CN106619654A

CN106619654A - 齐墩果酸在制备治疗痛风药物中的应用

Info

Publication number: CN106619654A
Application number: CN201611224767.8A
Authority: CN
Inventors: 蒋敏捷; 郭尔楚
Original assignee: Guangxi University of Chinese Medicine
Current assignee: Guangxi University of Chinese Medicine
Priority date: 2016-12-27
Filing date: 2016-12-27
Publication date: 2017-05-10

Abstract

本发明涉及齐墩果酸在制备治疗痛风药物中的应用，具有剂量低、疗效好的特点。

Description

齐墩果酸在制备治疗痛风药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体的涉及齐墩果酸（Oleanolic acid）在制备治疗痛风药物中的应用。

背景技术

高尿酸血症和痛风已成为现代生活的文明病之一，是一种由于体内嘌呤合成代谢增多，尿酸产生超量或因尿酸排泄不良而导致血中尿酸升高，高尿酸血症只是痛风疾病的一个生化标志。痛风的临床表现常分为急性期、间歇期、慢性期和肾脏病变等，主要表现为痛风性关节炎和痛风性肾病。肾脏病变的发生是长期高尿酸血症发展的结果，高尿酸血症患者肾脏病理检查几乎均有不同程度的损害，大约1/3患者在病程中出现肾脏症状。关于高尿酸血症的治疗，继发性高尿酸血症主要针对其基础疾病进行治疗，而原发性高尿酸血症的治疗，一般采用饮食、运动控制加以药物治疗。抑制尿酸生成药物主要机制为抑制黄嘌呤氧化酶（XO）的活性。别嘌醇是这类药的代表，一直以来都是抗痛风的临床一线药物，虽然降尿酸效果显著，但对肾脏的保护功能甚弱。

本发明涉及的化合物齐墩果酸，（Oleanolic acid），其CAS号：508-02-1，可从肾茶中提取得到。本发明将其用作制备抗通风药物为首次公开。

发明内容

本发明的目的在于提供齐墩果酸在制备治疗痛风药物中的应用，为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：

本发明一方面涉及齐墩果酸在制备治疗痛风药物中的应用，所述的化合物的结构式为：

在本发明的一个优选实施方式中，所述的药物中包括或者不包括其它活性成分。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的药物不含有其它活性成分，还含有药学上可接受的辅料。

本发明为痛风病人提供了新的治疗药物，具有剂量低、疗效好的特点。

具体实施方式

若未特别说明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。

实验例 1 ：齐墩果酸抗急性痛风炎症实验：

1、方法

①溶液配制

5g 尿酸加 1000ml 蒸馏水煮沸，加 5％ NaOH 溶液调 pH7.4，搅拌，冷却析晶制成尿酸钠结晶 (MSU)。将制好的 MSU10mg 高压灭菌，加不含血清的 DMEM 培养液 10ml，研磨配成 1mg/ml 的 DMEM 溶液。实验时，此溶液再加 DMEM 培养液配成不同浓度 DMEM 的 MSU溶液。

齐墩果酸 2.5mg，用乙醇溶解，终浓度 <0.02％，再加无血清的 DMEM 培养液，配制成浓度 2.5ug/ml、25ug/ml、250ug/ml。

阳性药吲哚美辛 2.0mg，方法同齐墩果酸，配制浓度 20ug/ml。

②血管内皮细胞的体外培养

人脐静脉血管内皮细胞 HUVEC 株，由广西某医学院提供，细胞经支原体检测，无支原体污染，细胞经0.25％胰蛋白酶消化，含10％小牛血清的DMEM培养液中和，离心(1000r/min×6min)，去上清液，加含10％小牛血清的DMEM培养液，移入细胞培养瓶中，放37℃、5％CO2 培养箱中传代培养。

③对 MSU 刺激 HUVEC 活力的影响

HUVEC在培养瓶中培养，待生长至70％～80％融合时，以0.25％胰蛋白酶消化、离心，10％小牛血清 DMEM 培养液洗涤 3 次，用 10％小牛血清 DMEM 培养液调成 4×104/ml细胞悬液，植入 96 孔板(每孔 200ul)，培养 24 小时后轻吸出原培养液，进行以下实验，每组各 8 孔，具体分组及加液如下：对照组(200ulDMEM培养液)、模型组(100ug/ml MSU溶液)、干预 A 组 (100ug/ml MSU 溶液 +2.5ug/ml 齐墩果酸)、干预 B 组 (100ug/ml MSU溶液 +25ug/ ml 齐墩果酸)、干预 C 组 (100ug/ml MSU 溶液 +250ug/ml 齐墩果酸)，加液后继续放 37℃、5％ CO2 培养箱中培养 24 小时，收集上清液，剩余的 HUVEC 用于测定细胞活性，每孔再加 5mg/ml MTT 液 20ul，继续放 37℃、5％ CO2培养箱中培养 4 小时后，弃 MTT 液，加入二甲基亚砜 200ul 溶解，震荡，于酶标仪读取吸光度值，波长 490nm。

阳性药组加液 (100ug/ml MSU 溶液 +20ug/ml 吲哚美辛 )，其他方法同上。

数据统计学处理，细胞活力 (％ ) ＝实验组吸光度值 / 对照组吸光度值 ×100％，结果见表 1。

与对照组相比，模型组细胞活力显著减小 (P<0.01，P<0.05)，阳性药吲哚美辛及齐墩果酸干预后细胞活力显著提高 (P<0.01，P<0.05)，并强于对照组，其中，齐墩果酸各浓度组的细胞活力强于阳性药吲哚美辛。

表 1 齐墩果酸对 MSU 刺激的血管内皮细胞活力的影响 (X±s)

组别	药物浓度（微克/毫升）	n/孔	细胞活力（%）
				对照组	0	8	100
模型组	0	8	81
				阳性药物	20	8	111
干预A组	2.5	8	172
				干预B组	25	8	199
干预C组	250	8	197

④对 ICAM-1 表达影响

将处于对数生长期的 HUVEC 用 0.25％的胰蛋白酶消化，轻轻吹打，制成细胞悬液，调整细胞密度为 5×109/L，接种于细胞培养瓶中。待细胞长满后 (约24h)，弃去上清液，分为下列组：对照组、模型组 (100ug/ml MSU 溶液 )、齐墩果酸组 (100ug/ml MSU 溶液+25ug/ml 齐墩果酸)，继续培养 24 小时，PBS 收集细胞，离心去上清，加入 CD54 单克隆抗体，30min 后，PBS 洗涤，重悬细胞，应用流式细胞仪检测其阳性细胞百分率 (n＝ 10000)，重复 3 次，结果见表 2。

表 2 齐墩果酸对 MSU 刺激的血管内皮细胞 ICAM-1 表达的影响 (X±s)

组别	药物浓度	ICAM表达
			对照组	0	13±4
模型组	0	237±59
			齐墩果酸组	25	134±41

与模型组比较，**P<0.01*P<0.05，与对照组比较，##P<0.01#P<0.05

2、结果

结果显示，空白组 HUVEC 几乎无 ICAM-1 表达，模型组 ICAM-1 的表达最高，与模型组相比，齐墩果酸对 ICAM-1 的表达有较强的抑制作用。

结论：用 MSU 致 HUVEC 损伤的急性痛风模型评价显示，齐墩果酸可保护 MSU 致HUVEC 损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制 ICAM-1 表达，具有抗痛风活性，齐墩果酸可用于制备治疗急性痛风炎症药物。

以上所述是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.齐墩果酸在制备治疗痛风药物中的应用，所述的化合物的结构式为：

。

2.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于所述的药物中包括或者不包括其它活性成分。

3.根据权利要求 2所述的药物，所述的药物不含有其它活性成分，还含有药学上可接受的辅料。