CN106922537A

CN106922537A - 一种麒麟果苗的培养方法及其培养基

Info

Publication number: CN106922537A
Application number: CN201710267485.4A
Authority: CN
Inventors: 程志号; 孙佩光; 孙长君; 吴琼
Original assignee: Haikou Experimental Station of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Current assignee: Haikou Experimental Station of Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Priority date: 2017-04-21
Filing date: 2017-04-21
Publication date: 2017-07-07

Abstract

本发明提供了一种麒麟果苗的培养方法：对肉质茎：依次采用70％(v/v)乙醇处理0.5‑2min，1％(w/w)升汞处理1‑5min，无菌水洗；将麒麟果无菌苗茎段切成外植体，接入如权利要求1或2所述的从芽诱导培养基中培养；幼苗接种到如权利要求3‑5中任意一项所述的生根诱导培养基中培养。本发明还提供了用于培养麒麟果苗的从芽诱导培养基和生根诱导培养基。本发明利用植物组织培养的方法，能在短时间内大量地繁育麒麟幼苗，实现提高繁殖系数，快速获得得到大量的优质麒麟果苗的目的，为我国麒麟果产业健康快速的发展提供技术支持和保障，在麒麟果的生产上具有重大意义。

Description

一种麒麟果苗的培养方法及其培养基

技术领域

本发明涉及一种麒麟果苗的培养方法及其培养基。

背景技术

麒麟果(Selenicereus megalantus),仙人掌科三角柱属植物，原产于中美洲哥伦比亚和厄瓜多尔。麒麟果果皮黄色，果肉白色，呈透明状，结构呈细丝状，果营养丰富、功能独特，外观奇异，风味独特，是新兴高档水果，经济效益可观，又称为燕窝果。火龙果按颜色的不同大致可分为3个品种：红皮白肉、红皮红肉、黄皮白肉(麒麟果)，但是营养差别不是很大。与红色火龙果有所不同，麒麟果的甜度很高，可以达到18度左右，产自厄瓜多尔的麒麟果，更是兼具了红色品种的水分与清爽，味道绝佳。麒麟果在国内的价格昂贵，比一般红皮的火龙果高出几倍，甚至几十倍。物以稀为贵，麒麟果价格昂贵的主要原因是：1.我国国内的麒麟果是国外进口，国内的生产量也较小，运费昂贵，成本高。2.麒麟果在国内的生产上极缺幼苗，所以生产上比较困难。3.麒麟果自身的结果率比较低，果实成熟期也比较长。

目前，在麒麟果苗的生产上多数采用扦插繁殖，但这种方法速度慢，且茎杆肉质容易腐烂，又受繁殖材料供应的限制。麒麟果的研究基本少之又少，目前在国内有麒麟果的组织培养与快速繁殖尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中不足，通过利用植物组织培养的方法培养麒麟果苗，能在短时间内大量地繁育麒麟幼苗，可以一定程度上解决了麒麟果在我国国内紧缺的问题，在麒麟果的生产上具有重大意义。

本发明的第一个方面是提供一种用于培养麒麟果苗的从芽诱导培养基，所述从芽诱导培养基采用MS培养基为基本培养基，并且添加6-BA和IBA，其中，以所述从芽诱导培养基为基准，6-BA的含量为2-4mg/L，IBA的含量为0.1-0.2mg/L。

优选地，在所述从芽诱导培养基中IBA的含量为0.2mg/L。

本发明的第二个方面是提供一种用于培养麒麟果苗的生根诱导培养基，所述生根诱导培养基采用1/2MS培养基为基本培养基，并添加有IBA，其中，以所述生根诱导培养基为基准，IBA的含量为0.1-0.4mg/L。

优选地，在所述生根诱导培养基中IBA的含量为0.2-0.4mg/L。

优选地，在所述生根诱导培养基中还添加有蔗糖，以及使生根诱导培养基固化或半固化的琼脂，本领域技术人员可根据经验酌情添加蔗糖和琼脂，本发明不对其含量进行特别限定。在本发明的一个实施方式中，以所述生根诱导培养基为基准，蔗糖的含量为1-5wt％，琼脂的含量为0.5-1.2wt％。

本发明的第三个方面是提供一种麒麟果苗的培养方法，包括以下步骤：步骤1，从生长健壮的麒麟果植株上切取幼嫩的肉质茎，截成段，依次采用70％(v/v)乙醇处理0.5-2min，0.1％(w/w)升汞处理3-8min，无菌水洗；步骤2，从芽诱导：将麒麟果无菌苗茎段切成外植体，接入如本发明第一个方面所述的从芽诱导培养基中培养；步骤3，将步骤2处理后得到的幼苗接种到如本发明第二个方面所述的生根诱导培养基中培养。

优选地，步骤1中，采用70％(v/v)乙醇处理0.5-1min。

优选地，步骤1中，采用0.1％(w/w)升汞处理3-5min。

进一步优选地，步骤1中，采用70％(v/v)乙醇处理0.5min，0.1％(w/w)升汞处理1min。

优选地，步骤2具体为：将麒麟果无菌苗茎段切成3-3.5cm的长茎段，每个茎段包含9-12个刺座，以切面垂直插入从芽诱导培养基中培养；或者将麒麟果无菌苗茎段切成0.5-1cm的短茎段，每个茎段包含3-4个刺座，以切面垂直插入从芽诱导培养基中培养；或者将麒麟果无菌苗茎段切成3-3.5cm的长茎段，然后沿着茎段的茎槽竖切成3-4块，每个块包含3-4个刺座，以切面水平直插入从芽诱导培养基中培养。

本发明利用植物组织培养的方法，能在短时间内大量地繁育麒麟幼苗，实现提高繁殖系数，快速获得得到大量的优质麒麟果苗的目的，为我国麒麟果产业健康快速的发展提供技术支持和保障，在麒麟果的生产上具有重大意义。

附图说明

图1为麒麟果组织培养过程，其中，A：麒麟果果实外观为黄色，球形，果皮外被刺芽座和短刺；B：麒麟果果实内部及种子形状，内部果肉为乳白色，晶莹透明，种子为黑色，比芝麻略大；C：麒麟果种子发芽生长出的幼苗，茎3楞或4楞，茎比较柔软；D：以麒麟果幼嫩茎段为外植体，经表面灭菌种植于MS培养基中的无菌苗；E：麒麟果外植体不同切割方法，上排为长茎段，中排为短茎段，下排为纵切，右排为顶视图，中间排为侧视图；F：不同切割方法处理后的外植体接种于从芽诱导培养基上；G：外植体接种于从芽诱导培养基4周后的刺芽座生长幼苗情况；H：外植体接种于生根诱导培养基上，正面照；I：外植体接种于生根培养基上，底视图；J麒麟果幼苗经生根后移栽。

具体实施方式

下面参照附图，结合具体的实施方式对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。1材料

供试麒麟果种子来自厄瓜多尔，现在保存于中国热带农业科学院海口实验站儋州组培中心。

2方法和结果

2.1麒麟果无菌苗制备

连续晴天时，从生长健壮的麒麟果植株上切取幼嫩的肉质茎，截成4cm左右的茎段，每个茎段上带10-15个刺座。先用70％酒精浸泡30秒-2分钟，再用0.1％的升汞消毒3-8分钟的不同组合(如表1所示)实现表面灭菌的目的，用无菌水漂洗3次，每次冲洗3分钟，再将冲洗后的外植体接种于1/2MS培养基上，每组合接种30个，重复一次。预培养1周后统计茎的生长情况和污染率，再进行下一步试验。

70％酒精和0.1％升汞对茎段的消毒时间不同，这两种溶液对麒麟果的茎段都有一定的毒害作用所以，对茎段发芽的影响也不同。用MS培养基培养一周后的，两种溶液不同时间处理组合对茎段的污染率和茎段的生长情况如表2所示，从表中可以看出70％酒精处理超过30秒，0.1％升汞处理超过5分钟的组合的污染率都在5％以下。从处理后的无菌苗的生长状态可见，70％乙醇处理超过1min，0.1％升汞处理超过5min，会影响苗的生长，如图1D图左边所示，材料的大部分刺座及茎菱组织有褐化并逐渐坏死的现象。因此，70％酒精处理30秒，0.1％升汞处理5分钟的组合污染率较低且不影响幼嫩小苗的生长，较适合于无菌苗的制备。

表1灭菌组合

表2不同灭菌组合灭菌后无菌苗的污染率及生长状态

组合编号	7天污染率	幼嫩茎生长状态
			1	13.33％(8/60)	正常生长
2	10.00％(6/60)	正常生长
			3	8.33％(5/60)	切口退绿，坏死
4	11.67％(7/60)	正常生长
			5	6.67％(4/60)	正常生长
6	5.00％(3/60)	切口退绿，坏死
			7	8.33％(5/60)	正常生长
8	5.00％(3/60)	切口退绿，坏死
			9	1.67％(1/60)	切口退绿，坏死

2.2麒麟果丛芽诱导

外植体放到含有不同浓度的6-BA和IBA的MS培养基上，附加3wt％蔗糖、0.8wt％琼脂，pH值调至5.8，培养温度控制在(26士2)℃，16h光照，光照强度2000lx。培养3周后对分化情况并进行统计。培养基配方：

(1)MS+6-BA 2mg/L+IBA 0.1mg/L；

(2)MS+6-BA 3mg/L+IBA 0.1mg/L；

(3)MS+6-BA 4mg/L+IBA 0.1mg/L；

(4)MS+6-BA 2mg/L+IBA 0.2mg/L；

(5)MS+6-BA 3mg/L+IBA 0.2mg/L；

(6)MS+6-BA 4mg/L+IBA 0.2mg/L。

外植体接种方法：

1、长茎段，切成3-3.5cm的长茎段，每个茎段包含9-12个刺座，以切面垂直插入从芽诱导培养基中培养；2、短茎段，切成0.5-1cm的短茎段，每个茎段包含3-4个刺座，以切面垂直插入从芽诱导培养基中培养；3、纵切，切成3-3.5cm的长茎段，然后沿着茎段的茎槽竖切成3-4块，每个块包含3-4个刺座，以切面水平直插入从芽诱导培养基中培养。

将麒麟果无菌苗茎段切成3种外植体，接入不同的培养基，暗培养3天后转入光培养。培养温度控制在(25+2)℃，光照时间12h每天，光照强度2000lx。培养30天后对分化情况进行统计。接种7d后，茎段刺芽座开始膨大，形成黄绿色愈伤组织，14d之后愈伤组织上长出许多幼嫩的丛生芽，如表3所示，5号培养基的诱导刺芽座分化的能力最高，达94.44％。三种接种方法的刺芽座诱导能力以纵切最强。

表3不同激素浓度对麒麟果茎段愈伤诱导与分化的影响

注：“正常”指再生芽颜色深绿、生长健壮；“一般”是指再生芽细弱、生长缓慢：“差”是指再生芽生长一段时间后停止生长并有玻璃化现象。

2.3麒麟果生根诱导

麒麟果的生根培养:将在伸长培养基上长到5cm高的幼苗接种到含有不同浓度生长素的1/2MS培养基上，附加3.0wt％蔗糖、0.8wt％琼脂，pH值调至6.2。培养条件同上。培养基配方：(1)1/2MS；(2)1/2MS+IBA0.1mg/L；(3)1/2MS+IBA0.2mg/L；(4)1/2MS+IBA0.4mg/L。

经过30d的生根培养，对外植体生根率、生根条数进行统计，计算平均每个苗的生根数量及质量，试验结果见表4。生根诱导培养基(3)的生根效率、生根条数以及根长均优于其他几个组合。

表4不同浓度的IBA对麒麟果试管苗生根的影响

培养基编号	生根率(％)	生根数/条	平均根长(cm)	小苗长势
					1	45	3.11	2.4cm	一般
2	83.33	5.10	2.7cm	正常
					3	95	6.20	3.6cm	良好
4	70	3.90	3.1cm	良好

2.4麒麟果幼苗种植情况

将生根诱导培养基中生根的幼苗种在培养盆里培养，4种培养基的苗各种30棵，培养3周后对幼苗生长情况进行统计，4种培养基诱导生根的苗都成活率都高达90％，但是根越多越长的小苗长势越好。培养基(3)诱导生根的幼苗，成活率最高，成活率高达97％，长势最好。

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims

1.一种用于培养麒麟果苗的从芽诱导培养基，其特征在于，所述从芽诱导培养基采用MS培养基为基本培养基，并且添加6-BA和IBA，其中，以所述从芽诱导培养基为基准，6-BA的含量为2-4mg/L，IBA的含量为0.1-0.2mg/L。

2.根据权利要求1所述的用于培养麒麟果苗的从芽诱导培养基，其特征在于，IBA的含量为0.2mg/L。

3.一种用于培养麒麟果苗的生根诱导培养基，其特征在于，所述生根诱导培养基采用1/2MS培养基为基本培养基，并添加有IBA，其中，以所述生根诱导培养基为基准，IBA的含量为0.1-0.4mg/L。

4.根据权利要求2所述的用于培养麒麟果苗的生根诱导培养基，其特征在于，IBA的含量为0.2-0.4mg/L。

5.根据权利要求3或4所述的用于培养麒麟果苗的生根诱导培养基，其特征在于，所述生根诱导培养基还添加有蔗糖，以及使生根诱导培养基固化或半固化的琼脂，以所述生根诱导培养基为基准，蔗糖的含量为1-5wt％，琼脂的含量为0.5-1.2wt％。

6.一种麒麟果苗的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，从生长健壮的麒麟果植株上切取幼嫩的肉质茎，截成段，依次采用70％(v/v)乙醇处理0.5-2min，0.1％(w/w)升汞处理3-8min，无菌水洗；

步骤2，从芽诱导：将麒麟果无菌苗茎段切成外植体，接入如权利要求1或2所述的从芽诱导培养基中培养；

步骤3，将步骤2处理后得到的幼苗接种到如权利要求3-5中任意一项所述的生根诱导培养基中培养。

7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，步骤1中，采用70％(v/v)乙醇处理0.5-1min。

8.根据权利要求6或7所述的培养方法，其特征在于，步骤1中，采用0.1％(w/w)升汞处理3-5min。

9.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，步骤1中，采用70％(v/v)乙醇处理0.5min，0.1％(w/w)升汞处理5min。

10.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，步骤2具体为：

将麒麟果无菌苗茎段切成3-3.5cm的长茎段，每个茎段包含9-12个刺座，以切面垂直插入从芽诱导培养基中培养；或者

将麒麟果无菌苗茎段切成0.5-1cm的短茎段，每个茎段包含3-4个刺座，以切面垂直插入从芽诱导培养基中培养；或者

将麒麟果无菌苗茎段切成3-3.5cm的长茎段，然后沿着茎段的茎槽竖切成3-4块，每个块包含3-4个刺座，以切面水平直插入从芽诱导培养基中培养。