CN111375058A - 一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂 - Google Patents

一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN111375058A
CN111375058A CN201811641361.9A CN201811641361A CN111375058A CN 111375058 A CN111375058 A CN 111375058A CN 201811641361 A CN201811641361 A CN 201811641361A CN 111375058 A CN111375058 A CN 111375058A
Authority
CN
China
Prior art keywords
formulation
antibody
tnf
mmol
buffer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811641361.9A
Other languages
English (en)
Inventor
刘丹
萨日娜
胡伟
张玲玲
顾正煜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Acebright Pharmaceuticals Group Co ltd
Shanghai Harmony Medical Technology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Acebright Pharmaceuticals Group Co ltd
Shanghai Harmony Medical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Acebright Pharmaceuticals Group Co ltd, Shanghai Harmony Medical Technology Co ltd filed Critical Shanghai Acebright Pharmaceuticals Group Co ltd
Priority to CN201811641361.9A priority Critical patent/CN111375058A/zh
Publication of CN111375058A publication Critical patent/CN111375058A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本发明提供了一种抗肿瘤坏死因子‑α抗体注射液制剂，所述制剂包括：(i)治疗有效量的抗TNF‑α抗体；(ii)等渗调节剂；(iii)缓冲液；和(iv)表面活性剂；其中，所述等渗调节剂为氯化钠，所述制剂的pH为4.5‑6.0。本发明的制剂在仅使用氯化钠而不添加甘露醇作为等渗调节剂的情况下，制剂稳定性没有降低，并且避免了使用甘露醇所带来的组分相互作用的风险，减小了副作用，提高了用药安全。

Description

一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂。
背景技术
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种重要的炎症细胞因子，在正常的免疫功能和引起炎症过程的级联反应中起重要的作用。在类风湿性关节炎病人关节滑液中，可以发现TNF-α和其他炎症因子的大量表达。重组抗肿瘤坏死因子-α全人源单克隆抗体注射液(如修美乐)是一种抗TNF-α因子的单克隆抗体，属疾病控制性抗类风湿药物，通过抑制在类风湿关节炎中起关键作用的肿瘤坏死因子TNF-α的生物活性，有效抑制类风湿关节炎的发展。
抗体蛋白在进行抗体工程的处理过程中常常会失去对靶抗原的亲合力和稳定性，因此需要大量的赋形剂来稳定蛋白质，如修美乐的商品制剂(见国际专利申请WO2004016286和EMA颁发的上市许可的附件1)包括抗TNF-α抗体、甘露醇、枸橼酸一水合物、枸橼酸钠、二水合磷酸二氢钠、氯化钠、聚山梨醇酯80和氢氧化钠。该制剂中特定的赋形剂组合形成了一种微妙的平衡，维持该制剂的稳定性。其中甘露醇和氯化钠为等渗调节剂；另外甘露醇还具有稳定剂的作用，文献记载任何蛋白质组合物中糖和多元醇的浓度与蛋白质的稳定性成正比(Foster等，Int.J.Pharm.(1996)134(1,2):193-201)。
但是考虑到大量的不同赋形剂不可避免地会增加工艺和成本负担、毒性风险、以及组分之间发生能够破坏制剂的不良相互作用(例如聚山梨酯80可以促进甘露醇的氧化，从而降低甘露醇的氧化调节功能及渗透压调节功能(见国际专利申请WO2015177058)的风险，开发一种具有较少的赋形剂的高效、简便、低成本的制剂是十分必要的。
发明内容
本发明的目的提供一种处方简单，稳定性强，副作用小的抗TNF-α抗体的注射液制剂。
在本发明的第一方面，提供了一种抗TNF-α抗体的注射液制剂，其特征在于，所述制剂包括：
(i)治疗有效量的抗TNF-α抗体；
(ii)等渗调节剂；
(iii)缓冲液；和
(iv)表面活性剂；
其中，所述等渗调节剂为氯化钠，所述制剂的pH为4.5-6.0。
在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体含量为40～60mg/mL，较佳地，45～55mg/mL，更佳地，48-52mg/ml。
在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体为单克隆抗体。
在另一优选例中，所述单克隆抗体为全长抗体。
在另一优选例中，所述单克隆抗体为IgG1抗体。
在另一优选例中，所述单克隆抗体为人源化抗体。
在另一优选例中，所述单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。
在另一优选例中，所述抗体片段为Fab或F(ab′)2片段。
在另一优选例中，所述单克隆抗体结合TNF-α。
在另一优选例中，所述抗TNF-α抗体选自：阿达木单抗(adalimumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、戈利木单抗(Golimumab)。
在另一优选例中，所述缓冲液选自枸橼酸/枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、琥珀酸/琥珀酸盐缓冲液、酒石酸/酒石酸盐缓冲液、马来酸/马来酸盐缓冲液，或其组合。
在另一优选例中，所述缓冲液为枸橼酸/枸橼酸盐缓冲液，且所述枸橼酸/枸橼酸盐缓冲液浓度为10～25mmol/L，较佳地，15～25mmol/L，更佳地，为20-25mmol/L。
在另一优选例中，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液，且所述磷酸盐缓冲液浓度为5～25mmol/L，较佳地，10～25mmol/L，更佳地，为20-25mmol/L。在另一优选例中，所述缓冲液为枸橼酸/枸橼酸盐缓冲液和磷酸盐缓冲液的组合；
其中，所述枸橼酸/枸橼酸盐缓冲液浓度为5～25mmol/L，较佳地，5-15mmol/L，更佳地，5～10mmol/L；和
所述磷酸/磷酸盐缓冲液浓度为5～25mmol/L，较佳地，10～20mmol/L，更佳地，10-15mmol/L。
在另一优选例中，所述氯化钠的浓度为100～180mmol/L，更佳地，130～160mmol/L，更佳地，为140-150mmol/L。
在另一优选例中，所述制剂的pH范围5.0-5.5，较佳地，为5.2。
在另一优选例中，所述表面活性剂的质量浓度为0.05％～0.2％，较佳地，0.05～0.15％，更佳地，0.08-0.12％，以所述制剂总质量计。
在另一优选例中，所述表面活性剂为聚山梨酯。
在另一优选例中，所述聚山梨酯为聚山梨酯80。
在另一优选例中，所述制剂包括40～60mg/mL的抗TNF-α单克隆抗体、5～25mmol/L的枸橼酸/枸橼酸盐缓冲液、5～25mmol/L的磷酸盐缓冲液、130～160mmol/L的氯化钠和0.05％～0.2％的聚山梨酯，且所述制剂的pH值为4.5～6.0。
在另一优选例中，所述制剂包括45～55mg/mL的抗TNF-α单克隆抗体、5～25mmol/L的枸橼酸/枸橼酸钠缓冲液、5～25mmol/L的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠缓冲液、140～150mmol/L的氯化钠和0.05-0.2％的聚山梨酯80，且所述制剂的pH值为5.2。
本发明的第二方面，还提供如本方面第一方面所述的制剂在制备治疗TNFα相关疾病的药物的用途。
在另一优选例中，所述的TNFα相关疾病包括脓毒症、自身免疫性疾病、传染病、恶性肿瘤、肺病、肠道疾病、心脏病。
在另一优选例中，所述的人类自身免疫相关疾病包括类风湿性关节炎、银屑病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、斑块状银屑病。所述的药物的制备方法为常规实验方法。
本发明的第三方面，还提供一种试剂盒，所述试剂盒包括：
本发明第一方面所述的抗体注射液制剂、用于盛装所述注射液制剂的容器和注射装置。
在另一优选例中，所述试剂盒还包括使用说明书。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选和测试，开发了一种处方简单，成本低廉，稳定性强的抗TNF-α抗体注射液。令人惊讶的是，在仅使用氯化钠而不添加甘露醇作为等渗调节剂的情况下，本发明的制剂稳定性没有降低，并且避免了使用甘露醇所带来的组分相互作用的风险，减小了副作用，提高了用药安全。在此基础上完成了本发明。
术语
如本文所用，所述“注射液制剂”是指如下形式的制备物，使得容许活性组分的生物学活性有效，且不含别的对会施用该制剂的受试者有不可接受的毒性的成分。受试者包括哺乳动物，优选为人。
如本文所用，所述“抗体稳定性”是指一种抗体在贮藏后基本上保留其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物学活性。贮藏期一般基于制剂的预定货架期来选择。多种用于测量抗体稳定性的分析技术是本领域所公知的。
可以在选定温度下用选定时间测定稳定性。优选的是，所述制剂在室温或30℃至40℃下能稳定至少1个月和/或在大约2-8℃下稳定至少2年。
如果在通过对颜色和/或透明度进行肉眼检查，或通过UV光散射或通过大小排阻层析测定时基本没有表现出明显的聚集，沉淀和/或变性的迹象，则制剂中的抗体保持它的物理稳定性。
如果在特定时间化学稳定性使得抗体被认为仍然保留了下面所定义的生物学活性，则在制剂中，所述抗体保持它的化学稳定性。可以通过检测和定量所述抗体的化学改变形式评估化学稳定性。化学改变可能涉及大小改变(例如，剪切)，例如，可以通过采用大小排阻层析，SDS-PAGE和/或矩阵辅助的激光解析离子化/飞行时间质谱分析(MALDI/TOF MS)进行评估。其他类型的化学改变包括电荷改变(例如，因为脱酰胺导致的改变)，例如，可以通过离子交换层析对它进行评估。
如果一种制剂中的抗体具有它预期用途的生物学活性，则所述抗体在制剂中保持它的生物学活性。例如，如果所述制剂中的抗体的生物学活性为在制备所述制剂时所表现出的生物学活性的大约70％～130％(在测定的误差范围内)内，就认为保持了它的生物学活性(例如，通过抗原结合测定确定)。
如本文所用，所述“治疗有效量”或“有效量”表示在药理学含义上，在本发明的范围内，在预防或治疗疾病方面的有效量。对于所述疾病的治疗来说，所述抗体是有效的。“治疗”表示治疗性治疗和预防性或防御性措施。需要治疗的受试者包括业已患有有关病症的受试者，以及需要预防有关疾病的受试者。
如本文所用，所述“TNF-α”是指人TNF-α(本文简称为hTNF-α)，表示人细胞因子，它是以17kD的分泌形式和26kD膜缔合形式存在的，它的生物学活性形式包括非共价结合的17kD分子的三聚体。hTNF-α的结构进一步披露于以下文献中：例如，Pennica，D.，等(1984)Nature 312：724-729；Davis，J.M.，等(1987)Biochemistry 26：1322-1326；和Jones，E.Y.，等(1989)Nature 338：225-228。术语人TNF-α意在包括重组人TNF-α(rhTNF-α)，它可以是通过标准重组表达方法制备的或通过商业渠道购买的(如R&D Systems，Catalog No.210-TA，Minneapolis，MN)。
如本文所用，所述“抗TNF-α抗体”是指以足够亲和力和特异性结合TNF-α的抗体。在某些实施方案中，所选择的抗体通常会具有足够的对TNF-α的结合亲和力。抗体亲和力可通过例如基于表面等离振子共振的测定法；酶联免疫吸附测定法(ELISA)和竞争测定法(例如RIA)来测定。
抗体注射液制剂
提供了一种抗TNF-α抗体的注射液制剂，其特征在于，所述制剂包括：
(i)治疗有效量的抗TNF-α抗体；
(ii)等渗调节剂；
(iii)缓冲液；和
(iv)表面活性剂；
其中，所述等渗调节剂为氯化钠，所述制剂的pH为4.5-6.0。
其中，可用于本发明制剂中的抗TNF-α抗体包括单克隆抗体，重组抗体，单链抗体，杂合抗体，嵌合抗体，人源化抗体，或它们的片段。还可以使用包括一个或两个用于结合抗原的结合位点和免疫球蛋白的Fc-部分的抗体分子。本发明优选为单克隆抗体，本发明所述的抗TNF-α单克隆抗体可来源以下文献：Guiding the selection of human antibodiesfrom phage display repertoires to a single epitope of an antigenBiotechnology(N Y).1994，12(9):899-903)和专利：CN 1935260B。通过本领域所公知的方法进行制备，也可以选用其它基因工程技术获得的抗TNF-α单克隆抗体。一类优选的由其它基因工程技术获得的抗TNF-α单克隆抗体包括阿达木单抗(adalimumab)、英夫利昔单抗(infliximab)、戈利木单抗(Golimumab)等。用于本发明制剂中的优选抗体是人抗体，它是从人细胞或从代表人抗体所有组成成分的基因文库中克隆的。特别优选的人抗体是针对抗原TNF-α，包括人TNF-α(或hTNFα)的抗体。
存在于本发明制剂中的抗体的治疗有效量是通过考虑需要的剂量体积和施用模式决定的。在本发明中，抗体的浓度为40-60mg/ml，优选45-55mg/ml，更优选为48-52mg/ml，最优选为50mg/ml。本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。
本发明制剂中的表面活性剂优选非离子表面活性剂，如失水山梨醇聚氧乙烯醚脂肪酸酯(例如失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚月桂酸酯，失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚油酸酯等)或泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)。所添加的表面活性剂的量使其能减少制剂中的抗体的聚集和/或减少颗粒在制剂中的形成和/或减少吸附。在本发明的优选的表面活性剂为聚山梨酯，如聚山梨酯80。在一优选的实施方案中，聚山梨酯80的浓度为0.1-2.0mg/ml，优选为0.5-1.0mg/ml，更优选为0.9-1.0mg/ml。本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。
本发明通过缓冲体系来调节制剂的pH值，以控制pH在4.5-6.0的范围内，在某些实施方案中，制剂的pH处于4.6至5.9、4.7至5.7、4.9至5.5、55.1至5.3之间，本发明包括使用上述任意值的组合作为上限和/或下限的值的范围。在一些优选的实施方案中，制剂pH为4.5、4.7、5.0、5.2、5.3、5.5、5.7或6.0。
本发明使用氯化钠作为等渗调节剂调节渗透压，所述氯化钠的浓度为100～180mmol/L，更佳地，130～160mmol/L，更佳地，为140-150mmol/L。
本发明的缓冲体系包括一种或多种其他缓冲组分，适合的缓冲组分包括组氨酸、枸橼酸盐、磷酸盐、乙酸盐(例如乙酸钠)，琥珀酸盐(例如琥珀酸钠)等，通过与其他缓冲组分的组合将制剂的pH值控制在上述范围。
本发明的制剂中可包括一种或多种其它药学可接受载体、赋形剂或稳定剂，诸如那些在Remington's Pharmaceutica1Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)中记载的，只要它们对制剂的期望特征没有不利影响。可接受载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括别的共溶剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；整合剂，诸如EDTA；金属复合物(例如Zn一蛋白质复合物)；生物可降解聚合物，诸如聚醋；和/或成盐反荷离子。
本发明的制剂可采用本领域公知的方法将各种组分按一定的浓度进行组合制备。
一类优选的方法主要包括以下步骤：
用Ultracel-30K超滤离心管将抗TNF-α单克隆抗体通过离心(4500rpm，4-10℃)浓缩换液至不同制剂缓冲液中，用制剂缓冲液将蛋白浓度调整到所需浓度。采用0.22μmMillex针头滤器将制剂过滤除菌。对所制备的制剂进行包装以方便使用，选用的包材可以是玻璃瓶、预填充注射器或笔式注射器。
本发明的主要优点包括：
1.本发明的抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂简化了制剂处方，但性能没有下降，节约了生产成本。
2.本发明的制剂不含甘露醇，避免了组分之间发生能够破坏制剂的不良相互作用的风险，减少了副作用，提高了用药安全。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
1.抗体制剂筛选实验
1-1抗体制剂制备方法
抗TNF-α抗体来源：通过将含有重组抗肿瘤坏死因子-α抗体基因(参见美国发明专利US6090382)的质粒转入CHO细胞(空白宿主CHO细胞购自Invitrogen公司)悬浮培养后取上清液，经三步层析分离纯化后得到的单抗溶液。
通过透析作用将抗体换液到目的缓冲液中。样品于4℃下，透析换液3次，透析后的样品进行分装后冻存于-80℃，同时放置于4℃和40℃，样品在4℃放置0、1个月、2个月、3个月，40℃的样品放置0、2周、1个月，并分别在对应时间点取样检测和分析。
1-2处方和依据
考察不同缓冲体系、不同糖类和不同pH值对抗体蛋白的影响。实验1-7的制剂处方组成如表1所示。
处方P1为本品同类型商业药修美乐制剂处方，所用辅料符合现行版中国药典标准。
考察了不同pH值的影响，P2、P3的pH值分别为pH 4.7和pH 5.7，其他成分与原研相同；
考察了不同糖类(即多元醇类)辅料的影响，P4中糖类为蔗糖，P5中不含糖类辅料；
考察了不同缓冲液体系的影响，P6为单一枸橼酸缓冲液(pH 4.5)，P7为单一磷酸缓冲液(pH 6.0)。
P1-P7制剂处方中均含有约50mg/mL的抗TNF-α抗体。
表1制剂处方筛选备选处方组成
成分 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7
一水合磷酸二氢钠(mmol/L) 5.51 5.51 5.51 5.51 5.51 0 8.33
十二水合磷酸氢二钠(mmol/L) 8.57 8.57 8.57 8.57 8.57 0 13.01
一水合枸橼酸(mmol/L) 6.19 6.19 6.19 6.19 6.19 18.13 0
二水合枸橼酸钠(mmol/L) 1.16 1.16 1.16 1.16 1.16 3.37 0
甘露醇(mg/mL) 12 12 12 0 0 12 12
蔗糖(mg/mL) 0 0 0 22 0 0 0
氯化钠(mmol/L) 105.41 105.41 105.41 105.41 148.87 105.41 105.41
聚山梨酯80(mg/mL) 1 1 1 1 1 1 1
pH值(用适量的NaOH调节) 5.2 4.7 5.7 5.2 5.2 4.5 6.0
1-3处方筛选实验方法
本实验将高温贮存及剧烈振摇作为处方筛选的考察条件，通过比较各个处方样品在不同条件下的稳定性表现，快速的筛选出最佳处方。
振摇稳定性实验的考察条件为25℃、250rpm的转速条件，正置水平振摇，振摇5天，其中第0天和5天分别取样品进行分析测试。
40℃稳定性实验的考察条件为40℃放置一个月，其中第0周，2周和1个月分别取样品进行分析测试。
2～8℃稳定性实验的考察条件为2～8℃放置三个月，其中第0个月，1个月，2个月和3个月分别取样品进行分析测试。
1-4分析检测方法
取样后的样品分别进行物理、化学、生物检测，检测项目包括pH值、渗透压、DSC、纯度(SEC-HPLC、CEX-HPLC)、DLS、生物活性及不溶性微粒。
纯度检测：分子尺寸排阻高效液相色谱法分析(SEC-HPLC)。
生物活性检测：通过考察系列稀释的抗体对于TNF-α的中和作用和对细胞的保护作用计算出相对生物活性。
DSC热分析方法：差示扫描量热法(DSC)检测分析蛋白吸收释放热量Tm值。
DLS分析方法：利用动态光散射方法(DLS)检测不溶性微粒粒径。
电荷异构体检测：采用阳离子交换色谱法(CEX-HPLC)测定电荷异质体主峰含量。
2.处方筛选结果与分析
2-1DSC扫描结果与分析
7种处方样品在DSC热扫描分析蛋白吸收释放热量结果如表2所示，结果表明Tm值和处方pH值有着一定的正相关性，pH值较高的处方表示出了较高的Tm值，从而表明蛋白在该体系中可能具有比较好的热稳定性。P1(市售处方)、P4、P5处方样品均展现了非常接近的Tm值，具有相近的热稳定性。
表2DSC实验数据
处方编号 Tm初始变构温度(℃) Tm 1变构温度峰值(℃)
P1 60.9 73.6
P2 56.9 72.3
P3 64.2 73.6
P4 62.1 73.7
P5 61.0 73.1
P6 51.3 61.3
P7 65.6 74.4
2-2振摇实验结果与分析
7种处方样品在振摇5天后，对pH值、渗透压、不溶性微粒、DLS、SEC-HPLC、CEX-HPLC、生物学活性等指标进行检测，检测结果与T0相比，未发生明显改变。检测结果如表3所示。
表3振摇实验数据汇总(250rpm，25℃)
Figure BDA0001931194150000111
(NA表示没有得到)
2-3 40℃高温加速实验结果与分析
表4 40℃高温实验数据汇总(40℃)
Figure BDA0001931194150000121
Figure BDA0001931194150000131
其中DLS检测结果显示，7种处方样品的平均粒子尺寸在40℃条件下放置1个月后较T0样品基本无变化，其中P2、P4和P6在规定考察条件1个月后，呈现出了较高的粒子分布系数(PDI)，显示体系可能变得不再均一稳定，P3、P5、P7表现与P1相当。
SEC-HPLC检测结果显示，7种处方样品在40℃放置1个月后主峰纯度较T0样品均出现了不同程度的下降，其中P2和P6呈现出了较大程度的下降，分别下降了4.6％和7.1％，这与DSC热稳定性扫描结果一致，说明低pH值条件下，该蛋白的热稳定性较差，主要表现为降解峰升高。P3和P7主峰纯度下降弱于P1，但是聚合物增加明显，说明在高温高pH值条件下，会引起聚体的增加。P5与P1的结果基本一致。
CEX-HPLC检测结果显示，7种处方样品在40℃放置1个月后，主峰含量较T0样品均出现了不同程度的下降，其中P2和P6的纯度下降量明显高于P1，其余处方呈现基本一致的变化趋势，处方间差异不明显。
上述结果说明本品对40℃高温敏感。在颗粒方面，7种处方的不溶性微粒检测结果在40℃放置1个月后没有发生明显变化；DLS检测显示P4和P6在40℃放置1个月后体系相对不均一，稳定性较差，其余处方间未见明显差异。在纯度方面(SEC-HPLC，CEX-HPLC)，7种处方在40℃放置1个月后均有所下降，其中P2和P6下降量高于P1，P3和P7虽然纯度差异不大，但其聚体增加较为明显。其余指标与处方P1呈现基本一致的变化趋势，处方间无明显差异。P1和P5处方样品在本次高温加速实验考察中基本表现出了相近的稳定性。
2-4 2～8℃长期稳定性实验结果与分析
2～8℃长期稳定性实验检测结果汇总见表5。DLS检测结果显示，P2样品在2～8℃条件下放置3个月后PdI值较T0增加，变化较明显；其余处方样品的平均粒子尺寸和PdI在规定考察条件下放置3个月后较T0样品均无显著变化，处方间差异不明显。
CEX-HPLC检测，P6样品在2～8℃放置3个月后，主峰含量较其T0的下降2.7％；其余处方的主峰含量较其T0样品没有发生明显下降，P2～P7样品的CEX-HPLC结果的变化趋势与P1样品检测结果基本一致。
上述结果说明，P2、P6样品在2～8℃放置3个月后其表现的结果最不理想，其余处方样品在规定考察条件下表现出与P1市售处方一致的、良好的稳定性。
表5 2～8℃长期稳定性实验数据汇总(2～8℃)
Figure BDA0001931194150000151
Figure BDA0001931194150000161
综上所述，处方实验检测结果中，P1和P5处方样品在振摇、40℃高温和2～8℃稳定性实验考察中表现出良好的稳定性。说明本发明的仅使用氯化钠而不添加甘露醇作为等渗调节剂的制剂，与添加了甘露醇的制剂相比在热扫描、振摇、40℃高温、2～8℃长期保存条件下稳定性都相近，没有明显差别，但本发明方制剂简化了处方结构，降低了制剂成本，且避免了使用甘露醇所带来的组分相互作用的风险，减小了副作用，提高了用药安全。说明本发明的制剂具有更优越的性质。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种抗TNF-α抗体的注射液制剂，其特征在于，所述制剂包括：
(i)治疗有效量的抗TNF-α抗体；
(ii)等渗调节剂；
(iii)缓冲液；和
(iv)表面活性剂；
其中，所述等渗调节剂为氯化钠，所述制剂的pH为4.5-6.0。
2.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述抗TNF-α抗体含量为40～60mg/mL，较佳地，45～55mg/mL，更佳地，48-52mg/ml。
3.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述抗TNF-α抗体为单克隆抗体。
4.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述缓冲液选自枸橼酸/枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、琥珀酸/琥珀酸盐缓冲液、酒石酸/酒石酸盐缓冲液、马来酸/马来酸盐缓冲液，或其组合。
5.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述氯化钠的浓度为100～180mmol/L，更佳地，130～160mmol/L，更佳地，为140-150mmol/L。
6.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述制剂的pH范围5.0-5.5，较佳地，为5.2。
7.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述表面活性剂的质量浓度为0.05％～0.2％，较佳地，0.05～0.15％，更佳地，0.08-0.12％，以所述制剂总质量计。
8.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述表面活性剂为聚山梨酯。
9.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述制剂包括40～60mg/mL的抗TNF-α单克隆抗体、5～25mmol/L的枸橼酸/枸橼酸盐缓冲液、5～25mmol/L的磷酸盐缓冲液、130～160mmol/L的氯化钠和0.05％～0.2％的聚山梨酯，且所述制剂的pH值为4.5～6.0。
10.如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述制剂包括40～60mg/mL的抗TNF-α单克隆抗体、5～25mmol/L的枸橼酸/枸橼酸钠缓冲液、5～25mmol/L的磷酸二氢钠/磷酸氢二钠缓冲液、140～150mmol/L的氯化钠和0.05-0.2％的聚山梨酯80，且所述制剂的pH值为5.2。
CN201811641361.9A 2018-12-29 2018-12-29 一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂 Pending CN111375058A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811641361.9A CN111375058A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811641361.9A CN111375058A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111375058A true CN111375058A (zh) 2020-07-07

Family

ID=71222437

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811641361.9A Pending CN111375058A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111375058A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210292419A1 (en) Immunoglobulin formulation and method of preparation thereof
EP3085385B1 (en) Pharmaceutical composition comprising adalimumab
CA2618068C (en) Stable aqueous protein or antibody pharmaceutical formulations and their preparation
EP1409018B1 (en) Stable lyophilized pharmaceutical formulation the igg antibody daclizumab
EP3532029B1 (en) Liquid pharmaceutical composition
CN110354073B (zh) 一种免疫抑制剂单克隆抗体的液体制剂
EP3639845B1 (en) Il-15 protein complex pharmaceutical composition and uses thereof
EP3888678A1 (en) Anti-pd-l1 antibody preparation
CN111375057A (zh) 一种包含抗Her2单克隆抗体的药物配制剂
CN113769081A (zh) 一种稳定的高浓度抗人il-5单克隆抗体液体制剂
CN107028897A (zh) 免疫调节剂胸腺五肽粉针剂药物组合物和质控方法
WO2021249551A1 (zh) 一种抗pd-1单克隆抗体液体制剂
CN111375058A (zh) 一种抗肿瘤坏死因子-α抗体注射液制剂
EP3434283A1 (en) Medicinal composition comprising peg anti-human ngf antibody fab' fragment
EP4070817A1 (en) Liquid preparation containing anti-il-17 antibody
CN114007648B (zh) 包含抗lag-3抗体的制剂、其制备方法及其用途
CN113082203B (zh) 一种免疫抑制剂单克隆抗体的液体制剂
WO2021175175A1 (zh) 一种包含贝伐珠单抗的药物配制剂
WO2021228113A1 (zh) 包含抗IL-23p19抗体的制剂、其制备方法和用途
CN116077646A (zh) 一种抗冠状病毒s蛋白的抗体制剂及其制备方法和用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20200707