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一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素及其制备方法和用途，山核桃叶提取物球松素，含有球松素的质量百分比在90％以上。本发明以山核桃叶为依托，制备山核桃叶中的球松素，开发其功效，扩大山核桃叶新的药用资源。该山核桃叶提取物球松素能够显著降低模型大鼠的血清尿酸水平，可用于防治高尿酸血症为主要功能的药品和保健产品。<!-- 2 -->

Description

一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素及其制备方法和用途。
背景技术
尿酸是内源性嘌呤和饮食中嘌呤的代谢产物。在人体的嘌呤代谢中，ATP等经过一系列的代谢反应，生产次黄嘌呤和黄嘌呤，两者在黄嘌呤氧化酶作用下生成尿酸。当嘌呤代谢紊乱时，血尿酸水平过高，导致高尿酸血症(Hyperuricemia)的发生，继而导致尿酸盐析出结晶并沉淀在关节处，引起痛风发作，常累及肾脏引起慢性间质性肾炎和尿酸肾结石，并且可能导致代谢综合征和相关的心血管疾病。近年来，高尿酸血症的发病率急剧增加，已超过10％，已被联合国列为21世纪20大顽症之一。
目前防治高尿酸血症类药物主要分为尿酸生成抑制药(如别嘌醇)和促尿酸排泄药(如苯溴马隆)两种，尽管这些药物有明显的降尿酸作用，但是副作用也较大，如皮疹、发热、肝肾功能障碍等，因而限制了其应用的范围。因此，开发研究药效明确且安全的新型抗高尿酸血症药物十分必要。据文献报道，天然植物药材来源中含有大量黄嘌呤氧化酶抑制剂和促尿酸排泄的成分，并且毒性小，安全性高，具有较好的研究及开发前景。
山核桃树(CaryacathayensisSarg.)是胡桃科山核桃属植物，山核桃叶常作为民间传统中草药，用于清热解毒等用途，已有研究表明山核桃叶提取物含有大量抗氧化活性物质，主要为黄酮类物质，具有明显的抗衰老、抗肿瘤、抗血管生成等功效。目前，尚未见到采用山核桃叶提取物球松素治疗高尿酸血症的相关报道。发明人通过研究发现，山核桃叶提取物球松素可降低模型大鼠血清尿酸水平，可用于防治高尿酸血症为主要功能的药品及保健食品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素，同时提供了其制备方法和用途。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素，含有球松素的质量百分比在90％以上。
一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素的制备方法，包括如下步骤：(1)取山核桃叶35-65℃烘箱干燥，粉碎至40-80目，放入圆底烧瓶中，加入70-95vol％乙醇水溶液，在80-110℃常压提取20-100分钟，重复提取1-3次；然后用滤纸过滤，合并滤液；
(2)滤液中加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液碱化12h(每4ml滤液加0.5-1mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液)，碱化后的滤液与聚酰胺以10-80mL:1g液质比进行充分混合，300±100pa真空度下减压浓缩至干燥，以5-10BV/h的流速，依次用水、20vol％乙醇、60vol％乙醇洗脱，每种溶剂冲洗8-10倍柱体积，收集60vol％乙醇的洗脱液，经50-70℃、300±100pa真空度下减压浓缩至干燥得山核桃叶粗提取物；
(3)将所得的山核桃叶粗提取物溶于甲醇溶液中，质液比为1g:10-30mL，并石油醚1:1萃取，重复5-10次，将石油醚萃取液置于30-50℃、300±100pa真空度下减压浓缩至干燥，既得山核桃叶黄色粗提取物；
(4)将所得的山核桃叶黄色粗提取物以1g:8-12mL的比例，加入60vol％-90％乙醇水溶液，在70-90℃水浴中进行溶解，溶解结束后，迅速放于4℃冰箱中，放置12-24h，进行结晶，滤纸过滤，得到山核桃叶提取物球松素晶体，球松素含量在90％以上。
步骤(1)中70-95％乙醇水溶液用量为每g山核桃叶粉碎物加10mL。
具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素在制备高尿酸血症药物中的用途。
上述山核桃叶提取物球松素可以与药剂或者食品上认可的辅料，采用现代制剂技术，制成以山核桃叶提取物球松素为主的胶囊剂、片剂、散剂、口服液、软胶囊、丸剂、凝胶剂、缓释制剂等各种剂型。
本发明的有益效果是：本发明以山核桃叶为依托，制备山核桃叶中的球松素，开发其功效，扩大山核桃叶新的药用资源。发明人的实验表明：该山核桃叶提取物球松素能够显著降低模型大鼠的血清尿酸水平，可用于防治高尿酸血症为主要功能的药品和保健产品。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例：
一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素的制备方法，包括如下步骤：(1)取山核桃叶35-65℃烘箱干燥，粉碎至40-80目，放入圆底烧瓶中，加入70-95vol％乙醇水溶液，在80-110℃常压提取20-100分钟，重复提取1-3次；然后用滤纸过滤，合并滤液；
(2)滤液中加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液碱化12h，每4ml滤液加0.5-1mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液，加入氢氧化钠溶液碱化后的滤液与聚酰胺(40-200目)以10-80mL:1g液质比进行充分混合，55℃，300±100pa真空度下减压浓缩至干燥，直接加水装柱，以5-10BV/h的流速，依次用水、20vol％乙醇、60vol％乙醇洗脱，每种溶剂冲洗8-10倍柱体积，收集60vol％乙醇的洗脱液，经50-70℃、300±100pa真空度下减压浓缩至干燥得山核桃叶粗提取物；
(3)将所得的山核桃叶粗提取物溶于甲醇溶液中，质液比为1g:10-30mL，并石油醚1:1萃取，重复5-10次，将石油醚萃取液置于30-50℃、300±100pa真空度下减压浓缩至干燥，既得山核桃叶黄色粗提取物；
(4)将所得的山核桃叶黄色粗提取物以1g:8-12mL的比例，加入60vol％-90％乙醇水溶液，在70-90℃水浴中进行溶解，溶解结束后，迅速放于4℃冰箱中，放置12-24h，进行结晶，滤纸过滤，得到山核桃叶提取物球松素晶体，球松素含量在90％以上。
具体实施例1
山核桃叶干燥后，机械粉碎，称取山核桃叶粉末200g，加10倍量(g：mL)的体积百分比为95％的乙醇溶液，提取2次，每次30min，合并滤液，按每4mL滤液，0.7mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液的比例，进行碱化12h，取碱化后样品溶液100mL，与5g聚酰胺(100-200目)，充分混合，300±100pa真空减压浓缩至干燥，上层析柱(15mm×350mmi.d)，依次用10BV水洗脱，10BV20vol％乙醇，10BV60vol％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱液，300±100pa真空度下减压浓缩至干燥，获得山核桃叶粗提物。
将获得的山核桃叶粗提物溶于甲醇溶液中，溶解比例为1g山核桃叶粗提物，20mL甲醇溶液，再用等体积石油醚进行萃取10次，将石油醚产物减压旋转蒸发至干燥，获得山核桃叶黄色粗提物。将山核桃叶黄色粗提物溶解于90℃体积百分比为80％的乙醇溶液中，趁热过滤，并将滤液迅速放于4℃冰箱中，放置12h，进行结晶。将结晶液滤纸过滤，得到山核桃叶提取物球松素晶体，球松素含量在90％以上。
具体实施例2
山核桃叶干燥后，机械粉碎，称取山核桃叶粉末400g，加10倍量体积百分比为95％的乙醇溶液，提取2次，每次30min，合并滤液，按每4mL滤液，0.7mL浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液的比例，进行碱化12h，取碱化后样品溶液6000mL，与300g聚酰胺(100-200目)，充分混合，减压旋转蒸发至干燥，上层析柱(7.5cm×90.0cmi.d)，先用10BV水洗脱，再用10BV体积百分比为20％的乙醇溶液洗脱，最后用10BV体积百分比为60％的乙醇溶液洗脱，收集60％乙醇洗脱液，300±100pa真空度下减压浓缩至干燥，获得山核桃叶粗提物。
将获得的山核桃叶粗提物溶于甲醇溶液中，溶解比例为1g山核桃叶粗提物，20mL甲醇溶液，再用等体积石油醚进行萃取10次，将石油醚产物减压旋转蒸发至干燥，获得山核桃叶黄色粗提物。将山核桃叶黄色粗提物溶解于90℃体积百分比为80％的乙醇溶液中，趁热过滤，并将滤液迅速放于4℃冰箱中，放置12h，进行结晶。将结晶液滤纸过滤，得到山核桃叶提取物球松素晶体，球松素含量在90％以上。
球松素含量测定方法参见沈勇等.高效液相色谱法测定山核桃叶中5个黄酮苷元含量[J].药物分析杂志,2013年05期。
效果试验
山核桃叶提取物球松素经长期给药发现对脂肪乳剂制备的高尿酸血症模型大鼠的血清尿酸水平具有显著地降低作用。
1实验材料与仪器
1.1材料与仪器
1.1动物SD大鼠，雄性，体重(200-500g)，60只。合格证号：scxk(浙)20080033。
1.2药物配制
1.2.1受试药
山核桃叶提取物球松素，用0.3％CMC-Na配制成浓度为100mg/kg和50.0mg/kg。
1.2.2阳性药别嘌醇片，规格100mg×200片，江苏方强制药厂有限责任公司，10mg/kg和苯溴马隆片，规格50mg×10片，德国赫曼大药厂，5mg/kg。
1.3仪器
电子天平CP114(上海奥豪斯仪器有限公司)；电热套(南通利豪实验仪器有限公司)；GG17旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)；SZ-93A自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)；电冰箱(青岛海尔股份有限公司)；Dionex高效液相色谱(美国戴安公司)；TBA-AOFR(ACCUTE)全自动生化分析仪(日本东芝三广医疗株式会社)。
2实验方法
2.1给药
根据体重将60只大鼠随机分为正常组，模型对照组，阳性对照组，山核桃叶提取物球松素高剂量组(100mg/kg)，山核桃叶提取物球松素低剂量组(50mg/kg)，正常组给予纯化水，模型组给予脂肪乳剂。灌胃给药，模型组和正常股灌胃给予自来水，给药组给予对应药物，给药容量为1mL/100g体重。
2.2观察指标
连续给药8周，每2周取血测定大鼠血清尿酸(UA)水平。
2.3统计与分析
计量资料数据结果以表示，组间差异采用t-test。
3实验结果
3.1给药期间正常组、模型组和各给药组血清尿酸变化情况
与正常组相比，模型组大鼠血清尿酸明显升高(P<0.01)；与模型组相比，给药4周山核桃叶提取物球松素高剂量组能明显降低模型组大鼠UA水平(P<0.05)，且降尿酸效果平稳持续。结果见表1。
表1连续给药大鼠UA水平的变化(X±S，n＝10，)
注：与正常组相比，*P<0.05，**P<0.01；与模型对照组相比，#P<0.05，##P<0.01。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

Claims (4)

1.一种具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素，其特征在于：含有球松素的质量百分比在90％以上。
2.一种如权利要求1所述的具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取山核桃叶35-65℃烘箱干燥，粉碎至40-80目，放入圆底烧瓶中，加入70-95vol％乙醇水溶液，在80-110℃常压提取20-100分钟，重复提取1-3次；然后用滤纸过滤，合并滤液；
(2)滤液中加入浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液碱化12h，碱化后的滤液与聚酰胺以10-80mL:1g液质比进行充分混合，300±100pa真空度下减压浓缩至干燥，以5-10BV/h的流速，依次用水、20vol％乙醇、60vol％乙醇洗脱，每种溶剂冲洗8-10倍柱体积，收集60vol％乙醇的洗脱液，经50-70℃、300±100pa真空度下减压浓缩至干燥得山核桃叶粗提取物；
(3)将所得的山核桃叶粗提取物溶于甲醇溶液中，质液比为1g:10-30mL，并石油醚1:1萃取，重复5-10次，将石油醚萃取液置于30-50℃、300±100pa真空度下减压浓缩至干燥，既得山核桃叶黄色粗提取物；
(4)将所得的山核桃叶黄色粗提取物以1g:8-12mL的比例，加入60vol％-90％乙醇水溶液，在70-90℃水浴中进行溶解，溶解结束后，迅速放于4℃冰箱中，放置12-24h，进行结晶，滤纸过滤，得到山核桃叶提取物球松素晶体，球松素含量在90％以上。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中70-95％乙醇水溶液用量为每g山核桃叶粉碎物加10mL。
4.如权利要求1所述的具有降尿酸作用的山核桃叶提取物球松素在制备高尿酸血症药物中的用途。
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