CN106701866A - 利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基和培养方法 - Google Patents

利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基和培养方法 Download PDF

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CN106701866A CN201710118917.5A CN201710118917A CN106701866A CN 106701866 A CN106701866 A CN 106701866A CN 201710118917 A CN201710118917 A CN 201710118917A CN 106701866 A CN106701866 A CN 106701866A
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Abstract

本发明涉及一种利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基和培养方法，本发明确认了刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的种子培养基、发酵培养基中碳源、氮源和最佳配伍比例。利用本发明提供的培养基配方和发酵生产控制工艺，能够提高乙基多杀菌素发酵单位，保证产品质量，控制发酵周期在170小时以内，降低发酵成本，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现乙基多杀菌素稳定、高效的生产。

Description

利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基和培养方法
技术领域
本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基和培养方法。
背景技术
乙基多杀菌素是从放线菌刺糖多孢菌发酵产生的，主要用于防治鳞翅目害虫（小菜蛾、甜菜夜蛾）及缨翅目害虫（蓟马）。乙基多杀菌素不仅具有多杀霉素防治害虫的一切功能，而且对多杀霉素在防治水果和坚果等农作物害虫无显著效果时，却能够发挥极好的效果。使用乙基多杀菌素比目前市场上所用的杀虫剂用量更低，在环境中的滞留时间比老品种的杀虫剂更短； 这种优异的环境特性， 将会给它带来一个新的市场，是对多杀霉素产品销售市场极为重要的补充。
目前，由于技术保密等原因，国外对于乙基多杀菌素发酵相关研究报道较少，而国内对乙基多杀茵素发酵研究处于起步阶段，其存在的主要问题有以下几点：
1 国内缺少关于规模化大生产乙基多杀菌素的发酵工艺文献报道，不能够为大生产模式提供有效地技术支持。
2 工业化大生产发酵水平较低，其发酵水平维持在1-2g/L左右，导致产品在国际市场中竞争力较弱。
发明内容
本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种可有效提高发酵单位，降低能耗，缩短发酵周期，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现乙基多杀菌素稳定、高效生产的利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基。
本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产乙基多杀菌素的培养方法。
为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基，其特征在于包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其中
所述一级种子培养基的组成为：
淀粉糖蜜5～9g/L、麸皮8～12g/L、橄榄油2～6g/L、鱼粉3～7g/L、玉米浆干粉11～15g/L、中性大豆蛋白胨4～8g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；
所述二级种子培养基的组成为：
淀粉糖蜜7～11g/L、麸皮11～15g/L、橄榄油3～7g/L、鱼粉5～9g/L、玉米浆干粉12～16g/L、中性大豆蛋白胨5～9g/L、缩二脲0.2～0.6g/L、轻质碳酸钙2～6g/L、磷酸二氢钾0.03～0.07g/L；
所述发酵培养基的组成为：
淀粉糖蜜10～14g/L、麸皮13～17g/L、橄榄油4～8g/L、鱼粉7～11g/L、玉米浆干粉14～18g/L、中性大豆蛋白胨7～11g/L、缩二脲0.3～0.7g/L、复合氨基酸粉0.4～0.8g/L、轻质碳酸钙2～6g/L、磷酸二氢钾0.03～0.07g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.002～0.006g/L、生物素0.004～0.008g/L、卵磷脂0.02～0.06g/L、乙基纤维素5～9g/L。
一种利用权利要求1所述培养基发酵生产乙基多杀菌素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：
1） 一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的刺糖多孢菌母瓶发酵液接入一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度28～32%、培养时间50～54h时移种；
2）二级种子培养：首先将二级种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度35～39%、培养时间45～50h时移入发酵培养基；
3）发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度34～38%、发酵周期不超过170h，菌株产量＞3g/L时终止发酵。
所述一级种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮20～30mg/L、还原糖2～3g/100ml；
所述二级种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮30～40mg/L、还原糖3～4g/100ml；
所述发酵培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮40～60mg/L、还原糖4～6g/100ml。
所述培养好的刺糖多孢菌母瓶发酵液质量要求为：菌体浓度20～30%；镜检无杂菌。
所述一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：30～50m3/h；搅拌转速60～80r/min。
所述二级级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：150～200m3/h；搅拌转速80～100r/min。
所述发酵培养条件为：
a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在7～7.5，
b 温度：培养温度29～30℃，
c 搅拌转速：转速控制在100～120r/min，
d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa，
e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7，
f 溶氧控制：
发酵前90h内，不控制溶氧，
91～140h，溶氧控制在40%以上，
141～发酵结束：溶氧控制在30%以上。
所述发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补水、补全料和pH控制，其中
a 补水工艺控制：
发酵前80h不用进行补水，
发酵81h～发酵结束，当菌体浓度高于38%时，加入灭菌水，控制发酵液菌体浓度在34～38%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度；
b 补料
采用流加法补全料（全料是指发酵培养基配方中的各种物料，按照比例组成的混合物。），发酵周期81h开始补料，补料量为发酵培养基总量的8-10%，发酵周期到160h后，停止补料；
c 发酵过程pH控制：
发酵前80h，pH不进行控制，
发酵81h～160h时，当pH＜6.0，采用流加法加入10～20%的氢氧化钠，调节pH至6～7，当pH＞7，采用流加法加入30%的盐酸溶液，调节pH至6～7。
本发明的技术优势体现在：
1 本发明确认了刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的种子培养基、发酵培养基中碳源、氮源和最佳配伍比例。
2 本发明对种子培养、发酵培养的工艺进行了详细的阐述，确认了乙基多杀菌素最佳的发酵工艺和控制参数。通过本发明发酵生产乙基多杀菌素，其发酵单位达到3g/L以上，同国内技术相比，发酵单位提高了50%以上；发酵周期控制在170h以内，降低了发酵能耗。
3 本发明培养基中加入复合氨基酸粉，因其含有丰富的氨基酸和促生长因子，可以补充乙基多杀菌素发酵过程中所需的各种氨基酸，保证了发酵质量。
4 本发明适用于工业化规模化发酵生产乙基多杀菌素。
具体实施方法
下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
下述实施例的菌种选用：生产使用的菌种来源是刺糖多孢菌母瓶发酵液。母瓶发酵液质量要求为：菌体浓度20～30%；镜检无杂菌。
实施例1
一级种子培养：种子培养基体积100L。
淀粉糖蜜500g、麸皮800g、橄榄油200g、鱼粉300g、玉米浆干粉1100g、中性大豆蛋白胨400g、轻质碳酸钙100g。
一级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮20.4mg/L、还原糖2.1g/100ml。
一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：30m3/h；搅拌转速60r/min。
一级种子培养基培养结束，菌体浓度28%、培养时间50h。
二级种子培养：种子培养基体积500L。
淀粉糖蜜3500g、麸皮5500g、橄榄油1500g/L、鱼粉2500g、玉米浆干粉6000g/L、中性大豆蛋白胨2500g、缩二脲100g、轻质碳酸钙1000g；磷酸二氢钾15g。
二级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮30.3mg/L、还原糖3.1g/100ml。
二级级种子培养条件：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：150m3/h；搅拌转速80r/min。
首先将二级种子培养基灭菌并冷却至20℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，二级种子培养结束，菌体浓度35%、培养时间45h。
发酵培养：发酵培养基体积3m3。
淀粉糖蜜30kg、麸皮39kg、橄榄油12kg、鱼粉21kg、玉米浆干粉42kg、中性大豆蛋白胨21kg、缩二脲0.9kg、复合氨基酸粉1.2kg、轻质碳酸钙6kg；磷酸二氢钾0.09kg、硫酸镁0.09kg、硫酸亚铁0.006kg、生物素0.012kg、卵磷脂0.06kg、乙基纤维素15kg。
发酵培养基灭菌后的质量为：氨基氮40.4mg/L、还原糖4.2g/100ml。
灭菌后发酵培养基，冷却至20℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，
发酵培养条件为：
a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在7.5，
b 温度：培养温度29～30℃，
c 搅拌转速：转速控制在100r/min，
d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa，
e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7，
f 溶氧控制：
发酵前90h内，不控制溶氧，
91～140h，溶氧控制在40%以上，
141～发酵结束：溶氧控制在30%以上。
发酵培养结束，菌体浓度34%、发酵周期162h，菌株产量3.2g/L。
实施例2
一级种子培养：种子培养基体积100L。
淀粉糖蜜600g、麸皮900g、橄榄油300g、鱼粉400g、玉米浆干粉1200g、中性大豆蛋白胨500g、轻质碳酸钙200g。
一级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮22.1mg/L、还原糖2.3g/100ml。
一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：35m3/h；搅拌转速65r/min。
一级种子培养基培养结束，菌体浓度29%、培养时间51h。
二级种子培养：种子培养基体积500L。
淀粉糖蜜4000g、麸皮6000g、橄榄油2000g/L、鱼粉3000g、玉米浆干粉6500g/L、中性大豆蛋白胨3000g、缩二脲150g、轻质碳酸钙1500g；磷酸二氢钾20g。
二级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮33.2mg/L、还原糖3.3g/100ml。
二级级种子培养条件：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：160m3/h；搅拌转速85r/min。
首先将二级种子培养基灭菌并冷却至21℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，二级种子培养结束，菌体浓度36%、培养时间46h。
发酵培养：发酵培养基体积3m3。
淀粉糖蜜33kg、麸皮42kg、橄榄油15kg、鱼粉24kg、玉米浆干粉45kg、中性大豆蛋白胨24kg、缩二脲1.2kg、复合氨基酸粉1.5kg、轻质碳酸钙9kg；磷酸二氢钾0.12kg、硫酸镁0.12kg、硫酸亚铁0.009kg、生物素0.015kg、卵磷脂0.09kg、乙基纤维素18kg。
发酵培养基灭菌后的质量为：氨基氮45.1mg/L、还原糖4.6g/100ml。
灭菌后发酵培养基，冷却至21℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，
发酵培养条件为：
a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在7.4，
b 温度：培养温度29～30℃，
c 搅拌转速：转速控制在105r/min，
d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa，
e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7，
f 溶氧控制：
发酵前90h内，不控制溶氧，
91～140h，溶氧控制在40%以上，
141～发酵结束：溶氧控制在30%以上。
发酵培养结束，菌体浓度35%、发酵周期164h，菌株产量3.5g/L。
实施例3
一级种子培养：种子培养基体积100L。
淀粉糖蜜700g、麸皮1000g、橄榄油400g、鱼粉500g、玉米浆干粉1300g、中性大豆蛋白胨600g、轻质碳酸钙300g。
一级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮24.8mg/L、还原糖2.5g/100ml。
一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：40m3/h；搅拌转速70r/min。
一级种子培养基培养结束，菌体浓度30%、培养时间52h。
二级种子培养：种子培养基体积500L。
淀粉糖蜜4500g、麸皮6500g、橄榄油2500g/L、鱼粉3500g、玉米浆干粉7000g/L、中性大豆蛋白胨3500g、缩二脲200g、轻质碳酸钙2000g；磷酸二氢钾25g。
二级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮35.4mg/L、还原糖3.5g/100ml。
二级级种子培养条件：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：170m3/h；搅拌转速90r/min。
首先将二级种子培养基灭菌并冷却至23℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，二级种子培养结束，菌体浓度37%、培养时间47h。
发酵培养：发酵培养基体积3m3。
淀粉糖蜜36kg、麸皮45kg、橄榄油18kg、鱼粉27kg、玉米浆干粉48kg、中性大豆蛋白胨27kg、缩二脲1.5kg、复合氨基酸粉1.8kg、轻质碳酸钙12kg；磷酸二氢钾0.15kg、硫酸镁0.15kg、硫酸亚铁0.012kg、生物素0.018kg、卵磷脂0.12kg、乙基纤维素21kg。
发酵培养基灭菌后的质量为：氨基氮50.6mg/L、还原糖5.1g/100ml。
灭菌后发酵培养基，冷却至23℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，
发酵培养条件为：
a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在7.3，
b 温度：培养温度29～30℃，
c 搅拌转速：转速控制在110r/min，
d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa，
e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7，
f 溶氧控制：
发酵前90h内，不控制溶氧，
91～140h，溶氧控制在40%以上，
141～发酵结束：溶氧控制在30%以上。
发酵培养结束，菌体浓度36%、发酵周期166h，菌株产量3.9g/L。
实施例4
一级种子培养：种子培养基体积100L。
淀粉糖蜜800g、麸皮1100g、橄榄油500g、鱼粉600g、玉米浆干粉1400g、中性大豆蛋白胨700g、轻质碳酸钙400g。
一级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮27.4mg/L、还原糖2.7g/100ml。
一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：45m3/h；搅拌转速75r/min。
一级种子培养基培养结束，菌体浓度31%、培养时间53h。
二级种子培养：种子培养基体积500L。
淀粉糖蜜5000g、麸皮7000g、橄榄油3000g/L、鱼粉4000g、玉米浆干粉7500g/L、中性大豆蛋白胨4000g、缩二脲250g、轻质碳酸钙2500g；磷酸二氢钾30g。
二级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮37.5mg/L、还原糖3.8g/100ml。
二级级种子培养条件：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：190m3/h；搅拌转速95r/min。
首先将二级种子培养基灭菌并冷却至24℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，二级种子培养结束，菌体浓度38%、培养时间48h。
发酵培养：发酵培养基体积3m3。
淀粉糖蜜39kg、麸皮48kg、橄榄油21kg、鱼粉30kg、玉米浆干粉51kg、中性大豆蛋白胨30kg、缩二脲1.8kg、复合氨基酸粉2.1kg、轻质碳酸钙15kg；磷酸二氢钾0.18kg、硫酸镁0.18kg、硫酸亚铁0.015kg、生物素0.021kg、卵磷脂0.15kg、乙基纤维素24kg。
发酵培养基灭菌后的质量为：氨基氮54.8mg/L、还原糖5.6g/100ml。
灭菌后发酵培养基，冷却至24℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，
发酵培养条件为：
a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在7.2，
b 温度：培养温度29～30℃，
c 搅拌转速：转速控制在115r/min，
d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa，
e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7，
f 溶氧控制：
发酵前90h内，不控制溶氧，
91～140h，溶氧控制在40%以上，
141～发酵结束：溶氧控制在30%以上。
发酵培养结束，菌体浓度37%、发酵周期168h，菌株产量3.7g/L。
实施例5
一级种子培养：种子培养基体积100L。
淀粉糖蜜900g、麸皮1200g、橄榄油600g、鱼粉700g、玉米浆干粉1500g、中性大豆蛋白胨800g、轻质碳酸钙500g。
一级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮30mg/L、还原糖3g/100ml。
一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：50m3/h；搅拌转速80r/min。
一级种子培养基培养结束，菌体浓度32%、培养时间54h。
二级种子培养：种子培养基体积500L。
淀粉糖蜜5500g、麸皮7500g、橄榄油3500g/L、鱼粉4500g、玉米浆干粉8000g/L、中性大豆蛋白胨4500g、缩二脲300g、轻质碳酸钙3000g；磷酸二氢钾35g。
二级种子培养基灭菌后的质量为：氨基氮40mg/L、还原糖4g/100ml。
二级级种子培养条件：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：200m3/h；搅拌转速100r/min。
首先将二级种子培养基灭菌并冷却至25℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，二级种子培养结束，菌体浓度39%、培养时间50h。
发酵培养：发酵培养基体积3m3。
淀粉糖蜜42kg、麸皮51kg、橄榄油24kg、鱼粉33kg、玉米浆干粉54kg、中性大豆蛋白胨33kg、缩二脲2.1kg、复合氨基酸粉2.4kg、轻质碳酸钙18kg；磷酸二氢钾0.21kg、硫酸镁0.21kg、硫酸亚铁0.018kg、生物素0.024kg、卵磷脂0.18kg、乙基纤维素27kg。
发酵培养基灭菌后的质量为：氨基氮60mg/L、还原糖6g/100ml。
灭菌后发酵培养基，冷却至25℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，
发酵培养条件为：
a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在7.0，
b 温度：培养温度29～30℃，
c 搅拌转速：转速控制在120r/min，
d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa，
e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7，
f 溶氧控制：
发酵前90h内，不控制溶氧，
91～140h，溶氧控制在40%以上，
141～发酵结束：溶氧控制在30%以上。
发酵培养结束，菌体浓度37%、发酵周期170h，菌株产量3.5g/L。
上述实施例1-5中，发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补水、补全料和pH控制，其中
a 补水工艺控制：
发酵前80h不用进行补水，
发酵81～发酵结束，当菌体浓度高于38%时，加入灭菌水，控制发酵液菌体浓度在34～38%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度；
b 补全料
采用流加法补全料（全料是指发酵培养基配方中的各种物料，按照比例组成的混合物），发酵周期81h开始补料，其补料量为发酵培养基总量的8-10%。发酵周期到160h后，停止补料。
c 发酵过程pH控制：
发酵前80h，pH不进行控制，
发酵81～160h，当pH＜6.0，采用流加法加入10～20%的氢氧化钠，调节pH至6～7，当pH＞7，采用流加法加入30%的盐酸溶液，调节pH至6～7。

Claims (8)

1.一种利用刺糖多孢菌发酵生产乙基多杀菌素的培养基，其特征在于包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其中
所述一级种子培养基的组成为：
淀粉糖蜜5～9g/L、麸皮8～12g/L、橄榄油2～6g/L、鱼粉3～7g/L、玉米浆干粉11～15g/L、中性大豆蛋白胨4～8g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；
所述二级种子培养基的组成为：
淀粉糖蜜7～11g/L、麸皮11～15g/L、橄榄油3～7g/L、鱼粉5～9g/L、玉米浆干粉12～16g/L、中性大豆蛋白胨5～9g/L、缩二脲0.2～0.6g/L、轻质碳酸钙2～6g/L、磷酸二氢钾0.03～0.07g/L；
所述发酵培养基的组成为：
淀粉糖蜜10～14g/L、麸皮13～17g/L、橄榄油4～8g/L、鱼粉7～11g/L、玉米浆干粉14～18g/L、中性大豆蛋白胨7～11g/L、缩二脲0.3～0.7g/L、复合氨基酸粉0.4～0.8g/L、轻质碳酸钙2～6g/L、磷酸二氢钾0.03～0.07g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.002～0.006g/L、生物素0.004～0.008g/L、卵磷脂0.02～0.06g/L、乙基纤维素5～9g/L。
2.一种利用权利要求1所述培养基发酵生产乙基多杀菌素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：
1） 一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的刺糖多孢菌母瓶发酵液接入一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度28～32%、培养时间50～54h时移种；
2）二级种子培养：首先将二级种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度35～39%、培养时间45～50h时移入发酵培养基；
3）发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度34～38%、发酵周期不超过170h，菌株产量＞3g/L时终止发酵。
3.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于
所述一级种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮20～30mg/L、还原糖2～3g/100ml；
所述二级种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮30～40mg/L、还原糖3～4g/100ml；
所述发酵培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮40～60mg/L、还原糖4～6g/100ml。
4.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述培养好的刺糖多孢菌母瓶发酵液质量要求为：菌体浓度20～30%；镜检无杂菌。
5.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述一级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：30～50m3/h；搅拌转速60～80r/min。
6.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述二级级种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温29～30℃；空气流量：150～200m3/h；搅拌转速80～100r/min。
7.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述发酵培养条件为：
a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在7～7.5，
b 温度：培养温度29～30℃，
c 搅拌转速：转速控制在100～120r/min，
d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa，
e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7，
f 溶氧控制：
发酵前90h内，不控制溶氧，
91～140h，溶氧控制在40%以上，
141～发酵结束：溶氧控制在30%以上。
8.按照权利要求2所述的培养方法，其特征在于所述发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补水、补全料和pH控制，其中
a 补水工艺控制：
发酵前80h不用进行补水，
发酵81h～发酵结束，当菌体浓度高于38%时，加入灭菌水，控制发酵液菌体浓度在34～38%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度；
b 补料
采用流加法补全料，发酵周期81h开始补料，补料量为发酵培养基总量的8-10%，发酵周期到160h后，停止补料；
c 发酵过程pH控制：
发酵前80h，pH不进行控制，
发酵81h～160h时，当pH＜6.0，采用流加法加入10～20%的氢氧化钠，调节pH至6～7，当pH＞7，采用流加法加入30%的盐酸溶液，调节pH至6～7。
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