CN106998743B - 调节脂肪酸受体活性的化合物及包含该化合物的宠物食品 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种风味组合物，其包含至少一种调节、增加和/或增强可用于增强宠物食品的脂肪酸味道和/或适口性的GPR120脂肪酸受体的活性的化合物。本文还公开了鉴别所述化合物的方法。

Description

调节脂肪酸受体活性的化合物及包含该化合物的宠物食品

对相关申请的交叉引用

本申请要求于2014年12月10日提交的美国临时申请序列号62/090,138的优先权，该申请的内容通过引用的方式全部并入。

技术领域

本文公开的主题涉及化合物，以及包括与脂肪酸受体相互作用的至少一种化合物的风味组合物。该风味组合物可用于增强或改良宠物食品的适口性、味道和/或风味。该风味组合物可以包括化合物的组合，并且可以各种递送系统形式添加到宠物食品中。

背景技术

可食用组合物的味道特征(taste profile)包括基础味道如甜味、咸味、苦味、酸味、鲜味和厚味(kokumi)。味道特征也已经被描述为包括游离脂肪酸的味道。引发这些味道的化学化合物通常被称为促味剂。据推测，促味剂是由口腔和咽喉中的味觉受体感测，该味觉受体将信号传递到其中记录促味剂和产生味道特征的大脑。味觉受体包括GPR120(也称为GPR129、O3FAR1、PGR4、FFAR4)味觉受体，其被预测为G蛋白偶联的细胞表面受体，其含有参与特定脂肪酸检测的七种跨膜结构域，并且与细胞内部分相关的G蛋白参与信号转导。GPR120被认为以它们的游离形式结合中到长链的脂肪酸，如油酸和亚油酸。已经预测到，GPR120受体的两种同种型(剪接变体)GPR120L和GPR120S存在于人类的结肠内分泌细胞上。已经提出长的同种型在功能上不标志味道的感知。

GPR120在各种哺乳动物组织中表达，是不饱和长链脂肪酸的已知受体。已知GPR120参与来自STC-1(肠分泌细胞系)的胆囊收缩素(CCK)分泌的刺激，并且已经报道GPR120对葡萄糖样肽(GLP 1)的分泌具有刺激作用。虽然已经探索了GPR120在应激调节和胰岛素敏化中的潜在参与，以及其潜在的抗炎和抗肥胖作用(参见例如Cartoni等人，神经科学杂志(JNeurosci.)，2010年6月23日；30(25):8376-82；Céline等人，公共科学图书馆(PLoS One)，2011；6(8):e24014；2007年11月29日公开的国际公开号WO/2007/134613；2008年6月18日公开的欧洲公开号EP1932920A1；和2006年8月9日公布的欧洲公开号EP1688138A1)，一直未提出GPR120参与调节宠物食品特别是猫科动物和犬科动物食品的适口性。

宠物食品制造商长期希望提供具有高营养价值的宠物食品。此外，特别考虑到猫科动物与犬科动物食品，宠物食品制造商希望高度的适口性，使宠物可以从它们的食物得到充分的营养益处。家养动物，尤其是猫科动物，对它们的食物偏好是出名地善变，并且常常拒绝食用已经接受了一段时间的宠物食品或拒绝食用仅仅最小量的宠物食品。结果是，宠物主人经常改变宠物食品的类型和品牌，以保持他们的宠物处于健康和满足的状态。

虽然最近在味道和风味技术方面存在进展，但仍需要通过增强或改变宠物食品的味道特征、质地特征(texture profile)和/或风味特征(flavor profile)而增强或改变宠物食品的适口性的化合物。增强或改变可以是增加希望的属性的强度，以取代宠物食品中不存在或不知何故丢失的希望的属性，或以降低不希望的属性的强度。特别地，期望增加宠物食品中促味剂的强度。因此，本领域中仍然需要增强宠物食品的适口性和/或味道的组合物，其与控制肥胖或控制脂肪酸摄入的任何尝试分离。

发明内容

本文公开的主题涉及风味组合物以及跨各种宠物食品制备和改良这种组合物的方法。具体而言，本发明涉及包含一种或多种增强、增加和/或调节脂肪酸受体GPR120的活性的化合物的组合物。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含选自由以下组成的组的一种或多种化合物：

(5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酸(也称为花生四烯酸)；

(5Z,8Z)-二十碳-5,8-二烯酸；

4-[4-(庚氧基)苯基]-4-氧代丁酸；

(11Z)-十八碳-11-烯酸(也被称为顺十八碳烯酸)；

(9E)-十六碳-9-烯酸(也被称为棕榈反油酸(Palmitelaidic acid))；

十三碳-12-烯酸(也被称为12-十三碳烯酸)；

S-法呢基硫代乙酸(S-Farnesyl Thioacetic Acid)；

(10Z)-十五碳-10-烯酸(也被称为(10Z)-10-十五碳烯酸)；

10(E),12(Z)-共轭亚油酸(也被称为(10Z,12Z)-10,12-十八碳二烯酸)；

(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯酸；

(9Z,11E)-十八碳-9,11-二烯酸；

顺-7-十六碳烯酸；

十二烷酸(也被称为月桂酸)；

(9Z)-十四碳-9-烯酸(也被称为肉豆蔻脑酸(Myristoleic acid))；

(11Z,14Z,17Z)-二十碳-11,14,17-三烯酸(也被称为二高-α-亚麻酸(Dihomo-α-linolenic acid)(20:3(n-3)))；

(6Z,9Z,12Z)-十八碳-6,9,12-三烯酸(也被称为γ-亚麻酸)；

(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯酸(也被称为二高亚麻酸(Dihomolinoleic acid)(20:2(n-6)))；

(9Z)-十六碳-9-烯酸(也被称为棕榈酸酯(palmitoleate),(Z)-棕榈油酸)；

12-甲氧基十二烷酸；

(8Z,11Z,14Z)-二十碳-8,11,14-三烯酸；

(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(也被称为亚油酸)；

(10Z)-十七碳-10-烯酸；

松油酸；

(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯酸(也被称为α-亚麻酸)；

十三烷酸(也被称为十三酸)；

十四烷酸(也被称为肉豆蔻酸)；

(9Z)-十八碳-9-烯酸(也被称为油酸)；

GW 9508(也被称为4-[[(3-苯氧基苯基)甲基]氨基]苯丙酸)；

(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯酸(也被称为二十碳五烯酸)；

3-(4-((4-氟代-4'-甲基联苯基-2-基)甲氧基)苯基)丙酸(也被称为TUG 891和4-[(4-氟代-4'-甲基[1,1'-联苯基]-2-基)甲氧基]-苯丙酸)；

(10E)-十五碳-10-烯酸；

(9E)-十四碳-9-烯酸(也被称为肉豆蔻脑酸)；

(6Z,9Z,12Z,15Z)-十八碳-6,9,12,15-四烯酸；

(5Z,8Z,11Z)-二十碳-5,8,11-三烯酸(也被称为二十碳三烯酸(Mead acid))；和

单正十二烷基磷酸酯(Dodecyl dihydrogen phosphate)。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含式I化合物，该式I化合物包含如下结构：

其中R是取代或未取代的烃链。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含式II化合物，该式II化合物包含如下结构：

其中X、X₁、Y、W、Z₁、Z₂、n₁、n₂和n₃如本文所述。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含式III化合物，该式III化合物包含如下结构：

其中X、X₁、Y、W、R、n₁、n₂和n₃如本文所述。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含具有结构R-X的化合物，其中X是羧基或羧酸盐的生物电子等排取代，R是取代或未取代的烃链。

本发明还提供本文所述化合物的盐和立体异构体。

在某些实施方案中，风味组合物还包含至少一种、二种、三种、四种、五种或更多种第一氨基酸和/或至少一种、二种、三种、四种、五种或更多种第二氨基酸。第一氨基酸的非限制性实例包括色氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、酪氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺和亮氨酸。第二氨基酸的非限制性实例包括苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、羟基脯氨酸、精氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、缬氨酸、精氨酸、谷氨酸一钠(MSG)和牛磺酸。

在某些实施方案中，风味组合物还可包含至少一种标准核苷酸。标准核苷酸的非限制性实例包括鸟苷单磷酸(GMP)、腺苷单磷酸(AMP)、胞苷单磷酸(CMP)、肌苷单磷酸(IMP)、尿苷单磷酸(UMP)、胸苷单磷酸(TMP)和黄苷单磷酸(XMP)。在某些实施方案中，风味组合物还可包含至少一种本文所述的核苷酸衍生物。

在某些实施方案中，风味组合物还可包含至少一种如本文所述的跨膜化合物。

在某些实施方案中，本发明提供包括风味组合物的宠物食品，该风味组合物包含化合物，其中所述风味组合物以有效增加食品的脂肪酸味道的量存在，正如通过味道测试者小组测定的。

在某些实施方案中，本发明提供包括风味组合物的宠物食品，该风味组合物包含化合物，其中所述风味组合物以宠物食品的约0.001重量％至约10重量％(％w/w)，或约0.01％w/w至约1％w/w的浓度存在。在某些实施方案中，宠物食品是猫科动物宠物食品。

在某些实施方案中，本发明提供了包括风味组合物的宠物食品，该风味组合物包含化合物。在某些实施方案中，风味组合物以宠物食品的约0.01ppm至约1000ppm的浓度存在。可选地或另外地，化合物可以在宠物食品中以约10pM至约1M的浓度存在。

本发明还提供了提高宠物食品的适口性的方法。在某些实施方案中，该方法包括将宠物食品与风味组合物混合。在某些实施方案中，风味组合物以该混合物的约0.001重量％至约10重量％的浓度存在。

在本发明的某些实施方案中，用于提高宠物食品的适口性的方法包括将宠物食品与风味组合物混合。在某些实施方案中，风味组合物以混合物的约0.01ppm至约1000ppm的浓度存在。可选地或另外地，至少一种化合物在混合物中以约为10pM至约1M的浓度存在。

在本发明的某些实施方案中，将风味组合物以有效提高宠物食品的适口性的量与宠物食品混合。

本文公开的主题还提供了调节脂肪酸受体的活性的方法，包括使组合物与脂肪酸受体例如包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的猫科动物脂肪酸受体接触，其中组合物与一种或多种氨基酸在选自由以下组成的组的脂肪酸受体相互作用位点相互作用：螺旋2上的PHE88、VAL95、VAL98和ARG99；螺旋3上的PHE115、MET118、SER119、GLY122、SER123；螺旋5上的TRP207、PHE211、VAL212、ASN215；螺旋6上的TRP277、ILE280、ILE281、ILE284；和螺旋7上的TRP299、PHE303、PHE304、VAL307、THR310、PHE311；及它们的组合。

本文公开的主题还提供了用于鉴别调节脂肪酸受体的活性的组合物的方法，包括使测试剂与脂肪酸受体接触并检测在本文所述的脂肪酸受体相互作用位点测试剂与一种或多种氨基酸之间的相互作用。

前述内容已相当广泛地概述了本申请的特征和技术优点，以便可以更好地理解下面的详细描述。下文中将描述本申请的其它特征和优点，这构成本申请的权利要求的主题。本领域技术人员应当理解，所公开的概念和具体实施方案可以容易地用作修改或设计其它结构以执行本申请的相同目的基础。本领域技术人员还应当认识到，这样的等效结构并不背离如所附权利要求阐述的本申请的精神和范围。通过下面的描述可以更好地理解关于其组织和操作方法被视为本申请的特点的新特征以及进一步的目的和优点。

附图说明

图1显示三种不同剂量的各种化合物的体外fGPR120受体活性水平，如实施例1所述。

图2显示各种化合物的体外fGPR120激活的剂量响应曲线，如实施例1所述。

图3显示实施例1和图1及图2所述的提高fGPR120活性的化合物的化学结构。每种化合物中的碳原子数示出在标记为“L”的列中，每种化合物中的双键数目示出在标记为“S”的列中。

图4A至图4C显示化合物3-(4-((4-氟-4'-甲基联苯-2-基)甲氧基)苯基)丙酸(也称为TUG891)与fGPR120结合的计算机建模。(A)显示结合化合物的结构，(B)显示与fGPR120结合的化合物模型，(C)显示与结合化合物相互作用的推定的fGPR120氨基酸残基。

图5A至图5C显示化合物4-[4-(庚氧基)苯基]-4-氧代丁酸与fGPR120结合的计算机建模。(A)显示结合化合物的结构，(B)显示与fGPR120结合的化合物模型，(C)显示与结合化合物相互作用的推定的fGPR120氨基酸残基。

图6A至图6C显示化合物二十碳五烯酸与fGPR120结合的计算机建模。(A)显示结合化合物的结构，(B)显示与fGPR120结合的化合物模型，(C)显示与结合化合物相互作用的推定的fGPR120氨基酸残基。

图7显示二十碳五烯酸、3-(4-((4-氟-4'-甲基联苯-2-基)甲氧基)苯基)丙酸和4-[4-(庚氧基)苯基]-4-氧代丁酸的重叠(overlay)，示出fGPR120的Arg99相对于结合受体时化合物的位置。

图8A至图8B显示化合物油酸与fGPR120结合的计算机建模，其中在油酸的羧基和fGPR120的Arg99之间形成盐桥。(A)显示结合化合物的结构，(B)显示与fGPR120结合的化合物模型，其中示出了与结合化合物相互作用的推定的fGPR120氨基酸残基。

图9A至图9C显示化合物亚油酸与fGPR120结合的计算机建模，其中在亚油酸的羧基与fGPR120的Arg99之间形成盐桥。(A)显示结合化合物的结构，(B)显示与fGPR120结合的化合物模型，(C)显示与结合化合物相互作用的推定的fGPR120氨基酸残基。

图10显示被鉴别为SEQ ID NO：1的fGPR120受体的氨基酸序列。

图11显示在激动剂和PAM模式中通过配体激活fGPR120的体外细胞测定中测定的单正十二烷基磷酸酯的剂量响应曲线。

图12显示如实施例3所述的用于激活fGPR120的体外细胞测定中对照α-亚麻酸和ATP的剂量响应曲线。

具体实施方式

迄今为止，仍然需要一种风味改良剂，其可以以增加和/或增强猫科动物的各种宠物食品的适口性。本申请涉及包含至少一种化合物的风味组合物。该风味组合物可以用于增加适口性和/或增强或改良各种宠物食品的味道，如营养全面的宠物食品。该风味组合物还可以包括化合物的组合，该化合物包括氨基酸、核苷酸和呋喃酮(如2013年10月31日提交的国际申请PCT/EP2013/072788，2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072789，2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072790和2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072794中所述，各自通过引用整体并入)、核苷酸衍生物(如2015年12月10日提交的国际申请PCT/US15/65046中所述，其通过引用整体并入)和/或跨膜化合物(如2015年12月10日提交的国际申请PCT/US15/65036中所述，其通过引用整体并入)，并且可以各种递送系统形式添加到宠物食品中。

1.定义

本说明书中使用的术语通常具有它们在本发明的上下文以及每种术语使用的特定上下文中本领域的通常含义。某些术语将在下面或说明书其它地方讨论，以在描述本发明的组合物和方法以及如何制造和使用它们方面为从业者提供进一步的指导。

如本文所使用的，权利要求和/说明书中与术语“包含”结合使用的词语“一”或“一种”可以表示“一种”，但其也与“一种或多种”、“至少一种”和“一种或多于一种”的含义一致。进一步地，术语“具有”、“包括”“含有”和“包含”可互换，并且本领域技术人员认识到这些术语是开放性术语。

术语“约”或“大约”意在本领域普通技术人员所确定的特定值的可接受误差范围，这将部分地取决于如何测量或确定值，即测量系统的限制。例如，按照本领域的实践，“约”可以在3个或多余3个标准偏差内。可选地，“约”可以表示给定值的至多20％、优选至多10％、更优选至多5％和仍更优选至多1％的范围。可选地，特别是对于生物系统或过程，该术语可以表示在一种值的一种数量级内，优选在5倍内，更优选在2倍内。

如本文所使用的，“味道”是指激活或抑制种体味蕾中的受体细胞所引起的感觉。在某些实施方案中，味道可以选自甜味、酸味、咸味、苦味、厚味和鲜味。在某些实施方案中，味道由种体中的“促味剂”引起。在某些实施方案中，促味剂是合成促味剂。在某些实施方案中，促味剂是从天然来源制备。

在某些实施方案中，“味道”可以包括游离脂肪酸味道。参见，例如Cartoni等人,J.of Neuroscience(神经科学杂志),30(25):8376-8382(2010)，其内容在此通过引用并入本文。在某些实施方案中，游离脂肪酸味道是由种体味蕾中受体细胞(例如受体GPR120)的激活或抑制引起的感觉，并且与脂肪食物的质地和嗅觉感觉不同，脂肪食物例如具有粘稠、光滑、油腻、黏附感(mouth-coating)或奶油般质地的食物。

如本文所使用的，“味道特征”是指味道的组合，例如甜味、酸味、咸味、苦味、鲜味、厚味(kokumi)和游离脂肪酸味道的一种或多种。在某些实施方案中，味道特征是由以相同或不同浓度存在于组合物中的一种或多种促味剂产生。在某些实施方案中，味道特征是指味道或味道的组合的强度，例如由种体或本领域已知的任何测定法所检测的甜味、酸味、咸味、苦味、鲜味、厚味和游离脂肪酸味道。在某些实施方案，修改、改良或变化味道特征中促味剂的组合可以改变种体的感官体验。

如本文所使用的，“风味”指的是一种或多种感官刺激，例如，味道(味觉)、气味(嗅觉)、触摸(触觉)和温度(热)刺激的一种或多种。在某些非限制性实施方案中，个体暴露于风味的感官体验可以被归类为对特定风味的特有体验。例如，风味可被种体被鉴别为，但不限于，花、柑橘、浆果、坚果、焦糖、巧克力、胡椒、烟熏、干酪、肉等的风味。如本文所用，风味组合物可以选自液体、溶液、干粉、喷雾剂、膏剂、悬浮液和它们的任何组合。风味剂可以是天然组合物、人造组合物、天然等同物或者它们的任意组合。

如本文可互换使用的，“芳香”和“气味”指的是对刺激的嗅觉反应。例如，而不是通过限制的方式，芳香可以通过由嗅觉系统的气味受体感知的芳香物质产生。

如本文所使用的，“风味特征”指的是感官刺激例如味道，诸如甜味、酸味、苦味、咸味、鲜味、厚味和和游离脂肪酸味道，和/或嗅觉、触觉和/或热刺激的组合，在某些实施方案中，风味特征包括有助于种体的感官体验的一种或多种风味。在某些实施方案种，修改、改良或变化风味特征种刺激的组合可以改变种体的感官体验。

如本文所使用的“混合”，例如，“将本申请的风味组合物或它们的组合与食品混合”，是指其中在产品形成过程中或这些步骤的一些组合中将风味组合物或风味组合物的各组分混合或添加到成品产品或与产品的一些或所有组分混合的过程。当在混合的上下文中使用时，术语“产品”指的是产品或其任何组分。此混合步骤可包括选自以下步骤的过程：将风味组合物添加到产品，在产品上喷雾风味组合物，在产品上涂布风味组合物，在风味组合物中悬浮产品，在产品上涂装风味组合物，在产品上粘合风味组合物，用风味组合物包封产品，将风味组合物与产品及它们的任何组合混合。风味组合物可以是液体、乳液、干粉、喷雾剂、膏剂、悬浮液和它们的任何组合。

在某些实施方案中，可以在宠物食品的处理例如杀菌、干馏和/或挤出的过程中，由宠物食品中存在的前体化合物生产风味组合物的化合物。在非限制性实施例中，该组合物可以是在宠物食品的处理过程中从一种或多种甘油三酯释放的游离脂肪酸。在某些实施方案中，游离脂肪酸在甘油三酯的热、酸和/或酶处理的过程中产生。在某些方案中，甘油三酯存在于被处理以生产宠物食品的肉(例如鸡肉、牛肉、猪肉、鱼肉和/或动物脂油)和/或蔬菜(例如油类，如蔬菜和葵花籽油)来源。

如本文所使用的，“ppm”是指百万分之一份，其是重量相对参数。百万分之一份为每克的微克数，使得以10ppm存在的组分为每1克集料混合物10微克特定成分。

如本文所使用的，“适口性”可指动物食用某一食品的总体意愿。增加宠物食品的“适口性”可导致伴侣动物对宠物食品的享受和接受的增加，以确保动物食用“健康量”的宠物食物。本文所用的术语“健康量的”宠物食物是指能够使伴侣动物维持或实现有助于其全部总体健康的微量营养素、常量营养素和热量方面摄入的量，如“Mars Petcare EssentialNutrient Standards(马斯宠物护理的必需营养素标准)”中所述的。在某些实施方案中，“适口性”可意指动物对一种食品较另一种的相对偏好。例如，当动物显示对两种或更多种食品的一种的偏好，所偏好的食品是更“可口的”，并且具有“增强的适口性”。在某些实施方案中，可以确定一种食品较一种或多种其它食品的相对偏好性，例如，与此同时，例如通过食品的相对消费或指示适口性的偏好的其它适当的测量进行的自由选择比较。适口性可以通过其中动物可以公平获取两种食品的标准测试方案确定，诸如所谓的“双碗试验”或“相对测试”的测试。这种偏好可以由动物的任何感觉引起，但可以与特别是味道、回味、气味、口感和/或质地有关。

术语“宠物食物”或“宠物食品”是指预期由伴侣动物如猫科动物、犬科动物、豚鼠、兔、鸟和马用于消费的产品或组合物。例如，而不是通过限制的方式，伴侣动物可以是“家养”猫科动物如家猫科动物(Felis domesticus)。在某些实施方案中，伴侣动物可以是“家养”犬科动物，例如家犬科动物(Canis lupus familiaris)。“宠物食物”或“宠物食品”包括任何食品、饲料、小吃、食品补充剂、液体、饮料、零食、玩具(可咀嚼和/或可食用的玩具)、膳食替代品或膳食替代。

本文使用的“营养全面的”指的是包含对于食品的预期接受者而言的所有已知的必需营养物的宠物食品，以基于伴侣动物营养领域公认的或者主管机关所推荐的适当的量和比例。此类食品因此能够作为维持生命的膳食摄入的唯一来源，无需添加补充营养源。

如本文所使用的，“风味组合物”是指至少一种化合物或其生物学上可接受的盐，其调节包括增强、增加、加强、降低、抑制或诱导动物或人中的天然或合成的促味剂、风味剂、味道特征、风味特征和/或质地特征的味道、气味、风味和/或质地。在某些实施方案中，风味组合物包含化合物或其生物上可接受的盐的组合。在某些实施方案中，风味组合物包含一种或多种赋形剂。

如本文所用，术语“调节”或“改良”是指受体的特定活性的量、质量或作用的增加或减少，和/或受体的表达、活性或功能的增加或减少。本文所用的“调节剂”是指使用例如激动剂、拮抗剂及其同系物(包括片段、变体和模拟物)进行计算机、体外和/或体内测定而鉴别的任何抑制或激活化合物。

本文所用的“抑制剂”或“拮抗剂”是指降低、减少、阻断、阻止、延迟激活、失活、脱敏或下调受体的生物学活性和/或表达或感兴趣的途径的调节化合物。

本文所用的“诱导剂”、“激活剂”或“激动剂”是指增加、诱导、刺激、开放、激活、促进、增强激活、敏化或下调受体或感兴趣的途径的调节化合物。

如本文所用，术语“载体”和“表达载体”是指线性或圆形的DNA分子，其中可以整合适当大小的另一DNA序列片段。这样的DNA片段可以包括提供由DNA序列片段编码的基因转录的其它区段。其它片段可以包括但不限于：启动子、转录终止子、增强子、内部核糖体进入位点、非翻译区、多聚腺苷酸化信号、选择性标记、复制起点等。表达载体通常衍生自质粒、粘粒、病毒载体和酵母人造染色体。载体通常是含有多种来源的DNA序列的重组分子。

术语“可操作地连接”当应用于DNA序列时，例如在表达载体中，表示序列被排列成使得它们协同起作用以达到其预定目的，即启动子序列允许开始转录，并且转录通过距离终止信号尽可能远的连接的编码序列进行。

本文所用的术语“核酸分子”和“核苷酸序列”是指单链或双链共价连接的核苷酸序列，其中每种核苷酸的3'和5'末端通过磷酸二酯键连接。核酸分子可以包括脱氧核糖核苷酸碱基或核糖核苷酸碱基，并且可以在体外合成制备或从天然来源分离。

本文中可互换使用的术语“多肽”、“肽”、“氨基酸序列”和“蛋白质”是指由至少两个氨基酸连接形成的分子。一个氨基酸残基与下一个氨基酸残基之间的连接是酰胺键，有时也被称为肽键。可以通过本领域已知的合适方法获得多肽，包括从天然来源的分离，重组表达系统中的表达，化学合成或酶合成。该术语可应用于其中一种或多种氨基酸残基是天然存在的氨基酸对应的人造化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。

本文所用的术语“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及之后被修饰的那些氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物和衍生物可以指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构的化合物，即结合于氢、羧基、氨基和R基团的碳，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜和甲硫氨酸甲基锍。这样的类似物可以具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽主链，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构但是以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的化合物。

本文中可互换使用的术语“分离的”或“纯化的”是指从其天然结合的组分中去除的核酸、多肽或其他生物部分。术语“分离的”可以指与完全生物体分离和离散的多肽，该分子在天然存在下被发现，或者存在于基本上不存在相同类型的其它生物大分子的情况下。关于多核苷酸的术语“分离的”可以指核酸分子天然地全部或部分缺乏通常与之连接的序列；或其天然存在但具有与之连接的异源序列的序列；或从染色体分离的分子。

如本文所用，术语“重组”可用于描述核酸分子，并且是指基因组、RNA、DNA、cDNA、病毒、半合成或合成来源的多核苷酸，其通过其来源或操作与全部或部分多核苷酸连接(与其是天然连接)。

本文所用的术语“融合”是指通过遗传或化学方法连接不同的肽或蛋白质区段，其中肽或蛋白质区段的连接末端可以彼此直接相邻，或者可以通过接头或间隔部分如氨基酸残基或其它连接基团隔开。

2.脂肪酸受体

本文公开的主题提供了用于所公开方法的脂肪酸受体。本发明的脂肪酸受体可以包括哺乳动物脂肪酸受体，例如但不限于猫科动物、犬科动物和人脂肪酸受体。

在某些非限制性实施方案中，本发明的脂肪酸受体由2014年12月18日公布的国际公开号WO 2014/199114所述的核酸编码，其全部内容通过引用并入本文。在某些非限制性实施方案中，本发明的脂肪酸受体包含国际公开号WO 2014/199114所述的氨基酸序列。

在某些非限制性实施方案中，该脂肪酸受体包含如2014年12月18日公布的国际公开号WO 2014/199114所述的猫科动物、犬科动物或人脂肪酸受体核苷酸序列。

在某些非限制性实施方案中，该脂肪酸受体包含如2014年12月18日公布的国际公开号WO 2014/199114所述的猫科动物、犬科动物或人脂肪酸受体氨基酸序列。

在某些实施方案中，用于本发明公开的主题的脂肪酸受体可以包括这样的受体，其包含具有与猫科动物、犬科动物和人脂肪酸受体核苷酸序列至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的核苷酸序列。

在某些实施方案中，用于本发明公开的主题的脂肪酸受体可以包括这样的受体，其包含具有与猫科动物、犬科动物和人脂肪酸受体氨基酸序列至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。

在某些实施方案中，所公开的主题提供分离或纯化的脂肪酸受体和/或其变体和片段的用途。所公开的主题还包括序列变体的用途。在某些实施方案中，可以在脂肪酸受体的核苷酸序列的编码区和非编码区中的一种或两种中发生变化。变体可以包括由生物体中相同遗传基因座编码的基本上同源的蛋白质，即等位基因变体。变体还包括衍生自生物体例如猫科动物中的其它遗传基因座的蛋白质，但与脂肪酸受体具有实质同源性，即同源物。变体还可以包括与脂肪酸受体基本同源但衍生自另一生物体的蛋白质，即直向同源物。变体还包括与通过化学合成产生的脂肪酸受体基本同源的蛋白质。变体还包括与通过重组方法产生的脂肪酸受体基本同源的蛋白质。

所公开的主题还提供了包含脂肪酸受体或其片段的融合蛋白。在某些实施方案中，本发明的融合蛋白可以包括可检测标记、功能基团，例如载体、标记、稳定序列或可以检测脂肪酸受体激动剂结合的机制。标记的非限制性实施方案包括FLAG标签、His标签、MYC标签、麦芽糖结合蛋白和本领域已知的其它标签。本文公开的主题还提供了编码这种融合蛋白的核酸、含有融合蛋白编码核酸的载体和包含这种核酸或载体的宿主细胞。在某些实施方案中，可以在脂肪酸受体的氨基末端(N末端)或脂肪酸受体的羧基末端(C末端)进行融合。

在某些实施方案中，本文公开的脂肪酸受体可以在序列的N末端和/或C末端含有另外的氨基酸，例如当用于所公开主题的方法时。在某些实施方案中，为了便于检测生物学活性，另外的氨基酸可以帮助固定多肽用于筛选目的，或允许多肽为融合蛋白的一部分，如上所述。

3.脂肪酸受体结合化合物

本发明涉及包含至少一种可以调节脂肪酸受体(例如GPR120受体)的活性的化合物的风味组合物。在某些实施方案中，组合物包含游离脂肪酸。本文公开的化合物通过体外测定和/或计算机测定法来鉴别，体外测定法中测定化合物激活培养物中由细胞表达的猫科动物GPR120受体(fGPR120)的能力，计算机测定法中用计算机测定化合物结合fGPR120的能力。风味组合物可用于增强或改良宠物食品的适口性、味道或风味。风味组合物可以包括化合物的组合，例如一种或多种化合物和/或一种或多种氨基酸和/或一种或多种核苷酸和/或一种或多种呋喃酮的组合，如本文和2013年10月31日提交的国际申请PCT/EP2013/072788、2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072789、2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072790、2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072794，各申请的全部内容通过引用并入本文；和/或一种或多种核苷酸衍生物的组合，如本文和2015年12月10日提交的国际申请号PCT/US15/65046所述，其全部内容通过引用并入本文；和/或一种或多种跨膜化合物的组合，如本文和2015年12月10日提交的国际申请号PCT/US15/65036所述，其全部内容通过引用并入本文，并且可以递送系统形式添加到各种宠物食品组合物中。

在某些实施方案中，至少一种脂肪酸受体调节化合物选自以下化合物：

(5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酸(也称为花生四烯酸)；

(5Z,8Z)-二十碳-5,8-二烯酸；

4-[4-(庚氧基)苯基]-4-氧代丁酸；

(11Z)-十八碳-11-烯酸(也被称为顺十八碳烯酸)；

(9E)-十六碳-9-烯酸(也被称为棕榈反油酸)；

十三碳-12-烯酸(也被称为12-十三碳烯酸)；

S-法呢基硫代乙酸；

(10Z)-十五碳-10-烯酸(也被称为(10Z)-10-十五碳烯酸)；

10(E),12(Z)-共轭亚油酸(也被称为(10Z,12Z)-10,12-十八碳二烯酸)；

(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯酸；

(9Z,11E)-十八碳-9,11-二烯酸；

顺-7-十六碳烯酸；

十二烷酸(也被称为月桂酸)；

(9Z)-十四碳-9-烯酸(也被称为肉豆蔻脑酸)；

(11Z,14Z,17Z)-二十碳-11,14,17-三烯酸(也被称为二高-α-亚麻酸(20:3(n-3)))；

(6Z,9Z,12Z)-十八碳-6,9,12-三烯酸(也被称为γ-亚麻酸)；

(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯酸(也被称为二高亚麻酸(20:2(n-6)))；

(9Z)-十六碳-9-烯酸(也被称为棕榈酸酯,(Z)-棕榈油酸)；

12-甲氧基十二烷酸；

(8Z,11Z,14Z)-二十碳-8,11,14-三烯酸；

(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸(也被称为亚油酸)；

(10Z)-十七碳-10-烯酸；

松油酸；

(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯酸(也被称为α-亚麻酸)；

十三烷酸(也被称为十三酸)；

十四烷酸(也被称为肉豆蔻酸)；

(9Z)-十八碳-9-烯酸(也被称为油酸)；

GW 9508(也被称为4-[[(3-苯氧基苯基)甲基]氨基]苯丙酸)；

(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯酸(也被称为二十碳五烯酸)；

3-(4-((4-氟代-4'-甲基联苯基-2-基)甲氧基)苯基)丙酸(也被称为TUG 891和4-[(4-氟代-4'-甲基[1,1'-联苯基]-2-基)甲氧基]-苯丙酸)；

(10E)-十五碳-10-烯酸；

(9E)-十四碳-9-烯酸(也被称为肉豆蔻脑酸)；

(6Z,9Z,12Z,15Z)-十八碳-6,9,12,15-四烯酸；

(5Z,8Z,11Z)-二十碳-5,8,11-三烯酸(也被称为二十碳三烯酸)；和

单正十二烷基磷酸酯。

本发明还提供本文所述化合物的盐、立体异构体和可食用形式。

在某些实施方案中，化合物是饱和脂肪酸。

在某些实施方案中，化合物是不饱和或多不饱和脂肪酸。

在某些实施方案中，化合物包含结构R-X，其中

X是羧基或羧酸盐的生物电子等排取代，例如但不限于磷酸盐、硼酸、磷酸酯、磷酸二酯、次膦酸、磺胺、丙二酸、2-磺基乙酸、磺酸、异羟肟酸、四唑、羟基脲、磷酰胺、C(O)OCH₂CH(OH)OP(O)(OR₁)(OR₂)，其中R₁和R₂各自独立地选自H、低级烷基(C₁至C₆)和Ph；或本领域已知的羧酸基团的任何其它生物电子等排取代；和

R是碳长度为约C₂至约C₄₀，或约C₄至约C₃₅，约C₆至约C₃₀，或约C₈至约C₂₈，或约C₁₀至约C₂₆，或约C₁₂至约C₂₄，或约C₁₄至约C₂₂，或约C₁₆和约C₂₀之间的烃链。在某些实施方案中，烃链具有约C₁₄至约C₂₂之间的碳长度。

在某些实施方案中，烃链可以是未取代的或被以下的一种或多种取代：H、CH₃、C₁至C₂₀、COOH、SO₃H、CHO、C(O)R₁、C＝CR₁R₂、C＝NOH、OP(O)(OR₁)(OR₂)、OR₁、SR₁、CN、COOR₁、CONR₁R₂、NO₂、NHOH、F、Cl、Br、I和NR₁R₂，其中R₁、R₂各自独立地选自H和支链或无支链的低级烷基(例如C₁至C₆)。

在某些实施方案中，烃链包含0至8个双键，例如，沿着烃链与单键交替布置。在某些实施方案中，化合物是(E)异构体。在某些实施方案中，化合物是(Z)异构体。在某些实施方案中，双键可以任选被氢、甲基或低级烷基的一种或多种取代，低级烷基例如碳长度在约C₁至C₁₂之间的烷基。

在某些实施方案中，烃链中的一个或多个碳被氧、硫、氮、酮、砜、亚砜、酰胺、脲或磺酰胺取代。

在某些实施方案中，本发明的化合物包含连接到烃链上的一种或多种带负电荷的基团。在某些实施方案中，带负电荷的基团包括例如羧基或羧酸盐的生物电子等排取代，例如但不限于磷酸盐、硼酸、磷酸酯、磷酸二酯、次膦酸、磺酰胺、丙二酸、2-磺基乙酸、磺酸、异羟肟酸、四唑、羟基脲、磷酰胺，或本领域技术人员已知的羧酸盐的任何其它生物电子等排取代。

在某些实施方式中，化合物包含脂肪酸。在某些实施方案中，脂肪酸不包含脂肪酸酯，例如甲酯或乙酯。

在某些实施方案中，化合物包含与GPR120的位置99(即Arg99)的精氨酸相互作用的羧基。在某些实施方案中，羧基与Arg99形成盐桥。在某些实施方案中，化合物的烃链与GPR120脂肪酸结合结构域中存在的其它GPR120氨基酸残基形成疏水相互作用。

在某些实施方案中，本发明的化合物包含具有以下结构的式I化合物：

其中R是烃链，例如，取代或未取代的碳长度为约C₁至约C₄₀，或约C₄至约C₃₅，或约C₆至约C₃₀，或约C₈至约C₂₈，或约C₁₀至约C₂₆，或约C₁₂至约C₂₄，或约C₁₄至约C₂₂，或约C₁₆至约C₂₀之间的烃链。在某些实施方案中，烃链具有约C₁₄至约C₂₂之间的碳长度。取代可以包括但不限于上述那些，例如，烃链可以被以下的一种或多种取代：H、CH₃、C₁至C₂₀、COOH、SO₃H、CHO、C(O)R₁、C＝CR₁R₂、C＝NOH、OP(O)(OR₁)(OR₂)、OR₁、SR₁、CN、COOR₁、CONR₁R₂、NO₂、NHOH、F、Cl、Br、I和NR₁R₂，其中R₁、R₂各自独立地选自H或支链或无支链的低级烷基(例如C₁至C₆)。

在某些实施方案中，本发明的化合物包含具有以下结构的式II化合物：

其中，

X为(C)R₁R₂、O、S、C(O)或化学键；

X₁为(C)R₁R₂、O、S或N(R₁)；

Y为COOH、SO₃H、-OP(O)(OH)₂或四唑；

W为卤素、COOH、COOMe、CN、N(R₁)(R₂)、CHO、CONR₁R₂、芳基、OH、H、-S-芳基、-O-芳基、-N-芳基、CF₃、OCH₃、CH₃、NO₂或OEt；

Z₁和Z₂各自独立地选自卤素、COOH、COOMe、CN、N(R₁)(R₂)、CHO、CONR₁R₂、芳基、OH、H、-S-芳基、-O-芳基、-N-芳基、CF₃、OCH₃、CH₃、NO₂和OEt；

R₁和R₂各自独立地选自H和支链或无支链C₁至C₆低级烷基；

n₁为0至4；

n₂为0至2；和

n₃为0至4。

在某些实施方案中，本发明的化合物包含具有以下结构的式III化合物：

其中，

X为(C)R₁R₂、O、S、C(O)或化学键；

X₁为(C)R₁R₂、O、S或N(R₁)；

Y为COOH、SO₃H、-OP(O)(OH)₂或四唑；

W为卤素、COOH、COOMe、CN、N(R₁)(R₂)、CHO、CONR₁R₂、芳基、OH、H、-S-芳基、-O-芳基、-N-芳基、CF₃、OCH₃、CH₃、NO₂或OEt；

R为CH₃或(R₄)(R₅)X₂；

R₁和R₂各自独立地选自H和支链或无支链的C₁至C₆低级烷基；

R₄和R₅各自独立地选自H、芳基和支链或无支链的低级烷基(C₁至C₁₀)；

n₁为0至4；

n₂为0至2；

n₃为1至12(支链或无支链C₂至C₂₀)；和

X₂是C或N。

在某些实施方案中，本发明的脂肪酸受体调节剂包含脂肪酸受体调节剂的盐，例如但不限于乙酸盐或甲酸盐。在某些实施方案中，脂肪酸受体调节剂的盐包含与阳离子(+)(例如但不限于Al³⁺、Ca²⁺、Na⁺、K⁺、Cu²⁺、H⁺、Fe³⁺、Mg²⁺、NH₄ ⁺和H₃O⁺)经由离子键键合的阴离子(-)(例如但不限于Cl^-、O^2-、CO₃ ^2-、HCO₃ ^-、OH^-、NO₃ ^-、PO₄ ^3-、SO₄ ^2-、CH₃COO^-、HCOO^-和C₂O₄ ^2-)。在其它实施方案中，脂肪酸受体激动剂盐包含与阴离子(-)经由离子键键合的阳离子(+)。在某些实施方案中，本发明的化合物包含化合物的钠盐或钾盐。

在某些实施方案中，本申请的脂肪酸受体调节剂通过脂肪酸受体(例如GPR120受体)例如猫科动物或犬科动物脂肪酸受体的计算机建模鉴别，其中本发明的脂肪酸受体调节化合物包含适合于脂肪酸受体的结合位点的结构。在某些实施方案中，计算机方法包括本文和本申请的实施例部分描述的计算机方法。

在某些实施方案中，本申请的脂肪酸受体调节剂通过体外方法鉴别，其中所述脂肪酸受体激动剂化合物激活和/或调节本文公开的体外细胞表达的脂肪酸受体。在某些实施方案中，体外方法包括本文和本申请的实施例部分中描述的体外方法。

在某些实施方案中，化合物包含在没有其它适口性增强剂的风味组合物中。在某些实施方案中，化合物包含在一种或多种风味组合物中，该风味组合物具有一种或多种另外的适口性增强剂，例如本文所述的激活不同受体(例如，鲜味受体)上的不同活性位点的核苷酸、核苷酸衍生物、氨基酸、呋喃酮和跨膜化合物。

4.鉴别脂肪酸受体调节化合物的方法

本发明还提供了鉴别调节脂肪酸受体的活性和/或表达的化合物的方法。例如，而不是限制，调节剂可以是激动剂或拮抗剂。本文公开的主题提供了用于鉴别调节上文所公开的脂肪酸受体的活性和/或表达的化合物的计算机方法和体外方法。

4.1计算机方法

本文公开的主题还提供了用于鉴别可能潜在地与脂肪酸受体相互作用和/或调节脂肪酸受体(例如猫科动物、犬科动物或人脂肪酸受体)的活性和/或表达的化合物的计算机方法。

在某些实施方案中，该方法可以包括预测脂肪酸受体的三维结构(3D)并用推定的脂肪酸受体调节化合物(即测试化合物)筛选预测的3D结构。该方法还可以包括通过分析与推定化合物和受体的氨基酸的潜在相互作用来预测推定的化合物是否与受体的结合位点相互作用。该方法还可以包括通过确定化合物的3D结构是否适合受体的3D结构的结合位点来鉴别可结合和/或调节脂肪酸受体的生物学活性的测试化合物。

在某些实施方案中，用于所公开方法的脂肪酸受体可以具有如2014年12月18日公布的国际公开号WO 2014/199114所述的氨基酸或核苷酸序列，或其片段或变体。

可以使用所公开的方法测试的化合物(例如，潜在的脂肪酸受体调节剂)的非限制性实例包括任何小的化学化合物或任何生物实体，例如本领域已知的肽、盐、氨基酸和脂肪酸化合物。在某些实施方案中，测试化合物可以是小的化学分子。

在某些实施方案中，脂肪酸受体的结构模型可以使用其它GPCR的晶体结构作为同源建模的模板来构建。例如，而不是限制，可以使用A组GPCR的晶体结构产生结构模型。在某些实施方案中，脂肪酸受体的结构模型可以基于已知的GPCR晶体结构或已知的GPCR晶体结构的组合。(参见，例如Rasmussen,S.G.等人,(2011)Nature(自然)477:549-555；Wu,B.等人,(2010)Science(科学)330:1066-1071；和Wu,H.等人,(2012)Nature(自然)485:327-332，其各自通过引用整体并入本文)。例如而不是限制，可以基于具有蛋白质数据库(PDB)ID号4DJH，3OE6和/或3SN6的晶体结构生成脂肪酸受体的跨膜结构域的结构模型。图4至图6、图8和图9描述了可以在公开的计算机方法中使用的脂肪酸受体的结构模型。可以使用本领域已知的任何合适的建模软件。在某些实施方案中，可以使用Modeller软件包(Accelrys，BIOVIA，Dassault Systèmes(达索系统))来生成三维蛋白质结构。

在某些实施方案中，鉴别与脂肪酸受体结合的化合物的计算机方法包括确定测试化合物是否与脂肪酸受体相互作用结构域的一种或多种氨基酸相互作用，如本文所述。

可以使用本文公开的体外方法进一步测试通过公开的计算机方法鉴别的化合物。

4.2脂肪酸受体结合位点

本申请提供了筛选调节脂肪酸受体(例如猫科动物、犬科动物或人脂肪酸受体)的活性的化合物的方法，其中所述化合物与脂肪酸受体的一种或多种氨基酸相互作用。在某些实施方案中，脂肪酸受体的结合位点包含受体的跨膜结构域内的氨基酸，例如7-跨膜(7TM)结构域，并且可以通过使用计算机建模生成受体的相互作用图来鉴别，如本文所述。在一个非限制性实例中，跨膜相互作用图中氨基酸的存在意味着残基在配体结合环境附近，并与配体相互作用。

在某些实施方案中，化合物与本文所述脂肪酸受体的一种或多种氨基酸之间的相互作用可包含氢键、共价键、非共价键、盐桥、物理相互作用及它们的组合的一种或多种。相互作用也可以是本领域已知的配体受体相互作用的任何相互作用特征。这种相互作用可以通过例如定点诱变、x射线晶体学、x射线或其他光谱方法、核磁共振(NMR)、交联评估、质谱或电泳、低温显微镜、基于已知激动剂的置换测定法、结构测定及它们的组合来测定。在某些实施方案中，相互作用通过计算测定，例如通过理论手段如将化合物对接到猫科动物或犬科动物脂肪酸受体结合口袋中来进行测定，例如使用分子对接、分子建模、分子模拟或本领域普通技术人员已知的其它手段。

在某些实施方案中，相互作用是氢键相互作用。

在某些实施方案中，相互作用是疏水相互作用。

在某些实施方案中，根据本文描述的方法鉴别调节脂肪酸受体的活性的化合物与脂肪酸受体的跨膜结构域中的一种或多种氨基酸相互作用，例如7-跨膜结构域(7TM)。在某些实施方案中，与化合物相互作用的氨基酸包括以下中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或更多种：脂肪酸受体的螺旋2上的PHE88、VAL95、VAL98和ARG99；螺旋3上的PHE115、MET118、SER119、GLY122、SER123；螺旋5上的TRP207、PHE211、VAL212、ASN215；螺旋6上的TRP277、ILE280、ILE281、ILE284；和螺旋7上的TRP299、PHE303、PHE304、VAL307、THR310、PHE311；例如包含猫科动物脂肪酸受体的脂肪酸受体或犬科动物脂肪酸受体或人脂肪酸受体的相应氨基酸酸。

在某些实施方案中，用于鉴别调节猫科动物脂肪酸受体活性的组合物的方法包括(a)使测试剂与脂肪酸受体例如包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的猫科动物脂肪酸受体接触，(b)检测在选自下组的脂肪酸受体的相互作用位点中测试剂与一种或多种氨基酸之间的相互作用：螺旋2上的PHE88、VAL95、VAL98和ARG99；螺旋3上的PHE115、MET118、SER119、GLY122、SER123；螺旋5上的TRP207、PHE211、VAL212、ASN215；螺旋6上的TRP277、ILE280、ILE281、ILE284；和螺旋7上的TRP299、PHE303、PHE304、VAL307、THR310、PHE311；及它们的组合；和(c)选择与一种或多种氨基酸相互作用的测试剂作为组合物。

在某些实施方案中，该方法还包括在步骤(a)之后测定脂肪酸受体的活性，并选择增加脂肪酸受体活性的测试剂作为组合物。

在某些实施方案中，该方法还包括使脂肪酸受体与配体例如激动剂接触，并且选择增加或增强激动剂激活脂肪酸受体的能力的测试剂作为组合物。

4.3体外方法

本文公开的主题还提供了用于鉴别可以调节脂肪酸受体的活性和/或表达的化合物的体外方法。

用于本发明公开的方法的脂肪酸受体可以包括本文公开的分离的或重组的脂肪酸受体或表达脂肪酸受体的细胞。在某些实施方案中，用于所公开方法的脂肪酸受体可以具有如2014年12月18日公布的国际公开号WO 2014/199114所述的氨基酸或核苷酸序列，或其片段或变体。

在某些实施方案中，用于鉴别调节脂肪酸受体的活性和/或表达的化合物的方法包括在不存在和/或存在测试化合物的情况下测量脂肪酸受体的生物学活性。在某些实施方案中，该方法可以包括在存在不同浓度的测试化合物的情况下测量脂肪酸受体的生物学活性。该方法还可以包括，与在不存在测试化合物的情况下脂肪酸受体的活性和/或表达相比，鉴别导致脂肪酸受体的活性和/或表达的调节的测试化合物。

在某些实施方案中，与该化合物不存在时脂肪酸受体的生物学活性相比，根据本文所述方法鉴别的化合物将脂肪酸受体的生物学活性提高至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％或更多。在某些实施方案中，与化合物不存在时脂肪酸受体的生物学活性相比，根据本文所述方法鉴别的化合物将脂肪酸受体的生物学活性提高至少约30％。

在某些实施方案中，该方法可以进一步包括组合分析两种或多种、三种或多种或四种或更多种测试化合物。在某些实施方案中，两种或多种、三种或更多种或四种或更多种测试化合物可以来自不同类别的化合物，例如氨基酸和小的化学化合物。例如，而不是限制，该方法可以包括在一种或多种氨基酸测试化合物的存在下分析一种或多种小的化学测试化合物对脂肪酸受体的生物学活性和/或表达的作用。在某些实施方案中，用于鉴别化合物对脂肪酸受体的活性和/或表达的作用的方法包括在一种或多种核苷酸或核苷酸衍生物测试化合物的存在下分析测试化合物对脂肪酸受体的生物学活性和/或表达的作用。

在某些实施方案中，用于鉴别调节脂肪酸受体的活性和/或表达的化合物的方法包括确定化合物是否直接调节受体，例如作为激动剂或拮抗剂。在某些实施方案中，所述方法包括确定化合物是否间接调节受体的活性(例如，作为变构调节剂)，例如通过增强或降低其它化合物对激活或抑制受体活性的作用。

在某些实施方案中，用于鉴别调节脂肪酸受体的活性和/或表达的化合物的方法包括在细胞系中表达脂肪酸受体并且在存在和/或不存在测试化合物的情况下测量受体的生物学活性。该方法可以进一步包括通过确定与在不存在测试化合物的情况下受体的活性相比，在测试化合物存在下受体激活是否存在差异，来鉴别调节受体活性的测试化合物。在某些实施方案中，推定的脂肪酸受体调节剂的选择性可以通过比较其对其它GPCR或味道受体如鲜味、CaSR、T1R等受体的作用来评估。

所公开的方法中受体的激活可以通过使用标记化合物和/或试剂来检测。在某些实施方案中，脂肪酸受体的活性可通过检测次级信使例如但不限于cAMP、cGMP、IP3、DAG或钙来测定。在某些实施方案中，脂肪酸受体的活性可以通过检测细胞内钙水平来测定。监测可以通过发光或荧光检测，如钙敏感荧光染料。在某些实施方案中，可以使用细胞染料，例如荧光钙指示剂如钙4来测定细胞内钙水平。在某些实施方案中，细胞内钙水平可以通过测量钙与钙结合蛋白例如钙调蛋白的结合水平来测定。可选地和/或另外地，可以通过检测脂肪酸受体的一种或多种下游蛋白靶标的磷酸化、转录水平和/或蛋白水平来测定脂肪酸受体的活性。

在所公开的方法中使用的细胞系可以包括能够表达脂肪酸受体的任何细胞类型。可用于所公开方法的细胞的非限制性实例包括HeLa细胞、中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)、非洲绿猴肾细胞(COS细胞)、非洲爪蟾卵母细胞、HEK-293细胞和鼠3T3成纤维细胞。在某些实施方案中，该方法可以包括在CHO-K1细胞中表达脂肪酸受体。在某些实施方案中，该方法可以包括在HEK-293细胞中表达脂肪酸受体。在某些实施方案中，该方法可以包括在COS细胞中表达脂肪酸受体。在某些实施方案中，细胞组成型地表达脂肪酸受体。在另一种实施方案中，细胞中脂肪酸受体的表达是可诱导的。

在某些实施方案中，细胞表达钙结合光蛋白，其中光蛋白在结合钙时发光。在某些实施方案中，钙结合光蛋白包含蛋白质壳质。在某些实施方案中，壳质是重组壳质。在某些实施方案中，所述壳质包含分离的壳质，例如，从Clytia gregar分离的壳质。在某些实施方案中，钙结合光蛋白包含蛋白水母发光蛋白，例如重组的水母发光蛋白或分离的水母发光蛋白，例如从维多利亚多管发光水母(Aequorea victoria)分离的水母发光蛋白。在某些实施方案中，钙结合光蛋白包含蛋白质螅蛋白，例如重组螅蛋白或分离的螅蛋白，例如从薮枝螅水母(Obelia longissima)分离的螅蛋白。

在某些实施方案中，脂肪酸受体在细胞中的表达可以通过将编码脂肪酸受体的核酸引入细胞来进行。例如但不限于，可以将具有国际公开号WO 2014/199114(公布于2014年12月18日)的核苷酸序列的核酸或其片段引入细胞。在某些实施方案中，将核酸引入细胞可以通过本领域已知的任何方法进行，包括但不限于转染、电穿孔、显微注射、用含有核酸序列的病毒或噬菌体感染的载体、细胞融合、染色体介导的基因转移、微细胞介导的基因转移、原生质球融合等。本领域已知用于将外源基因引入细胞中的许多技术(参见，例如Loeffler和Behr,Meth.Enzymol.(酶学方法)217:599-618(1993)；Cohen等人,Meth.Enzymol.(酶学方法)217:618-644(1993)；Cline,Pharmac.Ther.(药理学与治疗学)29:69-92(1985)，其公开内容通过引用全部并入本文)，并且可以根据所公开的主题使用。在某些实施方案中，该技术可以提供核酸到细胞的稳定转移，使得核酸可被细胞表达并且可被其后代遗传和表达。在某些实施方案中，该技术可以提供核酸到细胞的瞬时转移，使得核酸可被细胞表达，其中遗传性和可表达性在后续的细胞后代中降低。

在某些实施方案中，该方法可以包括鉴别结合脂肪酸受体的化合物。该方法可以包括使脂肪酸受体与测试化合物接触并且测量化合物和脂肪酸受体之间的结合。例如但不限于，所述方法可以包括在无细胞系统中提供分离或纯化的脂肪酸受体，并且在无细胞系统中使受体与测试化合物接触以确定测试化合物是否结合脂肪酸受体。在某些实施方案中，该方法可以包括使在细胞表面上表达的脂肪酸受体与测试化合物接触并检测测试化合物与脂肪酸受体的结合。结合可以直接测量，例如通过使用标记的测试化合物，或可以间接测量。在某些实施方案中，检测包括检测由化合物与脂肪酸受体的结合引起的细胞中的生理事件，例如细胞内钙水平的增加。例如但不限于，可以通过荧光检测(例如钙敏感荧光染料)、通过检测发光或本领域已知的任何其它检测方法进行检测。

在某些非限制性实施方案中，体外测定包括表达对细胞为天然的脂肪酸受体的细胞。表达天然脂肪酸受体的这种细胞的实例包括，例如但不限于狗(犬科动物)和/或猫(猫科动物)味道细胞(例如原代味道受体细胞)。在某些实施方案中，从狗和/或猫中分离表达脂肪酸受体的狗和/或猫味道细胞并在体外培养。在某些实施方案中，味道受体细胞可以永生化，例如使得从狗和/或猫分离的细胞可以在培养物中繁殖。

在某些实施方案中，脂肪酸受体在细胞中的表达可以通过基因编辑诱导，例如通过使用CRISPR基因编辑系统将脂肪酸受体基因并入细胞基因组，或编辑或修饰对细胞为天然的脂肪酸受体基因。

在某些实施方案中，鉴别与脂肪酸受体结合的化合物的体外方法包括确定测试化合物是否与脂肪酸受体相互作用结构域的一种或多种氨基酸相互作用，如本文所述。

在某些实施方案中，被鉴别为脂肪酸受体的调节剂的化合物可以在其他分析方法中进一步测试，包括但不限于体内测定，以确认或定量其调节活性。

在某些实施方案中，本文所述的方法可以包括确定脂肪酸受体调节剂是否为脂肪酸味道增强化合物，例如脂肪酸受体激动剂。

在某些实施方案中，鉴别脂肪酸受体调节剂的方法可以包括比较测试化合物与脂肪酸受体激动剂的作用。例如，与脂肪酸受体激动剂接触时受体的活性相比，增加受体活性的测试化合物可以被选择为脂肪酸受体调节化合物(例如作为激动剂)。

在某些实施方案中，鉴别脂肪酸受体调节剂的方法可以包括确定当受体与激动剂接触时测试化合物是否调节受体的活性，或测试化合物是否可调节正变构调节剂(Positive allosteric modulator，PAM)的活性。可以选择增加或减少所述激动剂或PAM对受体的作用的测试化合物作为脂肪酸受体调节化合物(例如，作为变构调节剂)。

5.风味组合物

在某些实施方案中，本发明的风味组合物可用于增加宠物食品如猫科动物食品的适口性。风味组合物可以包括化合物的组合，并且可以各种递送系统添加到宠物食品中。

在某些实施方案中，本发明涉及用于调节宠物食品的脂肪酸味道(例如脂肪酸受体(如GPR120，包括fGPR120)的活性)的方法，其包括：a)提供至少一种宠物食品或其前体，和b)将所述宠物食品或其前体与至少脂肪酸味道调节量的至少一种风味组合物结合，以便形成增强的宠物食品，风味组合物例如包含一种或多种化合物或其食品上可接受的盐。

在某些实施方案中，本发明的风味组合物可以增强GPR120受体的活性和/或宠物食品的适口性，例如，宠物食品包括湿宠物食品、干宠物食品、微湿的宠物食品、宠物饮料产品和/或小吃宠物食品。

在某些实施方案中，可将本发明的一种或多种风味组合物以调节、增强或以其它方式改良宠物食品的味道或味道特征的有效量添加到宠物食品中。调节可以包括例如增加或增强宠物食品的适口性，如通过动物例如猫和/或犬确定的，或在制剂测试的情况下，如通过动物例如猫和/或犬的味道测试者小组确定的，通过本领域已知的程序。

在本发明的某些实施方案中，可以制备包含本文描述的足够量的至少一种风味组合物的宠物食品，风味组合物例如包含化合物，以生产具有所希望的味道例如脂肪酸味道的宠物食品。

在本发明的某些实施方案中，可以制备包含足够量的风味组合物的宠物食品，该风味组合物包含至少一种、两种、三种、四种、五种、六种或更多种化合物。

在某些实施方案中，可以将GPR120调节量的本发明的一种或多种风味组合物中添加到宠物食品，从而使宠物食品相比于没有风味组合物制备的宠物食品具有增强的适口性，如通过动物例如猫和/或犬科动物确定的，或者在制剂测试的情况下，如通过动物例如和/或犬的味道测试者小组确定的，通过本领域已知的程序。

在本发明的某些实施方案中，将风味组合物以增加、增强和/或改良宠物食品的适口性的有效量添加到宠物食品中。

与宠物食品混合以调节和/或改善宠物食品的适口性的风味组合物的浓度可以根据以下变量而变化：诸如特定类型的宠物食品、宠物食品中存在的何种脂肪酸化合物及其浓度以及具体的风味组合物对这种脂肪酸化合物的增强效果。

宽范围浓度的风味组合物可以被用来提供这样的适口性改良。在本申请的某些实施方案中，将风味组合物与宠物食品混合，其中风味组合物的存在量为约0.01ppm至约1000ppm。例如，但不是通过限制的方式，所述风味组合物可以存在的量为约0.01ppm至约750ppm，约0.01ppm至约500ppm，约0.01ppm至约250ppm，约0.01ppm至约150ppm，约0.01ppm至约100ppm，约0.01ppm至约75ppm，约0.01ppm至约50ppm，约0.01ppm至约25ppm，约0.01ppm至约15ppm，约0.01ppm至约10ppm，约0.01ppm至约5ppm，约0.01ppm至约4ppm，约0.01ppm至约3ppm，约0.01ppm至约2ppm，约0.01ppm至约1ppm，约0.01ppm至约1000ppm，约0.1ppm至1000ppm，约1ppm至1000ppm，约2ppm至约1000ppm，约3ppm至约1000ppm，约4ppm至约1000ppm，约5ppm至约1000ppm，约10ppm至约1000ppm，约15ppm至约1000ppm，约25ppm至约1000ppm，约50ppm至约1000ppm，约75ppm至约1000ppm，约100ppm至约1000ppm，约150ppm至约1000ppm，约250ppm至约1000ppm，约250ppm至约1000ppm，约500ppm至约1000ppm或约750ppm至约1000ppm，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与宠物食品混合，其中风味组合物的存在量为约0.01ppm至约500ppm，或约0.1ppm至约500ppm，或约1ppm至约500ppm，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与宠物食品混合，其中风味组合物的存在量为约0.01ppm至约100ppm，或约0.1ppm至约100ppm，或约1ppm至约100ppm，和它们之间的值。

在某些实施方案中，风味组合物存在于宠物食品中的量大于约0.01ppm，大于约0.1ppm，大于约1ppm，大于约2ppm，大于约3ppm，大于约4ppm，大于约5ppm，大于约10ppm，大于约25ppm，大于约50ppm，大于约75ppm，大于约100ppm，大于约250ppm，大于约500ppm，大于约750ppm或大于约1000ppm，和它们之间的值。

在某些实施方案中，本发明的化合物以足以调节、激活和/或增强脂肪酸受体例如GPR120受体的量存在于食品中。例如，但不是通过限制的方式，化合物可以存在于食品中的量为约10pM至约1M，约1nM至约1M，约1μM至约1M，约1mM至约1M，约10mM至约1M，约100mM至约1M，约250mM至约1M，约500mM至约1M，约750mM至约1M，约0.001μM至约1M，约0.001μM至约750mM，约0.001μM至约500mM，约0.001μM至约250mM，约0.001μM至约100mM，约0.001μM至约50mM，约0.001μM至约25mM，约0.001μM至约10mM，约0.001μM至约1mM，约0.001μM至约100μM或约0.001μM至约10μM，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与宠物食品混合，其中风味组合物的存在量为约10pM至约1M，或约1pM至约1M，或约0.1pM至约1M，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与宠物食品混合，其中风味组合物的存在量为约10pM至约0.5M，或约1pM至约0.5M，或约0.1pM至约0.5M，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与宠物食品混合，其中风味组合物的存在量为约10pM至约0.1M，或约1pM至约0.1M，或约0.1pM至约0.1M，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与食品混合，其中风味组合物的存在量为食品的约0.001重量％至约10重量％(w/w)。例如但不限于，风味组合物存在的量可以为约0.001重量％至约10重量％，约0.01重量％至约20重量％，约0.001重量％至约1重量％，约0.001重量％至约0.1重量％，约0.001重量％至约0.01重量％，约0.01重量％至约10重量％，约0.01重量％至约1重量％，或约0.1重量％至约10重量％，或约0.1重量％至约1重量％，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与食品混合，其中风味组合物的存在量为约0.001％至约5％，或约0.01％至约5％，或约0.1％至约5％w/w，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与食品混合，其中风味组合物的存在量为约0.001％至约1％，或约0.01％至约1％，或约0.1％至约1％w/w，和它们之间的值。

在本申请的某些实施方案中，风味组合物与食品混合，其中风味组合物的存在量为约0.01％w/w至约10％w/w。

在某些实施方案中，本申请的化合物以各种比例混合在一起，或与其它化合物(例如核苷酸和/或核苷酸衍生物和/或呋喃酮和/或氨基酸和/或跨膜化合物)共混以形成各种风味组合物。核苷酸、核苷酸衍生物、呋喃酮、氨基酸和跨膜化合物的非限制性实例公开于2013年10月31日提交的国际申请PCT/EP2013/072788、2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072789、2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072790、2007年10月31日提交的PCT/EP2013/072794、2015年12月10日提交的PCT/US15/65046、2015年12月10日提交的PCT/US15/65036和2015年12月10日提交的PCT/US15/65067、其全部内容通过引用并入本文。

5.1核苷酸和核苷酸衍生物

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物和至少一种本文和2015年12月10日提交的国际申请PCT/US15/65046所述的核苷酸和/或核苷酸衍生物，该申请通过引用整体并入本文。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物和至少两种、三种、四种、五种或更多种本文所述的核苷酸和/或核苷酸衍生物。核苷酸的非限制性实例包括鸟苷单磷酸(GMP)、肌苷单磷酸(IMP)、腺苷单磷酸(AMP)、胞苷单磷酸(CMP)、胸苷单磷酸(TMP)、黄苷单磷酸(XMP)、尿苷单磷酸(UMP)及它们的组合。

在某些实施方案中，风味组合物可包括食品中存在的核苷酸和/或核苷酸衍生物，其可以存在的量为约1pM至约1M，约1nM至约1M，约1μM至约1M，约1mM至约1M，约10mM至约1M，约100mM至约1M，约250mM至约1M，约500mM至约1M，约750mM至约1M，约1μM至约1M，约1μM至约750mM，约1μM至约500mM，约1μM至约250mM，约1μM至约100mM，约1μM至约50mM，约1μM至约25mM，约1μM至约10mM，约1μM至约1mM，约1μM至约100μM或约1μM至约10μM，和它们之间的值。

在某些实施方案中，核苷酸和/或核苷酸衍生物可以存在的量大于宠物食品的约1mM或约2.5mM。在某些非限制性实施方案中，核苷酸和/或核苷酸衍生物可以存在的量小于宠物食品的约100mM，小于约50mM，低于约20mM或小于约10mM。在某些非限制性实施方案中，核苷酸和/或核苷酸衍生物以宠物食品的约5mM的量存在。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物还包含本文所述的至少一种氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物还包含本文所述的至少一种跨膜化合物。

5.2氨基酸

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物和至少一种本文和2013年10月31日提交的国际申请PCT/EP2013/072788、2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072789、2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072790和2013年10月31日提交的PCT/EP2013/072794中所述的氨基酸，各申请的内容通过引用整体并入本文。在某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物和至少两种、三种、四种、五种或更多种这里所述的氨基酸。

在某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物，至少一种、两种、三种、四种、五种或更多种第一氨基酸，和/或至少一种、两种、三种、四种、五种或更多种第二氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物、至少一种第一氨基酸和至少一种第二氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物、至少两种第一氨基酸和至少一种第二种氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物、至少一种第一氨基酸和至少两种第二氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物、至少两种第一氨基酸和至少两种第二氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物还包含本文所述的至少一种脂肪酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物还包含本文所述的至少一种跨膜化合物。

第一氨基酸的非限制性实例包括色氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、酪氨酸、丝氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、亮氨酸和它们的组合。

第二氨基酸的非限制性实例包括苏氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、谷氨酸、天门冬氨酸、羟基脯氨酸、精氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、缬氨酸、鸟氨酸、牛磺酸、谷氨酸一钠(MSG)和它们的组合。

在某些实施方案中，至少一种第一氨基酸和/或第二氨基酸单独或组合可存在的量为宠物食品的约1mM至约1M，或约250mM至约1M，或约5mM至约500mM，或约10mM至约100mM，或约15mM至约50mM，或约20mM至约40mM。在某些实施方案中，氨基酸可以存在的量小于宠物食品的约1M，小于约200mM，小于约100mM，小于约50mM，低于约20mM或小于约10mM。在某些实施方案中，第一氨基酸和/或第二氨基酸单独或组合可存在的量为宠物食品的约25mM。

5.3跨膜化合物

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种如本申请所述的化合物和至少一种由2015年12月10日提交的国际申请PCT/US15/65036所述和下表1中的跨膜化合物，该申请的全部内容通过引用并入在此。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物和至少两种、三种、四种、五种或更多种跨膜化合物。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物、至少一种跨膜化合物和至少一种本文所述的氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物、至少一种跨膜化合物、本文所述的至少一种第一氨基酸和至少一种第二氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物、至少一种跨膜化合物和至少一种本文所述的核苷酸和/或核苷酸衍生物。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包含至少一种化合物、至少一种跨膜化合物、至少一种核苷酸和/或核苷酸衍生物和至少一种氨基酸。

在本发明的某些实施方案中，风味组合物包括至少一种化合物、至少一种跨膜化合物、至少一种核苷酸和/或核苷酸衍生物、至少一种第一氨基酸和至少一种第二氨基酸。

在某些实施方案中，本发明的跨膜化合物在食品中可以存在的量为约1pM至约1M，约1nM至约1M，约1μM至约1M，约1mM至约1M，约10mM至约1M，约100mM至约1M，约250mM至约1M，约500mM至约1M，约750mM至约1M，约1μM至约1M，约1μM至约750mM，约1μM至约500mM，约1μM至约250mM，约1μM至约100mM，约1μM约50mM，约1μM约25mM，约1μM至约10mM，约1μM至约1mM，约1μM至约100μM，或约1μM至约10μM，和它们之间的值。

在某些实施方案中，跨膜化合物可以是本文所述的跨膜化合物的盐、立体异构体或可食用形式。

表1

6.递送系统

在某些实施方案中，本申请的风味组合物可以掺入到用于宠物食品的递送系统。递送系统可以是非水性液体、固体或乳液。递送系统通常被调整为适应风味组合物和/或其中掺入风味组合物的宠物食品的需求。

风味组合物可以非水性液体形式、干燥形式、固体形式和/或乳液形式使用。当以干燥形式使用时，可以使用合适的干燥方式例如喷雾干燥。可选地，风味组合物可以被包封或吸收到水溶性材料中。制备这种干燥形式的实际技术是本领域公知的，并且可适用于本文公开的主题。

本发明公开的主题的风味组合物可以以本领域熟知的许多独特的物理形式使用，以提供味道、风味和/或质地的初始突释；和/或味道、风味和/或质地的持续感觉。但不限于此，这样的物理形式包括游离形式，例如喷雾干燥形式、粉状形式和珠状形式以及包封形式和它们的混合物。

在某些实施方案中，可以在宠物食品的处理例如杀菌、干馏和/或挤出的过程中，由宠物食品中存在的前体化合物生产风味组合物的化合物。在非限制性实施例中，该组合物可以是在宠物食品的处理过程中从一种或多种甘油三酯释放的游离脂肪酸。在某些实施方案中，游离脂肪酸在甘油三酯的热、酸和/或酶处理的过程中产生。在某些方案中，甘油三酯存在于被处理以生产宠物食品的肉(例如鸡肉、牛肉、猪肉、鱼肉和/或动物脂油)和/或蔬菜(例如油类，如蔬菜和葵花籽油)来源。

在某些实施方案中，如上所述，包封技术可用于改良风味系统。在某些实施方案中，可以完全或部分地包封风味化合物、风味成分或整种风味组合物。可以选择包封材料和/或技术以确定风味系统的改良类型。

在某些实施方案中，选择包封材料和/或技术以改善风味化合物、风味成分或风味组合物的稳定性；而在其它实施方案中，选择包封材料和/或技术以改良风味组合物的释放曲线。

适合的包封材料可以包括但不限于：水胶体，例如海藻酸盐、果胶、琼脂、瓜尔胶、纤维素等，蛋白质，聚乙酸乙烯酯、聚乙烯、交联聚乙烯吡咯烷酮、聚甲基丙烯酸甲酯、聚乳酸、聚羟基烷酸酯、乙基纤维素、聚醋酸乙烯苯二甲酸酯、聚乙二醇酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物、乙烯-乙酸乙烯酯(EVA)共聚物等，以及它们的组合。适合的包封技术可以包括但不限于：喷涂、喷雾干燥、喷雾冷却、吸收、吸附、包合络合(例如，产生一种风味/环糊精络合物)、凝聚、流化床涂覆或可用来用包封材料包封成分的其它方法。

用于风味剂或甜味剂的包封的递送系统可以含有包围甜味剂或风味剂芯的脂肪或蜡的疏水基质。脂肪可以选自以下任何数目的常规材料，例如脂肪酸、甘油酯或聚甘油酯、山梨糖醇酯以及它们的混合物。脂肪酸的实例包括但不限于氢化的和部分氢化的植物油，例如棕榈油、棕榈仁油、花生油、菜籽油、稻糠油、大豆油、棉籽油、葵花籽油、红花油和它们的组合。甘油酯的实例包括但不限于甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯。

蜡可以选自由天然蜡和合成蜡以及它们的混合物组成的组。非限制性的实例包括石蜡、凡士林、碳蜡、微晶蜡、蜂蜡、巴西棕榈蜡、小烛树蜡、羊毛脂、杨梅蜡、甘蔗蜡、鲸蜡、稻糠蜡以及它们的混合物。

脂肪和蜡可以单独或组合使用，其量为包封系统的重量的约10％至约70％，可选地为约30％至约60％的量。当组合使用时，脂肪和蜡可分别以从约70:10至85:15的比率存在。

典型的包封的风味组合物、风味剂或甜味剂递送系统在美国专利US 4,597,970和US 4,722,845中公开，其通过引用以其整体并入本文。

液体递送系统可以包括但不限于具有本申请的风味组合物的分散体的系统，分散体如碳水化合物糖浆和/或乳剂。液体递送系统还可以包括其中化合物和/或风味组合物在溶剂中溶解的提取物。固体递送系统可通过喷雾干燥、喷涂、喷雾冷却、流化床干燥、吸收、吸附、凝聚、络合或任何其它标准技术来创建。在一些实施方案中，递送系统可以被选择为与可食用组合物兼容或在可食用组合物中发挥作用。在某些实施方案中，递送系统将包括油质材料，如脂肪或油。在某些实施方案中，递送系统将包括糖果用脂肪，如可可脂、可可脂代用品、可可脂替代物或可可脂等效物。

当以干燥形式使用时，可以使用合适的干燥方式诸如喷雾干燥。可选地，风味组合物可被吸附或吸收到基底，如水不溶性物质，或可以被包封。制备这种干燥形式的实际技术是本领域公知的。

7.宠物食品

本发明的主题的风味组合物可用于各种各样的宠物食品中。合适的宠物食品的非限制性实例包括本文所述的湿食品、干食品、微湿的食品、宠物食品补剂(例如维生素)、宠物饮料产品、小吃和零食。

当需要时，本发明的主题的风味组合物与宠物食品和任选的成分一起的组合，提供了具有意料不到的味道并赋予例如脂肪酸的感官体验的风味剂，例如通过增加GPR120脂肪酸受体的活性。本文所公开的风味组合物可在宠物食品的制剂处理或包装之前、期间或之后添加，风味组合物的组分可以顺序加入或同时加入。在某些实施方案中，可以在宠物食品的处理例如杀菌、干馏和/或挤出的过程中，由宠物食品中存在的前体化合物生产风味组合物的化合物。在非限制性实施例中，该组合物可以是在宠物食品的处理过程中从一种或多种甘油三酯释放的游离脂肪酸。在某些实施方案中，游离脂肪酸在甘油三酯的热、酸和/或酶处理的过程中产生。在某些方案中，甘油三酯存在于被处理以生产宠物食品的肉(例如鸡肉、牛肉、猪肉、鱼肉和/或动物脂油)和/或蔬菜(例如油类，如蔬菜油和葵花籽油)来源。

在某些实施方案中，宠物食品是营养全面的干食品。营养全面的干或含有低水分宠物食品可包含小于约15％的水分，包含约10％至约60％的脂肪，约10％至约70％的蛋白质，和约30％至约80％的碳水化合物，例如膳食纤维和灰分。

在某些实施方案中，宠物食品是营养全面的湿食品。营养全面的湿或含有高水分宠物食品可包含大于约50％的水分。在某些实施方案中，湿宠物食品包含约40％的脂肪，约50％的蛋白质，和约10％的碳水化合物，例如膳食纤维和灰分。

在某些实施方案中，宠物食品是营养全面的微湿的食品。微湿的(例如半微湿或半干或干软或微湿软或含中间或中等水分)的营养全面的宠物食品包含约15％至约50％的水分。

在某些实施方案中，宠物食品是宠物食品小吃产品。宠物食品小吃产品的非限制性实例包括小吃棒、宠物咀嚼物、脆脆的零食、压缩干粮、小吃、饼干和甜品。

在某些实施方案中，蛋白质源可以来自植物来源，如羽扇豆蛋白、小麦蛋白、大豆蛋白及它们的组合。可选地或另外地，蛋白质源可以来自各种动物来源。动物蛋白的非限制性实例包括牛肉、猪肉、禽肉、羊肉或鱼肉，包括例如肌肉肉类、肉副产品、肉粉或鱼粉。

8.测量味道属性的方法

在本发明的某些实施方案中，宠物食品的味道、风味和/或适口性属性可通过将风味组合物与食品混合进行改良，或在食品制备条件下产生，如本文所述。在某些实施方案中，属性可通过增加或降低与食品混合或产生的风味组合物的浓度来增强或减弱。在某些实施方案中，经改良的食品的味道属性可以如本文所述进行评估，可以基于评估结果增加或降低与食品混合或产生的风味组合物的浓度。

在本发明的某些实施方案中，可以使用体外测定法测定味道和/或适口性属性，其中在体外测定不同浓度下化合物激活由细胞表达的猫科动物GPR120受体的能力。在某些实施方案中，受体激活的增加与化合物的味道和/或适口性属性的增强相关。在某些实施方案中，单独或与其它化合物组合测定组合物。在某些实施方案中，体外测定法包括本申请的实施例部分中描述的体外测定法。

在本发明的某些实施方案中，可使用味道测试者小组(panelist of tastetester)测定味道和/或适口性属性。例如，而不是通过限制的方式，该小组可包含猫科动物小组成员。在某些实施方案中，该小组可包括犬科动物小组成员。在某些实施方案中，宠物食品的适口性可以通过消耗仅含有风味组合物的宠物食品来确定(例如，单碗试验，一元归类(monadic ranking))。在某些实施方案中，宠物食品的适口性可以通过相对于不含风味组合物或含另一风味组合物的宠物食品优先消耗本发明的含有风味组合物的宠物食品来确定(例如，用于测试偏好的双碗试验、差异和/或选择)。

在某些实施方案中，风味组合物的适口性和/或脂肪酸味道可以通过相对于不含风味组合物或含另一风味组合物的乳液，优先消耗含有本发明的风味组合物的乳液(或者本申请的化合物可以混合到其中的任何其他组合物，如凝胶或明胶)来确定。例如，凝胶小组(gel panel)可用于比较单一暴露下一定浓度范围的化合物的适口性。在某些实施方案中，所述乳液可以包含适口性增强剂，例如L-组氨酸，作为摄食/正促味剂以增加基线乳液摄入，因此使得能够识别测试化合物的潜在负面影响。

每种宠物食品或乳液的摄入比可以通过测量消耗的定量除以总消耗量来确定。然后可以计算消耗比(consumption ratio，CR)以比较一种定量相对于另一种定量的消耗，从而确定一种食品或乳液相对于另一种的优先消耗。可选地或另外地，摄入量(g)的差异可用来评估双碗试验中两种乳液或双碗试验中两种宠物食品在选定的显著性水平例如5％的显著性水平下测定的平均差异，以确定摄入量的平均差异，置信区间为95％。然而，可以使用任何显著性水平，例如1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％或50％的显著性水平。在某些实施方案中，也可以计算百分比偏好分数，例如，动物对一种乳液或食品的百分比偏好是测试过程中摄取的乳液或食品占总液体或食品的百分比。

9.生成方法

在某些实施方案中，可以使用标准的化学合成方法来生产本发明的化合物。在某些实施方案中，化学合成方法提供了具有至少99.999％、或至少99％、或至少95％、或至少90％、或至少85％或至少80％的纯度的化合物。在某些实施方案中，可以使用标准的水解方法如使用酸、酶或酸和酶的组合的那些方法制备化合物。

本发明的化合物可以在食物制备条件下生产，例如生产宠物食品的过程中。例如，而不是通过限制的方式，可以在宠物食品的热食物处理过程例如、杀菌、干馏和/或挤压中，由宠物食物中存在的前体化合物生产本发明的化合物。在某些实施方案中，也可加入液体和/或粉末增味剂(palatant)，以改善宠物食品的味道，例如加入到干宠物食品中，以增加宠物食品的适口性。增味剂可以是肉(例如，肝脏)的消化产物和/或蔬菜的消化产物，并且可以任选地包括本领域已知的其它增味剂。在某些实施方案中，化合物可在加入到宠物食品之前与液体和/或粉末增味剂混合或者在液体和/或粉末增味剂中生成。可选地或另外地，化合物可在加入到宠物食品之后与液体和/或粉末增味剂混合或者在液体和/或粉末增味剂中生成。

10.本发明的方法的非限制实施例

在某些非限制性实施方案中，本发明提供了用于提高宠物食品的适口性的方法，其包括将宠物食品与包含本文所述的化合物的风味组合物混合，其中所述化合物存在的浓度为该混合物的约10pM至约1M。

在某些非限制性实施方案中，本发明提供了用于提高宠物食品的适口性的方法，其包括生产使用包含本文所述的化合物的风味组合物的宠物食品，其中所述化合物存在的浓度为该产品的约10pM至约1M。

在某些非限制性实施方案中，本发明提供了用于提高宠物食品的脂肪酸味道的方法，例如通过提高GPR120受体的活性，其包括将宠物食品与包含本文所述的化合物的风味组合物混合，其中所述化合物存在于混合物的浓度为0.01ppm至1000ppm。

在某些非限制性实施方案中，本发明提供了用于提高宠物食品的适口性的方法，其包括将宠物食品与包含本文所述的化合物的风味组合物混合，其中所述风味组合物存在于混合物的浓度为约0.01ppm至1000ppm。

在某些非限制性实施方案中，本发明提供了用于提高宠物食品的脂肪酸味道的方法，例如通过提高GPR120受体的活性，其包括将宠物食品与包含本文所述的化合物的风味组合物混合，其中所述化合物存在于混合物的浓度为约0.001％至约10％w/w，或约0.01％至约20％w/w，或约0.01％至约5％w/w，或约0.01％至约1％w/w。

在某些非限制性实施方案中，本发明提供了用于提高宠物食品的适口性的方法，其包括将宠物食品与包含本文所述的化合物的风味组合物混合，其中所述化合物存在于混合物的浓度为约0.001％至约10％w/w，或约0.01％至约20％w/w，或约0.01％至约5％w/w，或约0.01％至约1％w/w。

实施例

通过参考以下实施例将更好地理解本发明的主题，其作为本发明的示例而不是通过限制的方式提供。

实施例1-激活fGPR120受体的化合物

本实施例描述了化合物在体外对猫科动物GPR120受体(fGPR120)的激活。

通过体外功能表征鉴别起GPR120激动剂作用的化合物。评估化合物在激活fGPR120受体中的有效性。

方法：使用稳定表达fGPR120的CHO-K1细胞筛选约120种测试化合物，以鉴别激活fGPR120脂肪酸受体的化合物。使用钙敏感荧光染料通过细胞内钙水平的变化来检测fGPR120受体的激活。使用不表达fGPR120受体的细胞(空白细胞(mock cell))作为对照。使用进行数据采集。

首先测试每种化合物在三种不同剂量水平(10μM、3μM和1μM；50μM、16.7μM和5.6μM；或100μM、30μM和10μM)下激活fGPR120的能力(图1)。然后为每种化合物生成剂量响应曲线(图2)。测定以下性质：与fGPR120激动剂对照(α-亚麻酸)相比，化合物诱导的fGPR120活性的百分比增加；与ATP背景对照相比，化合物诱导的fGPR120活性的百分比增加，并且所需的化合物浓度达到EC50(即达到最大活性的50％)。

结果：图1和图2示出了，对表达fGPR120受体的CHO-K1细胞或不表达fGPR120的CHO-K1细胞(空白对照细胞(MOCKcontrol cell))处理后fGPR120活性的变化，与对照相比，34种化合物将fGPR120的活性增加了至少30％。表2鉴别了与对照相比将fGPR120的活性增加至少30％的34种化合物。

表2.与对照相比将GPR120的活性增加至少30％的GPR120结合化合物。

实施例2-使用计算机筛选鉴别GPR120激动剂

已经使用定点诱变(site-directed mutagenesis)来鉴别与GPR120结合化合物相互作用的人GPR120的氨基酸残基(Hudson等人)。然而，本实施例描述了为鉴别GPR120受体的推定化合物激动剂进行的猫科动物和犬科动物GPR120的计算建模。GPR120属于G-蛋白偶联受体(GPCR)A组受体家族。猫科动物GPR120显示出与犬科动物GPR120具有96％的序列同一性，与人GPR120具有89％的序列同一性(参见，例如2014年12月18日公布的国际公开号WO2014/199114，其全部内容通过引用并入本文)。

使用计算方法分析GPR120受体的三维结构，以鉴别可被利用以选择性激活受体的多肽区域。基于A类GPCR的结构，生成GPR120受体的结构同源性模型。在基于SWISS-MODEL和GPCR-I-TASSER网络的环境中构建同源性模型，并在来自Accelrys(BIOVIA,DassaultSystèmes)的发现工作室(Discovery Studio，DS)成套程序中进一步完善。来自DS的Modeller程序用于模型细化(参见Eswar等人,Current Protocols in Bioinformatics,Supplement(生物信息学现行协议，增刊)15:5.6.1-5.6.30(2006)，其全部内容通过引用并入本文)。“计算机(in silico)”筛选用于鉴别与GPR120相互作用的化合物。

GPCR A组蛋白家族包括许多解开的晶体结构。基于来自蛋白质数据库(ProteinData Bank，PDB)的GPCR A组的晶体结构生成猫科动物和犬科动物GPR120跨膜结构域的同源性模型：4DJH(人κ阿片受体(Wu,H.等人))，3OE6(CXCR4趋化因子受体)(Wu,B.等人))和3SN6(β2肾上腺素能受体(Rasmussen等人))。使用来自BioPredict的对接程序BioDock在计算机中将化合物3-(4-((4-氟-4'-甲基联苯-2-基)甲氧基)苯基)丙酸(也称为TUG891)(图4)、4-[4-(庚氧基)苯基]-4-氧代丁酸(图5)、二十碳五烯酸(图6)、油酸(图8)和亚油酸(图9)对接(dock)进入猫科动物GPR120的跨膜结构域的活性位点。这些化合物也在计算机中对接进入犬科动物GPR120的跨膜结构域的活性位点。人、猫科动物和犬科动物GPCR的活性位点的结构相似。

基于计算机结合模型，观察到化合物与猫科动物GPR120的跨膜结构域的以下氨基酸具有潜在的相互作用：

螺旋2上的PHE88、VAL95、VAL98和ARG99；

螺旋3上的PHE115、MET118、SER119、GLY122、SER123；

螺旋5上的TRP207、PHE211、VAL212、ASN215；

螺旋6上的TRP277、ILE280、ILE281、ILE284；

螺旋7上的TRP299、PHE303、PHE304、VAL307、THR310、PHE311。

化合物和猫科动物GPR120活性位点之间的许多相互作用涉及GPR120疏水残基。此外，化合物的羧基和ARG99之间存在盐桥和氢键。

参考文献：

1.Rasmussen,S.G.等人,“Crystal structure of the beta2 adrenergicreceptor-Gs protein complex.(β2肾上腺素受体-Gs蛋白复合物的晶体结构)”(2011)Nature(自然)477:549-555.

2.Wu,B.等人,“Structures of the CXCR4 chemokine GPCR with small-molecule and cyclic peptide antagonists.(CXCR4趋化因子的GPCR与小分子和环状肽拮抗剂的结构)”(2010)Science(科学)330:1066-1071.

3.Wu,H.等人,“Structure of the human kappa-opioid receptor in complexwith JDTic(与JDTic复合的人κ阿片受体的结构).”(2012)Nature(自然)485:327-332.

4.Brian D.Hudson等人,“The Molecular Basis of Ligand Interaction atFree Fatty Acid Receptor 4(FFA4/GPR120)(游离脂肪酸受体4处的配体相互作用的分子基础).”The Journal of Biological Chemistry(生物化学杂志),2014Jul 18(2014年7月18日)；289(29):20345-58.

5.Arnold K,Bordoli L,Kopp J,和Schwede T.,“The SWISS-MODEL Workspace:Aweb-based environment for protein structure homology modelling.(SWISS-MODEL工作区：用于蛋白质结构同源建模的基于Web的环境)”(2006)Bioinformatics.(生物信息学),22,195-201.

Zhang,J Yang,R Jang,Y Zhang.,“GPCR-I-TASSER:A hybrid approach to Gprotein-coupled receptor structure modeling and the application to the humangenome(GPCR-I-TASSER：进行G蛋白偶联受体的结构建模的混合方法和在人类基因组的应用).”Structure(结构),23:1538-1549,201520345–20358,July 18,2014(2014年7月18日).

实施例3-使用体外筛选鉴别作为GPR120的正变构调节剂的单正十二烷基磷酸酯

本实施例描述了用于测量作为GPR120激动剂和正变构调节剂(PAM)的单正十二烷基磷酸酯的活性的体外测定。

方法：使用稳定表达fGPR120的CHO细胞测定单正十二烷基磷酸酯作为fGPR120激动剂或PAM的活性。

将CHO/NatClytin/fGpr120+Gα16(fGpr120)细胞和CHO/NatClytin/空白+Gα16(空白)细胞以5000个细胞/孔接种。在细胞接种24小时后，将细胞在室温下用在标准酪氨酸缓冲液(20μl/孔)中的0.5×Fluo8-NW染料负载1小时。根据以下方案，用激动剂模式和PAM模式将细胞与化合物接触后，通过使用筛选系统测量荧光来测定单正十二烷基磷酸酯激活由CHO细胞表达的fGPR120的能力：

1.激动剂模式：注射3×单正十二烷基磷酸酯(10μl/孔)，其中测量荧光(即激动剂活性)3分钟。

2.PAM模式：注射3×单正十二烷基磷酸酯(10μl/孔)，其中测量荧光3分钟。在另外约1分钟后，以对应于激动剂EC₂₀的浓度注射3×fGPR120激动剂(15μl/孔)，其中测量荧光(即PAM活性)3分钟。fGPR120激动剂为1.5μM的α-亚麻酸。对于空白对照(mock control)，使用0.2μ的ATP作为激动剂。

使用系统测量最大ΔF/F值，并将其输出用于数据分析。对于PAM数据分析，将数据归一化到EC₁₀₀(作为100％活性)值和EC₂₀(作为0％活性)值。

将实验中使用的化合物在0.01％BSA(不含脂肪酸)中溶解6×，然后用缓冲液在化合物板上预混合。细胞的最终BSA浓度为0.00167％。

激动剂模式实验的对照—α-亚麻酸的剂量响应曲线(图12)：100μM的α-亚麻酸(fGpr120最大信号)，30μM的ATP(最大信号)，缓冲液(最小信号)，缓冲液+0.01％BSA(最小信号)。

PAM模式实验的对照—α-亚麻酸(fGpr120)或ATP(空白)的剂量响应曲线(图12)：100μM的α-亚麻酸(Gpr120的最大信号)，1.5μM的α-亚麻酸(EC₂₀，Gpr120的最小信号)，30μM的ATP(最大信号)，0.2μM的ATP(EC₂₀，最小信号)。

结果：如图11所示，在fGPR120激动剂存在下，单正十二烷基磷酸酯作为PAM调节fGPR120的活性。

***

尽管已经详细描述了本文公开的主题及其优点，但是应当理解，可在不脱离所附权利要求所限定的本发明的精神和范围的情况下作出各种变化、取代和更改。此外，本申请的范围并非旨在限于本说明书中所描述的物质的处理、处理、制造和组合物、装置、方法和步骤的具体实施方案。正如本领域普通技术人员从本发明公开的内容将容易地认识到，根据本文公开的主题，可以利用目前存在的或以后要开发的与本文描述的对应实施方案执行基本相同的功能或实现基本相同结果的物质的处理、处理、制造和组合物、装置、方法或步骤。因此，所附权利要求旨在包括在此类物质的处理、处理、制造、组合物、装置、方法或步骤的范围内。

本申请通篇引用专利、专利申请、出版物、产品说明和协议，其公开内容通过引用以其整体并入本文作为用于所有的目的。

序列表

<110> 马斯公司

<120> 调节脂肪酸受体活性的化合物及包含该化合物的宠物食品

<130> 069269.0162

<150> US 62/090138

<151> 2014-12-10

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 361

<212> PRT

<213> 家猫（Felis catus）

<400> 1

Met Ser Pro Glu Cys Ala Gln Ala Ala Gly Thr Gly Ser Pro Arg Ser

1 5 10 15

Leu Glu Arg Ala Asn Arg Thr Arg Phe Pro Phe Phe Ser Asp Val Lys

20 25 30

Gly Asp His Arg Leu Val Leu Thr Ala Val Glu Thr Val Val Leu Ala

35 40 45

Leu Ile Phe Ala Val Ser Leu Leu Gly Asn Val Cys Ala Leu Val Leu

50 55 60

Val Ala Arg Arg Arg Arg Arg Gly Thr Thr Ala Cys Leu Val Leu Asn

65 70 75 80

Leu Phe Cys Ala Asp Leu Leu Phe Thr Ser Ala Ile Pro Pro Val Leu

85 90 95

Ala Val Arg Trp Thr Glu Ala Trp Leu Leu Gly Pro Val Ala Cys His

100 105 110

Leu Leu Phe Tyr Val Met Ser Leu Ser Gly Ser Val Thr Ile Leu Thr

115 120 125

Leu Ala Ala Val Ser Leu Glu Arg Met Val Cys Ile Val Arg Leu Gln

130 135 140

Arg Gly Val Arg Gly Leu Gly Arg Arg Ala Arg Ala Ala Leu Leu Ala

145 150 155 160

Leu Ile Trp Gly Tyr Ser Ala Leu Ala Ala Leu Pro Leu Cys Val Phe

165 170 175

Phe Gln Val Val Pro Gln Arg Leu Ser Gly Arg Asp Gln Glu Ile Pro

180 185 190

Ile Cys Thr Leu Ser Trp Pro Ser Ile Ala Gly Glu Ile Ser Trp Asp

195 200 205

Val Ser Phe Val Thr Leu Asn Phe Leu Met Pro Gly Leu Leu Ile Val

210 215 220

Ile Ser Tyr Ser Lys Ile Leu Gln Ile Thr Lys Ala Ser Arg Lys Arg

225 230 235 240

Leu Thr Val Asn Leu Ala Ser Ser Glu Ser His His Ile Arg Val Ser

245 250 255

Gln Gln Asp Phe Arg Leu Phe Arg Thr Leu Phe Leu Leu Met Ile Ser

260 265 270

Phe Phe Ile Met Trp Ser Pro Ile Ile Ile Thr Ile Leu Leu Ile Leu

275 280 285

Ile Gln Asn Phe Lys Gln Asp Leu Val Ile Trp Pro Ser Leu Phe Phe

290 295 300

Trp Val Val Ala Phe Thr Phe Ala Asn Ser Ala Leu Asn Pro Ile Leu

305 310 315 320

Tyr Asn Met Ser Leu Phe Arg Asn Glu Trp Arg Lys Ile Phe His Cys

325 330 335

Phe Phe Tyr Pro Glu Lys Gly Ala Met Phe Thr Asp Thr Ser Val Arg

340 345 350

Arg Asn Asp Leu Ser Val Ile Ser Asn

355 360

Claims (14)

1.一种风味组合物，所述组合物包含单正十二烷基磷酸酯和选自由以下组成的组的化合物：

(5Z,8Z,11Z,14Z)-二十碳-5,8,11,14-四烯酸；

(5Z,8Z)-二十碳-5,8-二烯酸；

(11Z)-十八碳-11-烯酸；

(9E)-十六碳-9-烯酸；

十三碳-12-烯酸；

S-法呢基硫代乙酸；

(10Z)-十五碳-10-烯酸；

10(E),12(Z)-共轭亚油酸；

(10Z,13Z)-十九碳-10,13-二烯酸；

(9Z,11E)-十八碳-9,11-二烯酸；

顺-7-十六碳烯酸；

十二烷酸；

(9Z)-十四碳-9-烯酸；

(11Z,14Z,17Z)-二十碳-11,14,17-三烯酸；

(6Z,9Z,12Z)-十八碳-6,9,12-三烯酸；

(11Z,14Z)-二十碳-11,14-二烯酸；

(9Z)-十六碳-9-烯酸；

12-甲氧基十二烷酸；

(8Z,11Z,14Z)-二十碳-8,11,14-三烯酸；

(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯酸；

(10Z)-十七碳-10-烯酸；

松油酸；

(9Z,12Z,15Z)-十八碳-9,12,15-三烯酸；

十三烷酸；

十四烷酸；

(9Z)-十八碳-9-烯酸；

(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-二十碳-5,8,11,14,17-五烯酸；

(10E)-十五碳-10-烯酸；

(9E)-十四碳-9-烯酸；

(6Z,9Z,12Z,15Z)-十八碳-6,9,12,15-四烯酸；和

(5Z,8Z,11Z)-二十碳-5,8,11-三烯酸。

2.一种包含权利要求1所述的风味组合物的食品，其中所述风味组合物以有效增加食品的脂肪酸味道的量存在，正如通过味道测试者小组测定的。

3.一种包含权利要求1所述的风味组合物的食品，其中所述风味组合物以有效增加食品的适口性的量存在，正如通过味道测试者小组测定的。

4.根据权利要求2或3所述的食品，其中所述风味组合物以所述食品的10pM至1M、0.01ppm至1000ppm，或0.01w/w％至10w/w％的浓度存在。

5.根据权利要求2或3所述的食品，其中所述食品包括宠物食品。

6.根据权利要求5所述的食品，其中所述宠物食品是猫科动物宠物食品或犬科动物宠物食品。

7.根据权利要求6所述的食品，其中所述宠物食品是湿宠物食品。

8.根据权利要求6所述的食品，其中所述宠物食品是干宠物食品。

9.根据权利要求4所述的食品，其中所述食品包括宠物食品。

10.根据权利要求9所述的食品，其中所述宠物食品是猫科动物宠物食品或犬科动物宠物食品。

11.根据权利要求10所述的食品，其中所述宠物食品是湿宠物食品。

12.根据权利要求10所述的食品，其中所述宠物食品是干宠物食品。

13.一种提高食品中脂肪酸味道强度的方法，所述方法包括将食品与权利要求1所述的风味组合物混合，其中所述风味组合物以有效增加食品的脂肪酸味道的量存在，正如通过味道测试者小组测定的。

14.根据权利要求13的方法，其中所述风味组合物以10pM至1M、0.01ppm至1000ppm或0.01w/w％至10w/w％的浓度存在于混合物中。