CN103435561A - 一种新型d-氨基酸氧化酶抑制剂及其制备和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种新型D-氨基酸氧化酶抑制剂及其制备和应用，具体地，本发明公开了一类如式A所示的结构全新的喹喔啉-2，3-二酮衍生物，及其制备方法和作为D-氨基酸氧化酶(DAAO)抑制剂的用途。本发明化合物表现出很好的镇痛和阻断吗啡镇痛耐受作用，有作为镇痛、治疗阿片药物耐受和抗精神分裂症的应用价值。

Description

一种新型D-氨基酸氧化酶抑制剂及其制备和应用

技术领域

本发明涉及医药领域，具体地，本发明涉及一类新颖的DAAO抑制剂喹喔啉-2,3-二酮衍生物，及其制备方法和应用。

背景技术

D-氨基酸氧化酶(D-amino acid oxidase：DAAO，EC1.4.3.3)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的黄素蛋白酶，机体内代谢D-氨基酸生成相应的酮酸、氨和过氧化氢。中枢系统中，L-丝氨酸经丝氨酸消旋酶(SRR)催化转变成D-丝氨酸，后者又经DAAO催化转变成酮酸而消除。D-丝氨酸是一种兴奋性神经递质：它是NMDA受体甘氨酸调节位点上的另一种内源性配体，作用更强，它与谷氨酸共同作用于突触后膜上NMDA受体，使后者的钙离子通道开放，实现神经兴奋的传递[H.Wolosker,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.1999,96,13409–13414;H.Wolosker,et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.1999,96,721–725]。因此，抑制DAAO可上调中枢内的D-丝氨酸水平，兴奋NMDA受体，进而起到调节兴奋传导的功能。临床前研究已经证实，D-丝氨酸或DAAO抑制剂与传统的多巴胺受体(DA受体)拮抗剂联合给药能够显著提高后者的疗效，明显改善精神分裂患者阳性、阴性及认知症状[T.Adage,et al.,Eur.Neuropsychopharmacol.2008,18,200-214]。

近十年来，结构新颖的DAAO抑制剂陆续被发现[US20030162825；US20050143443；WO2005089753；US20080004327；US20090099248]，并用以开展抗精神分裂症以及其它中枢神经系统疾病的研究。

2007年Yoshikawa等人报道了D-丝氨酸增强了吗啡的镇痛作用[M.Yoshikawa,et al.,Eur.J.Pharmacol.2007,565,1-3,89-97]。此后数年，国内外多家研究单位相继报道了DAAO与疼痛关联的证据[R.Sethuraman,et al.,Mini-Rev.Med.Chem.2009,9,7,813-819]。王永祥等人发现DAAO基因突变小鼠的疼痛感受明显降低[W.J.Zhao,et al.,Cell Mol Neurobiol.2008,28,581–91]，利用RNA干扰沉默DAAO基因也得到了相似的结果[X.L.Chen,et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.2012,3,501-507],证明DAAO与疼痛有因果关系。此后还发现一系列已知结构的DAAO抑制剂能够有效缓解对大鼠福尔马林诱导的疼痛[W.J.Zhao,et al.,Cell Mol Neurobiol.2008,28,581–91；J.M.Lu,et al.,Br.J.Pharmacol.2012,165,6,1941-1955；N.Gong,et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.2011,336,1,282-293]、神经源性疼痛[W.J.Zhao,et al.,J PharmacolExp Ther.2010,332(1),248-254；Hopkins,et al.,J Pharmacol Exp Ther.2013,345:502-511]和骨癌疼痛[J.L Huang,et al.,Amino Acids2012,43:1905-1918]，而且抑制福尔马林诱导疼痛的效率与DAAO抑制剂的体外抑酶能力呈线性相关[N.Gong,et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.2011,336,1,282-293]。

因此，开发新型的DAAO抑制剂，是本领域尚待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型D-氨基酸氧化酶抑制剂，及其制备方法。

本发明的另一目的是提供一类喹喔啉-2,3-二酮类衍生物的新用途。

本发明的第一方面，提供了一种如式A所示的化合物，或其药学上可接受的盐，

其中：

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C3～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10烷氧基、取代或未取代的C6～C10芳基、取代或未取代的C1～C10杂芳基；

X、Y为C；或者，

X与R₄共同构成N，而Y为C；或

Y与R₃共同构成N，而X为C。

在另一优选例中，X和Y都为C。

在另一优选例中，当X、Y为C时：

R₁选自下组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、nBuO-、-OCH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂CH₂C₆H₅；

R₂选自下组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、nBuO-、-OCH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂CH₂C₆H₅；

R₃为H或CH₃；

R₄选自下组：H、-CH₃、-OH或F。

在另一优选例中，当X与R₄共同构成N，且Y为C时：

R₁选自下组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-OC₆H₅、-OCH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂CH₂C₆H₅；

R₂选自下组：H、-CH₃、F、Cl、Br；

R₃为H或CH₃。

在另一优选例中，当X为C，且Y与R₃共同构成N时：

R₁选自下组：H、卤素、-CH₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂；

R₂=R₄=H。

本发明的第二方面，提供了一种式A化合物或其药学上可接受的盐的用途，

其中：

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C3～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10烷氧基、取代或未取代的C6～C10芳基、取代或未取代的C1～C10杂芳基；

X、Y为C；或者，

X与R₄共同构成N，而Y为C；或

Y与R₃共同构成N，而X为C；

其特征在于，所述化合物用于选自下组的用途：

(i)用于制备DAAO酶活抑制剂；

(ii)用于制备镇痛药物组合物；

(iii)用于制备预防阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；

(iv)用于制备逆转阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；

(v)用于制备调节中枢体内D-丝氨酸水平的药物组合物；

(vi)用于制备治疗或缓解动物的精神病症状的药物组合物；或

(vii)用于体外非治疗性抑制DAAO酶活性。

在另一优选例中，所述式A化合物抑制DAAO酶活性的IC₅₀≤50μM，较佳地IC₅₀≤20μM，更佳地IC₅₀≤10μM，最佳地IC₅₀≤5μM。

在另一优选例中，所述DAAO酶选自下组：人DAAO酶、猪DAAO酶、大鼠DAAO酶，或其组合。

在另一优选例中，所述阿片类药物为吗啡。

本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括(a)药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药作为活性成分以及(b)药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物的重量百分比为0.1～99%，较佳地为10%～80%，更佳地为30%～75%。

在另一优选例中，所述的药物组合物是口服制剂或注射剂。

在另一优选例中，所述的药物组合物还包括阿片类药物和/或D-丝氨酸。

在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物与阿片类药物的质量比为1：0.001-1000，较佳地为1：0.01-100，更佳地为1：0.1-10。

在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物与D-丝氨酸的摩尔比为1：0.1-100000，较佳地为1:1-10000，最佳地为1:1-1000。

在另一优选例中，所述的药物组合物用于选自下组的用途：

(i)抑制DAAO酶活性；

(ii)缓解生物体疼痛；

(iii)用于预防阿片类药物镇痛耐受作用；

(iv)用于逆转阿片类药物镇痛耐受作用；

(v)用于调节中枢体内D-丝氨酸水平；

(vi)用于治疗或缓解动物的精神病症状。

在另一优选例中，所述的疼痛是福尔马林诱导的疼痛或神经源性疼痛。

本发明的第四方面，提供了一种制备如本发明第三方面所述的药物组合物的方法，所述方法包括步骤：

将药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合，形成药物组合物。

在另一优选例中，所述式A化合物或其药学上可接受的盐占药物组合物的重量百分比为0.1～99%。

在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体选自下组：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、二甲基亚砜及其组合。

本发明的第五方面，提供了一种体外非治疗性抑制DAAO酶活性的方法，所述方法包括：对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或前药，和/或本发明第三方面所述的药物组合物。

在另一优选例中，所述方法对DAAO酶活性的最大抑制率为100%。

在另一优选例中，所述抑制对象是含DAAO酶的溶液或细胞。

本发明的第六方面，一种如式A’所示的中间体化合物：

其中：

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C3～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10烷氧基、取代或未取代的C6～C10芳基、取代或未取代的C1～C10杂芳基；

R₅、R₆各自独立地选自下组：胺基、硝基、C1-C4的酰胺基；

X、Y为C；或者，

X与R₄共同构成N，而Y为C；或

Y与R₃共同构成N，而X为C。

在另一优选例中，所述的R₅、R₆各自独立地选自下组：-NH₂、-NO₂，或-NH-C(O)-CH₃。

在另一优选例中，所述的R₂、R₃各自独立地选自下组：F原子或氢原子。

在另一优选例中，R₁、R₄各自独立地选自下组：C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、苯基取代的C1-C4烷氧基。

在另一优选例中，所述的化合物选自下组：

本发明的第七方面，提供了如本发明第一方面所述的式A化合物的制法，其特征在于，包括以下步骤：

在惰性溶剂中，用式VII化合物与

反应，得到式A化合物；

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、X、Y的定义如本发明第一方面中所述；

R₈、R₉各自独立地选自下组：羟基、卤素、取代或未取代的C1～C6的烷氧基。

在另一优选例中，所述惰性溶剂是酸性溶剂，较佳地，所述的惰性溶剂为盐酸溶液。

在另一优选例中，所述反应在回流温度下进行；较佳地，所述的回流温度为40～150℃。

在另一优选例中，所述式VII化合物通过以下步骤制备：

在还原试剂和任选的酸或碱的存在下，用式V化合物进行还原反应，得到式VII化合物；

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、X、Y的定义如本发明第一方面中所述；

R₅、R₆各自独立地选自下组：胺基、硝基、或-NH-R’；其中，R’为取代基，较佳地选自下组：硝基、C1～C5的酰基，附加条件是R₅和R₆不同时为胺基。

在另一优选例中，所述的还原试剂选自下组：钯碳/氢、氯化亚锡，连二亚硫酸钠，或其组合。

在另一优选例中，所述的碱是碱性氢氧化物，较佳地选自下组：氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾。

在另一优选例中，式V化合物用式I化合物作为原料制备：

在另一优选例中，当X、Y均为C时，所述的式VII化合物通过包括以下步骤的方法制备：

(a1)用式I化合物与

反应，得到式II化合物；

(a2)用式II化合物与硝化试剂反应，得到式IVa化合物；和

(a3)在还原试剂和任选的酸或碱的存在下，用式IVa化合物进行还原反应，得到式VII化合物。

式中，R’为取代或未取代的C1～C5的烷基，或取代或未取代的苯基。

在另一优选例中，所述的硝化试剂选自下组：硝酸/浓硫酸、硝酸/醋酸、硝酸/醋酐，或硝酸/二氯甲烷。

在另一优选例中，当X或Y之一不为C时，所述的式VII化合物通过包括以下步骤的方法制备：

(b1)在硝酸/浓硫酸体系中，用式I化合物反应，得到式Va化合物；

(b2)在还原试剂存在下，用式Va化合物进行还原反应，得到式VII化合物。

在另一优选例中，所述步骤(b1)在低温或高温下进行；较佳地，所述的低温条件为-8～0℃，所述的高温条件为30～50℃。

在另一优选例中，在当所述步骤(b1)低温条件下进行时，所述步骤(b1)为：

式I化合物先转化为式III所示的中间体，再重排形成式Va化合物。

本发明的第八方面，提供了一种抑制或缓解生物体疼痛的方法，所述方法包括：给需要的对象施用有效量的如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或前药，和/或本发明第三方面所述的药物组合物。

本发明的第九方面，提供了一种治疗或缓解动物的精神病症状的方法，所述方法包括：给需要的对象施用有效量的如本发明第一方面所述的化合物或其药学上可接受的盐或前药，和/或本发明第三方面所述的药物组合物。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1，喹喔啉-2,3-二酮类衍生物中化合物16对人、猪和大鼠DAAO酶活性抑制作用。

图2，单次经鞘内给予喹喔啉-2,3-二酮类衍生物中化合物16阻断福尔马林诱导的疼痛实验。

图3，单次经鞘内给予一系列其他喹喔啉-2,3-二酮类衍生物阻断福尔马林诱导的疼痛实验。A.*表明与溶剂组相比，所有化合物差异均有显著性(P<0.05，ANOVA);B.*表明与溶剂组相比，差异有显著性(P<0.05，ANOVA)。

图4，单次经皮下和口服给予喹喔啉-2,3-二酮类衍生物中化合物16阻断福尔马林诱导的疼痛实验。*表明与生理盐水组相比，差异有显著性(P<0.05，ANOVA)。

图5，单次脊髓鞘内注射喹喔啉-2,3-二酮类衍生物中化合物16阻断大鼠神经源性疼痛实验。*表明与生理盐水组相比，差异有显著性(P<0.05，ANOVA)。

图6，连续7日鞘内注射喹喔啉-2,3-二酮类衍生物中化合物16对吗啡镇痛耐受的预防作用(A)。B.鞘内注射喹喔啉-2,3-二酮类衍生物对已形成的吗啡镇痛耐受的逆转作用。*表明与吗啡耐受组相比，差异有显著性(P<0.05，ANOVA)。

具体实施方式

本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现，喹喔啉-2,3二酮及其衍生物可用作DAAO抑制剂，可以用于镇痛或预防/逆转阿片镇痛耐受作用，具有显著的效果。基于上述发现，发明人完成了本发明。

术语

如本文所用，术语“喹喔啉-2,3-二酮类衍生物”指喹喔啉-2,3-二酮或氮杂喹喔啉-2,3-二酮的一个或多个芳环上的氢原子被取代基取代得到的化合物。在本发明中，一类优选的喹喔啉-2,3-二酮类衍生物具有如式A所示的结构：

其中：

X、Y为C；

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C3～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10烷氧基、取代或未取代的C6～C10芳基、取代或未取代的C1～C10杂芳基；

或

X与R₄共同构成N；或

Y与R₃共同构成N。

如本文所用，术语“取代”指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：C1～C6烷基、C3～C6环烷基、C1～C6烷氧基、卤素、羟基、羧基(-COOH)、C1～C6醛基、C2～C6酰基、C2～C6酯基、氨基、苯基；其中，所述的苯基包括未取代的苯基或具有1-3个取代基的取代苯基，所述取代基选自：卤素、C1-C4烷基、氰基、OH、硝基、C3～C4环烷基、C1～C4烷氧基、氨基。

术语“C1～C10烷基”指具有1～10个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。

术语“C3～C10环烷基”指具有3～10个碳原子的环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环庚基、或类似基团。

术语“C6～C10芳基”指具有6～10个碳原子的芳基，包括单环或二环芳基，例如苯基、萘基，或类似基团。

术语“C1～C10杂芳基”指具有1～10个碳原子的杂芳基，例如吡咯基、吡啶基、呋喃基，或类似基团。

术语“C1～C10烷氧基”指具有1-10个碳原子的直链或支链烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、或类似基团。

术语“C1～C5酰基”指具有“-CO-(C1～C5烷基)”结构的基团，例如甲基酰基、乙基酰基、丙基酰基、异丙基酰基、丁基酰基、异丁基酰基、仲丁基酰基、叔丁基酰基、或类似基团。

术语“卤素”指F、Cl、Br和I。

DAAO抑制剂

如本文所用，术语“DAAO抑制剂”指能够用于抑制D-氨基酸氧化酶的酶活性的化合物或组合物。

D-氨基酸氧化酶的酶活性与多类疾病具有关联，如福尔马林诱导产生的疼痛、精神分裂症等一系列与中枢神经相关的疾病。对患有上述疾病的对象施用DAAO抑制剂，能够有效地治疗或改善其疾病。

其中，上述的“治疗”指指疾病或病症或其至少一种可辨的症状的减轻、预防或逆转，与所治疗疾病或病症相关的至少一个可测量身体参数的改善、预防或逆转，抑制或减缓疾病或病症的进展，或延迟疾病或病症的发作。

上述的“改善”某一特定疾病的症状是指任何减轻，无论是永久的，临时的，长期的，短暂的疾病或病症或其至少一种可辨的症状的减轻、预防或逆转。

式A化合物

本发明提供了一种喹喔啉-2,3-二酮类衍生物，具体地，本发明提供了一种如式A所示的化合物：

其中：

X、Y为C；

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C3～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10烷氧基、取代或未取代的C6～C10芳基、取代或未取代的C1～C10杂芳基；

或

X与R₄共同构成N；或

Y与R₃共同构成N。

在另一优选例中，当X、Y为C时：

R₁选自下组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、nBuO-、-OCH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂CH₂C₆H₅；

R₂选自下组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、nBuO-、-OCH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂CH₂C₆H₅；

R₃为H或CH₃；

R₄选自下组：H、-CH₃、-OH或F。

在另一优选例中，当X与R₄共同构成N，Y为C时：

R₁选自下组：H、卤素、-CH₃、-CF₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂、-OC₆H₅、-OCH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂C₆H₅、-OCH₂CH₂CH₂C₆H₅；

R₂选自下组：H、-CH₃、F、Cl、Br；

R₃为H或CH₃。

在另一优选例中，当X为C，Y与R3共同构成N时：

R₁选自下组：H、卤素、-CH₃、-CH₂CH₃、-CH(CH₃)₂、-OCH₃、-OCH₂CH₃、-OCH(CH₃)₂；

R₂=R₄=H。

本发明部分优选的式A化合物如下表所示。

式A化合物的制法

本发明还提供了所述式A化合物的制法，所述方法包括以下步骤：

在惰性溶剂中，用式VII化合物与

反应，得到式A化合物；

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、X、Y的定义如上文中所述；

R₈、R₉选自下组：羟基、卤素、取代或未取代的C1～C6的烷氧基。

在另一优选例中，所述惰性溶剂是酸性溶剂，如较佳地，所述的惰性溶剂为盐酸溶液。

在另一优选例中，所述反应在回流温度下进行；较佳地，所述的回流温度为100～180℃。

所述的制备方法中，各反应物可通过常规方法制备。在另一优选例中，所述式VII化合物通过以下步骤制备：

在还原试剂和任选的酸或碱的存在下，用式V化合物进行反应，得到式VII化合物；

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、X、Y的定义如权利要求1中所述；

R₅、R₆各自独立地选自下组：氨基、硝基、或-NH-R’；其中，R’为取代基，较佳地选自下组：硝基、C1～C5的酰基。

在另一优选例中，所述的还原试剂选自下组：钯碳/氢、氯化亚锡，连二亚硫酸钠，或其组合。

在另一优选例中，所述的碱是碱性氢氧化物，较佳地选自下组：氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾。

在另一优选例中，式V化合物用式I化合物作为原料制备：

在另一优选例中，当X、Y均为C时，所述的式VII化合物通过包括以下步骤的方法制备：

(a1)用式I化合物与

反应，得到式II化合物；

(a2)用式II化合物与硝化试剂反应，得到式IVa化合物；和

(a)在还原试剂和任选的酸或碱的存在下，用式V化合物进行反应，得到式VII化合物。

式中，R’为取代或未取代的C1～C5的烷基、或取代或未取代的苯基。

在另一优选例中，所述的硝化试剂选自下组：硝酸/浓硫酸、硝酸/醋酸、硝酸/醋酐，或硝酸/二氯甲烷。

在另一优选例中，当X或Y为N时，所述的式VII化合物通过包括以下步骤的方法制备：

(b1)在硝酸/浓硫酸体系中，用式I化合物反应，得到式V化合物；

(b)在还原试剂存在下，用式V化合物进行反应，得到式VII化合物。

在另一优选例中，所述步骤(b1)在低温或高温下进行；较佳地，所述的低温条件为-8～0℃，所述的高温条件为30～50℃。

在另一优选例中，在当所述步骤(b1)低温条件下进行时，所述步骤(b1)为：

式I化合物先转化为式III所示的中间体，再重排形成式V化合物。

在另一优选例中，当X=Y=C时，制备喹喔啉-2,3-二酮类衍生物的一般方法按下面合成路线：

(a1)以取代或未取代的苯胺I作为起始原料，I经醋酐或其它酰化试剂酰化得中间体II。

(a2)中间II体在硝酸/浓硫酸或者硝酸/醋酸或者硝酸/醋酐或者硝酸/二氯甲烷体系中硝化经重结晶或柱层析得中间体IVa。

(a3)中间体IVa经盐酸水解或碱性氢氧化物水解或者还原条件脱除酰基得中间体VI。

(a4)中间体VI经钯碳加氢或者氯化亚锡或者保险粉还原得邻苯二胺中间体VII。

或中间体IVa也可经(a3’)先还原硝基；(a4’)再脱除酰基得中间体VII。

(a5)中间体V与草酸在盐酸溶液中回流环合，或者与草酸衍生物环合,得喹喔啉-2,3-二酮A。

在另一优选例中，当X或Y为N时，制备喹喔啉-2,3-二酮类衍生物的一般方法按下面路线：

(当X=C时Y=N，当X=N时Y=C)

(b1)氨基吡啶I在硝酸/浓硫酸体系中低温硝化得中间体III。

(b2)中间体III在浓硫酸中重排得中间体V。或者(b1’)I在硝酸/浓硫酸体系中升温硝化一步得中间体V。

(b3)中间体V经钯碳加氢或者氯化亚锡或者保险粉还原得邻二氨基吡啶中间体VII。

(b4)中间体VII与草酸在盐酸溶液中回流环合，或者与草酸衍生物环合得氮杂喹喔啉-2,3-二酮A。

式A化合物(喹喔啉-2,3-二酮类衍生物)的用途

本发明还提供了如式A所示的喹喔啉-2,3-二酮类衍生物及其盐在DAAO生理、病理和药理研究方面的应用，以及在此基础上制备抗精神分裂症和镇痛药物的应用。

本发明的式A化合物可以用于包括(但并不限于)以下用途：

(i)用于制备DAAO酶抑制剂；

(ii)用于制备镇痛药物组合物；

(iii)用于制备预防阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；

(iv)用于制备逆转阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；

(v)用于制备调节中枢神经系统内D-丝氨酸水平的药物组合物；

(vi)用于制备治疗或缓解动物的精神病症状的药物组合物；

(vii)用于体外非治疗性抑制DAAO酶活性。

式A化合物(喹喔啉-2,3-二酮类衍生物)的药物组合物

本发明还提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括药物有效量的式A化合物，或其药学上可接受的盐或前药。

具体地，在本发明所述的药物组合物中，式A化合物的质量百分比没有特别的限制，可根据药物组合物的用途、用法、施用对象和剂型而有所区别，可以由本领域的技术人员结合本领域的公知常识和本发明的内容而决定。在另一优选例中，上述式A化合物在所述药物组合物中的质量百分比为0.1～99%，较佳地为10%～80%，更佳地为30%～75%。

通常，可将本发明的有效部位配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质，如其他药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、二甲基亚砜及其组合。

配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、局部给药、蛛网膜下腔给药。药物制剂应与给药方式相匹配。

在另一优选例中，本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。本发明的药物组合物也可以制成诸如片剂和胶囊之类的口服制剂形式，上述制剂均可通过常规方法进行制备。

药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约30毫克/千克体重。

本发明的药物组合物可以制成口服和非口服制剂。口服给药可制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等常用剂型，所用的赋型剂可以为淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羟甲基纤维素等中的一种或几种。崩解剂可以为马铃薯淀粉、羟甲基纤维素等中的一种或几种。粘合剂可以为阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、糊精等中的一种或几种。口服制剂除上述剂型外，还可以制成乳剂、糖浆剂等。

非口服制剂可以制成注射剂，可以与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。

此外，本发明的药物组合物还可以与其他组分联用，以达到更佳的治疗效果。例如，当本发明的药物组合物用于调节中枢体内D-丝氨酸水平时，所述的药物组合物还可以包括有效量的D-丝氨酸；当本发明的药物组合物用于缓解生物体疼痛时，上述的药物组合物还包括阿片类药物。

在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物与阿片类药物的质量比为1：0.001-1000，较佳地为1：0.01-100，更佳地为1：0.1-10。

在另一优选例中，所述药物组合物中式A化合物与D-丝氨酸的摩尔比为1：0.1-100000，较佳地为1:1-10000，最佳地为1:1-1000。。

本发明所述的药物组合物可以用于于DAAO酶活性相关的病症，包括(但并不限于)用于选自下组的用途：

(i)抑制DAAO酶活性；

(ii)缓解生物体疼痛；

(iii)用于预防阿片类药物镇痛耐受作用；

(iv)用于逆转阿片类药物镇痛耐受作用；

(v)用于调节中枢神经系统内D-丝氨酸水平；

(vi)用于治疗或缓解动物的精神病症状。

在另一优选例中，所述的疼痛是福尔马林诱导的疼痛或神经源性疼痛。

在本发明的另一优选例中，所述的喹喔啉-2,3-二酮类衍生物用于预防和/或治疗因阿片耐受使得其治疗功效降低的病症，这些病症能够通过抑制D-氨基酸氧化酶达到预防和/或治疗阿片耐受从而得到预防和/治疗。具体来说，所述病症可以是疼痛，包括但不限于急性和/或慢性疼痛，尤其是慢性疼痛。

在一个实施例中，在施用引起慢性疼痛物质和阿片类物质之前、同时或之后施用所述D-氨基酸氧化酶抑制剂。

在另一个实施例中，通过口服或胃肠外途径施用所述D-氨基酸氧化酶抑制剂，例如包括皮下注射，脊髓施用。

本发明所述的药物组合物可以通过本领域的任何常规技术制备，如通过以下方法制备：

将药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合，形成药物组合物。

本发明的主要优点

(1)本发明提供了一类结构新颖的喹喔啉-2,3-二酮衍生物，它们的合成路线设计合理、原料易得，适于应用。

(2)本发明提供的式A化合物可以用于制备一系列用于治疗与DAAO酶活性相关的病症的药物，在缓解生物体疼痛、预防和治疗阿片类药物镇痛耐受作用、用于调节中枢体内D-丝氨酸水平、治疗或缓解动物的精神病症状等方面均有应用价值，且能被用作多种动物的DAAO酶抑制剂，用途广泛。

(3)本发明提供的式A化合物作为DAAO抑制剂具有很高的活性，最低IC₅₀值可≤0.5μm，在极低浓度下即可表现出抑制活性。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例15-乙基喹喔啉-2,3-二酮(1)的制备

将2-乙基苯胺(12.1g,0.1mol)，三乙胺(11.1g,0.11mol)溶于200毫升二氯甲烷中，并置于冰浴中冷却，待温度降至2℃时缓慢滴加乙酸酐(10.7g,0.105mol)。反应液缓慢升至室温并在室温下搅拌5-6小时。反应液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经100毫升溶剂(石油醚/乙酸乙酯=100:1)洗涤得2-乙基-N-乙酰基苯胺(14.9g,收率91.4%)。

将2-乙基-N-乙酰基苯胺(5g,30.67mmol)分散在50毫升冰醋酸/乙酸酐=1:1的混合溶剂里，并置于冰浴中冷却，待温度降至5℃时缓慢滴加65%的硝酸(2.76mL,39.88mmol)。反应液缓慢升至室温并在室温下搅拌10小时。反应液加150克冰水，搅拌1小时。以乙酸乙酯萃取(60mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5:1)得2-乙基-6-硝基-N-乙酰基苯胺(2.35g,收率36.83%)。

将2-乙基-6-硝基-N-乙酰基苯胺(1g,4.8mmol)与25毫升的4N盐酸混合，升温至回流并搅拌3-4小时。反应液以2N氢氧化钠溶液中和，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得2-乙基-6-硝基苯胺(775mg,收率97.1%)。

将2-乙基-6-硝基苯胺(500mg,3.01mmol)溶于20毫升乙酸乙酯/甲醇=8:1的混合溶剂中，氮气氛下加入10%Pd-C(50mg)，反应体系以氢气置换三次，置于室温下搅拌15小时。过滤去除钯碳，滤液浓缩得3-乙基-1,2-苯二胺(405mg,收率98.9%)。

将3-乙基-1,2-苯二胺(200mg,1.47mmol)、二水合草酸(195mg,1.54mmol)与20毫升4N盐酸的混合物，升温至回流并搅拌3-4小时。反应液冷却后以2N氢氧化钠溶液中和，过滤出产生的固体。将固体分散在10毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入1克活性炭，升温至回流，1小时候趁热过滤，向滤液中加入1毫升水，静置冷却1小时，析出的白色固体经过滤，水洗，95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得5-乙基喹喔啉-2,3-二酮白色固体(95mg,收率34%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.13(t,J=7.6Hz,3H),2.77(q,J=7.6Hz,2H),6.94-7.06(m,3H),11.24(s,1H),11.91(s,1H).

实施例25-异丙基喹喔啉-2,3-二酮(2)的制备

操作同实施例1，以2-异丙基苯胺作为起始原料。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.17(d,J=6.8Hz,6H),3.49(m,J=6.8Hz,1H),7.0(dd,J=2.4,6.8Hz,1H),7.06(m,2H),11.22(s,1H),11.90(s,1H).

实施例35,8-二甲基喹喔啉-2,3-二酮(3)的制备

操作同实施例1，以2，5-二甲基苯胺作为起始原料。

核磁共振氢谱：核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:2.31(s,6H),6.85(s,2H),11.12(s,2H).

实施例45-羟基-8-甲基喹喔啉-2,3-二酮(4)的制备

操作同实施例1，以2-甲基-5-羟基苯胺作为起始原料。

核磁共振氢谱：核磁共振氢谱：核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:2.23(s,3H),6.51(d,J=8.0Hz,1H),6.73(s,J=8.0Hz,1H),9.95(s,1H),10.87(s,1H),11.09(s,1H).

实施例55-氟-8-甲基喹喔啉-2,3-二酮(5)的制备

将2-氟-5-甲基苯胺(5g,40mmol)，三乙胺(4.44g,44mmol)溶于80毫升二氯甲烷中，并置于冰浴中冷却，待温度降至1-2℃时缓慢滴加乙酸酐(4.28g,42mmol)。反应液缓慢升至室温并在室温下搅拌5-6小时。反应液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经80毫升溶剂(石油醚/乙酸乙酯=100:1)洗涤得2-氟-5-甲基-N-乙酰基苯胺(6.15g,收率92%)。

将2-氟-5-甲基-N-乙酰基苯胺(1.5g,8.97mmol)分散在15毫升冰醋酸/乙酸酐=1:1的混合溶剂里，并置于冰浴中冷却，待温度降至5℃时缓慢滴加65%的硝酸(1.2g,12.38mmol)。反应液缓慢升至室温并在室温下搅拌10小时。反应液加50克冰水，搅拌1小时。以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=3:1)得2-氟-5-甲基-6-硝基-N-乙酰基苯胺(343mg,收率18.05%)。

将2-氟-5-甲基-6-硝基-N-乙酰基苯胺(160mg,0.75mmol)与15毫升的2N氢氧化钠溶液混合，升温至回流并搅拌2-3小时。反应液以3N盐酸溶液中和，乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5:1)得2-氟-5-甲基-6-硝基苯胺(92mg,收率71.7%)。

将2-氟-5-甲基-6-硝基苯胺(90mg,0.53mmol)溶于10毫升乙酸乙酯/甲醇=8:1的混合溶剂中，氮气氛下加入10%Pd-C(10mg)，反应体系以氢气置换三次，置于室温下搅拌15小时。过滤去除钯碳，滤液浓缩得3-氟-6-甲基-1,2-苯二胺(73mg,收率98.5%)。

将3-氟-6-甲基-1,2-苯二胺(70mg,0.5mmol)溶于10毫升二氯甲烷中，冰浴冷却。待温度降至1-2℃时缓慢滴加草酰氯(47.5μL,0.5mmol)。撤去冰浴缓慢升至室温并搅拌1-2小时，然后升温至回流2小时。反应液静置冷却30分钟，析出的固体经过滤，水洗，95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得5-氟-8-甲基喹喔啉-2,3-二酮类白色固体(79mg,收率81.4%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:2.30(s,3H),6.90(s,1H),6.92(s,1H),11.31(s,1H),11.91(s,1H).

实施例65-乙氧基喹喔啉-2,3-二酮(6)的制备

向2,3-二硝基苯酚(1g,5.43mmol)溶于15毫升N,N-二甲基甲酰胺的溶液中顺序加入溴乙烷(651mg,5.98mmol)，碳酸钾(1.12g,8.15mmol)。反应液升温至50℃并在此温度下搅拌4-5小时。向反应液中加入40克冰水，以乙醚萃取(30mL×3),萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得2,3-二硝基苯基乙基醚粗品(1.05g,收率91.5%)。

将2,3-二硝基苯基乙基醚(1g,4.71mmol)溶于20毫升乙酸乙酯/甲醇=8:1的混合溶剂中，氮气氛下加入10%Pd-C(180mg)，反应体系以氢气置换三次，置于室温下搅拌15小时。过滤去除钯碳，滤液浓缩得3-乙氧基-1,2-苯二胺(694mg,收率96.7%)。

将3-乙氧基-1,2-苯二胺(300mg,1.66mmol)与20毫升草酸二甲酯混合，升温至回流并搅拌3-4小时。反应液冷却后过滤出产生的固体。将固体分散在15毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入1克活性炭，升温至回流，1小时候趁热过滤，向滤液中加入1毫升水，静置冷却1小时，析出的白色固体经过滤，水洗，95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得5-乙氧基喹喔啉-2,3-二酮白色固体(240mg,收率59.1%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.38(t,J=6.8Hz,3H),4.11(q,J=6.8Hz,2H),6.74(q,J=8.0Hz,2H),7.01(t,J=8.0Hz,1H),11.15(s,1H),11.88(s,1H).

实施例75-异丙氧基喹喔啉-2,3-二酮(7)

操作同实施例6，以异丙基溴作为烷化试剂。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.30(d,J=6.0Hz,6H),4.69(m,1H),6.71(dd,J=8.0,0.8Hz,1H),6.80(d,J=8.0Hz,1H),7.0(t,J=8.0Hz,1H),11.06(s,1H),11.89(s,1H).

实施例85-正丁氧基喹喔啉-2,3-二酮(8)

操作同实施例6，以正丁基溴作为烷化试剂。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:0.94(t,J=7.2Hz,3H),1.48(m,2H),1.76(m,2H),4.03(t,J=6.4Hz,2H),6.74(m,2H),7.01(d,J=8.0Hz,1H),11.17(s,1H),11.88(s,1H).

实施例95-苄氧基喹喔啉-2,3-二酮(9)

操作同实施例6，以氯化苄作为烷化试剂。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:5.25(s,2H),6.72(d,J=8.0Hz,1H),6.85(d,J=8.0Hz,1H),6.99(t,J=8.0Hz,1H),7.35(m,3H),7.55(d,J=8.0Hz,2H),11.25(s,1H),11.90(s,1H).

实施例106-苄氧基喹喔啉-2,3-二酮(10)

操作同实施例6，以3,4-二硝基苯酚作为起始原料，氯化苄作为烷化试剂。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:5.06(s,2H),6.74(d,J=2.8Hz,1H),6.79(dd,J=8.8,2.8Hz,1H),7.04(d,J=8.8Hz,1H),7.39(m,5H),11.78(s,1H),11.83(s,1H).

实施例118-甲基-6-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(11)

在-8℃和搅拌下将4-氨基-3-甲基吡啶(3g,27.74mmol)分批加入到30毫升浓硫酸中，当固体完全溶解后缓慢滴加发烟硝酸(1.60mL,36.1mmol)，缓慢升至50℃并继续搅拌1小时。将反应液倒入200克冰水中，以浓氨水调节pH=8-9，过滤产生的黄色固体。黄色固体经重结晶(石油醚/乙酸乙酯=5:1)得4-氨基-3-甲基-5-硝基吡啶(3.5g,收率82.3%)。

将4-氨基-3-甲基-5-硝基吡啶(1.5g,9.79mmol)溶解于20毫升95%乙醇中，加入氯化亚锡(5.57g,29.38mmol)。反应液升温至回流并在此温度下搅拌2-3小时。将反应液倒入100毫升2N氢氧化钠溶液中，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=4:1)得3,4-二氨基-5-甲基吡啶(517mg,收率42.9%)。

将3,4-二氨基-5-甲基吡啶(413mg,3.35mmol)与20毫升草酸二甲酯混合，升温至回流并搅拌3-4小时。反应液冷却后过滤出产生的固体。将固体分散在15毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入1克活性炭，升温至回流，1小时候后趁热过滤，向滤液中加入1毫升水，静置冷却1小时，析出的白色固体经过滤，水洗，95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得8-甲基-6-氮杂喹喔啉-2,3-二酮白色固体(434mg,收率73.1%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:2.11(s,3H),8.03(s,1H),8.19(s,1H),11.62(s,1H),12.02(s,1H).

实施例128-乙基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(12)

向4-乙基吡啶(10.7g,100mmol)溶解在100毫升二甲苯的溶液中加入氨基钠(4.68g,120mmol)。反应液升温至回流并在此温度下搅拌15小时。反应液在冰浴下以100毫升甲醇/水的混合溶剂小心处理，浓缩后得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5:3)，重结晶(石油醚/乙酸乙酯=10:1)得2-氨基-4-乙基吡啶(3.6g,收率29.5%)。

在-8℃和搅拌下将2-氨基-4-乙基吡啶(2g,16.4mmol)分批加入到10毫升浓硫酸中，当固体完全溶解后缓慢滴加65%硝酸(2mL,28.8mmol)，反应液在0℃下继续搅拌1小时。将反应液倒入60克冰水中，以浓氨水调节pH=3，过滤出白色固体，并以水、80%乙醇洗涤得2-硝胺基-4-乙基吡啶(2.54g,收率92.6%)。

0℃下将2-硝胺基-4-乙基吡啶(2.54g,15.2mmol)分批加入到15毫升浓硫酸中，反应液缓慢升至55℃并搅拌2小时。将反应液倒入100克冰水中，以浓氨水调节pH=9-10，过滤产生的固体，固体经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5:1)得2-氨基-3-硝基-4-乙基吡啶(665mg,收率26.2%)。

将4-氨基-3-甲基-5-硝基吡啶(660mg,3.95mmol)溶解于20毫升95%乙醇中，加入氯化亚锡(2.25g,11.84mmol)。反应液升温至回流并在此温度下搅拌2-3小时。将反应液倒入60毫升2N氢氧化钠溶液中，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=4:1)得2,3-二氨基-4-乙基吡啶(308mg,收率56.84%)。

将2,3-二氨基-4-乙基吡啶(305mg,2.22mmol)与20毫升草酸二甲酯混合，升温至回流并搅拌3-4小时。反应液冷却后过滤出产生的固体。将固体分散在15毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入1克活性炭，升温至回流，1小时候后趁热过滤，向滤液中加入1毫升水，静置冷却1小时，析出的白色固体经过滤，水洗，95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得8-乙基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮白色固体(187mg,收率44.1%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.15(t,J=7.6Hz,3H),2.79(q,J=7.6Hz,2H),7.02(d,J=5.2Hz,1H),8.00(d,J=5.2Hz,1H),11.48(s,1H),12.28(s,1H).

实施例138-溴-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(13)的制备

在-8℃和搅拌下将2-氨基-5-溴吡啶(5g,28.9mmol)分批加入到40毫升浓硫酸中，当固体完全溶解后缓慢滴加发烟硝酸(1.68mL,37.57mmol)，并继续搅拌20分钟，过程温度不超过-5℃。将反应液倒入250可冰水中，以浓氨水调节pH=3，过滤出白色固体，并以水洗、80%乙醇洗，空气中晾干得2-硝胺基-4-溴吡啶(6.25g,收率99.2%)。

在0℃和搅拌下将2-硝胺基-4-溴吡啶(3g,13.76mmol)分批加入到30毫升浓硫酸中，缓慢升至40℃并搅拌1小时。将反应液倒入200克冰水中，以浓氨水调节pH=8-9，过滤产生的黄色固体。黄色固体经硅胶柱层析(二氯甲烷/甲醇=100:1)得2-氨基-3-硝基-4-溴吡啶(1.34g,收率44.7%)。

将2-氨基-3-硝基-4-溴吡啶(1g,4.59mmol)溶解于20毫升95%乙醇中，加入氯化亚锡(2.61g,13.76mmol)。反应液升温至回流并在此温度下搅拌2-3小时。将反应液倒入80毫升1N氢氧化钠溶液中，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5:1)得2,3-二氨基-4-溴吡啶(322mg,收率37%)

将2,3-二氨基-4-溴吡啶(320mg,1.7mmol)与20毫升草酸二甲酯混合，升温至回流并搅拌3-4小时。反应液冷却后过滤出产生的固体。将固体分散在15毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入1克活性炭，升温至回流，1小时候后趁热过滤，向滤液中加入1毫升水，静置冷却1小时，析出的白色固体经过滤，水洗，95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得8-溴-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮白色固体(332mg,收率80.6%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:7.42(d,J=5.2Hz,1H),7.92(d,J=5.2Hz,1H),11.38(s,1H),12.46(s,1H).

实施例148-三氟甲基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(16)的制备

操作同实施例13，以2-氨基-4-三氟甲基吡啶为起始原料。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:7.38(d,J=4.8Hz,1H),8.17(d,J=4.8Hz,1H),11.62(s,1H),12.60(s,1H).

实施例158-氯-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(14)的制备

操作同实施例13，以2-氨基-4-氯吡啶为起始原料。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:7.29(d,J=5.2Hz,1H),8.01(d,J=5.2Hz,1H),11.74(s,1H),12.50(s,1H).

实施例168-甲氧基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(15)的制备

将2-氨基-3-硝基-4-溴吡啶(300mg,1.38mmol)溶解于15毫升无水甲醇中，氮气氛下加入甲醇钠(149mg,2.75mmol)。反应液升温至回流并在此温度下搅拌1小时。将反应液浓缩干并加入10毫升碳酸氢钠溶液，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=4:1)得2-氨基-3-硝基-4-甲氧基吡啶(202mg,收率86.5%)。

将2-氨基-3-硝基-4-甲氧基吡啶(200mg,1.18mmol)溶解于20毫升95%乙醇中，加入氯化亚锡(673mg,3.55mmol)。反应液升温至回流并在此温度下搅拌2-3小时。将反应液倒入30毫升1N氢氧化钠溶液中，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5:1)得2,3-二氨基-4-甲氧基吡啶(110mg,收率67%)。

将2,3-二氨基-4-甲氧基吡啶(100mg,0.72mmol)与12毫升草酸二甲酯混合，升温至回流并搅拌3-4小时。反应液冷却后过滤出产生的固体。固体经95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得8-甲氧基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮白色固体(78mg,收率55.56%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:3.93(s,3H),6.91(d,J=5.6Hz,1H),8.00(d,J=5.6Hz,1H),11.50(s,1H),12.23(s,1H).

实施例178-乙氧基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(17)的制备

操作同实施例16，以乙醇钠替换甲醇钠。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.39(t,J=7.2Hz,3H),4.21(q,J=7.2Hz,2H),6.89(d,J=5.6Hz,1H),7.97(d,J=5.6Hz,1H),11.43(s,1H),12.22(s,1H).

实施例188-异丙氧基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(18)的制备

操作同实施例16，以异丙醇钠替换甲醇钠。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:1.33(d,J=6.0Hz,6H),4.82(m,J=6.0Hz,1H),6.91(d,J=5.6Hz,1H),7.95(d,J=5.6Hz,1H),11.38(s,1H),12.21(s,1H).

实施例198-苯乙氧基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(19)的制备

操作同实施例16，以苯乙醇钠替换甲醇钠。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:3.14(t,J=6.8Hz,2H),4.35(t,J=6.8Hz,2H),6.92(d,J=5.6Hz,1H),7.2-7.43(m,5H),7.95(d,J=5.6Hz,1H),11.48(s,1H),12.23(s,1H).

实施例208-苯丙氧基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(20)的制备

操作同实施例16，以苯丙醇钠替换甲醇钠。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:2.08(m,2H),2.85(t,J=6.0Hz,2H),4.14(t,J=6.0Hz,2H),6.87(d,J=5.6Hz,1H),7.15-7.33(m,5H),7.97(d,J=5.6Hz,1H),11.59(s,1H),12.26(s,1H).

实施例218-苯氧基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(21)的制备

将2-氨基-3-硝基-4-溴吡啶(142mg,0.82mmol)溶解于3毫升N,N-二甲基甲酰胺/水=10:1的混合溶剂中，氮气氛下顺序加入苯硼酸(110mg,0.9mmol)，1,1’-双(二苯基膦)二茂铁氯化钯(30mg,0.041mmol)，碳酸钾(339mg，2.46mmol)。反应液升温至100℃并在此温度下搅拌3小时。将反应液倒入20克冰水中，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=4:1)得2-氨基-3-硝基-4-苯氧基吡啶(87mg,收率45.9%)。

将2-氨基-3-硝基-4-苯氧基吡啶(85mg,0.37mmol)溶解于10毫升95%乙醇中，加入氯化亚锡(209mg,1.1mmol)。反应液升温至回流并在此温度下搅拌2-3小时。将反应液倒入30毫升1N氢氧化钠溶液中，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=5:1)得2,3-二氨基-4-苯氧基吡啶(53mg,收率71.2%)。

将2,3-二氨基-4-苯氧基吡啶(53mg,0.26mmol)与10毫升草酸二甲酯混合，升温至回流并搅拌3-4小时。反应液冷却后过滤出产生的固体。固体经95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得8-苯氧基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮类白色固体(49mg,收率73.85%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:6.49(d,J=5.6Hz,1H),7.20(m,2H),7.29(m,1H),7.49(m,2H),7.94(d,J=5.6Hz,1H),11.91(s,1H),12.38(s,1H).

实施例227-氟-8甲基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮(22)

在0℃和搅拌下将2-氨基-4-甲基-5-氟吡啶(1g,7.93mmol)分批加入到15毫升浓硫酸中，当固体完全溶解后缓慢滴加发烟硝酸(0.43mL,10.3mmol)，缓慢升至50℃并继续搅拌1小时。将反应液倒入100克冰水中，以浓氨水调节pH=9-10，过滤产生的黄色固体。黄色固体经重结晶(石油醚/乙酸乙酯=5:1)得2-氨基-3-硝基-4-甲基-5-氟吡啶(1.1g,收率81%)。

将2-氨基-3-硝基-4-甲基-5-氟吡啶(500mg,2.92mmol)溶解于20毫升95%乙醇中，加入氯化亚锡(1.66g,8.76mmol)。反应液升温至回流并在此温度下搅拌2-3小时。将反应液倒入100毫升2N氢氧化钠溶液中，以乙酸乙酯萃取(30mL×3)，萃取液经食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得粗品。粗品经硅胶柱层析(石油醚/乙酸乙酯=4:1)得2,3-二氨基-4-甲基-5-氟吡啶(280mg,收率67.9%)。

将2,3-二氨基-4-甲基-5-氟吡啶(200mg,1.42mmol)与15毫升草酸二乙酯混合，升温至回流并搅拌4小时。反应液冷却后过滤出产生的固体。将固体分散在15毫升N,N-二甲基甲酰胺中，加入1克活性炭，升温至回流，1小时候后趁热过滤，向滤液中加入1毫升水，静置冷却1小时，析出的白色固体经过滤，水洗，95%乙醇洗，乙酸乙酯洗得7-氟-8甲基-5-氮杂喹喔啉-2,3-二酮白色固体(104mg,收率37.5%)。

核磁共振氢谱：¹HNMR,400MHz,DMSO:2.30(d,J=1.6Hz,3H),8.04(s,1H),11.64(s,1H),12.33(s,1H).

生物活性研究

实施例23体外测定喹喔啉-2,3-二酮类化合物对人、猪和大鼠人DAAO酶活性抑制作用

1)取Wistar大鼠，断头处死，手术分离其脊髓，每1g组织加入3mLTris-HCl匀浆液，4℃冰浴下1000r/sec匀浆15秒。匀浆液4000rpm，4℃离心10分钟，上清极为组织脊髓粗酶液。对照管、空白管加入25μL Tris-HCl缓冲液，抑制剂管加入25μL多种浓度的喹喔啉-2,3-二酮类化合物。空白管加入50μLTirs-HCl缓冲液，其他管加入50μL15mM D型丙氨酸底物。各组加入50μL大鼠脊髓粗酶液启动反应，反应置于37℃恒温摇床上进行，摇动频率为700rpm。60分钟后加入50μL25%三氯乙酸终止反应，并置于冰上。2)按8.2UI/ml的浓度配制猪DAAO酶储备液，使用时稀释10倍作为工作液使用。对照管、空白管加入25μL Tris-HCl缓冲液，抑制剂管加入25μL多种浓度的喹喔啉-2,3-二酮类化合物。空白管加入50μL Tirs-HCl缓冲液，其他管加入50μl2.5mM D型丙氨酸底物。各组加入50μL0.82UI/mL猪DAAO酶工作液启动反应，反应置于37℃恒温摇床上进行，摇动频率为700rpm。5分钟后加入50μL25%三氯乙酸终止反应，并置于冰上。3)按0.02mg/mL的浓度配制人DAAO酶工作液，0.08mg/mL的浓度配制FAD工作液。对照管、空白管加入25μL Tris-HCl缓冲液，抑制剂管加入25μL多种浓度的喹喔啉-2,3-二酮类化合物。空白管加入50μL Tirs-HCl缓冲液，其他管加入50μL2.5mM D型丙氨酸底物。各组加入25μL0.02mg/mL人DAAO酶工作液和25μL0.08mg/mL FAD工作液启动反应，反应置于37℃恒温摇床上进行，摇动频率为700rpm。60分钟后加入50μL25%三氯乙酸终止反应，并置于冰上。

上述反应液震荡混匀后4℃14000rpm离心5分钟。取50μL离心上清液，加入50μL1mM2,4-二硝基苯肼显色液，震荡混匀，置于37℃恒温摇床反应10分钟，摇动频率为700rpm。加入100μL1.5M氢氧化钠溶液，置于37℃恒温摇床反应10分钟，摇动频率为700rpm。取出100μL反应液，加入96孔板中，在酶标仪上于450nm波长读数。按抑制率%=(对照管吸光率-抑制管吸光率)/(对照管吸光率-空白管吸光率)*100计算抑制率。以抑制剂浓度的Log对数值为横坐标，以抑制率为纵坐标作图，计算半数抑制剂量IC₅₀.

结果表明，化合物16对人、猪和大鼠DAAO酶抑制作用均呈浓度依赖式，最大抑制达100%(图1)。其抑制人、猪和大鼠DAAO酶活性IC₅₀分别为0.21μM、0.18μM和0.14μM。其他13个化合物对人、猪和大鼠DAAO酶抑制作用均亦呈浓度依赖式，最大抑制率达100%，相应IC₅₀值见表1。

表1 喹喔啉-2,3-二酮类衍生物对人、猪和大鼠DAAO酶活性抑制作用

实施例24单次脊髓鞘内注射喹喔啉-2,3-二酮类衍生物化合物16对福尔马林诱导的疼痛的影响

雄性Wistar大鼠(体重150-170g，上海中国科学院实验动物中心)，分为5组，每组6只。分别脊髓鞘内单剂量注射生理盐水(10μL)、化合物16(0.1μg/10μL)、化合物16(0.3μg/10μL)、化合物16(1μg/10μL)和化合物16(3μg/10μL)。30分钟后大鼠右后足背注射50μL5%福尔马林致痛，在福尔马林注射后0-90分钟间，每隔十分钟观察1分钟内大鼠抬脚或抖脚次数作为疼痛指标。0-1分钟为I相疼痛反应而20-90分钟为II相疼痛反应。实验结果如图2A所示，大鼠鞘内单剂量注射化合物16能剂量依赖式的抑制福尔马林诱导的II相疼痛。E_max和ED₅₀分别为67.1%和0.25μg(图2B)。

实施例25单次脊髓鞘内注射一系列其他喹喔啉-2,3-二酮类化合物对福尔马林诱导的疼痛的影响

雄性Wistar大鼠(题中150-170g，上海中国科学院实验动物中心)，分为6组，每组5只。分别脊髓鞘内单剂量注射溶剂(10μL)、化合物13(3μg/10μL)、化合物22(3μg/10μL)、化合物23(3μg/10μL)、化合物28(3μg/10μL)和化合物29(3μg/10μL)。30分钟后大鼠右后足背注射50μL5%福尔马林致痛，在福尔马林注射后0-90分钟间，每隔十分钟观察1分钟内大鼠抬脚或抖脚次数作为疼痛指标。0-1分钟为I相疼痛反应而20-90分钟为II相疼痛反应。实验结果如图3A所示，大鼠鞘内单剂量注射这些喹喔啉-2,3-二酮类衍生物能抑制福尔马林诱导的疼痛，在30-40分钟抑制效果很明显(均有统计学显著性差异)。以AUC计算，鞘内单剂量注射这些喹喔啉-2,3-二酮类衍生物均能显著性地抑制福尔马林诱导II相疼痛(图3B)。

实施例26单次皮下和口服注射喹喔啉-2,3-二酮类衍生物中化合物16对福尔马林诱导的疼痛的影响

雄性Swiss小鼠(体重20-25g，上海斯莱克实验动物责任有限公司)，自由饮水，进食，分为7组，每组6只。第1-6组分别皮下注射生理盐水(10mL/kg)、化合物16(0.3mg/10mL/kg)、化合物16(1mg/10mL/kg)、化合物16(3mg/10mL/kg)、化合物16(10mg/10mL/kg)和化合物16(30mg/10mL/kg)；第7组经口服给予化合物16(10mg/10mL/kg)。给药30分钟后小鼠右后足背注射10μl5%福尔马林致痛，小鼠持续舔足时间作为疼痛指标。在福尔马林注射后0-5分钟(I相疼痛反应)和20-40分钟(II相疼痛反应)。实验结果如图4A和4B所示，表明在皮下注射化合物16对福尔马林对II相疼痛有抑制作用，镇痛作用呈现剂量依赖式，E_max和ED₅₀分别为49%和1.8mg/kg(图4C)。化合物16经口服亦显著抑制福尔马林诱导的II相疼痛。

实施例27单次脊髓鞘内注射喹喔啉-2,3-二酮类衍生物中化合物16对大鼠神经源性疼痛的镇痛作用

雄性Wistar大鼠(体重180-200g)，购自上海中国科学院实验动物中心，清洁级，动物许可证号为：SCXK(沪)2007-0005。大鼠适应环境后，先用异氟烷吸入式麻痹(4%诱导，1%维持)。待动物完全麻醉后，俯卧位放置于手术台上，以髂骨连线与脊柱交汇处为中心，置大鼠于腹卧位，平髂棘(L6)，用手术刀沿着背部正中间上下各1.5cm切开皮肤，量取适当长度的(大约25cm)一段PE-10管(内径0.28mm，外径：0.61mm)。导针插入位置为L5和L6脊椎骨间隙，即约位于两髂骨连线与脊柱交汇处。

同时可以制作L5/L6脊神经紧结扎模型(Chung Model)。在背部正中间切开皮肤处，在L4～S2之间钝性分离左侧椎旁肌肉，暴露L6横突和骶骨夹角，去除L6部分横突，露出L4和L5脊神经，分离出L5，并用6号丝线紧紧结扎，然后在骶骨夹角处分离出L6脊神经，也用6号丝线紧紧结扎。手术后将动物放置37℃温垫上复温，待其苏醒后，再放回动物房单笼饲养。术后第二天用利多卡因(200μg in10μL)硬膜外注射，15μL生理盐水冲洗以证实插管成功，保留给予利多卡因后双后肢立即瘫痪并在15min内恢复行动的大鼠进入实验。

将术后1-2周模型大鼠放置于机械性痛阈检测架上，使模型大鼠适应检测环境15-30min，待其梳理和探究活动基本消失，比较安静时，用电子机械性痛阈检测仪器(安装15号纤维，量程为65g)垂直刺激大鼠后肢足底中部。大鼠在刺激过程中出现迅速的抬脚或缩足反应，或者大鼠扭头舔后肢，记为阳性反应。记录大鼠手术侧(左侧)抬脚或缩足反应时的最小值作为痛阈。每隔5min测试一次，重复测试两次。取三次检测的平均值作为大鼠该足的机械性疼痛阈值(paw withdrawal threshold,PWT)。手术侧后肢缩足反应阈值<8g，并且没有明显运动性障碍的大鼠被认为模型制备成功，用于进一步的试验。

同时将实验动物放置于辐射热痛检测架上，使实验动物适应检测环境15-30min，辐射热源垂直放置于大鼠后肢脚掌处的玻璃板下方，从脚掌开始接受辐射热到大鼠突然添/咬或抬脚、或缩足为其受辐射热刺激后痛觉阈值，用缩脚反应潜伏期(paw withdrawal latency，PWL)表示。大鼠的每只脚掌3次，每隔10min检测一次，取3次测定的平均值作为该脚掌的PWL。为了避免实验动物脚掌的热损伤，将20sec设为截止(cut-off)值。

为了探索化合物16对神经源痛的镇痛作用，在L5/L6脊神经结扎手术后约1-3周，选取造模成功的神经源痛大鼠分成2组(每组6只)：分别为生理盐水组(10μL)和化合物16组(30μg，10μL)。然后用50μl微量注射器(带有自制的针头，该针头连接一小段PE-10导管，导管另一端连接50μl微量注射器)通过插入硬膜外PE-10管，缓慢(大约10s)注射，紧随其后注射15μL医用生理盐水冲洗PE-10管，拔出微量注射器针头，再一次熔封PE-10管。分别检测给药前及给药后0.5、1、2和4h这5个时间点的大鼠双侧后肢爪机械性痛阈和辐射热痛敏的变化。

实验结果如图5A和5B所示，在给药后0.5h和1h后，化合物16组的机械性疼痛阈值(图5A)和缩脚反应潜伏期(图5B)与生理盐水组相比有显著性提高(P<0.05，双因素方差分析)，并且PWL在2h后逐渐恢复到给药前水平，而PWT在4h后恢复到给药前水平。化合物16组在给药后0.5，1，2和4h后对非手术侧后肢爪的PWT和PWL均无明显影响。结果表明，髓鞘内注射化合物16能明显减轻神经源性大鼠的机械性痛超敏和辐射热痛超敏。

实施例28脊髓鞘内注射喹喔啉-2,3-二酮类衍生物中化合物16对吗啡耐受作用的预防和逆转作用

雄性Wistar大鼠(体重150-170g，上海中国科学院实验动物中心)，分为4组，每组6只。第1组鞘内注射生理盐水(10μL/大鼠)，每天两次，每次间隔12小时，连续7天；第2、3组鞘内注射吗啡(10μg/20μL/大鼠)，每天两次，每次间隔12小时，连续7天；第4组鞘内注射化合物16(10μg/20μL)和吗啡(10μg/20μL)混合物，每天两次，每次间隔12小时，连续7天。分别于第1、3、5和7天检测大鼠10:00am给药后热板痛阈值在0、0.5、1和2小时的变化。比较不同药物对大鼠热板疼痛的影响，并计算阈值净值和2小时内曲线下面积(AUC)。实验结果如图6A所示，连续7日鞘内注射吗啡产生明显耐受性(第2、3组)，连续7日鞘内注射化合物16能抑制吗啡耐受的形成(第4组)。

第8天第1组给予生理盐水(20μL)；第2组给予吗啡(10μg/20μL)；第3、4组给予化合物16(10μg/20μL)和吗啡(10μg/20μL)混合物。均于8天10:00am检测大鼠给药后热板痛阈值在0、0.5、1和2小时的变化。比较不同药物对大鼠热板疼痛的影响。实验结果如图6B所示，长期给予吗啡产生镇痛作用耐受(第2组)，单剂量鞘内注射化合物16能逆转已形成的吗啡镇痛耐受(第3组)。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种如式A所示的化合物，或其药学上可接受的盐，

其中：

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C3～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10烷氧基、取代或未取代的C6～C10芳基、取代或未取代的C1～C10杂芳基；

X、Y为C；或者，

X与R₄共同构成N，而Y为C；或

Y与R₃共同构成N，而X为C。

2.一种式A化合物或其药学上可接受的盐的用途，

其中：

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C3～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10烷氧基、取代或未取代的C6～C10芳基、取代或未取代的C1～C10杂芳基；

X、Y为C；或者，

X与R₄共同构成N，而Y为C；或

Y与R₃共同构成N，而X为C；

其特征在于，所述化合物用于选自下组的用途：

(i)用于制备DAAO酶活抑制剂；

(ii)用于制备镇痛药物组合物；

(iii)用于制备预防阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；

(iv)用于制备逆转阿片类药物镇痛耐受作用的药物组合物；

(v)用于制备调节中枢体内D-丝氨酸水平的药物组合物；

(vi)用于制备治疗或缓解动物的精神病症状的药物组合物；或

(vii)用于体外非治疗性抑制DAAO酶活性。

3.一种药物组合物，其特征在于，包括(a)药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药作为活性成分以及(b)药学上可接受的载体。

4.如权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物还包括阿片类药物和/或D-丝氨酸。

5.如权利要求3或4所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物用于选自下组的用途：

(i)抑制DAAO酶活性；

(ii)缓解生物体疼痛；

(iii)用于预防阿片类药物镇痛耐受作用；

(iv)用于逆转阿片类药物镇痛耐受作用；

(v)用于调节中枢体内D-丝氨酸水平；

(vi)用于治疗或缓解动物的精神病症状。

6.一种制备如权利要求3所述的药物组合物的方法，其特征在于，包括步骤：

将药物有效量的式A化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合，形成药物组合物。

7.一种体外非治疗性抑制DAAO酶活性的方法，其特征在于，所述方法包括：对抑制对象施用抑制有效量的如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或前药，和/或权利要求3所述的药物组合物。

8.一种如式A’所示的中间体化合物：

其中：

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自下组：H、卤素、取代或未取代的C1～C10烷基、取代或未取代的C3～C10环烷基、取代或未取代的C1～C10烷氧基、取代或未取代的C6～C10芳基、取代或未取代的C1～C10杂芳基；

R₅、R₆各自独立地选自下组：胺基、硝基、C1-C4的酰胺基；

X、Y为C；或者，

X与R₄共同构成N，而Y为C；或

Y与R₃共同构成N，而X为C。

9.如权利要求1所述的式A化合物的制法，其特征在于，包括以下步骤：

在惰性溶剂中，用式VII化合物与

反应，得到式A化合物；

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、X、Y的定义如权利要求1中所述；

R₈、R₉各自独立地选自下组：羟基、卤素、取代或未取代的C1～C6的烷氧基。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述式VII化合物通过以下步骤制备：

在还原试剂和任选的酸或碱的存在下，用式V化合物进行还原反应，得到式VII化合物；

上述各式中，R₁、R₂、R₃、R₄、X、Y的定义如权利要求1中所述；

R₅、R₆各自独立地选自下组：胺基、硝基、或-NH-R’；其中，R’为取代基，较佳地选自下组：硝基、C1～C5的酰基，附加条件是R₅和R₆不同时为胺基。

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