CN106577299A - 一种以子叶节为外植体的红椿再生方法 - Google Patents

一种以子叶节为外植体的红椿再生方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种以子叶节为外植体的红椿再生方法。本发明的以子叶节为外植体的高效组织培养和植株再生方法，可摆脱外界条件的影响，规模化和工厂化生产出健壮、整齐一致的红椿组培幼苗；与已经报道的以红椿大树茎段作为外植体构建再生体系相比，具有操作方便、取材广泛、可重复性强及效率高等优势。该方法可满足市场对种苗的需求，为红椿种质资源可持续利用奠定基础。

Description

一种以子叶节为外植体的红椿再生方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种以子叶节为外植体的红椿再生方法。
背景技术
红椿(Toona ciliata Roem.)隶属楝科(Meliaceae)香椿属(Toona)，分布范围主要包括中国、印度、老挝、缅甸、巴基斯坦，此外，澳大利亚东海岸也有分布。在我国的分布区域主要集中在华南、华中、华东及西南地区。红椿材质优良，花纹美丽，是上等的家具用材，以“中国桃花心木”的美誉远销海外。它具有早期速生性状明显、生长快等特点，生长量均超过一般人工栽培的常绿阔叶树种，在我国南方地区已成为重点开发利用的优质速生用材树种。红椿天然群体多数以零星分布的形式存在，由于环境的变化、天然更新能力较差及过度的采伐破坏，红椿目前已成为濒危树种，为国家Ⅱ级重点保护野生植物。除广泛应用在家具设计、车船制造及室内装饰领域外，红椿因其树形美观，也可以作为行道树栽种，近年来在药用方面的应用也得到较大的发展。
目前红椿繁殖方式多采用种子繁殖。但其成年大树树形通直，使得采种较为困难，且该树种的种子较小，千粒重仅4.4g，因此严重影响了其长期的保存能力，因此，红椿扦插、嫁接及组织培养等繁殖技术得到越来越多的关注。扦插及嫁接繁殖对红椿的嫩枝要求较高，采穗圃的构建同样需要大量人力物力。在短时间内，传统的种子繁殖和扦插繁殖不能及时满足种苗市场需求，此时，可通过组织培养技术解决种苗快速且大量繁殖问题。
红椿组织培养技术的研究报道较少，主要集中在利用成年大树带芽茎段构建组培体系，但所获得的腋芽诱导率均较低，增殖情况并不理想，且生根培养并不成功。
发明内容
本发明的目的是提供一种以红椿子叶节为外植体的操作更简便、取材更广泛的高效的红椿再生方法，利用该方法能够在短期内快速获得大量优质的红椿种苗。本发明以红椿子叶节为材料，快速获得健康的不定芽，增殖获得大量的再生幼苗，旨在解决子叶节的再生问题，提高红椿再生能力，为工厂化生产种苗、种质资源保护研究提供有效的参考价值。
本发明的以子叶节为外植体的红椿再生方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、外植体的获得：将红椿种子去掉双侧翅，在水中浸泡3～5h，经消毒后将种子播种于固体MS培养基上培养得到无菌苗，切取无菌苗的子叶节作为外植体；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；
B、不定芽的诱导：将子叶节接种到芽诱导培养基上培养诱导不定芽，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；
所述的芽诱导培养基：每升含有6-BA 0.6～1.0mg、KT 0.6～1.8mg、NAA 0.05～0.1mg、蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8～6.0；
C、生根培养：待不定芽伸长到5～8cm时，切取不定芽，接种于生根培养基上培养诱导生根，得到生根苗；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；
所述的生根培养基：每升含有NAA0.05～0.2mg、蔗糖15g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8～6.0；
D、炼苗及移栽：将生根苗炼苗后从培养瓶中挖出，洗净根上的培养基，将生根苗在自来水中浸泡1h，移栽到泥炭土上，进行栽培管理，得到红椿植株。
优选，所述的步骤A的消毒是将红椿种子用体积分数75％乙醇水溶液灭菌1min，无菌水冲洗1次，质量分数10％次氯酸钠水溶液灭菌15min～20min，无菌水冲洗3～5次。
优选，所述的步骤D的炼苗是打开培养瓶盖让生根苗适应2d。
优选，所述的步骤D的泥炭土是高温灭菌过的泥炭土。
所述的步骤A的固体MS培养基每升含有蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8～6.0。
所述的MS培养基为国际通用的培养基，其成份和配置方法见Murashige T,SkoogF(1962)A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco tissuecultures.Physiol Plant 15:473–497。
本发明的以子叶节为外植体的高效组织培养和植株再生方法，可摆脱外界条件的影响，规模化和工厂化生产出健壮、整齐一致的红椿组培幼苗；与已经报道的以红椿大树茎段作为外植体构建再生体系相比，具有操作方便、取材广泛、可重复性强及效率高等优势。该方法可满足市场对种苗的需求，为红椿种质资源可持续利用奠定基础。
附图说明
图1为种子培养20d得到的无菌苗，用于切取子叶节。
图2为子叶节外植体在芽诱导培养基培养40d后产生的不定芽。
图3为不定芽在生根培养基上培养诱导出的根。
图4为移栽成活的红椿植株。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
A、外植体的获得：将红椿种子去掉双侧翅，在水中浸泡3h；在无菌超净台上，用体积分数75％乙醇水溶液灭菌1min，无菌水冲洗1次，质量分数10％次氯酸钠水溶液灭菌15min，无菌水彻底冲洗3次，然后将种子播种于固体MS培养基上培养，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。种子培养3d左右开始萌芽，15d后，无菌苗(如图1所示)子叶伸展，切取子叶节作为外植体。所述固体MS培养基每升含有蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
B、不定芽的诱导：将子叶节接种到芽诱导培养基上培养诱导不定芽；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。培养40d后，不定芽(如图2所示)出现并逐渐伸长。所述的芽诱导培养基：每升含有6-BA 0.8mg、KT 1.2mg、NAA 0.05mg、蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
C、生根培养：待不定芽伸长到5cm时，切取不定芽，接种于生根培养基上培养诱导生根，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。生根培养30d后，不定芽长出多条根得到生根苗，生根情况如图3所示。所述的生根培养基：每升含有NAA0.12mg、蔗糖15g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
D、炼苗及移栽：打开培养瓶盖让生根苗适应2d，然后小心将生根苗从培养瓶中挖出，洗净根上的培养基，将生根苗在自来水中浸泡1h，移栽到装在营养杯中的高温灭菌过的泥炭土上，在营养杯上套上塑料袋保湿，3d后慢慢地移开塑料袋，按生长需求浇水。移栽成活的红椿植株如图4所示。
实施例2
A、外植体的获得：将红椿种子去掉双侧翅，在水中浸泡3h；在无菌超净台上，用体积分数75％乙醇水溶液灭菌1min，无菌水冲洗1次，质量分数10％次氯酸钠水溶液灭菌15min，无菌水彻底冲洗3次，然后将种子播种于固体MS培养基上培养，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。种子培养3d左右开始萌芽，15d后，无菌苗子叶伸展，切取子叶节作为外植体。所述固体MS培养基每升含有蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
B、不定芽的诱导：将子叶节接种到芽诱导培养基上培养诱导不定芽；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。培养50d后，不定芽出现并逐渐伸长。所述的芽诱导培养基：每升含有6-BA 0.6mg、KT 0.6mg、NAA 0.08mg、蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
C、生根培养：待不定芽伸长到5cm时，切取不定芽，接种于生根培养基上培养诱导生根，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。生根培养30d后，不定芽长出多条根得到生根苗。所述的生根培养基：每升含有NAA0.05mg、蔗糖15g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
D、炼苗及移栽：打开培养瓶盖让生根苗适应2d，然后小心将生根苗从培养瓶中挖出，洗净根上的培养基，将生根苗在自来水中浸泡1h，移栽到装在营养杯中的高温灭菌过的泥炭土上，在营养杯上套上塑料袋保湿，3d后慢慢地移开塑料袋，按生长需求浇水。由此得到移栽成活的红椿植株。
实施例3
A、外植体的获得：将红椿种子去掉双侧翅，在水中浸泡5h；在无菌超净台上，用体积分数75％乙醇水溶液灭菌1min，无菌水冲洗1次，质量分数10％次氯酸钠水溶液灭菌20min，无菌水彻底冲洗5次，然后将种子播种于固体MS培养基上培养，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。种子培养3d左右开始萌芽，20d后，无菌苗子叶伸展，切取子叶节作为外植体。所述固体MS培养基每升含有蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH6.0；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
B、不定芽的诱导：将子叶节接种到芽诱导培养基上培养诱导不定芽；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。培养30d后，不定芽出现并逐渐伸长。所述的芽诱导培养基：每升含有6-BA 1.0mg、KT 1.8mg、NAA 0.1mg、蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH6.0；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
C、生根培养：待不定芽伸长到8cm时，切取不定芽，接种于生根培养基上培养诱导生根，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d。生根培养30d后，不定芽长出多条根得到生根苗。所述的生根培养基：每升含有NAA0.2mg、蔗糖15g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH6.0；配制方法是将上述成份混合均匀，调pH，然后灭菌备用。
D、炼苗及移栽：打开培养瓶盖让生根苗适应2d，然后小心将生根苗从培养瓶中挖出，洗净根上的培养基，将生根苗在自来水中浸泡1h，移栽到装在营养杯中的高温灭菌过的泥炭土上，在营养杯上套上塑料袋保湿，3d后慢慢地移开塑料袋，按生长需求浇水。由此得到移栽成活的红椿植株。

Claims (5)

1.一种以子叶节为外植体的红椿再生方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、外植体的获得：将红椿种子去掉双侧翅，在水中浸泡3～5h，经消毒后将种子播种于固体MS培养基上培养得到无菌苗，切取无菌苗的子叶节作为外植体；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；
B、不定芽的诱导：将子叶节接种到芽诱导培养基上培养诱导不定芽，培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；
所述的芽诱导培养基：每升含有6-BA 0.6～1.0mg、KT 0.6～1.8mg、NAA 0.05～0.1mg、蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8～6.0；
C、生根培养：待不定芽伸长到5～8cm时，切取不定芽，接种于生根培养基上培养诱导生根，得到生根苗；培养条件为温度25±2℃，光照强度2500lx，光照时间12h/d；
所述的生根培养基：每升含有NAA0.05～0.2mg、蔗糖15g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8～6.0；
D、炼苗及移栽：将生根苗炼苗后从培养瓶中挖出，洗净根上的培养基，将生根苗在自来水中浸泡1h，移栽到泥炭土上，进行栽培管理，得到红椿植株。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤A的消毒是将红椿种子用体积分数75％乙醇水溶液灭菌1min，无菌水冲洗1次，质量分数10％次氯酸钠水溶液灭菌15min～20min，无菌水冲洗3～5次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤D的炼苗是打开培养瓶盖让生根苗适应2d。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤D的泥炭土是高温灭菌过的泥炭土。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤A的固体MS培养基每升含有蔗糖30g和琼脂5g，余量为MS培养基，pH5.8～6.0。
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