CN106589202A - 一种溶菌酶固定化载体及其制备方法 - Google Patents

一种溶菌酶固定化载体及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种溶菌酶固定化载体及其制备方法，属于酶固定化技术领域。本发明采用环境友好技术悬浮聚合工艺，以丙烯酸甲酯为主要原料，以二乙烯基苯为交联剂，通过添加第三单体苯乙烯调节树脂结构以增加载体的机械强度，在复合致孔剂存在下制备了大孔酶载体基体树脂，再经过水解制备弱酸性大孔阳离子交换树脂而得到酶载体。最后通过树脂、戊二醛及溶菌酶的相互反应制备出固化化溶菌酶。用该载体制备的固定化溶菌酶活性在3000‑5000u/g之间。

Description

一种溶菌酶固定化载体及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种酶固定化载体及其制备方法，更具体地说，本发明涉及一种溶菌酶固定化载体及其制备方法，属于酶固定化技术领域。
背景技术
液态酶固定化后具有诸多优点：可增加酶的稳定性从而延长酶的使用寿命；在酶催化反应结束后可方便将酶与反应产物及反应液通过过滤手段得到分离，既降低了操作成本，又避免了酶对催化产物的污染；可实现酶催化的柱操作，提高酶催化效率等。吸附法固定化酶以其操作简单，成本较低而被广泛采用，但吸附法制备固定化酶不如共价键结合法得到的固定化酶牢固，容易脱落。尤其在流动分析过程中，固定化酶很容易被流体冲刷下来。
现有技术造成酶活性较低。
发明内容
本发明旨在解决现有技术的问题，提供一种溶菌酶固定化载体，能够使得酶活性提高。
为了实现上述发明目的，其具体的技术方案如下：
一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 35-40份
二乙烯基苯 45-50份
苯乙烯 5-10份
二甲苯 50-60份
正丁醇 50-60份
偶氮二异丁腈 1-3份；
水相：
聚乙烯醇 5-10份
明胶 5-10份
氯化钠 100-200份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
一种溶菌酶固定化载体的制备方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至45-55℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为150-200转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至75-80℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温3-4个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温2-3个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温1-2个小时；将反应体系降温至20-30℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于75-80℃水解反应6-8h；滤出，后处理即得酶载体。
本发明带来的有益技术效果：
本发明采用环境友好技术悬浮聚合工艺，以丙烯酸甲酯为主要原料，以二乙烯基苯为交联剂，通过添加第三单体苯乙烯调节树脂结构以增加载体的机械强度，在复合致孔剂存在下制备了大孔酶载体基体树脂，再经过水解制备弱酸性大孔阳离子交换树脂而得到酶载体。最后通过树脂、戊二醛及溶菌酶的相互反应制备出固化化溶菌酶。用该载体制备的固定化溶菌酶活性在3000-5000u/g之间。
具体实施方式
实施例1
一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 35份
二乙烯基苯 45份
苯乙烯 5份
二甲苯 50份
正丁醇 50份
偶氮二异丁腈 1份；
水相：
聚乙烯醇 5份
明胶 5份
氯化钠 100份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
实施例2
一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 40份
二乙烯基苯 50份
苯乙烯 10份
二甲苯 60份
正丁醇 60份
偶氮二异丁腈 3份；
水相：
聚乙烯醇 10份
明胶 10份
氯化钠 200份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
实施例3
一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 37份
二乙烯基苯 47份
苯乙烯 7份
二甲苯 55份
正丁醇 55份
偶氮二异丁腈 2份；
水相：
聚乙烯醇 7份
明胶 7份
氯化钠 150份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
实施例4
一种溶菌酶固定化载体的制备方法，包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至45℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为150转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至75℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温3个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温2个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温1个小时；将反应体系降温至20℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于75℃水解反应6h；滤出，后处理即得酶载体。
实施例5
一种溶菌酶固定化载体的制备方法，包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至55℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为200转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至80℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温4个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温3个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温2个小时；将反应体系降温至30℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于80℃水解反应8h；滤出，后处理即得酶载体。
实施例6
一种溶菌酶固定化载体的制备方法，包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至48℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为170转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至77℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温3.5个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温2.5个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温1.5个小时；将反应体系降温至25℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于77℃水解反应7h；滤出，后处理即得酶载体。

Claims (2)

1.一种溶菌酶固定化载体，其特征在于：包括以下按照重量份数计的原料：
油相：
丙烯酸甲酯 35-40份
二乙烯基苯 45-50份
苯乙烯 5-10份
二甲苯 50-60份
正丁醇 50-60份
偶氮二异丁腈 1-3份；
水相：
聚乙烯醇 5-10份
明胶 5-10份
氯化钠 100-200份
硫酸钙 15份
去离子水 1000份。
2.根据权利要求1所述的一种溶菌酶固定化载体的制备方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：
A、按照配方要求准确称取油相原料于容器中充分混合均匀，备用；按照水相配方要求，将各组分加入一具搅拌、冷凝管及加料口三口瓶内；将体系温度升至45-55℃，开动搅拌直至水相各组分充分混合溶解；将上述配制好的油相混合物倒入水相三口瓶内；
B、保持反应器中搅拌的速度为150-200转/分钟，使油相形成均匀的珠体分散在预先配制好的水相中；升温至75-80℃，直至珠体定型；
C、将聚合反应体系温度升到85℃，保温3-4个小时；将聚合反应体系升温至90℃，保温2-3个小时；将聚合反应体系升温至95℃，保温1-2个小时；将反应体系降温至20-30℃，滤出树脂珠体；采用乙醇对树脂进行淋洗，除去树脂的杂质风干即得到酶载体基体树脂，备用；用30%NaOH溶液250ml，于75-80℃水解反应6-8h；滤出，后处理即得酶载体。
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