CN103110679B - 竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。本发明竹节参提取物是从天然的中药竹节参中提取得到的，竹节参是常用的中草药，有长期的中医用药经验,该药使用安全性高,无明显毒性作用记载。竹节参提取物具有抗骨质疏松的显著性作用，且不具有肝毒性，较之现有的依瞵片剂相对安全。因此，竹节参提取物有开发成抗骨质疏松药物的前景。

Description

竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用

技术领域：

本发明属于中药制剂领域，具体涉及竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。

技术背景：

竹节参又名竹节三七、竹节人参、白三七，为五加科植物竹节参（Panax japonicus C.A. Mey.）的干燥根茎，属《中国药典》多年收载的中药材品种。竹节参性温，味甘、微苦；滋补强壮，散瘀止痛，止血祛痰；用于病后虚弱、劳嗽咯血、咳嗽痰多、跌扑损伤。现代药理研究表明，竹节参主要活性成分为皂苷类，尚含少量挥发油、多糖和氨基酸等。

骨质疏松(osteoporosis，OP)是以骨量减少，骨组织显微结构退行性改变为特征，骨脆性增加，易发生骨折的一种全身代谢性骨病。骨质疏松症的西药治疗主要有骨吸收抑制剂和骨形成刺激剂，常用药物为降钙素、维生素D、雌激素等。然而长期大量使用外源性雌激素会增加子宫内膜增生、子宫癌、乳腺癌、卵巢癌、静脉血栓形成等并发症的危险性，限制了雌激素的临床应用。从天然植物中筛选并提取分离抗骨质疏松症的天然有效活性成分已成为现代药物研究的热点。小鼠颅骨细胞来源的前成骨细胞MC3T3-E1细胞系是体外研究成骨过程的经典模型；维甲酸大鼠骨质疏松模型是体内研究抗骨质疏松常用的模型。

发明内容：

本发明的目的在于提供竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。

所述的竹节参提取物为竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物和竹节参精提物中的任意一种或几种。

所述竹节参水提物采用以下方法制备：取竹节参药材饮片加水浸泡后，以8~12倍量水直火煎煮至少2次，每次1~3h，合并水提液，水浴浓缩近干，在≤80℃条件下，减压干燥后得竹节参水提物。

所述竹节参醇提物采用以下方法制备：取竹节参药材饮片加90%乙醇浸泡后，以8~12倍量90%乙醇水浴回流提取至少2次，每次1~3h，合并提取液，回收乙醇并浓缩近干，在≤80℃条件下，减压干燥后得竹节参醇提物粉末。

所述竹节参粗提物采用以下方法制备：①将药材粉碎；② 醇提：将粉碎后的药材加70%乙醇浸泡后，分别用8~12倍量的70%乙醇，回流提取3次，每次提取的时间为1~3h；③树脂型号与用量：HPD722树脂、D101树脂或HP20树脂，树脂的干重与中试药材重量比=8：10；④上样液浓度：上样液浓度为0.08g生药/ml；⑤水洗倍量与流速：工艺研究采用的水洗脱流速为2 BV/h，洗脱6~18个柱体积；⑥5%乙醇除杂倍量与流速：5%乙醇除杂倍量为6~14个柱体积，流速为1.5 BV/h；⑦50%乙醇洗脱倍量与流速：50%乙醇洗脱的0.5个柱体积弃用或保存另用，50%乙醇洗脱流速为1.5 BV/h，收集50%乙醇洗脱的0.5~6个柱体积，回收乙醇，干燥，得竹节参粗提物（竹节参总皂苷），所得竹节参粗提物（竹节参总皂苷）的纯度（控制指标成分为竹节参皂苷V、竹节参皂苷Ⅰb、竹节参皂苷Ⅵ、竹节参皂苷Ⅵa）≥50%，R转移率≥70%。

所述竹节参精提物为竹节参皂苷V 。

所述的抗骨质疏松药物包括竹节参提取物和药学上可接受的载体或者常规食用辅料。药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。 给药途径可以是口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案，该组合物可以是口服制剂或注射用制剂，其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂、滴丸等。所用辅料包括：淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料，制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。

本发明组合物口服给药的剂量为3次/天，2-4粒/次。

本发明的有益效果：

本发明竹节参提取物是从天然的中药竹节参中提取得到的，竹节参是常用的中草药，有长期的中医用药经验,该药使用安全性高,无明显毒性作用记载。

竹节参提取物具有抗骨质疏松的显著性作用，且不具有肝毒性，较之现有的依瞵片剂相对安全。因此，竹节参提取物有开发成抗骨质疏松药物的前景。

具体实施方式：

实施例一  竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物（竹节参总皂苷）、竹节参精提物（竹节参皂苷V）的制备

竹节参水提物的制备：

取竹节参药材饮片500g，加水浸泡2h后，以10倍量水直火煎煮3次，每次2h，合并水提液，水浴浓缩近干，在80℃以下0.08Mpa的负压条件下干燥，得竹节参水提物粉末。将竹节参水提物粉末溶解定容为浓度1g生药/mL的水溶液。备用于稀释到一定浓度，供体内外药效试验使用。

竹节参醇提物的制备：

取竹节参药材饮片500g，加90%乙醇浸泡2h后，以10倍量90%乙醇水浴回流提取3次，每次2h，合并提取液，回收乙醇并浓缩近干，在80℃以下0.08Mpa的负压条件下干燥，得竹节参醇提物粉末。将竹节参醇提物粉末溶解定容为浓度1g生药/mL的水溶液。备用于稀释到一定浓度，供体内外药效试验使用。

竹节参粗提物（竹节参总皂苷）的制备：

1. 药材的粉碎粒度：将药材粉碎粒度定为米粒大小。

2. 醇提工艺具体为：药材粉碎至米粒大小，用70%乙醇，浸泡2h后，依次用11倍量，10倍量，9倍量的70%乙醇回流提取3次，提取时间分别为2.5h、2h、1.5h。

3. 树脂型号与用量：HPD722树脂（沧州宝恩吸附材料科技有限公司生产，或者用D101、HP20）。树脂的湿重量（干重）与中试药材重量比=25（8）:10。

4. 上样液浓度：上样液浓度为0.08g生药/ml。

5. 水洗倍量与流速：工艺研究采用的水洗脱流速为2 BV/h，洗脱18个柱体积。

6. 5%乙醇除杂倍量与流速:5%乙醇除杂倍量确定为14个柱体积，流速为1.5 BV/h。

7. 50%乙醇洗脱倍量与流速：50%乙醇洗脱的0.5个柱体积弃用或保存另用，50%乙醇洗脱流速为1.5 BV/h，然后收集50%乙醇洗脱的0.5~6个柱体积，回收乙醇，干燥，得竹节参粗提物（竹节参总皂苷），所得的竹节参粗提物（竹节参总皂苷）的纯度（控制指标成分为竹节参皂苷V、竹节参皂苷Ⅰb、竹节参皂苷Ⅵ、竹节参皂苷Ⅵa）≥50%，总皂苷的转移率≥70%。

8. 下柱条件：采用95%乙醇洗脱2个柱体积，流速1.5 BV/h。

9. 树脂预处理方法：在树脂柱内加入高于树脂层10cm的95%乙醇浸渍4小时，然后用乙醇冲洗，洗至流出液在试管中用水稀释不浑浊时为止。最后用水反复洗涤至乙醇含量小于1%或无明显乙醇气味后即可用于生产。

10．每100g竹节参生药可以得到竹节参粗提物（竹节参总皂苷）10g（视药材的质量不同，得率不同）左右，竹节参粗提物（竹节参总皂苷）的纯度（控制指标成分为竹节参皂苷V、竹节参皂苷Ⅰb、竹节参皂苷Ⅵ、竹节参皂苷Ⅵa）≥50%，总皂苷的转移率≥70%。

竹节参精提物（竹节参皂苷V）：竹节参皂苷Ⅴ，又称人参皂苷Ro，Gisenoside Ro，购买于上海亚培生物科技有限公司，批号：A0522。竹节参皂苷Ⅴ的纯度为98%。

实施例二 竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物（竹节参总皂苷）、竹节参精提物（竹节参皂苷V）体外抗骨质疏松作用

本技术方案采用体外MC3T3-E1细胞模型和体内维甲酸大鼠骨质疏松模型，研究竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物（竹节参总皂苷）、竹节参精提物（竹节参皂苷V）在抗骨质疏松方面的活性。

试验方法：

将MC3T3-E1细胞（MC3T3-E1，购于中国医学科学院基础医学研究所）以2×10⁴ cell /mL密度接种于96孔培养板，每孔200μL，培养24h后给药。实验组分别加入竹节参水提物和竹节参醇提物的终浓度为10^-1mg生药/mL，加入竹节参粗提物（竹节参总皂苷）、竹节参精提物（竹节参皂苷V）的终浓度分别为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4mg生药/mL，阳性对照组加入等体积终浓度为1×10^-8mol·L^-1的雌二醇，空白对照组加入等体积的不含药的溶剂α-MEM培养液，每组均设6个复孔。继续培养44h，每孔中加入5mg/ml的MTT溶液20μl，37℃孵化4h，有蓝紫色沉淀生成。吸去培养液，每孔加入150μl/孔DMSO溶解，用酶标仪于490nm测定每孔的吸光度。

应用SPSS 11.0对实验数据进行统计学分析，所有数据均以

表示，实验组与对照组比较，采用t检验，p<0.05表示有显著性差异，p<0.01为有极显著性差异。

由表1可知，10^-1mg/mL的竹节参水提物和竹节参95%乙醇提取物，以及竹节参粗提物（竹节参总皂苷）与竹节参精提物（竹节参皂苷V）的各剂量组具有明显促进MC3T3-E1增殖作用。

表1 竹节参各种提取物对MC3T3-E1细胞增殖的影响(n=6)

注:与空白组比较，*p<0.05,**p<0.01。

实施例三 竹节参提取物（水提物、醇提物）、竹节参粗提物（竹节参总皂苷）体内抗骨质疏松作用

实验方法：取雄性SD大鼠72只，体重150～220g。按体重随机分为9组，一组作为正常对照组，给予0.5%CMC-Na液，其余8组大鼠均给予维甲酸70mg/kg，以制备骨质疏松模型。在这8组大鼠中，一组作为模型对照组给予0.5%CMC-Na液；一组给予依瞵片剂40mg/kg作为阳性对照组；其余6组分别为竹节参水提物高、低剂量组，竹节参醇提物高、低剂量组，竹节参粗提取物（竹节参总皂苷）高、低剂量组。动物同时灌胃维甲酸及药物2周后，停服维甲酸，继续给药2周，每天给药一次，均于每天上午8∶00～10∶00左右给药，下午14∶00～16∶00左右给维甲酸。于给药过程中，每周称一次体重，根据体重调整给药量。末次给药后禁食24小时（不禁水）后，大鼠眼眶取血至5mL的离心管中，3000rpm，离心10分钟后，以移液枪分离血清及血浆。血清标号后，-20℃保存，用于各指标含量测定。

大鼠取血后，颈椎脱位处死，分离左侧股骨至称量纸上（纸标号，骨剔除干净，血污均要吸净），称取骨湿重并记录,测量股骨头直径，完成后将骨装至自封袋中（袋上标号），-20℃保存。右侧股骨直接装入自封袋，后转入西林瓶中，10%的甲醛浸泡防腐。

主要药品与试剂：依膦片剂（依替膦酸，Etidronic Acid，EA），连云港正大天晴制药有限公司，批号：120501；维甲酸(Retinotic Acid，RA)，重庆华邦制药有限公司，批号：TRE-20120106；羟脯氨酸试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20120810）；血清碱性磷酸酶(ALP)试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20120611）；血清无机磷(P)试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20120728）；钙(Ca)测试盒（南京建成生物工程研究所，批号：20120921）；羧甲基纤维素钠(CMC-Na)（天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20120429）。

试剂配制：0.5%CMC-Na：称取15g CMC-Na，加入3000mL蒸馏水，混合均匀，使其充分溶胀，放置过夜，搅拌均匀，既得。

维甲酸(RA)溶液：精密称取7.0026g维甲酸，置于1000mL容量瓶中，加入0.5%CMC-Na搅拌、超声并稀释至刻度，得7mg/mL维甲酸溶液。维甲酸大鼠给药量为70mg/kg。

依膦(EA)混悬液：取两片依膦药片用研钵研碎，精密称取2.0021g，置于500mL容量瓶中，加入0.5%CMC-Na溶液定容至刻度，超声使其形成混悬液。依膦大鼠给药量为40mg/kg。

竹节参水提物高剂量组：取竹节参水提物溶液适量，用0.5%CMC-Na溶解制成0.4g生药/mL的混悬液。给药体积为0.01mL/g大鼠；高剂量组给药剂量为4g/kg大鼠。

竹节参水提物低剂量组：取适量高剂量组药液，用0.5%CMC-Na稀释至原来的2倍，即得0.2g生药/mL的混悬液。给药体积为0.01mL/g大鼠；低剂量组给药剂量为2g/kg大鼠。

竹节参醇提物高剂量组：取竹节参醇提物溶液适量，用0.5%CMC-Na溶解制成0.4g生药/mL的混悬液。给药体积为0.01mL/g大鼠；高剂量组给药剂量为4g/kg大鼠。

竹节参醇提物低剂量组：取适量高剂量组药液，用0.5%CMC-Na稀释至原来的2倍，即得0.2g生药/mL的混悬液。给药体积为0.01mL/g大鼠；低剂量组给药剂量为2g/kg大鼠。

竹节参粗提物（竹节参总皂苷）高剂量组：竹节参粗提物（竹节参总皂苷）高剂量组浓度=给药剂量÷给药体积=0.4g/kg÷10mL/kg=0.04g/mL。

取竹节参粗提物（竹节参总皂苷）粉末4g，加0.5%的CMC-Na溶液溶解，定容至100mL即得到浓度为0.04g/mL的竹节参粗提物（竹节参总皂苷）高剂量组溶液。

竹节参粗提物（竹节参总皂苷）低剂量组：竹节参粗提物（竹节参总皂苷）低剂量组浓度=给药剂量÷给药体积=0.1g/kg÷10mL/kg=0.01g/mL。

取竹节参粗提物（竹节参总皂苷）粉末1g，加0.5%的CMC-Na溶液溶解，定容至100mL即得到浓度为0.01g/mL的竹节参粗提物（竹节参总皂苷）低剂量组溶液。

实验动物：雄性SD大鼠，中国药科大学动物中心提供。

试验分组安排及给药体积：  给药体积：0.01mL/g大鼠。

各指标测定方法

羟脯氨酸(HOP)的含量测定：按试剂盒要求进行。

血清中碱性磷酸酶(ALP)的含量测定：按试剂盒要求进行。

骨湿重系数、骨灰重系数的测定：

骨湿重系数测定：=股湿重g/100g体重。

骨灰重系数：电子天平称量，=股灰重(g)×1000/大鼠体重(g)。注：骨灰制备方法：分离出大鼠左侧股骨后，置坩锅内于120℃干烤2h，取出，置干燥器中保存，放置过夜。隔日，将烤干的股骨盛于坩锅内，置箱式电阻炉（马弗炉）中，分别在250℃，400℃，600℃各加热0.5h，最后于800℃灰化1h，取出，置干燥器冷却0.5h，称重灰重。

股骨长度、股骨直径及骨密度的测定：用直尺测量大鼠股骨的长度，同时用游标卡尺测量固定位置（股骨头）的直径。

骨密度的测定：股骨标本经10%甲醛溶液固定，用双能X射线骨密度测定仪测定股骨骨密度。

4 实验结果

4.1 实验期间动物的一般情况

实验期间，正常对照组大鼠食欲良好，反应灵敏，被毛浓密有光泽，眼睛明亮，体重随时间延长而稳定增加。模型组大鼠在维甲酸灌胃期间，出现活动减少，拱背、竖毛等阳虚证相似表现，其平均体重高于其它各组；停服维甲酸后，各组大鼠活动逐渐增强，被毛柔顺且毛色渐渐正常，其平均体重低于正常对照组，体重增加趋于缓慢。给药组大鼠的一般情况基本同正常对照组大鼠，但其活动更加频繁，更为敏捷，灌胃时反抗更加积极。

4.2 对羟脯氨酸含量的影响

骨组织的形成需要先有有机基质的合成，然后在基质中沉淀钙盐。骨胶原占正常骨有机质的90%以上，而羟脯氨酸又占胶原蛋白的13%左右，由胶原降解时释放，是胶原破坏的标志，反应了骨退变。实验结果表明，模型组血清中羟脯氨酸的含量明显升高，于正常组比较产生显著性差异（p<0.05），表明造模后大鼠骨吸收活动增强，骨胶原的分解代谢加快，造模成功；而竹节参提取物给药各组的羟脯氨酸含量明显低于模型组，表明竹节参提取物各给药组均有一定的抗骨吸收作用。

表2  各种竹节参提取物给药后维甲酸造模大鼠血清羟脯氨酸（HOP）测定

组 别	剂量	HOP(U/100mL)
			正常对照	0.5%CMC-Na	7.178±1.327
模型	0.5%CMC-Na	11.899±1.711*
			雌二醇（EA）	40mg·kg-1·d-1 EA	7.711±1.961##
竹节参水提物高	4g·kg-1·d-1	8.927±1.344##
			竹节参水提物低	2g·kg-1·d-1	8.554±1.692##
竹节参醇提物高	4g·kg-1·d-1	7.836±1.267##
			竹节参醇提物低	2g·kg-1·d-1	7.664±1.721##
竹节参粗提物高	0.4g·kg-1·d-1	7.527±1.539##
			竹节参粗提物低	0.2g·kg-1·d-1	7.454±1.473##

注：与空白组比较，* p < 0.05, ** p < 0.01；与模型组比较， ^# p < 0.05, ^## p < 0.01 。

4.4 对血清中碱性磷酸酶（ALP）活性的影响

结果表明，与正常对照组相比，模型组大鼠血清中ALP活性明显升高，而各种竹节参提取物组大鼠血清中ALP活性明显低于模型组，且与正常对照组相近，二者无明显差异。本实验中ALP各组间比较，模型组比正常组显著升高，表明RA的大量应用，影响了钙磷代谢和成骨、破骨过程，造成骨盐丢失，骨负重能力下降。而在服用阳性药（依瞵片剂）和高、低两个剂量的竹节参提取物后ALP水平较模型组均有回落，且各种竹节参提取物两个剂量组的作用与阳性药相当。

表3   各种竹节参提取物给药后维甲酸造模大鼠血清碱性磷酸酶测定

组别	剂量	Serum ALP (U/100mL)
			正常对照	0.5%CMC-Na	35.899±4.986
模型	0.5%CMC-Na	50.234±13.669**
			雌二醇（EA）	40mg·kg-1·d-1 EA	33.808±5.733##
竹节参水提物高	4g·kg-1·d-1	36.472±5.223##
			竹节参水提物低	2g·kg-1·d-1	37.287±5.901#
竹节参醇提物高	4g·kg-1·d-1	35.572±6.038##
			竹节参醇提物低	2g·kg-1·d-1	36.226±5.636#
竹节参粗提物高	0.4g·kg-1·d-1	32.722±6.698##
			竹节参粗提物低	0.2g·kg-1·d-1	33.091±5.999#

注：与空白组比较，* p < 0.05, ** p < 0.01；与模型组比较， ^# p < 0.05, ^## p < 0.01 。

4.5 对骨密度的影响

骨密度是衡量骨质疏松的显著标志。实验结果表明，维甲酸模型组大鼠较其他各组明显更容易出现骨折现象。模型组的骨密度明显下降，而其他给药组均与正常组无差异。表明各种竹节参提取物可以保持大鼠的骨密度，防止骨丢失，对骨质疏松有治疗作用。

表4  各种维甲酸造模大鼠给药后股骨长、股骨直径及骨密度的变化

组 别	剂量	骨密度(g/cm2)
			正常对照	0.5%CMC-Na	0.268±0.025
模型	0.5%CMC-Na	0.223±0.022*
			雌二醇（EA）	40mg·kg-1·d-1 EA	0.280±0.029 ##
竹节参水提物高	4g·kg-1·d-1	0.269±0.043##
			竹节参水提物低	2g·kg-1·d-1	0.262±0.048 #
竹节参醇提物高	4g·kg-1·d-1	0.274±0.034 ##
			竹节参醇提物低	2g·kg-1·d-1	0.265±0.039 #
竹节参粗提物高	0.4g·kg-1·d-1	0.282±0.042 ##
			竹节参粗提物低	0.2g·kg-1·d-1	0.279±0.038 # #

注：与空白组比较，* p < 0.05, ** p < 0.01；与模型组比较， ^# p < 0.05, ^## p < 0.01 。

4.6 对大鼠股骨湿重系数和骨灰重系数的影响

骨由有机成分和无机成分组成。有机成分绝大多数是胶原蛋白，还有少部分脂类物质，无机成分主要是钙和磷。由表5可知，与正常对照组相比，模型组的骨重系数与骨灰重系数均显著地降低，说明模型组大鼠的骨量显著减少，大鼠骨质疏松造模成功。低剂量组的骨灰重系数低于高剂量组和对照组，而在骨湿重系数方面则为低剂量组高于正常组。实验结果表明，竹节参提取物有增加大鼠骨重量的作用。

表5  各种维甲酸造模大鼠给药后骨湿重系数、骨灰重系数的变化

组 别	骨灰重系数	骨湿重系数
			正常对照	1.081±0.199	0.282±0.026
模型	0.843±0.132*	0.256±0.018*
			EA	1.062±0.213#	0.341±0.024##
竹节参水提物高	1.084±0.219#	0.289±0.044#
			竹节参水提物低	1.023±0.177#	0.282±0.031#
竹节参醇提物高	1.092±0.235#	0.331±0.030##
			竹节参醇提物低	1.028±0.213#	0.294±0.040#
竹节参粗提物高	1.104±0.280#	0.340±0.019##
			竹节参粗提物低	1.020±0.169#	0.335±0.023##

注：与空白组比较，* p < 0.05, ** p < 0.01；与模型组比较， ^# p < 0.05, ^## p < 0.01 。

结论：竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物（竹节参总皂苷）、竹节参精提物（竹节参皂苷V）具有治疗模型大鼠骨质疏松的作用。

实施例四 竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物（竹节参总皂苷）、竹节参精提物（竹节参皂苷V）的样品制剂

竹节参水提物胶囊的制备方法：取实施例一制备的竹节参水提物粉末。将竹节参水提物粉末加入1%-15%淀粉（或其它药学上可接受的载体或者常规食用辅料），用90%乙醇（或其它浓度的乙醇、水）为润湿剂，制备软材，过20目筛制粒，60℃下干燥，20目筛整理，即得合格颗粒，装0号胶囊，为0.42g/粒重，其中0.02g/辅料粒，0.4g竹节参水提物粉末/粒。日服3次，每次3-4粒。

竹节参醇提物胶囊的制备方法：取实施例一制备的竹节参醇提物粉末。将竹节参醇提物粉末加入1%-15%淀粉（或其它药学上可接受的载体或者常规食用辅料），用90%乙醇（或其它浓度的乙醇、水）为润湿剂，制备软材，过20目筛制粒，60℃下干燥，20目筛整理，即得合格颗粒，装0号胶囊，为0.42g/粒重，其中0.02g/辅料粒，0.4g竹节参醇提物粉末/粒。日服3次，每次3-4粒。

竹节参粗提物（竹节参总皂苷）胶囊的制备方法：取实施例一制备的竹节参粗提物（竹节参总皂苷），将竹节参粗提物（竹节参总皂苷）粉末加入1%-15%淀粉（或其它药学上可接受的载体或者常规食用辅料），用90%乙醇（或其它浓度的乙醇、水）为润湿剂，制备软材，过20目筛制粒，60℃下干燥，20目筛整理，即得合格颗粒，装2号胶囊，为0.21g/粒重，其中0.01g/辅料粒，0.2g竹节参粗提物（竹节参总皂苷）粉末/粒。日服3次，每次2-3粒。

竹节参精提物（竹节参皂苷V）胶囊制备方法：将竹节参精提物（竹节参皂苷V）粉末加入1%-15%淀粉（或其它药学上可接受的载体或者常规食用辅料），用90%乙醇（或其它浓度的乙醇、水）为润湿剂，制备软材，过20目筛制粒，60℃下干燥，20目筛整理，即得合格颗粒，装4号胶囊，为0.11g/粒重,其中0.01g/辅料粒，0.1g竹节参精提物（竹节参皂苷V）粉末/粒。日服3次，每次2-3粒。

本发明公开了竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用。本发明竹节参提取物是从天然的中药竹节参中提取得到的，节参是常用的中草药，有长期的中医用药经验，该药使用安全性高，无明显毒性作用记载。竹节参水提取物、竹节参醇提取物、竹节参粗提物（竹节参总皂苷）、竹节参精提物（竹节参皂苷V）具有抗骨质疏松的显著性作用，且不具有肝毒性，较之现有的依瞵片剂相对安全。因此，竹节参提取物有开发成抗骨质疏松药物的前景。

Claims (2)

1.竹节参提取物在制备抗骨质疏松药物中的应用，所述的竹节参提取物为竹节参水提物、竹节参醇提物、竹节参粗提物和竹节参精提物中的任意一种或几种；

所述竹节参水提物采用以下方法制备：取竹节参药材饮片加水浸泡后，以8~12倍量水直火煎煮至少2次，每次1~3h，合并水提液，水浴浓缩近干，在≤80℃条件下，减压干燥后得竹节参水提物；

所述竹节参醇提物采用以下方法制备：取竹节参药材饮片加90%乙醇浸泡后，以8~12倍量90%乙醇水浴回流提取至少2次，每次1~3h，合并提取液，回收乙醇并浓缩近干，在≤80℃条件下，减压干燥后得竹节参醇提物粉末；

所述竹节参粗提物采用以下方法制备：①将药材粉碎；② 醇提：将粉碎后的药材加70%乙醇浸泡后，分别用8~12倍量的70%乙醇，回流提取3次，每次提取的时间为1~3h；③树脂型号与用量：HPD722树脂、D101树脂或HP20树脂，树脂的干重与中试药材重量比=8：10；④上样液浓度：上样液浓度为0.08g生药/ml；⑤水洗倍量与流速：工艺研究采用的水洗脱流速为2 BV/h，洗脱6~18个柱体积；⑥5%乙醇除杂倍量与流速：5%乙醇除杂倍量为6~14个柱体积，流速为1.5 BV/h；⑦50%乙醇洗脱倍量与流速：50%乙醇洗脱0.5个柱体积弃用，50%乙醇洗脱流速为1.5 BV/h，收集50%乙醇洗脱的0.5~6个柱体积，回收乙醇，干燥，得竹节参粗提物，所得竹节参粗提物的纯度≥50%，R转移率≥70%；

所述竹节参精提物为竹节参皂苷V 。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的抗骨质疏松药物由竹节参提取物和药学上可接受的载体或者常规食用辅料组成。