食物前约10分钟给药。

51.权利要求47的方法，其中所述化合物(I)基本上在与给予食物的同时给药。

52.权利要求47-51之一的方法，其中所述化合物口服给药。

53.权利要求47-51之一的方法，其中所述化合物为如权利要求1-8之一所表征的晶型II。

54.权利要求47-51之一的方法，其中所述化合物为在如权利要求9-19之一所表征的药物组合物中。

55.权利要求47-54之一的方法，其中所述有效量为每日或间歇地约4-60mg。

56.权利要求20-55之一的方法，其还包括向所述患者给药抗高血压剂。

57.权利要求56的方法，其中所述抗高血压剂选自α₁-肾上腺素受体拮抗剂、α₂-肾上腺素受体拮抗剂、钙通道阻断剂、利尿剂、血管收缩素转化酶抑制剂(ACE)抑制剂及其组合。

58.权利要求56-57之一的方法，其中所述抗高血压剂在给药化合物(I)的30分钟内给药。

59.权利要求56-58之一的方法，其中所述抗高血压剂选自多沙唑嗪、哌唑嗪、特拉唑嗪、吲哚拉明、可乐定、胍那苄和胍诺沙苄。

60.权利要求56-59之一的方法，其中所述抗高血压剂的活性成分基本上由α₁-肾上腺素受体拮抗剂组成。

61.权利要求57-60之一的方法，其中所述α₁-肾上腺素受体拮抗剂是哌唑嗪。

62.制备化合物(I)的方法，

其包括：

a.使化合物(8)与三氟甲磺酸酐反应生成三氟甲磺酸酯

b.使所述三氟甲磺酸酯与氨反应生成化合物(9)

c.使化合物(9)与2-氯嘧啶反应生成粗化合物(I)；

d.对所述粗化合物(I)进行纯化步骤，所述步骤包括在高于35℃的温度下将粗化合物(I)溶解于乙酸乙酯中，用庚烷部分或完全替代乙酸乙酯溶剂；以及

e.收集纯化的化合物(I)的形式I。

63.权利要求62的方法，还包括将庚烷加热至高于50℃的温度，并冷却庚烷至室温。

64.制备化合物(I)的形式II的方法，其包括将纯化的化合物(I)的形式I悬浮于水中持续一段足够的时间。

65.制备化合物(I)的形式II的方法，其包括将固态的化合物(I)的形式I加热至高于50℃的温度一段足够的时间。

66.权利要求65的方法，其中所述温度高于约100℃。