CN106913667A - 柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于治疗非小细胞肺癌的医学用途 - Google Patents
柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于治疗非小细胞肺癌的医学用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及医药领域，尤其涉及一种柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于治疗非小细胞肺癌的医学用途。本发明的一个目的是提供一种柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用，所述的新型小分子果胶为柑橘橘络在提取高分子果胶后的萃取液经过物理分离制备的小分子果胶。本发明的二个目的是提供一种柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于制备抑制非小细胞肺癌的食品或保健品中的应用。本发明的小分子果胶是一种从柑橘橘络中直接提取出的水溶性多糖，能与肿瘤细胞亲和黏附，特异性杀伤并清除突变细胞。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，尤其涉及小分子果胶用于治疗非小细胞肺癌的医学用途。
背景技术
柑橘果胶是来源于植物细胞壁的多糖，一般可作为食品添加剂使用，有很好的胶凝、稳定、乳化、增稠、悬浮功能，同样的，天然柑橘果胶分子量大(5-30万Da)，食用后无法被肠道吸收而不能使其在体内充分发挥作用。鉴于此，对其分子进行大小及结构的改性，具有增强生物学功能的前景。
果胶改性的几类主要方法，包括化学(pH)改性、酶改性、热改性、辐照改性、接枝改性、交联改性和取代改性；
目前，国内外的小分子果胶提取技术，主要是利用天然柑橘果胶经过改性方法制备，包括化学(pH)改性、酶改性、热改性、辐照改性、接枝改性、交联改性和取代改性；这些方法进行天然果胶分子链断链的处理，可得到分子量为2000-35000Da的小分子果胶，酯化度2-30％，水解的作用一是将果胶直链切断以降低分子量，二是降低酯化度，直链切断的过程中采用的工艺，会导致果胶的活性降低，服用后得到的效果仅有10％左右。
过去，因为小分子果胶只有欧美、日本等国家的极少数企业掌握核心生产技术，我国小分子果胶产业长期受限于国外技术垄断，产品绝大多数以进口为主，所以迫切需要自主研发、技术领先的国产小分子果胶充实国内市场，我们完全可以充分利用我国丰富的柑橘资源，生产出优质的小分子柑橘果胶，满足国内日益增长的市场需求，可苦于技术的限制，使得这一市场基本被国外企业占领。
申请人范晓青申请了中国发明专利(CN200610050803.3、CN200610051667.X、CN201010226113.5、CN201110028976.6)公开了低分子柑桔果胶的新用途，该低分子柑桔果胶由干柑桔皮提取果胶后采用氢氧化钠和氢氧化钾催化获得低分子柑桔果胶。其采用将果胶直链切断以降低分子量的方式，会导致果胶的活性降低。
本发明的发明人申请的中国发明专利申请(申请号CN201610531658.4，公开日：2016.12.07)公开了一种柑橘罐头加工工艺中同步提取果胶及多酚的方法，分别通过不同级别的分离装置分离出柑橘罐头加工工艺水中的高分子果胶、低分子果胶以及多酚、单糖等物质，避免了传统罐头加工中工艺水难处理造成环境污染及物质浪费，且各个不同分子量物质的分离采用的分离提取方式也都不同，比如超滤、纳滤等，不会使回收工艺太过复杂。本发明还提供了一种柑橘罐头工艺水中提取果胶及多酚的系统，根据高分子果胶、低分子果胶以及多酚、单糖分子量大小不同，采用不同的膜装置用于过滤的分离装置，促使分离出的上述物质纯度较高，系统中包含除盐装置能有效的去除工艺水中的重金属以及盐类，避免了这些物质对提取后的高分子果胶、低分子果胶以及酚、单糖的污染。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用，所述的新型小分子果胶为柑橘橘络提取物中物理分离制备的小分子果胶。作为优选，所述的小分子果胶的摩尔质量为50000Da以下，最优选为1000-50000Da之间。
本发明的二个目的是提供一种柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于制备抑制非小细胞肺癌的食品或保健品中的应用，所述的新型小分子果胶为柑橘橘络提取物中物理分离制备的小分子果胶。作为优选，所述的小分子果胶的摩尔质量为50000Da以下，最优选为1000-50000Da之间。
本发明所述的高活性小分子果胶可以采用以下的方法制备得到：
1)原料的处理
将柑橘橘络原料，进入酸提罐，并加热至40-50℃，调节PH至3.5-4.5，保温3～5小时；
2)过滤
浸提后的液体，经过滤滤出残渣，取滤液进入萃取罐，滤渣进行二次浸提；
3)萃取
浸提后的液体进入萃取罐，加入萃取液，进行高分子果胶萃取，萃取后的萃取液进入压榨装置，将得高分子果胶；
4)回收萃取液
萃取液经过萃取回收装置回收，萃取液残留部分为小分子果胶的原料液；
5)超滤Ⅰ
含有小分子果胶的原料经过超滤滤出大于5万分子量的果胶和杂质；
6)超滤Ⅱ
选用1000分子量的超滤分离和浓缩超滤Ⅰ滤后的滤液，得到小分子果胶液。
当然，本发明的小分子果胶也可以采用本发明的发明人高海峰申请的中国发明专利申请(申请号CN201610531658.4，公开日：2016.12.07)公开方法获得。
本发明的小分子果胶是一种从柑橘橘络中直接提取出的水溶性多糖，能与非小细胞肺癌肿瘤细胞亲和黏附，特异性杀伤并清除突变细胞。
附图说明
图1.本发明小分子果胶对PC-9细胞的增殖抑制率。
图2.改性柑橘果胶粉对PC-9细胞的增殖抑制率。
图3.模型对照及各给药组荷瘤裸小鼠皮下实体瘤。
图4.小分子果胶对荷瘤裸小鼠肿瘤体积(TV)的影响。
图5.小分子果胶荷瘤裸小鼠相对肿瘤体积(RTV)的影响。
具体实施方式
实施例1
一种柑橘橘络提取的新型小分子果胶的制备方法，该方法包括以下的步骤：
1)原料的处理
柑橘橘络经过粉碎、清洗、甩干后进入酸提罐，并加热至40-50℃，用酸(HCl)调节PH至3.5-4.5，保温4小时。
2)过滤
浸提后的液体，经过滤滤出残渣，取滤液进入萃取罐，滤渣进行二次浸提。
3)萃取
浸提后的液体进入萃取罐，加入萃取液，进行高分子果胶萃取，萃取后的萃取液进入压榨装置，将得高分子果胶。
4)回收萃取液
萃取液经过萃取回收装置回收，萃取液残留部分为小分子果胶和黄酮的原料液。
5)超滤Ⅰ
含有小分子果胶和黄酮的原料经过超滤滤出大于5万分子量的果胶和杂志。
6)超滤Ⅱ
选用1000分子量的起滤分离和浓缩超滤Ⅰ滤后的滤液，得到1000-5万的小分子果胶液。
实施例2
高活性小分子果胶(橘络白金)及改性柑橘果胶粉(市售)对PC-9细胞的体外抑制作用实验。
1.实验目的
高活性小分子果胶(橘络白金)及改性柑橘果胶粉(市售)对人非小细胞肺癌PC-9的体外抑制作用。
2.材料与方法
2.1 受试物：高活性小分子果胶(橘络白金)，分子量在5000-50000Da之间，中国发明专利申请(申请号CN201610531658.4，公开日：2016.12.07)公开方法获得，是一种从柑橘橘络中直接提取出的水溶性多糖；改性柑橘果胶粉(市售)用ddH2O配制成100mg/ml，灭菌后备用。
2.2 细胞株及培养条件：人非小细胞肺癌PC-9细胞由本实验室提供，用含10％胎牛血清、100U/L青霉素和100mg/L链霉素的RPMI1640培养液，于37℃、5％CO2并饱和湿度的培养箱中传代培养，取对数生长期细胞用于实验。
2.3 试剂：RPMI1640培养液为Corning Cellgro公司产品，胰蛋白酶(trypsin)为Sigma公司产品，胎牛血清为Biowest公司产品，CellTiterAQueous One SolutionReagent为Promega公司产品。
2.4 仪器：Model 3111型CO2培养箱为Thermo Fisher公司产品，Model 680型酶标仪为BioRad公司产品。
2.5 体外肿瘤细胞增殖抑制测定：取对数生长期的PC-9细胞，调整细胞悬液浓度为5×104/ml，每孔100μl细胞悬液接种于96孔细胞培养板中，接种后第二天给药(100μl/孔)，分别设空白对照组、细胞对照组以及5个浓度受试药物组。继续培养72h后，PBS洗涤两遍，每孔加入1:10稀释的CellTiterAQueous One Solution Reagent试剂110μl，37℃避光培养2h，酶标仪测定490nm处吸光度，计算受试药物对PC-9细胞的增殖抑制率，并以GraphPad Prism software(GraphPadTM Software Inc.)计算机程序拟合抑制曲线计算受试物对肿瘤细胞增殖(72h)的半数抑制浓度(IC50)。
3.结果
受试药物高活性小分子果胶及改性柑橘果胶粉(市售)对人非小细胞肺癌PC-9细胞的增殖抑制作用(表1，表2，图1，图2)及72小时半数抑制浓度IC50(Tab.3)。
表1试验材料对体外PC-9细胞的增殖抑制作用(％)
Data represent mean±SD,n＝8.
表2试验材料对体外PC-9细胞的增殖抑制作用(％)
Data represent mean±SD,n＝6.
表3试验材料在PC-9细胞中的72小时IC 50值.
4.结论
高活性小分子果胶(橘络白金)及改性柑橘果胶粉(市售)对人非小细胞肺癌PC-9细胞具有体外增殖抑制作用，同等剂量条件下高活性小分子果胶(橘络白金)对人非小细胞肺癌PC-9细胞的抑制作用略强于改性柑橘果胶粉(市售)。
实施例3
确定皮下移植人非小细胞肺癌PC-9细胞的裸小鼠连续35日经口灌胃分别给予小分子果胶口服液高剂量、中剂量、低剂量对肿瘤生长的影响，同时初步观察药物的毒副作用。
实验动物与管理
1.动物
BALB/c(nu/nu)裸小鼠，雄性，SPF级，4～6周，体重20±2g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，实验动物生产许可证：SCXK(沪)2013-0016。
2.饲养管理与环境条件
每笼6只。屏障系统饲养室温度20～25℃，相对湿度40-70％，中央空调集中通风10-20次/小时，光照12小时暗，12小时明。实验动物使用许可证：SYXK(浙)2014-0008。
3.饲料和饮水
喂饲钴60辐照的全价营养颗粒饲料，由浙江省实验动物饲料生产基地生产供应。饮水为城市饮用水经LAWS-2000实验动物反渗透纯水机处理后，装入消毒过的饮水瓶内自由饮用。供试品和对照品
供试品
1.1.小分子果胶口服液：本品为黄褐色液体，常温避光保存，由杭州络通生物科技有
限公司提供。
1.2.供试品的配制：使用前领取供试品，以超纯水配置中低浓度。
阳性对照品：顺铂，规格：20mg/瓶冻干粉，齐鲁制药有限公司。
检测仪器和设备
1.电子天平，型号BS124S，Sartorius公司，用于受试药品的称量。
2.电子天平，型号SF-400A，用于动物体重的称量。
3.超纯水仪，型号ZMQS50001，MILLIPORE公司，超纯水用于配制供试品。
给药方案
1.给药途径
经口灌胃(p.o.)，与临床给药途径一致。
2.剂量组别
3.剂量确定依据
高剂量组为受试物小分子果胶口服液(浓度1.25mg/ml，以半乳糖醛酸计)0.45ml/20g，一日给药2次，每日给药剂量为56.25mg/kg，相当于临床推荐肿瘤患者放化疗期间每日服用剂量，相当于临床推荐肿瘤患者日常调理剂量的1.5倍。中剂量组给药剂量为28.13mg/kg，低剂量组给药剂量为14.06mg/kg。
检疫
裸小鼠检疫期为48小时，期间观察裸小鼠的行为活动、精神、摄食、体重、体温等情况。
试验分组
检疫结束日为造模日期。待造模后五天对裸小鼠进行分组，分为模型对照组(6个动物)、阳性药物顺铂对照组(6个动物)和3个供试品给药组(每组6个动物)。
试验方法
收集对数生长期人非小细胞肺癌PC-9细胞，调整细胞悬液浓度1×107/ml，无菌条件下皮下注射接种于裸小鼠背部，0.2ml/只，SPF级常规饲养5天，随机分组。分别设肿瘤模型对照组、顺铂对照组、3个供试品给药组。给药组经口灌胃给药，模型对照组给予超纯水，连续给药5周，每周给药5天。顺铂对照组于分组后第9天肿瘤平均体积达到50mm3以上后开始给药，腹腔注射，每周两次。
检测指标
1.瘤径：以瘤径为主要检测指标，每3～4d测量1次，根据测量结果计算肿瘤体积和相对肿瘤体积。肿瘤体积(tumor volume,TV)，TV＝π/6×a×b2(其中a、b分别为最长径和最短径)；相对肿瘤体积(relative tumor volume,RTV)，RTV＝Vt/V0(其中V0为分组给药时d0测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积)。
2.瘤重：试验结束后处死动物，解剖剥离瘤块，称瘤重。模型对照组肿瘤平均瘤重小于1g，或20％肿瘤重量小于400mg，表示肿瘤生长不良，试验作废。根据称重结果计算肿瘤生长抑制率，肿瘤生长抑制率＝[(模型对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/模型对照组平均瘤重]×100％。肿瘤生长抑制率<40％，判断受试药物无效；肿瘤生长抑制率≥40％，并经统计学分析P<0.05，判断受试药物有效。
3.脏器指数：试验结束后处死动物，称体重，解剖后取心脏、肝脏、肺和肾脏肉眼观察可见病变，脾脏称湿重，计算脏器指数，脏器指数＝脏器湿重(g)/体重(g)*1000。
4.体重：每3～4d记录动物体重，观察受试药物对动物体重的影响。
数据统计方法
所有计量数据均表示为均数±标准误(Mean±SE)，采用SPSS Statistics 17.0软件进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析，以P<0.05认为统计学差异有显著性。
试验结果
皮下移植人非小细胞肺癌PC-9细胞的裸小鼠连续35日经口给予小分子果胶高剂量(56.25mg/kg)，对肿瘤生长具有显著抑制作用(P<0.05)，抑制率达53.9％；给予小分子果胶中剂量(28.13mg/kg)，对肿瘤生长无显著抑制作用(P>0.05)，抑制率为23.3％；给予小分子果胶口服液低剂量(14.06mg/kg)，对肿瘤生长无显著抑制作用(P>0.05)，抑制率为5.0％。详见图3、图4、图5和表4、表5、表6。
表4.小分子果胶对荷瘤裸小鼠肿瘤体积(TV,mm3)的影响
Mean±SE，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs.模型对照，t-test。
表4(续).小分子果胶对荷瘤裸小鼠肿瘤体积(TV,mm3)的影响
Mean±SE，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs.模型对照，t-test。
表5.小分子果胶对荷瘤裸小鼠相对肿瘤体积(RTV)的影响
Mean±SE，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs.模型对照，t-test。
表5(续).小分子果胶对荷瘤裸小鼠相对肿瘤体积(RTV)的影响
Mean±SE，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs.模型对照，t-test。
表6.小分子果胶对荷瘤裸小鼠皮下实体瘤的抑制作用
Mean±SE，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs.模型对照，t-test。
在本试验剂量条件下，各给药组裸小鼠体重与模型对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。
试验结束，剖检所有试验小鼠，各脏器未发现任何肉眼可见的异常病变，所有给药组裸小鼠
脾脏湿重指数与模型对照组相比无显著性差异(P>0.05)。详见表7、表8。
表7.小分子果胶对荷瘤裸小鼠脾脏指数的影响
Mean±SE，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs.模型对照，t-test。
表8.小分子果胶对荷瘤裸小鼠体重的影响
Mean±SE，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs.模型对照，t-test。
表8(续).小分子果胶对荷瘤裸小鼠体重的影响
Mean±SE，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs.模型对照，t-test。
试验结论
皮下移植人非小细胞肺癌PC-9细胞的裸小鼠连续35日经口给予小分子果胶口服液高剂量(56.25mg/kg)，对肿瘤生长具有显著抑制作用(P<0.05)，抑制率达53.9％；给予小分子果胶中剂量(28.13mg/kg)，对肿瘤生长无显著抑制作用(P>0.05)，抑制率为23.3％；给予小分子果胶口服液低剂量(14.06mg/kg)，对肿瘤生长无显著抑制作用(P>0.05)，抑制率为5.0％。小分子果胶口服液对人非小细胞肺癌PC-9细胞裸小鼠皮下移植瘤生长的抑制作用具有剂量依赖性，无明显毒副作用。
Claims (6)
1.一种柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于制备治疗非小细胞肺癌的药物中的应用，所述的新型小分子果胶为柑橘橘络提取物中物理分离制备的小分子果胶。
2.权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的小分子果胶的摩尔质量为50000Da以下。
3.权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的小分子果胶的摩尔质量1000-50000Da之间。
4.一种柑橘橘络提取的新型小分子果胶用于制备抑制非小细胞肺癌的食品或保健品中的应用，所述的新型小分子果胶为柑橘橘络提取物中物理分离制备的小分子果胶。
5.权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的小分子果胶的摩尔质量为50000Da以下。
6.权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的小分子果胶的摩尔质量1000-50000Da之间。
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|---|---|
| CN (1) | CN106913667A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107467428A (zh) * | 2017-08-16 | 2017-12-15 | 杭州络通生物科技有限公司 | 一种食用的橘络提取果胶饮料的配方及其制备方法 |
| CN110893191A (zh) * | 2018-09-12 | 2020-03-20 | 复旦大学 | 低分子果胶在制备脑胶质瘤的辅助治疗药物或试剂中的用途 |
| CN111632202A (zh) * | 2020-06-29 | 2020-09-08 | 南开大学 | 肿瘤细胞粘附材料及其制备方法和应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102085214A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-06-08 | 范晓青 | 低分子柑橘果胶联和临床常用化疗药用于控制癌症和癌症转移扩散 |
| CN106188335A (zh) * | 2016-06-29 | 2016-12-07 | 高海峰 | 柑橘罐头加工工艺中同步提取果胶及多酚的方法与系统 |
-
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102085214A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-06-08 | 范晓青 | 低分子柑橘果胶联和临床常用化疗药用于控制癌症和癌症转移扩散 |
| CN106188335A (zh) * | 2016-06-29 | 2016-12-07 | 高海峰 | 柑橘罐头加工工艺中同步提取果胶及多酚的方法与系统 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 乔孟晗: "MMP-9、Galectin-3和VEGF在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究", 《万方学位》 * |
| 络通橘络白金: "肺癌要不要手术", 《百度快照》 * |
| 赵光日等: "顺铂联合低分子柑橘果胶对肺癌细胞增殖与凋亡的影响", 《广西医学》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107467428A (zh) * | 2017-08-16 | 2017-12-15 | 杭州络通生物科技有限公司 | 一种食用的橘络提取果胶饮料的配方及其制备方法 |
| CN110893191A (zh) * | 2018-09-12 | 2020-03-20 | 复旦大学 | 低分子果胶在制备脑胶质瘤的辅助治疗药物或试剂中的用途 |
| CN111632202A (zh) * | 2020-06-29 | 2020-09-08 | 南开大学 | 肿瘤细胞粘附材料及其制备方法和应用 |
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