CN106963731A - 一种pH敏感型的SN‑38胶束及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种pH敏感型的SN‑38胶束，它是包载有7‑乙基‑10‑叔丁氧羰基喜树碱的单甲氧基聚乙二醇‑聚(ε‑己内酯‑ran‑三亚甲基碳酸酯)胶束。本发明还公开了前述胶束的制备方法和用途。本发明制备得到了含有SN‑38‑BOC的胶束，抗肿瘤活性优良，临床应用前景良好。

Description

一种pH敏感型的SN-38胶束及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种一种pH敏感型的SN-38胶束及其制备方法和用途。
背景技术
癌症这种可怕的疾病在世界范围内的死亡率依旧居高不下。据文献报道， 结直肠癌每年大约有一百万的发病率并且在男性和女性中的死亡率都有33％ 之多。虽然就癌症的治疗方法在近几年有所发展，但是对于癌症尤其是结直 肠癌，化疗和放疗依旧是首选的治疗方案。令人遗憾的是，化疗药物的器官 毒性和一些其他的副作用大大限制了其进一步的临床应用。
CPT(喜树碱)是一种抑制DNA拓扑异构酶1(TOP1)成熟的抗肿瘤 药，在所有CPT类似物中，7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)作为最具代表的 一个活性类似物，其羟基在C-10位置，乙基在C-7位置，因此在生理环境 下稳定性好，与其他的CPT类似物相比药效较高。但是，其具有一个非常大 的缺陷，即几乎不溶于水，也不溶解在大多数药用溶剂和油中，直接制成液 体制剂受到限制，因而临床使用也大大受限。因此，目前关于SN38的大多 数研究均在对SN38进行化学结构修饰，以改善其溶解性，目前研发上市的 伊利替康的活性成分即是对SN38进行结构修改后得到的溶剂型比较好的衍 生物。但是由于伊利替康具有较大的毒副作用，而且在人体内催化伊利替康 转化成有活性的SN-38所需的羧酸酯酶(hCE)具有明显的种属差异和个体 差异。例如，在体内平均大约只有28％的伊利替康被转化成有活性的SN-38。
目前全世界的研究人员都在进一步对SN38进行研究，希望提供一种安 全、有效的SN-38的新的药物。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种新的药物：pH敏感型的SN-38 胶束，还提供了它的制备方法和用途。
一种pH敏感型的SN-38胶束，它是包载有7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树 碱的单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯)胶束。
7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱，后简称SN-38-BOC，其结构式为：
单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯)，后简称 MPEG-P(CL-ran-TMC)，其结构式为：
所述胶束中，7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的包载量为0.99～2.99％，优 选为2.99％。
其中，所述胶束的粒径为30～34nm，优选为32～34nm，PDI为0.11± 0.05，优选为0.13±0.015。
本发明还提供了一种制备前述的pH敏感型的SN-38胶束的方法，步骤 如下：
(1)取单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯)和7-乙 基-10-叔丁氧羰基喜树碱，溶解于丙酮中，旋干，形成一层薄膜；
(2)将薄膜溶解于热水中，用0.22um的滤膜过滤，即可。
步骤(1)中，所述单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸 酯)的制备方法如下：取单甲氧基聚乙二醇、ε-己内酯、三亚甲基碳酸酯和 辛酸亚锡，在氮气保护条件下反应，用石油醚沉淀，透析，冻干，即得。
所述单甲氧基聚乙二醇、ε-己内酯、三亚甲基碳酸酯和辛酸亚锡的重量 比为10：8.5：2.5：0.1；所述反应是在130℃搅拌反应24h。
步骤(1)中，所述7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的制备方法如下：取7- 乙基-10-羟基喜树碱和二碳酸二叔丁酯，溶于二氯甲烷中，随后加入吡啶作 为催化剂，反应；分别用0.5N的盐酸和饱和NaHCO3洗；取有机相，干燥， 过滤，旋干，即得。
所述7-乙基-10-羟基喜树碱和二碳酸二叔丁酯的摩尔比例为2.745： 4.582。
步骤(1)中，单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯) 与7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的重量比为97:3～99:1.
步骤(1)中，旋干的温度为60℃。
步骤(2)中，所述热水的温度为60℃。
本发明还提供了前述pH敏感型的SN-38胶束在制备抗肿瘤药物中的用 途。
单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯) (MPEG-P(CL-ran-TMC))是一种生物可降解极低毒性的两嵌段共聚物，并 且可以将疏水性药物包载成水溶性药物胶束。但是，在我们的预实验中， SN-38几乎不能包载在MPEG-P(CL-ran-TMC)胶束中，无法形成包含药物的 胶束。
然而，本发明将SN-38-BOC与MPEG-P(CL-ran-TMC)组合却可以有效形 成胶束，而且该胶束具有pH敏感性，其在肿瘤组织的弱酸性环境(pH5.5-6.8) 可以快速的将SN-38-BOC的Boc酯水解掉形成具有活性的SN-38，用于抗肿 瘤的效果优良，而且副作用小。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段， 在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、 替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步 的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1：SN-38-BOC的合成与敏感性。(A)SN-38-BOC的合成。(B) SN-38-BOC的水解示意图。(C)SN-38-BOC在不同pH条件下(pH＝7.4、6.8 和5.5)水解成SN-38的速率图。(D)在pH5.5不同时间下(1、5和7小时) SN-38-BOC转化为SN-38的效率。
图2：SN-38-BOC胶束的制备与表征。(A)制备SN-38-BOC胶束的示 意图。(B)SN-38-BOC胶束的粒径分布情况。(C)SN-38-BOC胶束的电位 分布。(D)制备好的SN-38-BOC胶束(从左到右依次为：空白胶束，SN-38-BOC 水溶液和SN-38-BOC胶束)。(E)SN-38-BOC胶束的投射电镜图。
图3：SN-38-BOC胶束的毒性评价。(A)和(B)裸药SN-38-BOC和 SN-38-BOC胶束在24小时对HCT116和CT26细胞的毒性评价。(C)和(D) 裸药SN-38-BOC和SN-38-BOC胶束在48小时对HCT116和CT26细胞的毒 性评价。(E)和(F)空白胶束在24、48和72小时对HCT116和CT26细胞 的毒性评价。所有的结果均为三次平行试验的平均值±方差。
图4：不同试验组(生理盐水组，空白胶束组，裸药SN-38-BOC和 SN-38-BOC胶束组)诱导HCT116和CT26细胞凋亡的情况。所有的结果均 为三次平行试验的平均值±方差。
图5：不同试验组(生理盐水组，空白胶束组，裸药SN-38-BOC和 SN-38-BOC胶束组)在转基因(GFP)斑马鱼中抗血管生成效果。所有的结 果均为三次平行试验的平均值±方差。
图6：SN-38-BOC胶束在HCT116和CT26皮下瘤模型中的抑瘤效果。 (A)HCT116和CT26皮下瘤模型中各治疗组中的肿瘤大小代表图片。(B) SN-38-BOC胶束在HCT116和CT26皮下瘤模型中的肿瘤体积抑制生长曲 线图。(C)HCT116和CT26皮下瘤模型中不同治疗组肿瘤体积变化曲线图。
具体实施方式
实施例1本发明pH敏感型含有SN-38-BOC的胶束的制备
1、制备方法
(1)SN-38-BOC的合成
将SN-38(1g，2.745mmol)和二碳酸二叔丁酯(1g，4.582mmol)溶 在100mL二氯甲烷中，随后加入5mL吡啶作为催化剂。上述溶液室温搅拌 反应12h。反应完全后，反应液分别用0.5N的盐酸(3×100mL)和饱和 NaHCO3(1×100mL)洗。有机相用无水Mg2SO4干燥，过滤。滤液用旋转 蒸发仪旋干后得到SN-38-BOC(7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱)(浅黄色固体，910mg，91％)。
7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的结构式为：
7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.04(t,3H, J＝7.2Hz),1.41(t,3H,J＝7.6Hz),1.61(s,9H),1.85–1.93(m,2H),3.17(q,2H,J ＝7.6Hz),3.81(brs,1H),5.27(s,2H),5.31(d,1H,J＝16.4Hz),5.75(d,1H,J ＝16.0Hz),7.67(dd,1H,J＝2.4,9.2Hz),7.72(s,1H),7.91(d,1H,J＝2.4Hz), 8.28(d,1H,J＝9.2Hz)。
(2)MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物的合成
MPEG-P(CL-ran-TMC)是通过开环聚合反应合成，具体如下：将MPEG (10g)，ε-CL(8.5g)，TMC(2.5g)和辛酸亚锡(100mg，5‰，辛酸亚锡的 量为MPEG,ε-CL和TMC总和质量的千分之五)一起装入氮气保护的三颈瓶 中。氮气保护，130℃搅拌反应24h。反应液用石油醚沉淀，透析再冻干得到 MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物。
本发明MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物又可称为MPEG–P(CL-co-TMC)， 可按照XIYANG etal.，In Vitro and In Vivo Safety Evaluation of Biodegradable Self-Assembled Monomethyl Poly(Ethylene Glycol)–Poly (_-Caprolactone)–Poly(Trimethylene Carbonate)Micelles，JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES 103:305–313,2014公开的方法制备。
(3)SN-38-BOC胶束的制备与表征
通过一步固相分散法制备SN-38-BOC胶束。首先，将 97mgMPEG-P(CL-ran-TMC)和3mgSN-38-BOC一起充分溶解到5mL丙酮中。 在60℃条件下用旋转蒸发仪将溶剂旋干，同时形成一层薄膜。然后，用60℃ 热水将薄膜溶解。SN-38-BOC和MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物在水中通过 自组装形成SN-38-BOC胶束。将SN-38-BOC胶束溶液用0.22um的滤膜过 滤，冻干并保存在4℃中待用。
2、性质检测
2.1检测方法
2.1.1SN-38-BOC的pH敏感性
将0.5mg SN-38-BOC分别溶于10mL pH值为7.4、6.8和5.5的PBS(含 0.5％吐温-80，v/v)中，每组15个样品。SN-38-BOC溶液置于37℃摇床(100 转/分钟)中。在预定的时间点(1,3,5,7,9h)，从每组中取出样品，用高效 液相色谱法检测溶液中由SN-38-BOC转化的SN-38的量。每个时间点平行 做三次实验。
2.1.2SN-38-BOC胶束的性质检测
用马尔文粒径分析仪测定SN-38-BOC胶束的粒径分布和电位。
SN-38-BOC胶束的载药量(DL)和包封率(EE)测定如下：将10mg 冻干的SN-38-BOC/MPEG-P(CL-ran-TMC)胶束溶于0.1mL乙腈中。用HPLC 检测样品当中SN-38-BOC的量。SN-38-BOC胶束的载药量(DL)算法如下：
2.2检测结果
2.2.1SN-38-BOC的合成与敏感性探讨
在预实验中，我们发现具有抗肿瘤活性的7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38) 很难被一些两亲性聚合物，例如MPEG-P(CL-ran-TMC)包载形成稳定的药物 胶束。但是，SN-38被认为是在体内发挥药效的主要物质。
为了验证SN-38-BOC是否可以在肿瘤部位有效的转换成具有活性的 SN-38,我们开展了SN-38-BOC pH敏感性实验。如图1B，C和D所示，在 pH5.5和6.8的环境中作用7个小时以后，SN-38的转换效率可以达到将近 90％。Boc酯键在弱酸性环境中的水解速度明显高于pH7.4的生理条件的水 解速度。然而在生理pH条件下作用5小时，也检测到有40％的转换效率， 但是随着作用时间的延长Boc酯的水解达到平衡。因此，在肿瘤弱酸性环境 下SN-38-BOC可以高效率的转换成具有活性的SN-38，从而可以提高其抗肿 瘤活性。
2.2.2SN-38-BOC胶束的制备与表征
如图2所示，SN-38-BOC和MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物通过自组装形 成SN-38-BOC胶束。SN-38-BOC胶束载药量为2.99％。粒径、PDI分别为33±1nm、0.14±0.01。胶束表面电荷为-0.6mV。
实验结果说明，本发明方法制备得到了含有SN-38-BOC的胶束，且其具 有pH敏感性，能在肿瘤的特定酸性条件下转换成具有活性的SN-38。
实施例2本发明pH敏感型含有SN-38-BOC的胶束的制备
1、制备方法
(1)SN-38-BOC的合成
同实施例1。
(2)MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物的合成
同实施例1。
(3)SN-38-BOC胶束的制备与表征
通过一步固相分散法制备SN-38-BOC胶束。首先，将 98mgMPEG-P(CL-ran-TMC)和2mg SN-38-BOC一起充分溶解到5mL丙酮中。 在60℃条件下用旋转蒸发仪将溶剂旋干，同时形成一层薄膜。然后，用60℃ 热水将薄膜溶解。SN-38-BOC和MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物在水中通过 自组装形成SN-38-BOC胶束。将SN-38-BOC胶束溶液用0.22um的滤膜过 滤，冻干并保存在4℃中待用。
2、检测
SN-38-BOC和MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物通过自组装形成 SN-38-BOC胶束。SN-38-BOC胶束载药量为1.98％。粒径、PDI分别为32± 2nm、0.11±0.01。
实验结果说明，本发明方法制备得到了含有SN-38-BOC的胶束，且其具 有pH敏感性，能在肿瘤的特定酸性条件下转换成具有活性的SN-38。
实施例3本发明pH敏感型含有SN-38-BOC的胶束的制备
1、制备方法
(1)SN-38-BOC的合成
将SN-38(1g，2.745mmol)和二碳酸二叔丁酯(1g，4.582mmol)溶 在100mL二氯甲烷中，随后加入5mL吡啶作为催化剂。上述溶液室温搅拌 反应12h。反应完全后，反应液分别用0.5N的盐酸(3×100mL)和饱和 NaHCO3(1×100mL)洗。有机相用无水Mg2SO4干燥，过滤。滤液用旋转 蒸发仪旋干后得到SN-38(浅黄色固体，910mg，91％)。1H-NMR(400MHz, CDCl3):δ1.04(t,3H,J＝7.2Hz),1.41(t,3H,J＝7.6Hz),1.61(s,9H),1.85–1.93 (m,2H),3.17(q,2H,J＝7.6Hz),3.81(brs,1H),5.27(s,2H),5.31(d,1H,J＝16.4 Hz),5.75(d,1H,J＝16.0Hz),7.67(dd,1H,J＝2.4,9.2Hz),7.72(s,1H),7.91 (d,1H,J＝2.4Hz),8.28(d,1H,J＝9.2Hz)。
(2)MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物的合成
MPEG-P(CL-ran-TMC)是通过开环聚合反应合成，具体如下：将MPEG (10g)，ε-CL(8.5g)，TMC(2.5g)和辛酸亚锡(100mg，5‰)一起装入氮 气保护的三颈瓶中。氮气保护，130℃搅拌反应24h。反应液用石油醚沉淀， 透析再冻干得到MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物。
(3)SN-38-BOC胶束的制备与表征
通过一步固相分散法制备SN-38-BOC胶束。首先，将 99mgMPEG-P(CL-ran-TMC)和1mg SN-38-BOC一起充分溶解到5mL丙酮中。 在60℃条件下用旋转蒸发仪将溶剂旋干，同时形成一层薄膜。然后，用60℃ 热水将薄膜溶解。SN-38-BOC和MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物在水中通过 自组装形成SN-38-BOC胶束。将SN-38-BOC胶束溶液用0.22um的滤膜过 滤，冻干并保存在4℃中待用。
2、检测
SN-38-BOC和MPEG-P(CL-ran-TMC)共聚物通过自组装形成 SN-38-BOC胶束。SN-38-BOC胶束载药量为0.99％。粒径、PDI分别为32± 1、0.11±0.01。
实验结果说明，本发明方法制备得到了含有SN-38-BOC的胶束，且其具 有pH敏感性，能在肿瘤的特定酸性条件下转换成具有活性的SN-38。
以下用实验例的方式来说明本发明的有益效果：
实验例1本发明pH敏感型含有SN-38-BOC的胶束的抗肿瘤活性
取实施例1制备的含有SN-38-BOC的胶束，进行如下实验，以检测其抗 肿瘤活性：
1、试验方法
1.1 SN-38-BOC胶束的抗细胞增殖作用
我们在HCT116和CT26细胞中用MTT法检测SN-38-BOC胶束的抗细 胞增殖作用。以4000/孔的密度将细胞铺于96孔板中，分别用裸药SN-38-BOC, SN-38-BOC胶束和空白胶束以不同浓度(2.5，5,10,20,40ug/mL)作用细胞 24和48小时。最后加入MTT作用4小时，弃去空中液体加入150uL DMSO， 测570nm处的吸光度。
1.2 SN-38-BOC胶束的促凋亡效果
将HCT116和CT26细胞铺于6孔板中，分别用分别用裸药SN-38-BOC(5 ug/mL),SN-38-BOC胶束(5ug/mL SN-38-BOC)和空白胶束作用细胞。不做任 何处理的细胞培养基当做空白对照。24小时后，收集每孔中的细胞用FITC-conjugated Annexin V/PI处理细胞。用流式细胞仪检测细胞凋亡比率(包 括Annexin V阳性,PI阴性的早凋和Annexin V/PI双阳性的晚凋)。
1.3 SN-38-BOC胶束的抗血管性能
本实验利用绿色荧光蛋白转基因斑马鱼评价SN-38-BOC胶束抗新生血 管的性能。分别将20个斑马鱼卵培养于含SN-38-BOC(0.05μg/mL), SN-38-BOC胶束(0.05μg/mL SN-38-BOC)或空白胶束的Holtfreter’s溶液 中。15小时后，用0.01％的三卡因麻醉斑马鱼后用共聚焦显微镜拍摄斑马鱼 血管生长情况。
1.4 SN-38-BOC胶束在小鼠体内抗肿瘤活性评价
将100uL HCT116细胞悬液(10×106个细胞)注射到BALB/c裸鼠(6-8 周龄)右大腿皮下。当肿瘤的直径涨到mm左右时，将小鼠随机分为4组(生 理盐水对照组，空白胶束组，SN-38组(20mg/kg)和SN-38-BOC胶束(20 mg/kgSN-38-BOC)组)。尾静脉给药，每三天给一次药。给药期间，记录小 鼠的肿瘤体积。
2、实验结果
2.1 SN-38-BOC胶束的抗细胞增殖评价
如图3所示随着SN-38-BOC裸药和SN-38-BOC胶束的浓度增加，细胞 增殖的抑制效果明显增强，其中，SN-38-BOC胶束的抑制作用明显高于 SN-38-BOC裸药的抑制作用(p<0.01)，HCT116细胞的48小时检测结果显 示SN-S8-BOC胶束的IC50(2.1ug/mL)明显低于裸药SN-38-BOC组 (10ug/mL)，在CT26细胞中也是相似的结果，当作用时间延长到72小时， 此现象更加明显。
同时空白胶束MPEG-P(CL-ran-TMC)对HCT116和CT26两种细胞并没 有抑制增殖的作用。
综上所述，与SN-38-BOC裸药相比，在相同剂量下，本发明SN-38-BOC 胶束的抗癌细胞增殖的作用显著提高，说明SN-38-BOC被包在 MPEG-P(CL-ran-TMC)胶束中明显增加了药物的抗细胞增殖作用。
2.2SN-38-BOC胶束的促凋亡作用
如图4所示：
在HCT116细胞中裸药SN-38-BOC的凋亡率为70.1±1.6％，空白胶束 为3.7±1.2％，空白对照组为2.72±1.3％，而SN-38-BOC胶束的促凋亡率 为75.8±1.9％明显高于其他组。
在CT26细胞中SN-38-BOC胶束的促凋亡率为60.4±1.8％也明显高于其 他组。至此可以说明SN-38-BOC胶束相比于裸药SN-38-BOC具有更高效的 促凋亡效应。
2.3SN-38-BOC胶束的抗新生血管作用
我们用绿色荧光蛋白转基因斑马鱼模型来评价SN-38-BOC胶束的抗新 生血管作用。从图5A和B中我们可以看到，与空白对照组、空白胶束组和 裸药SN-38-BOC组相比SN-38-BOC胶束明显抑制了间节血管(ISVs)的生 长，而且差异显著。
2.4SN-38-BOC胶束的抗肿瘤效果评价
我们在HCT116和CT26细胞的皮下瘤模型评价SN-38-BOC胶束的抗肿 瘤活性。如图6所示，相比于裸药SN-38-BOC组，SN-38-BOC胶束在HCT116 和CT26模型中都取得了较好的抑制肿瘤生长的效果。另外在生理盐水组和 空白胶束组中的肿瘤没有得到抑制。综上所述，SN-38-BOC胶束相比于裸药 SN-38-BOC具有明显的抗肿瘤效果，而且差异显著。
3结论
在本研究中，我们将一种可以在肿瘤弱酸性环境中转换成活性SN-38的 一种前药(SN-38-BOC)包载在生物可降解的MPEG-P(CL-ran-TMC)胶束中， 从而制备成SN-38-BOC胶束。前药SN-38-BOC在肿瘤环境(pH5.5-6.8)转 换成活性SN-38的效率明显高于生理环境(pH7.4)。与裸药SN-38-BOC相 比，SN-38-BOC胶束具有较明显的抗肿瘤细胞增殖作用、促凋亡作用和抗新 生血管效应。同时，在HCT116和CT26皮下瘤模型中，SN-38-BOC胶束的 抗肿瘤效果明显优于裸药SN-38-BOC(p<0.05)。
综上，本发明制备得到了含有SN-38-BOC的胶束，且其具有pH敏感性， 能在肿瘤的特定酸性条件下转换成具有活性的SN-38，而且体内抗肿瘤活性 显示其具有良好的抗肿瘤活性，抗肿瘤药效明显由于裸药SN-38-BOC，临床 应用前景非常优良。

Claims (12)

1.一种pH敏感型的SN-38胶束，其特征在于：它是包载有7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯)胶束。
2.根据权利要求1所述的胶束，其特征在于：所述胶束中，7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的包载量为0.99～2.99％，优选为2.99％。
3.根据权利要求1或2所述的胶束，其特征在于：所述胶束的粒径为30～34nm，优选为32～34nm，PDI为0.11±0.05，优选为0.13±0.015。
4.一种制备权利要求1～3任意一项所述的pH敏感型的SN-38胶束的方法，其特征在于：步骤如下：
(1)取单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯)和7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱，溶解于丙酮中，旋干，形成一层薄膜；
(2)将薄膜溶解于热水中，用0.22um的滤膜过滤，即可。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯)的制备方法如下：取单甲氧基聚乙二醇、ε-己内酯、三亚甲基碳酸酯和辛酸亚锡，在氮气保护条件下反应，用石油醚沉淀，透析，冻干，即得。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述单甲氧基聚乙二醇、ε-己内酯、三亚甲基碳酸酯和辛酸亚锡的重量比为10：8.5：2.5：0.1；所述反应是在130℃搅拌反应24h。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的制备方法如下：取7-乙基-10-羟基喜树碱和二碳酸二叔丁酯，溶于二氯甲烷中，随后加入吡啶作为催化剂，反应；分别用0.5N的盐酸和饱和NaHCO3洗；取有机相，干燥，过滤，旋干，即得。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述7-乙基-10-羟基喜树碱和二碳酸二叔丁酯的摩尔比例为2.745：4.582。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，单甲氧基聚乙二醇-聚(ε-己内酯-ran-三亚甲基碳酸酯)与7-乙基-10-叔丁氧羰基喜树碱的重量比为97:3～99:1。
10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，旋干的温度为60℃。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述热水的温度为60℃。
12.利要求1～3任意一项所述的pH敏感型的SN-38胶束在制备抗肿瘤药物中的用途。
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