CN106957914B

CN106957914B - 樱桃品种的鉴定方法

Info

Publication number: CN106957914B
Application number: CN201710226331.0A
Authority: CN
Inventors: 刘聪利; 李明; 齐希梁; 李玉红; 邱新强; 丁金鸽
Original assignee: Zhengzhou Fruit Research Institute CAAS
Current assignee: Zhengzhou Fruit Research Institute CAAS
Priority date: 2017-04-08
Filing date: 2017-04-08
Publication date: 2020-12-01
Anticipated expiration: 2037-04-08
Also published as: CN106957914A

Abstract

本发明公开了一种樱桃品种的鉴定方法，属于樱桃品种的分子鉴定领域。本发明首先公开了用于樱桃品种鉴定的11对SSR引物，其核苷酸序列分别为SEQ ID No.1‑SEQ ID No.22所示。本发明进一步从所述11对SSR引物中筛选核心引物组合，实现5个核心引物组合即能够完全区分87份樱桃种质，且所获引物组合具有多态性高、扩增稳定、重复性好、电泳条带清晰等优点。本发明还公开了一种基于S基因型信息和SSR引物组合的樱桃品种鉴定方法以及试剂盒。利用本发明所述的引物对能够快速、准确的完成对樱桃不同品种的鉴定。本发明所述SSR引物对、樱桃品种鉴定方法和试剂盒，能够应用于樱桃种质评价、创新、育种亲本选择等。

Description

樱桃品种的鉴定方法

技术领域

本发明涉及一种樱桃品种鉴定方法，尤其涉及一种基于S基因型信息和SSR核心引物组合的樱桃品种鉴定方法，属于樱桃品种的分子鉴定领域。

背景技术

近20多年来，中国甜樱桃产业从传统种植的山东、辽宁迅速扩展至陇海铁路沿线的河南、山西、陕西、甘肃、江苏等多个省份以及云、贵、川等冷凉高地。截止2016年春，中国甜樱桃栽培面积已有15.33万hm²。然而，目前中国各栽培区广泛栽培的品种多引种于国外，随着甜樱桃品种数目逐渐增多和种质交流日趋频繁，以及苗木多家繁育、多家经营的既定格局，同名异物或同物异名现象十分普遍，不仅给甜樱桃品种选育及产权保护带来诸多困难和混乱，更会给樱桃产业造成严重损失。因此，建立一套准确可靠、操作简便的品种区别和鉴定技术体系，进行甜樱桃品种权利保护，对维护育种者和生产者的利益，保障果树产业健康发展，具有重要的现实意义。

目前，随着分子生物学技术的发展，分子标记种类及检测手段日趋完善，借助一套核心引物可以构建不同品种特异的DNA指纹图谱，且其具有不受环境影响、重复性好、分辨率高和易于检测等优点。正是基于这些优点，国际植物新品种保护联盟(UPOV)已将SSR(simple sequence repeat)和SNP(single nucleotide polymorphisms)标记技术认定为适合构建指纹图谱数据库的2种技术，其中SSR标记技术已经大量应用于桃、枣、苹果、樱桃等果树新品种的鉴定、品种真实性的检测及品种间亲缘关系分析工作中，并且对果树品种的资源评价、利用和保护等起到了重要作用。在樱桃上尽管有少量标记开发和种质分子身份证的研究，但如何获得合适的引物组，既能提高甜樱桃品种的鉴定能力，又不过多的增加工作量是亟待解决的技术问题。

甜樱桃绝大多数品种具有自交不亲和性，生产中为避免授粉受精不良，需要配置适宜比例的授粉树，甜樱桃S基因型是配置授粉树的重要依据，同时也是甜樱桃品种非常重要的身份信息。因此，将甜樱桃品种DNA指纹信息与甜樱桃品种的S基因型信息相结合，建立一种更加快速、准确的甜樱桃品种检测方法，将为樱桃种质资源的收集和鉴定评价提供科学依据。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供用于樱桃品种鉴定的SSR引物对；

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种基于S基因型信息和SSR引物组合的樱桃品种鉴定方法。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明首先公开了用于樱桃品种鉴定的SSR引物对。本发明选择均匀分布在甜樱桃8条染色体上的48对SSR引物及1对扩增S等位基因引物，对随机挑选的12个甜樱桃品种进行PCR扩增及电泳检测，从中筛选出11对多态性高、谱带清晰、在8条染色体上均匀分布的引物；具体的，包括：

由核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的反向引物组成的引物对1(引物PMS67)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.3所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.4所示的反向引物组成的引物对2(引物UCD-CH12)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.5所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.6所示的反向引物组成的引物对3(引物BPPCT034)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.7所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.8所示的反向引物组成的引物对4(引物PMS30)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.9所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.10所示的反向引物组成的引物对5(引物PMS40)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.11所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.12所示的反向引物组成的引物对6(引物EMPaS06)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.13所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.14所示的反向引物组成的引物对7(引物PceGA25)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.15所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.16所示的反向引物组成的引物对8(引物EMPA004)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.17所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.18所示的反向引物组成的引物对9(引物PMS02)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.19所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.20所示的反向引物组成的引物对10(引物EMPA018)；

由核苷酸序列为SEQ ID No.21所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.22所示的反向引物组成的引物对11(引物Pru-T2/SI32)。

本发明利用上述11对引物对87个甜樱桃种质进行扩增，共检测到67个等位基因，品种间不同位点等位基因数目为4-9个，平均为6.09个。其中，PMS30(引物对4)和Pru-T2/SI32(引物对11)检测到的基因型总数分别为23个和22个，在所有位点中基因型最丰富，其次为EMPaS06(引物对6)(20个)和PceGA25(引物对7)(20个)。

本发明所述的SSR引物对能够应用于樱桃品种的鉴定。

本发明所述的樱桃品种包括：彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1号、早丹、Royalton、彩虹、春晖、春娇、春雷、春艳、大将锦、东香锦、福晨、哥伦比亚、哈松、含香、黑金、红鲁比、红青、红艳、兰伯特、雷尼尔、龙宝、龙冠、美国大黄、睿德、睿贤、睿哲、睿智、萨米脱、桑蒂娜、山形美人、奇好、胜利、斯基娜、泰山朝阳、甜九月、乌梅极早、意大利3号、饴珠、友谊、宇宙、早大果、佐藤锦、Blaze star、Gil peck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八兴、宾库、波尔娜、春绣、布鲁克斯、春露、春晓、大地红、红玛瑙、红蜜、佳红、巨红、巨晚红、柯迪娅、美早、莫莉、南阳红、水晶、赛维、斯坦拉、先锋、新星、艳阳、睿善、早红珠、Hartland、SandraRose、Ulster、明珠、香泉2号、樱姬、早星、红灯、极佳、拉宾斯或丽珠中的任意一种或多种。

为了实现用较少的引物组合来区分最多的品种，本发明进一步从上述11对引物中筛选出Pru-T2/SI32(引物对11)、PMS30(引物对4)、EMPaS06(引物对6)、PceGA25(引物对7)和EMPA004(引物对8)5个核心引物组合，即可以将87份樱桃种质资源完全区分开。

其中，利用S等位基因引物Pru-T2/SI32(引物对11)进行筛选品种，能够将‘彩霞’、‘大紫’、‘斯科耐得斯’、‘意大利1号’、‘早丹’、‘Royalton’6个品种区分开；在引物Pru-T2/SI32基础上继续加入基因型总数最多的引物PMS30(引物对4)后，再次将45个品种区分开(具体包括：彩虹、春晖、春娇、春雷、春艳、大将锦、东香锦、福晨、哥伦比亚、哈松、含香、黑金、红鲁比、红青、红艳、兰伯特、雷尼尔、龙宝、龙冠、美国大黄、睿德、睿贤、睿哲、睿智、萨米脱、桑蒂娜、山形美人、奇好、胜利、斯基娜、泰山朝阳、甜九月、乌梅极早、意大利3号、饴珠、友谊、宇宙、早大果、佐藤锦、Blaze star、Gil peck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33)；在引物Pru-T2/SI32和引物PMS30基础上继续加入引物EMPaS06(引物对6)，能区分开79个品种(即把90.8％的品种区分开)，其中28个是增加EMPaS06引物后可分开的品种(具体包括：八兴、宾库、波尔娜、春绣、布鲁克斯、春露、春晓、大地红、红玛瑙、红蜜、佳红、巨红、巨晚红、柯迪娅、美早、莫莉、南阳红、水晶、赛维、斯坦拉、先锋、新星、艳阳、睿善、早红珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster)；在引物Pru-T2/SI32、引物PMS30和引物EMPaS06基础上，继续加入引物PceGA25(引物对7)，能区分开83个品种，其中引物PceGA25可分开的品种包括：明珠、香泉2号、樱姬、早星；在前述4个引物基础上继续加入引物EMPA004(引物对8)时，87个品种已全部分开，其中引物EMPA004可分开的品种包括：红灯、极佳、拉宾斯和丽珠。由此可见，甜樱桃自交不亲和S基因型的鉴定是品种鉴定的第一步，在S基因型已知的基础上，按引物基因型总数的高低依次来区分品种是甜樱桃品种鉴定最有效的方法，避免了用11个引物对区分全部品种的繁琐工作量。

本发明进一步公开了一种基于S基因型信息和SSR引物组合的樱桃品种鉴定方法，包括以下步骤：(1)提取待检测樱桃样品的基因组DNA；(2)以提取的DNA为模板，以本发明所述的SSR引物对建立PCR反应体系并进行PCR扩增；(3)将PCR扩增产物进行6％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；(4)对电泳结果进行数据分析，确定樱桃品种，即得。其中，所述SSR引物对选自本发明所述11对SSR引物中的任意一对或多对，优选为Pru-T2/SI32(引物对11)、PMS30(引物对4)、EMPaS06(引物对6)、PceGA25(引物对7)和EMPA004(引物对8)5个核心引物组合中的任意一对或多对。

本发明还公开了一种基于S基因型信息和SSR引物组合的樱桃品种鉴定方法，包括以下步骤：(1)提取待检测樱桃样品的基因组DNA；(2)以提取的DNA为模板，将本发明所述的SSR引物对的正向引物的5’端分别标记FAM或HEX荧光基团，然后建立PCR反应体系并进行PCR扩增；(3)将PCR扩增产物进行SSR荧光标记毛细管电泳；(4)对电泳结果进行数据分析，确定樱桃品种，即得。其中，所述SSR引物对选自本发明所述11对SSR引物中的任意一对或多对，优选为Pru-T2/SI32(引物对11)、PMS30(引物对4)、EMPaS06(引物对6)、PceGA25(引物对7)和EMPA004(引物对8)5个核心引物组合中的任意一对或多对。进一步的，所述引物对1-8、引物对10-11的正向引物的5’端分别标记FAM荧光基团，引物对9的正向引物的5’端标记HEX荧光基团。

本发明上述两种樱桃品种鉴定方法中，所述PCR反应体系包括：反应体系的总体积为20μL，其中，模板DNA 10ng、10μmol/L正向引物0.8μL，10μmol/L反向引物0.8μL，2.5mmol/L dNTPs 1.2μL，含Mg²⁺的10×PCR buffer 2μL，1U Taq酶，余量为dd H₂O。所述PCR扩增的程序包括：95℃预变性4min；95℃45s，54℃-57℃45s，72℃1min，35个循环；72℃10min，4℃保存。进一步的，可根据具体引物对退火温度作适当调整，优选的，引物对PMS67的退火温度为55℃，引物对UCD-CH12的退火温度为55℃，引物对BPPCT034的退火温度为57℃，引物对PMS30的退火温度为57℃，引物对PMS40的退火温度为55℃，引物对EMPaS06的退火温度为56℃，引物对PceGA25的退火温度为57℃，引物对EMPA004的退火温度为56℃，引物对Pru-T2/SI32的退火温度为55℃，引物对PMS02的退火温度为55℃，引物对EMPA018的退火温度为54℃。

本发明以各品种5对引物(即：Pru-T2/SI32(引物对11)、PMS30(引物对4)、EMPaS06(引物对6)、PceGA25(引物对7)、EMPA004(引物对8))的扩增条带为基础，基于Nei’s得到的遗传相似系数矩阵，用Neighbour-Joining方法做出87份参试材料的无根聚类树状图，聚类结果基本符合樱桃品种实际特征及亲缘关系，如自交亲和品种‘艳阳’、‘Sandra Rose’、‘新星’、‘丽珠’、‘拉宾斯’、‘赛维’、‘Blaze star’、‘黑金’均是‘斯坦拉’的直系或旁系后代，聚成了一个小类群。以上结果表明，本发明所述基于S基因型信息和SSR核心引物组合的樱桃品种鉴定方法可以应用于樱桃品种鉴定及遗传多样性分析中。

本发明通过6％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测与SSR荧光标记毛细管电泳检测方法相互验证后，这2种方法检测到的等位基因数目和片段大小基本一致，只有少数引物在个别品种中荧光标记毛细管电泳检测比聚丙烯酰胺凝胶电泳检测多出1个等位基因。因此，后者检测结果更为精确、灵敏、高效，更适用于大批量的品种的检测分析，降低实验成本。

本发明还公开了一种用于樱桃品种鉴定的试剂盒，包括：SSR引物对、dNTPs、含Mg²⁺的10×PCR buffer和Taq酶；其中，所述SSR引物对选自本发明所述的11对SSR引物中的任意一对或多对，优选为Pru-T2/SI32(引物对11)、PMS30(引物对4)、EMPaS06(引物对6)、PceGA25(引物对7)和EMPA004(引物对8)5个核心引物组合中的任意一对或多对。

本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：

本发明筛选获得11对SSR引物，扩增的带型稳定、清晰且重复性好，在多个樱桃品种中均具有较高的多态性，且利用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳就能够分辨同一SSR位点上的不同等位基因，完全满足构建指纹图谱数据库对等位基因大小分辨率的要求。本发明进一步利用5个核心引物组合Pru-T2/SI32、PMS30、EMPaS06、PceGA25和EMPA004即可以将87份樱桃种质资源完全区分开，既能提高甜樱桃品种的鉴定能力，又不过多的增加工作量。本发明方法成本低，在短时间内可完成大批实验材料鉴定；同时应用荧光标记，在ABI3130遗传分析仪(荧光毛细管电泳)上鉴定，效果可靠，可广泛用于樱桃种质评价、创新、杂交育种亲本选择等。

附图说明

图1为部分SSR引物多态性鉴定结果；多态性鉴定的品种共用12份甜樱桃品种，顺序为‘春艳’、‘红灯’、‘艳阳’、‘早大果’、‘萨米脱’、‘早红珠’、‘桑蒂娜’、‘大紫’、‘维卡’、‘美早’、‘龙冠’、‘布鲁克斯’；

图2为PMS30扩增部分甜樱桃品种结果；其中，M：DL500Marker；1-9：分别为甜樱桃品种‘桑蒂娜’、‘美早’、‘甜九月’、‘红灯’、‘早大果’、‘Blaze star’、‘南阳红’、‘春艳’、‘春绣’；

图3为甜樱桃品种‘桑蒂娜’、‘美早’、‘甜九月’、‘红灯’、‘Blaze star’在位点PMS30的SSR指纹图谱；

图4为87份材料的无根聚类树状图。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。

实施例1 基于S基因型信息和SSR核心引物组合的樱桃品种鉴定方法的建立

1、材料与方法

1.1 材料

供试甜樱桃品种共87个，均取自中国农业科学院郑州果树研究所樱桃种质资源圃。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取与引物合成

春季取新梢嫩叶，采用CTAB法提取叶片基因组DNA，之后放置于-20℃冰箱保存。参照前人文献选择均匀分布在甜樱桃8条染色体上的SSR引物48对(表1)，扩增S等位基因引物1对(Pru-T2(GTTCTTGCTTTTGCTTTCTTC)和SI 32(CATAGGCCATGGATGGTG)，对随机挑选的12个品种进行扩增，将筛选的多态性较高的11对引物分别用FAM(蓝色)、HEX(绿色)2种荧光基团修饰上游引物5’端(表2)。普通引物和荧光引物均由上海Sangon公司合成。

表1 48对SSR引物序列

表2 11对SSR核心引物扩增等位基因数及基因型总数

1.2.2 PCR扩增与检测

PCR反应体系为(20μL)：10ng模板DNA、正反向引物(10μmol/L)各0.8μL，dNTPs(2.5mmol/L)1.2μL，10×PCR buffer(含Mg²⁺)2μL，1U Taq酶，加dd H₂O补足20μL。反应程序为：95℃预变性4min；95℃45s，57℃(可根据引物退火温度作适当调整，表2)45s，72℃1min，35个循环；72℃10min，4℃保存。普通引物扩增产物用6％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，银染技术检测。

毛细管电泳荧光检测：将PCR产物进行适当稀释后，取1μL稀释液加8.5μL去离子甲酰胺、0.5μL Liz-500分子量内标(扩增S等位基因引物内标为Rox-1200)，于ABI 3730xlDNA分析仪上进行毛细管电泳检测；预电泳13kV，3min；1.5kV进样10s；电泳10kV，40min。

1.2.3 数据分析

用Data Collection软件收集原始数据，利用Genemapper软件分析收集的原始数据，通过各峰值的位置与其泳道中的Liz-500或Rox-1200分子量内标进行自动比对，获得扩增产物的片段大小(bp)。SSR数据使用PowerMarker v3.25进行多态性分析，得出87份材料的遗传相似系数矩阵，并采用Neighbour-Joining方法将结果进行聚类分析，得到的亲缘关系树状图在MEGA 6.06中输出图形并编辑。

2、结果

2.1 核心引物的筛选及SSR多态性

选择均匀分布在甜樱桃8条染色体上的SSR引物48对，扩增S等位基因引物1对Pru-T2/SI 32，利用随机挑选的12份甜樱桃品种进行PCR扩增及电泳检测(图1)，筛选出11对多态性高、谱带清晰、在8条染色体上均匀分布的引物。11对引物对87个甜樱桃种质进行扩增的条带数及其基因型总数(Genotype no，Gn)见表2，87个甜樱桃种质见表3。从表2中可以看出，共检测到67个等位基因，品种间不同位点等位基因数目为4-9个，平均为6.09个。其中PMS30和Pru-T2/SI32检测到的基因型总数分别为23个和22个，在所有位点中基因型最丰富，其次为EMPaS06(20个)和PceGA25(20个)。

2.2 甜樱桃品种的指纹图谱构建与品种鉴定

用6％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和SSR荧光标记毛细管电泳两种检测方法相结合，对11对SSR引物扩增的片段大小进行验证，准确获得不同材料在不同位点的等位基因片段大小及相应的毛细管电泳图。结果2种方法检测到的等位基因数目和片段大小基本一致(部分材料结果见图2、图3)，只有少数引物在个别品种中荧光标记毛细管电泳检测比聚丙烯酰胺凝胶电泳检测多出1个等位基因。

2.3 核心引物组合的筛选

11个引物组合固然能区分87个品种，但如何筛选核心引物组合，以实现用较少的引物组合来区分最多的品种，既能提高甜樱桃品种的鉴定能力，又不过多的增加工作量是本发明拟解决的关键技术问题。本发明首先选用S等位基因引物Pru-T2/SI32进行筛选品种，能够将‘彩霞’、‘大紫’、‘斯科耐得斯’、‘意大利1号’、‘早丹’、‘Royalton’6个品种区分开(表3)，继续加入基因型总数最多的引物PMS30后，再次筛选45个品种能够区分开，按引物基因型总数的高低依次陆续加入组合后分别进行筛选。第3个组合能区分开79个品种，其中有51个是前2个引物分开的，另28个是增加EMPaS06引物后可分开的品种。第4、5引物组合增加能区分开的品种数量依次为4、4，第5组引物时87个品种已全部分开。第3组引物就能把90.8％的品种区分开。由此可见，甜樱桃自交不亲和S基因型的鉴定是品种鉴定的第一步，在S基因型已知的基础上，按引物基因型总数的高低依次来区分品种是甜樱桃品种鉴定最有效的方法，避免了用11个引物区分全部品种的繁琐工作量。

表3 逐个增加引物组合对种质的区分

2.4 聚类分析

以各品种5对引物的扩增条带为基础，基于Nei’s得到的遗传相似系数矩阵，用Neighbour-Joining方法做出87份参试材料的无根聚类树状图(图4)。S基因型信息和4个SSR核心引物组合将87个樱桃品种全部区分开，同时聚类结果基本符合樱桃品种实际特征及亲缘关系，如自交亲和品种‘艳阳’、‘Sandra Rose’、‘新星’、‘丽珠’、‘拉宾斯’、‘赛维’、‘Blaze star’、‘黑金’均是‘斯坦拉’的直系或旁系后代，聚成了一个小类群。表明该基于S基因型信息和SSR核心引物组合的樱桃品种鉴定方法可以应用于樱桃品种鉴定及遗传多样性分析中。

SEQUENCE LISTING

<110> 中国农业科学院郑州果树研究所

<120> 樱桃品种的鉴定方法

<130> HN-2002-170110A

<160> 22

<170> PatentIn version 3.5

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cataggccat ggatggtg 18

Claims

1.用于樱桃品种鉴定的SSR引物对，其特征在于，由以下5对引物对组成：

由核苷酸序列为SEQ ID No.7所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.8所示的反向引物组成的引物对4；

由核苷酸序列为SEQ ID No.11所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.12所示的反向引物组成的引物对6；

由核苷酸序列为SEQ ID No.13所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.14所示的反向引物组成的引物对7；

由核苷酸序列为SEQ ID No.15所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.16所示的反向引物组成的引物对8；

由核苷酸序列为SEQ ID No.21所示的正向引物和核苷酸序列为SEQ ID No.22所示的反向引物组成的引物对11。

2.权利要求1所述的SSR引物对在樱桃品种鉴定中的应用；所述樱桃品种是：彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1号、早丹、Royalton、彩虹、春晖、春娇、春雷、春艳、大将锦、东香锦、福晨、哥伦比亚、哈松、含香、黑金、红鲁比、红青、红艳、兰伯特、雷尼尔、龙宝、龙冠、美国大黄、睿德、睿贤、睿哲、睿智、萨米脱、桑蒂娜、山形美人、奇好、胜利、斯基娜、泰山朝阳、甜九月、乌梅极早、意大利3号、饴珠、友谊、宇宙、早大果、佐藤锦、Blaze star、Gilpeck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八兴、宾库、波尔娜、春绣、布鲁克斯、春露、春晓、大地红、红玛瑙、红蜜、佳红、巨红、巨晚红、柯迪娅、美早、莫莉、南阳红、水晶、赛维、斯坦拉、先锋、新星、艳阳、睿善、早红珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster、明珠、香泉2号、樱姬、早星、红灯、极佳、拉宾斯或丽珠。

3.一种樱桃品种的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待检测樱桃样品的基因组DNA；(2)以提取的DNA为模板，以权利要求1所述的SSR引物对建立PCR反应体系并进行PCR扩增；(3)将PCR扩增产物进行6％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；(4)对电泳结果进行数据分析，即得；所述樱桃品种是：彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1号、早丹、Royalton、彩虹、春晖、春娇、春雷、春艳、大将锦、东香锦、福晨、哥伦比亚、哈松、含香、黑金、红鲁比、红青、红艳、兰伯特、雷尼尔、龙宝、龙冠、美国大黄、睿德、睿贤、睿哲、睿智、萨米脱、桑蒂娜、山形美人、奇好、胜利、斯基娜、泰山朝阳、甜九月、乌梅极早、意大利3号、饴珠、友谊、宇宙、早大果、佐藤锦、Blaze star、Gil peck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八兴、宾库、波尔娜、春绣、布鲁克斯、春露、春晓、大地红、红玛瑙、红蜜、佳红、巨红、巨晚红、柯迪娅、美早、莫莉、南阳红、水晶、赛维、斯坦拉、先锋、新星、艳阳、睿善、早红珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster、明珠、香泉2号、樱姬、早星、红灯、极佳、拉宾斯或丽珠。

4.一种樱桃品种的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待检测樱桃样品的基因组DNA；(2)以提取的DNA为模板，将权利要求1所述的SSR引物对的正向引物的5’端分别标记FAM或HEX荧光基团，然后建立PCR反应体系并进行PCR扩增；(3)将PCR扩增产物进行SSR荧光标记毛细管电泳；(4)对电泳结果进行数据分析，即得；所述樱桃品种是：彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1号、早丹、Royalton、彩虹、春晖、春娇、春雷、春艳、大将锦、东香锦、福晨、哥伦比亚、哈松、含香、黑金、红鲁比、红青、红艳、兰伯特、雷尼尔、龙宝、龙冠、美国大黄、睿德、睿贤、睿哲、睿智、萨米脱、桑蒂娜、山形美人、奇好、胜利、斯基娜、泰山朝阳、甜九月、乌梅极早、意大利3号、饴珠、友谊、宇宙、早大果、佐藤锦、Blaze star、Gilpeck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八兴、宾库、波尔娜、春绣、布鲁克斯、春露、春晓、大地红、红玛瑙、红蜜、佳红、巨红、巨晚红、柯迪娅、美早、莫莉、南阳红、水晶、赛维、斯坦拉、先锋、新星、艳阳、睿善、早红珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster、明珠、香泉2号、樱姬、早星、红灯、极佳、拉宾斯或丽珠。

5.按照权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于：权利要求1所述的引物对的正向引物的5’端分别标记FAM荧光基团。

6.按照权利要求3或4所述的鉴定方法，其特征在于，所述PCR反应体系包括：反应体系的总体积为20μL，其中，模板DNA 10ng、10μmol/L正向引物0.8μL，10μmol/L反向引物0.8μL，2.5mmol/L dNTPs 1.2μL，含Mg²⁺的10×PCR buffer 2μL，1U Taq酶，余量为dd H₂O；

所述PCR扩增的程序包括：95℃预变性4min；95℃45s，54℃-57℃45s，72℃1min，35个循环；72℃10min，4℃保存；

所述的SSR引物对为权利要求1所述的引物对11时，所述PCR扩增的退火温度为55℃；

所述的SSR引物对为权利要求1所述的引物对4或引物对7时，所述PCR扩增的退火温度为57℃；

所述的SSR引物对为权利要求1所述的引物对6或引物对8时，所述PCR扩增的退火温度为56℃。

7.一种用于樱桃品种鉴定的试剂盒，包括：SSR引物对、dNTPs、含Mg²⁺的10×PCR buffer和Taq酶；其特征在于，所述SSR引物对是权利要求1所述的SSR引物对；所述樱桃品种是：彩霞、大紫、斯科耐得斯、意大利1号、早丹、Royalton、彩虹、春晖、春娇、春雷、春艳、大将锦、东香锦、福晨、哥伦比亚、哈松、含香、黑金、红鲁比、红青、红艳、兰伯特、雷尼尔、龙宝、龙冠、美国大黄、睿德、睿贤、睿哲、睿智、萨米脱、桑蒂娜、山形美人、奇好、胜利、斯基娜、泰山朝阳、甜九月、乌梅极早、意大利3号、饴珠、友谊、宇宙、早大果、佐藤锦、Blaze star、Gil peck、Isbella、Wyaltan、9-19、13-33、八兴、宾库、波尔娜、春绣、布鲁克斯、春露、春晓、大地红、红玛瑙、红蜜、佳红、巨红、巨晚红、柯迪娅、美早、莫莉、南阳红、水晶、赛维、斯坦拉、先锋、新星、艳阳、睿善、早红珠、Hartland、Sandra Rose、Ulster、明珠、香泉2号、樱姬、早星、红灯、极佳、拉宾斯或丽珠。