CN106581443A - 一种预防或治疗军事应激障碍症的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种预防或治疗军事应激障碍症的中药组合物及其制备方法，所述的中药组合物由灵芝、灵芝孢子、石斛、人参、黄芪、女贞子、五味子、淡豆豉、陈皮按一定比例配制而成。本发明的中药组合物具有益气生津，补肾健脾，养心安神，解表除烦，疏肝解郁、滋阴潜阳，提高机体免疫力等功效。药效学试验证明，该中药组合物能明显改善应激障碍模型大鼠的行为学异常和免疫功能生化指标改变，并具有标本兼治的功效。临床验证结果显示：对于因各种刺激因素造成的应激障碍症的防治有效，能显著改善虚烦不眠、焦虑不安、忧郁寡欢、闷闷不乐、头痛脑胀、不思饮食、疲倦懒散和免疫力下降等症状。

Description

一种预防或治疗军事应激障碍症的中药组合物及其制备方法

技术领域：

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种可用于防治因各种刺激源所致应激障碍症的中药组合物的配方，有效组分的提取分离、富集以及制备方法。

背景技术：

应激障碍，是指一组主要由心理、社会(环境)因素引起异常心理反应而导致的精神障碍。常见的应激源有以下几项：A、严重的生活事件，如惨重的交通事故；亲人的突然死亡；遭受歹徒袭击；被强奸或重大的财产损失。B、重大的自然灾害，如洪水、地震和火灾等的对生命安全的威胁。C、战争场面，如敌对双方短兵相接的白刃战等。应激障碍症是指人在心理、生理上不能有效应对应激源所导致的各种心理生理反应，主要包括急性应激反应、创伤后应激障碍、适应障碍三大类。

军事应激障碍症，也称军事心理应激障碍(Military psychological stressdisorder)、军事心理应激反应综合征(Military mental stress reaction syndrome)，是军事应激医学研究的重要内容和新课题，它是伴随现代高技术战争的发展产生的各种恶性应急源给军人群体造成的不良心理疾病并累及心、脑、脏腑而产生的一系列心身疾病。其最直接的表现是精神紧张，恐惧感强烈，常以失眠、持续疲劳、情绪易激动、焦躁不安、易无端恼怒、爱发脾气、多疑、孤独、对外界事物兴趣减退、对工作产生厌倦感等为反应先兆；上述症状长期反复出现，还会伴随精神难于集中、记忆力减退、性功能减退、无名低热、食欲不振等，但查不出任何明显的器质性病变；严重的则可能有胃溃疡、心肌梗死等病症，并导致内分泌、免疫功能和行为方面的负性变化。

军队指战员长期处于高强度体力活动和超负荷心理压力状态中，同时，大都处于恶劣环境中，是一类经常处于应激状态的特殊人群，军事应激障碍症是我国现代战争新形势下值得重视的常见病和多发病。强军目标需要强调人的因素，保障官兵的健康体魄，更要保障战斗员的心理、脑力和智力健全，这是现代化军队立于不败之地的关键。战斗胜负的决定因素不仅仅是武器技术装备，更主要的是人的因素，随着防护装备的现代化，卫生防疫工作的不断完善。危害参战人员战斗力的重要因素，如武器、环境、生物等，造成减员的可能性将会有所降低，而军事应激造成部队减员的可能性将会有所增加。有军事家预言，今后的战争，决定胜负的一个重要因素就是该部队处理军事应激反应的能力。

军事应激障碍是部队常见的身心疾病，也是严重影响部队战斗力的主要因素。据美军和其他国家军队资料，战时的应激性减员可达卫生减员的10％-50％，当代科学技术的迅猛发展推进着新的军事革命，“信息化、数字化部队”等一系列创新的军事概念和实战体系的提出，提示着未来的高技术战争愈发快速、激烈和高智能化，军人所承受的应激程度将大幅度增强。应激反应表现将更加复杂化。因此，军事应激损伤的防治引起了各国军事医学部门的高度重视。

常见的军事应激障碍症状有：认知功能改变，如自信心动摇、判断能力下降、思维与行为协调暂时性障碍等；生理功能改变，如心跳加快、血压升高、肌肉震颤或痉挛、头痛、耳鸣、神经性厌食、呕吐、运动耐量下降等；精神失调症状，如失眠、头晕、焦虑、胃闷不适、心理性疲劳、脾气急躁、反应能力减退、适应能力减退、记忆力减退等。其结果将导致参战人员判断、决策、技术、动作发挥失常，从而影响军事任务完满达成。

对于应激性损伤的预防和治疗，现代医学主要注重心理疏导，采用了诸如参加体育和娱乐活动，音乐疗法等多种方式，间或使用一些抗抑郁药、安定药等。

近年来，一些研究者从植物中开发具有减缓应激性损伤作用的药物，已经有确定作用的植物类有；银杏叶、麻醉椒、人参等10余种。如西欧国家已经将西番莲、麻醉椒等用于应激损伤的预防，并获准进入市场；有人已根据对应激相关活性因子的认识，研制减缓应激损伤的免疫类制剂。这类制剂将有望用于面临高应激负荷的人群，发挥群体防护功能。在抗应激损伤的药物研究中，国外有关研究机构已涉及了多种营养素、药用植物、药物等多类研究，这些药物应用于军人和运动员训练和比赛，都发挥了明显的作用(参见文献：钱令嘉，关于应激与军事应激医学研究的思考,解放军预防医学杂志,19(4)：235-238,2001；王家同，苏衡，军事应激障碍的评估与防治，心理科学进展2006，14(2)：178～183；ThompsonN.Murphy M.Stradling S.Dealing with Stress.Macmillan Press LTD London,1994Pate1 C.the complete guide tress management Plenum Press.New York and London,1 991；赵璐，李霄茜，陈红云，李伟红，周爽，周庆辉，针灸在中外军队的应用与研究，第二军医大学长海医院中医系，中国针灸，34(1):99-104,2014；王振，肖泽萍，上海交通大学医学院附属精神卫生中心，创伤后应激障碍的药物治疗，中华精神科杂志，2014；许建阳，王发强，刘庆安等，中药、针灸对反恐演习人员SDS、SAS的影响，[J].武警医学，15(12)：940-941,2004)。

中医脏象及七情学说与现代心理应激理论密切相关，在认识上有许多共性。中医学注重对主观感受体验的描述，应激多侧重于对躯体反应的生物学指标的检测。现代应激理论从最初的只观察机体的生理反应也逐渐发展到重视对心理社会因素所产生的心理生理综合反应的研究，这说明二者可以相互补充，相互参照。中医学基本理论的一大特征就是强调人的有机整体性，强调人的精神、意识、思维活动与机体生理病理状态的互相关联性，强调人与自然和社会环境的相互关联性。而现代医学在阐述心理应激致病理论时，也特别强调个体的心理状态、遗传素质、社会生活环境以及其他因素的重要性。

在中医药学领域研究开发防治应激障碍症药物，具有创新意识和中国特色。对于心理应激障碍病证，中医学的理论和临床将其归入情志疾病。本证与七情：喜、怒、忧、思、悲、恐、惊；五志：喜、怒、忧、思、恐；五神：神、魂、意、志、魄密切相关。“心理应激障碍”主要涉及：恐、惊、悲、怒、忧等情志失常问题。心理应激障碍的临床表现错综复杂，症状多样，变化无常，或惊恐不安，睡眠障碍，哭泣不止，或抑郁悲伤，甚至有欲死感，或幻听，幻视，狂言等交替时作，当属于中医“邪祟”病的范畴。传统中医学虽无“心理应激障碍”之名，但从临证看，应归于“郁证”、“脏燥”等情志病范畴。

总之，对于现代认为的应激反应、心理应激障碍、各种应急源所致的应激症状，包括军事、战斗、创伤、地震等灾害所致的应激反应；推而广之也涉及现代社会快节奏和高压力造成的身心疲劳综合征等亚健康状况，在中医理论而言，属于中医情志疾病，与七情、五志、五神的过极或异常有关。心理应激障碍主要涉及：恐、惊、悲、怒、忧等情志失常问题，病证不单造成心理障碍，而且累及身体相关脏腑的病变，当属于心身疾病之复杂证候。

心理应激障碍的常见证型为：肝气郁滞、肝郁化火、心脾两虚等多见，其中有虚实交杂，阴阳失衡，气血失调，病证较为复杂。传统中药方剂有柴胡疏肝散、丹栀逍遥散、归脾汤等代表方，可随证加减(江泳，汪卫东编著，心理应激障碍中医疗法，人民军医出版社，北京，2012.1)。

中国专利CN200910000817.8，授权公布号CN101780224B，公开了一种由旋复花、代赭石、竹叶、和淡豆豉组成的中药组合物，用于预防或治疗创伤后应激障碍、焦虑症。中国专利申请CN201010539304.7，申请公布号CN102461892A，公开了一种用于灾后应激的便携功能食品配方，是由刺五加、姜黄、党参、贯叶连翘、菟丝子、枸杞子、白芍、龙骨、牡蛎、菖蒲、柴胡按照一定配比组成，在灾后提供快速供能、缓解精神紧张、毒副作用小长期食用的功能食品。中国专利申请CN201310110628.2，申请公布号CN103142880A，公开了一种用于急性应激障碍致失眠多梦的中药组合物，是由太子参、茯神、神曲、半夏、生铁落、青礞石、陈皮、石菖蒲、制附子、酸枣仁、珍珠母、龙齿、天竺黄、生甘草按照一定配比组成，具有理气和中，燥湿化痰，安神定惊的功效，能够有效治疗急性应激障碍致失眠多梦。中国专利申请CN201510205375.6，申请公布号CN104758853A，公开了一种用于创伤后应激障碍的中药制剂，它是以黄芪、太子参、生地黄、麦冬、天冬、百合、龙胆草、酸枣仁、炒白术、刺五加、五味子、远志、石菖蒲、胆南星、白蒺藜、丹参、川芎、竹茹、醋柴胡、白芍、郁金、香附、栀子、生龙骨、生牡蛎、何首乌、磁石为原料按比例配制，具有补肾宁心、安神益气、平肝养阴、行气清心作用。

但现有技术对改善军事应激障碍的大部分症状，如认知功能改变中的自信心动摇、判断能力下降、思维与行为协调暂时性障碍等；生理功能改变中的心跳加快、血压升高、肌肉震颤或痉挛、头痛、耳鸣、神经性厌食、呕吐、运动耐量下降等；精神失调症状中的失眠、头晕、焦虑、胃闷不适、心理性疲劳、脾气急躁、反应能力减退、适应能力减退、记忆力减退等效果均不显著。综上所述，国内外至今尚未开发出真正针对“军事心理应激障碍”的干预药物，可以做到专防专治。对于本病卫生干预和防治，目前多用心理治疗、营养支持及安眠精神类药物的对症用药。这类精神病用药治标不治本，毒副作用大，因此，不能大范围普遍使用作为群防群治的良方。我们还是应该着力于中药宝库中开发研制防治应激障碍的天然药物或药食兼用的功能性保健食品，应用中药方剂进行有效地预防和治疗，配合心理治疗等其他防治措施才能够取得事半功倍的效果。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种预防或治疗应激障碍症的中药组合物，本发明的另一目的在于所述的中药组合物的提取物以及制备方法，本发明的第三目的在于提供所述中药组合物及其提取物在改善军事应激障碍症等方面的应用。

本发明人认为，恐惧应激应该说是军事心理应激障碍中常见的应激类型，根据中医情志病防治经验，明确了“恐伤肾”、“怒伤肝”等病机并以此创建的应激反应动物模型，结合中医“治未病”学说对“心理应激障碍”和“身心疲劳综合征”等亚健康防治提供了理论依据和临床经验，对相关中药进行筛选研究，并依据中医中药配伍规则，研制本发明的中药组合物。

本发明经筛选、配伍，提供一种预防或治疗应激障碍症，特别是军事应激障碍症的中药组合物，由下述质量份的原料制成：灵芝1-6份、灵芝孢子(破壁更优)1-6份、石斛1-5份、人参1-5份、黄芪1-5份、女贞子1-4份、五味子1-4份、淡豆豉1-4份、陈皮1-4份。

优选的，所述中药组合物可进一步由下述质量份的原料制成：灵芝2-4份、灵芝孢子(破壁更优)2-4份、石斛2-4份、人参1-3份、黄芪2-4份、女贞子2-4份、五味子1-3份、淡豆豉1-3份、陈皮1-3份。

更优的，所述中药组合物最优选由下述质量份的原料制成：灵芝4份、灵芝孢子(破壁更优)3份、石斛3份、人参3份、黄芪3份、女贞子2份、五味子2份、淡豆豉2份、陈皮2份。

本发明中所用药材均收载于国家法定标准，所用药材品质符合其质量标准规定，各药材的来源及功效参见相关标准：灵芝，符合中国药典(2015年版一部)188页标准；黄芪，符合中国药典(2015年版一部)302页标准；人参，符合中国药典(2015年版一部)8页标准；石斛，符合中国药典(2015年版一部)92页标准；五味子，符合中国药典(2015年版一部)66页标准；女贞子，符合中国药典(2015年版一部)45页标准；陈皮，符合中国药典(2015年版一部)191页标准；淡豆豉，符合中国药典(2015年版一部)328页标准；灵芝孢子(破壁)，符合《浙江省中药炮制规范》(2014年10月修订)收载的标准。

进一步地，本发明提供了上述中药组合物的提取物(或称为中药提取物的组合物)，由精油和有效部位细粉两部分组成；

精油部分：将精油A和精油B混合均匀，经过硅胶脱水处理，过滤得到；

有效部位细粉部分：将灵芝三萜酸类提取物C、总三萜皂苷D、总多糖E和木脂素、黄酮与异黄酮类提取物F合并，混合均匀，过100～200目筛得到。

所述的中药组合物的提取物，即中药组合物中组分，可按照下述1)～6)所述方法进行制备，也即上述的中药提取物的组合物的制备方法如下：

1)灵芝孢子精油的超临界流体萃取工艺(精油A的制备)：取灵芝孢子粉(破壁)，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力25～35Mpa，萃取温度40～60℃，萃取时间1～3小时，收集所得灵芝孢子精油提取物备用(精油A)，计算并记录得油率，灵芝孢子药渣待后续处理；

2)组合物配方原料中其他药材精油的超临界CO₂萃取工艺(精油B的制备)：取组合物配方原料中五味子、女贞子、淡豆豉、陈皮，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力15～35Mpa，萃取温度40～60℃，萃取时间1～3小时，收集各原料所得精油提取物备用(精油B)，药渣待后续处理；

3)灵芝和灵芝孢子中灵芝三萜酸类提取分离工艺(灵芝三萜酸类提取物C的制备)：超临界CO₂萃取，取灵芝粗粉和提取过灵芝孢子油的破壁灵芝孢子粉药渣，添加5～30％的乙醇作为夹带剂提取灵芝三萜类组分，萃取工艺条件为：萃取压力20～40Mpa,萃取温度40～65℃，萃取时间1.0～3.0小时，得到灵芝三萜酸类提取物C；

4)三萜皂苷类提取分离工艺(总三萜皂苷D的制备)：将人参、黄芪及女贞子药渣，用5～10倍量体积的60～90％乙醇加热回流提取1～3次，每次1～3小时，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到提取物细粉，检测其中三萜皂苷含量，要求达到30％以上，必要时需要进一步进行大孔树脂柱层析精制纯化，提取过的药渣保留，供作下一步多糖提取，得到总三萜皂苷D；

5)多糖类提取分离工艺(总多糖E的制备)：将石斛切段，与提取过皂苷的人参、黄芪、女贞子的药渣及上述经超临界CO₂萃取后的灵芝与灵芝孢子药渣一起，用4～10倍量体积的10～50％乙醇加热回流提取2～3次，每次1～3小时，减压浓缩，真空干燥，粉碎，得到多糖提取物细粉，检测其中多糖含量，要求达到30％以上，必要时需要进一步进行膜分离精制纯化，得到总多糖E；

6)木脂素、黄酮与异黄酮类组分提取分离富集(木脂素、黄酮与异黄酮类提取物F的制备)：将提取过油脂的五味子、淡豆豉、陈皮粉药渣，添加4～8倍量体积的60～90％的乙醇提取分离木脂素、异黄酮和黄酮类组分，提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到含木脂素、黄酮和异黄酮提取物粗提物细粉，检测其中总黄酮类含量，要求达到10％以上，木脂素含量，要求达到4％以上，必要时需要进一步进行硅胶柱层析精制纯化，得到木脂素、黄酮与异黄酮类组分提取物(F)。

本发明所述中药提取物的组合物，其中有效组分含量指标为：总三萜≥15％(g/g)，总多糖≥35％(g/g)，总黄酮≥2.0％(g/g)。

进一步地，本发明还提供了上述中药组合物作为活性成份的中药制剂；以及上述中药组合物的提取物作为活性成份的中药制剂。

在上述中药组合物、中药组合物的提取物中还可以加入一种或多种辅料。所述辅料包括药剂学制剂工艺常用的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体及润滑剂等。

本发明所述的中药制剂，主要通过口服途径给药，剂型可以是片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、汤剂、丸剂、散剂、滴丸剂、口服液和脂质体制剂。上述各种剂型均可以按照中药制剂的常规方法制备。

本发明还提供了上述中药组合物中药组合物的提取物及其提取物在改善军事应激障碍症等方面的应用。

本发明所述的中药组合物、中药组合物的提取物、中药制剂可以制备抗应激障碍症药物；制备防治军事应激障碍症的军特药；制备增强免疫力的功能性产品；制备具有改善睡眠功能的保健食品。

本发明的中药组合物配方，主要依据传统中医药对应激反应和疲劳综合征属于中医情志病范畴如“郁证、庳惵、不寐”等的临床经验，结合现代医学免疫学理论，以及大量的中医药研究成果和临床应用实践。本发明处方以灵芝为君药组方，源于传统中医本草古籍对灵芝的应用经验；其他配方药材和有关药对配伍参考传统中医临床用药的经验总结。本方中灵芝和灵芝孢子合二为一作为君药，石斛、人参、黄芪为臣，女贞子、五味子、淡豆豉为佐，陈皮为使。

本发明的中药组合物选用具有强大免疫增强作用，又能宁心安神的灵芝和灵芝孢子(破壁)为方中主药，灵芝和灵芝孢子粉性平，味甘，无毒。归肺、心、脾、肾经。功能主治：益气血，安心神，健脾胃，补气安神，止咳平喘。主治气血不足、心神失养所致的心神不宁、失眠、惊悸、多梦、健忘、体倦神疲、食少等症。现代研究证明灵芝能提高机体免疫功能，抑制肿瘤生长，提高心肌收缩力，抗衰老，抗氧化等功能。应对应激障碍症出现的免疫功能紊乱、免疫力下降(根本原因)以及焦虑、忧郁，心神不宁、失眠惊悸和多梦健忘等(表现症状)。可见，灵芝独一味药就可显标本兼治治之功效。据此，灵芝在本方中处于君主地位。配合人参、黄芪药对，人参、黄芪同为补气要药，人参味甘、微苦而性微温，善补五脏之气，补气而兼能养阴，守而不走；黄芪味甘性温，善走肌表，补气而兼能补阳，走而不守。二药相须配对，共同辅助灵芝，发挥强大的补气助阳作用。两者一走一守补元气、生精血、阴阳兼顾，扶正固本功效显著。因此，黄芪、人参作为药对伍用，更能增强灵芝的提高免疫功能的功效；方中用石斛，生津益胃，清热养阴，益精补虚。主治热病伤津，口干烦渴，病后虚热，阴伤目暗，平胃气，长肌肉，逐邪热，定志除惊。在方中，取其泻虚火，滋肾阴，消烦渴之功，还可调和全方药性，平衡阴阳；女贞子补肝肾，强腰膝，明目乌发，善治阴虚内热，头晕目花，须发早白；五味子益气生津，补肾宁心；淡豆豉解表，除烦，宣发郁热，主头痛，烦燥，胸闷，虚烦不眠；陈皮行气健脾、燥湿化痰，理气散结，辅助方中主药的补五脏之气通达全身，并可消除和防止服药造成的胃肠道不适，诸药配伍，可对焦虑、烦躁、忧郁、疲倦、头痛、失眠及免疫功能降低等应激障碍所致的典型临床症状得到明显改善。

本发明中药组合物的制备是通过提取，浓缩和富集组方药材的有效部位，可以发挥多成分、多路径、多靶点协同作用，使本品体现原方应有的功效。本中药组合物的优势在于既有双向调节失调的生理功能，同时具有显著的宁心、安神，提高机体免疫力的功效，对调整心态，改善睡眠，增强食欲、恢复和提高体力耐力的作用十分明显。

本发明中药组合物的组方药味均属于药食兼用品种，安全无毒，祛邪扶正而不伤正气，故对于军事应激障碍症易感人群既可改善其应激反应症状，减轻身心疲劳，宁心安神，振奋精神，达到治疗目的，又可调整机体免疫功能，增强抗病能力，体现“扶正祛邪，调平阴阳”而防范身心亚健康之功效。

本发明特别适用于包括军事应激障碍在内的各种应激障碍症患者、能显著改善焦虑、烦躁、忧郁、疲倦、头痛、失眠及免疫功能降低等应激障碍所致的典型临床症状，故本品适用于需要长期工作在应激状态下的易感人群，如水下作业、远洋航行、潜水探险、航天航海、高热高寒非常环境、海防高原恶劣气候下上班人群，特别对参战、军训、抢险救灾的军人和高强度训练比赛的运动员等具有应激损伤保护作用。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明中药组合物的成分、配比和制备方法，以及有益效果。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

下述实施例中所用的灵芝、灵芝孢子(破壁)、石斛、人参、黄芪、女贞子、五味子、淡豆豉、陈皮均符合中国药典(2015年版一部)各药材项下的有关质量标准规定。

实施例1、本发明所述中药组合物的制备方法

取灵芝4kg、灵芝孢子(破壁)3kg、石斛3kg、人参3kg、黄芪3kg、女贞子2kg、五味子2kg、淡豆豉2kg、陈皮2kg，(总量24kg)；除灵芝孢子外，各种药材分别切片或破碎成粗粉，按以下流程进行操作：

1)灵芝孢子精油的超临界流体萃取工艺：取灵芝孢子粉(破壁)3kg，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力25Mpa，萃取温度60℃，萃取时间3h，收集所得灵芝孢子精油提取物备用(精油A)得到黄棕色灵芝孢子精油0.53kg，计算并记录得油率17.75％，灵芝孢子药渣待后续处理；

2)组合物配方原料中其他药材精油的超临界CO₂萃取工艺：取组合物配方原料中五味子、女贞子、淡豆豉、陈皮总量8kg，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力15Mpa，萃取温度60℃，萃取时间3h，收集得到红棕色精油0.59kg，得率7.38％(精油B)，备用，药渣待后续处理；

3)灵芝和灵芝孢子中灵芝三萜酸类提取分离工艺：超临界CO₂萃取，取灵芝粗粉和提取过灵芝孢子油的破壁灵芝孢子粉药渣，添加10％的乙醇作为夹带剂提取灵芝三萜类组分，萃取工艺条件为：萃取压力30Mpa,萃取温度65℃，萃取时间3h，得到灵芝三萜酸类提取物(C)0.66kg，得率10.31％；

4)三萜皂苷类提取分离工艺：将人参、黄芪及女贞子药渣，用8倍量体积的60％乙醇加热回流提取3次，每次3h，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到提取物细粉，得到总三萜皂苷(D)0.81kg，得率10.13％，提取过的药渣保留，供作下一步多糖提取；

5)多糖类提取分离工艺：将石斛3kg切段，与提取过皂苷的人参、黄芪、女贞子的药渣及上述经超临界CO₂萃取后的灵芝与灵芝孢子药渣一起，用6倍量体积的20％乙醇加热回流提取2次，每次3h，减压浓缩，真空干燥，粉碎，得到多糖提取物细粉(E)2.75kg，得率15.28％；

6)木脂素、黄酮与异黄酮类组分提取分离富集：将提取过油脂的五味子、淡豆豉、陈皮粉药渣，添加6倍量体积的70％的乙醇提取分离木脂素、异黄酮和黄酮类组分，提取3次，每次3h，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到含木脂素、黄酮和异黄酮提取物粗提物细粉(F)0.45kg，得率7.50％。

实施例2、本发明所述中药组合物的制备方法二，包括下述步骤：

取灵芝2kg、灵芝孢子(破壁)4kg、石斛4kg、人参2kg、黄芪4kg、女贞子2kg、五味子1.5kg、淡豆豉2.5kg、陈皮2.5kg，(总量24.5kg)；除灵芝孢子外，各种药材分别切片或破碎成粗粉，按以下流程进行操作：

1)灵芝孢子精油的超临界流体萃取工艺：取灵芝孢子粉(破壁)4kg，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力35Mpa，萃取温度50℃，萃取时间2h，收集所得灵芝孢子精油提取物备用(精油A)，得到浅黄棕色灵芝孢子精油0.69kg，得率17.25％，灵芝孢子药渣待后续处理；

2)组合物配方原料中其他药材精油的超临界CO₂萃取工艺：取组合物配方原料中五味子、女贞子、淡豆豉、陈皮总量8kg，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力30Mpa，萃取温度50℃，萃取时间2h，收集收集得到红棕色精油0.55kg，得率6.87％，备用(精油B)，药渣待后续处理；

3)灵芝和灵芝孢子中灵芝三萜酸类提取分离工艺：超临界CO₂萃取，取灵芝粗粉和提取过灵芝孢子油的破壁灵芝孢子粉药渣，添加20％的乙醇作为夹带剂提取灵芝三萜类组分，萃取工艺条件为：萃取压力40Mpa,萃取温度55℃，萃取时间2h，得到灵芝三萜酸类提取物(C)0.77kg，得率12.83％；

4)三萜皂苷类提取分离工艺：将人参、黄芪及女贞子药渣，用10倍量体积的90％乙醇加热回流提取2次，每次2h，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到总三萜皂苷提取物细粉(D)0.89kg，得率11.13％，提取过的药渣保留，供作下一步多糖提取；

5)多糖类提取分离工艺：将石斛4kg切段，与提取过皂苷的人参、黄芪、女贞子的药渣及上述经超临界CO₂萃取后的灵芝与灵芝孢子药渣一起，用10倍量体积的40％乙醇加热回流提取2次，每次2h，减压浓缩，真空干燥，粉碎，得到总多糖提取物细粉(E)2.69kg，得率14.16％；

6)木脂素、黄酮与异黄酮类组分提取分离富集：将提取过油脂的五味子、淡豆豉、陈皮粉药渣，添加8倍量体积的90％的乙醇提取分离木脂素、异黄酮和黄酮类组分，提取2次，每次2h，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到含木脂素、黄酮和异黄酮类组分提取物粗提物细粉(F)0.46kg，得率7.08％。

实施例3、制备防治应激障碍症中药组合物软胶囊剂。

将中药组合物的精油部分A、B各0.2kg置合适容器中，于50℃保温；

将中药组合物有效部位混合细粉C、D各0.1kg，E0.2kg、F0.1kg加入保温的精油部分中，添加药用规格茶油0.1～0.3kg，调整内容物体积和粘稠度，经过胶体磨多次研磨，充分混合均匀，过120目筛，必要时重复操作2次，将内容物均质化成混悬液，制备成软胶囊1000粒，每粒含内容物1.0g～1.2g，放置，整粒，洗涤，干燥，包装，检验，即得合格成品。

实施例4、制备防治应激障碍症中药组合物颗粒剂。

将中药组合物的精油部分A、B各0.1kg置合适容器中，用β-环糊精0.4kg进行包合，将此精油包合物再与中药组合物有效部位混合细粉,C、D、E、F各0.1kg，在混合器中充分混合均匀，进行干法制粒或湿法80目制粒，干燥，整粒，制得颗粒剂量为1kg左右，包装，检验，即得。

实施例5、制备防治应激障碍症中药组合物胶囊剂。

将中药组合物的精油部分A、B各0.05kg，置合适容器中，用β-环糊精0.2kg进行包合，将此精油包合物再与中药组合物有效部位混合细粉C、D、E、F各0.05kg在混合器中充分混合均匀，进行干法制粒或湿法80目制粒，干燥，整粒，在硬胶囊自动灌装机上填充胶囊定时进行粒重检查，抛光，整粒，制得1000粒，每粒胶囊含内容物重0.5g，包装，检验，即得。

实施例6、本发明中药组合物对复合应激障碍症模型大鼠药效学试验结果。

实验模型以中医“恐伤肾”和“怒伤肝”理论为基础，综合目前药理实验常用的急性、慢性应激动物造模方法，建立恐-怒复合应激障碍大鼠模型，对本发明中药组合物进行药效学研究。

动物及分组：健康雄性Wistar大鼠(清洁级)50只，体重200±20g，第二军医大学实验动物中心提供[SCXK(沪)2002-2006]。动物饲养，除正常组每笼放5只群养外，其他各组动物均各自孤养，自由进食及饮水，自然光照。将50只实验动物完全随机分为5组：模型组、正常对照组、本发明中药组合物低、中、高剂量组，每组10只。在造模同时各组开始给药，中药组合物(用实施例3制备的软胶囊，除去软胶囊外壳，取内容物供试)低、中、高组的剂量为100mg/kg/d、200mg/kg/d、400mg/kg/d。

复合应激模型，其具体建模方法为：将大鼠禁锢2小时，限制活动，期间同时对大鼠足底施以不可逃避电刺激(4mA，60V)持续2秒，随机变化时间间隔(30～120秒)；禁锢结束后，将大鼠取出进行强迫、力竭式游泳，直到大鼠放弃挣扎沉底；单笼孤独饲养；禁食/禁水；4℃冷应激；昼夜颠倒等刺激，随机变化刺激方法，每天进行1～2种刺激，历时21天。通过给予动物上述多种不同的刺激建立大鼠恐-怒复合应激障碍动物模型。检测结果显示，模型组与正常对照组动物的各项指标具有显著性差异(P<0.05，P<0.01)，造模成功。

检测方法和结果：

1)体重与食物消耗量：造模21天后，模型组大鼠与正常组体重相比，两组大鼠体重差异非常显著(P<0.01)，与中药组合物低、中、高剂量组比较差异显著((P<0.05)。模型组大鼠体重增长趋势缓慢，增幅显著小于对照组和中药组合物组。与模型组比较，中药组合物低中高剂量组的食物消耗量明显增加(P<0.05)。

2)行为学测试：以Open field旷场测试和双瓶蔗糖水消耗实验来评定大鼠应激后的行为变化。学习记忆行为指标采用Morris水迷宫和Y迷宫。应激前，各组大鼠在旷场测试中各行为指标的比较差异无显著性P>0.05)。应激后，模型组大鼠与对照组、中药组合物中、高剂量组相比，除了呆滞时间和理毛次数差异无显著性，其余行为指标均差异显著，模型组大鼠水平穿越格子数明显减少(p<0.01)、中央格停留时间延长(p<0.05)、站立次数明显减少(p<0.01)；中药组合物低剂量组也有显著性差异(p<0.05)。模型组大鼠与对照组和给药组相比，在试验的不同时间段内均表现出易激惹、厮打行为多、活动减少、扎堆懒散等现象。

蔗糖水消耗实验：与模型组比较，正常组、中药组合物低、中、高剂量组对糖水的偏嗜明显增强(P<0.05)

Morris水迷宫和Y迷宫：Morris水迷宫结果：定位航行试验中，模型组大鼠逃避潜伏期较对照组延长(p<0.01)，中药组合物低、中、高剂量组逃避潜伏期较模型组缩短(P<0.05)；空间探索实验中，模型组原平台象限游泳时间(路程)/总时间(总路程)的比值较正常对照组减小(P<0.01)；中药组合物低、中、高剂量组的上述比值均大于模型组(P<0.05)。Y迷宫实验中，模型组大鼠第二天的主动回避反应次数明显减少，与对照组和各给药组相比，差异显著(P<0.05)。

3)生化指标检测：模型组大鼠脑海马天冬氨酸、谷氨酸含量明显增高；额叶皮质5-HT含量降低，与对照组比较有非常显著(P<0.01)；中药组合物3个剂量组与模型组比较，海马天冬氨酸、谷氨酸含量降低；额叶皮质5-HT含量较高，有显著性差异(P<0.05)。

可见，本发明中药组合物具有改善应激大鼠模型抑郁状态，改善其躯体症状和体征；可降低慢性应激大鼠海马Asp、Glu的含量和提高额叶皮质5-HT的含量。

上述药效学实验结果提示：该中药组合物软胶囊具有改善军事应激障碍所致负性影响的作用，如认知功能方面：有利于保持或恢复正常的记忆力和判断能力；行为能力方面：增加或保持食欲、体重和运动能力，消除或减轻疲劳、失眠、头痛等；精神心理状态方面：改善心态，排除或减轻焦虑、易激怒或忧郁寡欢等症状。

实施例7、本发明的防治应激障碍中药组合物小鼠免疫调节试验结果。

动物及分组：试验动物为昆明种小鼠，体重22g±3g，随机分组，每组10只，雌雄各半；经口每天给予400mg/kg/d、200mg/kg/d、100mg/kg/d(分别相当于成人每日每千克体重推荐摄入量的10倍，5倍，2.5倍)中药提取物(用实施例3制备的软胶囊，除去软胶囊外壳，取内容物供试)30天，各项试验结果如下：

1)体重：实验后各受试动物剂量组小鼠增重于正常对照组无显著差异性(P＞0.05)。

2)脏器体重的比值：与正常对照组比，各组小鼠胸腺体比值、脾体比值无统计学差异(P＞0.05)。

3)细胞免疫功能试验：诱导的小鼠脾对靶细胞转化试验(MTT法)：各剂量组光密度差值均高于正常对照组和模型组，且随剂量增加而增加，中、高剂量组有统计学显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。提示中、高剂量本品具有增强小鼠淋巴细胞增殖能力。二硝基氟苯(DNFB)诱导的消除迟发性变态反应(DTH)：各剂量组小鼠的耳廓肿胀度均高于正常对照组值，且随剂量增加而增加，各剂量组均有统计学显著差异(P＜0.05，P＜0.01)。提示本品可增强DNFB引起的小鼠迟发性变态反应。根据以上两项试验结果，表明该中药提取物具有增强小鼠细胞免疫功能。

4)体液免疫功能试验：抗体生成细胞检测(Jeme改良玻片法)：各剂量组空斑数均高于正常对照组，中、高剂量组空斑与对照组相比有统计学差异(P＜0.05，P＜0.01)。提示中、高剂量本品具有增强小鼠抗体生成细胞的能力。血清溶血素试验：各剂量组小鼠血清半数溶血值(HC₅₀)均高于正常对照组值，高剂量组有显著统计学差异(P＜0.05)。提示高剂量本品可增强小鼠产生血清溶血素的能力。

5)单核-巨噬细胞功能试验：小鼠碳廓清试验：各剂量组的吞噬指数与正常对照组相比，均具有统计学显著性差异(P＜0.05)。提示本品有明显增强小鼠碳廓清能力的作用。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(滴片法)：各剂量组小鼠的单核一巨石吞噬百分率和吞噬指数均高于对照组相应值，中、高剂量组吞噬率及各剂量组吞噬指数均有统计差异(P＜0.05，P＜0.01)。提示本试验条件下，本品具有增强小鼠腹腔吞噬细胞吞噬能力的作用。

6)NK细胞活性测定：各剂量组的NK细胞活性均高于对照组，且具有明显统计学差异(P＜0.05)，表明本品具有增强小鼠NK细胞活性的作用。

综合上述实验结果，根据增强免疫力功能评价标准，表明该中药组合物物具有增强免疫力的作用。

实施例8、本发明的防治应激障碍症的中药组合物的毒理学研究结果：

1)小鼠急性毒性试验：本品LD50为13.92g/kg，相当于推荐人临床剂量的292倍。(测试方法参见：彭成主编.中药药理学，中国中医药出版社，北京，2012.8；卫生部法监司发布.保健食品安全性毒理学评价规范，2003年版)

2)大鼠急性毒性试验：本品LD₅₀为17.54g/kg，相当于推荐人临床剂量的365倍。(测试方法参见：彭成主编.中药药理学，中国中医药出版社，北京，2012.8；卫生部法监司发布.保健食品安全性毒理学评价规范，2003年版)

3)大鼠连续服用本品13周毒性试验：本试验为评价本品连续经口给予大鼠90天的毒性以及停药30天恢复期的反应可逆性。低、中、高剂量组分别为1g/kg/d、2g/kg/d、3g/kg/d，试验期每组动物20只，雌、雄各10只，恢复期动物每组10只，雌、雄各5只。试验结果：给药即时动物未见明显的毒性反应，未发现死亡。血液生化学检查无异常，结束时称取动物体重，两种性别均呈现体重增长的趋势，与空白对照组相比无显著性差异。实验结束后各组每只动物解剖，取肝、肾、胃、十二指肠、脾、睾丸、卵巢切片于显微镜下观察未见明显实质性病理变化，给药组和对照组情况相似。表明所检大鼠各器官均未出现与服用该中药提取物明显有关的组织病理学改变。

实施例9、初步临床验证结果：

将本发明实施例3所述中药组合物的软胶囊剂，进行临床验证试验。

口服，一天2次，一次2粒(0.85g/粒)，由神经内科、心理治疗科及中医内科选择具有应激障碍症临床症状的患者(多数由突发刺激源造成如焦虑不安、虚烦不眠、纳呆食少、忧郁寡欢、头晕头痛、疲倦乏力等)。连续用药2周，复诊后根据症状情况可再服用2周，再诊时给予疗效评价。

统计结果：治愈9例，显效15例，改善3例，无效3例，总计30例，总有效率90.0％。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (10)

1.一种预防或治疗应激障碍症的中药组合物，由下述质量份的原料制成：灵芝1-6份、灵芝孢子1-6份、石斛1-5份、人参1-5份、黄芪1-5份、女贞子1-4份、五味子1-4份、淡豆豉1-4份、陈皮1-4份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由下述质量份的原料制成：灵芝2-4份、灵芝孢子2-4份、石斛2-4份、人参1-3份、黄芪2-4份、女贞子2-4份、五味子1-3份、淡豆豉1-3份、陈皮1-3份。

3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由下述质量份的原料制成：灵芝4份、破壁灵芝孢子3份、石斛3份、人参3份、黄芪3份、女贞子2份、五味子2份、淡豆豉2份、陈皮2份。

4.一种如权利要求1至3任一项所述的中药组合物的提取物，其特征在于，所述的中药组合物的提取物中总三萜重量百分比≥15%，总多糖重量百分比≥25%，总黄酮重量百分比≥2.0%。

5.一种如权利要求1至3任一项所述的中药组合物的提取物，其特征在于，所述的中药组合物的提取物由精油和有效部位细粉两部分组成；

精油部分：由灵芝孢子用超临界CO₂萃取的精油A和五味子、女贞子、淡豆豉、陈皮混合用超临界CO₂萃取的精油B组成；

有效部位细粉部分：由灵芝和灵芝孢子用超临界CO₂萃取的灵芝三萜酸类提取物C；人参、黄芪及女贞子用乙醇回流提取的总三萜皂苷D；石斛、人参、黄芪、女贞子、灵芝及灵芝孢子用乙醇回流提取的总多糖E；和五味子、淡豆豉、陈皮用乙醇回流提取的木脂素、黄酮与异黄酮类提取物F组成。

6.一种如权利要求1至3任一项所述的中药组合物的提取物，其特征在于，所述的中药组合物的提取物由精油和有效部位细粉两部分组成；

精油部分：将精油A和精油B混合均匀，经过硅胶脱水处理，过滤得到；

有效部位细粉部分：将灵芝三萜酸类提取物C、总三萜皂苷D、总多糖E和木脂素、黄酮与异黄酮类提取物F合并，混合均匀，过100～200目筛得到；

1）精油A的制备：取灵芝孢子粉，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力25～35Mpa，萃取温度40～60℃，萃取时间1～3小时，收集所得的精油A，灵芝孢子药渣待后续处理；

2）精油B的制备：取五味子、女贞子、淡豆豉、陈皮，混合，粉碎成粗粉，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力15～35Mpa，萃取温度40～60℃，萃取时间1～3小时，收集所得的精油B，药渣待后续处理；

3）灵芝三萜酸类提取物C的制备：取灵芝粗粉和提取过灵芝孢子油的破壁灵芝孢子粉药渣，添加5～30%的乙醇作为改性剂，超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力20～40Mpa,萃取温度40～65℃，萃取时间1.0～3.0小时，得到灵芝三萜酸类提取物C；

4）总三萜皂苷D的制备：将人参、黄芪及女贞子药渣，用5～10倍量体积的60～90%乙醇加热回流提取1～3次，每次1～3小时，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到总三萜皂苷D；

5）总多糖E的制备：将石斛切段，与提取过皂苷的人参、黄芪、女贞子的药渣及上述经超临界CO₂萃取后的灵芝与灵芝孢子药渣一起，用4～10倍量体积的10～50%乙醇加热回流提取2～3次，每次1～3小时，减压浓缩，真空干燥，粉碎，得到总多糖E；

6）木脂素、黄酮与异黄酮类提取物F的制备：将提取过油脂的五味子、淡豆豉、陈皮粉药渣，添加4～8倍量体积的60～90%的乙醇提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到木脂素、黄酮与异黄酮类提取物F。

7.一种如权利要求1至3任一项所述的中药组合物的提取方法，其特征在于，所述的提取方法包括以下步骤；

1）精油A的制备：取灵芝孢子粉，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力25～35Mpa，萃取温度40～60℃，萃取时间1～3小时，收集所得的精油A，灵芝孢子药渣待后续处理；

2）精油B的制备：取五味子、女贞子、淡豆豉、陈皮，混合，粉碎成粗粉，用超临界CO₂萃取，萃取工艺条件为：萃取压力15～35Mpa，萃取温度40～60℃，萃取时间1～3小时，收集所得的精油B，药渣待后续处理；

3）灵芝三萜酸类提取物C的制备：取灵芝粗粉和提取过灵芝孢子油的破壁灵芝孢子粉药渣，添加5～30%的乙醇，超临界流体萃取，萃取工艺条件为：萃取压力20～40Mpa,萃取温度40～65℃，萃取时间1.0～3.0小时，得到灵芝三萜酸类提取物C；

4）总三萜皂苷D的制备：将人参、黄芪及女贞子药渣，用5～10倍量体积的60～90%乙醇加热回流提取1～3次，每次1～3小时，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到总三萜皂苷D；

5）总多糖E的制备：将石斛切段，与提取过皂苷的人参、黄芪、女贞子的药渣及上述经超临界CO₂萃取后的灵芝与灵芝孢子药渣一起，用4～10倍量体积的10～50%乙醇加热回流提取2～3次，每次1～3小时，减压浓缩，真空干燥，粉碎，得到总多糖E；

6）木脂素、黄酮与异黄酮类提取物F的制备：将提取过油脂的五味子、淡豆豉、陈皮粉药渣，添加4～8倍量体积的60～90%的乙醇提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，减压浓缩，回收乙醇，真空喷雾干燥，粉碎，得到木脂素、黄酮与异黄酮类提取物F。

8.一种改善军事应激障碍症的中药制剂，其活性成份为如权利要求1至3任一项所述的中药组合物，或如权利要求4至6任一项所述的中药组合物的提取物。

9.根据权利要求8所述的一种改善军事应激障碍症的中药制剂，其特征在于，所述的中药制剂的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂、软胶囊剂、汤剂、丸剂、散剂、滴丸剂、口服液，或脂质体制剂。

10.如权利要求1至3任一项所述的中药组合物或如权利要求4至6任一项所述的中药组合物的提取物在制备以下任一产品中的应用：

1)制备防治应激障碍症药物；

2)制备改善军事应激障碍症的军特药；

3)制备增强免疫力的功能性产品；

4)制备具有改善睡眠功能的保健食品。