CN106993466A - 一种玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种生产及栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种生产和栽培方法，以玉米秸秆枝条型薄片为载体，放入液体培养基中灭菌，培养基冷却后接入均质化的食用菌液体菌种，150 rev/min、30℃培养，收集吸附大量食用菌菌丝的薄片，即为食用菌枝条型固定化菌种，将枝条型固定化菌种接种于中心已预留孔洞的灭菌培养料，适温培养使菌丝充分吃料，经出菇管理收获菇子实体。本发明提供的玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种生产周期短、成本低；应用于栽培时接种极为方便，菌丝吃料时间明显缩短，此外利用废弃物玉米秸秆生产枝条型菌种，不依赖木材，对森林无破坏作用。因此本发明具有极大的应用和推广价值。

Description

一种玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种生产及栽培方法

技术领域

本发明属于食用菌及生物技术领域，尤其涉及一种玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种生产和栽培方法。

背景技术

食用菌是一类可产生子实体并具有极高营养和药用价值的大型真菌，常见种类有香菇、双孢蘑菇、平菇、杏鲍菇、银耳等。食用菌营养丰富，含有蛋白质、不饱和脂肪酸、氨基酸、膳食纤维、维生素、微量元素等，其蛋白质含量高于蔬菜。食用菌还含有特殊风味物质，使其味道鲜美，因此，食用菌是一种深受人们喜爱的食物，目前已成为人们日常饮食中的一道重要菜品。尤其引人关注的是食用菌含有多种生物活性分子，以多糖最为著名，具有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、免疫调节等生理活性，因此，食用菌还成为新药开发的重要来源，其潜力越来越受到研究人员的重视。

食用菌生长需要特殊光、湿、温度等自然环境，野生资源极其有限，人工采集不能满足人们不断增长的需求，因此，人工栽培是一种必然选择，目前代料栽培已成为食用菌生产的主要方式，20多种食用菌已实现商业规模生产。食用菌栽培主要利用林业、农业、食品工业等所产生的不同废弃物如木屑、棉籽壳、甘蔗渣、玉米芯、稻草、麦杆、豆杆、花生壳、莲子壳、野草、酒渣等作为主料，额外添加麸皮、玉米粉、米糠、石灰、石膏等作为辅料满足食用菌生长繁殖需求。由于食用菌生产原料大都可再生，且来源广泛，价格低，易于大量获得，因此食用菌属于可持续发展产业，具有极大发展空间和前景。此外，食用菌栽培在为人类提供大量食物的同时还可减轻废弃物对环境的极大破坏作用，因此食用菌栽培也具有重要的生态意义。

我国是食用菌生产大国，栽培分布全国各地，产量占世界总产量的70%以上，其产值继粮、棉、油、果、蔬后占第六位，因此食用菌已成为我国农业的重要组成部分。食用菌栽培中主要使用木屑种、木枝条种以及液体菌种等。木屑种应用最为普遍，近年来木枝条种的生产应用呈上升趋势，两者均属固态发酵法生产，但两者生产周期长以及对森林造成破坏。为有效利用农业生产中产生的废弃物如玉米秸秆以及缩短菌种生产周期，本发明公布了利用农业废弃物玉米秸秆，将其制作为薄片作为细胞吸附载体，液体培养和食用菌菌丝细胞吸附法生产枝条型固定化菌种及其栽培应用方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种以玉米秸秆枝条型薄片为载体，液体培养自然吸附技术生产枝条型食用菌固定化菌种及其栽培方法。

具体方法为：

（1）收集玉米采收后的新鲜秸秆，将其去叶去皮，切成长、宽、厚为120 mm ×10 mm×2mm的薄片，70℃烘干；

（2）以薄片为载体，生产枝条型固定化菌种方法为：每20根薄片用棉绳子捆成一捆；每3捆放置于1 L三角瓶，移入400 mL发酵培养基，胶塞封口；121℃灭菌30 min；冷却后接种50mL均质（研磨、均质机或超声波破碎进行均质）处理的液体菌种，150 rev/min、30℃培养；4-5 d收集吸附和生长大量食用菌菌丝的薄片，即为玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种；

（3）上述枝条型固定化菌种栽培应用方法：将枝条型固定化菌种接种放置于中心已预留孔洞的灭菌培养料，孔洞直径为1.5 cm、从料面穿至近料底，25℃培养走菌吃料；10-14 d吃料完全后，经出菇管理（开袋、通风、提供光源及湿度），收获菇子实体。

所述的发酵培养基配方为每升中含葡萄糖35 g、蛋白胨5 g、酵母粉4 g、磷酸二氢钾1.0 g、硫酸镁0.5 g。

所述的灭菌培养料，每包750克湿料配方按质量分数为：棉籽壳60%、木屑20%、麸皮18%、石膏2%，其含水量为60-65%。

本发明的有益效果是：与木屑种生产周期（以活化的母种接种至装有600克培养料的菌包，长满通常需30 d以上）相比，本发明玉米秸秆枝条型固定化菌种生产周期仅为9 d（活化的母种接种摇瓶培养约5 d时，均质后接种固定化培养约4 d），菌种制备时间显著缩短；本发明采用玉米秸秆为食用菌细胞固定化材料，提高了玉米秸秆的利用价值；本发明采用玉米秸秆作为固定化材料，可降低菌种生产成本；本发明生产的玉米秸秆枝条型固定化菌种应用于栽培，接种操作方便，并降低菌包杂菌污染率；本发明的玉米秸秆枝条型固定化菌种栽培发菌周期仅为10-14 d，与木屑种发菌周期（约25-40 d）相比，本发明缩短了15-26d，极大提高了生产效率。本发明具有极大的应用和推广价值。

具体实施方式

本发明公布了一种以玉米秸秆薄片为载体，液体培养自然吸附生产枝条型食用菌固定化菌种及栽培方法，下面实施例来进一步描述本发明的使用方法，但这些实施例仅是规范性的，并不对本发明的范围构成任何限制。此外，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换仍在本发明保护范围。

实施例1 平菇的玉米秸秆枝条型固定化菌种生产及栽培应用

1、收集玉米采收后的新鲜秸秆，将其去叶、去皮，切成长、宽、厚为120 mm × 10 mm ×2 mm的薄片，70℃烘干；

2、每20根薄片用棉绳子捆成一捆；将3捆放置于1 L三角瓶，移入400 mL发酵培养基，配方（每升）为葡萄糖35 g、蛋白胨5 g、酵母粉4 g、磷酸二氢钾1.0 g、硫酸镁0.5 g；胶塞封口，121℃灭菌30 min；；

3、培养基冷却后接种50 mL均质（超声波破碎进行均质）处理的平菇液体菌种，150rev/min、30℃培养；

4、培养4 d后吸附和生长大量菌丝的薄片，即为平菇枝条型固定化菌种；

5、将枝条型固定化菌种接种至灭菌的预留孔洞的培养料菌包。菌包对折径规格为17cm ×33 cm，装料量为750 g，配方为60%棉籽壳、20%木屑、18%麸皮、2%石膏，调含水量为63%，孔洞直径为1.5 cm，从培养料表面至近料底。

6、菌包放置于菇棚，遮阴，暗培养，温度在25℃，相对湿度65%，每2天通风一次；

7、菌包菌丝吃料完全后(12 d)开袋，提供光照1000 lux，温度控制在15℃，经常喷水，每天通风3次诱导原基形成和子实体生长；

8、子实体菇盖长至近平展时采收，采收一潮菇，称重,计算生物转化率。

与利用木屑种栽培相比，枝条型固定化菌种菌种制备时间仅为9 d（活化后的母种接种到摇瓶液体培养需5 d，均质后摇瓶培养固化时间需4 d），木屑种通常需30 d(活化母种接种于装有600克培养料的菌包，吃料完全约需30 d),菌种制备时间缩短21 d；本发明的枝条型固定化菌种接种方便，接种效率高；本发明枝条型固定化菌种走菌时间为12 d，木屑种为37 d，走菌时间缩短25 d；本发明枝条型固定化菌种生物转化率为71%,木屑种为62%，有很大提高。

实施例2 杏鲍菇玉米秸秆枝条型固定化菌种生产及栽培应用

1、收集玉米采收后的新鲜秸秆，将其去叶、去皮，切成长、宽、厚为120 mm× 10 mm ×2 mm的长条薄片，70℃烘干；

2、每20根薄片用棉绳子捆成一捆；每3捆放置于1 L的三角瓶，移入400 mL发酵培养基，配方（每升）为葡萄糖35 g、蛋白胨5 g、酵母粉4 g、磷酸二氢钾1.0 g、硫酸镁0.5 g；胶塞封口，121℃灭菌30 min；；

3、培养基冷却后接入50 mL经均质（用均质机进行均质）处理的杏鲍菇液体菌种，150rev/min、30℃培养；

4、培养5 d后，收集吸附和生长大量菌丝的薄片，即为杏鲍菇枝条型固定化菌种；

5、将枝条型固定化菌种接种至灭菌的预留孔洞的培养料菌包。菌包对折径规格为18cm × 33 cm，装料量为900 g，配方为60%棉籽壳、20%木屑、18%麸皮、2%石膏，调含水量为65%，孔洞直径为1.5 cm，从培养料表面至近料底。

6、菌包放置菇房暗培养，自动控温保持在25℃，相对湿度70%，CO₂浓度0.1%以下；

7、菌包菌丝吃料完全后(14 d)，继续培养7 d后开袋，提供光照1000 lux，温度控制在12℃，湿度95%，CO₂浓度0.1%以下,诱导原基形成和子实体生长；

8、菌包料面形成大量幼菇时，采取疏蕾措施，保留大的幼菇2-3朵；

8、子实体菇盖长至近平展时采收，采收一潮菇，称重,计算生物转化率。

与利用木屑种栽培相比，固定化菌种菌种制备时间仅为9 d（活化后的母种接种到摇瓶液体培养需5 d，均质后摇瓶培养固化时间需4 d），木屑种通常需30 d(活化母种接种于装有600克培养料的菌包，吃料完全约需30 d),菌种制备时间缩短21 d；本发明的枝条型固定化菌种接种方便，接种效率高；本发明枝条型固定化菌种走菌时间为14 d，木屑种为38d，走菌时间缩短24 d，显著提高生产效率；本发明枝条型固定化菌种生物转化率为54%,木屑种为46%，有很大提高。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims (3)

1.一种玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种生产及栽培方法，其特征在于：所述方法包括如下：

（1）收集玉米采收后的新鲜秸秆，将其去叶去皮，切成长、宽、厚为120 mm × 10 mm ×2 mm的薄片，呈枝条型，70℃烘干；

（2）以薄片为载体，生产枝条型固定化菌种方法为：每20根薄片用棉绳子捆成一捆；每3捆放置于1 L三角瓶，移入400 mL发酵培养基，胶塞封口，121℃灭菌30 min；冷却后接种50mL均质处理的液体菌种，150 rev/min、30℃培养；4-5 d收集吸附和生长大量食用菌菌丝的薄片，即为食用菌枝条型固定化菌种；

（3）枝条型固定化菌种栽培应用方法：无菌条件下将食用菌枝条型固定化菌种接种放置于中心已预留孔洞的灭菌培养料中，其孔洞为直径1.5 cm，从培养料表面穿至近料底；接种后25℃培养走菌吃料；10-14 d吃料完全后，经出菇管理，收获菇子实体。

2.根据权利要求1所述的一种玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种生产和栽培方法，其特征在于：所述的发酵培养基配方为每升中含葡萄糖35 g、蛋白胨5 g、酵母粉4 g、磷酸二氢钾1.0 g、硫酸镁0.5 g。

3.根据权利要求1所述的一种玉米秸秆枝条型食用菌固定化菌种生产和栽培方法，其特征在于：所述的灭菌培养料，每包750克湿料配方按质量分数为：棉籽壳60%、木屑20%、麸皮18%、石膏2%，其含水量为60-65%。