CN102311448B - 噻吩并嘧啶酮类dpp-iv抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体地涉及以噻吩并嘧啶酮为母核的化合物或其盐、其制备方法、组合物以及这类化合物作为二肽基肽酶(DPP-IV)抑制剂在预防或治疗受益于DPP-IV抑制的疾病中的用途。本发明化合物制备工艺简单，原料易得，适合工业化大规模生产，并且经体外实验验证，其对DPP-Ⅳ具有非常好的选择性抑制作用，在有效抑制DPP-Ⅳ活性的同时，对DPP-Ⅷ和DPP-Ⅸ的活性几乎没有影响，可以预见本发明化合物开发成药后毒性将非常低，具有突出的优势。

Description

噻吩并嘧啶酮类DPP-IV抑制剂

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地涉及一种以噻吩并嘧啶酮为母核的化合物或其盐、其制备方法、组合物以及这类化合物作为二肽基肽酶(DPP-IV)抑制剂在预防或治疗受益于DPP-IV抑制的疾病中的用途。

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一种多病因的代谢性疾病，是由于胰岛素的绝对或相对不足造成血糖升高而引起机体代谢紊乱。它可以分为胰岛素依赖型糖尿病(insulindependent diabetes mellitus，IDDM，即Ⅰ型糖尿病)和非胰岛素依赖型糖尿病(noninsulindependent diabetes mellitus，NIDDM，即II型糖尿病)，其中II型糖尿病最为常见，占糖尿病病人的90％以上。目前糖尿病治疗药物的研究多是针对II型糖尿病展开的。传统的降糖药物种类繁多，主要有三大类：胰岛素增敏剂，包括双胍类(如二甲双胍)和噻唑烷二酮类(如吡格列酮)；胰岛素促分泌剂，包括磺酰脲类(如格列吡嗪)；以及α-葡萄糖苷酶抑制剂(如阿卡波糖)等。

上述传统降糖药一般都伴有体重增加、低血糖等副作用以及药效逐渐降低等问题，因此迫切需要开发新型的药物。二肽基肽酶(Dipeptidyl peptidase-IV，DPP-IV)抑制剂是最新一代的抗糖尿病药物，是基于胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的治疗药物，能够有效控制血糖而不增加体重，不引起低血糖等副作用，为糖尿病的治疗带来了希望。

DPP-IV是一种广泛分布于体内的糖蛋白，其功能类似于丝氨酸蛋白酶，通过对多肽的剪切使其失活，从而达到调节生理功能的作用。GLP-1(Glucagon-like peptide)是一种内源性的激素，随着餐后血糖升高，小肠中的L-细胞就分泌产生GLP-1，进而刺激胰岛素分泌，以此降低血糖。基于GLP-1的治疗方案可以有效地控制血糖，但是GLP-1作为DPP-IV的底物，半衰期很短，分泌后1-2分钟之内就会被DPP-IV迅速剪切，失活。因此基于GLP-1的作用机制可以采用两种新药开发的策略：开发DPP-IV耐受的GLP-1类似物和开发DPP-IV抑制剂。本发明人就是基于后一开发思路，发现杂环并嘧啶酮类化合物是一种有效的DPP-IV抑制剂，能够有效降低血糖，同时不引起体重增加和低血糖等风险，并基于此完成本发明。

发明内容

本发明一方面涉及一种式I的化合物及其对映异构体、非对映异构体、药学上可接受的盐、溶剂化物、多晶型物：

其中，R¹选自氢、氰基、溴、氨基、羧基、硝基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰基烷基、酰氨基、低级烷基、低级烷氧基、羰基烷基、芳基、芳氧基、杂环烷基、杂芳基、杂芳氧基、环烷基、环烷基烷基、亚胺基，各自是取代或未取代的；

R⁸、R⁹、R¹⁰选自氢、氰基、卤素、氨基、羟基、羧基、硝基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰基烷基、酰氨基、低级烷基、羰基烷基、低级烷氧基、芳基、芳氧基、杂环烷基、杂芳基、杂芳氧基、环烷基、环烷基烷基、亚胺基，各自是取代或未取代的；

X、Y不相同，各自独立地选自C、S、SO₂；

R⁴、R⁵、R⁶选择性地存在或者不存在，各自独立地选自氢、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、烯基、炔基、羧基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰基烷基、酰氨基、三氟甲基、杂环烷基、芳基、杂芳基、低级烷基、低级烷氧基、环烷基、环烷基烷基，亚胺基，各自是取代或未取代的；R⁴、R⁵、R⁶优选氢、卤素、低级烷基、酰氨基、三氟甲基、芳基、杂芳基；

条件是下列化合物除外：

在某些实施方案中，R¹优选氢、氰基、溴、氨基、羧基、硝基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰基烷基、酰氨基、低级烷基、羰基烷基、低级烷氧基，各自是取代或未取代的。

在某些更优选的实施方案中，R¹选自氰基。

在某些实施方案中，R⁸、R⁹、R¹⁰优选氢、氰基、卤素、氨基、羟基、羧基、硝基、磺酰基、亚磺酰基、磺酰基烷基、酰氨基、低级烷基、羰基烷基、低级烷氧基，各自是取代或未取代的。

在某些更优选的实施方案中，R⁸、R⁹、R¹⁰选自氢、氨基、低级烷基或羟基。

在某些实施方案中，R⁴、R⁵、R⁶存在或不存在，各自独立地选自优选氢、卤素、低级烷基、酰氨基、三氟甲基、芳基、杂芳基，各自是取代或未取代的。

本发明式I化合物或其可药用盐，优选下列式Ⅱ-式Ⅳ的化合物或其可药用盐：

其中，R¹、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、R¹⁰如通式I中的定义。

本发明式Ⅰ化合物或其可药用盐，优选下列式Ⅹ、式Ⅻ的化合物或其可药用盐：

其中，R⁴、R⁵、R⁶同通式I中的定义相同。

术语“低级烷基”是指由1-4个碳原子组成的直链或支链的饱和烷基，具体的例子包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等，所述的低级烷基可以选择性地带有取代基，取代基可以选自卤素、羟基、氨基、羧基、亚胺基。

术语“低级烷氧基”是指具有低级烷基取代的含氧部分，即-O-低级烷基基团，具体的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、仲丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等，所述的低级烷基可以选择性地带有取代基，取代基可以选自卤素、羟基、氨基、羧基、亚胺基。

术语“杂环烷基”是指带有一个或两个氮、氧、硫等杂原子的五元或六元的取代的或未取代的单环非芳香族环基，具体的例子包括但不限于哌嗪、哌啶、四氢吡咯、吗啉等，取代基可以选自氰基、卤素、羟基、氨基、酰胺基等；

术语“芳基”是指含有5-12个碳原子的全碳单环或双环碳环芳香环体系，具有完全共轭的π电子体系，芳基的非限制性实例如苯基、联苯基、萘基等。芳基可以是取代的或未取代的，取代基选自低级烷基、低级烷氧基、芳基、卤素、氨基、羟基、硝基、羧基等。

术语“杂芳基”是指具有5或6个原子的单环芳基，至少含有1个选自N、O或S的杂原子，其余的原子是C。杂芳基可以是取代的或未取代的，取代基选自低级烷基、低级烷氧基、芳基、羟基、氨基等。杂芳基的例子如呋喃、咪唑、噁唑、噻吩、吡咯、吡唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、噻唑、噻二唑、三唑等。

术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。

术语“磺酰基烷基”是指被磺酰基取代的含有1-6个碳原子的直链或支链的烷基，如磺酰基甲基，磺酰基乙基，1-磺酰基-2-甲基乙基等，烷基可以是取代的或未取代的，取代基选自低级烷基、低级烷氧基、芳基、卤素、氨基、羟基、硝基、羧基等。

术语“环烷基”是指含有3-7个碳原子的饱和环烃，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基，环烷基可以是取代的或未取代的，取代基选自低级烷基、低级烷氧基、芳基、卤素、氨基、羟基、羧基、酰胺基、氰基等。

术语“环烷基烷基”是指被环烷基取代的含有1-6个碳原子的直链或支链烷基基团，如环丙甲基，环戊乙基，1-环己基-3-乙基丁基等。

术语“烯基”是指含有2-9个碳原子以及至少含有1个双键的直链或支链的烃基，例如包括但不限于乙烯基、丙烯基、2-丙烯基、异丙烯基、烯丙基、正丁烯基、正戊烯基、正己烯基等。

术语“炔基”是指是指含有2-9个碳原子以及至少1个三键的直链或支链不饱和烃基，例如包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基等。

术语“羧基”是指含-COO-基团的1-7碳原子的直链或支链基团，包括但不限于HOOC-、CH₃OOC-或CH₃CH₂OOC-等。

本发明涉及的具体化合物举例如下，但并不限于下列化合物：

本发明涉及的上述式I化合物还可以以其盐、水合物的形式存在，它们在体内转化为式I化合物。例如，在本发明的范围内，按照本领域熟知的工艺，将本发明化合物转化为药学上可接受的盐的形式，并且以盐形式使用它们。

当本发明化合物具备游离碱的形式时，使化合物的游离碱形式与药学上可接受的无机或有机酸反应，可以制备本发明化合物的酸加成盐，这些盐包括但不限于：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、磷酸盐、硫酸盐、磺酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、乙磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、丙二酸盐、己二酸盐、己酸盐、精氨酸盐、富马酸盐、烟酸盐、邻苯二甲酸盐或草酸盐等。

当本发明化合物具备游离酸的形式时，使其游离酸形式与药学上可接受的无机或有机碱反应可以制备本发明化合物的碱加成盐，这类盐包括但不限于：锂、钠、钾、钡、钙、镁、铝、铁、亚铁、铜、锌盐，或与吗啉、二乙胺、三乙胺、异丙胺、三甲胺、赖氨酸或组胺酸组成的盐。

以上通式化合物的立体异构体(对映体、非对映体和顺反异构体)和这些立体异构体的混合物均包括在本发明范围内。

本发明再一方面涉及式I化合物的制备方法，包括如下步骤：

(1)式A化合物与式B化合物反应生成式C化合物；

(2)式C化合物与式D化合物反应生成式I化合物；

其中，R¹、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、R¹⁰、X、Y均如通式I中的定义，Hal为氯或溴，Hal’为氯、溴或碘。

本发明再一方面涉及一种式A化合物：

其中，R⁴、R⁵、R⁶、X、Y均如通式I中的定义；Hal选自氯或溴。

式A优选下列化合物：

其中，R⁴、R⁵、R⁶均如通式I中的定义，Hal为氯或溴。

式A化合物最优选下列化合物：

其中，R⁴、R⁵、R⁶均如通式I中的定义，Hal为氯或溴。

本发明再一方面涉及式A化合物用于制备式I化合物的用途。

本发明另一方面涉及上述式A化合物的制备方法，其包括如下步骤：

(a)式F的化合物与卤化试剂发生卤代反应生成式G的化合物；

(b)式G的化合物在有机溶剂和碱水溶液中或在碱水溶液中水解生成式A化合物；

其中X、Y、R⁴、R⁵、R⁶同通式I中的定义，Hal为氯或溴；步骤(a)中所述的卤化试剂选自三氯氧磷、三溴氧磷、五氯化磷或二氯亚砜；步骤(b)中所述的有机溶剂选自四氢呋喃、乙腈、醇类溶剂、二甲基甲酰胺、1，4-二氧六环；碱水溶液选自氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钠水溶液等。所述的醇类溶剂包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙二醇、丁醇、叔丁醇等本领域常用的醇类溶剂。

具体地说，本发明的合成路线如下，详细的制备方法会因原料、合成条件、合成前体的不同而变化，但基本都经过以下反应完成：

其中，R¹、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、R¹⁰、X、Y如通式I中的定义，Hal为氯或溴，Hal’为氯、溴或碘；当式A中的X-R⁶或Y-R⁴为N-H基团时，应当先用常规的保护基团对其中的N进行保护，然后再使带有保护基的式A化合物与式B化合物进行反应，随后用常规的方法脱去保护基，得到式C化合物。

具体反应方法举例如下：

1)将式F化合物加入到卤化试剂中，加热反应6～10小时，随后将反应液冷却，减压蒸发除去大部分卤化试剂，将残留液加入到碎冰中，剧烈搅拌，将析出的固体过滤并干燥得到式G化合物；

2)将式G化合物溶于有机溶剂中，加入碱水溶液，或者直接将式G化合物悬浮于碱水溶液中，加热反应4～24小时，然后减压蒸去有机溶剂，用冰醋酸调pH至4～6，随后进行抽滤或萃取等简单处理，得到式A化合物；

3)将式A化合物溶于干燥的乙二醇二甲醚和N，N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中(4∶1～0∶1)，向其中加入60％的氢化钠，然后加入无水溴化锂，再加入式B化合物，将混合物加热反应10～18小时，然后冷却，随后加入反应液体积5～8倍的水，即有固体析出，抽滤并干燥得到式C化合物；

4)将1当量的式C化合物，1.05～5当量式的D化合物，3～5当量的碳酸氢钠和5～10倍体积量的无水乙醇混合，将混合液加热至150℃，回流6～15小时，然后冷却，过滤，将滤液减压浓缩，纯化后得到式I化合物。

其中，步骤(1)中所述的卤化试剂为三氯氧磷、三溴氧磷、五氯化磷或二氯亚砜；步骤(2)中所述的有机溶剂为四氢呋喃、乙腈、醇类溶剂、二甲基甲酰胺、1，4-二氧六环等。

上述方法中，式F化合物可以按照本领域已知的方法合成得到或者从市场上买到，比如，当式F中的X、Y分别为C或S时，可以采用下列方法合成式F化合物：

使式E化合物与尿素或者氯磺酰异氰酸酯发生缩合反应生成式F化合物，其中，式E的化合物可以从市场上买到或通过本领域常用的方法合成得到；

其中，X、Y分别为C或S，R⁴、R⁵、R⁶同通式I中的定义，R¹¹为氢或低级烷基。

本发明再一方面涉及式I化合物在治疗或预防受益于DPP-IV抑制的疾病的药物中的用途。所述的受益于DPP-IV抑制的疾病选自Ⅱ型糖尿病、糖尿病性脂血异常、葡萄糖耐量减低(IGT)症、禁食血浆葡萄糖减低(IFG)症、代谢性酸中毒、酮症、食欲调节、肥胖症、各种癌症、神经系统病症或免疫系统病症等，优选地包括Ⅱ型糖尿病或肥胖症。

本发明再一方面涉及一种药物组合物，包括本发明所述的式I化合物和一种或几种药学上可接受的辅料。本发明所述的组合物可以是液体、半液体或固体形式，按照适合于所用的给药途径的方式配制。本发明所述的组合物可以按照下列给药方式给药：口服、肠胃外、腹膜内、静脉内、透皮、舌下、肌内、直肠、口腔、鼻内、脂质体等方式。

口服组合物可以是固体、凝胶或液体。固体制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂和散装粉剂。这些制剂可以选择地含有粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、甜味剂或矫味剂等。粘合剂的实例包括但不限于微晶纤维素、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊；润滑剂的实例包括但不限于滑石、淀粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸；稀释剂的实例包括但不限于乳糖、蔗糖、淀粉、甘露糖醇或磷酸二钙；助流剂的实例包括但不限于二氧化硅；崩解剂的实例包括但不限于交联羧甲基纤维素钠、淀粉羟乙酸钠、藻酸、玉米淀粉、马铃薯淀粉、甲基纤维素、琼脂或羧甲基纤维素。

以肠胃外给予本发明组合物，一般以注射为主，包括皮下、肌内或静脉内注射。注射剂可以被制成任何常规形式，如液体溶液或悬液、适合于在注射之前溶解或悬浮在液体中的固体形式或者乳剂。可用于本发明注射剂的药学上可接收的载体的实例包括但不限于水性载体、非水性载体、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧剂、悬浮与分散剂、乳化剂、螯合剂和其它药学上可接受的物质。水性载体的实例包括氯化钠注射液、林格式注射液、等渗葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖与乳酸化林格氏注射液；非水性载体的实例包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油；抗微生物剂的实例包括间甲酚、苄醇、氯丁醇、苯扎氯铵等；等渗剂的实例包括氯化钠和葡萄糖；缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。

本发明组合物还可以制备成无菌的冻干粉针剂，将化合物溶于磷酸钠缓冲溶液，其中含有葡萄糖或其他适合的赋形剂，随后在本领域技术人员已知的标准条件下将溶液无菌过滤，继之以冷冻干燥，得到所需的制剂。

本发明提供的上述杂环并嘧啶酮类化合物制备工艺简单，原料易得，适合工业化大规模生产，并且经体外实验验证，本发明化合物对DPP-Ⅳ具有非常好的选择性抑制作用，在有效抑制DPP-Ⅳ活性的同时，对DPP-Ⅷ和DPP-Ⅸ的活性几乎没有影响，可以预见本发明化合物开发成药后毒性将远低于对照药，具有突出的优势。

具体实施方式

本发明提供的化合物可以通过多种制备方法来合成，实施例中仅提供了合成这些化合物的代表性方法。这里要说明的是，不管以何种方式开发的本发明化合物的游离酸和/或碱形式，还是盐的形式，均属于本发明的范围。具体实施例的目的是进一步说明本发明内容但不意味着对本发明进行限制。

本发明具体实施例中使用的初始原料、反应试剂等均为市售产品。制备出来的游离碱的形式可以采用本领域常用的成盐的方法制备成盐的形式，比如，室温下，将游离碱的形式溶于甲醇，向其中加入氯化氢甲醇溶液进行反应，生成盐酸盐；或者向其中加入苯甲酸进行反应生成苯甲酸盐；或者加入三氟乙酸进行反应生成三氟乙酸盐。

实施例1.化合物1的合成

合成路线：

合成化合物1-2

将尿素(1mol，60g)加入到250ml干燥的单口圆底烧瓶中，油浴下加热到160℃至熔融，加入(0.13mol，20g)3-氨基噻吩-2-甲酸甲酯，混合物在190-200℃加热反应3小时，冷却，加入500ml 10％的氢氧化钠水溶液，搅拌均匀，抽滤，5-10％氢氧化钠水溶液洗涤，滤液于冰浴下用2N HCl溶液调pH至6.5，有白色固体析出，抽滤，冰水洗，干燥得白色固体12.5g，收率59％。

¹H-NMR(400MHz，d₆-DMSO)：δ6.9(1H，d，J＝5.2Hz)，8.10(1H，d，J＝5.2Hz)，11.60-11.1(2H，br，s)；MS：169.1[M+H⁺]。

合成化合物1-3

将上步骤中得到的化合物1-2(74.3mmol，12.5g)与200ml三氯氧磷混合，加热回流8小时，冷至室温，减压蒸去大部分三氯氧磷，残留液缓慢倒入到碎冰中，剧烈搅拌，有白色固体析出，抽滤，冷水洗，干燥得白色絮状固体10.2g，收率67％。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.55(1H，d，J＝5.5Hz)，8.13(1H，d，J＝5.5Hz)；MS：206.9[M+H⁺]。

合成化合物1-4

将上步骤中得到的化合物1-3(49.7mmol，10.2g)溶于120ml四氢呋喃中，冰浴下加入1N氢氧化钠水溶液120ml，氮气保护下室温反应8小时，低温减压蒸去四氢呋喃，冰醋酸调pH至5.5，有固体析出，抽滤，冷水洗，干燥得淡黄色固体8.4g，收率90.5％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ7.55(1H，d，J＝5.5Hz)，8.2(1H，d，J＝5.5Hz)，13.47(1H，br，s)；MS：187.0[M+H⁺]。

合成化合物1-5

将上步骤中得到的化合物1-4(44.9mmol，8.4g)用干燥的120ml DME和30ml DMF的混合溶剂溶解，冰浴下加入60％的氢化钠(2.1g，51.6mmol)，搅拌20分钟，再加入无水溴化锂(7.9g，89.7mmol)，升至室温，搅拌30分钟，加入邻氰基苄溴(10.15g，51.6mmol)，加热至65℃反应14小时，反应液用冰浴冷却，缓慢加入反应液体积8倍量的水，有固体析出，抽滤，冷水洗，干燥得13.1g化合物1-5，收率96.8％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO)：δ5.77(2H，br，s)，7.16(1H，d，J＝8Hz)，7.32(1H，d，J＝5.2Hz)，7.43(1H，t，J＝7.6Hz)，7.55(1H，t，J＝7.6Hz)，7.73(1H，d，J＝7.6Hz)，7.88(1H，d，J＝5.2Hz)；MS：302.0[M+H⁺]。

合成化合物1

将上步骤中得到的化合物1-5(13.1g，43.41mmol)，3-(R)-氨基哌啶二盐酸盐(11.5g，66mmol)，碳酸氢钠(17.4g，173.6mmol)，300ml无水乙醇和4g分子筛4A先后加入500ml单口圆底烧瓶中，混合物加热至150℃，回流反应12小时，冷至室温，过滤，滤液减压浓缩，所得油状物经柱层析分离纯化(先乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1，然后二氯甲烷∶甲醇＝15∶1洗涤)得浅黄色固体化合物1。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ1.25(1H，m)，1.67(1H，m)，1.76(1H，m)，1.96(1H，m)，2.67(1H，m)，2.88(2H，m)，3.21(1H，m)，3.39(1H，m)，5.56(2H，s)，7.12(1H，d，J＝8Hz)，7.25(1H，d，J＝4.8Hz)，7.42(1H，t，J＝7.6Hz)，7.57(1H，t，J＝7.6Hz)，7.73(1H，d，J＝8Hz)，7.98(1H，dd，J＝2Hz，2Hz)；MS：366.1[M+H⁺]。

实施例2.化合物2的合成

用化合物2-1代替实施例1中的化合物1-1，合成方法参考实施例1，制备得到浅黄色固体化合物2，收率45％。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)：δ1.25(1H，m)，1.75(1H，m)，1.77(1H，m)，1.96(1H，m)，2.03(1H，m)，2.33(3H，s)，2.71(1H，m)，2.81(1H，s)，2.89(1H，m)，3.21(1H，m)，3.42(2H，m)，5.55(2H，ABq)，7.08(1H，d，J＝8Hz)，7.39(1H，t，J＝7.6Hz)，7.56(1H，t，J＝7.8Hz)，7.59(1H，s)，7.69(1H，d，J＝7.6Hz)；MS：380.1[M+H⁺]，402.1[M+Na⁺]。

实施例3.化合物3的合成

合成路线

合成化合物3-2

于250ml圆底烧瓶中加入化合物3-1(77.5g，0.5mol)，氰乙酸甲酯(99.1g，1mol)和50ml甲醇，冰浴下分别滴入1mlDMF和5ml三乙胺，加热至70℃反应3小时，减压蒸除溶剂，剩余物用1L冷水处理、搅拌，得到灰褐色沉淀，抽滤，冷水洗，干燥得到113g灰色固体化合物3-2，收率79.6％。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ6.98(1H，d，J＝5.2Hz)，6.30(1H，d，J＝5.2Hz)，4.0(2H，s)，3.80(3H，s)；MS：158.0[M+H⁺]。

合成化合物3-3

将上步骤中得到的化合物3-2(9.5g，6mmol)溶于300ml干燥的二氯甲烷，冷至-60℃，氮气保护下滴加9g氯磺酰异氰酸酯，滴加完毕，升至室温反应20分钟，TLC显示反应完全。减压除去溶剂，加入200ml水，75℃搅拌1小时以除去过量的氯磺酰异氰酸酯，再冷至室温，加入200ml 10N的NaOH溶液，升温至85℃搅拌30分钟，冰浴下用浓HCl调pH至1，产生沉淀，抽滤，水洗，干燥得8g灰白色固体化合物3-3，收率78.4％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ11.95(1H，s)，11.20(1H，s)，7.12(1H，d，J＝5.6Hz)，7.08(1H，d，J＝5.6Hz)；MS：169.0[M+H⁺]。

合成化合物3-4

于冰水浴中，将化合物3-3(8g，47.6mmol)与4.2g N，N-二甲基苯胺，40ml乙腈和200ml POCl₃混合，搅拌30分钟，然后加热回流12小时，TLC显示反应完全。冷至室温，缓慢倾入500ml碎冰中，剧烈搅拌，有沉淀析出，抽滤，冷水洗，干燥得8.8g淡黄色固体化合物3-4，收率90.2％。

¹H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ8.15(1H，d，J＝6.4Hz)，7.55(1H，d，J＝6.4Hz)；MS：206.9[M+H⁺]。

合成化合物3

采用化合物1的合成方法，制备得到化合物3，为浅黄色固体，收率50.5％。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ＝7.73(1H，d，J＝7.6Hz)，7.58(1H，t，J＝7.6Hz)，7.42(1H，t，J＝7.6Hz)，7.28(2H，dd，J＝6.8Hz，6Hz)，7.19(1H，d，J＝8Hz)，5.53(2H，s)，3.49(1H，dd)，3.32(1H，d)，3.25(1H，d)，3.07(1H，s)，2.86(2H，m)，1.80(1H，d，J＝5Hz)，1.71(2H，m)，1.36(2H，m)；MS：366.0[M+H⁺]。

实施例4.化合物4的合成

以2-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯为原料，代替化合物3的合成路线中的原料3-2，其余步骤参考化合物3的合成方法，制备得到化合物4，浅黄色固体，收率50.5％。

¹H-NMR(400MHz，CD3OD)：δ7.71(1H，d，J＝7.6Hz)，7.6(2H，m)，7.44(1H，dd，J＝6.8Hz，6Hz)，6.42(1H，d，J＝4Hz)，5.71(2H，s)，4.54(1H，dd)，4.42(1H，dd)，3.06(1H，m)，2.84(2H，m)，2.46(3H，s)，1.98(1H，m)，1.76(1H，m)，1.54(2H，m)，1.34(2H，m)；MS：380.1[M+H⁺]，402.1[M+Na⁺]。

实施例5.化合物5的合成

合成路线：

合成化合物5-2

将39.4g溴乙缩醛二乙醇用250ml DMF溶解，然后加入2.4g NaI，39.6g氰基乙酸甲酯和55.0g无水碳酸钾，加热至70℃反应过夜，TLC显示反应完全。反应液降至室温，用500ml水处理，300ml乙醚萃取3次，有机相用饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，柱层析分离，得到24.9g浅黄绿色液体化合物5-2，收率57.8％。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ4.69(1H，t，J＝5.6Hz)，3.82(3H，s)，3.73(3H，m)，3.54(2H，m)，2.25(2H，m)，1.21(6H，m)；MS：214.1[M-H⁺]。

合成化合物5-3

将2g化合物5-2和0.67g尿素加入到由0.44g钠与50ml无水乙醇制备的乙醇钠溶液中，室温搅拌30分钟，然后加热回流7小时，蒸除乙醇，剩余物用30ml水处理，乙醚洗涤并弃之，所得水相用冰醋酸调pH至6.5，得到白色沉淀，抽滤，水洗，干燥得到640mg白色固体化合物5-3，收率28.3％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ10.24(1H，s)，9.95(1H，s)，5.84(2H，s)，4.45(1H，s)，3.58(2H，q)，2.39(2H，d，J＝5.2Hz)，1.07(6H，t，J＝6.8Hz)；MS：266.0[M+Na⁺]。

合成化合物5-4

将630mg化合物5-3悬浮于50ml 0.2N的HCl溶液中，室温搅拌5小时，有大量白色固体析出，抽滤，水洗，干燥得350mg灰白色固体化合物5-4，收率81％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ11.44(1H，s)，11.09(1H，s)，10.47(1H，s)，6.56(1H，t，J＝2.4Hz)，6.22(1H，t，J＝2.4Hz)；MS：152.1[M+H⁺]。

合成化合物5-5

将3.6g化合物5-4溶于10ml甲苯中，加入7ml三氯氧磷，加热至70℃滴加DIPEA 8.2ml，滴毕，100℃反应过夜，TLC显示反应完全。降至室温，倾入到150ml冰水混合物中，剧烈搅拌，有沉淀析出。抽滤，冷水洗，干燥得3.42g深黄色固体，收率77.2％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.77(1H，s)，7.72(1H，t，J＝2.8Hz)，6.65(1H，dd，J＝2.0Hz，1.6Hz)；MS：190.0[M+H⁺]。

合成化合物5-6

将400mg化合物5-5悬浮于12ml 2N的KOH水溶液中，100℃下反应4小时，然后冷至室温。倾入50ml冷水中，冰浴下滴加冰醋酸调pH＝6.5，再用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和食盐水洗，干燥，过滤，浓缩得到240mg黄色固体，收率：80.6％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.75(1H，br，s)，12.02(1H，s)，7.06(1H，t，J＝2.8Hz)，6.45(1H，t，J＝2.8Hz)；MS：168.0[M+H⁺]。

合成化合物5-7

将240mg化合物5-6溶于30ml THF中，然后分别加入143mg三乙胺，320mg(BOC)₂O和9mg DMAP，室温搅拌2小时，TLC显示反应完全。反应混合物减压浓缩，剩余物经柱层析分离得到340mg白色固体，收率89％。

¹H-NMR(400MHz，CD3Cl3)：δ12.76(1H，br，s)，7.37(1H，d，J＝4.0Hz)，6.73(1H，d，J＝3.6Hz)，1.68(9H，t，J＝7.6Hz)；MS：292.0[M+Na⁺]。

合成化合物5-8

采用制备化合物1-5相同的合成方法，由310mg化合物5-7制备得到144mg白色固体形式的化合物5-8，收率：44.1％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.20(1H，s)，7.90(1H，d，J＝7.6Hz)，7.65(1H，t)，7.50(1H，t)，7.15(2H，m)，6.54(1H，t)，5.58(2H，s)；MS：285.0[M+H⁺]，307.0[M+Na⁺]。

合成化合物5

参考合成化合物1的方法，制备得到浅黄色固体形式的化合物5，收率63％。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ10.90(1H，br，s)，7.59(1H，d，J＝7.6Hz)，7.36(1H，t，J＝7.6Hz)，7.25(1H，t，J＝7.6Hz)，6.97(1H，d，J＝7.6Hz)，6.76(1H，d，J＝7.6Hz)，6.59(1H，d，J＝7.6Hz)，5.53(2H，d，J＝5.2Hz)，3.13(1H，t，J＝2.4Hz)，2.96(2H，m)，2.71(2H，t)，1.86(2H，m)，1.69(1H，m)，1.56(1H，m)；MS：349.1[M+H⁺]，371.1[M+Na⁺]。

实施例6.化合物6的合成

以3-羟基哌啶为原料，参考化合物4的合成方法，制备得到化合物6，为浅黄色固体，收率85％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：δ7.67(1H，m)，7.53(1H，m)，7.35(1H，m)，6.65(1H，s)，5.52(2H，dd)，3.90(1H，s)，3.26(1H，s)，3.20(2H，m)，3.10(2H，m)，2.50(3H，d)，1.76(1H，m)，1.74(2H，m)，1.72(1H，m)；1.63(1H，m)；MS：381.1[M+H⁺]。

实施例7.化合物7的合成

以2-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯代替化合物3的合成路线中的3-2，以间氰基苄溴为原料，代替化合物3的合成路线中的邻氰基苄溴，其余步骤参考化合物3的合成方法，制备得到化合物7，浅黄色固体，收率60％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：δ7.54(2H，d，J＝7.6Hz)，7.48(1H，m)，7.42(1H，d，J＝6.8Hz，5.0Hz)，6.66(1H，s)，5.30(2H，s)，3.25(1H，dd)，3.13(1H，dd)，2.98(1H，m)，2.85(1H，m)，2.79(1H，m)，2.51(3H，s)，1.98(1H，m)，1.81(1H，m)，1.75(1H，m)；1.56(4H，m)；MS：380.1[M+H⁺]，402.1[M+Na⁺]。

实施例8.化合物8的合成

合成路线

合成化合物8-1

以2-氨基-4-甲基噻吩-3-甲酸乙酯为原料，代替化合物3的合成路线中的原料3-2，其余步骤参考化合物3-5的合成方法，制备得到化合物8-1，白色固体，收率56％。

¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.85(1H，s)，2.50(3H，s)，2.10(1H，s)；MS：199.1，201.1[M-H⁺]。

合成化合物8-2

100ml干燥的单口圆底烧瓶中，氮气保护下加入1g(4.984mmol)化合物8-1，DME12ml，DMF3ml，冰浴至0℃下加入NaH(0.25g，6.23mmol，1.25eq，60％oil)，分批次加入，15分钟后，加入无水溴化锂(0.87g，9.97mmol，2eq)，30分钟后再加入间氟苄溴(0.99g，5.23mmol，1.05eq)，冰浴下搅拌20分钟，转入室温下搅拌30分钟，加热至65℃搅拌过夜，TLC检测反应完全后，冰浴下加入冰水30ml，有白色固体析出，搅拌1小时，抽滤，冷水(20ml)洗三次，抽干，真空干燥得粗品1.36g，过层析柱先石油醚∶乙酸乙酯＝15∶1洗脱，再石油醚∶乙酸乙酯＝12∶1洗脱，过柱得白色固体1.0g，收率65％。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.28(1H，m)，7.12(1H，d，J＝0.4Hz)，7.01(2H，m)，6.83(1H，br，s)，5.46(1H，br，s)，2.56(3H，s)；MS：309.0[M+H⁺]。

合成化合物8

参考合成化合物1的方法，制备得到白色泡沫状固体化合物8，收率87.5％。

¹H-NMR(400MHz，CD3Cl3)：δ7.13(1H，d，J＝5.6Hz)，6.88(1H，d，J＝3.6Hz)，6.77(2H，m)，6.48(1H，d，J＝1.2Hz)，5.15(1H，d，J＝6Hz)，3.12(1H，dd)，3.07(1H，dd)，2.82(1H，m)，2.68(2H，m)，2.48(1H，m)，2.38(3H，s)，1.81(1H，m)，1.62(1H，m)，1.49(1H，m)，1.2(2H，s)，1.08(1H，m)；MS：373.1[M+H⁺]。

实施例9.化合物9的合成

以4-氰基苄溴为原料，代替化合物8的合成路线中的原料间氟苄溴，其余步骤参考化合物8的合成方法，制备得到化合物9，白色泡沫状固体，收率69％。

¹H-NMR(400MHz，CD3Cl3)：δ7.65(2H，d，J＝8.4Hz)，7.29(2H，d，J＝8.4Hz)，6.63(1H，br，s)，5.32(2H，br，s)，3.23(1H，dd)，3.09(1H，dd)，2.90(1H，m)，2.76(2H，m)，2.62(1H，m)，2.48(3H，s)，1.93(1H，m)，1.75(1H，m)，1.60(1H，m)，1.38(2H，s)，1.23(1H，m)；MS：380.1[M+H⁺]。

实施例10.化合物10的合成

以2-氯苄溴为原料，代替化合物8的合成路线中的原料间氟苄溴，其余步骤参考化合物8的合成方法，制备得到化合物10，白色泡沫状固体，收率24.7％。

¹H-NMR(400MHz，CD3Cl3)：δ7.39(1H，d，J＝4Hz)，7.19(2H，s)，6.85(1H，dd)，6.63(1H，d，J＝0.8Hz)，5.34(2H，dd)，3.28(1H，dd)，3.12(1H，m)，2.96(1H，br，s)，2.82(1H，m)，2.58(1H，dd)，2.51(1H，s)，2.18(2H，m)，1.95(1H，m)，1.72(1H，s)，1.58(1H，m)，1.22(1H，m)；MS：389.1[M+H⁺]。

实施例11.化合物11的合成

合成路线

合成化合物11-2

250ml干燥的单口圆底烧瓶中，将氢硫化钠(7.0g，124.6mmol)溶于25ml水中，于冰浴中搅拌条件下，缓慢滴加35ml的1N NaOH溶液，然后再缓慢滴加7.5ml 1-溴-3，3，3-三氟丙酮(17.0g，89mmol)的乙醚溶液，氮气保护下，于0℃搅拌条件下反应1小时，反应混合物备用。

在冰浴条件下，将氰基乙酸甲酯(10.6g，106.8mmol)缓慢加入到上述制备的反应液中，然后再缓慢滴加入三乙胺(10.8g，106.8mmol)，得到黄色反应液，在冰浴条件下反应1小时，然后于室温条件下搅拌1.5小时，反应完全后，将反应液过滤，滤饼水洗，真空干燥得到2-氨基-4-羟基-4-三氟甲基噻吩-3-甲酸甲酯粗品。

将所得粗品加热至190℃至熔融，并在此温度下搅拌10-15分钟，然后冷却至室温得到6g棕黄色产品，即化合物11-2。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ6.75(1H，s)，6.26(2H，s)，3.84(3H，s)；MS  (ES)：223.1[M-H⁺]。

合成化合物11-3

在氮气保护条件下，将化合物11-2(4.5g，20mmol)溶于100ml二氯甲烷中，并降温至-60℃，缓慢滴入氯磺酸异氰酸酯(3.18g，22.4mmol)的二氯甲烷溶液，控制反应液的温度不高于-55℃，滴加完毕维持此温反应30分钟，然后缓慢升至室温，检测反应完毕后，减压浓缩至干，向固体残渣中加入60ml水，混合物在搅拌条件下加热至75℃，反应1小时，然后冷却至室温，向其中缓慢加入6ml 10N的NaOH溶液，搅拌条件下，加热至85℃，反应1小时，然后冷却至室温，然后用浓盐酸酸化使pH值达到1，常温下搅拌5小时，混合物过滤，滤饼水洗，真空干燥得白色固体4.7g，收率99％，即化合物11-3。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.17(1H，s)，11.28(1H，s)，7.75(1H，s)；MS  (ES)：234.9[M-H⁺]。

合成化合物11

参考化合物3的合成方法，制备得到化合物11，为白色泡沫状固体，总收率30％。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.68-7.65(1H，m)，7.55-7.51(2H，m)，7.36(1H，t，J＝7.6Hz)，7.14(1H，d，J＝8.0Hz)，5.50(2H，s)，3.35-3.31(1H，m)，3.22-3.19(1H，m)，3.02-2.95(1H，m)，2.90-2.83(1H，m)，2.67-2.62(1H，m)，1.98-1.94(1H，m)，1.80-1.75(1H，m)，1.70-1.64(1H，m)，1.31-1.20(1H，m)；MS(ES)：435.1[M+H⁺]。

实施例12.化合物14的合成

以5-8(50mg)和4-氨基哌啶(40mg)为原料，参考合成化合物5的方法，制备得到白色固体状的化合物14，收率59％。

¹H-NMR(CD3OD)δ(ppm)：1.63(m，2H)，1.93(m，2H)，2.92(t，2H)，3.05(m，1H)，3.34(m，1H)，5.56(s，2H)，6.50(d，1H，J＝3.6)，6.93(d，1H，J＝3.6Hz)，7.04(d，1H，J＝7.6Hz)，7.41(t，1H，J＝7.6Hz)，7.56(t，1H，J＝7.6Hz)，7.75(dd，1H，J＝7.6Hz)；MS：349.1[M+H⁺]，347.1[M-H⁺]。

实施例13.化合物19的合成

以5-8(50mg)和3-羟基哌啶盐酸盐(55mg)为原料，参考合成化合物5的方法，制备得到浅黄色油状的化合物19，收率61％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：1.45(m，1H)，1.78(m，3H)，2.31(m，2H)，3.07(m，2H)，3.20(d，2H，J＝3.6Hz)，3.88(s，1H)，5.51(q，2H)，6.60(q，1H，J＝3.2Hz)，6.78(q，1H，J＝3.2Hz)，7.19(d，1H，J＝7.6Hz)，7.29(t，1H，J＝7.6Hz)，7.44(t，1H，J＝7.6Hz)，7.61(d，1H，J＝7.6Hz)，10.23(s，1H)；MS：350.0[M+H⁺]，372.1[M+Na⁺]，348.1[M-H⁺]。

实施例14.化合物20的合成

合成路线：

合成化合物20-1

准确称取1.7克化合物5-5用50ml无水四氢呋喃溶解，冰浴条件下降温至0℃，搅拌条件下分批加入750mg 2当量的NaH(60％oil)，混合物于0℃并搅拌条件下反应半小时，然后向其中缓慢滴加0.675ml碘甲烷，然后于室温下搅拌过夜，检测反应完全后，向反应混合物中加入20ml饱和氯化铵水溶液，用乙酸乙酯(100ml)萃取2次，有机层用无水硫酸镁干燥，过滤，旋转蒸发至干得到粗品，柱层析分离纯化，展开相位石油醚∶乙酸乙酯＝10∶1～5∶1，得到白色固体1.52克。

¹H-NMR(CDCl₃)(ppm)：3.89(s，3H)，6.62(d，1H，J＝3.6Hz)，7.22(d，1H，J＝3.6Hz)；MS：202.1[M+H⁺]。

合成化合物20

以化合物20-1为原料代替实施例1中的化合物1-3，参考合成化合物1的方法，使用上述的方法制备得到白色固体状的化合物20，收率82％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：1.20(m，1H)，1.44(s，2H)，1.64(m，1H)，1.72(m，1H)，1.92(m，1H)，2.58(m，1H)，2.74(m，1H)，2.92(m，1H)，3.01(m，1H)，3.15(m，1H)，3.71(s，3H)，5.56(s，2H)，6.60(d，1H，J＝3.2Hz)，6.73(d，1H，J＝3.2Hz)，7.00(d，1H，J＝7.6Hz)，7.31(t，1H，J＝7.6Hz)，7.45(d，1H，J＝7.6Hz)，7.64(d，1H，J＝7.6Hz)；MS：363.2[M+H⁺]，361.2[M-H⁺]。

实施例15.化合物21的合成

合成路线：

合成化合物21-1

将75mg化合物5溶于20mL CH₂Cl₂中，并向其中加入80mg K₂CO₃和250mg(Boc)₂O，于室温下反应过夜，TLC检测反应完全后旋转蒸发至干，粗品经硅胶柱层析(PE∶EA＝8∶3)，得到浅黄色固体状的化合物21-1，收率84.75％。MS：549.3[M+H⁺]，571.3[M+Na⁺]。

合成化合物21-2A和21-2B

将100mg化合物21-1溶于20mL CH₂Cl₂中，加入31mg NBS，室温反应4h，TLC检测反应完全，旋干，粗品经硅胶柱层析分离纯化，展开相为CH₂Cl₂，得到固体化合物21-2A和21-2B。21-2A为白色固体，收率22.89％。21-2B白色固体，收率60.62％。

合成化合物21

将34mg化合物21-2A溶于10mL CH₂Cl₂中，向其中加入0.25mL TFA，于室温下反应3小时。TLC检测反应完全，向反应混合液中加入饱和K₂CO₃溶液调节pH至7，用CH₂Cl₂萃取该反混合液，用饱和NaCl洗涤，有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤，滤液选装蒸发至干，得到的粗品经硅胶柱层析分离纯化(展开相为CH₂Cl₂∶MeOH＝15∶1)，得到浅白色固体状的化合物21，收率16.13％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：1.64(m，4H)，1.75(m，1H)，1.93(m，1H)，2.61(t，1H)，2.76(t，1H)，2.96(m，1H)，3.03(m，1H)，3.21(m，1H)，5.52(q，2H)，7.07(1H，d，J＝7.6Hz)，7.33(t，1H，J＝7.6Hz)，7.49(t，1H，J＝7.6Hz)，7.65(d，1H，J＝7.6Hz)；MS：506.9[M+H⁺]，504.9[M-H⁺]。

实施例16.化合物22的合成

参照化合物21的合成方法以21-2B为原料，制备得白色固体化合物22，收率18.75％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：1.64(m，2H)，1.76(m，2H)，1.93(m，2H)，2.80(m，1H)，2.97(m，1H)，3.06(m，1H)，3.19(m，1H)，5.53(m，2H)，6.58(s，1H)，6.96(d，1H，J＝7.2Hz)，7.30(t，1H，J＝7.6Hz)，7.36(t，1H，J＝7.6Hz)，7.64(dd，1H，J＝7.6Hz)；MS：426.9[M+H⁺]；

实施例17.化合物23的合成

以化合物5为原料，参照化合物20及化合物21的合成方法，制备得到化合物23，收率59.52％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：1.40(m，2H)，1.65(m，2H)，1.79(m，2H)，2.63(2H，s)，2.99(m，3H)，3.14(s，1H)，3.31(m，1H)，3.71(s，3H)，5.46(s，2H)，7.09(1H，d，J＝7.6Hz)，7.32(t，1H，J＝7.6Hz)，7.48(t，1H，J＝7.6Hz)，7.64(dd，1H，J＝7.6Hz)；MS：521.0[M+H⁺]。

实施例18.化合物24的合成

以化合物22为原料，参考实施例14中制备化合物20-1的方法，用碘甲烷将化合物22进行甲基化，制备得到化合物24，收率为62.5％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：1.58(m，1H)，1.65(m，2H)，1.78(m，2H)，3.01(m，3H)，3.17(s，1H)，3.29(m，1H)，3.68(s，3H)，3.80(1H，s)，5.51(s，2H)，6.66(s，1H)，7.04(1H，d，J＝7.6Hz)，7.32(1H，t，J＝7.6Hz)，7.46(1H，t，J＝7.6Hz)，7.65(1H，dd，J＝7.6Hz)；MS：441.0[M+H⁺]。

实施例19.化合物25的合成

合成路线：

合成化合物25-1

将3-氨基-2-丁烯氰(1.75g)溶于MeOH(50mL)中，加入氨基丙二酸二乙酯盐酸盐(5g)，室温搅拌72h，TLC检测反应完全后，反应液旋转蒸发至干，粗品经硅胶柱层析分离纯化(展开相为PE∶EA＝10∶1)，得白色固体，收率97.65％。

MS：240.1[M+H⁺]，239.1[M+Na⁺]。

合成化合物25-2

冰浴条件下，将Na(0.57g)分次投入重蒸过的EtOH(100ml)中，待金属Na完全溶解后，将该溶液滴入化合物25-1的30ml EtOH溶液中，30分钟滴毕，反应液于60℃条件下加热回流5h，TLC检测反应完全后，冷却至室温，旋转蒸发至干，粗品用100ml水溶解，用冰乙酸调节pH至7-8，然后用EtOAc萃取，饱和NaHCO₃洗涤，有机层用无水Na₂SO₄干燥，过滤后将滤液旋转蒸发至干，粗品经硅胶柱层析分离纯化(展开相为CH₂Cl₂)，得黄色固体，收率：58.82％。MS：169.1[M+H⁺]，167.1[M+Na⁺]。

合成化合物25-3

将化合物25-2(2.0g)溶于冰乙酸(30mL)和水(3mL)中，冰浴条件下，滴加9mL KOCN(2.9g)水溶液，滴毕，室温条件下搅拌23h，有大量白色固体析出，过滤，滤饼用水洗，干燥，得到白色固体，收率99.60％。MS：212.1[M+H⁺]，234.1[M+Na⁺]，210.1[M-H⁺]。

合成化合物25-4

将化合物25-3(2.5g)溶于6％的NaOH水溶液(46mL)中，加热到100℃回流3h，TLC检测反应完全后，冷却至室温，冰浴条件下用浓HCl调节pH至6，有大量固体析出，过滤，滤饼用水洗，滤饼干燥后得灰白色固体，收率99.99％。

MS：166.1[M+H⁺]，234.1[M+Na⁺]，164.1[M-H⁺]。

合成化合物25-5

以化合物25-4为原料，参考化合物5-5的制备方法，制备得到黄色固体，收率88.56％。MS：212.1[M+H⁺]，202.0[M+Na⁺]，200.0[M-H⁺]。

合成化合物25-6

以化合物25-5(650mg)为原料，采用制备化合物5-6的方法，反应27h，粗品过硅胶柱(PE∶EtOAc＝2∶1)，得白色固体，收率76.27％。

MS：184.0[M+H⁺]，182.1[M-H⁺]。

合成化合物25-7

以化合物25-6为原料，采用制备化合物5-7的方法，反应18h，粗品过硅胶柱(PE∶EtOAc＝2∶1)，得白色固体，收率17.55％。MS：306.0[M+Na⁺]，282.0[M-H⁺]。

合成化合物25-8

化合物25-7为原料，采用制备化合物5-8的方法，反应30h。粗品过硅胶柱(PE∶EtOAc＝10∶1)，得白色固体，收率30.47％。MS：399.1[M+H⁺]。

化合物25

以化合物25-8为原料，采用制备化合物5的方法，反应6-7h，柱分离(CH₂Cl₂∶MeOH＝50∶1)得白色固体，收率12.77％。

¹H-NMR(CDCl₃)δ(ppm)：1.59(m，1H)，1.71(s，2H)，1.90(m，2H)，2.34(s，3H)，2.61(m，1H)，2.88(m，2H)，2.94(m，2H)，3.10(m，1H，5.62(s，2H)，6.14(s，1H)，6.90(d，1H，J＝7.6Hz)，7.32(t，1H，J＝7.6Hz)，7.44(t，1H，J＝7.6Hz)，7.67(dd，1H，J＝7.6Hz)，10.37(s，1H)；MS：363.1[M+H⁺]，361.1[M-H⁺]。

实施例20.化合物26的合成

合成路线：

合成化合物26-1

准确称取20克2-丁烯腈和4.3克吡啶置于干燥的三口圆底烧瓶中，冰盐浴条件下，向其中缓慢滴加50克溴素，同时保持反应液温度不高于5℃，滴加完毕，冰浴条件下搅拌30分钟，然后转至室温条件下搅拌过夜，TLC显示反应完全后，加入200ml二氯甲烷，过滤，滤液用150ml 10％硫代硫酸钠溶液洗涤3次，再用饱和食盐水洗涤两次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液蒸除溶剂得到淡黄色油状物58.82克，收率87％，无需处理直接进行下一步。MS：227.1[M+H⁺]。

合成化合物26-2

用14.0克金属钠与200ml无水甲醇制得白色固体甲醇钠，向甲醇钠中加入200ml乙醚，冰浴条件下向其中滴加15.6克巯基乙酸乙酯的100ml乙醚溶液，滴毕，维持此温继续搅拌反应1小时，然后滴加化合物26-1的乙醚溶液150ml，滴毕，搅拌2小时，反应完全后向反应液中加入300ml冰水，乙醚萃取两次，合并有机层，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液蒸发得到黄色油状物，用甲醇重结晶得浅黄色固体，收率26％。

¹H-NMR(CDCl₃)(ppm)：6.25(s，1H)，5.30(bs，2H)，3.81(s，3H)，2.37(s，3H)；MS：156.0[M+H⁺]。

合成化合物26

用化合物26-2代替实施例1中的化合物1-1，合成方法参考实施例1，制备得到浅黄色泡沫状固体化合物26，总收率35％。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)：δ1.41(2H，m)，1.72(1H，m)，1.97(1H，m)，2.54(3H，s)，2.98(3H，m)，4.28(1H，d，J＝13.2Hz)，4.47(1H，d，J＝10.4Hz)，5.60(2H，ABq)，6.73(1H，s)，7.29(1H，m)，7.49(2H，m)，7.57(1H，m)；MS：380.1[M+H⁺]。

实施例21.化合物27的合成

合成化合物27

室温下，将实施例1中的化合物1(510mg，1.1mmol)溶于HOAc(15mL)中，滴加入NBS(783mg，4.4mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液，升温至回流状态，搅拌过夜。反应完毕，降至室温，减压蒸除大部分溶剂，然后加入饱和碳酸钠水溶液(20mL)和二氯甲烷(30mL)，萃取分层，水层再用二氯甲烷(30mL)萃取两次，合并有机层，依次用饱和碳酸钠水溶液(20mL)、水(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂后，洗脱液二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，200-300目硅胶层析柱分离得白色泡沫状固体即化合物27，228mg，收率46.8％。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.42-1.46(m，1H)，1.65-1.68(m，1H)，1.79-1.80(m，1H)，1.9-2.00(m，1H)，2.88-2.99(m，2H)，3.07(s，2H)，3.12-3.21(m，4H)，3.37-3.41(dd，1H，J＝12Hz，J＝4Hz)，5.50-5.54(dd，2H，J＝8Hz，J＝4Hz)，7.07-7.09(d，1H，J＝8Hz)，7.34-7.38(t，1H，J＝8Hz)，7.48-7.52(m，1H)，7.66-7.68(d，2H，J＝8Hz)，7.72(s，1H)。MS：444.0，446.0，447.0[M+H⁺]。

实施例22.化合物28的合成

合成路线：

合成化合物28-2

室温下，将实施例1中化合物1(964mg，1.97mmol)溶解在二氯甲烷(30mL)中，滴加入三乙胺(424mg，4.2mmol)和Boc-酸酐(479mg，2.2mmol)，室温搅拌过夜。反应完毕，直接用硅胶过滤，减压蒸除溶剂后，洗脱液用石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1，200-300目硅胶层析柱分离得浅黄色固体粉末化合物28-2，900mg，收率96.6％。MS：444.0，446.0，447.0[M+H⁺]。

合成化合物28-3

室温下，化合物28-2(890mg，1.91mmol)溶解在二氯甲烷(30mL)：乙酸(3mL)中，加入70％mCPBA(3.3g，13.4mmol)，室温搅拌过夜。反应完毕，加入饱和碳酸钠水溶液(20mL)和二氯甲烷(30mL)，萃取分层。水层用二氯甲烷(30mL)萃取两次，合并有机层，依次用饱和碳酸钠水溶液(20mL)、水(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗一次，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸除溶剂后，洗脱液用石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1，200-300目硅胶层析柱分离得黄色油状物28-3，240mg，收率25.3％。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.38(s，9H)，1.49-1.53(m，1H)，1.67-1.69(m，1H)，1.77-1.80(m，1H)，1.83-1.89(m，1H)，2.91-2.99(m，2H)，3.15(s，1H)，3.39-3.42(d，1H，J＝12Hz)，4.98-4.99(d，1H，J＝4Hz)，5.36(s，2H)，7.00-7.03(d，1H，J＝12Hz)，7.07-7.10(d，1H，J＝12Hz)，7.24-7.26(d，1H，J＝8Hz)，7.35-7.39(t，1H，J＝8Hz)，7.51-7.55(t，1H，J＝8Hz)，7.62-7.64(d，2H，J＝8Hz)。

合成化合物28

室温下，化合物28-3(240mg，0.48mmol)溶解在饱和HCl/MeOH(20mL)中，室温搅拌过夜。反应完毕，减压蒸除溶剂后，溶于甲醇(20mL)，加入碳酸氢钠(84mg，1.0mmol)，室温搅拌2小时，减压蒸除溶剂，丙酮溶解析出盐，过滤除去盐，将滤液减压蒸除溶剂后，洗脱液二氯甲烷∶甲醇＝8∶1，200-300目硅胶层析柱分离得黄色泡沫状化合物28，180mg，收率94.0％。

¹H-NMR(400MHz，CD₃OD)δ：1.32(s，1H)，1.44(s，1H)，1.58(s，1H)，2.64(s，1H)，2.83-2.86(m，2H)，3.16(s，1H)，3.21-3.28(m，1H)，3.32-3.34(d，1H，J＝8Hz)，5.58(s，2H)，6.87-6.90(d，1H，J＝12Hz)，6.94-6.97(d，1H，J＝12Hz)，6.99-7.06(m，2H)，7.12-40(m，3H)，7.46-7.49(d，2H，J＝12Hz)。

实施例23.化合物29的合成

合成化合物29-1

称取5.0g 6-氨基尿嘧啶，5.0g乙酸钠加入200ml水中，搅拌下加入5mL 1-氯丙酮，加热回流72小时，冷却至室温，过滤，滤饼水洗，真空干燥得固体2.0g。收率30.7％。MS：166.0[M+H⁺]。

合成化合物29-2

以化合物29-1为原料，采用制备化合物5-5的方法，得黄色固体400mg，收率50.1％。MS：202.0[M+H⁺]。

合成化合物29-3

以化合物29-2为原料，采用制备化合物5-6的方法，得白色固体260mg，收率76.7％。MS：170.1[M+H⁺]。

合成化合物29-4

称取900mg化合物29-3溶于10mL DMF中，加入吡啶(840mg，2eq)，加热到80℃。1小时后，向体系中加入2.3g(Boc)₂O，有大量气体放出，于80℃下继续搅拌2小时，反应结束后，冷却至室温，加入60mL水，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，旋除溶剂得白色固体.不经提纯，直接投入下一步反应。

合成化合物29-5

以化合物29-4为原料，采用制备化合物5-8的方法，得白色固体60mg，收率46.0％。MS：299.1[M+H⁺].¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ9.89(s，1H)，7.73(m，1H)，7.68(m，1H)，7.64(m，1H)，7.47(m，1H)，7.26(d，1H，J＝12Hz)，5.75(s，2H)，1.25(s，3H).

合成化合物29

以化合物29-5为原料，采用制备化合物5的方法，得白色固体30mg，收率80.3％.

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：9.32(s，1H)，7.62(d，2H，J＝8Hz)，7.41(m，1H)，7.29(m，1H)，7.01(d，1H，J＝26Hz)，6.28(s，1H)，5.5(d，2H，J＝6Hz)，3.13(d，1H)，2.96(d，2H)，2.72(d，2H)，2.30(s，1H)，1.90(s，1H)，1.59(s，1H)，1.33(s，1H)，1.24(s，3H).MS：363.2[M+H⁺].

实施例23.体外活性实验

可以用DPP-IV-Glo蛋白水解酶的均相发光检测系统(DPP-IV-GloProtease Assay，Promega cat# G8350)测定本发明化合物对DPP-IV的抑制率。该系统含有DPP-IV底物Gly-Pro-氨基萤光素和萤光素酶活性检测的缓冲液系统，DPPIV-Glo^TM被DPP-IV切割后会激活萤光素酶反应，产生“glow-type”型发光信号，再用Turner Veritas微孔板发光光度计检测发光信号即可表征DPP-IV的活性。

1、实验目的

测定本发明实施例化合物对DPP-Ⅳ酶的抑制活性以及选择性抑制作用。

2、实验材料

DPP-Ⅳ酶、DPP-Ⅷ酶、DPP-Ⅸ酶、GP-AMC(BioMol)、黑色96孔板、超级酶标仪；

DPP-Ⅳ和DPP-Ⅷ的分析缓冲液：100mmol/l Tris/HCl buffer，pH 8.0，0.1mg/ml BSA；

DPP-Ⅸ的分析缓冲液：100mmol/l Tris/HCl buffer，pH 7.4，0.1mg/ml BSA。

3、实验方法

a、酶活性的确定：

将GP-AMC稀释于各自的缓冲液中，浓度为100umol/L，每孔25ul；酶梯度稀释，起始浓度分别为DPP-Ⅷ、DPP-Ⅸ：0.01ug/ul，DPP-Ⅳ：0.01mU/ul，按5倍稀释，每孔25ul，混匀；37℃，360/460nm测定荧光值的动态变化，测定30分钟；以吸光度呈直线上升、S/B≥5的酶浓度为使用浓度。

b、抑制剂活性测定：

所有酶、抑制剂、GP-AMC均用分析缓冲液配制，设置无化合物对照、无酶液对照。

按酶的使用浓度配制酶液，每孔25ul；梯度稀释抑制剂(10倍或5倍稀释)，每孔25ul，混匀；加入稀释好的GP-AMC溶液50ul，混匀；37℃反应20分钟，360/460nm测定荧光值。

c、数据分析：用GraphPad-Prism软件分析。

4、实验结果

本发明实施例化合物对三种酶的抑制活性数据如下表1所示。

表1 体外活性与选择性数据

实验结果说明：与对照药相比，本发明化合物对DPP-Ⅳ具有更好的选择性抑制作用或相当的抑制作用，在有效抑制DPP-Ⅳ活性的同时，本发明化合物对DPP-Ⅷ和DPP-Ⅸ的活性几乎没有影响，可以预见本发明化合物开发成药后毒性将远低于对照药，具有突出的优势。

Claims (7)

1.一种通式Ⅰ的化合物及其药学上可接受的盐：

其中，R¹选自氰基；

R⁸、R⁹、R¹⁰选自氢、氨基、由1-4个碳原子组成的直链或支链的饱和烷基或羟基；

X、Y不相同，各自独立地选自C、S、SO₂；

R⁴、R⁵、R⁶存在或不存在，各自独立地选自氢、卤素、由1-4个碳原子组成的直链或支链的饱和烷基、三氟甲基；

条件是下列化合物除外：

2.权利要求1所述的化合物及其药学上可接受的盐，选自下列式Ⅱ－式Ⅳ的化合物或其可药用盐：

其中，R¹、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、R¹⁰同权利要求1中的定义相同。

3.下列化合物及其药学上可接受的盐：

4.一种权利要求1所述的通式Ⅰ化合物的制备方法，包括如下步骤：

（1）式A化合物与式B化合物反应生成式C化合物；

(2)式C化合物与式D化合物反应生成式Ⅰ化合物；

其中，R¹、R⁴、R⁵、R⁶、R⁸、R⁹、R¹⁰、X、Y同权利要求1中的定义相同，Hal为氯或溴，Hal’为氯、溴或碘。

5.权利要求1-3中任一项所述的化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗或预防受益于DPP-IV抑制的疾病的药物中的用途，所述受益于DPP-IV抑制的疾病选自Ⅱ型糖尿病、糖尿病性脂血异常、葡萄糖耐量减低症、禁食血浆葡萄糖减低症、代谢性酸中毒、酮症、食欲调节、肥胖症、各种癌症、神经系统病症、免疫系统病症。

6.权利要求5所述的用途，其中所述受益于DPP-IV抑制的疾病选自Ⅱ型糖尿病。

7.一种药物组合物，包括权利要求1-3中任一项所述化合物及其药学上可接受的盐和一种或几种药学上可接受的辅料。