CN101491215B - 香椿组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
香椿的组织培养与快繁技术，是从正在生长的植株中，剪取当年生半木质化腋芽饱满的枝条，经杀菌、消毒，剪成含有1-2个腋芽的茎段，快速接种到分化诱导培养基中，进行分化培养；再利用分化培养出的植株，放入增殖培养基中进行增殖快繁；扩繁到一定数量时，放入生根培养基中进行壮苗生根培养，壮苗生根后，转入炼苗。该方法利用香椿的茎尖、茎段进行无性组织快繁和脱毒，繁殖的后代保持了原品种的优良种性，确保了种质纯度，且无病虫害发生；克服了传统的用种子和扦根繁殖速度慢的弊端，可人为的控制培养生长条件，不受自然条件的影响，取材量小，可实现工厂化育苗、高效率生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的组培快繁技术，确切地说是一种香椿的组培快繁技术，以及繁育所用培养基的配比。
背景技术
植物组织培养是指植物的所有器官、组织和细胞，在人为的控制条件下，放入含有植物营养和调节剂等组成的培养基中，让其生长、分化形成完整植株的过程。其理论依据是植物细胞的全能性。植物组织培养与快繁技术近几年飞快发展，已广泛应用在花卉、林果、蔬菜以及农作物上，并产生了巨大的经济效益。
培养基是植物快繁的关键，培养基的配比，是因作物的不同而异，是随植物的不同生长和发育阶段而有区别。作物不同生长发育所需的营养物质也不尽相同。每一种作物只有适应它自身的生长条件和环境条件才能生存，反之则亡。因此，香椿各个生长发育阶段的培养基配比，也就是说，香椿的诱导与分化培养、继代与增殖培养、壮苗与生根培养中培养基的配比，只适宜香椿各个生长阶段，因此，筛选合适的培养基是至关重要的。
过去生产香椿苗的常规方法是，①用根系进行繁殖，但由于根量太少，育苗量较低，且每年只能繁育一次，发展迟缓；②用种子繁殖幼苗，会使单株之间的内部形态和外部形状及生长速度呈现不一致性，造成品质、营养含量相差太大。
作为食用型香椿，它菜、材兼用，鲜嫩的芽菜口感好，香味浓郁，富含大量蛋白质、维生素等营养物质，是大众餐桌上的美味佳肴。由于其本身是一个高度的杂合体，后代分离严重的原因，导致了品质的 多异性和形态及特征的不一致性，所以只有采用无性组织快繁，才能从根本上解决种质和纯度的一致性问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种香椿的无性营养体组织培养与脱毒快繁技术，并筛选出适宜该品种分化、增殖、生根的最佳培养基配比，以实现不受季节限制，多次、快速、大量繁殖，并且保证原品种全部的遗传性和该品种品质的一致性。
本发明的组培繁育方法是：
1、分化诱导培养
从正在生长的植株中，选择生长健壮，无病虫，具有本品种特征特性的植株，剪取当年生半木质化腋芽饱满的枝条，去掉可见叶，在流动的自来水中冲洗，拮干水分。在无菌室内的超净工作台上，进行灭菌后，再用无菌水冲洗，然后剪成1.0-1.5cm长含有1-2个腋芽的茎段，快速接种到分化诱导培养基中，封口后作好标记，迅速转到培养室内进行分化诱导培养。培养温度26±℃，湿度65-75％，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d。经过25-28天的分化培养，芽长出3-5片叶，高度3-5cm时，可进行单株继代增殖快繁。
2、增殖培养
将生长健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段，长1-1.5cm，转入增殖培养基中进行增值培养，在培养室内通过28天的增殖培养的组培苗，此时可进行继代繁殖，继代周期为28-30天，如此反复，短期内即可获得大量芽苗。培养温度26±℃，湿度65-75％，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d。
3、生根培养
选取生长势强、健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段长1.0-1.5cm转入生根培养基中，25天左右，有95％以上的植株长出3-5 条0.3-3cm长的根，展开叶3-5片，待苗长至30-35天时，即可炼苗移栽。培养温度26±℃，湿度65-75％，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d。
4、炼苗与移栽
练苗前首先揭开培养瓶的封口膜，练苗时间5-7天，练苗时在保证温、湿度的条件下，逐步接近自然环境，以利提高成活率，然后小心取出，用自来水冲洗净苗基部的培养基，并灭菌，然后移栽到已灭过菌的腐殖质与碎炉渣以1∶2的比例混合的基质中，前期适当遮阴并保持湿度在85-95％，逐步降至70％，15天后去掉薄膜罩，定期杀菌，7-10天一次，共计2-3次。
本发明的培养基及配比：
由基本培养基、生长调节剂附加蔗糖和琼脂组成分化诱导培养基、增值培养基和生根培养基，基本培养基为MS，基本培养基MS的配制方法为公知技术，生长调节剂分别由6-苄基腺嘌呤(6-BA)、a-萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸(IBA)、赤霉素(GA3)组合而成。
1、分化诱导培养基的配比是：基本培养基1升、6-苄基腺嘌呤(6-BA)0.5-3.0mg，a-萘乙酸(NAA)0.5-3.0mg，赤霉素(GA3)0.5-3.0mg，蔗糖30g，琼脂6-8g；
2、增值培养基的配比是：基本培养基1升、6-苄基腺嘌呤(6-BA)1.0-5.0mg，a-萘乙酸(NAA)0.5-2.5mg，吲哚丁酸(IBA)0.5-3.0mg，赤霉素(GA3)0.5-3.0mg，蔗糖30g，琼脂6-8g；
3、生根培养基的配比是：1/2基本培养基1升、a-萘乙酸(NAA)1-3mg，蔗糖20g，琼脂6-8g；
本发明的积极效果是：利用香椿的茎尖、茎段进行无性组织快繁和脱毒，改变了常规繁育方法用香椿种子繁殖后代出现严重分离的多样化现象，保持了原品种的优良种性，确保了种质纯度，脱毒后使其 抗性增强，品质和感官变优，芽菜产量提高30％以上，且香味浓郁，无病虫害发生。克服了传统的用种子和扦根繁殖速度慢的弊端，1年内1个生长点或1个茎段可增殖600000-700000万个与母体生理特征完全一致的小植株，可实现工厂化育苗、高效率生产；可人为的控制培养生长条件，不受自然条件的影响，取材量小，培养材料经济，生长周期短，繁殖系数大，管理方便，利于自动化生产和产业化生产。
具体实施方式
本实施例是用河南省命名的“红香椿一号”菜、材兼用香椿，进行组培快繁的实例。
1、分化诱导培养
从正在生长的植株中，选择生长健壮，无病虫，具有本品种特征特性的植株，剪取当年生半木质化腋芽饱满的枝条，去掉可见叶，在流动的自来水中冲洗20-30mis，拮干水分。在无菌室内的超净工作台上，用75％酒精处理30S，用0.1％的升汞灭菌8-12min后，用无菌水冲洗5-7次，然后，剪成1.0-1.5cm长含有1-2个腋芽的茎段，快速接种到分化诱导培养基中，封口后作好标记，迅速转到培养室内进行分化诱导培养。
分化诱导培养基是由1升基本培养基MS、1.5mg6-苄基腺嘌呤(6-BA)、1.0mg a-萘乙酸(NAA)、3mg赤霉素(GA3)加入30g蔗糖、6g琼脂配制而成。用氢氧化钠和盐酸调整PH值，控制PH值在5.6-5.8，培养温度26±℃，湿度65-75％，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d。接种到分化诱导培养基中的外植体，7天后有芽萌动，15天后芽出现，在此培养基中苗分化早、快，且集中，芽长势好，15天左右芽分化形成率达70％以上。经过25-28天的培养，芽长至3-5cm高时，可进行单株快繁。
2、增殖培养
将生长健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段长1-1.5cm，转入增殖培养基中进行培养，增值培养基是由1升基本培养基(MS)、2mg6-苄基腺嘌呤(6-BA)、0.5mga-萘乙酸(NAA)、0.5mg吲哚丁酸(IBA)、1.5mg赤霉素(GA3)加入30g蔗糖、6g琼脂配制而成。用氢氧化钠和盐酸调整PH值，控制PH值在5.6-5.8，培养温度26±℃，湿度65-75％，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d。3-7天有愈伤组织形成，7-10天有芽萌动，随着丛芽的形成愈伤组织也随之减少到消失，10-20天长出丛生芽4-6个。在该增值培养基中茎分化苗增殖率高达100％，增殖倍数6以上，在接种后的1-10天增殖率占23％，增殖最快的时间是在11-20天之间高达70％，且芽匀而壮。继代周期为28-30天，如此反复，短期内即可获得大量芽苗。
3、生根培养
选取生长势强、健壮的无菌芽苗切成含有1-2个节间的小段长1.0-1.5cm转入生根培养基中，生根的基本培养基是分化和增殖培养基本培养基的一半，即1/2MS。生根培养基由1升1/2MS 1-3mg a-萘乙酸(NAA)、20g蔗糖、6g琼脂配制而成。用氢氧化钠和盐酸调整PH值，控制PH值在5.8，培养温度26±℃，湿度65-75％，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d。该生根培养基生根率达100％，生根倍数5以上，在根分化形成过程中，1-10天内无根形成，10-20天内根形成增长率占30％，集中在20-30天为70％。7-10天在茎基部出现白色突起，15-20天有2-3个根尖萌出，25天左右，有95％以上的植株长出3-5条0.3-3cm长的根，展开叶3-5片，待苗长至30-35天即可炼苗移栽。
4、炼苗与移栽
练苗前首先揭开培养瓶的封口膜，练苗时在保证温、湿度的条件下，逐步接近自然环境，以利提高成活率，练苗时间5-7天，然后小 心取出，用自来水冲洗净苗基部的培养基，用多菌灵浸泡5-10min后，移栽到已灭过菌的腐殖质与碎炉渣以1∶2的比例混合的基质中，前期适当遮阴并保持湿度在85-95％，逐步降至70％左右，15天后去掉薄膜罩，定期喷洒40％多菌灵800倍液杀菌，7-10天一次，共计2-3次，成活率90％以上，15天后生长加快。
“红香椿一号”是香椿中的极品，该香椿生长快、材质好、芽菜品质优良、营养价值高。“红香椿一号”是菜、材兼用型树种，它鲜嫩的芽菜蛋白质含量9.7％，比一般香椿(5.7％)高40％，维生素C含量比一般香椿高7.1％。
Claims (1)
1.香椿组培快繁方法，其具体方法步骤是：①选取香椿一年生半木质化的茎段或茎尖，去掉可见叶，在流动的自来水中进行冲洗；②在无菌室内的超净工作台上，进行消毒与灭菌，先用75％的酒精消毒处理，用0.1％的升汞灭菌后，再用无菌水冲洗干净，然后剪成1.0-1.5cm长含有1-2个腋芽的茎段，快速接种到已灭好菌的分化诱导培养基中；③将接种到各个分化诱导培养基中的外植体，放在温度26℃，湿度65-75％，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d的环境中进行分化诱导培养，通过28-35天长成完整的植株；④再利用分化诱导培养出的植株，剪成含有1-2个节间的长1-1.5cm的小段放入增殖培养基中，在上述同等环境中进行增殖快繁；⑤扩繁到一定数量时，待生产种植以前，需放入生根培养基中进行生根培养，生根培养在上述同等环境中进行，壮苗生根后，转入炼苗；首先打开封口膜5-7天，然后小心取出苗，用自来水冲洗净苗基部的培养基，以防感染，用多菌灵浸泡灭菌，移栽到已灭过菌的腐殖质与碎炉渣以1∶2的比例混合的基质中进行炼苗，前期适当遮阴并保持湿度在85-95％，逐步降至70％，15天后去掉薄膜罩，定期喷洒40％多菌灵800倍液杀菌，7-10天一次，共计2-3次；
其中，分化诱导培养基、增殖培养基和生根培养基由基本培养基、生长调节剂、蔗糖及琼脂配制而成；基本培养基为MS；
分化诱导培养基的配比是基本培养基1升、6-苄基腺嘌呤6-BA0.5-3.0mg，a-萘乙酸NAA 0.5-3.0mg，赤霉素GA3 0.5-3.0mg，蔗糖30g，琼脂6-8g；
增殖培养基的配比是基本培养基1升、6-苄基腺嘌呤6-BA1.0-5.0mg，a-萘乙酸NAA 0.5-2.5mg，吲哚丁酸IBA 0.5-3.0mg，赤霉素GA3 0.5-3.0mg，蔗糖30g，琼脂6-8g；
生根培养基的配比是1/2基本培养基1升、a-萘乙酸NAA 1-3mg，蔗糖20g，琼脂6-8g。
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