CN107155894A - 一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法 - Google Patents

一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107155894A
CN107155894A CN201710560495.7A CN201710560495A CN107155894A CN 107155894 A CN107155894 A CN 107155894A CN 201710560495 A CN201710560495 A CN 201710560495A CN 107155894 A CN107155894 A CN 107155894A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
walnut
somatic embryo
culturing seedlings
green ridge
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710560495.7A
Other languages
English (en)
Inventor
李国松
蒋淑磊
李志修
赵玉芬
赵焕生
卢素敏
郭晓军
李庆国
王祺龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201710560495.7A priority Critical patent/CN107155894A/zh
Publication of CN107155894A publication Critical patent/CN107155894A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明属于植物繁殖方法技术领域，具体涉及到一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，利用核桃幼胚外植体诱导产生胚性愈伤组织，将获得的胚性愈伤组织转接到体细胞胚诱导培养基，进行体细胞胚诱导，体细胞胚生长一段时间后，挑选质量好的体细胞胚接种于促萌发培养基中进行萌发培养，获得幼小丛生芽。将幼小丛生芽接种到壮苗培养基壮苗培养，将健壮无根苗转接到生根培养基中进行生根培养，健壮良好的生根苗进行炼苗移栽，用草炭和珍珠岩配成的混合基质做为移栽苗基质。本发明首次提出核桃诱导胚性愈伤组织的途径获得幼苗的方法，可以为建立绿岭核桃品种遗传转化体系奠定基础。

Description

一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法
技术领域
本发明属于植物繁殖方法技术领域，具体涉及到一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法。
背景技术
绿岭核桃品种是河北农业大学、河北绿岭果业有限公司1999年在5年生香玲中发现的优良变异单株。2005年通过河北省林木品种审定委员会审定，是河北省林木种质资源普查主栽经济林品种和审定品种重点调查内容。其品种的生物学特征为：坚果卵圆形，浅黄色，三径平均为3.42cm，平均单果重12.8g。壳厚0.8mm，均匀不露仁，缝合线平滑而不突出，果面光滑美观，用手轻轻一捏就可剥开；内种皮淡黄色，无涩味，种仁饱满浓香。出仁率67％以上，果仁颜色浅黄，营养丰富，脂肪含量67％(香玲65.48％)、蛋白质含量22％(香玲21.43％)。与香玲相比，果壳薄、个大、出仁率高，果形美观，蛋白质、脂肪含量均比香玲高。雄先型品种。以中短枝结果为主，果枝率88.5％，双果率22.4％。早实、丰产，栽植第二年可结果。五年进入盛果期，平均亩产200kg以上。抗逆性与抗病性较强，耐旱。对细菌性褐斑病和炭疽病具有较强的抗性，病果率小于3.5％。
核桃的繁殖是产品推广的重要基础工作，而传统的育苗方法难以满足稳定的品种遗传转化的要求。
发明内容
本发明的目的提供一种绿岭核桃体细胞胚发生方法，为实现发明的目的，本发明提供以下技术方案：
一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，包括以下过程：
(1)将核桃幼胚外植体消毒处理，达到无菌要求；
(2)将核桃幼胚外植体转接到愈伤组织培养基中进行培养，诱导产生愈伤组织；
(3)将诱导的愈伤组织转接到诱导体细胞胚培养基中进行培养；
(4)将质量好的体细胞胚转接到丛生芽诱导培养基中进行丛生芽培养；
(5)经过丛生芽培养的健壮芽接种到壮苗培养基中进行壮苗培养；
(6)经过壮苗培养的无根苗接种到生根培养基进行生根培养；
(7)选择根系长到2-3cm的生根苗进行炼苗移栽，应用草炭土和珍珠岩配成的混合基质。
具体的，步骤(1)中，所述的外植体消毒方法：用75％的酒精处理外植体30S，用无菌水冲洗5遍，再用0.1％的氯化汞消毒3-5分钟，再用无菌水冲洗5遍。
步骤(2)中所述的愈伤组织培养基，为在按规定量称取1LWPM培养基基本成分后添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、6-BA 1.0mg、NAA 0.5mg，用纯净水定容至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，暗培养，培养时间30天。
步骤(3)中所述的诱导体细胞胚培养基，是在按规定量称取1LWPM培养基基本成分后添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、6-BA 1.0mg、TDZ 0.01mg、NAA 0.5mg，用纯净水定容至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间45天。
步骤(4)中所述的丛生芽诱导培养基，是为在按规定量称取1LWPM培养基基本成分后添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、6-BA 1.0mg、ZT 0.5mg、NAA 0.5mg，用纯净水定容至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间60天。
步骤(5)中所述的壮苗培养基，是为在按规定量称取1LWPM培养基基本成分后添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、6-BA 0.5mg、NAA 1mg，用纯净水定容至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间60天。
步骤(6)中所述的生根培养基，在按规定量称取1LWPM培养基其中大量元素减一半，添加蔗糖20g、琼脂粉6.5g、活性炭1g、IBA1.5mg，用纯净水定容至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间70天。
具体的说明，1升WPM基本培养基，包括以下元素，大量元素：NH4NO3 400mg；(NH4)2SO4 132mg；MgSO4.7H2O 370mg；KH2PO4 170mg；KNO3 400mg；K2SO4 900mg；钙盐：CaCl2 96mg；Ca(NO3)2·4H2O 556mg；微量元素：H3BO3 6.2mg；MnSO4.H2O 22.3mg；Na2MoO4·2H2O 0.25mg；CuSO4.5H2O 0.025mg；ZnSO4·7H2O 8.6mg；铁盐：Na2-EDTA 37.3mg；FeSO4.7H2O 27.8mg；维生素：肌醇100mg；烟酸(维生素PP)0.5mg；盐酸吡多醇0.5mg；盐酸硫胺素0.5mg；甘氨酸2mg。
步骤(7)所述的草炭土：珍珠岩的质量比为3:2。
本发明提供的一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，通过诱导核桃体细胞胚的方法建立植株再生的方法，为建立绿岭核桃品种遗传转化体系奠定基础。
具体实施方式
本发明通过诱导绿岭核桃体细胞胚的发生方式达到植株再生繁殖的目的，具体方法如下：
(1)处理外植体用冷水浸泡一周，每天换水一次，然后太阳下暴晒，裂开即可发芽，待发芽后，在超净工作台上取出完整的幼胚作为外植体备用。
(2)消毒处理，首先在超净工作台上用75％酒精处理30S，用无菌水冲洗5次，0.1％的氯化汞处理3-5分钟，再用无菌水冲洗5遍。
(3)外植体诱导愈伤组织将消毒后的外植体接种到愈伤组织培养基中，以WPM为基本培养基添加蔗糖30g，琼脂粉6.5g，6-BA 1.0mg，NAA 0.5mg，用纯净水定容到1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，暗培养，培养时间30天。
(4)愈伤组织经过再分化选择质地呈颗粒状，颜色浅红色的愈伤组织，转接到再分化培养基中。培养基为WPM基本培养基添加蔗糖30g，琼脂6.5g，6-BA 1.0mg，TDZ 0.01mg，NAA 0.5mg，纯净水定容至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间45天。
(5)丛生芽培养将体细胞胚转接到丛生芽诱导培养基，培养基以WPM为基本培养基添加蔗糖30g，琼脂6.5g，6-BA 1.0mg，ZT 0.5mg，NAA 0.5mg，定容水至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间60天。
(6)壮苗培养经过丛生芽诱导后细小芽，转接到壮苗培养基，培养基以WPM为基本培养基添加蔗糖30g，琼脂6.5g，6-BA 1.0mg，NAA 1.0mg，定容水至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间45天。
(7)生根培养经过壮苗培养后，选择2-3cm长的芽苗转接到生根培养基中，培养基以1/2WPM为基本培养基添加蔗糖20g，琼脂6.5g，活性炭1g，IBA 0.5mg，IAA 0.3mg，定容水至1升，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间60天。
(8)炼苗移栽在生根培养基中根长到2-3cm时，即可炼苗移栽。移栽前先将瓶苗置于温室中驯化7天左右，打开瓶盖放置3天，用镊子将苗轻轻取出，用温水洗净培养基后用1％的多菌灵浸泡4分钟，栽入育苗穴盘中，移栽组培苗基质比例：草炭土：珍珠岩为3:2，浇透水，用塑料薄膜遮阳3-5天。

Claims (8)

1.一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，其特征在于，包括以下过程：
(1)将核桃幼胚外植体消毒处理，达到无菌要求；
(2)将核桃幼胚外植体转接到愈伤组织培养基中进行培养，诱导产生愈伤组织；
(3)将诱导的愈伤组织转接到诱导体细胞胚培养基中进行培养；
(4)将质量好的体细胞胚转接到丛生芽诱导培养基中进行丛生芽培养；
(5)经过丛生芽培养的健壮芽接种到壮苗培养基中进行壮苗培养；
(6)经过壮苗培养的无根苗接种到生根培养基进行生根培养；
(7)选择根系长到2-3cm的生根苗进行炼苗移栽，应用草炭土和珍珠岩配成的混合基质。
2.根据权利要求书1中所述的一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的外植体消毒方法：用75％的酒精处理外植体30S，用无菌水冲洗5遍，再用0.1％的氯化汞消毒3-5分钟，再用无菌水冲洗5遍。
3.根据权利要求书1中所述的一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，其特征在于，步骤(2)中所述的愈伤组织培养基，为1LWPM培养基，添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、6-BA 1.0mg、NAA0.5mg，用纯净水定容至1L，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，暗培养，培养时间30天。
4.根据权利要求书1中所述的一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，其特征在于，步骤(3)中所述的诱导体细胞胚培养基，为1LWPM培养基，添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、6-BA 1.0mg、TDZ 0.01mg、NAA 0.5mg，用纯净水定容至1L，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间45天。
5.根据权利要求书1中所述的一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，其特征在于，步骤(4)中所述的丛生芽诱导培养基，为1LWPM培养基，添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、6-BA 1.0mg、ZT0.5mg、NAA 0.5mg，用纯净水定容至1L，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间60天。
6.根据权利要求书1中所述的一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，其特征在于，步骤(5)中所述的壮苗培养基，为1LWPM培养基，添加蔗糖30g、琼脂粉6.5g、6-BA 0.5mg、NAA 1mg，用纯净水定容至1L，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间60天。
7.根据权利要求书1中所述的一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，其特征在于，步骤(6)中所述的生根培养基，为1LWPM培养基，大量元素减半，添加蔗糖20g、琼脂粉6.5g、活性炭1g、IBA1.5mg，用纯净水定容至1L，调整pH值6.5-6.8，培养温度25±2℃，光照强度3500Iux，培养时间70天。
8.根据权利要求书1中所述的一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法，其特征在于，步骤(7)所述的草炭土：珍珠岩的质量比为3:2。
CN201710560495.7A 2017-07-11 2017-07-11 一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法 Pending CN107155894A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710560495.7A CN107155894A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710560495.7A CN107155894A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107155894A true CN107155894A (zh) 2017-09-15

Family

ID=59823701

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710560495.7A Pending CN107155894A (zh) 2017-07-11 2017-07-11 一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107155894A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110278872A (zh) * 2019-07-12 2019-09-27 山东农业大学 一种核桃体细胞胚生根和炼苗移栽的方法
CN110741935A (zh) * 2019-11-22 2020-02-04 塔里木大学 一种早实核桃的组培方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101785432A (zh) * 2010-02-05 2010-07-28 浙江林学院 山核桃胚根不定芽诱导和生根培养基及组培方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101785432A (zh) * 2010-02-05 2010-07-28 浙江林学院 山核桃胚根不定芽诱导和生根培养基及组培方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张启香等: "山核桃间接体细胞胚发生和植株再生", 《园艺学报》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110278872A (zh) * 2019-07-12 2019-09-27 山东农业大学 一种核桃体细胞胚生根和炼苗移栽的方法
CN110741935A (zh) * 2019-11-22 2020-02-04 塔里木大学 一种早实核桃的组培方法
CN110741935B (zh) * 2019-11-22 2021-05-04 塔里木大学 一种早实核桃的组培方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101491215B (zh) 香椿组培快繁方法
CN103190347B (zh) 一种茶壶枣组织培养方法
CN104126511B (zh) 一种早熟梨茎段的组织培养方法及培养基
CN102511398B (zh) 蕲山药组培育苗方法
CN102696479A (zh) 一种高效的红花石蒜快速繁殖方法
CN104885948B (zh) 一种油茶子叶节直接再生植株的方法
CN106342689A (zh) 一种南美星油藤快速繁殖的方法
CN108243944A (zh) 一种蝴蝶兰快速育种方法及优质品种组织培养繁殖方法
CN103461143A (zh) 一种油茶组织培养快速繁殖方法
CN102823503A (zh) 红掌以芽繁芽组织培养培养基
CN101695280B (zh) 红树莓的组织培养与快速繁殖方法
CN106106178B (zh) 一种糖果鸢尾的组织培养方法
CN104938335B (zh) 利用油茶下胚轴获得再生植株的方法
CN103070078A (zh) 一种利用芋头茎尖进行组织培养的快繁方法
CN106538382A (zh) 一种以幼穗为外植体建立假俭草高效再生体系的方法
CN102342246A (zh) 一种大白杜鹃组培快速繁殖方法
Badrelden Establishment of in Direct Propagation of Mandarin (Citrus reticulata L) using tissue culture
CN106069771A (zh) 蝴蝶兰组培繁殖方法
CN107155894A (zh) 一种绿岭核桃体细胞胚育苗方法
CN103416302B (zh) 桂花体细胞胚再生植株的方法
CN110800609B (zh) 一种利用胚性愈伤组织进行钻喙兰人工快繁的方法
CN100442971C (zh) 一种牡丹胚状体诱导方法
CN100391333C (zh) 安祖花无菌苗组织培养和试管苗炼苗移栽方法
CN1723770A (zh) 一种楝树杂交组织培养技术
CN101268758A (zh) 一种宣木瓜组织培养快速繁殖的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170915

RJ01 Rejection of invention patent application after publication