CN107028897A - 免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合物和质控方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合物和质控方法。本发明胸腺五肽冷冻干燥粉针剂的药物组合物中包含：胸腺五肽、甘露醇、任选的酸碱调节剂，以每10重量份的胸腺五肽计，甘露醇的量为20～100重量份。本发明的胸腺五肽药物组合物可用于治疗慢性病毒性肝炎例如慢性乙型肝炎、用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷病例如儿童先天性免疫缺陷病；此外，本发明的免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合物还可用于治疗某些自身免疫性疾病例如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮，用于治疗各种细胞免疫功能低下的疾病，还可用于治疗肿瘤特别是用于肿瘤的辅助治疗。本发明免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合呈现出如本发明所述的优异技术效果。

Description

免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合物和质控方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种免疫调节剂的药物组合物，特别是涉及一种免疫调节剂种胸腺五肽的药物组合物例如其冷冻干燥粉针剂。本发明的胸腺五肽药物组合物可用于治疗慢性病毒性肝炎例如慢性乙型肝炎、用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷病例如儿童先天性免疫缺陷病；此外，本发明的免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合物还可用于治疗某些自身免疫性疾病例如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮，用于治疗各种细胞免疫功能低下的疾病，还可用于治疗肿瘤特别是用于肿瘤的辅助治疗。本发明免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合呈现出如本发明所述的优异技术效果。

背景技术

胸腺是一级淋巴上皮组织，是机体中枢免疫器官，是T-细胞发育的中心器官，除了提供一个T-细胞发育所需的微环境外，还可产生多种胸腺肽类激素。胸腺激素能诱导各T-细胞亚群的分化和成熟，也能增强各类T-细胞的反应性能，进而调节整个免疫系统的功能。动物胸腺(包括人类)成年后随着年龄的增长逐渐痿缩退化，胸腺激素的分泌量也逐渐降低，至老年时明显萎缩，仅存少量皮质及髓质，故有人认为老年传染病、肿瘤、自身免疫疾病发病率高与胸腺萎缩、胸腺激素活性降低有关。胸腺本身功能不足或依赖胸腺的免疫系统出现明显的原发性或继发性缺陷，而自身的调节又不足以修复时，给予外源性胸腺激素可取得明显的疗效。如果机体免疫系统功能紊乱、低下或亢进，外加胸腺激素可产生明显的双向调节作用。

胸腺五肽(Thymopentin，通常缩写为TP-5)是一种由5个氨基酸残基构成短肽(Arg-Lys-Asp-Val-Tyr)，这种结构与胸腺生成素(Tpymopoietin，TP)的49个氨基酸中的32-36位顺序相同，并已有资料证明TP-5是TP的功能活性片段，TP-5具有TP的相似生理活性。胸腺五肽CAS登记号：69558-55-0，英文化学名：N-(N-(N-(N2-L-Arginyl-L-lysyl)-L-α-aspartyl)-L-valyl)-L-tyrosine，英文化学名：N-(N-(N-(N^α-L-精氨酰-L-赖氨酰)-L-α-天门冬氨酰)-L-缬氨酰)-L-酪氨酸，分子式：C₃₀H₄₉N₉O₉，分子量679.76，其化学结构式如下：

胸腺五肽是一种免疫调节药，其作用之一是诱导T细胞分化。它可选择性地诱导Thy-1-的前胸腺细胞转化为Thy-1+的T细胞。其T细胞分化作用由胞内cAMP水平升高介导。胸腺五肽的另一基本作用是对成熟外周血T细胞的特异受体结合，使胞内cAMP水平上升，从而诱发一系列胞内反应，这也是它免疫调节功能的基础。在正常机体状态下胸腺五肽显现免疫刺激作用，能显著增高脾淋巴细胞的E玫瑰花结形成率及转化率，对免疫应答的初次或再次反应的不同阶段都有增强作用，能增多IgM类型和IgG或IgA类型的抗体形成细胞。胸腺五肽还可增强巨噬细胞的吞噬功能，增加多形核嗜中性白细胞的酶和吞噬功能，升高循环抗体含量，增强红细胞免疫功能。胸腺五肽能活化CD₄和CD₈阳性细胞，使专一的Tc细胞寿命维持更长时间，同时也可活化Th细胞，诱导Ts细胞的功能。胸腺五肽的抗感染力和治疗作用与它增进TC细胞活性相关。在抗感染免疫中适量胸腺五肽可明显增加干扰素的产生，诱导和促进T细胞分化成熟；调节T淋巴细胞亚群比例使CD₄ ⁺/CD₈ ⁺趋于正常；增强巨噬细胞吞噬功能；增强红细胞免疫功能；提高自然杀伤细胞的活力；提高白介素2的产生水平与受体表达水平；增强外周血单核细胞γ干扰素的产生；增强血清中SOD活性。

目前胸腺五肽主要用于治疗肿瘤、免疫功能低下和自身免疫病，并能调节减退的胸腺功能，使机体失衡的免疫功能正常化，促进胸腺细胞的生长和分化。对因年龄和其他因素造成的胸腺萎缩及功能减退具有重要的调节作用。胸腺五肽是一种非常安全的药物，无论皮下注射还是静脉给药，都极少有毒副作用，偶然产生的一些副作用也很轻微，如注射部位瘙痒和红斑，通常无需特殊处理就能自行消退(Sundal E，etal.Arzneimittelforschung，1994：44(10)：1145-1149)。因此胸腺五肽是一种新型安全的免疫调节剂，它的开发为免疫系统类药物使用者增加了一种安全有效的选择。

胸腺五肽对免疫功能的调节有剂量选择性。国内外文献报告、动物试验及人体临床验证表现、每次1mg剂量时、对人体内巨噬细胞的吞噬功能、红细胞的免疫功能以及对外周血T细胞的激活作用最为明显；超越特定的剂量范围并未显示更好的疗效。26例志愿者每次接受1mg剂量注射，10次以后可提高超氧化物歧化酶的活性2-3倍、对超氧负离子自由基有明显清除作用；对红细胞免疫功能提高的有效率为66.7％，红细胞的免疫功能在消除免疫复合物及病原体方面发挥着重要作用，对白细胞的免疫功能亦有激活作用。并可促进B细胞生长因子和免疫球蛋白增加。胸腺五肽能促红细胞C3b受体和红细胞免疫复合物处于较高水平，说明红细胞免疫系统被激活。

胸腺五肽进入体内后迅速被血浆中的氨肽酶降解，t_1/2约30秒，降解产物为无活性的四肽(Lys-Asp-Val-Tyl)和三肽(Lys-Asp-Val)。但单次注射胸腺五肽后很快作用于靶细胞，通过胞内第二信使(CAMP)引起一系列级联反应，使体内效应能维持至数周，故能保证它在治疗中药效的维持。

胸腺五肽(TP-5)作为一种免疫调节剂，于1985年在意大利上市使用。但其所存在的固有稳定性问题而困扰着制药研究行业。

中国专利申请号200510102991.5(双鹭)公开了一种胸腺五肽的水溶液制剂、其制备方法及其在制备用于治疗慢性病毒性肝炎、肿瘤和其它免疫性疾病的药物中的应用。该制剂由胸腺五肽、药用辅料和水组成。其中胸腺五肽的规格可以是0.1-1000mg/支，体积可以是0.1-500ml。辅料可以选用但不仅限于甘露醇或者聚乙二醇等碳水化合物、各种环糊精、甘氨酸等20种人体氨基酸、低分子右旋糖酐、泊洛沙姆、磷酸盐或者醋酸盐等缓冲盐类等等。并具体公开了pH值7.05，由0.5-250mg胸腺五肽、5-50mmol/L磷酸缓冲液、0.5-10mmol/L的乙二胺四乙酸钠(EDTA)、0.5-5％的氯化钠组成的水溶液制剂。稳定性试验(包括影响因素试验、加速试验和长期试验)表明：该水溶液制剂对光和温度都特别敏感，需遮光，并在冷处(2-10℃)保存。

中国专利申请号200810008117.9(地奥)公开了一种由胸腺五肽为活性成分，加入注射用辅料、灭菌注射用水制备而成的注射剂，其中注射用辅料包括保护剂、抗氧化剂、pH调节剂，其用量为：胸腺五肽0.1～200mg/ml、保护剂10～200mg/ml、抗氧化剂0.1～10mg/ml、pH调节剂0.5～20mg/ml。所述的辅料还包括等渗、等张调节剂，防腐剂、局部疼痛减轻剂，其用量为：等渗、等张调节剂0～10mg/ml、防腐剂0～10mg/ml、局部疼痛减轻剂0～10mg/ml。并具体公开了pH值5～7，处方为胸腺五肽0.5～50mg/ml、甘露醇20～150mg/ml、焦亚硫酸钠1～5mg/ml、醋酸-醋酸钠2～15mg/ml的胸腺五肽注射液，此为三种最佳选择辅料，缺一不可，可实现优越的稳定效果。稳定性试验表明：该注射液在2～10℃的低温环境中可24个月保持稳定，在25±2℃的常温下可12个月保持稳定。

中国专利申请号201310168339.8(力思特)公开了一种胸腺五肽的水溶液制剂，它是以胸腺五肽为活性成分原料，加入药用辅料、水混合后制成，其中辅料包括作为pH值调节剂的醋酸-醋酸钠缓冲液、作为保护剂的乙二胺四乙酸钙钠、作为渗透压调节剂的氯化钠，原辅料的用量为：胸腺五肽0.1～100mg/ml、醋酸-醋酸钠缓冲液1.5～1500mg/ml、乙二胺四乙酸钙钠0.1～40mg/ml、氯化钠0.3～300mg/ml。

中国专利申请号201210302762.8(姚云)公开了一种含有胸腺五肽化合物的药物组合物，特别是一种注射制剂，它的处方、应用及其制备方法，每1000支注射剂，由以下配比的组分制成：胸腺五肽0.5-2g；甘露醇50-200g；EDTA钙1-3g；维生素C 1-2g，摩尔比为1：4的柠檬酸氢二钠和柠檬酸三钠缓冲液1000ml；用注射用水定容到2000ml，接着经过冷冻干燥制备成冷冻干燥粉针剂。

中国专利申请号201210295672.0(济生)一种提高免疫力，治疗肝炎、T细胞缺陷病、自身免疫性疾病等疾病的由5种氨基酸组成的胸腺五肽药物的组合物，含有1～10重量份的由5种氨基酸组成的胸腺五肽、0.4-0.6重量份的枸橼酸、1.4-1.6重量份的磷酸氢二钾和48-52重量份的葡萄糖。其制法包括：取枸橼酸、磷酸氢二钾和葡萄糖加入注射用水中溶解；然后加胸腺五肽搅拌溶解并搅拌均匀，加针用活性炭搅拌，过滤脱炭，滤膜过滤除菌得滤液；滤液分装或冷冻干燥即得胸腺五肽药物组合物。

据信胸腺五肽分子链中的Asp的肽键稳定性较差，在水溶液或酸性溶液中易断裂，降解为相应的二肽Val-Tyr和三肽Arg-Lys-Asp。尽管现有技术有以HPLC法考察胸腺五肽的内在质量例如含量和有关物质，但是并未见有在制剂产品中检测相关杂质变化情况的报道。

2015年版《中国药典》收载了胸腺五肽、胸腺五肽注射液(1ml：1mg和1ml：10mg两种规格)、注射用胸腺五肽(冷冻干燥粉针剂，1mg和10mg两种规格)，其中记载胸腺五肽是一种白色或类白色粉末或疏松块状物，在水中极易溶解，在乙醇中微溶，在乙酸乙酯、乙醚或石油醚中不溶。另外还记载其中的胸腺五肽注射液需要在2～8℃保存，而粉针亦需要在凉暗处(即避光并不超过20℃)保存。鉴于上述胸腺五肽在水中极易溶解的性质，活性成分的溶解度大大高于制剂配液的浓度，在制备水针剂或粉针剂时，生产上以及临床上会使用1ml的体积来配制1mg和10mg的配方，如同上述药典记载的注射液那样，以相同大小的玻璃瓶分装不同活性成分量的制剂是有利的，首先节约了生产成本和运输成本，其次可以用同一套生产线和同一种规格的玻璃瓶生产便于生产管理，在临床用药时小玻璃瓶更容易处置。因此如上述药典收载的胸腺五肽注射液的1ml：1mg和1ml：10mg两种规格均用同一种玻璃瓶是非常科学的并且是也是便于生产操作和临床应用的。同样的，对于粉针剂，冷冻干燥前的1ml溶液足以溶解1mg和10mg两种活性成分量，此时采用同相的配液体积以及同样的玻璃瓶来制备两种规格的粉针剂也是在技术上完全可行的。并且，特别是，对于冷冻干燥粉针剂而言，在药物灌装到玻璃瓶中以后需要进入冷冻干燥机中，冷冻干燥机的容量有限，从这个角度讲用小瓶制备10mg粉针也是有利的。从2015年版《中国药典》注射用胸腺五肽粉针剂关于溶液的澄清度与颜色测定时每支加水1ml使溶解进行测定，也表明该10mg规格在冷冻干燥前配制的溶液为1ml也是可行且优选的。即，在制备1mg和10mg两种规格粉针剂时，冷冻干燥前的药液体积均为1ml是可行且优选的。

在中国国家食品药品监督管理总局已经收载了诸多注射用胸腺五肽粉针剂品种，并且包括1mg和10mg两种规格，然而市场上能购买到的主要是1mg规格粉针，10mg规格粉针极少有售，这对于临床用药是非常不利的。因为该产品在使用时，国家食品药品监督管理总局批准的药品说明书明确记载：成人常规剂量：1.皮下注射：(1)原发性免疫缺陷：开始时一日0.5～1mg/kg，连续2周；维持量为一次0.5～1mg/kg，一周2～3次。(2)继发性免疫缺陷：一次50mg，每周3次，连续3～6周。2.肌内注射：(1)原发性免疫缺陷：开始时一日0.5～1mg/kg，连续2周；维持量为一次0.5～1mg/kg，一周2～3次。(2)改善恶性肿瘤患者的免疫功能低下：与放疗、化疗同时使用，一日1次，一次1mg，28日为一疗程。可见，在大多数情况下该产品每次药用都在10mg以上，多次情况下都在30～70mg，如果使用1mg/瓶规格将会给医护人员带来巨大麻烦。

另外，如上所述，从产品的使用方法上讲，皮下注射和肌内注射两种给药途径，也要求制药厂商制备尽可能体积小的药品，例如1mg和10mg两种规格均配制成1ml体积的药品，否则如果照1ml：1mg规格的药物浓度来制备10mg药物即制成10ml：10mg，在临床上皮下注射和肌内注射都是不可接受的。

2015年版《中国药典》收载了注射用胸腺五肽为胸腺五肽加适量甘露醇等赋形剂经冷冻、干燥制成的无菌冻干品，甘露醇是冷冻干燥粉针剂最常、最安全、性能最好的冻干赋形剂，是本领域技术人员在制备冻干粉针剂时最为优选的。

然而，本发明人在开发1mg和10mg两种规格的注射用胸腺五肽粉针剂时，冷冻干燥前的溶液都采用1ml；制成的1mg规格即使经历长期贮藏试验，其按照《中国药典》进行溶液的澄清度与颜色时结果符合规定，但是制备的10mg规格却在长期贮藏过程中呈现溶液的澄清度与颜色不合格现象渐渐变得严重的情况。

因此，提供一种具有良好稳定性例如物理稳定性和/或化学稳定性和/或具有其它优良性能例如在溶液的澄清度与颜色方面具有优异性有的胸腺五肽产品特别是其冷冻干燥粉针剂组合物，仍然是本领域技术人员极其期待的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有良好稳定性例如物理稳定性和/或化学稳定性和/或具有其它优良性能例如在溶液的澄清度与颜色方面具有优异性有的胸腺五肽产品特别是其冷冻干燥粉针剂组合物。本发明人已经出人意料地发现，具有本发明特征的胸腺五肽药物组合物具有优良的药学性能。本发明基于此发现而得以完成。

为此，本发明第一方面提供了一种药物组合物，其中包含：胸腺五肽、甘露醇、任选的酸碱调节剂(亦通常可称为pH调节剂)。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中包含的物料以每10重量份的胸腺五肽计，甘露醇的量为20～100重量份，例如20-75重量份，例如20～50重量份。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其是冷冻干燥粉针剂。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其加水溶解并稀释制成每1ml中含胸腺五肽2mg的溶液，该溶液的pH值为6.5～7.5，该溶液的pH值为6.7～7.3。本发明下文制备例1至制备例9所得全部粉针剂组合物在加水溶解并稀释制成每1ml中含胸腺五肽2mg的溶液时，该溶液的pH值均在6.5～7.5范围内，特别是该溶液的pH值在6.7～7.3范围内。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其在冷冻干燥之前的溶液除包括胸腺五肽、甘露醇以及任选的酸碱调节剂外，还包括注射用水。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其在冷冻干燥之前的溶液除包括胸腺五肽、甘露醇以及任选的酸碱调节剂外，还包括注射用水，所述注射用水的用量是：以每10mg胸腺五肽计使得药液的体积为0.5～1.5ml，例如为1ml。或者，所述注射用水的用量是：以每10mg胸腺五肽计使得药液的体积为0.5～1.5g，例如0.8～1.5g，例如为1g。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中所述的酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、乙酸或其组合。在一个实施方案中，所述的酸碱调节剂是盐酸溶液或者氢氧化钠溶液或者是乙酸，例如1M盐酸溶液或者1M氢氧化钠溶液，例如是冰乙酸。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中包含胸腺五肽10重量份、甘露醇20～100重量份(例如20-75重量份，例如20～50重量份)、和任选的酸碱调节剂。

众所周知，经低温冷冻-真空干燥而获得的冷冻干燥粉针剂(通常简称为冻干粉针剂或冻干粉针)，其是首先将各物料用溶剂溶解(通常而言是用水溶解)，配制成一溶液，然后使该溶液进行低温冷冻，再进行抽真空、升华、干燥而获得的一种基本无水(通常而言水含量低于8％，特别是通常低于5％，特别是通常低于3％)的粉末状物或块状物。因此，该固体冻干物的酸碱度通常通过配制过程调节溶液的pH值来控制；或者可以通过处方调整以使获得的固体冻干物在规定的溶解/稀释程度下控制该溶解/稀释液的pH值来控制(此称为控制固体冻干物的酸碱度)；后一方式通常更为普遍使用，例如药典中所载的诸多冻干粉针剂均以此方式控制制品的酸碱度，而这种方式控制产品的酸碱度通常可以不具体规定酸碱调节剂的处方量，而仅规定终产品的酸碱度即可。同样适用于本发明的是，根据本发明第一方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述任选的酸碱调节剂的量是，使所述冻干粉针剂用注射用水溶解成含活性成分2mg/ml浓度的溶液时该溶液的pH值在6.5～7.5范围内的量，例如该溶液的pH值在6.7～7.3范围内的量。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其基本上是按包括如下的步骤制备的：

(a)称取10重量份的胸腺五肽，使其溶解于50～150重量份(例如80～120重量份，例如约100重量份)的注射用水中；

(b)在30℃保温条件下，按溶液体积加入0.05～0.2％(w/v)(例如0.08～0.15％(w/v))活性炭，搅拌均匀，滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为8.5～9.5(例如pH值为9.0～9.5)，搅拌使吸附15分钟，接着滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为6.5～7.5(例如pH值为6.7～7.3)，搅拌使吸附10分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭；

(c)称取甘露醇20～100重量份(例如20-75重量份，例如20～50重量份)，使其溶解于300～500重量份(例如350～500重量份，例如400～500重量份)的注射用水中，在50～60℃保温条件下，按溶液体积加入0.05～0.2％(w/v)(例如0.08～0.15％(w/v))活性炭，搅拌均匀，保温吸附15分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭，冷却至40℃以下；

(d)合并步骤(b)和步骤(c)所得溶液，补水至物料总重量接近800～1500重量份(例如至物料总重量接近900～1200重量份)，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节该溶液至pH符合规定的范围，补水至物料总重量为800～1500重量份(例如至物料总重量为900～1200重量份，此时由于药液体积未明显变化，可以不再调节pH值)；

(e)将步骤(d)所得药液依次经0.45μm和0.22μm微孔滤膜无菌过滤，灌装，装量含活性成分10mg；冷冻干燥除去水分，压塞，即得到粉针剂形式的组合物。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中步骤(d)所述pH符合规定的范围是指：当将该溶液用注射用水稀释至含活性成分2mg/ml浓度时，所得稀释溶液的pH值在6.5～7.5范围内，例如该稀释溶液的pH值在6.7～7.3范围内，例如该稀释溶液的pH值为7.0。尽管步骤(d)所得溶液的活性成分浓度(约10mg/ml)高于测定pH值的规定浓度(2mg/ml，约是5倍)，但是本领域技术人员可以容易地将步骤(d)溶液稀释5倍并测定所得稀释液的pH值，根据该pH值确定步骤(d)所得溶液需要调节酸碱性的幅度。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中步骤(e)所得经过滤的滤液，其中固形物含量为2～20％(w/v)，优选2～10％(w/v)，再更优选2～8％，例如3～6％。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其中还任选地包含其它药学可接受的赋形剂。所述赋形剂例如但不限于甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘氨酸、右旋糖苷、及其组合。当它们存在时，它们是与甘露醇一起添加的。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为注射液或者为冷冻干燥粉针剂，其照中华人民共和国药典2010年版二部(在本发明中可简称为“中国药典2010版二部”或类似称呼)附录IX C不溶性微粒检查法中的“第一法(光阻法)”检查，每个供试品容器中含≥10μm的微粒数小于6000粒，例如小于3000粒，例如小于1500粒，例如小于1000粒，例如小于500粒，例如小于250粒，例如小于200粒，例如小于150粒，例如小于100粒，例如小于50粒，例如小于25粒。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为注射液或者为冷冻干燥粉针剂，其照中华人民共和国药典2010年版二部(在本发明中可简称为“中国药典2010版二部”或类似称呼)附录IX C不溶性微粒检查法中的“第一法(光阻法)”检查，每个供试品容器中含≥25μm的微粒数小于600粒，例如小于300粒，例如小于150粒，例如小于100粒，例如小于50粒，例如小于25粒。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其为注射液或者为冷冻干燥粉针剂，其照中华人民共和国药典2010年版二部(在本发明中可简称为“中国药典2010版二部”或类似称呼)附录IX C不溶性微粒检查法中的“第一法(光阻法)”检查，每个供试品容器中含≥10μm的微粒数小于6000粒(例如小于3000粒，例如小于1500粒，例如小于1000粒，例如小于500粒，例如小于250粒，例如小于200粒，例如小于150粒，例如小于100粒，例如小于50粒，例如小于25粒)，并且≥25μm的微粒数小于600粒(例如小于300粒，例如小于150粒，例如小于100粒，例如小于50粒，例如小于25粒)。

本发明人已经出人意料地发现，在本发明组合物制备过程中，活性成分预先在偏碱性条件下进行炭吸附处理，获得的组合物在长期贮藏过程中，降解产物增长速度远比未经此方法处理的试样要低。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加2～4重量份的氯化钠。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加1～3重量份的醋酸铵。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加2～4重量份的氯化钠和1～3重量份的醋酸铵。在一个实施方案中，所述氯化钠和醋酸铵二者是与活性成分一起添加的。已经出人意料的发现，仅在上述特定量的氯化钠和醋酸铵组合使用的情况下，此种10mg/瓶(冻干前药液体积约0.8～1.5ml)规格的粉针剂在制成后以及长期贮藏后均呈现优良的溶液的澄清度与颜色方面的性质。

为此，进一步地，本发明第二方面提供了制备本发明第一方面任一实施方案所述的药物组合物的方法，其基本上包括以下步骤：

(a)称取10重量份的胸腺五肽，使其溶解于50～150重量份(例如80～120重量份，例如约100重量份)的注射用水中；

(b)在30℃保温条件下，按溶液体积加入0.05～0.2％(w/v)(例如0.08～0.15％(w/v))活性炭，搅拌均匀，滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为8.5～9.5(例如pH值为9.0～9.5)，搅拌使吸附15分钟，接着滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为6.5～7.5(例如pH值为6.7～7.3)，搅拌使吸附10分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭；

(c)称取甘露醇20～100重量份(例如20-75重量份，例如20～50重量份)，使其溶解于300～500重量份(例如350～500重量份，例如400～500重量份)的注射用水中，在50～60℃保温条件下，按溶液体积加入0.05～0.2％(w/v)(例如0.08～0.15％(w/v))活性炭，搅拌均匀，保温吸附15分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭，冷却至40℃以下；

(d)合并步骤(b)和步骤(c)所得溶液，补水至物料总重量接近800～1500重量份(例如至物料总重量接近900～1200重量份)，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节该溶液至pH符合规定的范围，补水至物料总重量为800～1500重量份(例如至物料总重量为900～1200重量份，此时由于药液体积未明显变化，可以不再调节pH值)；

(e)将步骤(d)所得药液依次经0.45μm和0.22μm微孔滤膜无菌过滤，灌装，装量含活性成分10mg；冷冻干燥除去水分，压塞，即得到粉针剂形式的组合物。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)所述pH符合规定的范围是指：当将该溶液用注射用水稀释至含活性成分2mg/ml浓度时，所得稀释溶液的pH值在6.5～7.5范围内，例如该稀释溶液的pH值在6.7～7.3范围内，例如该稀释溶液的pH值为7.0。尽管步骤(d)所得溶液的活性成分浓度(约10mg/ml)高于测定pH值的规定浓度(2mg/ml，约是5倍)，但是本领域技术人员可以容易地将步骤(d)溶液稀释5倍并测定所得稀释液的pH值，根据该pH值确定步骤(d)所得溶液需要调节酸碱性的幅度。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(e)所得经过滤的滤液，其中固形物含量为2～20％(w/v)，优选2～10％(w/v)，再更优选2～8％，例如3～6％。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的方法，其中所述酸碱调节剂是选自下列的酸碱调节剂的水溶液：氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、乙酸或其组合。这些水溶液的浓度是本领域技术人员公知的，例如1～10％，例如2％～5％。在一个实施方案中，所述的酸碱调节剂是盐酸溶液或者氢氧化钠溶液或者是乙酸，例如1M盐酸溶液或者1M氢氧化钠溶液，例如是冰乙酸。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(e)中除去水分后所得冷冻干燥物料中水分含量低于10％，优选低于8％，优选低于5％，更优选低于3％。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的方法，所述药物组合物以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加2～4重量份的氯化钠。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的方法，所述药物组合物以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加1～3重量份的醋酸铵。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的方法，所述药物组合物以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加2～4重量份的氯化钠和1～3重量份的醋酸铵。在一个实施方案中，所述氯化钠和醋酸铵二者是与活性成分一起添加的。已经出人意料的发现，仅在上述特定量的氯化钠和醋酸铵组合使用的情况下，此种10mg/瓶(冻干前药液体积约1ml)规格的粉针剂在制成后以及长期贮藏后均呈现优良的溶液的澄清度与颜色方面的性质。

进一步的，本发明第三方面提供了对本发明第一方面任一实施方案所述药物组合物或者本发明第一方面任一实施方案所制得的药物组合物进行质量控制的方法，该方法包括对所述药物组合物进行溶液的澄清度与颜色检查的操作，包括如下步骤：取粉针剂，每支加水1ml使溶解，照中国药典2015年版四部通则0902第一法和通则0901第一法依法检查。

在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

在本发明任一方面的一个实施方案中，所述的酸碱调节剂是盐酸溶液或者氢氧化钠溶液，例如1M盐酸溶液或者1M氢氧化钠溶液。

在一个实施方案中，所述的酸碱调节剂是枸橼酸、枸橼酸钠、乙酸、乙酸钠。

在本发明任一方面的一个实施方案中，所述药物组合物，其经历30℃5个月处理后，与10℃5个月处理时相比，二肽增量(％)小于75％，例如小于50％，例如小于40％，例如小于30％，例如小于20％，例如小于15％，例如二肽增量(％)为0～75％，例如为1～50％，例如为1～40％，例如为1～30％。

上述二肽增量(％)是照以下方法测定的：将本发明药物组合物在30℃下放置5个月(称为高温处置)，平行地使同批次的该组合物在10℃下放置处5个月(称为低温处置)；测定在5个月时各样品中的相对于胸腺五肽而言二肽相对含量，对于同一批次的试样，按下式计算其经高温处理后的二肽增量(％)：

以上测定二肽相对含量可以使用本发明下文“降解产物的测定”部分的HPLC法，由于分析方法有多种并且本领域技术人员容易进行改良，而同一样品中的二肽相对含量不会因为分析方法的改变而改变，因此在测定本发明二肽增量(％)时可以不规定其具体的分析测定方法。

根据本发明的药物组合物，其中的活性成分胸腺五肽是具有下式结构的五肽片段化合物：

Arg-Lys-Asp-Val-Tyr

胸腺五肽是胸腺分泌物的一种胸腺生成素Ⅱ的有效部分。胸腺生成素Ⅱ是从胸腺激素中分离出来的单一多肽化合物，由49个氨基酸组成，而其中由5个氨基酸组成的肽链片段，却有着与胸腺生成素II相同的全部生理功能，所以就把这个五肽片段称为胸腺五肽。

胸腺五肽由精氨酸、赖氨酸、天门冬氨酸、缬氨酸、酪氨酸五种氨基酸组成。胸腺五肽的作用之一是诱导T细胞分化。它可选择性地诱导Thy-1-的前胸腺细胞转化为Thy-1+的T细胞。其T细胞分化作用由胞内cAMP水平升高介导。胸腺五肽的另一基本作用是对成熟外周血T细胞的特异受体结合，使胞内cAMP水平上升，从而诱发一系列胞内反应，这也是它免疫调节功能的基础。在正常机体状态下胸腺五肽显现免疫刺激作用，能显著增高脾淋巴细胞的E玫瑰花结形成率及转化率，对免疫应答的初次或再次反应的不同阶段都有增强作用，能增多IgM类型和IgG或IgA类型的抗体形成细胞。胸腺五肽还可增强巨噬细胞的吞噬功能，增加多形核嗜中性白细胞的酶和吞噬功能，升高循环抗体含量，增强红细胞免疫功能。胸腺五肽能活化CD4和CD8阳性细胞，使专一的Tc细胞寿命维持更长时间，同时也可活化Th细胞，诱导Ts细胞的功能。胸腺五肽的抗感染力和治疗作用与它增进TC细胞活性相关。在抗感染免疫中适量胸腺五肽可明显增加干扰素的产生。诱导和促进T细胞分化成熟；调节T淋巴细胞亚群比例使CD4/CD8趋于正常；增强巨噬细胞吞噬功能；增强红细胞免疫功能；提高自然杀伤细胞的活力；提高白介素-2的产生水平与受体表达水平；增强外周血单核细胞γ干扰素的产生；增强血清中SOD活性。

可用于恶性肿瘤病人经放化疗后，免疫功能损伤者；乙型肝炎的治疗；重大外科手术及严重感染；自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎，红斑狼疮；Ⅱ型糖尿病、更年期综合征；年老体衰免疫功能低下者。

目前临床上使用的胸腺五肽的适应症包括：(1)用于18岁以上的慢性乙型肝炎患者。(2)各种原发性或继发性T细胞缺陷病(如儿童先天性免疫缺陷病)。(3)某些自身免疫性疾病(如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮)。(4)各种细胞免疫功能低下的疾病。(5)肿瘤的辅助治疗。其用法用量为：肌肉注射或加入葡萄糖中静脉点滴，每次1mg，每日或隔日一次，一般15日为一个疗程，或者疗程根据病情决定。

根据本发明，术语“赋形剂”亦可称为辅料、填充剂等。本文所用的“药学可接受的赋形剂”指的是可用于配制药物的赋形剂/辅料，其对生物体基本上没有不良影响，并且通常是生物体可耐受的。

冷冻干燥粉针剂的制备过程是本领域技术人员公知的制药工艺，例如如下冻干曲线A和冻干曲线B所示的两种示意性的冻干曲线：

在下文制备冷冻干燥粉针剂中的具体实例中，如未另外特别说明，所用的冻干曲线是冻干曲线A。

冷冻干燥粉针剂中的水分含量是一般在8％以下，优选低于5％，更优选低于3％。水分控制可通过适当调整冷冻干燥程序来控制。该冷冻干燥粉针剂中的水分含量可根据许多已知方法来测定，例如干燥失重法。

在本发明中，为了在必要时调节药液的pH值，可以向组合物中加入适当的pH调节剂。尽管本发明人仅用不具缓冲能力的强酸或强碱溶液例如氢氧化钠水溶液和盐酸水溶液进行调节，然而，本领域技术人员理解，如果用这种不具缓冲能力的pH调节剂处理能满足体系的pH要求，则具有缓冲能力的pH调节剂将更加能够实现本发明目的，因此这些缓冲剂不但能够调节pH值，而且能稳定pH值。因此本发明所列任一pH调节剂或其组合均包括在本发明精神和范围内。

在制备本发明溶液型的注射液时，溶液中的固形物含量无需要作特别的限定。在制备本发明冻干粉针剂时，所配制的药液中，固形物含量为2～20％(w/v)，优选2～15％(w/v)，再更优选2～10％，以利于获得具有良好形态的冻干物。由于冻干粉针剂通常是在管状西林瓶中进行冷冻干燥得到，本领域技术人员理解这种产品在获得成品甚至在供医生使用之前，通常均呈现一个圆饼状，尽管该圆饼的体积理论上讲会比原有水溶液的体积少(稍有缩小)，然而通常这种缩小通常不会缩小到原水溶液体积50％，通常会在原水溶液体积的80-120％之间，更通常在原水溶液体积的90-100％之间，而从终产品西林瓶内可观察到原水溶液液面痕迹(主体饼状物因冻干缩小后残留在瓶壁上的液面痕迹，即便西林瓶中的冻干品因各种原因例如碰撞等原因而呈粉末状，通常仍然可以保留原有的液面痕迹)，据此痕迹亦可估计出该冷冻干燥组合物在冷冻干燥之前的水溶液体积。因此，虽然本发明提供的是一种基本无水的冷冻干燥粉针剂，然而根据该粉针剂仍然可以大致估计出其在配制时，至少在冷冻干燥开始之前的药液体积，根据该估计出的体积以及西林瓶中的干燥终产物的重量，亦可计算到在制备本发明冻干粉针剂时，所配制的药液中的固形物的含量。因此，根据本发明第一方面的冻干粉针剂，其在配制时的药液的固形物含量为2～20％(w/v)，优选2～15％(w/v)，再更优选2～10％。

术语“固形物含量”是指固体物质(例如本发明活性化合物及所用的全部赋形剂，重量/克)加入到溶剂(例如注射用水)中，溶解后得到一个溶液，所述固体物质的重量除以终溶液体积的百分数(重量/体积百分数，例如g/100ml)。例如在本发明中，以10mg活性化合物和总计约50mg的其它固形物加适量注射用水溶液，配制成终体积为1ml的溶液，其固形物含量即约为6％。

在本发明中，符号％，根据其所使用的语境，可以具有本领域技术人员容易理解的含义。例如在提及固形物含量时，该符号表示重量/体积的百分数(w/v，例如g/100ml)；又例如在提及冷冻干燥粉针剂中的“水含量”时，例如水含量在8％以下，此时该符号％表示重量/重量的百分数(w/w，g/100g)。一般而言，在固体分散在液体中时，％表示重量/体积百分数；在固体分散在固体中或者液体分散在固体中(例如粉针的含水量)时，％表示重量/重量百分数。在其它情况下，如无另外说明，符号％表示重量/重量百分数。

在配制本发明的药液时，本领域技术人员公知，可使用例如约0.45um的微孔滤膜进行粗滤过滤，在将药液灌装到西林瓶中之前，可以使用例如约0.22um的微孔滤膜进行精滤过滤以除菌，必要时可以过滤多次。

根据本发明的药物组合物，其为溶液型的注射液。在一个实施方案中，该注射液为单剂量制剂(例如安瓿瓶装的水针剂)，每一单位剂量中活性化合物的量可以例如但不限于约1mg、约2mg、约5mg、约10mg、约25mg、约50mg，为了便于临床应用，每瓶中的活性成分10mg是优选的。

根据本发明的药物组合物，其为冷冻干燥粉针剂。在一个实施方案中，该冷冻干燥粉针剂为单剂量制剂(例如西林瓶装的粉针剂)，每一单位剂量中活性化合物的量可以例如但不限于约1mg、约2mg、约5mg、约10mg、约25mg、约50mg，为了便于临床应用，每瓶中的活性成分10mg是优选的。

根据本发明的作为冷冻干燥粉针剂的药物组合物，其用注射用水复溶，通常而言复溶时间在30秒内，优选在20秒内，更优选在15秒内。

根据本发明的药物组合物(包括冻干粉针剂和注射液)，其用水制成每1ml中含活性化合物0.2mg的溶液并根据中国药典2010年版二部附录VI H项下的方法测定，该溶液的pH值为6.5～7.5。在一个实施方案中，pH值为6.8～7.2。

本发明提供的药物组合物(包括冻干粉针剂和注射液)可以在凉暗处(避光并不超过20℃)保存至少24个月，可以满足一般的冷冻干燥粉针剂/水针剂的贮藏要求。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。以下实施例进一步说明本发明，而不是限制本发明。在下面的例子中，使用的pH调节剂(在本发明中亦即酸碱调节剂)，如无另外说明，是1M氢氧化钠溶液或者1M盐酸溶液，其用量是使制备的水针剂或粉针剂用注射用水溶解和/或稀释成含活性成分2mg/ml的溶液时，达到以下例子中所规定的值或范围。

下文制备步骤为了举例的目的，并基于各举例的可比较性而作了某些具体描述，本领域技术人员根据已有知识完全可以从中概括得到本发明制备冻干粉针剂或水针剂的方法。在下面配液制备各种组合物中，如未另外说明，每批的总配液量为1000ml，但是列明配方和制备过程时时，均以每瓶含活性成分10mg的量阐明，并且以每瓶含活性成分10mg的量分装到玻璃瓶中进行冷冻干燥；当然为了制备每瓶装药量有差异的情形，通过调节向玻璃瓶中灌装不同体积的药液可以得到其它量的规格的粉针剂，例如得到1mg/瓶、2mg/瓶、5mg/瓶、15mg/瓶、20mg/瓶等的规格。

另外，本发明粉针剂的不溶性微粒检查的方法照中国药典2010版二部附录IX C不溶性微粒检查法中的“第一法(光阻法)”进行。

A、考察方法部分

溶液的澄清度与颜色的考察：取粉针剂，每支加水1ml使溶解，依法检查(中国药典2015年版四部通则0902第一法和通则0901第一法)。一般地讲，本发明粉针剂药物组合物要求的结果是：溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准溶液比较，不得更浓。

含量测定方法：

照中国药典2010年版二部附录VD所载高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0)-甲醇(90：10)为流动相，检测波长为275nm；理论板数按胸腺五肽峰计算应不低于1200；

测定法：取供试品10瓶，分别用流动相溶解和/或稀释制成每1ml中约含胸腺五肽0.5mg的溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取经五氧化二磷干燥至恒重的胸腺五肽对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，计算每瓶供试品的平均含量。

有关物质检查方法：

照以上含量测定方法中的高效液相色谱法进行；粉针剂用流动相溶解并稀释成含活性成分5mg/ml的溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，得到浓度相当于供试品溶液浓度1％的对照溶液；取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主峰高为满量程的10～20％；再分别取供试品溶液和对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录至主峰保留时间的3倍；使对照溶液色谱峰中主峰面积与供试品溶液色谱图中杂质峰面积进行比较，计算供试品中杂质相对于主成分的含量百分数。

降解产物的测定：

参照CN1704430A实施例中所记载的方法合成Val-Tyr二肽片段(其在本发明中可称为二肽、二肽片段、或Val-Tyr)；

使用HPLC法测定本发明组合物中Val-Tyr二肽片段的含量，HPLC采用梯度法进行洗脱，流动相A为0.05mol/L磷酸盐缓冲液(其中含0.1％三氟乙酸，pH7.0)，流动相B为乙腈(其中含0.1％三氟乙酸)，梯度程序为：

色谱记录时间45min，其余HPLC条件同含量测定方法和有关物质检查方法所载的HPLC条件；该梯度法可以有效地分离、测定胸腺五肽与上述二肽片段，分离度大于3.0；(本发明人在补充试验中，已经发现使用CN1676162A(中国专利申请号200410029852.X，中科)说明书2页18行开始描述的HPLC法不能有效地分离开胸腺五肽与二肽片段，二者分离度小于0.9)。

使用该色谱条件，以合成的二肽对照品作为对照，参照上文有关物质和含量测定的方法可以测定本发明制得的各种组合物中的二肽含量(为绝对含量，即每1克物料中二肽的量g/g)，同时按上文含量测定方法测定本发明制得的各种组合物中的胸腺五肽的含量(为绝对含量，即每1克物料中五肽的量g/g)，由此计算所测物料中二肽相对于五肽的相对含量(每批物料中，二肽含量除以五肽含量乘以100％所得值)，即为二肽相对含量。

稳定性考察方法：

本方法可以用于考察本发明各种产品模拟长期贮藏条件下的稳定性(例如物理稳定性和化学稳定性)。具体方法为：将制得的组合物在30℃下放置5个月，测定试样中胸腺五肽的含量[30℃-5月，可称为高温平均含量，mg/瓶，测定10瓶的平均值]相对于该试样在10℃下处理相应时间时活性成分的含量[10℃-5月，可称为低温平均含量，mg/瓶，测定10瓶的平均值]的百分数，可简称为残余含量(％)，计算式如下：

其中，高温平均含量(mg/瓶)和低温平均含量(mg/瓶)是样品照上文所述含量测定方法获得的。上述残余含量(％)越接近100％表明越稳定，低于100％则不稳定，越低越不稳定。

另外，测定各试样经高温处理后的二肽增量(％)，计算式如下：

其中，高温处置后二肽相对含量和低温处置后二肽相对含量是样品照上文所述降解产物的测定方法获得的。上述二肽增量(％)越接近0表明越稳定，越大则越不稳定。

B、组合物制备例部分

下面各种制备例、补充制备例和对照例中，制备组合物所用的原料药胸腺五肽，经测定，其中的二肽相对含量为0.44％。

制备例1、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方：

胸腺五肽	1mg，
		甘露醇	50mg，
pH调节剂	必要时适量，调至pH7.0，
		注射用水	适量，加至物料总重量为1.0g。

制备方法：

(a)称取处方量的胸腺五肽，使其溶解于0.1ml注射用水中；

(b)在30℃保温条件下，按溶液体积加入0.1％(w/v)的活性炭，搅拌均匀，滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为9.0，搅拌使吸附15分钟，接着滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为7.0，搅拌使吸附10分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭；

(c)称取甘露醇，使其溶解于0.45ml的注射用水中，在50～60℃保温条件下，按溶液体积加入0.1％(w/v)活性炭，搅拌均匀，保温吸附15分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭，冷却至40℃以下；

(d)合并步骤(b)和步骤(c)所得溶液，补水至物料总重量接近1.0g，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节该溶液至pH规定值[即调节至pH7.0；即，使用适量的酸碱调节剂调节使得该溶液用注射用水稀释至含活性成分0.2mg/ml浓度时，所得稀释溶液的pH值为7.0；下同]，补水至物料总重量为1.0g(经测定，本发明制备的各种组合物在此配液过程中，所得药液即冷冻干燥前的药液密度均为1.00g/ml，即在本发明中此物料或冷冻干燥前的物料1g相当于1ml，描述该物料时用g或ml是等同的)；

(e)将步骤(d)所得药液依次经0.45μm和0.22μm微孔滤膜无菌过滤，灌装，半加胶塞以备下面进行冷冻干燥，装量含活性成分1mg；按照本文所述冻干曲线A进行冷冻干燥，至水分低于3％；冻干结束后，全加塞；扎铝盖，即得本制备例的粉针剂。在本发明中制备例1的样品可简称为Ex1；其它制备例的样品亦可类似表示。

经测定，所得粉针剂Ex1中二肽相对含量为0.12％，相对于其原料药中二肽相对含量0.44％而言降幅达72％。

制备例2、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方：

制备方法：

(a)称取处方量的胸腺五肽，使其溶解于0.12ml注射用水中；

(b)在30℃保温条件下，按溶液体积加入0.08％(w/v)的活性炭，搅拌均匀，滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为9.3，搅拌使吸附15分钟，接着滴加酸碱调节剂(本制备例用冰乙酸)适量使溶液的pH值为7.3，搅拌使吸附10分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭；

(c)称取甘露醇100mg，使其溶解于0.5ml的注射用水中，在50～60℃保温条件下，按溶液体积加入0.15％(w/v)活性炭，搅拌均匀，保温吸附15分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭，冷却至40℃以下；

(d)合并步骤(b)和步骤(c)所得溶液，补水至物料总重量接近1.5g，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节该溶液至pH规定值，补水至物料总重量为1.5g；

(e)将步骤(d)所得药液依次经0.45μm和0.22μm微孔滤膜无菌过滤，灌装，半加胶塞以备下面进行冷冻干燥，装量含活性成分1mg；按照本文所述冻干曲线B进行冷冻干燥，至水分低于3％；冻干结束后，全加塞；扎铝盖，即得本制备例的粉针剂，编号为Ex2。

经测定，所得粉针剂Ex2中二肽相对含量为0.12％，相对于其原料药中二肽相对含量0.44％而言降幅达70％以上。

制备例3、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方：

胸腺五肽	1mg，
		甘露醇	20mg，
pH调节剂	必要时适量，调至pH6.5，
		注射用水	适量，加至物料总重量为0.8g。

制备方法：

(a)称取处方量的胸腺五肽，使其溶解于0.08ml注射用水中；

(b)在30℃保温条件下，按溶液体积加入0.15％(w/v)的活性炭，搅拌均匀，滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为9.5，搅拌使吸附15分钟，接着滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为6.7，搅拌使吸附10分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭；

(c)称取甘露醇20mg，使其溶解于0.4ml的注射用水中，在50～60℃保温条件下，按溶液体积加入0.08％(w/v)活性炭，搅拌均匀，保温吸附15分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭，冷却至40℃以下；

(d)合并步骤(b)和步骤(c)所得溶液，补水至物料总重量接近0.8g，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节该溶液至pH规定值，补水至物料总重量为0.8g；

(e)将步骤(d)所得药液依次经0.45μm和0.22μm微孔滤膜无菌过滤，灌装，半加胶塞以备下面进行冷冻干燥，装量含活性成分1mg；按照本文所述冻干曲线A进行冷冻干燥，至水分低于3％；冻干结束后，全加塞；扎铝盖，即得本制备例的粉针剂，编号为Ex3。

经测定，所得粉针剂Ex3中二肽相对含量为0.10％，相对于其原料药中二肽相对含量0.44％而言降幅达77％。

制备例4、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方：

胸腺五肽	1mg，
		甘露醇	30mg，
甘氨酸	30mg，
		pH调节剂	必要时适量，调至pH7.0，
注射用水	适量，加至1ml。

制备方法：基本上参考制备例1的方法进行，甘氨酸与甘露醇一起添加。经测定，所得粉针剂Ex4中二肽相对含量相对于其原料药中二肽相对含量而言降幅达74％。

制备例5、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方：

胸腺五肽	1mg，
		甘露醇	40mg，
右旋糖苷	10mg，
		pH调节剂	必要时适量，调至pH7.0，
注射用水	适量，加至1ml。

制备方法：基本上参考制备例1的方法进行，右旋糖苷与甘露醇一起添加。经测定，所得粉针剂Ex4中二肽相对含量相对于其原料药中二肽相对含量而言降幅达71％。

另外，经测定，本发明上述制备例1至制备例5它们的配液损失均在3.4％以下，均在2.2～3.4％范围内。

以制备例1为例，参数“配液损失”是如下计算的：在步骤(b)中，测定加活性炭之前的全部体积药液中胸腺五肽的量(mg，W1)，再测定经钛棒过滤所得滤液中胸腺五肽的量(mg，W2)，配液损失(％)＝[(W1-W2)÷W1]×100％。

使用上述二肽相对含量0.44％的原料药制备以下对照例。

对照例1：照CN1676162A(中国专利申请号200410029852.X，中科)说明书2页9-17行所记载的配方和方法，配制含甘氨酸50mg/ml等的无菌溶液，最后照本发明制备例1步骤(e)所述方法粗滤、精滤、冷冻干燥制得冻干粉针剂，记为Co1。

对照例2：照CN1660407A(中国专利申请号200510002507.1，维信)说明书4页实施例3所记载的配方和方法，配制含柠檬酸钠和氯化钠等的无菌溶液，最后照本发明制备例1步骤(e)所述方法粗滤、精滤、冷冻干燥制得冻干粉针剂，记为Co2。

对照例3：照CN101024071A(中国专利申请号200610008148.5，中和)说明书4页实施例1所记载的配方和方法，配制含乙酸钠的无菌溶液，最后照本发明制备例1步骤(e)所述方法粗滤、精滤、冷冻干燥制得冻干粉针剂，记为Co3。

对照例4：照CN101244255A(中国专利申请号200810008117.9，地奥)说明书5页实施例1所记载的配方和方法，配制含甘露醇、焦亚硫酸钠等的无菌溶液，最后照本发明制备例1步骤(e)所述方法粗滤、精滤、冷冻干燥制得冻干粉针剂，记为Co4。

对照例5：照CN102764424A(中国专利申请号201210295672.0，济生)说明书4页实施例1所记载的配方和方法，配制含枸橼酸、磷酸氢二钾、酒石酸钠等的无菌溶液，最后照本发明制备例1步骤(e)所述方法粗滤、精滤、冷冻干燥制得冻干粉针剂，记为Co5。

对照例6：照CN102988954A(中国专利申请号201210302762.8，姚云)说明书4页实施例1所记载的配方和方法，配制含甘露醇、EDTA钙、维生素C钠等的无菌溶液，最后照本发明制备例1步骤(e)所述方法粗滤、精滤、冷冻干燥制得冻干粉针剂，记为Co6。

以上Co1～Co6六个粉针剂，经测定，它们中二肽相对含量均在0.32％～0.40％范围内，相对于其原料药中二肽相对含量0.44％而言降幅在13％至27％范围内，远低于本文上面制备例1～5中达70％～80％的范围。

制备例6、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方和制法分别参照制备例1至制备例5，不同的仅是在配方中将胸腺五肽1mg用量改为10mg，其它不变，得到每瓶装量含活性成分10mg的5批粉针剂。

制备例7、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方和制法分别参照制备例1至制备例5，不同的仅是在配方中将胸腺五肽1mg用量改为10mg，并在参考制备例1至制备例5时在其中相对于每10mg胸腺五肽而言分别再添加3mg、2mg、4mg、3mg、3mg氯化钠，其它不变，得到每瓶装量含活性成分10mg的5批粉针剂。

制备例8、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方和制法分别参照制备例1至制备例5，不同的仅是在配方中将胸腺五肽1mg用量改为10mg，并在参考制备例1至制备例5时在其中相对于每10mg胸腺五肽而言分别再添加2mg、1mg、3mg、2mg、2mg乙酸铵，其它不变，得到每瓶装量含活性成分10mg的5批粉针剂。

制备例9、制备包含胸腺五肽的粉针剂组合物

配方和制法分别参照制备例1至制备例5，不同的仅是在配方中将胸腺五肽1mg用量改为10mg，并在参考制备例1至制备例5时在其中相对于每10mg胸腺五肽而言分别再添加3mg、2mg、4mg、3mg、3mg氯化钠，并在参考制备例1至制备例5时在其中相对于每10mg胸腺五肽而言分别再添加2mg、1mg、3mg、2mg、2mg乙酸铵，其它不变，得到每瓶装量含活性成分10mg的5批粉针剂。

本发明制备例中在补充添加氯化钠和乙酸铵或其类似物时，均是在制备过程中与胸腺五肽一起添加的。

制备例6至制备例9各制备例中所得全部批粉针剂，经测定，其中：二肽相对含量相对于其原料药中二肽相对含量而言降幅均在69～82％范围内；制备过程中的配液损失均在2.2～3.7％范围内。表明在粉针剂制备过程中主药含量增至10倍时，二肽相对含量降幅和配液损失与1mg/瓶规格基本无差异。

稳定性考察例1：

照上文所述组合物在30℃下放置5个月的留样方式，分别考察本发明制备的各种粉针剂在0月(即未经历上述30℃-5月过程)和5月时的溶液的澄清度与颜色。

照上述方式考察各粉针剂的溶液的澄清度与颜色项目，结果：制备例1至制备例5全部粉针剂在0月时结果均为溶液澄清无色，在5月时结果均为溶液澄清无色；制备例6全部粉针剂在0月时结果均为溶液微显浑浊且与1号浊度标准溶液比较不更浓，在5月时结果均为溶液明显显浑浊且均达到3～4号浊度标准溶液的浊度；制备例7全部粉针剂在0月时结果均为溶液微显浑浊且与1号浊度标准溶液比较不更浓，在5月时结果均为溶液明显显浑浊且均达到2～4号浊度标准溶液的浊度；制备例8全部粉针剂在0月时结果均为溶液微显浑浊且与1号浊度标准溶液比较不更浓，在5月时结果均为溶液明显显浑浊且均达到3～4号浊度标准溶液的浊度；制备例9全部粉针剂在0月时结果均为溶液澄清无色，在5月时结果均为溶液澄清无色；在一个补充的试验中，参照制备例9的配方和方法，不同的是将其中的氯化钠改为等量氯化钾，所得粉针剂0月和5月的溶液的澄清度与颜色结果均与制备例8各粉针剂的结果基本相同；在一个补充的试验中，参照制备例9的配方和方法，不同的是将其中的乙酸铵改为等量乙酸钠或氯化铵，所得粉针剂0月和5月的溶液的澄清度与颜色结果均与制备例7各粉针剂的结果基本相同；在一个补充的试验中，将从市场购得的两个生产厂家注射用胸腺五肽冷冻干燥粉针剂(均为10mg/瓶，且从其瓶子里的冷冻痕迹看冷冻干燥前的药液体积约为1ml)，两个粉针剂同样进行上述0月和5月的溶液的澄清度与颜色考察，结果均与制备例7各粉针剂的结果基本相同。

稳定性考察例2：

照上文稳定性考察方法，考察以上“B、组合物制备例部分”中各制备例和对照例所得的粉针试样在30℃下放置5月后的物理稳定性化学稳定性，特别是测定它们的二肽增量(％)、残余含量(％)。

上面“B、组合物制备例部分”获得的不同试样在二肽增量(％)方面，结果显示出现有技术完全无法预期的差异：对于Ex1、Ex2、Ex3、Ex4、Ex5这些使用本发明特定炭吸附方法处理所得的粉针剂，它们的二肽增量(％)均在3.3％～9.8％范围内，例如Ex1粉针的二肽增量(％)为4.2％、Ex2粉针的二肽增量(％)为6.5％，30℃-5个月后的药物残余含量(％)在97.7％～99.1％范围内；表明对于经本发明炭吸附方法处理所得的粉针试样，显示二肽增量均低于10％，药物降解不明显。

实施例6至制备例9各制备例中所得全部批粉针剂，经测定，其二肽增量(％)均在3.6％～9.2％范围内，30℃-5个月后的药物残余含量(％)在97.3％～99.0％范围内，表明在粉针剂制备过程中主药含量增至10倍时二肽相对含量降幅和配液损失与1mg/瓶规格基本无差异。

对于Co1至Co6这些粉针剂，它们的二肽增量(％)均在69.3％～147.2％范围内，例如Co6粉针针的二肽增量(％)为123.1％；以上Co1至Co6这些粉针剂在30℃-5个月后的药物残余含量(％)在91.4％～93.8％范围内。

稳定性考察例3：

对于制备例9的全部粉针剂，在0月(即制备后15天之内)、凉暗处保存24月，照中国药典2015年版二部1161页所载“注射用胸腺五肽”的各项指标进行检测。结果显示，制备例9的全部粉针剂在0月时以及在24月时各项指标均符合该药典标准规定。

产业适用性

本发明组合物可以在临床上用于18岁以上的慢性乙型肝炎患者；用于各种原发性或继发性T细胞缺陷病(如儿童先天性免疫缺陷病)；用于某些自身免疫性疾病(如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮)；用于各种细胞免疫功能低下的疾病；以及用于肿瘤的辅助治疗。

Claims (10)

1.对胸腺五肽冷冻干燥粉针剂的药物组合物进行质量控制的方法，该方法包括对所述药物组合物进行溶液的澄清度与颜色检查的操作，包括如下步骤：取粉针剂，每支加水1ml使溶解，照中国药典2015年版四部通则0902第一法和通则0901第一法依法检查；所述药物组合物中包含：胸腺五肽、甘露醇、任选的酸碱调节剂。

2.一种胸腺五肽冷冻干燥粉针剂的药物组合物，其中包含：胸腺五肽、甘露醇、任选的酸碱调节剂，以每10重量份的胸腺五肽计，甘露醇的量为20～100重量份，例如20-75重量份，例如20～50重量份。

3.根据权利要求2的药物组合物，其加水溶解并稀释制成每1ml中含胸腺五肽2mg的溶液，该溶液的pH值为6.5～7.5，该溶液的pH值为6.7～7.3。

4.根据权利要求2的药物组合物，其在冷冻干燥之前的溶液除包括胸腺五肽、甘露醇以及任选的酸碱调节剂外，还包括注射用水，所述注射用水的用量是：以每10mg胸腺五肽计使得药液的体积为0.5～1.5ml，例如为1ml；或者，所述注射用水的用量是：以每10mg胸腺五肽计使得药液的体积为0.5～1.5g，例如0.8～1.5g，例如为1g。

5.根据权利要求2的药物组合物，其中所述的酸碱调节剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸、磷酸、硝酸、硫酸、乙酸或其组；例如，所述的酸碱调节剂是盐酸溶液或者氢氧化钠溶液或者是乙酸，例如1M盐酸溶液或者1M氢氧化钠溶液，例如是冰乙酸。

6.根据权利要求2的药物组合物，其中还任选地包含其它药学可接受的赋形剂；进一步，所述赋形剂例如但不限于甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、甘氨酸、右旋糖苷、及其组合；进一步，当它们存在时，它们是与甘露醇一起添加的；或者，进一步的，所述药物组合物以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加2～4重量份的氯化钠；或者，进一步的，所述药物组合物以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加1～3重量份的醋酸铵；或者，进一步的，所述药物组合物以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加2～4重量份的氯化钠和1～3重量份的醋酸铵；在一个实施方案中，所述氯化钠和醋酸铵二者是与活性成分一起添加的。

7.根据权利要求2的药物组合物，其基本上是按包括如下的步骤制备的：

(a)称取10重量份的胸腺五肽，使其溶解于50～150重量份(例如80～120重量份，例如约100重量份)的注射用水中；

(b)在30℃保温条件下，按溶液体积加入0.05～0.2％(w/v)(例如0.08～0.15％(w/v))活性炭，搅拌均匀，滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为8.5～9.5(例如pH值为9.0～9.5)，搅拌使吸附15分钟，接着滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为6.5～7.5(例如pH值为6.7～7.3)，搅拌使吸附10分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭；

(c)称取甘露醇20～100重量份(例如20-75重量份，例如20～50重量份)，使其溶解于300～500重量份(例如350～500重量份，例如400～500重量份)的注射用水中，在50～60℃保温条件下，按溶液体积加入0.05～0.2％(w/v)(例如0.08～0.15％(w/v))活性炭，搅拌均匀，保温吸附15分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭，冷却至40℃以下；

(d)合并步骤(b)和步骤(c)所得溶液，补水至物料总重量接近800～1500重量份(例如至物料总重量接近900～1200重量份)，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节该溶液至pH符合规定的范围，补水至物料总重量为800～1500重量份(例如至物料总重量为900～1200重量份，此时由于药液体积未明显变化，可以不再调节pH值)；

(e)将步骤(d)所得药液依次经0.45μm和0.22μm微孔滤膜无菌过滤，灌装，装量含活性成分10mg；冷冻干燥除去水分，压塞，即得到粉针剂形式的组合物。

8.根据权利要求7的药物组合物，其中：

步骤(d)所述pH符合规定的范围是指：当将该溶液用注射用水稀释至含活性成分2mg/ml浓度时，所得稀释溶液的pH值在6.5～7.5范围内，例如该稀释溶液的pH值在6.7～7.3范围内，例如该稀释溶液的pH值为7.0；和/或

步骤(e)所得经过滤的滤液，其中固形物含量为2～20％(w/v)，优选2～10％(w/v)，再更优选2～8％，例如3～6％。

9.制备权利要求2-8任一项所述的药物组合物的方法，其基本上包括以下步骤：

(a)称取10重量份的胸腺五肽，使其溶解于50～150重量份(例如80～120重量份，例如约100重量份)的注射用水中；

(b)在30℃保温条件下，按溶液体积加入0.05～0.2％(w/v)(例如0.08～0.15％(w/v))活性炭，搅拌均匀，滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为8.5～9.5(例如pH值为9.0～9.5)，搅拌使吸附15分钟，接着滴加酸碱调节剂适量使溶液的pH值为6.5～7.5(例如pH值为6.7～7.3)，搅拌使吸附10分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭；

(c)称取甘露醇20～100重量份(例如20-75重量份，例如20～50重量份)，使其溶解于300～500重量份(例如350～500重量份，例如400～500重量份)的注射用水中，在50～60℃保温条件下，按溶液体积加入0.05～0.2％(w/v)(例如0.08～0.15％(w/v))活性炭，搅拌均匀，保温吸附15分钟，接着用1μm钛棒过滤脱炭，冷却至40℃以下；

(d)合并步骤(b)和步骤(c)所得溶液，补水至物料总重量接近800～1500重量份(例如至物料总重量接近900～1200重量份)，搅拌均匀，测定溶液pH值和任选的测定活性成分含量，必要时用酸碱调节剂调节该溶液至pH符合规定的范围，补水至物料总重量为800～1500重量份(例如至物料总重量为900～1200重量份，此时由于药液体积未明显变化，可以不再调节pH值)；和/或

(e)将步骤(d)所得药液依次经0.45μm和0.22μm微孔滤膜无菌过滤，灌装，装量含活性成分10mg；冷冻干燥除去水分，压塞，即得到粉针剂形式的组合物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中：

步骤(d)所述pH符合规定的范围是指：当将该溶液用注射用水稀释至含活性成分2mg/ml浓度时，所得稀释溶液的pH值在6.5～7.5范围内，例如该稀释溶液的pH值在6.7～7.3范围内，例如该稀释溶液的pH值为7.0；

所述药物组合物以每10重量份的胸腺五肽计，其中还添加2～4重量份的氯化钠和1～3重量份的醋酸铵；例如，所述氯化钠和醋酸铵二者是与活性成分一起添加的；

步骤(e)所得经过滤的滤液，其中固形物含量为2～20％(w/v)，优选2～10％(w/v)，再更优选2～8％，例如3～6％；和/或

步骤(e)中除去水分后所得冷冻干燥物料中水分含量低于10％，优选低于8％，优选低于5％，更优选低于3％。