CN107064348A - 高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法 - Google Patents

高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，采用高效液相色谱串联质谱检测经过预处理的血清中的上述五种甘氨结合型胆汁酸，先利用高效液相色谱将五种甘氨结合型胆汁酸分离，再利用质谱同位素内标定量法，建立校准曲线，计算上述五种甘氨结合型胆汁酸的含量，所述方法灵敏度高，特异性强且前处理过程较简单，对临床上疾病的诊断和筛查具有重大意义。

Description

高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的 方法
技术领域
本发明涉及胆汁酸的检测领域，尤其涉及高效液相色谱串联质谱检测五种甘氨结合型胆汁酸的方法。
背景技术
甘氨结合型胆汁酸是指胆汁酸以酰胺键(简称肽键)与甘氨酸结合，成为甘氨结合型胆汁酸，包括甘氨胆酸(glycocholic acid，GCA)、甘氨鹅脱氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid，GCDCA)、甘氨石胆酸(glycolithocholic acid，GLCA)、甘氨脱氧胆酸(glycodeoxycholic acid，GDCA)、甘氨熊去氧胆酸(glycoursodeoxycholicacid，GUDCA)。甘氨结合型胆汁酸易溶于水，这是由于其分子中既含有亲水的羟基和羧基，又含有疏水的甲基，且这两种性质不同的基团又完全排列在环戊烷多氢菲核的两侧，使分子分为“亲水”和“疏水”两个侧面。故甘氨结合型胆汁酸具有强乳化剂功能，使肠腔内油脂乳化成微粒，以增加油脂与消化液中脂肪酶(lipase)接触面积而便于脂类消化吸收。甘氨结合型胆汁酸在人体中除了作为乳糜微粒的主要成分外，它还是体内胆固醇消除的一个重要途径，肝脏中新陈代谢的产物可随胆汁排出。甘氨结合型胆汁酸参与脂肪循环，和磷脂形成微粒，并形成乳化液帮助脂肪酸和脂溶性维生素的肠道吸收。尽管甘氨结合型胆汁酸在于肝肠循环，体循环和尿液中含量很低，然而当出现肝胆疾病而致使胆汁酸排泄障碍时，肝内、血液以及尿液中含量显著升高。甘氨结合型胆汁酸能明显诱导肝细胞的凋亡，引起肝细胞的脂质过氧化，激活磷脂酶A2(Spla2)和细胞内钙离子的增加。有研究表明在肝癌中甘氨结合型胆汁酸明显高于正常组织，因此检测检测每一种甘氨结合型胆汁酸的体内水平对于肝胆和肠道疾病的筛查、诊断和鉴别诊断具有重要价值。
分离和定量甘氨结合型胆汁酸及其结合物是一项挑战，因为这类化合物的生化特征各异，有的还存在同分异构体，且它们在人体中的含量较低。目前常规检测方法是循环酶法测定生理溶液中的胆汁酸，虽然操作较为简单，然而该方法只能检测总胆汁酸含量，无法做到测定不同甘氨结合型胆汁酸的差异；气相色谱和气质联用在检测胆汁酸时需要复杂的样品制备，衍生化，需将甘氨结合型胆汁酸水解成非结合型才能进行分析；高效液相色谱串联紫外检测器在检测复杂生物基质中的甘氨结合型胆汁酸会导致灵敏度和特异性不足；荧光检测法则需要复杂的衍生化技术而不能推广。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，甘氨结合型胆汁酸检测操作复杂，灵敏度和特异性不足的问题。
本发明的目的采用以下技术方案实现：
高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，包括如下步骤：
(1)标准品的制备：将甘氨结合型胆汁酸标准品用乙腈稀释到若干个不同浓度备用，每个浓度的标准品中加入等量的含有已知浓度内标的乙腈溶液，所述甘氨结合型胆汁酸乙腈溶液的浓度范围为2nmol/L～6μmol/L，所述内标为氘代胆酸，氘代脱氧胆酸，氘代熊脱氧胆酸，高速离心后取上清液，上清液利用离心浓缩冷冻系统冻干后，加入一定量的含有乙腈的水溶液后离心，取上清液于96孔板用于高效液相色谱串联质谱上样分析；
(2)高效液相色谱分离：利用超高压液相色谱以及相应的流动相，在反向C18分析柱上对五种甘氨结合型胆汁酸进行分离；
(3)串联质谱检测：色谱上分离后的五种甘氨结合型胆汁酸进入到质谱进行检测，利用三重四级杆质谱中的多重反应监控模式特异性地检测五种甘氨结合型胆汁酸，根据信号噪音比计算得到定量检测限与鉴定检测限，根据比值以及已知标准品和内标浓度值绘制标准曲线图并得到定量校正方程；
(4)血清中甘氨结合型胆汁酸的检测：取血清样本，加入含内标的乙腈溶液进行蛋白沉淀，充分沉淀后第一次离心，移取血清上清液利用离心浓缩冷冻系统冻干后，加入一定量的含有乙腈的水溶液后离心，取上清液于96孔板上备用，用于高效液相色谱串联质谱上样分析；
高效液相色谱串联质谱上样分析步骤同步骤(2)、步骤(3)，液相色谱质谱检测得到甘氨结合型胆汁酸与内标的比值，将比值代入到定量校正方程，计算得到血清中甘氨结合型胆汁酸的含量。
优选的，所述步骤(1)中含已知浓度内标的乙腈溶液浓度分别为：内标氘代胆酸的浓度为76nmol/L，内标氘代脱氧胆酸的浓度为104nmol/L，内标氘代熊脱氧胆酸的浓度为126nmol/L。
优选的，所述步骤(2)中高效液相色谱分离条件为：色谱柱：Waters ACQUITY UPLCC18 Column:pore sizeparticle size 1.7μm,2.1mm×50mm；cat.#186002350IVD；色谱柱柱温：45℃；进样量：10μL；流速：0.4mL/min；流动相组成：A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸-乙腈：甲醇＝3：1。
优选的，所述步骤(3)质谱检测条件中，每一种物质的检测参数均先用标准品优化，然后利用三重四级杆质谱中的多重反应监控模式以及优化好的特定质谱参数特异性地检测五种甘氨结合型胆汁酸，具体的，所述质谱检测参数为：电喷雾针电压：3.0kV，去溶剂气流速：800L/h，去溶剂气温度：400℃，锥孔气流速：50L/h，检测为负离子模式，多重反应监控。
优选的，所述步骤(1)中两次离心条件为：低温离心机在18000g离心力4℃下离心5min。
优选的，所述步骤(4)中血清与含内标乙腈溶液的体积比为1:3。
优选的，所述步骤(4)中血清为人或动物血清。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明的高效液相色谱串联质谱检测五种甘氨结合型胆汁酸的方法，灵敏度高，特异性强且前处理过程较简单，短时间内可完成五种甘氨结合型胆汁酸的分离和检测，检测效率高，可用于临床上血清中甘氨结合型胆汁酸的定量分析，对临床上疾病的诊断和筛查具有重大意义。
附图说明
图1、本发明的检测方法的流程示意图；
图2、甘氨结合型胆汁酸及内标色谱洗脱出峰的绝对保留时间；
图3、甘氨胆酸标准曲线；
图4、甘氨石胆酸标准曲线；
图5、甘氨脱氧胆酸标准曲线；
图6、甘氨鹅脱氧胆酸标准曲线；
图7、甘氨熊脱氧胆酸标准曲线。
具体实施方式
下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述：
为了使本领域技术人员可以更好地理解本发明，从而对本发明的保护范围作出明确的限定；下面结合具体实施方式对本发明作出进一步详细的说明。
甘氨石胆酸标准品采购于Toronto Research Chemicals公司，其余4种甘氨结合型胆汁酸(甘氨胆酸，甘氨脱氧胆酸，甘氨鹅脱氧胆酸，甘氨熊脱氧胆酸)标准品以及同位素标记的内标(氘代胆酸，氘代脱氧胆酸，氘代熊脱氧胆酸)均采购于Sigma Aldrich公司。标准品和内标首先用乙腈进行溶解，然后保存在-80℃，需要进行实际样品检测时，再利用乙腈将内标氘代胆酸稀释浓度为76nmol/L，内标氘代脱氧胆酸稀释浓度为104nmol/L，内标氘代熊脱氧胆酸稀释浓度为126nmol/L，作为工作液。
1.标准品制备：分别取0.1mL 9个不同浓度的甘氨结合型胆汁酸乙腈溶液到1.5mLEP管中，再分别加入0.3mL低温保存的含内标氘代胆酸，氘代脱氧胆酸，氘代熊脱氧胆酸乙腈溶液，用旋涡混合器充分混合后，用1mL的移液枪转移0.3mL含内标氘代的胆汁酸乙腈溶液到另外一个1.5mL EP管，然后用离心浓缩冷冻系统冻干；
冻干后加入一定量的含有乙腈的水溶液后，混合组分使用低温离心机在18000g离心力4℃下离心5min，取上清液于96孔板用于液相色谱串联质谱上样分析。
2.液相色谱分离：利用超高压液相色谱以及相应的流动相，在反向C18分析柱上对样品上清液中甘氨结合型胆汁酸进行色谱洗脱分离，通过控制洗脱条件，分离出5种甘氨结合型胆汁酸；
液相色谱条件为：色谱柱：Waters ACQUITY UPLCC18 Column:pore sizeparticle size 1.7μm,2.1mm×50mm；cat.#186002350IVD；色谱柱柱温：45℃；进样量：10μL；流速：0.4mL/min；流动相组成：A相为0.1％甲酸水溶液，即甲酸在混合液中的体积占比为0.1％，B相为0.1％甲酸-乙腈：甲醇＝3：1，即甲酸和乙腈的混合液与甲醇的体积比为3:1,其中甲酸在甲酸和乙腈的混合液中体积占比为0.1％。
洗脱梯度如下表1或表2所示：
表1
表2
序号 时间(min) 流速(mL/min) A％ B％ 曲线值
1 - 0.4 65 35 -
2 2.0 0.4 57 43 6
3 3.5 0.4 54 46 6
4 5.0 0.4 41 59 6
5 7.0 0.4 41 59 6
6 8.7 0.4 34 66 6
7 10.7 0.4 2 98 1
8 11.3 0.4 65 35 1
3.质谱检测并制标准曲线：液相色谱上分离出的5种甘氨结合型胆汁酸进入到三重四级杆质谱进行检测，利用三重四级杆质谱中的多重反应监控模式特异性地检测5种甘氨结合型胆汁酸的含量，并画制标准曲线图；
根据不同的色谱洗脱时间，设置不同的检测窗口以及参数，每一种物质的检测参数均先用标准品优化，然后利用三重四级杆质谱中的多重反应监控模式以及优化好的特定质谱参数特异性地检测五种甘氨结合型胆汁酸；
质谱为Waters Xevo TQD IVD(Waters,Milford,MA)；质谱检测条件如下：电喷雾针电压：3.0kV，去溶剂气流速：800L/h，去溶剂气温度：400℃，锥孔气流速：50L/h，检测为负离子模式，多重反应监控，每个待测物的特定反应离子对、驻留时间、锥孔电压、碰撞能量等如下表所示(不同类型仪器，碰撞能量、锥孔电压值有所不同，需要独立优化)：
表3
多重反应监控通过两次筛选，即第一个四级杆进行特定母离子筛选，第二个四级杆进行母离子碎裂产生子离子，第三个四级杆进行特定子离子筛选，具有非常好的检测特异性，可以通过选择反应监控检测到的离子流，以及对应的保留时间，来确定甘氨结合型胆汁酸的检测，再利用添加已知量的氘代胆酸内标，氘代脱氧胆酸内标，氘代熊脱氧胆酸内标进行定量。
如图2所示，样品通过超高压液相色谱分离后，不同的甘氨结合型胆汁酸在不同洗脱时间出峰，并且被质谱选择反应监控模式检测到，从先到后检测到的物质分别为：甘氨熊脱氧胆酸，甘氨胆酸，氘代熊脱氧胆酸，氘代胆酸，甘氨鹅脱氧胆酸，甘氨脱氧胆酸，氘代脱氧胆酸，甘氨石胆酸，氘代胆酸保留时间为3.87min，氘代脱氧胆酸保留时间为5.76min，氘代熊脱氧胆酸保留时间为3.58min，甘氨胆酸保留时间为2.47min，甘氨石胆酸保留时间为5.86min，甘氨脱氧胆酸保留时间为4.51min，甘氨鹅脱氧胆酸保留时间为4.13min，甘氨熊脱氧胆酸保留时间为2.15min。
标准曲线图见图3至图7；检测限定义为信噪比>3，定量限定义为信噪比>10，保留时间为色谱洗脱出峰的绝对保留时间，所有检测物质的相关系数R2均>0.99，每种甘氨结合型胆汁酸的保留时间，检出限，定量限，线性范围以及定量校正方程分别如图中所示；通过三日的精密度测试，包括低、中、高三个浓度，日内日间精密度RSD均小于15％，如表5所示，表明检测结果准确，可重复。
五种甘氨结合型胆汁酸的保留时间、检测限、定量限、线性范围、线性方程、相关系数如下：
表4
五种甘氨结合型胆汁酸的日内和日间精密度数据如下：
表5
4.血清中甘氨结合型胆汁酸的检测：取0.1mL血清样品到1.5mL EP管中，再加入0.3mL低温保存的含内标氘代胆酸内标，氘代脱氧胆酸内标，氘代熊脱氧胆酸乙腈溶液，用旋涡混合器充分混合后，用1mL的移液枪转移0.3mL含内标氘代胆酸内标，氘代脱氧胆酸内标，氘代熊脱氧胆酸的胆汁酸乙腈溶液到另外一个1.5mL EP管，然后用真空冷冻干燥器冻干；
冻干后加入一定量的含有乙腈的水溶液后，混合组分使用低温离心机在18000g离心力4℃下离心5min，取上清液于96孔板用于液相色谱串联质谱上样分析；
液相色谱串联质谱分析同步骤(2)和(3)，质谱检测得到甘氨结合型胆汁酸与内标的比值，将比值代入到定量校正方程，计算得到血清中甘氨结合型胆汁酸的含量。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (7)

1.高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)标准品的制备：将甘氨结合型胆汁酸标准品用乙腈稀释到若干个不同浓度备用，每个浓度的标准品中加入等量的含有已知浓度内标的乙腈溶液，所述甘氨结合型胆汁酸乙腈溶液的浓度范围为2nmol/L～6μmol/L，所述内标为氘代胆酸，氘代脱氧胆酸，氘代熊脱氧胆酸，高速离心后取上清液，上清液利用离心浓缩冷冻系统冻干后，加入一定量的含有乙腈的水溶液后离心，取上清液于96孔板用于高效液相色谱串联质谱上样分析；
(2)高效液相色谱分离：利用超高压液相色谱以及相应的流动相，在反向C18分析柱上对五种甘氨结合型胆汁酸进行分离；
(3)串联质谱检测：色谱上分离后的五种甘氨结合型胆汁酸进入到质谱进行检测，利用三重四级杆质谱中的多重反应监控模式特异性地检测五种甘氨结合型胆汁酸，根据信号噪音比计算得到定量检测限与鉴定检测限，根据比值以及已知标准品和内标浓度值绘制标准曲线图并得到定量校正方程；
(4)血清中甘氨结合型胆汁酸的检测：取血清样本，加入含内标的乙腈溶液进行蛋白沉淀，充分沉淀后第一次离心，移取血清上清液利用离心浓缩冷冻系统冻干后，加入一定量的含有乙腈的水溶液后离心，取上清液于96孔板上备用，用于高效液相色谱串联质谱上样分析；
高效液相色谱串联质谱上样分析步骤同步骤(2)、步骤(3)，液相色谱质谱检测得到甘氨结合型胆汁酸与内标的比值，将比值代入到定量校正方程，计算得到血清中甘氨结合型胆汁酸的含量。
2.根据权利要求1中所述高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，其特征在于，所述步骤(1)中含已知浓度内标的乙腈溶液浓度分别为：内标氘代胆酸的浓度为76nmol/L，内标氘代脱氧胆酸的浓度为104nmol/L，内标氘代熊脱氧胆酸的浓度为126nmol/L。
3.根据权利要求1中所述高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，其特征在于，所述步骤(2)中高效液相色谱分离条件为：色谱柱：Waters ACQUITYUPLCC18 Column:pore sizeparticle size 1.7μm,2.1mm×50mm；cat.#186002350IVD；色谱柱柱温：45℃；进样量：10μL；流速：0.4mL/min；流动相组成：A相为0.1％甲酸水溶液，B相为0.1％甲酸-乙腈：甲醇＝3：1。
4.根据权利要求1中所述高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，其特征在于，所述步骤(3)质谱检测条件中，每一种甘氨结合型胆汁酸的质谱检测参数均先用标准品优化，然后利用三重四级杆质谱中的多重反应监控模式以及优化好的特定质谱参数特异性地检测五种甘氨结合型胆汁酸，所述质谱检测参数为：电喷雾针电压：电喷雾针电压：3.0kV，去溶剂气流速：800L/h，去溶剂气温度：400℃，锥孔气流速：50L/h，检测为负离子模式，多重反应监控。
5.根据权利要求1中所述高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，其特征在于，所述步骤(1)中两次离心条件为：低温离心机在18000g离心力4℃下离心5min。
6.根据权利要求1中所述高效液相色谱串联质谱检测血清中五种甘氨结合型胆汁酸的方法，其特征在于，所述步骤(4)中血清与含内标乙腈溶液的体积比为1:3。
7.根据权利要求1中所述高效液相色谱串联质谱检测血清中五中甘氨结合型胆汁酸的方法，其特征在于，所述步骤(4)中血清为人或动物血清。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107843671A (zh) * 2017-12-21 2018-03-27 杭州佰勤医疗器械有限公司 一种高通量液相色谱串联质谱的高通量液相色谱串联质谱的检测方法
CN111635447A (zh) * 2020-06-22 2020-09-08 百顺药业有限公司 一种从牛胆汁中提取高纯度结合胆汁酸的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04365500A (ja) * 1991-06-12 1992-12-17 Tokyo Tanabe Co Ltd 胆汁酸の一斉分析法
CN102798672A (zh) * 2011-05-21 2012-11-28 中国科学院大连化学物理研究所 一种检测血中gcdcs和gcdca的试剂盒
JP2015031541A (ja) * 2013-07-31 2015-02-16 株式会社Ｌｓｉメディエンス 胆汁酸同時分析方法
CN104458930A (zh) * 2013-09-25 2015-03-25 武汉生物化学制药有限公司 一种胆酸钠含量的测定方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04365500A (ja) * 1991-06-12 1992-12-17 Tokyo Tanabe Co Ltd 胆汁酸の一斉分析法
CN102798672A (zh) * 2011-05-21 2012-11-28 中国科学院大连化学物理研究所 一种检测血中gcdcs和gcdca的试剂盒
JP2015031541A (ja) * 2013-07-31 2015-02-16 株式会社Ｌｓｉメディエンス 胆汁酸同時分析方法
CN104458930A (zh) * 2013-09-25 2015-03-25 武汉生物化学制药有限公司 一种胆酸钠含量的测定方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SIRKKU E. JÄNTTI 等: "Quantitative profiling of bile acids in blood, adipose tissue,intestine, and gall bladder samples using ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry", 《ANAL BIOANAL CHEM》 *
陈德莹 等: "超高效液相色谱－四极杆-飞行时间质谱对血清中结合型胆汁酸的定性分析研究", 《药物分析杂志》 *
韩建华 等: "超高效液相色谱-串联质谱联用检测血清胆汁酸谱方法的建立及初步临床应用", 《中华检验医学杂志》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107843671A (zh) * 2017-12-21 2018-03-27 杭州佰勤医疗器械有限公司 一种高通量液相色谱串联质谱的高通量液相色谱串联质谱的检测方法
CN111635447A (zh) * 2020-06-22 2020-09-08 百顺药业有限公司 一种从牛胆汁中提取高纯度结合胆汁酸的方法
CN111635447B (zh) * 2020-06-22 2022-07-01 百顺药业有限公司 一种从牛胆汁中提取高纯度结合胆汁酸的方法

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