CN106755294A - 一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途 - Google Patents

一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途 Download PDF

Info

Publication number
CN106755294A
CN106755294A CN201610989386.2A CN201610989386A CN106755294A CN 106755294 A CN106755294 A CN 106755294A CN 201610989386 A CN201610989386 A CN 201610989386A CN 106755294 A CN106755294 A CN 106755294A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tcpc
real
quantitative pcr
detection
dna
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610989386.2A
Other languages
English (en)
Inventor
潘建平
方洁
张大勇
李雨涵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University City College ZUCC
Original Assignee
Zhejiang University City College ZUCC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University City College ZUCC filed Critical Zhejiang University City College ZUCC
Priority to CN201610989386.2A priority Critical patent/CN106755294A/zh
Publication of CN106755294A publication Critical patent/CN106755294A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于生物技术领域，尤其涉及表达tcpC基因的尿路致病大肠埃希菌的检测技术。一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途，本发明根据GenBank提供的tcpCDNA序列设计的特异引物和TaqMan探针，在特定的实时荧光定量PCR反应体系中，绘制出大肠埃希菌DNA浓度与Ct之间的标准曲线，将检验样品进行荧光定量PCR检测，根据标准曲线测得检验样品的DNA浓度。通过采用实时荧光定量PCR检测方法，能够高效、快速、特异、灵敏、稳定地检测出表达tcpC基因的尿路致病大肠埃希菌。应用本发明可快速检测临床尿路感染的病原体，为医生和患者降低时间和经济成本。

Description

一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及表达tcpC基因的尿路致病大肠埃希菌的检测技术。
技术背景
泌尿道感染是临床最常见的感染性疾病之一，据估计，在西欧国家每年有超过1000万的人患尿路感染，在美国，尿路感染患者每年的医疗费用大约为16亿到25亿美元。女性发病率明显高于男性，每个女性一生中平均会患有症状性泌尿系感染1～3次。男性则在50岁以后由于前列腺增生高发此病。尿路感染主要由细菌自尿道上行所致，易复发。许多病人对此类疾病相关知识欠缺，重视不够，疾病得不到规范彻底的治疗，感染反复持久发作，易引起急性肾盂肾炎、肾脓肿、泌尿系结石、肾功能损伤，甚至肾功能衰竭等。有研究表明，死于尿毒症的患者中，大约有1/3是由慢性肾盂肾炎引起的。统计资料表明导致泌尿道感染的病原菌85%以上为大肠埃希菌（Escherichia coli）。这类大肠杆菌可特异性地粘附、定植于人泌尿道粘膜上皮细胞，进而引起尿道上行性感染，被称为尿路致病性大肠埃希菌（Uropathogenic E. coli i, UPEC）。大多数尿路致病大肠埃希菌菌株能分泌一种含有Toll/interleukin-1 receptor（TIR）结构域的蛋白（TIR domain-containing proteins，TcpC），TcpC能抑制巨噬细胞的吞噬和杀菌功能，是尿路致病大肠埃希菌重要的毒力因子，在肾盂肾炎的发生中发挥重要作用。
如前所述，如何快速准确的测定尿路致病大肠埃希菌成为泌尿道感染诊断和治疗的关键。目前，临床上有一些方法已经被运用于尿路致病大肠埃希菌检测中，例如细菌的分离鉴定、全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测、PCR、PCR-ELISA等，这些不同的方法都有其各自的优缺点和使用范围，但目前还没有一个国际公认的快速检测尿路致病大肠埃希菌的标准方法。为此，建议一种快速、高效、精确的尿路致病大肠埃希菌检测方法成为临床亟待解决的问题。而本发明建立的检测tcpC的实时荧光定量PCR检测法，为临床快速检测表达tcpC的尿路致病大肠埃希菌打下基础。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种用于tcpC实时定量PCR检测的特异引物和TaqMan探针，本发明的第二个目的是提供采用上述的特异引物和TaqMan探针的PCR反应体系和PCR方法，本发明的第三个目的是提供一种用于tcpC实时定量PCR检测的目标产物基因。本发明的方法可以快速、高效、特异、敏感的表达tcpC的尿路致病大肠埃希菌。
为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种用于tcpC实时定量PCR检测的特异引物和TaqMan探针，
特异引物：上游引物F：5’-CCACTGGTAGACGAGTTA-3’，下游引物R：5’-GCCTAAATCAATATTTCTCCTTAA-3’；
TaqMan探针：5’-（FAM）TTCAAGTGTCTGTTCATCATACCAA（Eclipse）-3’。
为了实现上述的第二个目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种用于tcpC实时定量PCR检测的PCR反应体系，25μL反应体系包括：
PrimeScript 1 step Enzyme Mix反转录酶 1.0μL
2× 1 step buffer缓冲液 12.5μL
上述的上游引物F 0.5μL
上述的下游引物R 0.5μL
上述TaqMan探针 0.5μL
模板/样品 2.0μL；
上述的上游引物F、下游引物R浓度分别为250nM，
镁离子浓度5.5mM，
反应体系单价离子浓度100mM。
一种用于tcpC实时定量PCR检测的PCR方法，该方法将上述的反应体系加无菌去离子水至反应总体积25μL，小心放入7500仪器，记录好被检样品、阳性对照及阴性对照，设置反应程序，循环参数为：94.0℃预变性5min，1个循环；94.0℃变性30s，56℃退火30s， 40个循环。
为了实现上述的第三个目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种用于tcpC实时定量PCR检测的目标产物基因，该目标产物基因的核苷酸序列表如SEQ ID NO:1所示。
本发明根据GenBank提供的tcpCDNA序列设计的特异引物和TaqMan探针，在特定的实时荧光定量PCR反应体系中，绘制出大肠埃希菌DNA浓度与Ct之间的标准曲线，将检验样品进行荧光定量PCR检测，根据标准曲线测得检验样品的DNA浓度。
本发明tcpC实时定量PCR检测方法，能成功检测大肠埃希菌UPEC CFT073，其线性范围为5*102~5*10-2ng/μL，可以同时检测96 个样品，检测时间约1~2h，并可以对起始模板准确定量。检测结果直观，能将表达tcpC的大肠埃希菌与其它肠道细菌进行区分，有较高的灵敏度、特异性、稳定性和重复性，为临床早期快速诊断表达tcpC的尿路致病大肠埃希菌所致肾盂肾炎等尿路感染及败血症等并发症打下了基础。
附图说明
图1 是本发明的大肠埃希菌UPEC CFT073 real-time PCR标准曲线。
图2 是本发明的大肠埃希菌UPEC CFT073 real-time PCR标准曲线扩增曲线。
图3 是本发明的大肠埃希菌UPEC CFT073 real-time PCR特异性扩增曲线。
图4 是本发明的大肠埃希菌UPEC CFT073 real-time PCR灵敏度试验扩增曲线。
图5 是本发明的大肠埃希菌UPEC CFT073 real-time PCR批内可重复性试验扩增曲线。
图6 是本发明的大肠埃希菌UPEC CFT073 real-time PCR批间可重复性试验扩增曲线。
图7 是本发明的大肠埃希菌UPEC CFT073 real-time PCR回收率试验扩增曲线。
具体实施方式
以下结合附图和实施例作进一步的说明。
1.引物、探针的设计与合成
采用实时荧光定量PCR探针设计软件Beacon Designer 7.8及Primer Express 3.0设计特异引物及探针。
上游引物F：5’-CCACTGGTAGACGAGTTA-3’，长度：18bp，position 562，Tm值：61.7。
下游引物R：5’-GCCTAAATCAATATTTCTCCTTAA-3’，长度：24bp，position 660，Tm值：61.1。
荧光探针P：5’-（FAM）TTCAAGTGTCTGTTCATCATACCAA（Eclipse）-3’，长度：25bp，position 624，Tm值：66.9 。
产物Product：
CCACTGGTAGACGAGTTAAATAGACTTGGTGTAATTATTTGGTATGATGAACAGACACTTGAAGTCGGCGATAGCTTAAGGAGAAATATTGATTTAGGC，长度：99bp。
该探针为TaqMan探针，5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为Eclipse，扩增目的片段的长度为99bp。引物和探针均由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。使用前用灭菌超纯水配成浓度为100mM，-20℃保存备用。
2.实时荧光定量PCR反应体系
反应条件：
引物浓度 250nM
镁离子浓度5.5mM
反应体系单价离子浓度100mM
荧光定量PCR 25μL反应体系包括：
PrimeScript 1 step Enzyme Mix反转录酶 1.0μL
2× 1 step buffer缓冲液 12.5μL
Upstream Primer上游引物F-1 0.5μL
Downstream Primer下游引物R-1 0.5μL
Template探针P-1 0.5μL
模板/样品 2.0μL
加无菌去离子水至反应总体积25μL。小心放入7500仪器，记录好被检样品、阳性对照及阴性对照，设置反应程序。
循环参数为：94.0℃预变性5min，1个循环；94.0℃变性30s，56℃退火30s， 40个循环。荧光信号的收集及数据的采集定在56℃，根据荧光曲线和Ct值判断结果。
3.模板DNA制备
样品直接热裂解法：取菌液l00μL隔水煮沸20min，取出立即置于冰上，以12000rad/min的速度离心5min，取出所得上清液，加入500μL无水乙醇混匀，12000rad/min离心10min，弃去上清液，入烘干箱烘干，再加入100μL无菌去离子水，所得液体即为所需DNA样品。
4.标准曲线的制备
复苏UPEC CFT073菌株，37±1℃培养48h，取适量菌种置于LB液体培养基中在37±1℃摇床上培养8h。将该UPEC CFT073培养物充分混匀，提取细菌基因组DNA，并测定其浓度。将原液进行10倍梯度稀释，将浓度在5*102~5*10-2ng/μL 5个梯度用于标准曲线的制备，荧光定量PCR扩增时每个梯度模板重复2次，最后选择阴性对照以灭菌超纯水代替。
荧光定量PCR扩增的同时PCR仪自动绘出标准曲线，横坐标为提取DNA浓度值，纵坐标为循环阈值Ct值，斜率为-3.017，截距为14.189。从标准曲线得出DNA浓度值x与循环阈值Ct之间的线性关系曲线表达式为Ct=-3.017x + 14.189，根据该表达式测算出所测样中DNA浓度值与Ct的相关性。由标准曲线得知，所建立的荧光定量PCR的相关系数为R2=0.995，表明建立的荧光定量PCR方法误差极小，符合大肠埃希菌基因tcpC检测要求。
5.特异性试验
复苏表皮葡萄球菌（ATCC8799）、金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、痢疾杆菌（CMCC51252）、变形杆菌（ATCC6380）、空肠弯曲菌（ATCC33291）、粪链球菌（ATCC29212）、大肠埃希菌（UPECCFT073、DH5α、BL21）、白假丝酵母菌（ATCC76615）等菌株，将菌株培养物提取基因组DNA，作为荧光定量PCR模板，检测该方法的特异性。除大肠埃希菌UPEC CFT073能特异性出现S型扩增曲线，呈现阳性；而其他细菌均无反应，表明此方法的特异性很好。
6.灵敏性试验
复苏UPEC CFT073菌株，37±1℃培养48h，取适量菌种置于LB液体培养基中在37±1℃摇床上培养8h。将该UPEC CFT073培养物充分混匀，提取细菌基因组DNA，并测定其浓度。将已知浓度的DNA样品进行10倍梯度稀释，选择浓度在5*l00~5*l0-6 ng/μL 7个梯度的模板DNA进行荧光定量PCR扩增，确定其灵敏度。在荧光定量PCR方法中，模板的起始浓度越低，Ct值越大，当Ct值大于38时，定量结果被认为是不确切的。实验结果所示，PCR法检测细菌DNA提取物时，其最低可检测到5*l0-4 ng/μL。
表1大肠埃希菌UPEC CFT073探针荧光定量PCR灵敏性检测
7.重复性试验
批内重复性试验：复苏UPEC CFT073菌株，37±1℃培养48h，取适量菌种置于LB液体培养基中在37±1℃摇床上培养8h。将该UPEC CFT073培养物充分混匀，提取细菌基因组DNA，并测定其浓度。将已知浓度的DNA样品进行10倍梯度稀释，选择浓度在5*l01~5*l0-4 ng/μL6个梯度的模板DNA进行荧光定量PCR扩增，每一个浓度的DNA重复2次，以观察Ct值之间的误差。结果显示荧光定量PCR检测这5种不同浓度DNA提取物的循环数差值(△Ct)均小于0.8，标准差在0.131~0.788之间，变异系数在0.63%~2.92%之间，说明重复性好。
表2大肠埃希菌UPEC CFT073探针荧光定量PCR批内可重复性检测结果
批间重复性试验：复苏两批UPEC CFT073菌株，分别37±1℃培养48h，取适量菌种置于LB液体培养基中在37±1℃摇床上培养8h。将该UPEC CFT073培养物充分混匀，提取细菌基因组DNA，并测定其浓度。将已知浓度的DNA样品进行10倍梯度稀释，选择浓度在5*l01~5*l0-4 ng/mL6个梯度的模板DNA进行荧光定量PCR扩增，每一个浓度的DNA重复2次，观察两批UPEC CFT073菌株Ct值之间的误差。计算公式见公式7.1。结果显示第一批大肠埃希菌UPECCFT073（蓝色扩增曲线）曲线R2为0.998，第二批大肠埃希菌UPEC CFT073（紫色扩增曲线）曲线R2为0.995，变异系数为1.7%，可见该方法的重复性好。
表3大肠埃希菌UPEC CFT073探针荧光定量PCR批间可重复检测结果
循环数差值△Ct=Ct1-Ct2
变异系数CV%=标准偏差/算术平均值
标准偏差 StD公式
（公式7.1）
8.模拟样品UPEC CFT073 DNA回收效率试验
为了评价该实时荧光定量PCR方法的灵敏度与准确性，我们采用了在尿样中添加己知浓度的DNA样品的方法来检验其准确性。取5份90μL阴性尿样于1.5mlEP管中，分别添加10μL大肠埃希菌UPEC CFT073样品，经菌液直接热裂解法提取DNA后，进行荧光定量PCR检测；同时以核酸测定仪测定该大肠埃希菌样品DNA浓度。回收率计算公式为回收率%=尿样中实际浓度/DNA直接测定浓度*100%。结果显示大肠埃希菌UPEC CFT073回收率为82.7%~105.7%之间，平均值为93.34%。
表4大肠埃希菌UPEC CFT073探针荧光定量PCR回收率试验结果
<110>浙江大学城市学院
<120>一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途
<160>8
<210>1
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<400>1
CCACTGGTAG ACGAGTTA 18
<210>2
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<400>2
GCCTAAATCA ATATTTCTCC TTAA 24
<210>3
<211>23
<212>DNA
<213>人工序列
<400>3
TTCAAGTGTC TGTTCATCAT ACCAA 25
<210>4
<211>99
<212>DNA
<213>人工序列
<400>4
CCACTGGTAG ACGAGTTAAA TAGACTTGGT GTAATTATTT GGTATGATGA ACAGACACTT 60
GAAGTCGGCG ATAGCTTAAG GAGAAATATT GATTTAGGC 99

Claims (4)

1.一种用于tcpC实时定量PCR检测的特异引物和TaqMan探针，其特征在于：
特异引物：上游引物F：5’-CCACTGGTAGACGAGTTA-3’，下游引物R：5’-GCCTAAATCAATATTTCTCCTTAA-3’；
TaqMan探针：5’-（FAM）TTCAAGTGTCTGTTCATCATACCAA（Eclipse）-3’。
2.一种用于tcpC实时定量PCR检测的PCR反应体系，其特征在于25μL反应体系包括：
PrimeScript 1 step Enzyme Mix反转录酶 1.0μL
2× 1 step buffer缓冲液 12.5μL
权利要求1所述的上游引物F 0.5μL
权利要求1所述的下游引物R 0.5μL
权利要求1所述的TaqMan探针0.5μL
模板/样品 2.0μL；
上述的上游引物F、下游引物R浓度分别为250nM，
镁离子浓度5.5mM，
反应体系单价离子浓度100mM。
3.一种用于tcpC实时定量PCR检测的PCR方法，其特征在于该方法将权利要求2所述的反应体系加无菌去离子水至反应总体积25μL，小心放入7500仪器，记录好被检样品、阳性对照及阴性对照，设置反应程序，循环参数为：94.0℃预变性5min，1个循环；94.0℃变性30s，56℃退火30s， 40个循环。
4.一种用于tcpC实时定量PCR检测的目标产物基因，其特征在于该目标产物基因的核苷酸序列表如SEQ ID NO:1所示。
CN201610989386.2A 2016-11-10 2016-11-10 一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途 Pending CN106755294A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610989386.2A CN106755294A (zh) 2016-11-10 2016-11-10 一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610989386.2A CN106755294A (zh) 2016-11-10 2016-11-10 一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106755294A true CN106755294A (zh) 2017-05-31

Family

ID=58973145

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610989386.2A Pending CN106755294A (zh) 2016-11-10 2016-11-10 一种tcpC实时定量PCR检测方法及用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106755294A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111411088A (zh) * 2020-03-02 2020-07-14 浙江大学城市学院 一种新的E3泛素连接酶TcpC及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009106532A2 (en) * 2008-02-27 2009-09-03 Technische Universität München Use of prokaryotic tir-domain containing proteins as therapeutic and diagnostic agents
CN101629207A (zh) * 2008-12-12 2010-01-20 武汉大学 快速检测尿液中大肠埃希菌的荧光定量pcr试剂盒
CN103525944A (zh) * 2013-11-05 2014-01-22 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 猪源衣原体Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物、试剂盒和检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009106532A2 (en) * 2008-02-27 2009-09-03 Technische Universität München Use of prokaryotic tir-domain containing proteins as therapeutic and diagnostic agents
CN101629207A (zh) * 2008-12-12 2010-01-20 武汉大学 快速检测尿液中大肠埃希菌的荧光定量pcr试剂盒
CN103525944A (zh) * 2013-11-05 2014-01-22 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 猪源衣原体Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物、试剂盒和检测方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHRISTINE CIRL ET AL.: ""Subversion of Toll-like receptor signaling by a unique family of bacterial Toll/interleukin-1 receptor domain–containing proteins"", 《NATURE MEDICINE》 *
D. NAGARJUNA ET AL.: ""tcpC as a prospective new virulence marker in blood Escherichia coli isolates from sepsis patients admitted to the intensive care unit"", 《NEW MICROBE AND NEW INFECT》 *
RAMÓN GÓMEZ-MORENO ET AL.: ""Direct Detection and Quantification of Bacterial Genes Associated with Inflammation in DNA Isolated from Stool"", 《ADV MICROBIOL》 *
张翀等: ""TcpC诱导人血管内皮细胞凋亡及其机制"", 《浙江大学学报》 *
潘建平等: ""TcpC 研究现状与展望"", 《浙江大学学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111411088A (zh) * 2020-03-02 2020-07-14 浙江大学城市学院 一种新的E3泛素连接酶TcpC及应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104946762B (zh) 检测肺炎克雷伯氏菌的试剂盒
CN103866034A (zh) 一种胃液中幽门螺杆菌多重实时荧光定量pcr检测试剂盒及检测方法
CN105420360A (zh) 一种阴道炎病原体基因即时检测试剂盒
CN104928376B (zh) 用于检测艰难梭菌高毒力菌株和/或毒素类型的组合物与试剂盒以及方法
CN110343780A (zh) 加德纳杆菌、白色念珠菌和阴道毛滴虫多重检测的引物、探针组、试剂盒及检测方法
CN102102124B (zh) 伤寒、副伤寒沙门菌多重荧光pcr检测试剂盒
CN103642910B (zh) 定量检测肺炎克雷伯氏菌的引物和探针及其应用
CN105483214A (zh) 一种结核分枝杆菌检测试剂盒及其应用
CN102230013B (zh) 检测肺炎支原体的靶序列、引物和探针及其试剂盒
CN110373485A (zh) 一种解脲脲原体、沙眼衣原体和淋球菌三联检试剂盒
CN105779625B (zh) 一种同时检测猪链球菌通用型和猪链球菌2型双重荧光定量pcr引物、试剂盒及方法
CN102268478A (zh) 检测空肠弯曲菌的引物、探针及方法和试剂盒
CN107460242A (zh) 一种能同时检测多种高耐药基因的检测试剂盒及其应用
CN105385780A (zh) 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速检测的试剂盒及其应用
CN109234419A (zh) 炭疽杆菌双重荧光定量pcr检测试剂盒及检测方法
CN105525023A (zh) 艰难梭菌毒素a/b的荧光定量pcr检测试剂盒及检测方法
CN106967839A (zh) B族链球菌荧光定量pcr检测的引物、探针、试剂盒和方法
CN110343775A (zh) 双重检测加德纳杆菌和阴道毛滴虫的引物、探针组、试剂盒及检测方法
CN103333903A (zh) 检测幽门螺杆菌的靶序列、引物和探针及其试剂盒
CN102952886A (zh) 艰难梭菌肠毒素a、b双重荧光定量pcr检测方法及检测用试剂盒
CN100415900C (zh) 淋病奈瑟菌荧光定量pcr检测试剂盒
CN104830988A (zh) 鼠伤寒沙门氏菌特异性lamp引物组及lamp检测方法
CN102952850B (zh) 用于检测结核分枝杆菌的实时荧光定量pcr方法、引物、探针及试剂盒
CN105112558B (zh) 口蹄疫病毒O、A和AsiaⅠ型三重实时荧光定量RT‑PCR检测试剂盒
CN102242216A (zh) 一种3群霍乱弧菌荧光pcr检测试剂盒及系统鉴定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170531

RJ01 Rejection of invention patent application after publication