CN103798144A - 红椿组织培养培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种红椿组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基。首次采用组织培养的方式进行种苗无性繁殖，采用本发明的技术比通过种子繁殖快，更能有效保持母本的优良性状，保证了种苗的质量。
Description
技术领域
本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种红椿组织培养培养基。
背景技术
红椿（Toona ciliata Roem.）又名红楝子、印度椿、麦荣，楝科香椿属，半常绿乔木，国家Ⅱ级重点保护野生植物，是我国热带、亚热带地区的珍贵速生用材树种，主要分布于广东、广西、云南、贵州和安徽等省区。1973年在皖南泾县首次发现有少量天然分布，其木材为上等家具用材，素有“中国桃花心木”之称。红椿还是一种尚未被开发利用的药用植物。近年来的研究发现,红椿提取物具有抗菌、抗病毒、灭螺及抗疟等多种生物活性。目前该树种自然资源现存稀少，且人为破坏较为严重，若不加以保护，将陷于濒临灭绝的境地。
目前红椿的常规繁育以种子繁殖为主，难以保持母本的优良性状，且其种子易丧失活力，繁殖速度较慢。通过组织培养的方法可以解决其优质种苗繁殖问题。目前，还未见有红椿组织培养方面的相关报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种红椿组织培养培养基基配方，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1267mg/L、硝酸铵1100mg/L、二水氯化钙293mg/L、七水硫酸镁247mg/L、磷酸二氢钾113mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.4-0.8mg/L、萘乙酸0.1-0.3mg/L、赤霉素0.6-1.0mg/L；
余量为蒸馏水。
每升（L）生根培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾950mg/L、硝酸铵825mg/L、二水氯化钙220mg/L、七水硫酸镁185mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：吲哚乙酸0.4-0.8mg/L；
余量为蒸馏水。
本发明红椿组织培养基中的继代、生根培养基的配制方法为：
1母液的配制与保存
1.1为便于取样，宜先配制各种母液，分为大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和各种植物生长调节剂母液。蔗糖、琼脂不宜配成母液，需要时直接称样；
1.2大量元素母液浓度成100倍溶液，有机物、微量元素母液配成200倍溶液，植物生长调节试剂母液的浓度配成1mg/ml；
1.3母液选用无菌的蒸馏水、去离子水或超纯水配制，大量生产时用煮沸过的水；
1.4配制大量元素母液时，每个组分应单独溶解，后按氮、钙、镁、磷的顺序逐个混合，否则容易引起沉淀；
1.5微量元素、有机物、植物生长调节剂母液应用棕色瓶装好并置于冰箱中保存；
1.6母液配制后应及时使用，贮存时间不宜超过1个月；
1.7发现母液有沉淀，或有微生物生长，或有藻类生长，应废弃不用。
2培养基的配制
2.1依照培养基配方，按比例量取各种母液；
2.2在定量容器内放入准备配制培养基总量的约1/2以上的纯净水，并加入适量的糖，然后边搅拌边逐一加入所需量的母液；
2.3琼脂可加热熔化后加入，如有搅拌设备时也可直接加入琼脂粉，然后用纯净水补足所需配制培养基的总量，搅拌均匀即可；
2.4培养基中的糖，在大量组培苗生产中，一般可用市售白砂糖，但最好是用蔗糖而不要用甜菜糖；
2.5用1.0摩尔/升的盐酸或1.0摩尔/升的氢氧化钠调节培养基的pH值至5.8；
2.6配制好的培养基要尽快分装到培养容器中，以免培养基凝固或变稠而难以分装；
2.7分装培养基时应注意避免培养基粘在瓶口上，如果粘有培养基，在盖瓶盖或瓶塞前必须用干净纱布擦净瓶口。
3培养基消毒灭菌
3.1将分装好的培养基装于高压灭菌锅内消毒；
3.2加热初期，当消毒锅消毒室的气压达0.05MPa时，打开冷凝阀，排尽消毒室内冷空气；
3.3当消毒室内气压达到0.11MPa、温度达121℃时，开始计时，保持温度与压力消毒15-20分钟；
3.4关闭加热电源开关，按慢排气方式排放热气，待消毒室内的气压降至大气压时打开消毒锅盖或门，取出培养基；
3.5培养基应置于空气少流动和少灰尘的干净环境冷却，否则在降温进气过程中导致霉菌孢子进入培养器皿，产生霉菌污染。
4培养基储藏
4.1培养基应尽量现配现用；
4.2可在空气干净且不流动的环境短时间储藏培养基，但储藏超过1个月的培养基应废弃不用。
本发明红椿组织培养的方法为：
1.无菌芽的获取
选取颗粒饱满的红椿种子，在超净工作台上用0.1%氯化汞溶液浸泡消毒10min，再用无菌水冲洗4-5次。将经消毒处理的种子接种在诱导培养基上进行初始培养，诱导种子发芽以获取无菌材料。外植体初次培养时，需全暗培养10天左右，再放到弱光下进行培养，大约经过15天左右的种子开始萌芽，然后再移至见光的地方培养。
2.芽的增殖培养
将诱导获得的无菌芽接种至继代培养基上进行芽的继代增殖，一般30天左右继代一次，继代材料均放在培养室内培养，培养室温度为（25±2）℃,光照12h.d-1,光照度2000lx。
3.生根的诱导
芽条长至约2-3cm时，将较健壮的芽苗由丛生芽上单个切下转至生根培养基上诱导生根，其余芽苗转至继代培养基上继续进行增殖培养。生根培养需要在弱光下培养15天左右，此时小苗的基部形成白色突起，并逐渐伸长，20天后可形成明显根系，逐渐长成完整的小植株，此时期宜逐步增加光照使小苗变得粗壮。
4.生根苗的移栽
待生根小苗充分木质化，叶片舒展，叶色浓绿，茎轴伸长，苗高约3-4cm时即可进行大棚移栽。移栽时先取出小苗，洗净基部的培养基后，移栽于经0.1%高锰酸钾消毒过用营养袋装好的育苗基质上，移栽后浇透定根水，保持一定的温度和湿度，并要定期进行喷药进行防病处理。
本发明的优点是：
1、首次采用组织培养的方法对红椿进行无性繁殖，该技术比常规通过种子繁殖更快，更能有效保持母本的优良性状，保证了种苗的质量；
2、以继代培养基进行红椿增殖培养，培养温度保持在25-28℃左右，继代苗年繁殖系数为2.512，继代苗分化芽多，芽健壮，生长整齐，叶色浓绿；
3、用生根培养基进行生根苗培养生根率达90.0%，温度为25-28℃时，培养20天左右可出根，根系发达，平均出根量有4-6条，35天可移栽，移栽成活率达85.0%。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
实施例1：
红椿组织培养的培养基配方，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1267mg/L、硝酸铵1100mg/L、二水氯化钙293mg/L、七水硫酸镁247mg/L、磷酸二氢钾113mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.4mg/L、萘乙酸0.1mg/L、赤霉素0.6mg/L；
余量为蒸馏水。
每升（L）生根培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾950mg/L、硝酸铵825mg/L、二水氯化钙220mg/L、七水硫酸镁185mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：吲哚乙酸0.4mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例2：
红椿组织培养的培养基配方，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1267mg/L、硝酸铵1100mg/L、二水氯化钙293mg/L、七水硫酸镁247mg/L、磷酸二氢钾113mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.6mg/L、萘乙酸0.2mg/L、赤霉素0.8mg/L；
余量为蒸馏水。
每升（L）生根培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾950mg/L、硝酸铵825mg/L、二水氯化钙220mg/L、七水硫酸镁185mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：吲哚乙酸0.5mg/L；
余量为蒸馏水。
实施例3：
红椿组织培养的培养基配方，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1267mg/L、硝酸铵1100mg/L、二水氯化钙293mg/L、七水硫酸镁247mg/L、磷酸二氢钾113mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.8mg/L、萘乙酸0.3mg/L、赤霉素1.0mg/L；
余量为蒸馏水。
每升（L）生根培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾950mg/L、硝酸铵825mg/L、二水氯化钙220mg/L、七水硫酸镁185mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：吲哚乙酸0.8mg/L；
余量为蒸馏水。
通过以上实施例对红椿进行组培繁殖，用继代培养基进行增殖培养，培养温度保持在25-28℃左右，继代苗年繁殖系数为2.512，继代苗分化芽多，芽健壮，生长整齐，叶色浓绿；用生根培养基进行生根苗培养生根率达90.0%，温度为25-28℃时，培养20天左右可出根，根系发达，平均出根量有4-6条，35天可移栽，移栽成活率达85.0%。采用本发明的技术比通过种子繁殖快，更能有效保持母本的优良性状，保证了种苗的质量。
Claims (1)
1.一种红椿组织培养的培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其特征在于：
每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾1267mg/L、硝酸铵1100mg/L、二水氯化钙293mg/L、七水硫酸镁247mg/L、磷酸二氢钾113mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/L；
（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.4-0.8mg/L、萘乙酸0.1-0.3mg/L、赤霉素0.6-1.0mg/L；
余量为蒸馏水；
每升（L）生根培养基的组分及各组分的含量如下：
（1）大量元素：硝酸钾950mg/L、硝酸铵825mg/L、二水氯化钙220mg/L、七水硫酸镁185mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、七水硫酸亚铁27.8mg/L；
（2）微量元素：四水硫酸锰22.3mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L、六水氯化钴0.025mg/L；
（3）有机物：肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸吡哆醇（VB6）0.5mg/L、烟酸0.5mg/L、盐酸硫胺素（VB1）0.1mg/；
（4）植物生长调节剂：吲哚乙酸0.4-0.8mg/L；
余量为蒸馏水。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140521 |