CN106749045A - 一种新型d‑氨基酸氧化酶抑制剂及其制法和应用 - Google Patents

一种新型d‑氨基酸氧化酶抑制剂及其制法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种新型D‑氨基酸氧化酶抑制剂及其制法和应用，具体地，本发明公开了一类如式A所示的3‑羟基‑3,4‑二氢喹唑啉‑2(1H)‑酮类化合物及其衍生物，制备方法和作为D‑氨基酸氧化酶(DAAO)抑制剂的用途。本发明化合物表现出很好的镇痛和阻断吗啡镇痛耐受作用，有作为镇痛、治疗阿片药物耐受和抗精神分裂症的应用价值。

Description

一种新型D-氨基酸氧化酶抑制剂及其制法和应用
技术领域
本发明涉及医药领域，具体地，本发明涉及一类结构新颖的D-氨基酸氧化酶抑制剂3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物及其衍生物，该类化合物的制备方法以及针对D-氨基酸氧化酶的体外抑制活性。
背景技术
D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase：DAAO，EC1.4.3.3)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的黄素蛋白酶，机体内代谢D-氨基酸生成相应的酮酸、氨和过氧化氢。D-丝氨酸可以激活中枢神经系统中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的甘氨酸位点，使后者的钙离子通道开放，实现神经兴奋的传递[H Wolosker,et al,Proc Natl Acad Sci,1999,96,13409-13414；H Wolosker,et al,Proc Natl Acad Sci,1999,96,721-725]，同时，D-丝氨酸可以在肾脏中被DAAO代谢。因此，抑制DAAO可使D-丝氨酸选择性地转运到脑部，上调中枢内的D-丝氨酸水平，兴奋NMDA受体，进而起到调节兴奋传导的功能。临床前研究已经证实，D-丝氨酸或DAAO抑制剂与传统的多巴胺受体(DA受体)拮抗剂联合给药能够显著提高后者的疗效，明显改善精神分裂患者阳性、阴性及认知症状[T Adage,et al,EurNeuropsychopharmacol,2008,18,200-214]，同时使用DAAO抑制剂还可以减缓D-丝氨酸引起的肾毒性和神经毒性。DAAO与疼痛也有一定的关系。2007年Yoshikawa等人报道了D-丝氨酸增强了吗啡的镇痛作用[M Yoshikawa,et al,Eur J Pharmacol,2007,565,1-3,89-97]。此后数年，国内外多家研究单位相继报道了DAAO与疼痛关联的证据[LS Miraucourt,etal,Pain,2011,152,1340-1348；K Wake,Neurosci Lett,2001,5,25-28；B Ying,BiochemBiophys Res Commun,2006,340,1264-1272；R Sethuraman,et al,Mini-Rev Med Chem,2009,9,7,813-819]。
本发明所示化合物3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮是结构全新的DAAO抑制剂，其合成路线易于操作，重现性好，产率高。
发明内容
本发明的目在于提供一种新型D-氨基酸氧化酶抑制剂及其制备方法和用途。
本发明的第一方面提供了一种如式A所示的化合物，或其药学上可接受的盐，
其中：
X＝C，或X与R4共同构成N；
当X为C时，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自下组：H、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烃基、C1～C6脂肪烃氧基、C1～C6脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃氧基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基酰基；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基、C1～C8脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C8脂肪烃基酰基；
当X与R4共同构成N时，
R1、R2和R3为H；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基。
本发明的第二方面提供了一种式A化合物或其药学上可接受的盐的用途，
其中：
X＝C，或X与R4共同构成N；
当X为C时，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自下组：H、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烃基、C1～C6脂肪烃氧基、C1～C6脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃氧基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基酰基；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基、C1～C8脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C8脂肪烃基酰基；
当X与R4共同构成N时，
R1、R2和R3为H；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基；
所述式A化合物用于选自下组的用途：
(i)用于制备DAAO酶活抑制剂；
(ii)用于制备镇痛药物组合物；
(iii)用于制备预防阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；
(iv)用于制备逆转阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；
(v)用于制备调节中枢体内D-丝氨酸水平的药物组合物；
(vi)用于制备治疗或缓解动物的精神病症状的药物组合物；或
(vii)用于体外非治疗性抑制DAAO酶活性。
在另一优选例中，所述式A化合物抑制DAAO酶活性的IC50≤300μM，较佳地IC50≤46.27μM，更佳地IC50≤20.58μM，最佳地IC50≤11.56μM。
在另一优选例中，所述DAAO酶选自下组：人DAAO酶、猪DAAO酶、大鼠DAAO酶，或其组合。
在另一优选例中，所述阿片类药物为吗啡。
本发明的第三方面提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括(a)药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药作为活性成分以及(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的药物组合物还包括阿片类药物和/或D-丝氨酸。
在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物的重量百分比为0.1～99％，较佳地为10％～80％，更佳地为30％～75％。
在另一优选例中，所述的药物组合物是口服制剂或注射剂。
在另一优选例中，所述的药物组合物还包括阿片类药物和/或D-丝氨酸。
在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物与阿片类药物的质量比为1：0.001-1000，较佳地为1：0.01-100，更佳地为1：0.1-10。
在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物与D-丝氨酸的摩尔比为1：0.1-100000，较佳地为1:1-10000，最佳地为1:1-1000。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于选自下组的用途：
(i)抑制DAAO酶活性；
(ii)缓解生物体疼痛；
(iii)用于预防阿片类药物镇痛耐受作用；
(iv)用于逆转阿片类药物镇痛耐受作用；
(v)用于调节中枢体内D-丝氨酸水平；
(vi)用于治疗或缓解动物的精神病症状。
在另一优选例中，所述的疼痛是福尔马林诱导的疼痛或神经源性疼痛。
本发明的第四方面提供了一种制备如本发明第三方面所述的药物组合物的方法，所述的药物组合物的制备方法包括步骤：
将药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合，形成药物组合物。
在另一优选例中，所述式A化合物或其药学上可接受的盐占药物组合物的重量百分比为0.1～99％。
在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体选自下组：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、二甲基亚砜及其组合。
本发明的第五方面提供了一种体外非治疗性抑制DAAO酶活性的方法，所述方法包括：对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或前药，和/或本发明第三方面所述的药物组合物。
在另一优选例中，所述方法对DAAO酶活性的最大抑制率为100％。
在另一优选例中，所述抑制对象是含DAAO酶的溶液或细胞。
本发明的第六方面提供了一种如本发明第一方面所述的式A化合物的制备方法，所述方法(a)包括步骤：
(1)在还原试剂存在下，式III化合物的硝基被还原成氨基，从而得到式IV化合物；和
(2)在碱性条件下，式IV化合物与甲酰化试剂反应，从而得到式V化合物；
或所述方法(b)包括步骤：
(i)在碱存在下，式X化合物与胺化试剂反应，从而得到式XI化合物；
(ii)在酸存在下，式XI化合物氨基脱去保护基，得到式IV化合物；
(iii)在碱性条件下，式IV化合物与甲酰化试剂反应，从而得到式V化合物；
或所述方法(c)包括步骤：
(一)在碱存在下，式III化合物的苄胺与碳酰氯发生缩合反应，从而得到式XII化合物；
(二)在还原试剂存在下，式XII化合物的硝基被还原成氨基，从而得到式V化合物；
上述各式中，R1、R2、R3、R4和X的定义如本发明第一方面中所述；G为甲基，苄基，或苯甲酰基；Y为叔丁基，或苄基。
在另一优选例中，所述的还原试剂选自下组：钯碳/氢气、氢氧化钯碳/氢气、活泼金属/酸或酸性溶液、保险粉、三氯硅烷、或其组合。
在另一优选例中，所述的甲酰化试剂选自下组：三光气、氯甲酸酯、碳酸二酯、羰基二咪唑、或其组合。
所述的胺化试剂选自下组：甲氧基胺、苄氧基胺、O-苯甲酰基羟胺、或其组合。
在另一优选例中，所述的碱包括无机碱和有机胺类化合物。
在另一优选例中，所述的碱选自下组：三乙胺、吡啶、N,N-二甲基吡啶、或其组合。
在另一优选例中，所述的酸包括无机酸和有机酸。
在另一优选例中，所述碳酰氯选自下组：叔丁氧酰氯、苄氧酰氯、或其组合。
在另一优选例中，所述方法还包括步骤：
在催化氢化条件、水解条件或路易斯酸存在下，式V化合物脱去保护基，从而得到式VI化合物；和
在碱或缩合剂存在下，式VI化合物进一步与卤代烃或酰化试剂作用生成式VII化合物；
上述各式中，R1、R2、R3、R4、R5、和X的定义如本发明第一方面中所述；G为甲基，苄基。
在另一优选例中，所述的催化氢化条件包括钯碳/氢气、或氢氧化钯碳/氢气。
在另一优选例中，所述的水解条件包括碳酸盐水溶液条件、氢氧化物水溶液条件、或醇/水体系条件。
在另一优选例中，所述的路易斯酸选自下组：无水三氯化铝、四氯化锡、四氯化钛、或其组合。
在另一优选例中，所述的碱包括氢氧化物和碳酸盐。
在另一优选例中，所述的缩合剂选自下组：DCC、EDCI、HBTU、或其组合。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入地研究发现，3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮及其衍生物可用作DAAO抑制剂，可以用作以D-氨基酸氧化酶为靶标的疾病治疗药物。基于上述发现，发明人完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物”指3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮或氮杂3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮的芳环上的氢原子被取代基取代得到的化合物。在本发明中，一类优选的3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物具有如式A所示的结构：
其中：
X＝C，或X与R4共同构成N；
当X为C时，
R1、R2、R3、R4各自独立地选自下组：H、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烃基、C1～C6脂肪烃氧基、C1～C6脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃氧基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基酰基；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基、C1～C8脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C8脂肪烃基酰基；
当X与R4共同构成N时，
R1、R2、R3为H。
如本文所用，
术语“卤素”指F、Cl、Br和I。
术语“C1～C6脂肪烃基”和“C1～C8脂肪烃基”分别指具有1～6和1～8个碳原子的直链或支链烃基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、烯丙基等类似基团。
术语“C1～C6脂肪烃氧基”指具有1～6个碳原子的直链或支链烃氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、烯丙氧基等类似基团。
术语“C1～C6脂肪烃基酰基”和“C1～C8脂肪烃基酰基”分别指具有“-CO-(C1～C6烃基)”和“-CO-(C1～C8烃基)”结构的基团，例如甲基酰基、乙基酰基、丙基酰基、异丙基酰基、丙烯酰基等类似基团。
术语“(杂)芳基”指苯基、吡啶基、吡咯基、噻吩基、咪唑基、噻唑基。
术语“胺化试剂”指甲氧基胺、苄氧基胺、O-苯甲酰基羟胺等。
术语“甲酰化试剂”指三光气、氯甲酸酯、碳酸二酯、羰基二咪唑等。
DAAO抑制剂
如本文所用，术语“DAAO抑制剂”指能够用于抑制D-氨基酸氧化酶的酶活性的化合物或组合物。
D-氨基酸氧化酶的酶活性与多类疾病具有关联，如福尔马林诱导产生的疼痛、精神分裂症等一系列与中枢神经相关的疾病。对患有上述疾病的对象施用DAAO抑制剂，能够有效地治疗或改善其疾病。
其中，上述的“治疗”指指疾病或病症或其至少一种可辨的症状的减轻、预防或逆转，与所治疗疾病或病症相关的至少一个可测量身体参数的改善、预防或逆转，抑制或减缓疾病或病症的进展，或延迟疾病或病症的发作。
上述的“改善”某一特定疾病的症状是指任何减轻，无论是永久的，临时的，长期的，短暂的疾病或病症或其至少一种可辨的症状的减轻、预防或逆转。
式A化合物
本发明提供了一种3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类衍生物，具体地，本发明提供了一种如式A所示的化合物：
其中：
X＝C，或X与R4共同构成N；
当X为C时，
R1、R2、R3、R4各自独立地选自下组：H、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烃基、C1～C6脂肪烃氧基、C1～C6脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃氧基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基酰基；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基、C1～C8脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C8脂肪烃基酰基；
当X与R4共同构成N时，R1、R2、R3为H。
本发明部分优选的式A化合物如下表所示。
式A化合物的制法
本发明还提供了所述式A化合物的制法，所述方法含有或部分含有以下步骤：
上述各式中，R1、R2、R3、R4、R5、X的定义如本发明第一方面中所述。
(a)在卤化试剂存在下加热或加入自由基引发剂，式I化合物苄位发生自由基取代反应，得到式II化合物；
所述卤化试剂包括N-氯代丁二酰亚胺、N-溴代丁二酰亚胺、N-碘代丁二酰亚胺；自由基引发剂包括过氧化苯甲酰、偶氮二异丁腈。
(b)在碱存在下，式II化合物与胺化试剂反应，得到式III化合物；
所述的胺化试剂包括甲氧基胺、苄氧基胺、O-苯甲酰基羟胺；所述的碱包括无机碱(氢氧化物、碳酸盐)和有机胺类化合物。
(c)在还原试剂存在下，式III化合物的硝基被还原成氨基，得到式IV化合物；
所述的还原试剂包括催化氢化试剂(钯碳、氢氧化钯碳等)、氯化亚锡、活泼金属(锌、铁、锡等)与酸或酸性溶液、保险粉、三氯硅烷的组合。
(d)在碱性条件下，式IV化合物与甲酰化试剂反应，得到式V化合物；
所述的甲酰化试剂包括三光气、氯甲酸酯、碳酸二酯、羰基二咪唑；所述的碱包括三乙胺、吡啶、N,N-二甲基吡啶等。
(e)在催化氢化条件、水解条件或路易斯酸存在下，式V化合物脱去保护基，得到式VI化合物；
所述催化氢化条件包括钯碳/氢气、氢氧化钯碳/氢气；所述水解条件包括碳酸盐、氢氧化物的水溶液或醇/水体系；所述路易斯酸包括无水三氯化铝、四氯化锡、四氯化钛等。
(f)在碱或缩合剂存在下，式VI化合物进一步与卤代烃或酰化试剂作用生成式VII化合物。
所述碱包括氢氧化物和碳酸盐；所述缩合剂包括DCC、EDCI、HBTU等；
所述卤代烃包括本发明第一方面中所述各种烃基的氯或溴或碘代物；所述酰化试剂包括本发明第一方面中所述各种酰基对应的羧酸或酰氯。
在另一优选例中，式A化合物还包括另一制法，所述方法含有或部分含有以下步骤：
上述各式中，R1、R2、R3、R4、R5、X的定义如本发明第一方面中所述。
(g)在碱存在下，式VIII化合物的伯胺上保护基，得到式IX化合物；所述保护基包括Boc、乙酰基等；所述的碱包括三乙胺、吡啶、N,N-二甲基吡啶等。
(h)在卤化试剂存在下加热或加入自由基引发剂，式IX化合物苄位发生自由基取代反应，得到式X化合物；
所述卤化试剂包括N-氯代丁二酰亚胺、N-溴代丁二酰亚胺、N-碘代丁二酰亚胺；自由基引发剂包括过氧化苯甲酰、偶氮二异丁腈。
(i)在碱存在下，式X化合物与胺化试剂反应，得到式XI化合物；
所述的胺化试剂包括甲氧基胺、苄氧基胺、O-苯甲酰基羟胺；所述的碱包括无机碱(氢氧化物、碳酸盐)和有机胺类化合物。
(j)在酸存在下，式XI化合物脱去保护基，得到式IV化合物；
所述的酸包括盐酸等无机酸和三氟乙酸等有机酸。
(d)、(e)、(f)如上文所述。
在另一优选例中，式A化合物还包括另一制法，所述方法含有或部分含有以下步骤：
上述各式中，R1、R2、R3、R4、R5、X的定义如本发明第一方面中所述。
(k)在碱存在下，式III化合物的苄胺与碳酰氯发生缩合反应，得到式XII化合物；
所述碳酰氯包括叔丁氧酰氯、苄氧酰氯等；所述的碱包括三乙胺、吡啶、N,N-二甲基吡啶等。
(a)、(b)、(c)、(e)、(f)如上文所述。
式A化合物(3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物)的用途
本发明还提供了如式A所示的3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物对D-氨基酸氧化酶的体外抑制活性，表明该类化合物可以作为以D-氨基酸氧化酶为靶标的疾病治疗药物。
本发明的式A化合物可以用于包括(但并不限于)以下用途：
(i)用于制备DAAO酶抑制剂；
(ii)用于制备镇痛药物组合物；
(iii)用于制备预防阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；
(iv)用于制备逆转阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；
(v)用于制备调节中枢神经系统内D-丝氨酸水平的药物组合物；
(vi)用于制备治疗或缓解动物的精神病症状的药物组合物；
(vii)用于体外非治疗性抑制DAAO酶活性。
式A化合物(3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物)的药物组合物
本发明还提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括药物有效量的式A化合物，或其药学上可接受的盐或前药。
具体地，在本发明所述的药物组合物中，式A化合物的质量百分比没有特别的限制，可根据药物组合物的用途、用法、施用对象和剂型而有所区别，可以由本领域的技术人员结合本领域的公知常识和本发明的内容而决定。在另一优选例中，上述式A化合物在所述药物组合物中的质量百分比为0.1～99％，较佳地为10％～80％，更佳地为30％～75％。
通常，可将本发明的有效部位配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质，如其他药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、二甲基亚砜及其组合。
配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、局部给药、蛛网膜下腔给药。药物制剂应与给药方式相匹配。
在另一优选例中，本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。本发明的药物组合物也可以制成诸如片剂和胶囊之类的口服制剂形式，上述制剂均可通过常规方法进行制备。
药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约30毫克/千克体重。
本发明的药物组合物可以制成口服和非口服制剂。口服给药可制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等常用剂型，所用的赋型剂可以为淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羟甲基纤维素等中的一种或几种。崩解剂可以为马铃薯淀粉、羟甲基纤维素等中的一种或几种。粘合剂可以为阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、糊精等中的一种或几种。口服制剂除上述剂型外，还可以制成乳剂、糖浆剂等。
非口服制剂可以制成注射剂，可以与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。
此外，本发明的药物组合物还可以与其他组分联用，以达到更佳的治疗效果。例如，当本发明的药物组合物用于调节中枢体内D-丝氨酸水平时，所述的药物组合物还可以包括有效量的D-丝氨酸；当本发明的药物组合物用于缓解生物体疼痛时，上述的药物组合物还包括阿片类药物。
在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物与阿片类药物的质量比为1：0.001-1000，较佳地为1：0.01-100，更佳地为1：0.1-10。
在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物与D-丝氨酸的摩尔比为1：0.1-100000，较佳地为1:1-10000，最佳地为1:1-1000。
本发明所述的药物组合物可以用于DAAO酶活性相关的病症，包括(但并不限于)用于选自下组的用途：
(i)抑制DAAO酶活性；
(ii)缓解生物体疼痛；
(iii)用于预防阿片类药物镇痛耐受作用；
(iv)用于逆转阿片类药物镇痛耐受作用；
(v)用于调节中枢神经系统内D-丝氨酸水平；
(vi)用于治疗或缓解动物的精神病症状。
在另一优选例中，所述的疼痛是福尔马林诱导的疼痛或神经源性疼痛。
在本发明的另一优选例中，所述的3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物用于预防和/或治疗因阿片耐受使得其治疗功效降低的病症，这些病症能够通过抑制D-氨基酸氧化酶达到预防和/或治疗阿片耐受从而得到预防和/治疗。具体来说，所述病症可以是疼痛，包括但不限于急性和/或慢性疼痛，尤其是慢性疼痛。
在一个实施例中，在施用引起慢性疼痛物质和阿片类物质之前、同时或之后施用所述D-氨基酸氧化酶抑制剂。
在另一个实施例中，通过口服或胃肠外途径施用所述D-氨基酸氧化酶抑制剂，例如包括皮下注射，脊髓施用。
本发明所述的药物组合物可以通过本领域的任何常规技术制备，如通过以下方法制备：
将药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合，形成药物组合物。
本发明的主要优点
(1)本发明提供的式A化合物可以作为新型的D-氨基酸氧化酶抑制剂以及以D-氨基酸氧化酶为靶标的疾病治疗药物。
(2)本发明提供了一类结构全新的3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物及其衍生物，且合成路线易于操作，重现性好，产率高。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1 3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(19)的制备
将2-硝基甲苯(5.0g,36.50mmol)溶于100mL四氯化碳中，加入N-溴代丁二酰亚胺(6.5g,36.50mmol)，加入催化剂量的光引发剂过氧化二苯甲酰，升温到100℃，回流搅拌48h。待反应液恢复到室温，减压蒸馏去除溶剂，加50mL冰水，以乙酸乙酯萃取(40mL×3)，萃取液经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚)得2-硝基苄溴(3.5g，44.81％)。
将2-硝基苄溴(3.5g,16.36mmol)溶于30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(4.96g,49.08mmol)，室温搅拌5min。将苄氧胺盐酸盐(3.9g，24.54mmol)溶于30mL N,N’-二甲基甲酰胺中，逐滴滴入到上述混合物中，滴加结束后升温到45℃，并在此温度下反应12h。加50mL冰水，以乙酸乙酯萃取(40mL×3)，萃取液经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:100)得1-(2-硝基苯)-N-苄氧基-甲胺(3.5g，83.33％)。
将铁粉(8.8g，135.7mmol)加入到25mL的饱和氯化铵水溶液中，50℃下搅拌10min，将1-(2-硝基苯)-N-苄氧基-甲胺(3.5g，13.57mmol)溶于10mL乙醇中，逐滴滴入到上述反应物中，50℃下反应1h。反应恢复到室温，过滤除去锌粉及其氧化物，减压蒸馏去除大部分的乙醇，加30mL水，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:15)得1-(2-氨基苯基)-N-苄氧基-甲胺(2.5g，80.65％)。
将三光气(1.08g，3.65mmol)溶解在4mL四氢呋喃中，冷却到0℃。将1-(2-氨基苯基)-N-苄氧基-甲胺(2.5g，10.96mmol)溶解在6mL四氢呋喃中，加入三乙胺(0.1g，1.46mmol)，逐滴滴入到上述混合物中，搅拌10min，有白色固体析出。加入10mL冰水淬灭反应，静置，过滤，滤饼为粗品。粗品用乙酸乙酯/石油醚重结晶得3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(2.4g，85.71％，白色固体，16)。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.46(s,2H),5.01(s,2H),6.77-6.79(m,1H),6.90-6.97(m,2H),7.15-7.17(m,1H),7.35-7.36(m,3H),7.46-7.48(m,2H),8.14(s,1H)ppm.
实施例2 5-溴-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(20)的制备
操作同实施例1，以2-溴-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.53(s,2H),5.03(s,2H),6.70(d,J＝8Hz,1H),7.01-7.04(m,1H),7.11-7.13(m,1H),7.36(s,3H),7.48(s,2H),8.06(s,1H)ppm.
实施例3 5-氯-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(21)的制备
操作同实施例1，以2-氯-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.56(s,2H),5.02(s,2H),6.69(d,J＝8Hz,1H),6.935(d,J＝4Hz,1H),7.09(t,J＝8Hz,1H),7.34-7.39(m,3H),7.47-7.49(m,2H)ppm.
实施例4 5-氟-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(22)的制备
操作同实施例1，以2-氟-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.54(s,2H),5.02(s,2H),6.57-6.66(m,2H),7.10-7.15(m,1H),7.36-7.37(m,3H),7.47-7.49(m,2H),8.52-8.60(m,1H)ppm.
实施例5 6-氯-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(23)的制备
操作同实施例1，以3-氯-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.39(s,2H),4.98(s,2H),6.685(d,J＝12Hz,1H),6.93(s,1H),7.13(d,J＝8Hz,1H),7.35-7.37(m,3H),7.44-7.46(m,2H),7.86(s,1H)ppm.
实施例6 7-氯-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(24)的制备
操作同实施例1，以4-氯-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.40(s,2H),5.00(s,2H),6.81(s,2H),6.85-6.90(m,2H),7.35-7.37(m,3H),7.46-7.47(m,2H),8.34(s,1H)ppm.
实施例7 8-氯-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(25)的制备
操作同实施例1，以5-氯-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.42(s,2H),4.98(s,2H),6.85-6.86(m,2H),7.02-7.21(m,1H),7.34-7.35(m,3H),7.44-7.45(m,2H)ppm.
实施例8 5-三氟甲基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(26)的制备
操作同实施例1，以2-三氟甲基-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.56(s,2H),4.99(s,2H),6.94(d,J＝8Hz,1H),7.21-7.23(m,1H),7.26-7.28(m,1H),7.34-7.35(m,3H),7.44-7.46(m,2H),8.21(s,1H)ppm.
实施例9 5-甲氧基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(27)的制备
操作同实施例1，以2-甲氧基-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:3.77(s,3H),4.52(s,2H),4.99(s,2H),6.30-6.44(dd,J＝64,8Hz,2H),7.01-7.12(m,1H),7.32-7.37(m,3H),7.46-7.48(m,2H)ppm.
实施例10 6-正丙基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(28)的制备
操作同实施例1，以3-正丙基-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:0.85(t,J＝8Hz,3H),1.64-1.66(m,2H),2.61-2.63(m,2H),4.53(s,2H),4.99(s,2H),7.07-7.09(m,1H),7.14(s,1H),7.27-7.29(m,1H),7.31-7.35(m,3H),7.43-7.46(m,2H)ppm.
实施例11 6-丙酰基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(29)的制备
操作同实施例1，以3-丙酰基-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:1.18(t,J＝8Hz,3H),3.54(dd,J＝8,14Hz,2H),4.53(s,2H),4.99(s,2H),7.66(s,1H),7.75-7.76(m,1H),7.77-7.78(m,1H),7.31-7.35(m,3H),7.43-7.46(m,2H)ppm.
实施例12 6-乙氧基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(30)的制备
操作同实施例1，以3-乙氧基-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:1.22(t,J＝8Hz,3H),4.22(dd,J＝8,14Hz,2H),4.53(s,2H),4.99(s,2H),6.77-6.79(m,1H),6.99(s,1H),7.57-7.59(m,1H),7.33-7.35(m,3H),7.44-7.48(m,2H)ppm.
实施例13 6-苄氧基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(31)的制备
操作同实施例1，以3-苄氧基-6-硝基甲苯作为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:4.53(s,2H),4.99(s,2H),5.16(s,2H),6.77-6.79(m,1H),6.99(s,1H),7.57-7.59(m,1H),7.35-7.38(m,6H),7.44-7.48(m,4H)ppm.
实施例14 3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(1)的制备
操作同实施例1，得到3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(19)，以其为起始原料。
将3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(100mg,0.39mmol)溶于6mL甲醇中，氮气氛下加入10％Pd(OH)2-C(10mg)，反应体系以氢气置换三次，置于室温下搅拌3小时。过滤去除Pd(OH)2-C，滤液浓缩得3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(55mg,85.14％，白色固体，1)。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.47(s,2H),6.73-6.75(m,1H),6.84(t,J＝8Hz,1H),7.10-7.12(m,2H),9.30(s,1H),9.39(s,1H)ppm.
实施例15 5-溴-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(2)的制备
操作同实施例1，得到5-溴-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(20)，以其为起始原料。
将5-溴-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(100mg,0.30mmol)溶于6mL无水二氯甲烷中，冰浴下滴加四氯化钛，直到反应液变成深棕色，冰浴下搅拌20min。加入甲醇淬灭反应，浓缩后得粗品。粗品经硅胶柱层析(甲醇：二氯甲烷＝1:30)，得5-溴-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(35mg,48.61％，白色固体，2)。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.50(s,2H),6.54(d,J＝8Hz,1H),6.70(t,J＝8Hz,1H),7.13-7.17(m,1H),9.45(s,1H),9.60(s,1H)ppm.
实施例16 5-氯-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(3)的制备
操作同实施例15，以5-氯-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(21)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.48(s,1H),4.53(s,1H),6.69-6.74(m,1H),6.83-6.97(m,1H),7.10-7.17(m,1H),9.30(s,1H),9.50(s,1H)ppm.
实施例17 5-氟-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(4)的制备
操作同实施例15，以5-氟-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(22)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.51(s,2H),6.58(d,J＝8Hz,1H),6.71(t,J＝8Hz,1H),7.13-7.17(m,1H),9.46(s,1H),9.61(s,1H)ppm.
实施例18 6-氯-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(5)的制备
操作同实施例15，以6-氯-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(23)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.46(s,2H),6.73(d,J＝8Hz,1H),7.16-7.17(dd,J＝8,4Hz,1H),7.23(s,1H),9.38(s,1H),9.53(s,1H)ppm.
实施例19 7-氯-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(6)的制备
操作同实施例15，以7-氯-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(24)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.47(s,2H),6.74-6.78(m,1H),6.86-6.92(m,1H),7.12-7.17(m,1H),9.40(s,1H),9.54(s,1H)ppm.
实施例20 8-氯-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(7)的制备
操作同实施例15，以8-氯-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(25)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.51(s,2H),6.89(t,J＝8Hz,1H),7.12(d,J＝8Hz,1H),7.25(d,J＝8Hz,1H),8.93(s,1H),9.48(s,1H)ppm.
实施例21 5-三氟甲基-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(8)的制备
操作同实施例15，以5-三氟甲基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(26)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.56(s,2H),7.05(d,J＝8Hz,1H),7.23(d,J＝8Hz,1H),7.35(d,J＝8Hz,1H),9.54(s,1H),9.81(s,1H)ppm.
实施例22 5-甲氧基-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(9)的制备
操作同实施例15，以5-甲氧基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(27)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:3.72(s,3H),4.38(s,2H),6.34(d,J＝8Hz,1H),6.50(d,J＝8Hz,1H),7.06(t,J＝8Hz,1H),9.31(s,1H),9.34(s,1H)ppm.
实施例23 6-正丙基-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(10)的制备
操作同实施例15，以6-正丙基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(28)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:0.80(t,J＝8Hz,3H),1.60-1.63(m,2H),2.56-2.58(m,2H),4.49(s,2H),7.07-7.09(m,1H),7.14(s,1H),7.27-7.29(m,1H),8.01(s,1H)ppm.
实施例24 6-丙酰基-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(11)的制备
操作同实施例15，以6-丙酰基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(29)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:1.14(t,J＝8Hz,3H),3.50(dd,J＝7.0,14Hz,2H),4.48(s,2H),7.66(s,1H),7.74-7.75(m,1H),7.78-7.79(m,1H),8.10(s,1H)ppm.
实施例25 6-乙氧基-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(12)的制备
操作同实施例15，以6-乙氧基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(30)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:1.22(t,J＝8Hz,3H),4.08(dd,J＝8,14Hz,2H),4.48(s,2H),6.76-6.78(m,1H),6.99(s,1H),7.55-7.57(m,1H),7.99(s,1H)ppm.
实施例26 6-苄氧基-3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(13)的制备
操作同实施例15，以6-苄氧基-3-苄氧基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(31)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.48(s,2H),4.99(s,2H),6.77-6.79(m,1H),6.99(s,1H),7.56-7.58(m,1H),7.35-7.38(m,3H),7.44-7.48(m,2H)ppm.
实施例27 3-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮基乙酸酯(14)的制备
将3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(1)(100mg,0.61mmol)悬浮于3mL二氯甲烷中，20℃下加入乙酸酐(68mg,0.67mmol)，搅拌形成均相后，加入三乙胺(80mg,0.79mmol)。保持在此温度下搅拌30min，加50mL冰水，以二氯甲烷萃取(40mL×3)，萃取液经饱和碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)得3-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮基乙酸酯(92mg，73.60％，白色固体，14)。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:2.24(s,3H),4.73(s,2H),6.70(d,J＝8Hz,1H),6.97(t,J＝8Hz,1H),7.07(d,J＝8Hz,1H),7.19(t,J＝8Hz,1H),7.29(s,1H)ppm.
实施例28 3-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮基苯甲酸酯(15)的制备
将3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(1)(30mg,0.18mmol)溶于2mL N,N’-二甲基甲酰胺中，加入苯甲酸(23mg,0.18mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(76mg,0.20mmol)、三乙胺(37mg,0.36mmol)。室温搅拌12h，加30mL冰水，以二氯甲烷萃取(30mL×3)，萃取液经饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)得3-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮基苯甲酸酯(20mg，40.81％，白色固体，15)。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:4.80(s,2H),6.84(d,J＝8Hz,1H),6.95(s,1H),7.19(s,1H),7.57(s,2H),7.73(s,1H),8.01(d,J＝4Hz,2H),10.04(s,1H)ppm.
实施例29 3-氧代-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮基-4-甲基苯甲酸酯(16)的制备
操作同实施例28，以3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(1)为起始原料，与4-甲基苯甲酸反应。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,DMSO:3.01(s,3H),4.80(s,2H),6.75(d,J＝8Hz,1H),6.95(t,J＝8Hz,1H),7.09(d,J＝8Hz,1H),7.21(t,J＝8Hz,1H),7.55(s,1H),7.73-7.74(m,2H),8.07-8.09(m,2H)ppm.
实施例30 3-异丙基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(17)的制备
将3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(1)(43mg,0.26mmol)溶于3mL N,N’-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾(109mg,0.78mmol)、溴代异丙基(97mg,0.78mmol)。50℃下搅拌5h，加30mL冰水，以二氯甲烷萃取(30mL×3)，萃取液经饱和碳酸氢钠、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)得3-异丙基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(15mg，27.78％，白色固体，17)。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:1.28(s,6H),4.23-4.26(m,1H),4.56(s,2H),6.72(d,J＝8Hz,1H),6.95(t,J＝8Hz,1H),7.08(d,J＝8Hz,1H),7.18(t,J＝8Hz,1H),7.55(s,1H)ppm.
实施例31 3-(4-甲基苄氧基)-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(18)的制备
操作同实施例30，以3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮(1)为起始原料，与4-甲基溴苄反应。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:3.01(s,3H),4.46(s,2H),5.04(s,2H),6.77-6.79(m,1H),7.01-7.02(m,1H),7.15-7.17(m,2H),7.23-7.25(m,1H),7.29-7.30(m,1H),7.35-7.36(m,2H),8.14(s,1H)ppm.
实施例32 3-苄氧基-3,4-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(33)的制备
将过氧化氢(187.5g,1.72mol)溶于390mL发烟硫酸中，冰浴下搅拌，将2-氨基-3-甲基吡啶(25g,0.23mol)溶于80mL浓硫酸中，并在冰浴条件下逐滴滴入到上述溶液中，在冰浴条件下搅拌5h，恢复到室温反应24h。用40％氢氧化钠水溶液调pH值到中性，以乙酸乙酯(700mL×3)萃取，萃取液经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品，粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:10)得2-硝基-2-甲基吡啶(4.2g,13.13％)。
将2-硝基2-甲基吡啶(4.2g,30.66mmol)溶于100mL四氯化碳中，加入N-溴代丁二酰亚胺(5.5g,30.66mmol)，加入催化剂量的光引发剂过氧化二苯甲酰，升温到100℃，回流搅拌48h。待反应液恢复到室温，减压蒸馏去除溶剂，加50mL冰水，以乙酸乙酯萃取(40mL×3)，萃取液经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:10)得3-溴乙基-2-硝基吡啶(2.9g，44.14％)。
将3-溴乙基-2-硝基吡啶(2.9g,15.56mmol)溶于30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(4.11g,40.67mmol)，室温搅拌5min。将苄氧胺盐酸盐(3.23g，20.33mmol)溶于30mLN,N-二甲基甲酰胺中，逐滴滴入到上述混合物中，滴加结束后升温到45℃，并在此温度下反应12h。加50mL冰水，以乙酸乙酯萃取(40mL×3)，萃取液经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:8)得1-(2-硝基吡啶)-N-苄氧基-甲胺(3.0g，86.21％)。
将1-(2-硝基吡啶)-N-苄氧基-甲胺(100mg,0.39mmol)溶于7mL无水乙腈，加入N,N’-二异丙基乙胺(249mg,1.95mmol)，冰浴条件下向该混合物中逐滴滴入三氯硅烷(183mg,1.35mmol)，反应混合物恢复到室温，搅拌18h。加入10mL饱和碳酸氢钠搅拌30min，以乙酸乙酯萃取(20mL×3)，萃取液经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:10)得1-(2-氨基吡啶)-N-苄氧基-甲胺(40mg，45.45％)。
将1-(2-氨基吡啶)-N-苄氧基-甲胺(40mg,0.17mmol)和N,N’-羰基二咪唑(85mg,0.52mmol)溶于5mL四氢呋喃中，50℃条件下搅拌16h，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1:30)得3-苄氧基-3,4-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(33)(21mg，46.67％，白色固体，33)。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:5.22(s,2H),5.32(s,2H),7.22(d,J＝8Hz,1H),7.33-7.40(m,5H),8.175(dd,J＝4,8Hz,1H),8.365(d,J＝4Hz,1H),8.45(s,1H)ppm.
实施例33 3-羟基-3,4-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(32)的制备
操作同实施例15，以3-苄氧基-3,4-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-2(1H)-酮(33)为起始原料。
核磁共振氢谱：1HNMR,400MHz,CDCl3:5.32(s,2H),7.33(d,J＝8Hz,1H),7.77(d,J＝8Hz,1H),8.15(d,J＝8Hz,1H),8.39(s,1H),8.46(s,1H)ppm.
生物活性研究
实施例34 体外测定3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物对猪DAAO酶活性抑制作用
按8.2UI/ml的浓度配制猪DAAO酶储备液，使用时稀释10倍作为工作液使用。对照管、空白管加入25μL Tris-HCl缓冲液，抑制剂管加入25μL多种浓度的3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物。空白管加入50μL Tirs-HCl缓冲液，其他管加入50μl 2.5mM D型丙氨酸底物。各组加入50μL 0.82UI/mL猪DAAO酶工作液启动反应，反应置于37℃恒温摇床上进行，摇动频率为700rpm。5分钟后加入50μL 25％三氯乙酸终止反应，并置于冰上。
上述反应液震荡混匀后4℃14000rpm离心5分钟。取50μL离心上清液，加入50μL1mM 2,4-二硝基苯肼显色液，震荡混匀，置于37℃恒温摇床反应10分钟，摇动频率为700rpm。加入100μL 1.5M氢氧化钠溶液，置于37℃恒温摇床反应10分钟，摇动频率为700rpm。取出100μL反应液，加入96孔板中，在酶标仪上于450nm波长读数。按抑制率％＝(对照管吸光率-抑制管吸光率)/(对照管吸光率-空白管吸光率)*100计算抑制率。计算半数抑制剂量IC50。
结果表明，化合物3对猪DAAO酶抑制作用呈浓度依赖式，最大抑制达100％。其抑制猪DAAO酶活性IC50为11.56μM。其他13个化合物对人、猪和大鼠DAAO酶抑制作用均亦呈浓度依赖式，最大抑制率达100％，相应IC50值见表1。
表1 3-羟基-3,4-二氢喹唑啉-2(1H)-酮类化合物对猪DAAO酶活性抑制作用
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种如式A所示的化合物，或其药学上可接受的盐，
其中：
X＝C，或X与R4共同构成N；
当X为C时，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自下组：H、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烃基、C1～C6脂肪烃氧基、C1～C6脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃氧基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基酰基；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基、C1～C8脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C8脂肪烃基酰基；
当X与R4共同构成N时，
R1、R2和R3为H；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基。
2.一种式A化合物或其药学上可接受的盐的用途，
其中：
X＝C，或X与R4共同构成N；
当X为C时，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自下组：H、卤素、三氟甲基、氰基、硝基、氨基、C1～C6脂肪烃基、C1～C6脂肪烃氧基、C1～C6脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃氧基、(杂)芳基取代的C1～C4脂肪烃基酰基；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基、C1～C8脂肪烃基酰基、(杂)芳基取代的C1～C8脂肪烃基酰基；
当X与R4共同构成N时，
R1、R2和R3为H；
R5为H、C1～C8脂肪烃基、(杂)芳基取代的C1～C8烃基；
其特征在于，所述式A化合物用于选自下组的用途：
(i)用于制备DAAO酶活抑制剂；
(ii)用于制备镇痛药物组合物；
(iii)用于制备预防阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；
(iv)用于制备逆转阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；
(v)用于制备调节中枢体内D-丝氨酸水平的药物组合物；
(vi)用于制备治疗或缓解动物的精神病症状的药物组合物；或
(vii)用于体外非治疗性抑制DAAO酶活性。
3.如权利要求2中所述的用途，其特征在于，所述式A化合物抑制DAAO酶活性的IC50≤300μM，较佳地，IC50≤46.27μM，更佳地，IC50≤20.58μM，最佳地，IC50≤11.56μM。
4.一种药物组合物，其特征在于，包括(a)药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药作为活性成分以及(b)药学上可接受的载体。
5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物还包括阿片类药物和/或D-丝氨酸。
6.如权利要求4或5所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物用于选自下组的用途：
(i)抑制DAAO酶活性；
(ii)缓解生物体疼痛；
(iii)用于预防阿片类药物镇痛耐受作用；
(iv)用于逆转阿片类药物镇痛耐受作用；
(v)用于调节中枢体内D-丝氨酸水平；
(vi)用于治疗或缓解动物的精神病症状。
7.一种制备如权利要求4所述的药物组合物的方法，其特征在于，所述的药物组合物的制备方法包括步骤：
将药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合，形成药物组合物。
8.一种体外非治疗性抑制DAAO酶活性的方法，其特征在于，所述方法包括：对抑制对象施用抑制有效量的如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或前药，和/或权利要求4所述的药物组合物。
9.一种如权利要求1所述的式A化合物的制备方法，其特征在于，
所述方法(a)包括步骤：
(1)在还原试剂存在下，式III化合物的硝基被还原成氨基，从而得到式IV化合物；和
(2)在碱性条件下，式IV化合物与甲酰化试剂反应，从而得到式V化合物；
或所述方法(b)包括步骤：
(i)在碱存在下，式X化合物与胺化试剂反应，从而得到式XI化合物；
(ii)在酸存在下，式XI化合物氨基脱去保护基，得到式IV化合物；
(iii)在碱性条件下，式IV化合物与甲酰化试剂反应，从而得到式V化合物；
或所述方法(c)包括步骤：
(一)在碱存在下，式III化合物的苄胺与碳酰氯发生缩合反应，从而得到式XII化合物；
(二)在还原试剂存在下，式XII化合物的硝基被还原成氨基，从而得到式V化合物；
上述各式中，R1、R2、R3、R4和X的定义如权利要求1中所述；G为甲基，苄基，或苯甲酰基；Y为叔丁基，或苄基。
10.如权利要求9中所述的方法，其特征在于，还包括步骤：
在催化氢化条件、水解条件或路易斯酸存在下，式V化合物脱去保护基，从而得到式VI化合物；和
在碱或缩合剂存在下，式VI化合物进一步与卤代烃或酰化试剂作用生成式VII化合物；
上述各式中，R1、R2、R3、R4、R5、和X的定义如权利要求1中所述；G为甲基，苄基。
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