CN106834203A - 一种昆虫细胞培养基 - Google Patents

一种昆虫细胞培养基 Download PDF

Info

Publication number
CN106834203A
CN106834203A CN201611210551.6A CN201611210551A CN106834203A CN 106834203 A CN106834203 A CN 106834203A CN 201611210551 A CN201611210551 A CN 201611210551A CN 106834203 A CN106834203 A CN 106834203A
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
insect cell
cell
cell medium
medium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201611210551.6A
Other languages
English (en)
Inventor
严志海
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201611210551.6A priority Critical patent/CN106834203A/zh
Publication of CN106834203A publication Critical patent/CN106834203A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0601—Invertebrate cells or tissues, e.g. insect cells; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/05—Inorganic components
    • C12N2500/10—Metals; Metal chelators
    • C12N2500/20—Transition metals
    • C12N2500/22—Zinc; Zn chelators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/32—Amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/34—Sugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/35—Polyols, e.g. glycerin, inositol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/36—Lipids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/38—Vitamins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/74—Undefined extracts from fungi, e.g. yeasts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/998—Proteins not provided for elsewhere

Landscapes

  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于体外细胞培养技术领域，涉及一种昆虫细胞培养基。本发明昆虫细胞培养基包含：碳水化合物，氨基酸，无机盐，维生素，酵母提取物，水解乳蛋白，胆固醇，亚油酸，苹果酸，延胡索酸，大豆磷脂，谷氨酰胺，腐胺和甘油0.1‑1g/L。本发明昆虫细胞培养基，各成分搭配科学，能够有效延长昆虫细胞的生存时间，有利于细胞在长时间的不更换培养基的条件下，仍能拥有充足的营养，保持代谢平衡；此外本培养基所含成分种类少，配制简单，成本低。

Description

一种昆虫细胞培养基
技术领域
本发明属于体外细胞培养技术领域，涉及一种昆虫细胞培养基。
背景技术
细胞培养是将细胞在体外进行繁殖和培养，该工作始于20世纪初，现在已经成为生物学和医学研究领域中不可缺少的工具，并发展成为重要的基础科学之一。
在最近10年里，无脊椎动物细胞和组织培养在细胞和分子生物学基础研究中发挥了越来越重要的作用，应用杆状病毒表达载体，昆虫培养细胞作为宿主的真核表达系统已被广泛应用于生产外源蛋白质，特别是成功表达了大量的具有很高医药价值的活性蛋白质之后，备受人们青睐。
近年来，无血清细胞培养技术发展迅速，已报导有多种细胞株系在相应的无血清培养基中生长和增殖获得成功，Sigma－Aldrich公司开发出适用于Sf9和Sf21细胞系长期培养的420和Titer HighTMMedium且都是完全培养基，使用时无需添加其他成分，而其生产的EX-CELLTM405和Hyclone的HyQ SFX－Insect则更适于High Five细胞系的长期培养。
中国专利CN101988047B公布了一种低成本的昆虫细胞无血清培养基，所述无血清培养基包含5～10g/L碳水化合物、40～60g/L氨基酸、50～100g/L无机盐、0.01～0.1g/L维生素、12-20g/L的酵母提取物以及20-40ml/L的化学限定脂质混合物，该发明的培养基较目前的商用无血清培养基具有更低的成本。
尽管目前已有诸多商品化昆虫无血清培养基，但是细胞在无血清培养基中从几代到十几代不等，都会逐渐出现衰退、老化或死亡等现象，因而每种无血清培养基都有各自的特点和局限性，还需进一步优化完善。
发明内容
本发明的一个目的在于提供克服现有技术的缺陷，提供一种具有适应多种细胞长时间生长的细胞培养基，同时培养基可以以较低成本获得。
本发明通过以下技术方案实现：
一种昆虫细胞培养基，所述昆虫细胞培养基包含：碳水化合物20-50g/L，氨基酸10-30g/L，无机盐20-45g/L，维生素0.12-1g/L，酵母提取物10-30g/L，水解乳蛋白3-10g/L，胆固醇1-20mL/L，亚油酸1-10mL/L，苹果酸0.4-1.8g/L，延胡索酸0.1-0.8g/L，大豆磷脂0.1-20g/L，谷氨酰胺0.1-1g/L，腐胺0.1-10g/L和甘油0.1-1g/L；
所述氨基酸包括：精氨酸1.32-5.36g/L，亮氨酸1.0-2.56g/L，异亮氨酸0.1-2.42g/L，天冬氨酸2.45-4.27g/L，谷氨酸0.29-125g/L，赖氨酸0.1-3.67g/L，苏氨酸0.46-164g/L，脯氨酸0.19-0.95，甘氨酸0.02-0.65g/L，苯丙氨酸1.38-5.35g/L和蛋氨酸1.38-6.69g/L；
所述维生素包括：尼克酰胺0.10-0.58mg/L，吡哆醇0.25-1.38mg/L，泛酸0.23-2.41mg/L，生物素0.35-0.78mg/L和核黄素0.1-0.56mg/L；
所述无机盐包括：氯化铝0.5-1.3g/L，氯化钠2.6-5.2g/L，氯化钾0.3-0.8g/L，硫酸锌0.1-0.36g/L和碳酸氢钠0.25-0.35g/L。
优选地，所述碳水化合物包括葡萄糖、果糖、麦芽糖和乳糖一种或两种以上。
优选地，所述昆虫细胞培养基由以下成分组成：果糖33g/L，酵母提取物15g/L，水解乳蛋白8g/L，胆固醇13mL/L，亚油酸7mL/L，苹果酸1.69g/L，延胡索酸0.63g/L，大豆磷脂16g/L，谷氨酰胺0.8g/L，腐胺1.6g/L，甘油0.7g/L，精氨酸2.46g/L，亮氨酸1.35g/L，异亮氨酸1.78g/L，天冬氨酸3.56g/L，谷氨酸0.97g/L，赖氨酸2.98g/L，苏氨酸1.03g/L，脯氨酸0.83g/L，甘氨酸0.54g/L，苯丙氨酸4.63g/L，蛋氨酸3.21g/L，尼克酰胺0.44mg/L，吡哆醇0.89mg/L，泛酸1.03mg/L，生物素0.52mg/L，核黄素0.39mg/L，氯化铝0.87g/L，氯化钠3.68g/L，氯化钾0.56g/L，硫酸锌0.27g/L，碳酸氢钠0.28g/L。
本发明培养基中，碳水化合物为昆虫生长提供了充足的能源，所选氨基酸种类不仅能够满足昆虫细胞长期生长代谢所需，并且合理分配各氨基酸添加量，有利于促进细胞的生长和功能蛋白的表达。所选无机盐，满足了昆虫细胞生长所需的较高渗透压，各无机盐成分相互作用，可以使细胞培养基中pH保持稳定。酵母提取物，水解蛋白为细胞提供氨基酸、多肽等营养物质，胆固醇、亚油酸和大豆磷脂复合后主要提供细胞生长所需的脂类物质。腐胺除了能够维持培养基pH 之外，还能促进细胞的代谢。甘油作为一种多聚物保护剂，能够保护细胞免受剪切力损伤和降低细胞结团。
本发明昆虫细胞培养基制备方法并不是关键性的。例如，培养基可以通过下面所述方法制得，即将所有成分及附加物先以各自的合适浓度溶解于水，然后加压使溶液通过一个薄膜滤器过滤而制得无菌的培养基。
本发明昆虫细胞培养基组成成分中，本发明所用均购于sigma公司。
本发明昆虫细胞培养基，各成分搭配科学，能够有效延长昆虫细胞的生存时间，有利于细胞在长时间的不更换培养基的条件下，仍能拥有充足的营养，保持代谢平衡；此外本培养基所含成分种类少，配制简单，成本低。
本发明与现有技术相比，本发明具有以下技术优点：
1.本发明昆虫细胞培养基能够维持昆虫细胞较长时间的高活力生存，有效改善现有昆虫细胞在无血清培养中逐渐出现的衰退、老化或死亡等现象。
2.本发明昆虫细胞培养基所含成分种类少，配制简单，成本低。
附图说明
图1：HighFive细胞在不同培养基上的生长曲线；A，HighFive细胞在对比例1培养基中生长曲线；B，HighFive细胞在实施例1培养基中生长曲线；C，HighFive细胞在实施例2培养基中生长曲线；D：HighFive细胞在实施例3培养基中生长曲线。
具体实施例
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。
实施例1
一种昆虫细胞培养基由以下成分及份数组成：
麦芽糖20g/L、酵母提取物10g/L、水解乳蛋白3g/L，胆固醇1ml/L，亚油酸1ml/L，苹果酸0.4g/L，延胡索酸0.1g/L，大豆磷脂0.1g/L，谷氨酰胺0.1g/L，腐胺0.1g/L和甘油0.1g/L。
氨基酸组成，如下表1所示：
表1培养基中氨基酸组成
精氨酸 1.32g/L
亮氨酸 1.0g/L
异亮氨酸 0.1g/L
天冬氨酸 2.45g/L
谷氨酸 0.29g/L
赖氨酸 0.1g/L
苏氨酸 0.46g/L
脯氨酸 0.19-0.95g/L
甘氨酸 0.02g/L
苯丙氨酸 1.38g/L
蛋氨酸 1.38g/L
维生素组成，如表2所示：
表2培养基中维生素组成
尼克酰胺 0.10mg/L
吡哆醇 0.25mg/L
泛酸 0.23mg/L
生物素 0.35mg/L
核黄素 0.1-0.56mg/L
无机盐组成，如表3所示：
表3培养基中无机盐组成
氯化铝 0.5g/L
氯化钠 2.6g/L
氯化钾 0.3g/L
硫酸锌 0.1g/L
碳酸氢钠 0.25g/L
实施例2
一种昆虫细胞培养基由以下成分及份数组成：
葡萄糖50g/L、酵母提取物30g/L、水解乳蛋白10g/L，胆固醇20ml/L，亚油酸1ml/L，苹果酸1.8g/L，延胡索酸0.8g/L，大豆磷脂0.1g/L，谷氨酰胺0.1g/L，腐胺0.1g/L和甘油0.1g/L。
氨基酸组成，如下表4所示：
表4培养基中氨基酸组成
精氨酸 5.36g/L
亮氨酸 2.56g/L
异亮氨酸 2.42g/L
天冬氨酸 4.27g/L
谷氨酸 1.25g/L
赖氨酸 3.67g/L
苏氨酸 1.64g/L
脯氨酸 0.95g/L
甘氨酸 0.65g/L
苯丙氨酸 5.35g/L
蛋氨酸 6.69g/L
维生素组成，如表5所示：
表5培养基中维生素组成
尼克酰胺 0.58mg/L
吡哆醇 1.38mg/L
泛酸 2.41mg/L
生物素 0.78mg/L
核黄素 0.56mg/L
无机盐组成，如表6所示：
表6培养基中无机盐组成
实施例3
一种昆虫细胞培养基由以下成分及份数组成：
果糖33g/L、酵母提取物15g/L、水解乳蛋白8g/L，胆固醇13ml/，亚油酸7ml/L，苹果酸1.69g/L，延胡索酸0.63g/L，大豆磷脂16g/L，谷氨酰胺0.8g/L，腐胺1.6g/L和甘油0.7g/L。
氨基酸组成，如下表7所示：
表7培养基中氨基酸组成
精氨酸 2.46g/L
亮氨酸 1.35g/L
异亮氨酸 1.78g/L
天冬氨酸 3.56g/L
谷氨酸 0.97g/L
赖氨酸 2.98g/L
苏氨酸 1.03g/L
脯氨酸 0.83g/L
甘氨酸 0.54g/L
苯丙氨酸 4.63g/L
蛋氨酸 3.21g/L
维生素组成，如表8所示：
表8培养基中维生素组成
尼克酰胺 0.44mg/L
吡哆醇 0.89mg/L
泛酸 1.03mg/L
生物素 0.52mg/L
核黄素 0.39mg/L
无机盐组成，如表9所示：
表9培养基中无机盐组成
氯化铝 0.87g/L
氯化钠 3.68g/L
氯化钾 0.56g/L
硫酸锌 0.27g/L
碳酸氢钠 0.28g/L
对比例1
一种昆虫细胞培养基由以下成分及份数组成：
果糖33g/L、酵母提取物15g/L、水解乳蛋白8g/L，胆固醇13ml/，亚油酸7ml/L，硫酸锌0.27g/L，苹果酸2.32g/L，大豆磷脂16g/L，谷氨酰胺0.8g/L，腐胺1.6g/L和甘油0.7g/L。
氨基酸组成，如下表10所示：
表10培养基中氨基酸组成
精氨酸 2.46g/L
亮氨酸 1.35g/L
异亮氨酸 1.78g/L
天冬氨酸 3.56g/L
谷氨酸 0.97g/L
赖氨酸 2.98g/L
苏氨酸 1.03g/L
脯氨酸 0.83g/L
甘氨酸 0.54g/L
苯丙氨酸 4.63g/L
蛋氨酸 3.21g/L
维生素组成，如表11所示：
表11培养基中维生素组成
无机盐组成，如表12所示：
表12培养基中无机盐组成
氯化铝 0.87g/L
氯化钠 3.68g/L
氯化钾 0.56g/L
碳酸氢钠 0.28g/L
与实施例3的区别在于没有添加延胡索酸，而增加了苹果酸的用量。
试验例1、细胞生长曲线的测定
1.试验对象：实施例1-3和对比例1制备得到的培养基
2.试验方法：
将High Five细胞均培养于27℃生化培养箱中，细胞分为四组，分别对应实施例1、2、3及对比例1制得的培养基。利MTT法测定细胞生长曲线：
(1)制备1mL细胞悬液。空白对照以1mL培养基代替细胞悬液。加入0.1mLMTT于37℃孵育4h，使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。
(2)加1mL DTW脱色液，37℃至少静置30min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解。
(3)吸取200μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD值，检测波长570nm，参考波长630nm。
(4)每隔24h测量一个点，每个点为3个平行样品的平均值。
3.试验结果：
High Five细胞生长曲线测定结果如图1所示，由生长曲线可以看出，High Five细胞在实施例培养基中达到平顶期的时间均比对比例1短，平顶期最大细胞密度均高于对比例1，并且稳定期比对比例1培养基中培养的细胞平顶期长，因此本发明培养基比商业化的培养基更有利于昆虫细胞的生长，并且能够延长细胞的生长。
本发明未详细阐述部分属于本领域公知技术。
尽管前述的发明通过说明和实施例为阐明和理解目的已经相当详细地作了描述，但是很显然在所附的权利要求书的范围内仍然会有某些改变和更改。例如，在实施例一中提出的单独成分的相对量可由本领域的技术人员依照感兴趣的特定细胞系的特定需要而作修改，该需要对本领域的技术人员而言是熟知且易于利用的。通常，在实施例一中列举的特定的量可以在高约50％的范围内变动，更优选地，是在高约20％的范围内。

Claims (3)

1.一种昆虫细胞培养基，其特征在于，所述昆虫细胞培养基包含：碳水化合物20-50g/L，氨基酸10-30g/L，无机盐20-45g/L，维生素0.12-1g/L，酵母提取物10-30g/L，水解乳蛋白3-10g/L，胆固醇1-20mL/L，亚油酸1-10mL/L，苹果酸0.4-1.8g/L，延胡索酸0.1-0.8g/L，大豆磷脂0.1-20g/L，谷氨酰胺0.1-1g/L，腐胺0.1-10g/L和甘油0.1-1g/L；
所述氨基酸包括：精氨酸1.32-5.36g/L，亮氨酸1.0-2.56g/L，异亮氨酸0.1-2.42g/L，天冬氨酸2.45-4.27g/L，谷氨酸0.29-125g/L，赖氨酸0.1-3.67g/L，苏氨酸0.46-164g/L，脯氨酸0.19-0.95，甘氨酸0.02-0.65g/L，苯丙氨酸1.38-5.35g/L和蛋氨酸1.38-6.69g/L；
所述维生素包括：尼克酰胺0.10-0.58mg/L，吡哆醇0.25-1.38mg/L，泛酸0.23-2.41mg/L，生物素0.35-0.78mg/L和核黄素0.1-0.56mg/L；
所述无机盐包括：氯化铝0.5-1.3g/L，氯化钠2.6-5.2g/L，氯化钾0.3-0.8g/L，硫酸锌0.1-0.36g/L和碳酸氢钠0.25-0.35g/L。
2.根据权利要求1所述的昆虫细胞培养基，其特征在于，所述碳水化合物包括葡萄糖、果糖、麦芽糖和乳糖一种或两种以上。
3.根据权利要求1或2所述的昆虫细胞培养基，其特征在于，所述昆虫细胞培养基由以下成分组成：果糖33g/L，酵母提取物15g/L，水解乳蛋白8g/L，胆固醇13mL/L，亚油酸7mL/L，苹果酸1.69g/L，延胡索酸0.63g/L，大豆磷脂16g/L，谷氨酰胺0.8g/L，腐胺1.6g/L，甘油0.7g/L，精氨酸2.46g/L，亮氨酸1.35g/L，异亮氨酸1.78g/L，天冬氨酸3.56g/L，谷氨酸0.97g/L，赖氨酸2.98g/L，苏氨酸1.03g/L，脯氨酸0.83g/L，甘氨酸0.54g/L，苯丙氨酸4.63g/L，蛋氨酸3.21g/L，尼克酰胺0.44mg/L，吡哆醇0.89mg/L，泛酸1.03mg/L，生物素0.52mg/L，核黄素0.39mg/L，氯化铝0.87g/L，氯化钠3.68g/L，氯化钾0.56g/L，硫酸锌0.27g/L，碳酸氢钠0.28g/L。
CN201611210551.6A 2016-12-24 2016-12-24 一种昆虫细胞培养基 Pending CN106834203A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611210551.6A CN106834203A (zh) 2016-12-24 2016-12-24 一种昆虫细胞培养基

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611210551.6A CN106834203A (zh) 2016-12-24 2016-12-24 一种昆虫细胞培养基

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106834203A true CN106834203A (zh) 2017-06-13

Family

ID=59136450

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611210551.6A Pending CN106834203A (zh) 2016-12-24 2016-12-24 一种昆虫细胞培养基

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106834203A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110564670A (zh) * 2019-09-04 2019-12-13 广州今成生物科技有限公司 一种昆虫细胞无血清培养基及其制备工艺
CN114250191A (zh) * 2020-09-23 2022-03-29 上海倍谙基生物科技有限公司 适用于昆虫细胞高密度培养和产物高表达的无血清培养基

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104593316A (zh) * 2015-02-02 2015-05-06 苏州市沃美生物技术有限公司 昆虫细胞无血清培养基及其应用
CN105255810A (zh) * 2015-11-09 2016-01-20 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合昆虫细胞Sf-9的无血清无动物源培养基
CN105861415A (zh) * 2016-04-12 2016-08-17 北京瑞鹰生物技术有限公司 用于昆虫细胞悬浮培养的无血清培养基及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104593316A (zh) * 2015-02-02 2015-05-06 苏州市沃美生物技术有限公司 昆虫细胞无血清培养基及其应用
CN105255810A (zh) * 2015-11-09 2016-01-20 内蒙古金源康生物工程有限公司 一种适合昆虫细胞Sf-9的无血清无动物源培养基
CN105861415A (zh) * 2016-04-12 2016-08-17 北京瑞鹰生物技术有限公司 用于昆虫细胞悬浮培养的无血清培养基及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
马伟等: "昆虫细胞无血清培养基研究进展", 《动物医学进展》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110564670A (zh) * 2019-09-04 2019-12-13 广州今成生物科技有限公司 一种昆虫细胞无血清培养基及其制备工艺
CN114250191A (zh) * 2020-09-23 2022-03-29 上海倍谙基生物科技有限公司 适用于昆虫细胞高密度培养和产物高表达的无血清培养基
CN114250191B (zh) * 2020-09-23 2023-03-24 上海倍谙基生物科技有限公司 适用于昆虫细胞高密度培养和产物高表达的无血清培养基

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Zhou et al. Dead cell counts during serum cultivation are underestimated by the fluorescent live/dead assay
ES2947168T3 (es) Cultivo celular tridimensional
CN105087465B (zh) 肝细胞无血清培养基
CN109762782B (zh) 一种促间充质干细胞生长的培养基及其制备方法
CN109153968A (zh) 从生物流体样品中分离细胞外囊泡（ev）
CN106834203A (zh) 一种昆虫细胞培养基
CN110951681A (zh) 一种间充质干细胞培养基
AU2013403887A1 (en) Method for differentiating pluripotent stem cell induced from mesenchymal stem cell into neuron
CN105548321A (zh) 一种鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的方法
CN110734893B (zh) 含维生素c的促进脐带间充质干细胞增殖的培养基
CN113755441B (zh) 一种肺癌微肿瘤细胞模型的培养方法
KR102428120B1 (ko) 신규 줄기세포 배양용 조성물
CN111748522A (zh) 一种干细胞培养基及其应用
US20230146066A1 (en) Stem cell medium and stem cell culturing method
CN111544369B (zh) 一种面部美容组合物及其制备方法
CN112779220B (zh) 一种用于神经干细胞扩增的培养基
CN105087475A (zh) 一种细胞培养液及其应用以及诱导牙髓干细胞向神经样细胞分化的方法
Winfield et al. Postnatal development of the synaptic organisation of the lateral geniculate nucleus in the kitten with unilateral eyelid closure
WO2016143808A1 (ja) スフェロイドの作製方法及び該方法に用いる培地
JP6057418B2 (ja) 人工多能性幹細胞から分化した肝細胞を含む細胞群から、肝細胞からなる細胞培養物を得る方法
CN112899222A (zh) 高效的细胞无血清培养基体系及其细胞分泌物的应用
CN113881621B (zh) 胚胎干细胞培养基及其制备方法和应用
CN106244526B (zh) 心肌分化试剂盒及心肌细胞的培养方法
CN111919835B (zh) 维持红细胞活性的保存液
CN112359011B (zh) 培养基补充剂、培养基补充组合物、培养基及培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20170613

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication