CN106572999A - Syk抑制剂 - Google Patents

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A.克拉克
K.S.柯里
J.迪保罗
J.E.克罗普夫
S.H.李
J.R.洛
S.A.米切尔
A.C.施密特
S.斯瓦米纳坦
J-M.熊
J.徐
Z.赵
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Abstract

本发明涉及作为Syk抑制剂的化合物，涉及它们在治疗多种疾病(包括癌症和炎性病症)中的用途。在具体的实施方案中，化合物的结构由式I给出，其中R1、R2、R3和R4如本申请所定义。本发明还提供了药物组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐，以及使用这些化合物和组合物治疗由Syk所介导的病症的方法。在一些实施方案中，还公开了在需要治疗的受试者(例如，人)中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合给药于所述受试者。

Description

SYK抑制剂
技术领域
本申请涉及化合物和它们在治疗各种疾病中的用途，所述疾病包括癌症和炎性病症。本申请还涉及制备所述化合物的方法和包含所述化合物的药物组合物。
背景技术
蛋白激酶(人类酶的最大家族)包括超过500种蛋白质。脾酪氨酸激酶(Syk)为酪氨酸激酶Syk家族的一员，且为早期B细胞发育以及成熟B细胞活化、信号传导和存活的调节子。
Syk活性的抑制可用于治疗变态反应性疾病、自身免疫性疾病和炎性疾病，例如：SLE、类风湿性关节炎、多发性血管炎(multiple vasculitides)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、重症肌无力、变应性鼻炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、成人呼吸窘迫综合征(ARDs)和哮喘。此外，已经报道Syk在通过B细胞受体的非配体依赖性滋养信号传导(已知其为B细胞中重要的存活信号)中起着重要作用。因此，Syk活性的抑制也可用于治疗某些类型的癌症，包括B细胞淋巴瘤和白血病。美国专利8,455,493和8,440,667公开了Syk抑制剂，将其公开的全部内容通过引用的方式并入本申请。
继续需要提供作为有效Syk抑制剂的化合物，包括对于用作治疗癌症和其它疾病的治疗剂而言具有希望的药代动力学性质的化合物，包括以与其他药物或化学治疗剂的可能组合用于治疗血液肿瘤和实体瘤的化合物。
发明内容
因此，本申请提供了用作Syk抑制剂的化合物。在一个实施方案中，本申请提供了式I化合物：
或其药学上可接受的盐，其中:
R1选自其中＊表示式I的所示苯环中R1所连接的碳原子；
R2为H或者2-羟基乙氧基；
R3为H或者甲基；和
R4为H或者甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 在一些实施方案中，R1为在一些实施方案中，R1为在一些实施方案中，R1为
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R2为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R2为2-羟基乙氧基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H或2-羟基乙氧基；R3为H或甲基；且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的变化方案中，R1为R2为H；R3为H或甲基；且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的另一变化方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基；R3为H；且R4为H或甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R2、R3和R4中的任一个为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的另一变化方案中，R1为且R2、R3和R4中的任两个为H。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R2、R3和R4中的任一个为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R2、R3和R4中的任两个为H。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2和R3各自为H，且R4为H或甲基。
在一些实施方案中，式I化合物选自：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，式I化合物选自：2-(5-((6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇；6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺；2-((4-(4-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)丙-1,3-二醇；2-(5-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇；(R)-(4-(4-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)吗啉-2-基)甲醇；6-(6-氨基吡嗪-2-基)-5-甲基-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺；和6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺；或其药学上可接受的盐。
本申请还提供了使用式I化合物或其药学上可接受的盐治疗受试者如人中的疾病或者病症的方法。这种疾病和病症包括炎性疾病、变态反应性疾病、自身免疫性疾病或者癌症(包括癌、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病)。
在一些情况中，可用本申请公开的化合物治疗的疾病和病症包括癌症如膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、肾癌/肾细胞癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、甲状腺癌、白血病、黑色素瘤和非霍奇金淋巴瘤。
在一些实施方案中，所述疾病为癌症，包括血液恶性肿瘤或者实体瘤。在一些实施方案中，所述癌症为淋巴瘤、多发性骨髓瘤或者白血病。在一些实施方案中，所述血液恶性肿瘤为白血病或者淋巴瘤。
在一些实施方案中，可治疗的疾病或病症为血液恶性肿瘤，其选自淋巴瘤(例如小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)、顽固性非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤(+/-绒毛淋巴细胞)、结节边缘区淋巴瘤(+/-单核细胞样B细胞)、粘膜相关淋巴样组织(MALT)型的结节外边缘区B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤(例如皮肤T细胞淋巴瘤、结节外T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿(mycosis fungoides))、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、纵隔大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤)、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤和白血病(例如急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性T细胞型淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、急性B细胞型淋巴细胞性白血病(B-ALL)、B细胞幼淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、幼年粒单核细胞性白血病(JMML)、微小残留病灶(minimalresidual disease,MRD)、毛细胞性白血病、骨髓纤维化(例如原发性或者继发性骨髓纤维化)，或者慢性髓细胞样白血病(CML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性疾病(MPD)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)。
在一些实施方案中，所述癌症为实体瘤。在一些实施方案中，所述实体瘤为选自以下的癌症：胰腺癌、泌尿器癌、膀胱癌、结肠直肠癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、胆囊癌、肺癌(例如非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、黑色素瘤、神经内分泌癌、CNS癌症、脑瘤(例如，神经胶质瘤、间变性少突神经胶质瘤、成人多形性胶质母细胞瘤，和成人间变性星形细胞瘤)、骨癌、软组织肉瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、腹膜渗漏、恶性胸腔积液、间皮瘤、维尔姆斯瘤、滋养层肿瘤、血管外皮细胞瘤、卡波西肉瘤、粘液癌、圆细胞癌、鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、口腔癌、肾上腺皮质癌、产生ACTH的肿瘤。
在一些实施方案中，可治疗的疾病或病症选自系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力、古德帕斯彻综合征(Goodpasture’s syndrome)、肾小球肾炎、出血、肺出血、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎(RA)、牛皮癣关节炎、单关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎、脊椎炎、贝赫切特病(disease)、自身免疫性甲状腺炎、雷诺综合征(Reynaud’s syndrome)、急性播散性脑脊髓炎、慢性特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化(MS)、斯耶格伦氏综合症(syndrome)、自身免疫性溶血性贫血、组织移植排斥、移植器官的超急性排斥、同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、涉及白细胞渗出的疾病、由于白细胞恶液质和转移导致的疾病(disease states due to leukocyte dyscrasia and metastasis)、粒细胞输注相关综合征(granulocyte transfusion-associated syndromes)、细胞因子诱导的毒性、硬皮病、脉管炎(vasculitis)、哮喘、牛皮癣、炎性肠病(例如慢性炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、坏死性小肠结肠炎)、肠易激综合征、皮肌炎、艾迪生病、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病、I型糖尿病、脓毒症、感染性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒症、革兰氏阳性脓毒症和中毒性休克综合征、继发于败血病的多器官损伤综合征(multiple organinjury syndrome secondary to septicemia)、创伤、低血容量性休克、变应性结膜炎、春季结膜炎和甲状腺相关性眼病、嗜酸性肉芽肿、湿疹、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征、变应性鼻炎、鼻炎、花粉症、支气管哮喘、硅肺病、肺结节病、胸膜炎、肺泡炎、肺气肿、肺炎、细菌性肺炎、支气管扩张症和肺型氧中毒、心肌或脑或四肢的再灌注损伤、热伤、囊性纤维化、瘢痕疙瘩形成或者瘢痕组织形成、由于感染导致的发热和肌痛、由于微创导致的脑或者脊髓损伤、涉及白细胞渗出的疾病、急性超敏反应、迟发型超敏反应、荨麻疹、食物过敏、皮肤晒伤、盆腔炎性疾病、尿道炎、葡萄膜炎、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、酒精性肝炎、胃炎、肠炎、接触性皮炎、特应性皮炎、牙龈炎(gingivitis)、阑尾炎、胰腺炎、胆囊炎(cholocystitis)、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症和多囊性肾病。
在一些实施方案中，所述疾病为自身免疫性疾病。在一些实施方案中，所述自身免疫性疾病为系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力、类风湿性关节炎(RA)、急性播散性脑脊髓炎、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化(MS)、斯耶格伦氏综合症、牛皮癣、自身免疫性溶血性贫血、哮喘、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠易激综合征或慢性阻塞性肺病(COPD)。在一些实施方案中，所述疾病为过度的或者破坏性免疫反应，如哮喘、类风湿性关节炎、多发性硬化、慢性阻塞性肺病(COPD)或系统性红斑狼疮。
在一些实施方案中，本申请提供了药物组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的媒介物。
在一些实施方案中，本申请提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的酯、立体异构体、立体异构体混合物或者互变异构体，以及至少一种药学上可接受的媒介物。药学上可接受的媒介物的实例可选自载体和其它赋形剂、助剂等。
还提供了通过向受试者给药治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的酯、立体异构体、立体异构体混合物或者互变异构体，或其药物组合物来治疗有此需要的受试者中的疾病或者病症的方法。在治疗有此需要的受试者(例如，有此需要的人)中的疾病或者病症的方法的一种变型中，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述疾病或者病症为炎性疾病、变态反应性疾病、自身免疫性疾病或者癌症。
还提供了通过使Syk激酶多肽与式I化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的酯、立体异构体、立体异构体混合物或者互变异构体接触而抑制Syk激酶多肽的激酶活性的方法。一方面提供了通过使Syk激酶多肽与式I化合物或其药学上可接受的盐接触而抑制Syk激酶多肽的激酶活性的方法。
还提供了通过向受试者给药治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合来治疗有此需要的受试者中的癌症的方法。在一些实施方案中，所述受试者为对Syk活性起反应的肿瘤的人。在另一个实施方案中，所述受试者为具有表达Syk的实体瘤的人。在一些实施方案中，所述受试者为具有17p缺失、TP53突变、NOTCH1、SF3B1突变、11q缺失或其任意组合的人。在一个实施方案中，所述受试者为具有17p缺失、TP53突变或其任意组合的人。在另一个实施方案中，所述受试者为具有NOTCH1、SF3B1突变、11q缺失或其任意组合的人。
在一些实施方案中，所述长春花生物碱选自：长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、desoxyvincaminol、vincaminol、长春布宁、长春蔓晶和长春内日定(vineridine)及其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，至少一种长春花生物碱选自：长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、desoxyvincaminol、vincaminol、长春布宁、长春蔓晶和长春内日定及其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述长春花生物碱选自：长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨，及其药学上可接受的盐。在其他实施方案中，所述长春花生物碱选自：长春新碱和长春碱，及其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述长春花生物碱是长春新碱及其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述长春花生物碱是长春碱及其药学上可接受的盐。
本申请还提供了在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者给药治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐以及治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，式I化合物为：
并且所述长春花生物碱选自长春新碱和长春碱。在一个实施方案中，式I化合物为：
并且所述长春花生物碱为长春新碱。在另一个实施方案中，式I化合物为
并且所述长春花生物碱为长春碱。
本申请还提供了在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括向受试者给药治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐以及治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐，其中所述受试者为没有接受任何其他抗癌治疗的人；且所述受试者(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或(i)和(ii)的组合。在一些实施方案中，式I化合物为
并且所述长春花生物碱选自长春新碱或长春碱。在一个实施方案中，式I化合物为
并且所述长春花生物碱为长春新碱。在另一个实施方案中，式I化合物为
并且所述长春花生物碱为长春碱。
本申请还提供了附图和实施例用于解释说明，与在某些癌症和它们的各个细胞系的治疗中作为单一药物给药或者在单一疗法中单独使用的式I化合物或所述长春花生物碱的效果相比，式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合具有预料不到的改善。在一些实施方案中，所述长春花生物碱选自长春新碱和长春碱。
在一些实施方案中，所述受试者对至少一种抗癌疗法有顽固性。在其他实施方案中，所述受试者在用至少一种抗癌疗法治疗后复发。
在一些实施方案中，将约50mg至300mg的式I化合物或其药学上可接受的盐每天一次给药于受试者。在其他实施方案中，将约100mg至250mg的式I化合物或其药学上可接受的盐每天一次给药于受试者。在一个实施方案中，将约180-200mg的式I化合物或其药学上可接受的盐每天一次给药于受试者。
在一种变型中，所述受试者是具有17p缺失、TP53突变或其组合的人；且将约50mg至300mg的式I化合物或其药学上可接受的盐每天一次给药于所述受试者。在另外的变型中，所述受试者是具有17p缺失、TP53突变或其组合的人；且将约100mg至250mg的式I化合物或其药学上可接受的盐每天一次给药于所述受试者。在另外的变型中，所述受试者是具有17p缺失、TP53突变或其组合的人；且将约180至约200mg的式I化合物或其药学上可接受的盐每天一次给药于所述受试者。
在其他实施方案中，将所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐以临床批准剂量或亚临床批准剂量一周一次给药于所述受试者。在一些实施方案中，将所述长春花生物碱以亚临床批准剂量一周一次给药于所述受试者。在其他实施方案中，所述长春花生物碱为长春新碱，且以0.1mg-M2至1.5mg-M2的剂量给药长春新碱或其药学上可接受的盐。在其他实施方案中，将所述长春花生物碱以0.25mg-M2至1.0mg-M2的剂量一周一次给药于所述受试者，且所述长春花生物碱选自长春新碱和长春碱。在其他实施方案中，将所述长春花生物碱以0.1mg-M2至0.2mg-M2的剂量一天一次给药于所述受试者，且所述长春花生物碱选自长春新碱和长春碱。
在一些实施方案中，在给药所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐之前给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在其他实施方案中，在给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前给药长春花生物碱或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，同时给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐和所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐，其中所述长春花生物碱通过IV给药，并且式I化合物通过片剂给药。在其他实施方案中，一天一次给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐和所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐。在其他实施方案中，一周一次给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐和所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，一天一次给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐，并且一周一次给药所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述癌症为血液恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述癌症为白血病。在一个实施方案中，所述白血病为慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。在一些实施方案中，所述癌症为淋巴瘤。在一个实施方案中，所述淋巴瘤为非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一种变型中，所述NHL为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)和/或边缘区淋巴瘤(MZL)。因此，应当理解，在一方面，所述受试者是具有血液恶性肿瘤如白血病或淋巴瘤的人。
在一些实施方案中，所述癌症选自急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞样白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性疾病(MPD)、慢性髓细胞样白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)、顽固性非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)、T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。
在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤癌症(或实体癌肿瘤)。在一些实施方案中，所述癌症是实体瘤并表达脾酪氨酸激酶(Syk)活性。在其他实施方案中，所述实体瘤癌症选自：胰腺癌、肺癌、结肠直肠癌、卵巢癌和肝细胞癌。
还提供了试剂盒，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的酯、立体异构体、立体异构体混合物或者互变异构体。在一个方面，所述试剂盒包含式I化合物或其药学上可接受的盐。所述试剂盒可包含标签和/或说明书，用于指示所述化合物在治疗有此需要的受试者(例如，人)中的疾病或者病症中。在一些实施方案中，所述疾病或者病症可与Syk活性相关联或者通过Syk活性介导。在其他实施方案中，所述试剂盒还可包含说明书，用于指示长春花生物碱和式I化合物的组合用于治疗有此需要的受试者(例如，人)中的疾病或者病症中。在一些实施方案中，所述疾病或者病症是可与Syk活性相关联或者通过Syk活性介导的癌症(例如血液恶性肿瘤、实体瘤癌症)。
还提供了制品，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的酯、立体异构体、立体异构体混合物或者互变异构体；和容器。在一个方面，所述制品包含式I化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，所述容器可为小瓶(vial)、罐(jar)、安瓿瓶、预加载注射器(preloaded syringe)或者静脉注射袋(intravenous bag)。
在整个说明书中描述了本申请的其它方面和实施方案。
附图说明
图1A和1B示出并总结了在DLBCL细胞系DHL-10中，当化合物共同给药时，图1的化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺分别与两种长春花生物碱(长春新碱(图1A)和长春碱(图1B))之一的组合的抑制作用。
图2A和2B总结了式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺和长春新碱的组合在表达Syk的恶性结肠细胞系MiaPaca和在不表达Syk的恶性结肠细胞系HepG2中对细胞活力的抑制作用。
图3示出了在MiaPaca和HepG2恶性结肠细胞系中的Syk表达水平。
图4总结了在肺、胰腺和结肠的恶性细胞系中的Syk表达水平。
发明详述
已经出乎意料地发现，式I化合物或其药学上可接受的盐具有有利性质，从而使得它们成为对于本申请所述用途有吸引力的化合物。除了作为Syk抑制剂，所述化合物还具有希望的溶解度和药代动力学性质。考虑到基础结构类似的化合物的可比较的参数性质，这些发现尤其令人震惊。
以下描述阐述了示例性组合物、方法、参数等。然而，应认识到，这种描述不意欲限制本申请的范围，相反，是提供了作为示例性实施方案的描述。
对于式I化合物，还描述了这种化合物的药学上可接受的盐、药学上可接受的酯、药学上可接受的溶剂合物、水合物、异构体(包括其光学异构体、外消旋体或其它混合物)、互变异构体、同位素、多晶型和药学上可接受的前药。
本申请的化合物可具有不对称中心并可作为外消旋混合物或者作为单一对映异构体产生。所述单一对映异构体可通过不对称合成或者通过在合成的某一适合阶段拆分中间体的外消旋或者非外消旋混合物来得到。所述单一对映异构体也可通过借助常规手段拆分化合物来得到，例如在拆分剂的存在下结晶，或者使用例如手性高压液相色谱(HPLC)柱的色谱法。所述单一对映异构体以及对映异构体的外消旋和非外消旋混合物在本申请的范围内，其全部意欲包括在本说明书中所述的结构内，除非另外明确指出。
本申请还提供了在有此需要的某些受试者群体(例如人)中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合给药于所述受试者。在一些实施方案中，式I化合物为
其还可被提及为化合物名称：6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺。本领域技术人员理解的是，所述化合物结构可使用其它公知的命名系统和符号(包括CAS和IUPAC)命名或者识别。
本申请还提供了附图和实施例用于解释说明，与在某些癌症和它们的各个细胞系的治疗中作为单一药物给药或者在单一疗法中单独使用的式I化合物或所述长春花生物碱的效果相比，式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合具有预料不到的改善。在一些实施方案中，式I化合物为6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺，且所述长春花生物碱选自长春新碱和长春碱。
定义
如在本发明中所使用，下列的单词和短语通常意欲具有如下所述的含义，除非其使用的上下文中有另外的表明。
“异构体”为具有相同分子式的不同化合物。异构体包括立体异构体、对映异构体和非对映异构体。
“立体异构体”为仅在原子空间排列方式不同的异构体。
“对映异构体”为彼此为非重合的镜像的一对立体异构体。一对对映异构体的1:1混合物为“外消旋”混合物。术语"(±)"用于指定外消旋混合物(当合适时)。
绝对立体化学根据Cahn Ingold Prelog R S system确定。当化合物为纯的对映异构体时，在各个手性碳原子的立体化学可以通过R或S具体指定。其中绝对构型未知的拆分化合物指定为(+)或(-)，取决于其在钠D线的波长下旋转偏振光的平面的方向(右旋-或左旋)。
术语“治疗有效量”指的是当给药于需要治疗的受试者(例如，哺乳动物如人)时如下面所限定的足以有效治疗的量。所述治疗有效量会根据正在治疗的受试者和疾病、受试者的体重和年龄、疾病的严重性、给药方式等而变化，其可由本领域技术人员容易地确定。例如，式I化合物或其药学上可接受的盐的“治疗有效量”是这样的量：其足以调节Syk表达或者活性并由此治疗患有适应症的受试者(例如，人)或者改善或者缓解适应症的已有症状。例如，治疗有效量可为这样的量：其足以减少应答于Syk活性的抑制的疾病或者病症的症状。
术语“多晶型”指的是结晶化合物的不同的晶体结构。不同的多晶型可由结晶堆叠的不同(堆叠的多晶型现象)而造成或在相同分子的不同构象异构体之间的堆叠不同(构象多晶型现象)而造成。应理解的是，在治疗本申请所述的疾病或者病症中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐的任何多晶型尽管可能提供不同的性质(包括药代动力学性质)，但是一旦吸收至受试者中，会得到式I化合物，使得式I化合物的使用涵盖式I化合物或其药学上可接受的盐的任何多晶型的使用。
术语“溶剂合物”指的是通过组合式I化合物和溶剂而形成的复合物。应理解的是，在治疗本申请所述的疾病或者病症中使用的式I化合物的任何溶剂合物尽管可能提供不同的性质(包括药代动力学性质)，但是一旦吸收至受试者中，会得到式I化合物，使得式I化合物的使用涵盖式I化合物的任何溶剂合物的使用。
术语“水合物”指的是通过组合式I化合物和水而形成的复合物。应理解的是，在治疗本申请所述的疾病或者病症中使用的式I化合物的任何水合物尽管可能提供不同的性质(包括药代动力学性质)，但是一旦吸收至受试者中，会得到式I化合物，使得式I化合物的使用涵盖式I化合物的任何水合物的使用。
术语“前药”指的是衍生自或者容易转换成式I化合物的化合物，其包括化学基团，所述化学基团在体内可转换和/或可从分子的剩余部分分开以提供式I化合物或者药物的活性部分，或其药学上可接受的盐或其生物活性代谢物。应理解的是，在治疗本申请所述的疾病或者病症中使用的式I化合物的任何前药尽管可能提供不同的性质(包括药代动力学性质)，但是一旦吸收至受试者体内，会得到式I化合物，使得式I化合物的使用涵盖式I化合物的任何前药的使用。
本申请还提供了本申请所详述的化合物的同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本申请中给出的由通式所描述的结构，除了一个或多个原子被具有选择的原子质量或质量数的原子所置换。可以引入本发明化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如，但不限于2H(氘、D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、31P、32P、35S、36Cl和125I。提供了本申请的多种同位素标记的化合物，例如放射性同位素如3H、13C和14C引入其中的那些化合物。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究、反应动力学研究、检测或成像技术，例如包括药物或底物组织分布测试在内的正电子发射断层扫描术(PET)或单光子发射计算机断层成像术(SPECT)，或用于受试者(例如人)的放射性治疗。对于本申请所述的同位素标记的化合物，还提供了其任何药学上可接受的盐、药学上可接受的酯、药学上可接受的溶剂合物、水合物、对映异构体、对映异构体混合物、互变异构体、多晶型和药学上可接受的前药。
本申请还包括式I化合物或其药学上可接受的盐，其中连接至碳原子的1至n个氢被氘替代，其中n是分子中的氢的数目。此类化合物可显示出对代谢的抗性增强，因此用于增加式I化合物或其药学上可接受的盐的半衰期(当给药至哺乳动物时)。参见，例如，Foster,“Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism”,TrendsPharmacol.Sci.5(12):524-527(1984)。此类化合物通过本领域中已知的方法合成，例如，通过使用其中一个或多个氢原子已经被氘置换的起始原料。
氘标记的或取代的本发明的治疗性化合物可以具有改善的DMPK(药物代谢和药代动力学)性质，涉及分布、代谢和排泄(ADME)。使用较重同位素(例如氘)的取代可以提供某些治疗优势，基于较大的代谢稳定性，例如体内半衰期增加，降低的剂量需求和/或治疗指数改善。18F标记的化合物可以用于PET或SPECT研究。同位素标记的本发明化合物及其前药通常通过实施下文中描述的合成路线或实施例和制备中公开的步骤来制备，其中将非同位素标记的试剂替换为便利可得的同位素标记的试剂。可以理解，在此背景中的氘可以视为式I化合物中的取代基。
此类较重同位素(具体的为氘)的浓度可以由同位素富集因子来定义。在本发明化合物中，任何没有具体指定为特定同位素的原子意味着其代表该原子的任何稳定的同位素。除非另有说明，当某一位置具体指定为"H"或"氢"时，应当理解，该位置具有其天然丰度的同位素组成的氢。相应地，在本发明的化合物中，任何具体指定为氘(D)的原子意味着代表氘。
术语“抑制”表明生物活性或过程的基线活性降低，例如显著降低。“Syk活性的抑制”指的是相对于不存在式I化合物或其药学上可接受的盐情况下的Syk活性，直接或间接响应于存在式I化合物或其药学上可接受的盐的Syk活性的降低。活性的降低可以归因于化合物与Syk的直接相互作用，或归因于本申请中所述的化合物与一种或多种其他因子的相互作用进而影响Syk活性。例如，该化合物的存在可通过下面的方式降低Syk活性：通过直接结合至Syk，通过造成(直接或间接地)另一因素以降低Syk活性，或通过(直接或间接地)降低细胞或有机体中存在的Syk的量。在一些实施方案中，Syk活性的抑制可在治疗之前的相同受试者中，或者在未接受治疗的其它受试者中比较。
Syk活性的抑制还指的是在标准的Syk活性生化测试(例如，下文在实施例8中描述的ATP水解测试)中，可观察到的Syk活性的抑制。
在一些实施方案中，本申请所述化合物(例如式I化合物或其药学上可接受的盐)抑制Syk激酶活性，IC50值小于或者等于1μM，例如0.1nM至1μM或者1nM至1μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于小于500nM，例如0.1nM至500nM或者1nM至500nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于小于200nM，例如0.1nM至200nM或者1nM至200nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于小于100nM，例如0.1nM至100nM或者1nM至100nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于50nM，例如0.1nM至50nM或者1nM至50nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于20nM，例如0.1nM至20nM或者1nM至20nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于10nM，例如0.1nM至10nM或者1nM至10nM。在一些实施方案中，所述IC50值如实施例8的测试中所述测得。
“B细胞活性的抑制”指的是相对于不存在所述化合物或其药学上可接受的盐的情况下的B细胞活性，直接或间接响应于存在式I化合物或其药学上可接受的盐的B细胞活性的降低。活性的降低可以归因于化合物与Syk的直接相互作用或与一种或多种其他因素的直接相互作用进而影响B细胞活性。
B细胞活性的抑制还指的是在标准的测试中可观察到的CD86表达的抑制。在一些实施方案中，本申请所述化合物的IC50值小于或者等于10μM，例如1nM至10μM或者10nM至10μM。在一些实施方案中，所述化合物的IC50值小于或者等于小于1μM，例如1nM至1μM或者10nM至1μM。在一些实施方案中，所述化合物的IC50值小于或者等于500nM，例如1nM至500nM或者10nM至500nM。
“B细胞活性”还包括一种或多种不同B细胞膜受体或膜结合的免疫球蛋白(例如，IgM、IgG和IgD)的活化、重新分布、重组或帽化(capping)。大多数B细胞还具有对于IgG的Fc区的膜受体，以抗原-抗体复合物或聚集的IgG的形式。B细胞还带有用于补体的活化组分(例如，C3b、C3d、C4和Clq)的膜受体。这些不同的膜受体和膜结合的免疫球蛋白具有膜流动性，且能够进行重新分布和帽化(其可引发信号传导)。
B细胞活性还包括抗体或或免疫球蛋白的合成或生产。免疫球蛋白由B细胞系所合成，且具有共同的结构特征和结构单元。基于重链的结构区别(包括多肽链的氨基酸序列和长度)，认识到五类免疫球蛋白，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。对于给定抗原的抗体可以在全部或几类免疫球蛋白中被检测到或可以被限制于单一类或亚类免疫球蛋白。自身抗体或自身免疫抗体可类似地归于一类或几类免疫球蛋白。例如，类风湿因子(对IgG的抗体)通常被认为是IgM免疫球蛋白，但是也可由IgG或IgA组成。
此外，B细胞活性还意欲包括导致自前体B淋巴细胞的B细胞克隆扩张(增殖)并分化至抗体-合成的浆细胞(其与抗原-结合以及与从其他细胞的细胞因子信号传导协力发生)的系列事件。
“B细胞增殖的抑制”指的是异常B细胞(例如癌性B细胞，例如，淋巴瘤B细胞)的增殖的抑制和/或正常非患病的B细胞的抑制。术语“B细胞增殖的抑制”表明体内或体外B细胞数量的显著降低。因此，抑制体外B细胞增殖是指与没有与式I化合物或其药学上可接受的盐相接触的对应样本相比较，与式I化合物或其药学上可接受的盐相接触的体外样本中B细胞数目的任意显著降低。
B细胞增殖的抑制还指的是在标准的B细胞增殖的胸苷掺入测试(例如，如本领域中已知的测试)中，可观察到的B细胞增殖的抑制。在一些实施方案中，本申请所述化合物(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐)的IC50值小于或者等于10μM，例如1nM至10μM或者10nM至10μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于小于1μM，例如1nM至1μM或者10nM至1μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于500nM，例如1nM至500nM或者10nM至500nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于200nM，例如1nM至200nM或者10nM至200nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于100nM，例如1nM至100nM或者10nM至100nM。
“嗜碱性粒细胞活化降低”指的是本申请所述化合物降低嗜碱性粒细胞的活化的能力。嗜碱性粒细胞活化例如牵涉在本申请所述的炎性和自身免疫性疾病中，且嗜碱性粒细胞的活化的降低对本申请所述化合物(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐)是希望的。嗜碱性粒细胞的活化可通过以下方法评价：通过嗜碱性粒细胞测量CD63表达，如通过CD63人全血嗜碱性粒细胞细胞测试(25％血)，例如下面在实施例9中所述的测试。
在一些实施方案中，本申请所述化合物如式I化合物或其药学上可接受的盐在适合的CD63测试中的EC50值小于或等于10μM，例如1nM至10μM或者10nM至10μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的EC50值小于或者等于小于1μM，例如1nM至1μM或者10nM至1μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的EC50值小于或者等于500nM，例如1nM至500nM或者10nM至500nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的EC50值小于或者等于200nM，例如1nM至200nM或者10nM至200nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的EC50值小于或者等于150nM，例如1nM至150nM或者10nM至150nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的IC50值小于或者等于100nM，例如1nM至100nM或者10nM至100nM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐的EC50值小于或者等于75nM，例如1nM至75nM或者10nM至75nM。在一些实施方案中，所述EC50值如实施例9的测试中所述测得。
“动力学溶解度”指的是在适合的缓冲剂(例如pH 7.4的磷酸盐缓冲剂)中，在给定的温度(例如在37℃)化合物的溶解度的评价。在一种情况中，动力学溶解度在37℃在pH7.4的磷酸盐缓冲剂中，例如通过实施例10中所述的测试测得。
在一些实施方案中，本申请所述化合物如式I化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于10μM，例如10μM至500μM或者10μM至250μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于20μM，例如20μM至500μM或者20μM至250μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于30μM，例如30μM至500μM或者30μM至250μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于40μM，例如40μM至500μM或者40μM至250μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于50μM，例如50μM至500μM或者50μM至250μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于60μM，例如60μM至500μM或者60μM至250μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于70μM，例如70μM至500μM或者70μM至250μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于80μM，例如80μM至500μM或者80μM至250μM。在一些实施方案中，所述化合物或其药学上可接受的盐在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于90μM，例如90μM至500μM或者90μM至250μM。在一些实施方案中，所述动力学溶解度通过实施例10中所述的测试测得。
“人肝细胞稳定性”是化合物对于人肝细胞代谢的稳定性的测量，并作为以L/hr/kg计的化合物的预计的肝脏血浆清除率评价。所述预计的肝细胞清除率可例如通过实施例11中所述的测试测得。
在一些实施方案中，本申请所述化合物如式I化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.50L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.50L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.50L/hr/kg。在一些实施方案中，所述化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.40L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.40L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.40L/hr/kg。在一些实施方案中，所述化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.30L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.30L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.30L/hr/kg。在一些实施方案中，所述化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.20L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.20L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.20L/hr/kg。在一些实施方案中，所述化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.10L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.10L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.10L/hr/kg。在一些实施方案中，所述化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.09L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.09L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.09L/hr/kg。在一些实施方案中，所述化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.08L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.08L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.08L/hr/kg。在一些实施方案中，所述化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.07L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.07L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.07L/hr/kg。在一些实施方案中，所述化合物的预计的肝脏血浆清除率小于或等于0.06L/hr/kg，例如0.005L/hr/kg至0.06L/hr/kg或者0.01L/hr/kg至0.06L/hr/kg。在一些实施方案中，所述预计的肝细胞清除率通过实施例11中所述的测试测得。
"过敏症"或者“变态反应性疾病”指的是对于物质(变应原)的获得性超敏反应。变态反应性病症包括湿疹、变应性鼻炎(allergic rhinitis)或者鼻炎(coryza)、花粉症、支气管哮喘、荨麻疹(hives)和食物过敏和其它特应性病症。
“哮喘”指的是呼吸系统疾病，其特征在于炎症、气道狭窄以及气道对吸入试剂的反应性增强。哮喘为经常(尽管并不唯一)与特应性的或过敏性的症状相关。
“显著的”是指在统计学意义上的标准参数测试中，任何具有统计学显著性的可检测到的变化，例如斯氏T检验(Student’s T-test)，其中p<0.05。
“响应于抑制Syk活性的疾病”为其中抑制Syk激酶提供治疗益处(如症状的减轻、疾病进展的减弱、疾病发作的延迟，或某些细胞类型(单核细胞、B细胞和肥大细胞)的异常活性的抑制)的疾病。
“受试者”指的是动物(如哺乳动物)，其已经或者将要为治疗、观察或实验的对象。本申请所述方法可用于人治疗和兽医应用。在一些实施方案中，所述受试者为哺乳动物；在一些实施方案中，受试者为人；以及在一些实施方案中，受试者选自猫和狗。“有此需要的受试者”或者“有此需要的人”指的是受试者如人，其可已经患有或者被怀疑患有会从某治疗(例如用本申请所述的式I化合物或其药学上可接受的盐治疗)受益的疾病或者病症。这包括可被确定为处于这种疾病或者病症的风险下或者易患这种疾病或者病症的受试者，使得治疗将防止疾病或者病症发展。
“治疗”是用于得到有益的或者希望的结果(包括临床结果)的途径。有益的或者希望的临床结果可包括以下中的一个或者多个：
(i)抑制疾病或者病症(例如，减少疾病或者病症所导致的一个或者多个症状和/或减轻疾病或者病症的程度)；
(ii)减慢或者阻止与疾病或者病症相关联的一个或者多个临床症状的发展(例如，稳定疾病或者病症，防止或者延缓疾病或者病症的恶化或者进展和/或防止或者延缓疾病或者病症的传播(例如，转移))；和/或
(iii)减轻疾病，即，导致临床症状消退(例如，改善疾病，提供疾病或者病症的部分或者全部缓解，增强其它药疗法的效果，延缓疾病进展，提高生命质量和/或延长存活)。
“延缓”疾病或者病症的发展意味着延迟、阻碍、减慢、迟滞、稳定和/或推迟疾病或者病症的发展。取决于疾病或者病症的历史和/或治疗的受试者，这种延缓可为改变时间的长度。“延缓”疾病或者病症的发展的方法为这样的方法：当与不使用所述方法比较时，其在给定的时帧内减少疾病或者病症发展的概率和/或在给定的时帧内降低疾病或者病症的程度。这种比较通常基于临床研究，使用统计学上显著数目的受试者。疾病或者病症发展可使用标准方法检测，例如常规体检、乳房x线照相术、成像或者活组织检查。发展也可表示最初可为不可检测的疾病或者病症进展并包括发生、复发和发作。
在许多情况中，本申请的化合物能够通过氨基和/或羧基或者类似基团的存在形成酸和/或碱盐。
“药学上可接受的盐”包括例如与无机酸的盐和与有机酸的盐。盐的实例可包括盐酸盐、磷酸盐、二磷酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、亚磺酸盐、硝酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、乳酸盐、甲基磺酸盐(甲磺酸盐)、苯基磺酸盐(苯磺酸盐)、对甲苯基磺酸盐(对甲苯磺酸盐)、2-羟基乙基磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐和烷酸盐(例如乙酸盐、HOOC-(CH2)n-COOH，其中n为0-4)。此外,如果本申请所述化合物作为酸加合盐得到，那么游离碱可通过将酸盐溶液碱化得到。相反，如果产物为游离碱，那么加合盐(特别是药学上可接受的加合盐)可通过以下方法产生：按照从碱化合物制备酸加合盐的常规操作，将游离碱溶解在适合的有机溶剂中并用酸处理溶液。本领域技术人员将认识到可用于制备无毒的药学上可接受的加合盐的各种合成方法。
在本发明公开的一些实施方案中，式I化合物的药学上可接受的盐为甲磺酸盐。在本发明公开的一些实施方案中，所述长春花生物碱的药学上可接受的盐为硫酸盐。在本发明公开的一些实施方案中，式I化合物的药学上可接受的盐为甲磺酸盐，且所述长春花生物碱的药学上可接受的盐为硫酸盐。在本发明公开的一个实施方案中，式I化合物的药学上可接受的盐为甲磺酸盐，且所述长春花生物碱为长春新碱，其中长春新碱的药学上可接受的盐为硫酸盐。
在本文所述方法的一些实施方案中，式I化合物或药学上可接受的盐存在于药物组合物中，该药物组合物包括式I化合物或药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的媒介物。药学上可接受的媒介物可包括药学上可接受的载体、佐剂和/或其他赋形剂，并且只要它们与制剂的其他成分相容，并且对其接受者没有毒性，则其他成分可视为是药学上可接受的。
本申请所述的式I化合物的药物组合物可使用任意常规方法制备，例如，混合、溶解、制粒、制锭、研磨、乳化、包封、包埋、熔纺、喷雾干燥或冻干工艺。最佳药物制剂可由本领域技术人员根据给药途径和所需剂量进行确定。这种制剂可影响所施用的药物的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除率。根据所治疗的病症，可配制这些药物组合物并全身或局部给药。
本申请使用的“药学上可接受的赋形剂”为药学上可接受的媒介物，其包括但不限于任何和所有载体、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。对于药学活性物质而言，这种介质和试剂的使用是本领域公知的。除了与活性成分不相容的介质或者试剂之外，涵盖在治疗组合物中使用任何常规的介质或者试剂。也可将补充的活性成分引入组合物中。
术语“载体”是指用以将化合物给药的赋形剂或者媒介物，其包括但不限于稀释剂、崩解剂、沉淀抑制剂、表面活性剂、助流剂、粘合剂、润滑剂等。载体在本申请中和在E.W.Martin的“Remington's Pharmaceutical Sciences”中被一般性描述。载体的实例包括但不限于单硬脂酸铝、硬脂酸铝、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、交聚维酮、异硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、羟基乙基纤维素、羟基乙基纤维素、羟基甲基纤维素、羟基硬脂酸羟基二十八酯、羟基丙基纤维素、羟基丙基纤维素、羟基丙基甲基纤维素、乳糖、乳糖一水合物、硬脂酸镁、甘露醇、微晶纤维素、泊洛沙姆124、泊洛沙姆181、泊洛沙姆182、泊洛沙姆188、泊洛沙姆237、泊洛沙姆407、聚维酮、二氧化硅、胶体二氧化硅、有机硅、有机硅胶粘剂4102和有机硅乳液。然而，应理解的是，选择用于药物组合物的载体和这种载体在组合物中的量可取决于制剂(例如，干粒化制剂、固体分散制剂)的方法而改变。
术语“稀释剂”通常是指用于在递送之前稀释感兴趣的化合物的物质。稀释剂也可用于稳定化合物。稀释剂的实例可包括淀粉、糖、二糖、蔗糖、乳糖、多糖、纤维素、纤维素醚、羟基丙基纤维素、糖醇、木糖醇、山梨醇、麦芽糖醇、微晶纤维素、碳酸钙或者碳酸钠、乳糖、乳糖一水合物、磷酸二钙、纤维素、可压缩糖、脱水二代磷酸钙、甘露醇、微晶纤维素和磷酸三钙。
术语“崩解剂”通常是指这样的物质，其在添加至固体制剂后促进固体制剂在给药之后的碎裂或者崩解，并允许活性成分尽可能有效率地释放以允许活性成分快速溶出。崩解剂的实例可包括玉米淀粉、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲纤维素钠、交聚维酮、微晶纤维素、改性玉米淀粉、羧甲基淀粉钠、聚维酮、预胶化淀粉和海藻酸。
术语“沉淀抑制剂”通常是指防止或抑制活性剂从过饱和溶液中析出的物质。沉淀抑制剂的一个实例包括羟丙基甲基纤维素(HPMC)。
术语“表面活性剂”通常是指降低液体和固体之间的表面张力，能改善活性剂的湿润性或提高该活性剂的溶解度的物质。表面活性剂的实例包括泊洛沙姆和十二烷基硫酸钠。
术语“助流剂”通常是指用在片剂和胶囊制剂中提高压片过程中的流动性并产生抗结块效果的物质。助流剂的实例可包括胶体二氧化硅、滑石、烟雾硅胶、淀粉、淀粉衍生物和膨润土。
术语“粘合剂”通常是指任何药学上可接受的膜，其可用于将载体的活性成分和惰性成分粘合到一起以维持内聚和离散部分。粘合剂的实例可包括羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚维酮、共聚维酮和乙基纤维素。
术语“润滑剂”通常是指被添加至粉末掺合物以预防在压片或包囊处理过程中该压实的粉块粘到设备上的物质。润滑剂可帮助从模具排出片剂，并提高粉末流动。润滑剂的实例可包括硬脂酸镁、硬脂酸、二氧化硅、脂肪、硬脂酸钙、聚乙二醇、硬脂酰富马酸钠或滑石；和增溶剂，例如脂肪酸，包括月桂酸、油酸和C8/C10脂肪酸。
术语“长春花生物碱”指的是那些化合物及其药学上可接受的盐，它们衍生自马达加斯加长春花植物，且可用于治疗糖尿病、高血压和各种癌症。长春花生物碱的实例包括长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、desoxyvincaminol、vincaminol、长春布宁、长春蔓晶和长春内日定。通常，临床上使用的是四种主要的长春花生物碱：长春碱、长春瑞滨、长春新碱和长春地辛。所有的长春花生物碱通过静脉注射(IV)给药。
所述本发明公开的长春花生物碱及其药学上可接受的盐为细胞毒性药物–它们使细胞分裂停止，并引起细胞死亡。在细胞分裂过程中，长春花生物碱分子与称作微管蛋白的蛋白质的构建分子(building blocks)结合，抑制其形成。微管蛋白通常在细胞中产生微管。这些微管为细胞提供了分裂和复制所需的结构和灵活性。如果没有微管，细胞不能分裂。与抑制脾酪氨酸激酶的Syk抑制剂不同，长春花生物碱机理上占据微管蛋白的构建分子结构，因而在理论上防止微管的形成，从而干扰癌细胞分裂的能力。
本发明的一种长春花生物碱即长春碱抑制血管发生或新血管从预先存在的血管中生长的过程。血管发生是肿瘤向恶性转化的关键步骤。通常应用长春碱来治疗霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌和生殖细胞肿瘤。长春碱的副作用包括：对白血细胞的毒性、恶心、呕吐、便秘、呼吸困难、胸部疼痛或肿瘤疼痛、喘息和发烧。有时长春碱还与抗利尿激素分泌和心绞痛有关。
本发明的另一种长春花生物碱为长春瑞滨，其效果与长春碱相似。长春瑞滨在患有乳腺癌的患者中显示出显著的抗肿瘤活性，并且对骨肉瘤(骨肿瘤细胞)有抗增殖作用。长春瑞滨治疗可导致下面的副作用，包括对感染的抵抗力下降、瘀伤或出血、贫血、便秘、腹泻、恶心、手脚麻木或刺痛、疲劳(也称作周围神经病变)、和注射部位的炎症。不太常见的副作用包括脱发和过敏反应。
本发明的长春花生物碱的另一个实例或实施方案为长春新碱或其药学上可接受的盐。长春新碱对微管蛋白二聚物(只有两个骨架(blocks)长度的蛋白的构建分子二聚物)具有高亲和力，并且可以很快地在不同的位点连接和重新连接，因此在理论上可防止该二聚体重组(构建)微管蛋白，从而破坏微管蛋白，抑制微管的形成。长春新碱是FDA批准用于治疗急性白血病、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、维尔姆斯瘤、霍奇金病、和其他淋巴瘤。长春新碱最常见的副作用是周围神经病变、抑制骨髓活性、便秘、神经系统毒性、恶心和呕吐，其中神经病变是最常见和最严重的副作用。因此，已经报道了一些用长春新碱治疗肿瘤的患者不得不停止长春新碱的治疗。
第四种常见的长春花生物碱为长春地辛或其药学上可接受的盐。长春地辛只有24小时的血清半衰期，但其具有与长春碱类似的效果(预期的效果和副作用)。在治疗黑色素瘤、肺癌和(与其他药物组合)治疗子宫癌的过程中，长春地辛通常以每平方米体表面积3毫克的剂量给药。长春地辛的其他副作用包括贫血、血细胞毒性、疲劳、皮肤上的麻刺感或刺痛的感觉，和皮肤毒性。
化合物
在这里和其它地方到处提供化合物，例如在发明内容中和在实施例中。
本申请提供的化合物使用ChemBioDraw Ultra 12.0命名，且本领域技术人员理解的是，所述化合物结构可使用其它公知的命名系统和符号(包括CAS和IUPAC)命名或者识别。
因此，本文提供了用作Syk抑制剂的化合物。一方面，本发明提供了式I化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1选自其中＊表示式I的所示苯环中R1所连接的碳原子；
R2为H或2-羟基乙氧基；
R3为H或甲基；且
R4为H或甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 在一些实施方案中，R1为在一些实施方案中，R1为在一些实施方案中，R1为
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R2为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R2为2-羟基乙氧基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 且R2为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自且R2为2-羟基乙氧基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自且R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为H，且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R2为2-羟基乙氧基，且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R2为H，且R3为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为2-羟基乙氧基，且R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R2为2-羟基乙氧基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R2为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为2-羟基乙氧基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R2为H，且R4为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R2为2-羟基乙氧基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R3为H，且R4为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为H，R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为H，R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R2为H，R3为H，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为H，R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为H，R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自R2为H，R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1选自 R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R2为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R2为2-羟基乙氧基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R3为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R2为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R2为2-羟基乙氧基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R3为甲基。在式I化合物的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R2为H。在式I化合物的一些实施方案中，R1为且R2为2-羟基乙氧基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R3为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R3为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R3为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，且R4为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为H，且R4为甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为H，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为H，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为H，R3为甲基，且R4为甲基。
在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为H或甲基。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为H。在式I化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中，R1为R2为2-羟基乙氧基，R3为甲基，且R4为甲基。
一方面，本申请涉及式I化合物的实施方案还涉及式I化合物的药学上可接受的盐，即使本申请没有明确说明。
在一些实施方案中，式I化合物选自：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，式I化合物选自：2-(5-((6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇；6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺；2-((4-(4-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)丙-1,3-二醇；2-(5-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇；(R)-(4-(4-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)吗啉-2-基)甲醇；6-(6-氨基吡嗪-2-基)-5-甲基-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺；和6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺；或其药学上可接受的盐。
本申请还提供了式II化合物、或其药学上可接受的盐：
其中：
R10选自其中＊表示式I的所示苯环中R1所连接的碳原子；
R20为H或2-羟基乙氧基；
R30为H或甲基；且
R4为H、卤素(即F、Cl、Br或I)、甲基或卤素取代的甲基(即其中1至3个氢原子被1至3个可相同或不同的卤素原子所取代的甲基，例如氟代甲基、氯代甲基、二氟甲基、二氯甲基、氯氟代甲基、三氟甲基等)。
本发明的代表性化合物列于下表A中。表A中的化合物使用ChemBioDraw Ultra12.0命名，可以理解其他的名称也可用于鉴定化合物的相同结构。其他化合物或基团可使用通用名称或系统或非系统名称来命名。化合物也可利用在化学领域通知的其他命名体系和符号来命名，包括，例如化学文摘服务社(CAS)和国际理论和应用化学联合会(IUPAC)。化合物命名中任何含糊不清的地方，若本申请提供结构的话，可以按照结构解析。
表A.代表化合物
本申请所述化合物(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐)作为Syk抑制剂提供了独特的优势。本申请所述化合物为Syk激酶活性的抑制剂，例如，测得为生物化学测试中Syk激酶活性的抑制，或者测得为通过CD63表达测得的嗜碱性粒细胞活化的减少，如实施例中所述。本申请所述化合物还具有对于用作药物而言希望的性质，包括在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度和低水平的肝细胞清除率。这些特征得到了具有药代动力学特征的Syk抑制剂用于治疗疾病，所述药代动力学特征提供了治疗窗口，使得所述化合物与目前已知化合物相比能够在较小剂量有效。如此，所述化合物提供有效剂量且脱靶活性最小，其可减轻不想要的副作用，减少药物-药物相互作用的机会，和增加受试者对于给定治疗方案的顺应性。
在一些实施方案中，本申请所述化合物(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐)在Syk激酶活性抑制或者通过CD63表达测得的嗜碱性粒细胞活化减少中的一个或者多个中有效，例如，所述化合物抑制Syk激酶活性，IC50值小于或者等于1μM、小于或等于500nM、小于或等于200nM、小于或等于100nM、小于或等于50nM、小于或等于20nM或者小于或等于10nM，如通过适用于Syk激酶活性的测试证实，例如实施例8中所述的测试；和/或减少CD63表达活性，EC50值小于或者等于1μM、小于或等于500nM、小于或等于200nM、小于或等于150nM、小于或等于100nM或者小于或等于75nM，如通过适用于测量嗜碱性粒细胞中的CD63表达的测试证实，例如实施例9中所述的测试。
在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐在Syk激酶抑制和CD63表达减少中均有效，例如，所述化合物具有Syk激酶活性，IC50值小于或者等于1μM、小于或等于500nM、小于或等于200nM、小于或等于100nM、小于或等于50nM、小于或等于20nM或者小于或等于10nM，如通过适用于Syk激酶活性的测试证实，例如实施例8中所述的测试；并具有CD63表达减少，EC50值小于或者等于1μM、小于或等于500nM、小于或等于200nM、小于或等于150nM、小于或等于100nM或者小于或等于75nM，如通过适用于测量嗜碱性粒细胞中的CD63表达的测试证实，例如实施例9中所述的测试。
在一些实施方案中，除了具有Syk激酶抑制或者通过CD63表达测得的嗜碱性粒细胞活化减少中的一个或者多个性质(包括同时具有Syk激酶抑制和通过CD63表达测得的嗜碱性粒细胞活化减少的性质)，式I化合物或其药学上可接受的盐具有对于用作药物而言希望的性质，包括动力学溶解度和低水平的肝细胞清除率中的一个或者多个。在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐具有动力学溶解度和低水平的肝细胞清除率中的一个或者多个的希望性质，包括在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于10μM、大于或等于20μM、大于或等于30μM、大于或等于40μM、大于或等于50μM、大于或等于60μM、大于或等于70μM、大于或等于80μM或者大于或等于90μM，如通过动力学溶解度的适合的测量证实，例如实施例10中所述的测试；和/或预计的肝细胞清除率小于或等于0.50L/hr/kg、小于或等于0.40L/hr/kg、小于或等于0.30L/hr/kg、小于或等于0.20L/hr/kg、小于或等于0.10L/hr/kg、小于或等于0.09L/hr/kg、小于或等于0.08L/hr/kg、小于或等于0.07L/hr/kg或者小于或等于0.06L/hr/kg，如通过预计的肝细胞清除率的适合的测量证实，例如实施例11中所述的测试。
在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐具有动力学溶解度和低水平的肝细胞清除率的希望性质，包括在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于10μM、大于或等于20μM、大于或等于30μM、大于或等于40μM、大于或等于50μM、大于或等于60μM、大于或等于70μM、大于或等于80μM或者大于或等于90μM，如通过动力学溶解度的适合的测量证实，例如实施例10中所述的测试；和预计的肝细胞清除率小于或等于0.50L/hr/kg、小于或等于0.40L/hr/kg、小于或等于0.30L/hr/kg、小于或等于0.20L/hr/kg、小于或等于0.10L/hr/kg、小于或等于0.09L/hr/kg、小于或等于0.08L/hr/kg、小于或等于0.07L/hr/kg或者小于或等于0.06L/hr/kg，如通过预计的肝细胞清除率的适合的测量证实，例如实施例11中所述的测试。
在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐在Syk激酶抑制和CD63表达减少中均有效，并且具有动力学溶解度和低水平的肝细胞清除率的希望性质，例如，所述化合物具有Syk激酶活性，IC50值小于或者等于1μM、小于或等于500nM、小于或等于200nM、小于或等于100nM、小于或等于50nM、小于或等于20nM或者小于或等于10nM，如通过适用于Syk激酶活性的测试证实，例如实施例8中所述的测试；并且具有减少的CD63表达，EC50值小于或者等于1μM、小于或等于500nM、小于或等于200nM、小于或等于150nM、小于或等于100nM或者小于或等于75nM，如通过适用于测量嗜碱性粒细胞中的CD63表达的测试证实，例如实施例9中所述的测试；并且在37℃在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度大于或等于10μM、大于或等于20μM、大于或等于30μM、大于或等于40μM、大于或等于50μM、大于或等于60μM、大于或等于70μM、大于或等于80μM或者大于或等于90μM，如通过动力学溶解度的适合的测量证实，例如实施例10中所述的测试；并且预计的肝细胞清除率小于或等于0.50L/hr/kg、小于或等于0.40L/hr/kg、小于或等于0.30L/hr/kg、小于或等于0.20L/hr/kg、小于或等于0.10L/hr/kg、小于或等于0.09L/hr/kg、小于或等于0.08L/hr/kg、小于或等于0.07L/hr/kg或者小于或等于0.06L/hr/kg，如通过预计的肝细胞清除率的适合的测量证实，例如实施例11中所述的测试。
使用方法
本发明提供了治疗患有响应于Syk活性抑制的疾病的受试者(例如，哺乳动物，例如人)的方法，其包括向患有或者怀疑患有这种疾病的受试者给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。在一个方面，将所述受试者如人给药药物组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体。
在一些实施方案中，可将所述式I化合物或其药学上可接受的盐给药于处于患有所述疾病或者病症的风险下或者具有所述疾病或者病症的家族史的受试者(例如，人)。
在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐也可抑制其它激酶，使得也可治疗与这些激酶相关联的疾病、疾病症状和病症。
治疗的方法也包括通过给药有效浓度的式I化合物或其药学上可接受的盐，在具有响应于抑制Syk活性的疾病的受试者中，通过在体内借助Syk或其他机理抑制ATP结合或水解来抑制Syk活性和/或抑制B细胞活性。有效浓度的实例为在体外足以抑制Syk活性的浓度。有效浓度可以实验上确定(例如通过在向人给药后测试化合物的血液浓度)或理论上通过计算生物利用度确定。
在一些实施方案中，响应于抑制Syk活性和/或B细胞活性的病症为癌症、变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病，和/或急性炎症反应。
还提供了在有此需要的受试者中抑制B细胞活性的方法，其包括给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
还提供了在有此需要的受试者中抑制B细胞增殖的方法，其包括给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
还提供了通过给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐而治疗患有癌症、变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应的受试者的方法。
在一些实施方案中，可使用式I化合物或其药学上可接受的盐治疗的病症和疾病包括但不限于淋巴瘤(例如小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)、顽固性非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)、边缘区淋巴瘤(MZL)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤(+/-绒毛淋巴细胞)、结节边缘区淋巴瘤(+/-单核细胞样B细胞)、粘膜相关淋巴样组织(MALT)型的结节外边缘区B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤(例如皮肤T细胞淋巴瘤、结节外T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿)、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、纵隔大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、白血病(例如急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性T细胞型淋巴母细胞性白血病(T-ALL)、急性B细胞型淋巴细胞性白血病(B-ALL)、B细胞幼淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、幼年粒单核细胞性白血病(JMML)、微小残留病灶(MRD)、毛细胞性白血病、骨髓纤维化(例如原发性或者继发性骨髓纤维化)，或者慢性髓细胞样白血病(CML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性疾病(MPD)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症、胰腺癌、泌尿器癌、膀胱癌、结肠直肠癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、胆囊癌、肺癌(例如非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、黑色素瘤、神经内分泌癌、CNS癌症、脑瘤(例如，神经胶质瘤、间变性少突神经胶质瘤、成人多形性胶质母细胞瘤、成人间变性星形细胞瘤)、骨癌、软组织肉瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、腹膜渗漏、恶性胸腔积液、间皮瘤、维尔姆斯瘤(Wilms tumor)、滋养层肿瘤(trophoblasticneoplasms)、血管外皮细胞瘤、卡波西肉瘤、粘液癌(myxoid carcinoma)、圆细胞癌、鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、口腔癌、肾上腺皮质癌、产生ACTH的肿瘤(ACTH-producingtumors)、系统性红斑狼疮(SLE)、重症肌无力、古德帕斯彻综合征、肾小球肾炎、出血、肺出血、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎(RA)、银屑病关节炎、单关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎、脊椎炎、贝赫切特病、自身免疫性甲状腺炎、雷诺综合征、急性播散性脑脊髓炎、慢性特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化(MS)、斯耶格伦氏综合症、自身免疫性溶血性贫血、组织移植排斥、移植器官的超急性排斥、同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、涉及白细胞渗出的疾病、由于白细胞恶液质和转移导致的疾病、粒细胞输注相关综合征、细胞因子诱导的毒性、硬皮病、脉管炎、哮喘、牛皮癣、炎性肠病(例如慢性炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、坏死性小肠结肠炎)、肠易激综合征、皮肌炎、艾迪生病、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病、I型糖尿病、脓毒症、感染性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒症、革兰氏阳性脓毒症、中毒性休克综合征、继发于败血病的多器官损伤综合征、创伤、低血容量性休克、变应性结膜炎、春季结膜炎、甲状腺相关性眼病、嗜酸性肉芽肿、湿疹、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征、变应性鼻炎、鼻炎、花粉症、支气管哮喘、硅肺病、肺结节病、胸膜炎、肺泡炎、肺气肿、肺炎、细菌性肺炎、支气管扩张症、肺型氧中毒、心肌或脑或四肢的再灌注损伤、热伤、囊性纤维化、瘢痕疙瘩形成或者瘢痕组织形成、由于感染导致的发热和肌痛、由于微创导致的脑或者脊髓损伤、涉及白细胞渗出的疾病、急性超敏反应、迟发型超敏反应、荨麻疹、食物过敏、皮肤晒伤、盆腔炎性疾病、尿道炎、葡萄膜炎、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、酒精性肝炎、胃炎、肠炎、接触性皮炎、特应性皮炎、牙龈炎、阑尾炎、胰腺炎、胆囊炎和多囊性肾病。
在一些实施方案中，提供了通过给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐而治疗患有变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应的受试者的方法。在一些实施方案中，所述疾病选自系统性红斑狼疮、重症肌无力、古德帕斯彻综合征、肾小球肾炎、出血、肺出血、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、单关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎、脊椎炎、贝赫切特病、自身免疫性甲状腺炎、雷诺综合征、急性播散性脑脊髓炎、慢性特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、自身免疫性溶血性贫血、组织移植排斥、移植器官的超急性排斥、同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、涉及白细胞渗出的疾病、由于白细胞恶液质和转移导致的疾病、粒细胞输注相关综合征、细胞因子诱导的毒性、硬皮病、脉管炎、哮喘、牛皮癣、慢性炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、坏死性小肠结肠炎、肠易激综合征、皮肌炎、艾迪生病、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病、I型糖尿病、脓毒症、感染性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒症、革兰氏阳性脓毒症、中毒性休克综合征、继发于败血病的多器官损伤综合征、创伤、低血容量性休克、变应性结膜炎、春季结膜炎、甲状腺相关性眼病、嗜酸性肉芽肿、湿疹、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征、变应性鼻炎、鼻炎、花粉症、支气管哮喘、硅肺病、肺结节病、胸膜炎、肺泡炎、肺气肿、肺炎、细菌性肺炎、支气管扩张症、肺型氧中毒、心肌或脑或四肢的再灌注损伤、热伤、囊性纤维化、瘢痕疙瘩形成或者瘢痕组织形成、由于感染导致的发热和肌痛、由于微创导致的脑或者脊髓损伤、涉及白细胞渗出的疾病、急性超敏反应、迟发型超敏反应、荨麻疹、食物过敏、皮肤晒伤、盆腔炎性疾病、尿道炎、葡萄膜炎、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、酒精性肝炎、胃炎、肠炎、接触性皮炎、特应性皮炎、牙龈炎、阑尾炎、胰腺炎、胆囊炎和多囊性肾病。
在一些实施方案中，提供了通过给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐而治疗患有自身免疫性疾病的受试者的方法，所述自身免疫性疾病选自系统性红斑狼疮、重症肌无力、类风湿性关节炎、急性播散性脑脊髓炎、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、牛皮癣、自身免疫性溶血性贫血、哮喘、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠易激疾病和慢性阻塞性肺病。在一些实施方案中，所述自身免疫性疾病具有过度的或者破坏性免疫反应，例如哮喘、类风湿性关节炎、多发性硬化、慢性阻塞性肺病或者系统性红斑狼疮。
在一些实施方案中，提供了通过给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐而治疗患有类风湿性关节炎的受试者的方法。
Syk为淋巴瘤B细胞中凋亡的已知抑制剂。缺陷的凋亡有助于人白血病和淋巴瘤的发病机制和药物抗性。因此，还提供一种在表达Syk的细胞中促进或诱导凋亡的方法，其包括使得该细胞与式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
在一些实施方案中，提供了治疗患有癌症的受试者的方法，所述癌症选自癌、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病。在一些实施方案中，所述癌症为实体瘤或者血液恶性肿瘤。
在一些实施方案中，提供了治疗患有血液恶性肿瘤的受试者的方法，所述血液恶性肿瘤选自小淋巴细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、惰性非霍奇金淋巴瘤、顽固性非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤(+/-绒毛淋巴细胞)、结节边缘区淋巴瘤(+/-单核细胞样B细胞)、粘膜相关淋巴样组织型的结节外边缘区B细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、结节外T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性T细胞型淋巴母细胞性白血病、急性B细胞型淋巴细胞性白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞性白血病、幼年粒单核细胞性白血病、微小残留病灶、毛细胞性白血病、原发性骨髓纤维化、继发性骨髓纤维化、慢性髓细胞样白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性疾病和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
在一些实施方案中，提供了通过给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐而治疗患有癌症的受试者的方法，其中所述癌症为白血病或者淋巴瘤。在一些实施方案中，所述癌症选自急性淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞性白血病、小淋巴细胞淋巴瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性疾病、慢性髓细胞样白血病、多发性骨髓瘤、惰性非霍奇金淋巴瘤、顽固性非霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，所述癌症为急性T细胞型淋巴母细胞性白血病，或者急性B细胞型淋巴细胞性白血病。所述非霍奇金淋巴瘤涵盖惰性B细胞疾病，其包括例如滤泡淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症和边缘区淋巴瘤，以及涵盖侵袭性淋巴瘤，其包括例如伯基特淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，所述癌症为惰性非霍奇金淋巴瘤。
在一些实施方案中，提供了通过给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐而治疗患有血液恶性肿瘤的受试者的方法。在特定实施方案中，所述血液恶性肿瘤为白血病(例如，慢性淋巴细胞性白血病)或者淋巴瘤(例如，非霍奇金淋巴瘤)。
在一些实施方案中，提供了通过给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐而治疗患有慢性淋巴细胞性白血病的受试者的方法。
在一些实施方案中，提供了通过给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐而治疗患有实体瘤的受试者的方法。在一些实施方案中，所述实体瘤为癌症，其选自胰腺癌、泌尿器癌、膀胱癌、结肠直肠癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、胆囊癌、肺癌(例如非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、黑色素瘤、神经内分泌癌、CNS癌症、脑瘤(例如，神经胶质瘤、间变性少突神经胶质瘤、成人多形性胶质母细胞瘤，和成人间变性星形细胞瘤)、骨癌、软组织肉瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、腹膜渗漏、恶性胸腔积液、间皮瘤、维尔姆斯瘤、滋养层肿瘤、血管外皮细胞瘤、卡波西肉瘤、粘液癌、圆细胞癌、鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、口腔癌、肾上腺皮质癌和产生ACTH的肿瘤。在一些实施方案中，所述实体瘤为非小细胞肺癌、小细胞肺癌、结肠癌、CNS癌症、黑色素瘤、卵巢癌、肾癌、前列腺癌和乳腺癌。
本申请还提供了本申请所述的化合物，例如式I化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗本申请所述的疾病或者病症，例如癌症(包括癌、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病)、变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应。
本申请还提供了本申请所述的化合物，例如式I化合物或其药学上可接受的盐，其用于制造药物，所述药物用于治疗本申请所述的疾病或者病症，例如癌症(包括癌、肉瘤、黑色素瘤、淋巴瘤和白血病)、变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应。
本申请还提供了组合使用式I化合物或其药学上可接受的盐(以选择性或特异性抑制Syk活性来进行治疗性或预防性治疗)与长春花生物碱或其药学上可接受的盐(以选择性或特异性抑制微管蛋白或微管形成来进行治疗性或预防性治疗)的方法。所述方法包括将式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合，以足以抑制Syk活性和/或抑制微管蛋白或微管形成的量给药于需要治疗的受试者(例如人)。可使用该方法来治疗患有或遭受病症的受试者(例如人)，所述病症的症状或病理是由Syk表达或活性介导的。
“治疗(Treatment或treating)”是用于得到有益的或者希望的结果(包括临床结果)的方法。有益的或者希望的临床结果可包括以下中的一个或者多个：
(i)减少疾病所导致的一个或者多个症状；
(ii)减少疾病的严重性和/或稳定所述疾病(例如延缓疾病的恶化)；
(iii)延缓疾病的传播(例如，转移)；
(iv)延缓或放慢疾病的复发和/或疾病的进展；
(v)改善疾病和/或提供疾病的缓解(部分或者全部)和/或减少治疗该疾病所需的一种或多种其他药物的剂量；
(vi)提高生命质量，和/或
(vii)延长存活。
“延缓”疾病或者病症的发展意味着延迟、阻碍、减慢、迟滞、稳定和/或推迟疾病或者病症的发展。取决于疾病或者病症的历史和/或治疗的受试者，这种延缓可为不同时间的长度。“延缓”疾病或者病症的发展的方法为这样的方法：当与不使用所述方法比较时，其在给定的时间范围内减少疾病或者病症发展的概率和/或在给定的时间范围内降低疾病或者病症的严重性。这种比较通常基于临床研究，使用统计学上显著数目的受试者。疾病或者病症发展可使用标准方法检测，例如常规体检、
乳房x线照相术、成像或者活组织检查。发展也可表示最初可为不可检测的疾病或者病症进展并包括发生、复发和发作。
在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合可给药于处于患有所述疾病或病症的风险或者具有所述疾病或者病症的家族史的受试者(例如，人)。
术语“抑制”表明生物活性或过程的基线活性降低。“Syk活性的抑制”指的是相对于不存在该化合物或其药学上可接受的盐的情况下的Syk活性，直接或间接响应于存在式I化合物或其药学上可接受的盐的Syk活性的降低。在一些实施方案中，Syk活性的抑制可与治疗之前的相同受试者，或者与未接受治疗的其它受试者比较。“微管蛋白形成活性的抑制”指的是相对于不存在该长春花生物碱或其药学上可接受的盐的情况下的微管蛋白形成活性，直接或间接响应于存在长春花生物碱或其药学上可接受的盐的微管蛋白形成活性的降低。在一些实施方案中，微管蛋白形成的抑制可与治疗之前的相同受试者，或者与未接受治疗的其它受试者比较。
疾病
在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合用于治疗癌症。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合用于治疗血液恶性肿瘤。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合抑制造血起源的癌细胞的生长或增殖。在一些实施方案中，所述癌症细胞是淋巴起源的细胞，并且在一些实施方案中，所述癌症细胞涉及或衍生自B淋巴细胞或B淋巴细胞祖细胞。
可使用本发明所公开的方法治疗的恶性血液病包括，但不限于淋巴瘤(例如淋巴和网状内皮组织的恶性肿瘤，例如伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、淋巴细胞淋巴瘤)；多发性骨髓瘤；白血病(例如淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞(粒细胞)白血病)。表达Syk的造血起源或其他方式的其他癌细胞也可通过给药本申请所述的多晶型和组合物来治疗。
在具体的实施方案中，所述血液恶性肿瘤为白血病或淋巴瘤。在一些实施方案中，所述血液恶性肿瘤为急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞样白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性疾病(MPD)、慢性髓细胞样白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)、顽固性非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)、T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。
在一个实施方案中，所述癌症为急性T细胞型淋巴母细胞性白血病(T-ALL)或B细胞急性淋巴母细胞性白血病(B-ALL)。在另一个实施方案中，所述癌症为慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。在另外的实施方案中，所述癌症为非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一个实施方案中，所述NHL为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。在一个实施方案中，所述癌症为惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)。
在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合用于治疗实体瘤。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合用于治疗某些实体瘤，例如胰腺癌、肺癌、结肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、食管癌、腺癌、肝细胞癌。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合用于治疗其中具有Syk活性的表达或其中Syk被表达的某些实体瘤。表达Syk的其他实体瘤癌细胞也可通过给药本申请所述的多晶型和组合物来治疗。
在另一方面，提供了治疗具有Syk介导的疾病的受试者(例如，人)的方法，所述方法为将式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合给药于所述受试者。还提供了调节受试者(例如，人)中Syk的方法，所述方法为将式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合给药于所述受试者。
在本申请所述的任何方法中，式I化合物或其药学上可接受的盐可以单位剂量(例如片剂的形式)给药于所述个体。在本申请所述的任何方法中，所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐可通过IV(静脉注射)递送的方式给药于所述个体。
本申请所提供的任何治疗方法可用于治疗晚期的癌症。本申请所提供的任何治疗方法可用于治疗局部晚期的癌症。本申请所提供的任何治疗方法可用于治疗初期癌症。本申请所提供的任何治疗方法可用于治疗缓解期癌症。在本申请所提供的任何治疗方法的一些实施方案中，所述癌症在缓解期之后复发。在本申请所提供的任何治疗方法的一些实施方案中，所述癌症为进展性癌症。
受试者
所提供的任何治疗方法可用于治疗受试者，其已经被诊断患有或者怀疑患有变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应或者癌症。
在本发明提供的任意方法的一些实施方案中，所述受试者是有发展癌症的风险(例如，遗传上或以其他方式倾向于发展癌症的人)和已经诊断为或未被诊断为癌症的人。本发明所用“有风险”的受试者是有发展癌症(例如，血液恶性肿瘤)风险的受试者。所述受试者在用本发明所述方法治疗之前，可能患有或可能未患有可检测疾病，和可能已展现或可能未展现出可检测的疾病。有风险的受试者可能具有一种或多种所谓的危险因素，其为与发展癌症相关的可测量的参数，例如本发明所述。具有一种或多种这些风险因素的受试者比没有这些风险因素的个体具有更高的发展癌症的概率。
这些危险因素可包括，例如，年龄、性别、种族、饮食、以前的病史、前体疾病的存在、基因(例如，遗传性的)原因和环境暴露。在一些实施方案中，有患癌症风险的受试者包括，例如，亲戚已患有这个疾病的受试者，和通过遗传或生化标记物的分析确定有风险的那些人。有患癌症的先史也可为危险因素，例如癌症复发。
本发明还提供了治疗表现出一种或多种与癌症(例如，血液恶性肿瘤)有关的症状的受试者(例如，人)的方法。在一些实施方案中，所述受试者处于癌症早期。在其他一些实施方案中，所述受试者处于癌症晚期。
本发明还提供了治疗正采用一种或多种标准疗法治疗癌症(例如，血液恶性肿瘤)的受试者(例如，人)的方法，所述标准疗法例如化疗、放射疗法、免疫疗法和/或手术。因此，在一些上述实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐可在实施化疗、放射疗法、免疫疗法和/或手术之前、之中或之后给药。
在另一方面，本发明提供的是治疗受试者(例如，人)的方法，所述受试者对癌症治疗“顽固性”或在癌症治疗(例如，血液恶性肿瘤)后“复发”。对抗癌疗法“顽固性”的受试者是指他们对具体治疗不响应，也称为抵抗。所述癌症可自治疗开始时对治疗产生抗性，或可在治疗过程中(例如在治疗已显示出对该癌症有一定的作用之后但是不足以被视为缓解或部分缓解)产生抗性。“复发”的受试者是指，在改善一段时间后(例如治疗已显示出有效地降低癌症之后，例如在受试者缓解或部分缓解之后)，癌症恢复或癌症的征兆和症状恢复。
在一些实施方案中，所述受试者可为人，其(i)对至少一种抗癌疗法顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或(i)和(ii)二者。在一些实施方案中，所述受试者对至少两种、至少三种，或至少四种抗癌疗法(包括，例如，标准或实验的化疗)顽固性。
在一些实施方案中，所述受试者对至少一种、至少两种、至少三种、或至少四种抗癌疗法(包括，例如，标准或实验的化疗)顽固性，所述疗法选自：氟达拉滨、利妥昔单抗、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)、烷化剂、阿仑珠单抗和其他化疗治疗，例如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松)；R-CHOP(利妥昔单抗-CHOP)；hyperCVAD(超分割的环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、地塞米松、甲氨蝶呤、阿糖胞苷)；R-hyperCVAD(利妥昔单抗-hyperCVAD)；FCM(氟达拉滨、环磷酰胺、米托蒽醌)；R-FCM(利妥昔单抗、氟达拉滨、环磷酰胺、米托蒽醌)；硼替佐米和利妥昔单抗；坦西莫司和利妥昔单抗；坦西莫司和碘-131托西莫单抗和CHOP；CVP(环磷酰胺、长春新碱、泼尼松)；R-CVP(利妥昔单抗-CVP)；ICE(异环磷酰胺、卡铂、依托泊甙)；R-ICE(利妥昔单抗-ICE)；FCR(氟达拉滨、环磷酰胺、利妥昔单抗)；FR(氟达拉滨、利妥昔单抗)；和D.T.PACE(地塞米松、沙立度胺、顺铂、环磷酰胺、依托泊甙)。
化疗治疗的其他实例(包括标准或实验的化疗)在下文中描述。此外，一些淋巴瘤的治疗见于Cheson,B.D.,Leonard,J.P.,“Monoclonal Antibody Therapy for B-CellNon-Hodgkin’s Lymphoma”The New England Journal of Medicine 2008,359(6),p.613-626和Wierda,W.G.,“Current and Investigational Therapies for Patients withCLL”Hematology 2006,p.285-294。在美国，淋巴瘤的发病模式在Morton,L.M.,et al.“Lymphoma Incidence Patterns by WHO Subtype in the United States,1992-2001”Blood 2006,107(1),p.265-276中进行分析。
例如，治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)，尤其是B细胞来源，包括使用单克隆抗体、标准化疗方法(例如，CHOP、CVP、FCM、MCP等)、放射免疫疗法及其组合，尤其是抗体疗法与化疗的整合。用于非霍奇金淋巴瘤/B细胞癌症的非共轭单克隆抗体的实例包括利妥昔单抗、阿仑珠单抗、人或人源化抗-CD20抗体、鲁昔单抗(lumiliximab)、抗-TRAIL、贝伐珠单抗、加利昔单抗(galiximab)、依帕珠单抗、SGN-40和抗-CD74。用于治疗非霍奇金淋巴瘤/B细胞癌症的实验性抗体药物的实例包括奥法木单抗(ofatumumab)、ha20、PRO131921、阿仑珠单抗、加利昔单抗、SGN-40、CHIR-12.12、依帕珠单抗、鲁昔单抗、阿泊珠单抗(apolizumab)、米拉珠单抗(milatuzumab)和贝伐珠单抗。用于非霍奇金淋巴瘤/B细胞癌症的标准化疗方案的实例包括CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松)、FCM(氟达拉滨、环磷酰胺、米托蒽醌)、CVP(环磷酰胺、长春新碱和泼尼松)、MCP(米托蒽醌、苯丁酸氮芥和泼尼松龙)、R-CHOP(利妥昔单抗加CHOP)、R-FCM(利妥昔单抗加FCM)、R-CVP(利妥昔单抗加CVP)和R MCP(R MCP)。用于非霍奇金淋巴瘤/B细胞癌症的放射免疫疗法的实例包括钇-90-标记的替伊莫单抗和碘-131-标记的托西莫单抗。
在另一实例中，用于套细胞淋巴瘤(MCL)的治疗性治疗包括组合化疗，例如CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松)、hyperCVAD(超分割的环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、地塞米松、甲氨蝶呤、阿糖胞苷)和FCM(氟达拉滨、环磷酰胺、米托蒽醌)。此外，这些方案可补充有单克隆抗体利妥昔单抗(Rituxan)以形成组合疗法R-CHOP、hyperCVAD-R和R-FCM。其他方法包括将任意上述疗法与干细胞移植或用ICE(异环磷酰胺、卡铂和依托泊甙)的治疗组合。其他治疗套细胞淋巴瘤的方法包括免疫疗法，例如使用单克隆抗体，例如利妥昔单抗(Rituxan)。利妥昔单抗可用于治疗惰性B细胞癌，包括边缘区淋巴瘤、WM、CLL和小淋巴细胞淋巴瘤。利妥昔单抗和化疗剂的组合是尤其有效的。改进的方法是放射免疫疗法，其中将单克隆抗体与放射性同位素颗粒(例如碘-131托西莫单抗和钇-90替伊莫单抗)组合。在另一实例中，用于使用CHOP的序贯治疗。另一免疫疗法实例包括使用癌症疫苗，其根据的是个体受试者肿瘤的基因构成。淋巴瘤疫苗的实例是GTOP-99另外其他治疗套细胞淋巴瘤的方法包括自体干细胞移植加上高剂量的化疗，或者治疗套细胞淋巴瘤包括给药蛋白酶体抑制剂，例如(硼替佐米或PS-341)，或血管生成抑制剂，例如沙立度胺，特别是与Rituxan组合。另一种治疗方法是给药引起Bcl-2蛋白降解并增加癌细胞对化疗敏感性的药物，例如奥利默森(oblimersen，Genasense)与其他化疗剂组合。其他治疗方法包括给药mTOR抑制剂，其可导致抑制细胞生长和甚至细胞死亡；非限制性实例是坦西莫司(CCI-779)，和坦西莫司与或其他化疗剂组合。
最近用于MCL的其他疗法已经公开(Nature Reviews；Jares，P.2007)。这种实例包括夫拉平度(Flavopiridol)、PD0332991、R-roscovitine(Selicilib，CYC202)、苯乙烯基砜、Obatoclax(GX15-070)、TRAIL、抗-TRAIL DR4和DR5抗体、坦西莫司(CCl-779)、依维莫司(RAD001)、BMS-345541、姜黄素、伏立诺他(SAHA)、沙立度胺、来那度胺(lenalidomide，CC-5013)和格尔德霉素(17-AAG)。
用以治疗瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)的其他治疗剂的实例包括哌立福辛、硼替佐米利妥昔单抗、枸橼酸西地那非CC-5103、沙立度胺、依帕珠单抗(hLL2-抗-CD22人源化抗体)、辛伐他汀、enzastaurin、campath-1H、地塞米松、DTPACE、奥利默森(oblimersen)、抗瘤酮A10、抗瘤酮AS2-1、阿仑珠单抗、β-alethine、环磷酰胺、盐酸多柔比星、泼尼松、硫酸长春新碱、氟达拉滨、非格司亭、美法仑、重组干扰素α、卡莫司汀、顺铂、环磷酰胺、阿糖胞苷、依托泊甙、美法仑、多拉司他汀10、铟In 111单克隆抗体MN-14、钇Y90人源化依帕珠单抗、抗-胸腺细胞球蛋白、白消安、环孢菌素、甲氨蝶呤、麦考酚酸吗乙酯、治疗性同种异基因淋巴细胞、钇Y 90替伊莫单抗、西罗莫司、他克莫司、卡铂、噻替派、紫杉醇、阿地白介素、重组干扰素α、多西他赛、异环磷酰胺、美司钠、重组的白介素-12、重组的白介素-11、Bcl-2家族蛋白抑制剂ABT-263、地尼白介素2(denileukindiftitox)、坦螺旋霉素(tanespimycin)、依维莫司、培非司亭、伏立诺他、alvocidib、重组的flt3配体、重组的人血小板生成素、淋巴因子活化杀伤细胞、氨磷汀三水合物、氨基喜树碱、盐酸依立替康、醋酸卡泊芬净、氯法拉滨、阿法依伯汀、奈拉滨、喷司他丁、沙格司亭、长春瑞宾双酒石酸盐、WT-1类似物肽疫苗、WT1 126-134肽疫苗、芬维A胺、伊沙匹隆(ixabepilone)、奥沙利铂、单克隆抗体CD19、单克隆抗体CD20、ω-3脂肪酸、盐酸米托蒽醌、醋酸奥曲肽、托西莫单抗和碘I-131托西莫单抗、莫特沙芬钆、三氧化二砷、替吡法尼(tipifarnib)、自体人肿瘤衍生的HSPPC-96、维妥珠单抗、苔藓抑素1和聚乙二醇脂质体盐酸多柔比星及其任意组合。
用于治疗WM的治疗方法的实例包括外周血干细胞移植、自体造血干细胞移植、自体骨髓移植、抗体疗法、生物疗法、酶抑制剂疗法、全身照射、输注干细胞、干细胞支持的骨髓去除(干细胞支持的骨髓去除)、体外处理的外周血干细胞移植、脐带血移植、免疫酶技术、药理学研究、低-LET钴-60γ射线治疗、博来霉素、常规手术、放射疗法和非骨髓根除的同种异基因造血干细胞移植。
用于治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的药物疗法的其他治疗剂的实例(Blood2005Abramson，J.)包括环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松、抗-CD20单克隆抗体、依托泊甙、博来霉素，列于瓦尔登斯特伦中的许多药物，及其任意组合，例如ICE和R-ICE。
用于治疗慢性淋巴细胞性白血病(CLL)的其他治疗剂的实例(Spectrum，2006，Fernandes，D.)包括苯丁酸氮芥(瘤可宁)、环磷酰胺(Cyloxan、Endoxan、Endoxana、Cyclostin)、氟达拉滨(福达华)、喷司他丁(Nipent)、克拉屈滨(Leustarin)、多柔比星(阿霉素)、长春新碱(安可平)、泼尼松、泼尼松龙、阿仑珠单抗(Campath，MabCampath)、列于瓦尔登斯特伦中的许多药物以及化疗和化学免疫疗法的组合，包括常见的组合方案：CVP(环磷酰胺、长春新碱、泼尼松)；R-CVP(利妥昔单抗-CVP)；ICE(异环磷酰胺、卡铂、依托泊甙)；R-ICE(利妥昔单抗-ICE)；FCR(氟达拉滨、环磷酰胺、利妥昔单抗)；和FR(氟达拉滨、利妥昔单抗)。
在另一方面，提供了一种敏化受试者(例如，人)的方法，其(i)对至少一种化疗治疗顽固性，或(ii)在用化疗治疗后复发，或(i)和(ii)二者，其中所述方法包括向所述受试者给药式I化合物或其药学上可接受的盐或药物组合物。被敏化的受试者是对涉及给药式I化合物或其药学上可接受的盐的治疗有响应的受试者，或对这种治疗未产生抗性的受试者。
在另一方面，本发明提供了治疗受试者(例如，人)的伴有合并症(comorbidity)的癌症的方法，其中所述治疗也对治疗该合并症有效。癌症的“合并症”是随所述癌症同时发生的疾病。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗受试者(例如，人)的伴有合并症的慢性淋巴细胞性白血病(CLL)的方法，其中所述治疗也对治疗该合并症有效。许多患有CLL的受试者将患有一种或多种其他疾病，例如影响血压系统、血管和心脏系统、内分泌和代谢系统、生殖泌尿系统、肌肉骨骼系统、呼吸系统、神经系统、上和下消化道系统、精神系统、耳、鼻和喉系统、肾系统或肝系统的疾病。CLL的具体的合并症包括但不限于，一种或多种其他癌症(例如乳腺癌、头颈癌、肺癌、黑素瘤、非霍奇金T细胞淋巴瘤、前列腺癌、结肠癌、小肠癌、妇科和泌尿道癌症)、高血压、高脂血症、冠状动脉病、外周血管疾病、心肌病、心脏瓣膜病、心房颤动、脑血管病(例如短暂性脑缺血发作、中风)、慢性阻塞性肺病、关节病、消化性溃疡、炎性肠病、精神病、甲状腺疾病、良性前列腺增生、糖尿病和骨关节炎(Satram-Hoang等人，Journal of Cancer Therapy，2013；4:1321-1329；Thurmes等人，Leukemia&Lymphoma，2008；49(1):49-56)。
在一些实施方案中，治疗受试者(例如，人)中CLL的合并症的方法，其中所述方法包括向所述受试者给药式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。在一些实施方案中，所述合并症选自：一种或多种其他癌症(例如乳腺癌、头颈癌、肺癌、黑素瘤、非霍奇金T细胞淋巴瘤、前列腺癌、结肠癌、小肠癌、妇科和泌尿道癌症)、高血压、高脂血症、冠状动脉病、外周血管疾病、心肌病、心脏瓣膜病、心房颤动、脑血管病(例如短暂性脑缺血发作、中风)、慢性阻塞性肺病、关节病、消化性溃疡、炎性肠病、精神病、甲状腺疾病、良性前列腺增生、糖尿病和骨关节炎。
单一疗法和组合疗法
还提供了治疗方法，其中式I化合物或其药学上可接受的盐是给予受试者的唯一活性剂，以及还包括治疗方法，其中将式I化合物或其药学上可接受的盐与一种或者多种另外的活性剂组合地给予受试者。单一疗法和组合疗法均意欲并且被描述用于本申请所述的方法中，例如在治疗本申请详述的任何疾病或者病症的方法中，和用于本申请详述的任何受试者。
单一疗法
在一些实施方案中，治疗癌症、变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应的方法，包括向有此需要的受试者给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐，其中所述受试者未用另一种药物或操作就同一疾病或病症进行治疗。
在一些实施方案中，其中式I化合物或其药学上可接受的盐以单一疗法给药至受试者，其已被诊断患有或被怀疑患有癌症，所述受试者可为人，其(i)对至少一种抗癌疗法顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或(i)和(ii)二者。在一些实施方案中，所述受试者对至少两种、至少三种、或至少四种抗癌疗法(包括，例如，标准或实验的化疗)顽固性。例如，在一些实施方案中，所述受试者可为人，其(i)对使用抗-CD20抗体、烷化剂(例如，苯达莫司汀)、嘌呤类似物(例如，氟达拉滨)、蒽环类抗生素或其任意组合的疗法顽固性；(ii)在用抗-CD20抗体、烷化剂(例如，苯达莫司汀)、嘌呤类似物(例如，氟达拉滨)、蒽环类抗生素或其任意组合治疗后复发，或(i)和(ii)二者。
如上文所述，对至少一种抗癌疗法顽固性和/或在用至少一种抗癌疗法治疗后复发的人受试者，可能已进行一种或多种先前治疗。在一些实施方案中，这种受试者在使用本发明所述的方法治疗前(例如，在作为单一疗法给药式I化合物或其药学上可接受的盐之前)已进行一种、两种、三种或四种，或至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、或至少五种、或介于1至10、介于1至9、介于1至8、介于1至7、介于1至6、介于1至5、或介于1至4种抗癌治疗。
应理解，当受试者(例如人)用式I化合物或其药学上可接受的盐以单一疗法进行治疗时，所述受试者也可进行一种或多种不是抗癌疗法的其他疗法。
在一些实施方案中，提供了在已被诊断为癌症(例如CLL)的受试者(例如，人)中治疗癌症(包括但不限于CLL)的合并症的方法，其中所述方法包括向所述受试者给药与式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物的疗法组合以治疗所述合并症。在一些实施方案中，所述合并症选自：一种或多种其他癌症(例如乳腺癌、头颈癌、肺癌、黑素瘤、非霍奇金T细胞淋巴瘤、前列腺癌、结肠癌、小肠癌、妇科和泌尿道癌症)，高血压，高脂血症，冠状动脉病，外周血管疾病，心肌病，心脏瓣膜病，心房颤动，脑血管病(例如短暂性脑缺血发作，中风)，慢性阻塞性肺病，关节病，消化性溃疡，炎性肠病，精神病，甲状腺疾病，良性前列腺增生，糖尿病，和骨关节炎。
组合疗法
在一些实施方案中，治疗癌症、变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应的方法包括向有此需要的受试者给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐以及第二活性剂，所述第二活性剂可用于治疗癌症、变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应。例如，所述第二药剂可为抗炎药物。使用第二活性剂的治疗可在使用式I化合物或其药学上可接受的盐的治疗之前、同时或者之后进行。在一些实施方案中，式I化合物或其药学上可接受的盐在单一剂型中与另一活性剂组合。
本申请还提供了治疗方法，其中将给药于已经被诊断为患有癌症或者被怀疑患有癌症的受试者(例如，人)的式I化合物或其药学上可接受的盐与一种或者多种另外的疗法组合地给予受试者，所述疗法包括上述抗癌疗法中的一种或者多种。因此，在一些实施方案中，提供了治疗有此需要的受试者(例如，人)中的癌症的方法，包括与一种或者多种可用于治疗癌症的另外的疗法一起向所述受试者给药治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。所述一种或者多种另外的疗法可涉及给药一种或者多种治疗剂。可与式I化合物或其药学上可接受的盐组合使用的适合的抗癌疗法包括但不限于选自以下的一种或者多种药剂：化学治疗剂(例如丝裂霉素C、卡铂、泰素(taxol)、顺铂、紫杉醇(paclitaxel)、依托泊甙、多柔比星)、放射疗法抗肿瘤剂、拓扑异构酶I抑制剂(例如，喜树碱或者托泊替坎)、拓扑异构酶II抑制剂(例如道诺霉素和依托泊甙)、烷基化剂(例如环磷酰胺、美法仑和BCNU)、微管蛋白导向剂(例如泰素和长春碱)、PI3K抑制剂(例如下面的化合物A、B，和C)、赖氨酰氧化酶样蛋白2的抑制剂，和生物制剂(例如抗体如抗CD20抗体、IDEC8、免疫毒素类，和细胞因子类)。
在一些实施方案中，治疗有此需要的受试者(例如，人)中的癌症的方法，包括向所述受试者给药治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物以及一种或者多种另外的疗法，所述疗法选自氟达拉滨、利妥昔单抗、奥比妥珠单抗、阿仑珠单抗、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、多柔比星、盐酸多柔比星、长春新碱、硫酸长春新碱、美法仑、白消安、卡莫司汀、泼尼松、泼尼松龙、地塞米松、甲氨蝶呤、阿糖胞苷、米托蒽醌、盐酸米托蒽醌、硼替佐米、坦西莫司、卡铂、依托泊甙、沙立度胺、顺铂、鲁昔单抗、抗-TRAIL、贝伐单抗、加利昔单抗、依帕珠单抗、SGN-40、抗-CD74、奥法木单抗、ha20、PRO131921、CHIR-12.12、阿泊珠单抗、米拉珠单抗、贝伐单抗、钇-90-标记的替伊莫单抗、托西莫单抗、碘-131托西莫单抗、异环磷酰胺、GTOP-99疫苗、奥利默森、夫拉平度、PD0332991、R-roscovitine、苯乙烯基砜、Obatoclax、TRAIL、抗-TRAIL DR4和DR5抗体、依维莫司、BMS-345541、姜黄素、伏立诺他、来那度胺、格尔德霉素、哌立福辛、枸橼酸西地那非、CC-5103、辛伐他汀、enzastaurin、campath-1H、DT PACE、抗瘤酮A10、抗瘤酮AS2-1、β-alethine、非格司亭、重组干扰素-α、多拉司他汀10、铟In 111单克隆抗体MN-14、抗胸腺细胞球蛋白、环孢菌素、麦考酚酸吗乙酯、治疗性同种异基因淋巴细胞、他罗利姆、噻替派、紫杉醇、阿地白介素、多西紫杉醇、异环磷酰胺、美司钠、重组白细胞介素-12、重组白细胞介素-11、ABT-263、地尼白介素酯、坦螺旋霉素、依维莫司、聚乙二醇化非格司亭、伏立诺他、alvocidib、重组的flt3配体、重组的人血小板生成素、淋巴因子活化杀伤细胞、氨磷汀三水合物、氨基喜树碱、盐酸依立替康、醋酸卡泊芬净、氯法拉滨、阿法依伯汀、奈拉滨、喷司他丁、沙格司亭、长春瑞宾双酒石酸盐、WT-1类似物肽疫苗、WT1 126-134肽疫苗、芬维A胺、伊沙匹隆、奥沙利铂、单克隆抗体CD19、单克隆抗体CD20、ω-3脂肪酸、醋酸奥曲肽、莫特沙芬钆、三氧化二砷、替吡法尼、自体人肿瘤衍生的HSPPC-96、维妥珠单抗、苔藓抑素1、聚乙二醇化脂质体盐酸盐、外周血干细胞移植、自体造血干细胞移植、自体骨髓移植、输注干细胞、干细胞支持的骨髓去除、体外处理的外周血干细胞移植、脐带血移植、低-LET钴-60γ射线治疗、博来霉素、常规手术、放射疗法，和非骨髓根除的同种异基因造血干细胞移植。
在一些实施方案中，所述一种或者多种另外的疗法涉及使用磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂，其包括例如化合物A、B或者C，或者这些化合物的药学上可接受的盐。化合物A、B和C的结构在下面提供。
在上述的涉及与一种或者多种另外的疗法组合地使用式I化合物或其药学上可接受的盐的方法的其它实施方案中，所述一种或者多种另外的疗法不同于使用化合物A、化合物B或者化合物C或者这些化合物的药学上可接受的盐的疗法。在上述的涉及与一种或者多种另外的疗法组合地使用式I化合物或其药学上可接受的盐的方法的一个实施方案中，所述一种或者多种另外的疗法不同于使用化合物A或其药学上可接受的盐的疗法。在上述的涉及与一种或者多种另外的疗法组合地使用式I化合物或其药学上可接受的盐的方法的又一实施方案中，所述一种或者多种另外的疗法不同于使用化合物B或其药学上可接受的盐的疗法。在上述的涉及与一种或者多种另外的疗法组合地使用式I化合物或其药学上可接受的盐的方法的又一实施方案中，所述一种或者多种另外的疗法不同于使用化合物C或其药学上可接受的盐的疗法。
在其他实施方案中，所述一种或多种其他治疗剂可为赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)的抑制剂和结合LOXL2的物质，包括例如，具有针对人LOXL2的免疫球蛋白IgG4同型的人源化单克隆抗体(mAb)。
式I化合物或其药学上可接受的盐可用作化学增敏剂，并因此，可用于与其他化学治疗药(尤其是，诱导细胞凋亡的药物)组合。
本发明还提供了提高癌细胞对化疗的敏感性的方法，其包括向正接受化疗的受试者(例如，人)给药一种化学治疗剂以及式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物，其量足以提高癌细胞对该化学治疗剂的敏感性。可与本发明所述化学实体组合使用的其他化学治疗药的实例包括拓扑异构酶I抑制剂(喜树碱或托泊替康)、拓扑异构酶II抑制剂(例如道诺霉素和依托泊甙)、烷化剂(例如环磷酰胺、美法仑和BCNU)、微管蛋白导向剂(例如泰素和长春碱)和生物制剂(例如抗体，例如抗CD20抗体、IDEC 8、免疫毒素和细胞因子)。在提高癌细胞对于化疗的敏感性的方法的一个实施方案中，所述化学治疗剂不同于化合物A，或其药学上可接受的盐。在用于提高癌细胞对于化疗的敏感性的方法的另一实施方案中，所述化学治疗剂不同于化合物B或其药学上可接受的盐。在用于提高癌细胞对于化疗的敏感性的方法的又一实施方案中，所述化学治疗剂不同于化合物C或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物与(利妥昔单抗)或者通过选择性消耗CD20+B细胞起作用的其它药物组合使用。
本申请包括治疗癌症、变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应的方法，其包括向有此需要的受试者给药有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物与抗炎药物的组合。抗炎药物包括但不限于NSAID、非特异性和COX-2特异性环氧化酶抑制剂、金化合物、皮质类固醇、甲氨蝶呤、肿瘤坏死因子受体(TNF)受体拮抗剂、免疫抑制剂和甲氨蝶呤。NSAID的实例包括但不限于布洛芬、氟比洛芬、萘普生和萘普生钠、双氯芬酸、双氯芬酸钠和米索前列醇的组合、舒林酸、奥沙普秦、二氟尼柳、吡罗昔康、吲哚美辛、依托度酸、非诺洛芬钙、酮洛芬、萘丁美酮钠、柳氮磺吡啶、托美丁钠和羟氯喹。NSAID的实例还包括COX-2特异性抑制剂(即，抑制COX-2的IC50至少是抑制COX-1的IC50的1/50低的化合物)，例如塞来考昔、伐地考昔、芦米考昔、艾托考昔和/或罗非昔布。
在其他实施方案中，所述抗炎药物是水杨酸盐。水杨酸盐包括但不限于乙酰水杨酸或阿司匹林、水杨酸钠和水杨酸胆碱和水杨酸镁。所述抗炎药物还可为皮质类固醇。例如，所述皮质类固醇可选自：可的松、地塞米松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、强的松龙磷酸钠和泼尼松。在一些实施方案中，所述抗炎治疗剂是金化合物，例如硫代苹果酸金钠或金诺芬。在一些实施方案中，所述抗炎药物是代谢抑制剂，例如二氢叶酸还原酶抑制剂，例如甲氨蝶呤或二氢乳清酸脱氢酶抑制剂，例如来氟米特。
在一些实施方案中，使用组合，其中至少一种抗炎化合物是抗-C5单克隆抗体(例如依库珠单抗或培克珠单抗(pexelizumab))、TNF拮抗剂(例如依那西普(entanercept))，或英利昔单抗，其为抗-TNFα单克隆抗体。
在一些实施方案中，使用组合，其中至少一种治疗剂是免疫抑制化合物，例如甲氨蝶呤、来氟米特、环孢菌素、他克莫司、硫唑嘌呤或麦考酚酸吗乙酯。
本申请还提供了治疗方法，其中将给药于已经被诊断为患有或者被怀疑患有自身免疫性疾病的受试者(例如，人)的式I化合物或其药学上可接受的盐与一种或者多种抗炎或者免疫抑制剂组合地给予受试者，所述抗炎或者免疫抑制剂选自布洛芬、氟比洛芬、萘普生、萘普生钠、双氯芬酸、双氯芬酸钠、米索前列醇、舒林酸、奥沙普秦、二氟尼柳、吡罗昔康、吲哚美辛、依托度酸、苯氧布洛芬钙、酮洛芬、萘丁美酮钠、柳氮磺胺吡啶、托美丁钠、羟氯喹、塞来考昔、伐地考昔、鲁米考昔、艾托考昔、罗非昔布、乙酰水杨酸、水杨酸钠、水杨酸胆碱、水杨酸镁、可的松、地塞米松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、强的松龙磷酸钠、泼尼松、硫代苹果酸金钠、金诺芬、甲氨蝶呤、二氢乳清酸来氟米特、来氟米特、环孢菌素、他罗利姆、硫唑嘌呤、麦考酚酸吗乙酯、依库珠单抗、培克珠单抗、依那西普，和英夫利昔单抗。
本发明提供了将式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合给药于受试者(例如，人)的治疗方法是给药于所述受试者的唯一抗癌治疗方案。本发明提供了将式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合给药于受试者(例如，人)的治疗方法，其中所述受试者没有进行任何其他抗癌治疗。在一种变型中，所述受试者没有使用一种或多种PI3K抑制剂进行任何其他抗癌治疗。在一些实施方案中，所述PI3K抑制剂可包括化合物A、B和C，其结构提供在下面。
在一种变型中，所述受试者没有使用化合物A或其药学上可接受的盐进行任何其他抗癌治疗。在另外的变型中，所述受试者没有使用化合物B或其药学上可接受的盐进行任何其他抗癌治疗。在另外的变型中，所述受试者没有使用化合物C或其药学上可接受的盐进行任何其他抗癌治疗。
在一些实施方案中，其中将式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合以单一疗法治疗方案给药于所述受试者，所述受试者可为人，其(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或(i)和(ii)的组合。在一些实施方案中，所述受试者对至少两种、至少三种，或至少四种抗癌疗法(包括，例如，标准或实验的化疗)具有顽固性。
应理解，当受试者(例如人)用本发明所述的式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合作为单一疗法治疗方案进行治疗时，所述受试者也可进行一种或多种不是抗癌疗法的其他疗法。
在一些实施方案中，提供了在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐给药于所述受试者，其中：所述长春花生物碱选自长春新碱、长春地辛、长春瑞滨和长春碱，并且所述受试者为人，其(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或其组合。在一些其他实施方案中，提供了在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐给药于所述受试者，其中所述长春花生物碱选自长春新碱、长春地辛、长春瑞滨和长春碱，且其中进一步，所述受试者为没有进行任何其他抗癌治疗的人；且所述受试者为(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或其组合。
在一些实施方案中，提供了在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐给药于所述受试者，其中：所述长春花生物碱选自长春新碱和长春碱，并且所述受试者为人，其(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或其组合。在一些其他实施方案中，提供了在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐给药于所述受试者，其中所述长春花生物碱选自长春新碱和长春碱，且其中进一步，所述受试者为没有进行任何其他抗癌治疗的人；且所述受试者为(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或其组合。
在一个实施方案中，提供了在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐给药于所述受试者，其中：式I化合物为6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺，所述长春花生物碱为长春新碱，并且所述受试者为人，其(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或其组合。在一个其他实施方案中，提供了在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐给药于所述受试者，其中式I化合物为6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺，所述长春花生物碱为长春新碱，且其中进一步，所述受试者为没有进行任何其他抗癌治疗的人；且所述受试者为(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或其组合。
在一个实施方案中，提供了在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐给药于所述受试者，其中式I化合物为6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺，所述长春花生物碱为长春碱，并且所述受试者为人，其(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或其组合。在一个其他实施方案中，提供了在需要治疗的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括将治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐给药于所述受试者，其中式I化合物为6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺，所述长春花生物碱为长春碱，且其中进一步，所述受试者为没有进行任何其他抗癌治疗的人；且所述受试者为(i)对至少一种抗癌疗法有顽固性，或(ii)在用至少一种抗癌疗法治疗后复发，或其组合。
在其他实施方案中，其中将式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合以单一疗法治疗方案给药于所述受试者，所述受试者可具有17p缺失、TP53突变、NOTCH1、SF3B1突变、11q缺失或其任意组合。在一些实施方案中，其中将式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合以单一疗法治疗方案给药于所述受试者，所述受试者具有17p缺失、TP53突变或其组合。在另外的实施方案中，其中将式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐组合以单一疗法治疗方案给药于所述受试者，所述受试者具有NOTCH1、SF3B1突变、11q缺失或其任意组合。
本发明还提供了治疗方法，其中将给药于受试者(例如，人)的式I化合物或其药学上可接受的盐与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合在与一种或多种另外的疗法(包括一种或多种上述抗癌治疗)组合中给予受试者(例如，人)。因此，在一些实施方案中，在需要治疗的受试者(例如，人)中治疗癌症的方法，所述方法包括与一种或多种可用于治疗癌症的另外的疗法一起向所述受试者给药治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物与长春花生物碱或其药学上可接受的盐的组合。所述一种或多种另外的疗法可涉及给药一种或多种本申请所述的治疗剂。
例如，在其他实施方案中，所述一种或多种其他治疗剂可为赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)的抑制剂和结合LOXL2的物质，包括例如，具有针对人LOXL2的免疫球蛋白IgG4同型的人源化单克隆抗体(mAb)。
在其他实施方案中，所述一种或多种其他治疗剂可为抗炎药物。使用一种或多种其他治疗剂的治疗可在使用本申请所述的药物组合物的治疗之前、同时或者之后进行。在一些实施方案中，本申请所述的药物组合物在单一剂型中与另一治疗剂组合，然后将其在给药本发明公开的长春花生物碱或其药学上可接受的盐之前、同时或之后给予。可与至少一种本申请所述的化学实体组合使用的合适的抗癌药物包括，但不限于化学治疗剂例如丝裂霉素C、卡铂、泰素、顺铂、紫杉醇、依托泊甙、多柔比星或包含至少一种上述化学治疗剂的组合物。放射疗法抗肿瘤剂也可单独或与化学治疗剂组合使用。
应理解，可使用上述额外的治疗剂的任意组合，如同各自和每种组合单独列出那样。例如，在一些实施方案中，所述额外的治疗剂包括PI3K抑制剂和LOXL2抑制剂。
药物组合物和给药
式I化合物或其药学上可接受的盐通常以药物组合物的形式给药。因此，本发明提供了药物组合物，其包含一种或多种本申请所述的化合物或其药学上可接受的盐、或药学上可接受的酯作为活性成分，以及一种或多种药学上可接受的媒介物如赋形剂、载体(包括惰性固体稀释剂和填充剂)、稀释剂(包括无菌水溶液和多种有机溶剂)、渗透促进剂、增溶剂和助剂。该药物组合物可以单独给药或与其他治疗剂一起给药。此类组合物以药学领域公知的方式制备(参见，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mace PublishingCo.,Philadelphia,PA 17th Ed.(1985)；和Modern Pharmaceutics,Marcel Dekker,Inc.3rd Ed.(G.S.Banker&C.T.Rhodes,Eds.)。
该药物组合物可以以单剂量或多剂量，通过具有类似用途的药剂的任一可接受的给药方式给药，例如在此引入作为参考的那些专利和专利申请中所描述的，包括直肠、口含、鼻内和透皮途径、通过动脉内注射、静脉、腹膜内、肠胃外、肌内、皮下、口服、局部、作为吸入剂，或通过植入或包衣设备如支架，例如或者动脉插入柱状聚合物。
一种给药方式为肠胃外给药，尤其是通过注射给药。可将式I化合物或其药学上可接受的盐引入用于注射给药的形式包括水性或油性悬浮液或乳液(与芝麻油、玉米油、棉花籽油或花生油)，以及酏剂、甘露醇、右旋糖，或无菌水溶液，和类似的药学媒介物。于盐水中的水溶液也可常规地用于注射。也可以使用乙醇、甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等(和它们适宜的混合物)、环糊精衍生物和植物油。适宜的流动性能够(例如)通过使用包衣，例如卵磷脂而维持，在分散液的情况下通过保持所需粒径和通过使用表面活性而维持。微生物作用的预防可以通过多种抗细菌和抗真菌剂，例如尼泊金类、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等而实现。
无菌注射溶液通过以所需量将本发明的化合物掺入到适宜的溶剂(具有多种如上所列的其他成分(如果需要))，接着过滤杀菌而制备。通常，分散液通过将多种已杀菌的活性成分掺入至无菌媒介物(其包含基础分散介质和所需的上面所列的那些其他成分)中而制备。在无菌粉末用于制备无菌注射液的情况下，优选的制备方法为真空干燥和冷冻干燥技术，其从先前的杀菌过滤溶液中提供活性成分和其他所需成分的粉末。在一些实施方案中，对于肠胃外给药，制备无菌注射液，其包含治疗有效量的(例如，0.1-1000mg)的式I化合物或其药学上可接受的盐。但是，可以理解，实际给药的化合物的量通常由医师确定，基于相关的因素，包括需要治疗的疾病、所选的给药路径、给药的实际化合物及其相关活性、个体受试者的年龄和体重及响应、受试者症状的严重程度等。
口服给药为另一种给药式I化合物或其药学上可接受的盐的路径。给药可以通过胶囊或肠包衣片剂等进行。在制备包含式I化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物中，活性成分通常由赋形剂稀释和/或包裹在此类载体内，其可以胶囊、小袋(sachet)、纸或其他容器的形式。当赋形剂用作稀释剂时，其可以为固体、半固体或液体物质的形式(如上)，其用作活性成分的媒介物、载体或介质。因此，该组合物可以为片剂、丸剂、粉末、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(为固体或于液体介质中)、软膏(其含有例如至多10％重量的活性化合物)、软和硬明胶胶囊、无菌注射液和无菌包装的粉末。
在口服制剂中的适宜的赋形剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、西黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚维酮、纤维素、无菌水，糖浆和甲基纤维素。该制剂可另外包括：润滑剂如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和助悬剂；防腐剂如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。
本申请所述的药物组合物可被配制从而通过本领域中已知的方式给药至受试者后，提供活性成分的快速释放、缓慢释放或延迟释放。用于口服给药的控制释放药物递送体系包括等渗泵体系和溶出体系(含有聚合物包衣的储库或药物-聚合物基质制剂)。控制释放体系的实例在美国专利3,845,770；4,326,525；4,902,514；和5,616,345中给出。用于在本发明方法中使用的另一种制剂利用透皮递送装置(“贴片”)。可以使用此类透皮贴片从而提供以控制量的方式持续或间断的输注本发明的化合物。用于递送药物的透皮贴片的构成和使用为本领域中已知的。参见例如，美国专利5,023,252、4,992,445和5,001,139。此类贴片可被构造以用于持续、脉冲或按需(on demand)递送药物。
在一些实施方案中，本申请所述组合物以单位剂型配制。术语“单位剂型”指的是物理分离的单位，其适宜用作人患者和其他哺乳动物的单元剂型，各个单位包含预定量的活性物质(经计算以产生所需的治疗效果)和适宜的药学赋形剂(例如，片剂、胶囊、安剖瓶)。所述化合物通常以药用有效量给药。在一些实施方案中，对于口服给药，每一剂量单位包含约1mg至约5000mg、约1mg至约4000mg、约1mg至约3000mg、约1mg至约2000mg、约2mg至约2000mg、约5mg至约2000mg、约10mg至约2000mg、约1mg至约1000mg、约2mg至约1000mg、约5mg至约1000mg、约10mg至约1000mg、约25mg至约1000mg、约50mg至约1000mg、约75mg至约1000mg、约100mg至约1000mg、约125mg至约1000mg、约150mg至约1000mg、约175mg至约1000mg、约200mg至约1000mg、约225mg至约1000mg、约250mg至约1000mg、约300mg至约1000mg、约350mg至约1000mg、约400mg至约1000mg、约450mg至约1000mg、约500mg至约1000mg、约550mg至约1000mg、约600mg至约1000mg、约650mg至约1000mg、约700mg至约1000mg、约750mg至约1000mg、约800mg至约1000mg、约850mg至约1000mg、约900mg至约1000mg、约950mg至约1000mg、约1mg至约750mg、约2mg至约750mg、约5mg至约750mg、约10mg至约750mg、约25mg至约750mg、约50mg至约750mg、约75mg至约750mg、约100mg至约750mg、约125mg至约750mg、约150mg至约750mg、约175mg至约750mg、约200mg至约750mg、约225mg至约750mg、约250mg至约750mg、约300mg至约750mg、约350mg至约750mg、约400mg至约750mg、约450mg至约750mg、约500mg至约750mg、约550mg至约750mg、约600mg至约750mg、约650mg至约750mg、约700mg至约750mg、约1mg至约500mg、约2mg至约500mg、约5mg至约500mg、约10mg至约500mg、约25mg至约500mg、约50mg至约500mg、约75mg至约500mg、约100mg至约500mg、约125mg至约500mg、约150mg至约500mg、约175mg至约500mg、约200mg至约500mg、约225mg至约500mg、约250mg至约500mg、约300mg至约500mg、约350mg至约500mg、约400mg至约500mg、约450mg至约500mg、约1mg至约400mg、约2mg至约400mg、约5mg至约400mg、约10mg至约400mg、约25mg至约400mg、约50mg至约400mg、约75mg至约400mg、约100mg至约400mg、约125mg至约400mg、约150mg至约400mg、约175mg至约400mg、约200mg至约400mg、约225mg至约400mg、约250mg至约400mg、约300mg至约400mg、约350mg至约400mg、约1mg至约300mg、约2mg至约300mg、约5mg至约300mg、约10mg至约300mg、约25mg至约300mg、约50mg至约300mg、约75mg至约300mg、约100mg至约300mg、约125mg至约300mg、约150mg至约300mg、约175mg至约300mg、约200mg至约300mg、约225mg至约300mg、约250mg至约300mg、约1mg至约250mg、约2mg至约250mg、约5mg至约250mg、约10mg至约250mg、约25mg至约250mg、约50mg至约250mg、约75mg至约250mg、约100mg至约250mg、约125mg至约250mg、约150mg至约250mg、约175mg至约250mg、约200mg至约250mg、约225mg至约250mg、约1mg至约225mg、约2mg至约225mg、约5mg至约225mg、约10mg至约225mg、约25mg至约225mg、约50mg至约225mg、约75mg至约225mg、约100mg至约225mg、约125mg至约225mg、约150mg至约225mg、约175mg至约225mg、约200mg至约225mg、约1mg至约200mg、约2mg至约200mg、约5mg至约200mg、约10mg至约200mg、约25mg至约200mg、约50mg至约200mg、约75mg至约200mg、约100mg至约200mg、约125mg至约200mg、约150mg至约200mg、约175mg至约200mg、约180mg至约200mg、约1mg至约175mg、约2mg至约175mg、约5mg至约175mg、约10mg至约175mg、约25mg至约175mg、约50mg至约175mg、约75mg至约175mg、约100mg至约175mg、约125mg至约175mg、约150mg至约175mg、约1mg至约150mg、约2mg至约150mg、约5mg至约150mg、约10mg至约150mg、约25mg至约150mg、约50mg至约150mg、约75mg至约150mg、约100mg至约150mg、约125mg至约150mg、约1mg至约125mg、约2mg至约125mg、约5mg至约125mg、约10mg至约125mg、约25mg至约125mg、约50mg至约125mg、约75mg至约125mg、约100mg至约125mg、约1mg至约100mg、约2mg至约100mg、约5mg至约100mg、约10mg至约100mg、约25mg至约100mg、约50mg至约100mg，或者约75mg至约100mg的式I化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，对于口服给药，每一剂量单位包含约1mg、约2mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约180mg、约200mg、约225mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg或约1000mg的式I化合物或其药学上可接受的盐。
上述的用于口服给药的剂量可每日一次(QD)或者每日两次(BID)给药。在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物以下面的单位剂量口服给药：约1mg QD、约2mg QD、约5mg QD、约10mg QD、约15mg QD、约20mg QD、约25mg QD、约30mg QD、约35mg QD、约40mg QD、约45mg QD、约50mg QD、约60mg QD、约65mg QD、约70mgQD、约75mg QD、约80mg QD、约90mg QD、约100mg QD、约125mg QD、约150mg QD、约175mg QD、约180mg QD、约200mg QD、约225mg QD、约250mg QD、约300mg QD、约350mg QD、约400mg QD、约450mg QD、约500mg QD、约550mg QD、约600mg QD、约650mg QD、约700mg QD、约750mg QD、约800mg QD、约850mg QD、约900mg QD、约950mg QD或约1000mg QD。在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物以下面的单位剂量口服给药：约1mgBID、约2mg BID、约5mg BID、约10mg BID、约15mg BID、约20mg BID、约25mg BID、约30mgBID、约35mg BID、约40mg BID、约45mg BID、约50mg BID、约75mg BID、约80mg BID、约90mgBID、约100mg BID、约125mg BID、约150mg BID、约175mg BID、约200mg BID、约225mg BID、约250mg BID、约300mg BID、约350mg BID、约400mg BID、约450mg BID、约500mg BID、约550mg BID、约600mg BID、约650mg BID、约700mg BID、约750mg BID、约800mg BID、约850mgBID、约900mg BID、约950mg BID或约1000mg BID。
在一些实施方案中，对于肠胃外给药，每一剂量单位包含0.1mg至1g、0.1mg至700mg，或者0.1mg至100mg的式I化合物或其药学上可接受的盐。
然而，对于本申请所述的任何剂量单位，将理解的是，实际给药的化合物量通常将由医师根据相关情况决定，所述相关情况包括待治疗的病症、选择的给药途径、给药的实际化合物及其相对活性、个体受试者的年龄和体重及响应、受试者的症状的严重程度等。
为了制备固体组合物如片剂，将主要活性成分与药学赋形剂混合，以形成包含式I化合物或其药学上可接受的盐的均匀混合物的固体预制剂组合物。当提及这些预制剂组合物为均匀时，这意味着该活性成分完全均匀地分散在组合物中，从而该组合物可以便利地再细分为等量有效的单位剂型如片剂、丸剂和胶囊。
本申请所述的片剂或丸剂可被包衣或其它方式复合以得到剂型，其提供延长作用或抵抗胃中酸条件的优势。例如，该片剂或丸剂可以包含内部配药组分和外部配药组分，后者为在前者上的包封的形式。这两种组分可以通过肠包衣层而分离，从而阻止在胃中崩解并且使得内部组分完整通过进入十二指肠或被延迟释放。多种物质可以用于此类肠包衣层或包衣，此类物质包括多种聚合物酸和聚合物酸与此类物质如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素的混合物。
用于吸入或者吹入的组合物可包括在药学上可接受的水性或者有机溶剂或其混合物中的溶液剂和混悬剂，和粉末剂。该包含式I化合物或其药学上可接受的盐的液体或固体组合物可以包含如本申请中所描述的适宜的药学上可接受的赋形剂。优选地，该组合物通过口服或鼻内呼吸路径给药以起到局部或全身作用。于优选地药学上可接受的溶剂中的组合物可以通过利用惰性气体而雾化。雾化后的溶液可直接从雾化设备吸入或该雾化设备可以连接至面罩支架或间歇正压呼吸机。溶液、悬浮液或粉末组合物可以自以适宜方式递送制剂的设备给药，优选地口服或鼻内给药。
给药方案
在本申请提供的方法中，式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物以治疗有效量给药以实现预期目的。治疗有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内，尤其是鉴于本申请提供的详细公开。在一些实施方案(治疗癌症的方法)中，治疗有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐可(i)减少癌细胞的数目；(ii)减小肿瘤尺寸；(iii)抑制、延缓、在一定程度上减慢，并优选停止癌细胞浸润至周边器官中；(iv)抑制(例如，在一定程度上减慢并优选停止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)延迟肿瘤的出现和/或复发；和/或(vii)在一定程度上减轻与癌症相关联的一种或者多种症状。在各种实施方案中，所述量足以改善、缓和、减轻和/或延迟癌症的一种或者多种症状。
所述治疗有效量可取决于受试者和治疗的疾病或者病症、受试者的体重和年龄、疾病或者病症的严重性和给药方式而改变，其可由本领域普通技术人员容易地确定。
在本申请提供的方法中，式I化合物或其药学上可接受的盐的给药方案可取决于例如适应症、给药途径和病症严重性而改变。取决于给药途径，适合的剂量可根据体重、身体表面积或者器官尺寸计算。最终给药方案由主治医师鉴于良好医疗实践、考虑改变药物作用的各种因素确定，所述因素例如为化合物的具体活性、疾病的鉴定和严重性、受试者的应答性、受试者的年龄、状况、体重、性别和饮食，和任何感染的严重性。可考虑的另外的因素包括给药时间和频率、药物组合、反应严重性，和对疗法的耐受/应答。涉及本申请提及的任何制剂的适用于治疗的剂量的进一步精修常规地由熟练医师在不进行过度实验的情况下进行，尤其是根据公开的剂量信息和测试，以及在人的临床试验中观察到的药代动力学数据。适合的剂量可通过使用确立的测试以及剂量应答数据确定，所述测试用于测定药物在体液或其它样品中的浓度。
选择的制剂和给药途径可针对个体受试者、受试者中的待治疗的病症的性质，和通常主治医师的判断来定制。例如，式I化合物或其药学上可接受的盐的治疗指数可通过以下方法增强：改进或者衍生所述化合物用于靶标递送至癌细胞，所述癌细胞表达由此识别癌细胞的标记物。例如，可将所述化合物连接至抗体，所述抗体识别对于癌细胞选择性或者特异性的标记物，使得所述化合物来到细胞附近以在局部发挥它们的效果，如前面所述。参见例如，Pietersz等人的Immunol.Rev.,129:57(1992)；Trail等人的Science,261:212(1993)；和Rowlinson-Busza等人的Curr.Opin.Oncol.,4:1142(1992)。
式I化合物或其药学上可接受的盐的治疗有效量可在单一剂量或者多个剂量中提供，以实现希望的治疗终点。本申请使用的“剂量”是指由受试者(例如，人)每次采用的活性成分(例如，式I化合物或其药学上可接受的盐)的总量。给药的剂量(例如，上述的用于口服给药的剂量)可每日一次(QD)、每日两次(BID)、每日三次、每日四次，或者每日超过四次给药。在一些实施方案中，将式I化合物或其药学上可接受的盐的剂量每日一次给药。在一些实施方案中，将式I化合物或其药学上可接受的盐的剂量每日两次给药。
在一些实施方案中，用于人受试者的式I化合物或其药学上可接受的盐的示例性剂量可为约1mg至约5000mg、约1mg至约4000mg、约1mg至约3000mg、约1mg至约2000mg、约2mg至约2000mg、约5mg至约2000mg、约10mg至约2000mg、约1mg至约1000mg、约2mg至约1000mg、约5mg至约1000mg、约10mg至约1000mg、约25mg至约1000mg、约50mg至约1000mg、约75mg至约1000mg、约100mg至约1000mg、约125mg至约1000mg、约150mg至约1000mg、约175mg至约1000mg、约200mg至约1000mg、约225mg至约1000mg、约250mg至约1000mg、约300mg至约1000mg、约350mg至约1000mg、约400mg至约1000mg、约450mg至约1000mg、约500mg至约1000mg、约550mg至约1000mg、约600mg至约1000mg、约650mg至约1000mg、约700mg至约1000mg、约750mg至约1000mg、约800mg至约1000mg、约850mg至约1000mg、约900mg至约1000mg、约950mg至约1000mg、约1mg至约750mg、约2mg至约750mg、约5mg至约750mg、约10mg至约750mg、约25mg至约750mg、约50mg至约750mg、约75mg至约750mg、约100mg至约750mg、约125mg至约750mg、约150mg至约750mg、约175mg至约750mg、约200mg至约750mg、约225mg至约750mg、约250mg至约750mg、约300mg至约750mg、约350mg至约750mg、约400mg至约750mg、约450mg至约750mg、约500mg至约750mg、约550mg至约750mg、约600mg至约750mg、约650mg至约750mg、约700mg至约750mg、约1mg至约500mg、约2mg至约500mg、约5mg至约500mg、约10mg至约500mg、约25mg至约500mg、约50mg至约500mg、约75mg至约500mg、约100mg至约500mg、约125mg至约500mg、约150mg至约500mg、约175mg至约500mg、约200mg至约500mg、约225mg至约500mg、约250mg至约500mg、约300mg至约500mg、约350mg至约500mg、约400mg至约500mg、约450mg至约500mg、约1mg至约400mg、约2mg至约400mg、约5mg至约400mg、约10mg至约400mg、约25mg至约400mg、约50mg至约400mg、约75mg至约400mg、约100mg至约400mg、约125mg至约400mg、约150mg至约400mg、约175mg至约400mg、约200mg至约400mg、约225mg至约400mg、约250mg至约400mg、约300mg至约400mg、约350mg至约400mg、约1mg至约300mg、约2mg至约300mg、约5mg至约300mg、约10mg至约300mg、约25mg至约300mg、约50mg至约300mg、约75mg至约300mg、约100mg至约300mg、约125mg至约300mg、约150mg至约300mg、约175mg至约300mg、约200mg至约300mg、约225mg至约300mg、约250mg至约300mg、约1mg至约250mg、约2mg至约250mg、约5mg至约250mg、约10mg至约250mg、约25mg至约250mg、约50mg至约250mg、约75mg至约250mg、约100mg至约250mg、约125mg至约250mg、约150mg至约250mg、约175mg至约250mg、约200mg至约250mg、约225mg至约250mg、约1mg至约225mg、约2mg至约225mg、约5mg至约225mg、约10mg至约225mg、约25mg至约225mg、约50mg至约225mg、约75mg至约225mg、约100mg至约225mg、约125mg至约225mg、约150mg至约225mg、约175mg至约225mg、约200mg至约225mg、约1mg至约200mg、约2mg至约200mg、约5mg至约200mg、约10mg至约200mg、约25mg至约200mg、约50mg至约200mg、约75mg至约200mg、约100mg至约200mg、约125mg至约200mg、约150mg至约200mg、约175mg至约200mg、约180mg至约200mg、约1mg至约175mg、约2mg至约175mg、约5mg至约175mg、约10mg至约175mg、约25mg至约175mg、约50mg至约175mg、约75mg至约175mg、约100mg至约175mg、约125mg至约175mg、约150mg至约175mg、约1mg至约150mg、约2mg至约150mg、约5mg至约150mg、约10mg至约150mg、约25mg至约150mg、约50mg至约150mg、约75mg至约150mg、约100mg至约150mg、约125mg至约150mg、约1mg至约125mg、约2mg至约125mg、约5mg至约125mg、约10mg至约125mg、约25mg至约125mg、约50mg至约125mg、约75mg至约125mg、约100mg至约125mg、约1mg至约100mg、约2mg至约100mg、约5mg至约100mg、约10mg至约100mg、约25mg至约100mg、约50mg至约100mg、约60mg至约100mg或约75mg至约100mg。
在一些实施方案中，用于人受试者的式I化合物或其药学上可接受的盐的示例性剂量可为约1mg、约2mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约180mg、约190mg、约200mg、约225mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约550mg、约600mg、约650mg、约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1200mg、约1400mg、约1600mg、约1800mg、约2000mg、约2200mg、约2400mg、约2600mg、约2800mg、约3000mg、约3200mg、约3400mg、约3600mg、约3800mg、约4000mg、约4200mg、约4400mg、约4600mg、约4800mg或约5000mg。
在其它实施方案中，提供的方法包括通过以下方法继续治疗受试者(例如，人)：以实现临床效果的剂量给药式I化合物或其药学上可接受的盐，或者以保持效果的水平将剂量逐渐减少。在一些实施方案中，提供的方法包括向所述受试者(例如，人)给药50mg至约300mg的式I化合物的初始每日剂量，或者在另外的实施方案中，给药100mg至1000mg的式I化合物或其药学上可接受的盐的初始每日剂量，并给药式I化合物或其药学上可接受的盐的后续每日剂量，历时至少6天，其中每一后续每日剂量以25mg至300mg，或50mg至约400mg增加。因此，还应理解的是，式I化合物或其药学上可接受的盐的剂量可逐渐增加，直到实现临床效果。可使用约10mg、约25mg、约50mg、约100mg，或者约125mg，或者约150mg，或者约200mg，或者约250mg，或者约300mg的增量来增加剂量。所述剂量可每日增加，每隔一日增加，每周两次、三次、四次、五次或六次增加，或者每周一次增加。
给药频率将依赖于给药的化合物的药代动力学参数、给药途径和治疗的特定疾病。给药的剂量和频率也可依赖于药代动力学数据和药效数据以及毒性和有效性数据。例如，关于式I化合物或其药学上可接受的盐的药代动力学和药效信息可通过临床前体外和体内研究收集，然后在临床试验期间在人中验证。因此，对于在本申请提供的方法中使用的式I化合物或其药学上可接受的盐，治疗有效剂量最初可从生物化学和/或基于细胞的测试估计。然后，剂量可在动物模型中配制以实现调节Syk表达或者活性的希望的循环浓度范围。随着人体研究进行，关于各种疾病和病症的适当的剂量水平和治疗持续时间的进一步信息将出现。
式I化合物或其药学上可接受的盐的毒性和有效性可在细胞培养物或者实验动物中通过标准药学操作测定，例如，用于测定LD50(50％群体致死剂量)和ED50(50％群体治疗有效剂量)。在毒性和治疗效果之间的剂量比率为“治疗指数”，其通常表达为比率LD50/ED50。优选呈现大的治疗指数(即，中毒剂量显著高于有效剂量)的化合物。可在配制用于人的剂量范围中使用从这种细胞培养测试和另外的动物研究得到的数据。这种化合物的剂量优选位于包括具有极少或者无毒性的ED50的循环浓度范围内。
在本发明提供的方法中，以治疗有效量给药式I化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物以获得预期的目的。如本申请所用的，当提及长春花生物碱或其药学上可接受的盐时，“治疗有效量”是足以抑制微管蛋白生长或形成，或抑制或减少微管形成，或干扰纺锤体的形成的量，由此治疗患有适应症的受试者(例如，人)或者改善或者缓解适应症的已有症状。例如，治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐可为这样的量：其足以减少应答于微管蛋白活性和/或形成的抑制的疾病或者病症的症状。
本发明所述的长春花生物碱或其药学上可接受的盐的治疗有效量可在单一剂量或者多个剂量中提供，以实现希望的治疗终点。如本申请所用的“剂量”是指由受试者(例如，人)每次使用的活性成分(例如，长春新碱或长春碱或其药学上可接受的盐)的总量。
对于人受试者，取决于所述长春花生物碱的特性，所述本发明的长春花生物碱或其药学上可接受的盐的示例性剂量可为约0.01mg-M2至约3.0mg-M2、或约0.01mg-M2至约2.5mg-M2、或约0.01mg-M2至约2.0mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.9mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.8mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.7mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.6mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.5mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.4mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.3mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.2mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.1mg-M2、或约0.01mg-M2至约1.0mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.9mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.8mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.7mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.6mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.5mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.45mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.4mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.35mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.33mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.3mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.25mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.2mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.15mg-M2、或约0.01mg-M2至约0.01mg-M2、或约0.1mg-M2至约1.8mg-M2、或约0.15mg-M2至约1.7mg-M2、或约0.2mg-M2至约1.6mg-M2、或约0.25mg-M2至约1.5mg-M2、或约0.3mg-M2至约1.4mg-M2、或约0.33mg-M2至约1.3mg-M2、或约0.35mg-M2至约1.2mg-M2、或约0.4mg-M2至约1.1mg-M2、或约0.45mg-M2至约1.0mg-M2、或约0.5mg-M2至约0.9mg-M2或约0.6mg-M2至约0.8mg-M2。在一个实施方案中，给药于本发明方法中的所述受试者的所述本发明长春花生物碱或其药学上可接受的盐的剂量为约1.5mg-M2。在一个实施方案中，给药于本发明方法中的所述受试者的所述本发明长春花生物碱或其药学上可接受的盐的剂量为约1.0mg-M2。在一个实施方案中，给药于本发明方法中的所述受试者的所述本发明长春花生物碱或其药学上可接受的盐的剂量为约0.5mg-M2。
在其他实施方案中，提供的方法包括通过以下方法继续治疗受试者(例如，人)：以实现临床效果的剂量给药所述本发明长春花生物碱或其药学上可接受的盐，或者以保持效果的水平将剂量逐渐减少。给药频率将依赖于给药化合物的药代动力学参数、给药途径和治疗的特定疾病。给药的剂量和频率也可依赖于药代动力学数据和药效数据以及毒性和有效性数据。
所述本发明的长春花生物碱或其药学上可接受的盐通过IV给药。在一个实施方案中，所述长春花生物碱为硫酸长春新碱，且小瓶中的量为1mg/1ml。在一些实施方案中，所述长春花生物碱为硫酸长春新碱，且该小瓶为含有1mg或2mg硫酸长春新碱的2ml。在另一个实施方案中，美国药典的“硫酸长春新碱”是白色至灰白色粉末。它可溶于甲醇中，易溶于水中，但只微溶于95％乙醇中。在98％乙醇中，美国药典的硫酸长春新碱具有在221nm(∈+47,100)处有最大值的紫外线光谱。
美国药典的“硫酸长春新碱注射液”是无菌、无防腐剂、仅一次性使用的在2mL(1mg和2mg)小瓶中用于静脉注射的溶液。每mL含有1mg美国药典的硫酸长春新碱，100mg甘露醇和美国药典的注射用水。加入Q.S.硫酸或氢氧化钠以控制pH。硫酸长春新碱注射液,USP的pH为4.0至5.0。
式I化合物或其药学上可接受的盐的给药可在进食情况下进行。术语进食情况或其变型是指在给药化合物或其药物组合物之前或者同时摄入或者摄取固体或者液体形式的食物或者任何适合形式的卡路里。例如，式I化合物或其药学上可接受的盐可在摄入卡路里(例如，餐食)的数分钟或者数小时内给药于受试者(例如，人)。在一些实施方案中，所述式I化合物或其药学上可接受的盐可在摄入卡路里的5-10分钟、约30分钟，或者约60分钟的时间内给药于受试者(例如，人)。
制品和试剂盒
可将包含式I化合物或其药学上可接受的盐的组合物(包括，例如，制剂和单位剂量)制备并置于适当的容器内，并标记用于治疗示出的病症。因此，还提供了制品，例如包含单位剂量形式的式I化合物或其药学上可接受的盐的容器，和含有化合物的使用说明的标签。在一些实施方案中，所述制品为容器，其包含单位剂量形式的式I化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的媒介物。该制品可为含有本发明所提供的药物组合物的瓶子、小瓶、安瓿、一次性使用的用药器(applicator)等。所述容器可由多种材料制成，例如玻璃或塑料，且在一个方面也含有在该容器上或与容器相连的标签，其指示了治疗癌症或炎性病症的使用说明。应当理解，活性成分可被包装于任一能够增加化学和物理稳定性的材料中，例如铝箔袋。在一些实施方案中，在标签上示出的疾病或者病症可包括例如癌症的治疗。
在另一个实施方案中，所述制品为包含单位剂量形式的式I化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的媒介物的容器，和包含长春花生物碱或药学上可接受的盐的小瓶。
在本申请中提供的任何药物组合物可用于制品中，就如同每种组合物被明确地和单独地列举用于制品中。
还提供了包含药物组合物的试剂盒，所述药物组合物包含式I化合物或其药学上可接受的盐。例如，试剂盒可包含单位剂量形式的式I化合物或其药学上可接受的盐和包装插入件，所述包装插入件包含所述组合物在治疗医学病症中的使用说明书。在一些实施方案中，所述试剂盒包含单位剂量形式的式I化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的媒介物。在一些实施方案中，所述试剂盒包含单位剂量形式的式I化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的媒介物，以及包含长春花生物碱或其药学上可接受的盐的溶液的小瓶。在试剂盒中的使用说明书可用于治疗癌症，包括，例如，血液恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述说明书针对所述药物组合物用于治疗癌症的使用，所述癌症例如白血病或者淋巴瘤，包括复发的和顽固性白血病或者淋巴瘤。在一些实施方案中，在试剂盒中使用的说明书可用于治疗血液癌症，其选自小淋巴细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、惰性非霍奇金淋巴瘤、顽固性非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤(+/-绒毛淋巴细胞)、结节边缘区淋巴瘤(+/-单核细胞样B细胞)、粘膜相关淋巴样组织型的结节外边缘区B细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、结节外T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性T细胞型淋巴母细胞性白血病、急性B细胞型淋巴细胞性白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞性白血病、幼年粒单核细胞性白血病、微小残留病灶、毛细胞性白血病、原发性骨髓纤维化、继发性骨髓纤维化、慢性髓细胞样白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性疾病，和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。在一个实施方案中，在试剂盒中的使用说明书可用于治疗慢性淋巴细胞性白血病或者非霍奇金淋巴瘤。在一个实施方案中，NHL为弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤，和边缘区淋巴瘤。在一个实施方案中，所述血液恶性肿瘤为惰性非霍奇金淋巴瘤。在一些实施方案中，在标签上示出的疾病或者病症可包括例如癌症治疗。
在一些情况中，所述说明书涉及所述药物组合物用于实体瘤治疗的用途，其中所述实体瘤为选自以下的癌症：胰腺癌、泌尿器癌、膀胱癌、结肠直肠癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、胆囊癌、肺癌(例如非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、黑色素瘤、神经内分泌癌、CNS癌症、脑瘤(例如，神经胶质瘤、间变性少突神经胶质瘤、成人多形性胶质母细胞瘤，和成人间变性星形细胞瘤)、骨癌、软组织肉瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、腹膜渗漏、恶性胸腔积液、间皮瘤、维尔姆斯瘤、滋养层肿瘤、血管外皮细胞瘤、卡波西肉瘤、粘液癌、圆细胞癌、鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、口腔癌、肾上腺皮质癌、产生ACTH的肿瘤。
在一些情况中，所述说明书涉及所述药物组合物用于治疗变态反应性疾病和/或自身免疫性疾病和/或炎性疾病和/或急性炎症反应的用途。在一些实施方案中，所述说明书涉及所述药物组合物用于治疗自身免疫性疾病的用途。在一些实施方案中，所述说明书涉及所述药物组合物用于治疗选自以下的自身免疫性疾病的用途：系统性红斑狼疮、重症肌无力、类风湿性关节炎、急性播散性脑脊髓炎、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、牛皮癣、自身免疫性溶血性贫血、哮喘、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠易激疾病，和慢性阻塞性肺病。在一些实施方案中，所述自身免疫性疾病选自哮喘、类风湿性关节炎、多发性硬化、慢性阻塞性肺病和系统性红斑狼疮。
本发明中提供的任一药物组合物可在试剂盒中使用，就如同各个组合物被具体且单独地列出用于试剂盒中。
合成
本发明的化合物可以利用本申请公开的方法和鉴于本申请显而易见的常规变化以及本领域中公知的方法而制备。除了本申请中教导的以外，也可以使用常规的公知的合成方法。典型的式I化合物或其药学上可接受的盐的合成可如下面实施例所描述那样实现。如果市购可得，试剂可以例如自Sigma Aldrich或其他化学供应商处商业购买。
通用合成
本发明化合物的典型实施方案可以利用下面描述的通用反应路线合成。鉴于本申请的描述显而易见的是，该通用合成路线可以通过用具有类似结构的其他原料替换起始原料，从而相应地得到不同的产物而进行变化。下面的合成描述给出了起始原料可如何变化得到相应产物的多个实例。在给定的取代基团限定的所需产物的情况下，必须的起始原料通常可通过检查确定。起始原料典型地自商业来源得到或利用公开的方法合成。为可合成本发明实施方案的化合物，检查需要合成的化合物的结构会提供各个取代基的确定。最终产物的确定通常通过简单的检查程序使得必需原料的确定变得显而易见(鉴于本申请所给实施例)。
合成反应参数
本发明的化合物可以由便利可得的起始原料，利用例如下面的通用方法和步骤而制备。可以理解，在给出典型的或优选的方法条件(即，反应温度、时间、试剂的摩尔比、溶剂、压力等)时，其他的方法条件也可以使用，除非另有说明。优化的反应条件可以随着所使用的具体试剂或溶剂而变化，但是此类条件可以由本领域技术人员通过常规优化步骤而确定。
此外，对本领域技术人员显而易见的是，常规的保护基团可能是必须的以防止某些官能团进行不需要的反应。对于各种官能团的合适的保护基团以及用于保护和脱保护具体官能团的条件是本领域中公知的。例如，多种保护基团描述于T.W.Greene and G.M.Wuts(1999)Protecting Groups in Organic Synthesis,3rd Edition,Wiley,New York，将其在此引入作为参考。
此外，本发明的化合物可以包含手性中心。相应地，如果需要，此类化合物可以被制备或分离为纯的立体异构体，即，为单个对映异构体或立体异构体富集的混合物。所有的此类立体异构体(和富集的混合物)均在本发明的范围内，除非另有指定。纯的立体异构体(或富集的混合物)可以被制备，例如利用本领域中公知的光学活性起始原料或立体选择性试剂。或者，此类化合物的外消旋混合物可以被分离，例如利用手性柱层析、手性拆分试剂等。
下列反应的起始原料通常为已知的化合物或可以通过已知的方法或其显而易见的变化而制备。例如，很多起始原料可以从供应商如Aldrich Chemical Co.(Milwaukee,Wisconsin,USA)商购得到。其他的原料可以通过描述于标准的参考教科书中的步骤或其显而易见的变化而制备，如Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis,Volumes 1-15(John Wiley,and Sons,1991),Rodd's Chemistry of Carbon Compounds,Volumes 1-5,and Supplementals(Elsevier Science Publishers,1989)organicReactions,Volumes1-40(John Wiley,and Sons,1991),March's Advanced OrganicChemistry,(John Wiley,and Sons,5th Edition,2001),和Larock's ComprehensiveOrganic Transformations(VCH Publishers Inc.,1989)。
术语“溶剂”、“惰性有机溶剂”或“惰性溶剂”指的是在与其一起描述的反应条件下为惰性的溶剂(包括，例如，苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(“THF”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)、氯仿、二氯甲烷(mehylene chloride或dichloromethane))、乙醚、甲醇、吡啶等)。除非有相反指定，本发明反应中使用的溶剂为惰性有机溶剂，且反应在惰性气体(优选氮气)中进行。
术语“q.s.”表示加入足以达到所述功能的量，例如，将溶液调节至所需体积(即100％)。
包括下面的实施例以示例本发明的优选实施方案。本领域技术人员可以理解，实施例中公开的技术，其代表了发明人发现的能够良好实施本发明的代表性技术，因此可以理解为它们构成了用于其实施的优选方式。但是，本领域技术人员会理解，基于本发明的公开内容，在公开的具体实施方案中可以进行很多变化，且仍然可以得到相同或类似的结果而不偏离本发明的精神和范围。
缩写和缩略词列表
缩写 含义
℃ 摄氏度
anal 分析的
ATP 腺苷-5'-三磷酸
ATX II 地中海槽沟海葵毒素
AcOH 乙酸
ACN 乙腈
CAN 硝酸铈铵
CDI 1,1’-羰基二咪唑
CHO 中国仓鼠卵巢
conc. 浓缩
d 二重峰
DABCO 1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷
DAST (二乙基氨基)三氟化硫
dd 双二重峰
DCE 1,2-二氯乙烷
DCM 二氯甲烷
DEAD 偶氮二甲酸二乙酯
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
缩写 含义
DMAP 4-二甲基氨基吡啶
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
dppf 1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁
EA 乙醇
ECF 细胞外液
EDTA 乙二胺四乙酸
EGTA 乙二醇四乙酸
equiv/eq 当量
ESI 电喷雾离子化
Ac 乙酸盐/酯
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
g 克
HEPES (4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)
HATU 2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基
脲鎓六氟磷酸盐
hERG 人Ether-à-go-go相关基因
HMDS 六甲基二硅氮烷(叠氮化物)
HPLC 高效液相色谱
h 小时
Hz 赫兹
IC50 半数最大抑制浓度
IMR-32 人神经母细胞瘤细胞系
J 耦合常数
Kg 千克
kHz 千赫兹
LAH 氢化锂铵
LCMS/LC-MS 液相色谱–质谱
M 摩尔浓度
m 多重峰
m/z 质荷比
M+ 质量峰
M+H 加氢质量峰
mCPBA 3-氯过氧苯甲酸
Me 甲基
MeOH 甲醇
缩写 含义
mg 毫克
MHz 兆赫兹
min/m 分钟
ml/mL 毫升
mM 毫摩尔浓度
mmol 毫摩尔
nmol 纳摩尔
mOsmol 毫渗摩尔
MRM 磁共振显微技术
MS 质谱
ms 毫秒
mV 毫伏
mw 微波
N 当量
mol 摩尔
NMP N-甲基吡咯烷酮
NMR 核磁共振
pA 皮安
Ph 苯基
ppm 百万分率
prep 制备
q.s. 足以达到所述功能的量
Rf 保留因子
RP 反相
RT/rt 室温
s 秒
s 单峰
SEM 2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基
t 三重峰
TB 张力性阻断(Tonic Block)
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层层析
TMS 三甲基甲硅烷基
TTX 河豚毒素
UDB 使用依赖性阻断
WT 野生型
缩写 含义
δ 化学位移
μg 微克
μL/μl 微升
μM 微摩尔浓度
μm 微米
μmol 微摩尔
实施例
共同中间体的制备
中间体1.01.(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯IV和4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基(6-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯V的制备
1-(4-硝基苯基)-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪I：在500mL圆底烧瓶中，将1-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪(3.02g,21.26毫摩尔)、碳酸钾(5.87g,42.52毫摩尔)、1-氟-4-硝基苯(3.00g,21.26毫摩尔)在乙腈(33mL)中混合，并在氮气下在100℃搅拌过夜。将混合物用水(100mL)稀释，并用DCM(100mL x 3)萃取，经无水碳酸钠干燥，过滤并浓缩滤液。使用超声发生器将残留物溶解在最少量DCM中并用己烷析出。将析出物过滤，用己烷洗涤并干燥，得到橙色固体的标题化合物I(4.70g,17.85毫摩尔,84％)。
4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯胺II：在氢化容器中，将1-(4-硝基苯基)-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪I(4.70g,17.85毫摩尔)尽可能多地溶解在MeOH(26mL)和DCM(5mL)中。添加Pd/C(10％)(2.85g,2.68毫摩尔)，并将反应混合物贮存在氮气下。将反应混合物在Parr氢化器上以45PSI摇晃。在15分钟之后，将反应混合物完全再充至45PSI并再摇晃1小时。将所述物质经硅藻土过滤，用25％MeOH/DCM洗涤并浓缩，得到淡褐色固体的标题化合物II(4.16g,17.85毫摩尔,98％)。
6-溴-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺III：向4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯胺II(2.00g,8.57毫摩尔)中添加在DMF(43mL)中的hunig碱(3.29mL)和6,8-二溴咪唑并[1,2-a]吡嗪(2.37g,8.57毫摩尔)。将反应混合物在85℃在压力管中搅拌过夜。将物质用饱和碳酸氢钠淬灭，用DCM(120mL x 3)萃取，将有机层合并，并用水(120mL x 3)洗涤，经无水碳酸钠干燥并浓缩。将粗物质使用120gIsco柱纯化并使用0-60％(10％MeOH/DCM)的阶式梯度洗脱。将希望的级分合并，并浓缩，得到淡黄色固体的标题化合物III(3.00g,6.99毫摩尔,82％)。
(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯IV：将6-溴-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺III(1000mg,2.33mmol)、二碳酸二叔丁酯(1016.72mg,4.66mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(21.34mg,0.17mmol)在DCM(1.01ml)中搅拌并在65℃回流3小时。将反应混合物用100mL DCM稀释，用H2O洗涤(x3)，干燥，过滤并浓缩。将粗物质溶解在最少量DCM中，加载至预加载的氧化硅加载器上并使用0-30％MeOH/DCM历经20柱体积从40g柱洗脱。将希望的级分合并，并浓缩，得到标题化合物IV(1.2g,97％)。将该化合物在实施例2中使用。
4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基(6-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯V：在350mL p-管中，将6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯IV(8150mg,15.39mmol)、1,1,1,2,2,2-六丁基二锡烷(11.67ml,23.09mmol)、四(三苯基膦)钯(889.43mg,0.77mmol)和四丁基碘化铵(5686.03mg,15.39mmol)在二噁烷(62ml)中混合，并加热至110℃过夜。根据LCMS，无起始物质剩余。将反应混合物吸附至硅藻土上，并使用0-10-20-30-100％(50％EtOAc/Hex-Hex)梯度(在50％保持10-15柱体积)历经50-60柱体积从160g氧化铝柱洗脱，得到标题化合物V(5.83g,51％)。将该化合物在实施例1和2中使用。
中间体1.02.(6-溴-5-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯X的制备
6-甲基吡嗪-2-胺VI：在0℃，向无水氯化锌(II)(26.3g,193mmol)在THF(150mL)中的溶液滴加3M甲基溴化镁的乙醚溶液(129mL)，历时1小时。然后添加[1,3-双(二苯基膦基)丙烷]氯化镍(II)(2.08g,3.85mmol)，并将混合物温热至室温。向上面的混合物添加6-氯-2-氨基吡嗪(5.00g,38.6mmol)在无水THF(25mL)中的溶液，并将反应混合物在氮气气氛下在回流下搅拌6小时。然后，将混合物冷却至室温，然后冷却至0℃并用饱和氯化铵水溶液(50mL)小心淬灭。将有机层分离并经硫酸钠干燥。将干燥剂过滤并在减压下浓缩滤液，得到淡黄色固体的粗6-甲基吡嗪-2-胺VI(2.60g,62％)，其不经纯化就用于后续步骤中：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.63(s,1H),7.53(s,1H),4.96(bs,2H),2.16(s,3H)。
3,5-二溴-6-甲基吡嗪-2-胺VII：在10℃，历时15分钟向6-甲基吡嗪-2-胺VI(2.00g,18.3mmol)在THF(40mL)中的溶液逐份添加N-溴琥珀酰亚胺(6.70g,37.6mmol)，并在搅拌下将混合物温热至室温。在2小时之后，将反应混合物在减压下浓缩，并将所得残留物通过柱色谱法(硅胶,梯度,己烷至EtOAc)纯化，得到橙色固体的3,5-二溴-6-甲基吡嗪-2-胺VII(3.10g,64％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：4.93(bs,2H),2.38(s,3H)。
6,8-二溴-5-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪VIII：将2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(3.21mL,20.7mmol)和48％氢溴酸水溶液(1.0mL)的混合物在回流下搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至室温并用碳酸氢钠处理，直到气体逸出停止。过滤混合物，并将滤液用乙醇(15mL)稀释。向此混合物添加3,5-二溴-6-甲基吡嗪-2-胺VII(3.00g,11.2mmol)，并将反应混合物在回流下搅拌16小时。然后，将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩至约10mL的体积。将悬浮液过滤并用冷乙醇(5mL)洗涤滤饼。然后将滤饼吸收至水(50mL)中并用碳酸钾将pH调节至～8。将所得悬浮液过滤，并将滤饼在真空下干燥至恒定重量，得到淡褐色固体的6,8-二溴-5-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪VIII(1.97g,60％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.90(s,1H),7.72(s,1H),2.74(s,3H)。
6-溴-5-甲基-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺IX：化合物IX是从6,8-二溴-5-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪VIII制备的，使用如在中间体实施例1.01中对于制备6-溴-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺III所述的方法。
(6-溴-5-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯X：化合物X是从6-溴-5-甲基-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺IX制备的，使用如在中间体实施例1.01中对于制备(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯IV所述的方法。将该化合物在实施例4中使用。
实施例1-7的合成
实施例1 6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺(1)的制备
2-双(叔丁氧羰基)氨基-6-溴-3-氯吡嗪XI：将6-溴-3-氯吡嗪-2-胺(2000mg,9.59mmol)、三乙胺(3.99ml,28.78mmol)、二碳酸二叔丁酯(4188.12mg,19.19mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(87.91mg,0.72mmol)相继溶解在DCM(48ml)中。将反应混合物在室温搅拌过夜。将粗物质用水洗涤，干燥，过滤并浓缩。将粗物质溶解在最少的DCM中并加载至25g预填充硅胶加载器上并使用0-30％MeOH/DCM从40g柱洗脱。将标题化合物XI(3900mg,99％)分离并通过LCMS和NMR鉴别。通过NMR观察，产物为单和双boc-保护的材料的混合物，主要为双boc-保护的材料。
叔丁氧羰基(6-(8-((叔丁氧羰基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)-3-氯吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯XII：将在1,4-二噁烷(11.27ml)中的4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基(6-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯V(1000mg,1.4mmol)、2-双(叔丁氧羰基)氨基-6-溴-3-氯吡嗪XI(552mg,1.35mmol)和PdCl2(PPh3)2(142.77mg,0.20mmol)在微波中在140℃辐射20分钟。将反应混合物吸附至硅藻土上并使用0-10-100％(30％MeOH/DCM)历经20柱体积从40gGold Isco柱洗脱。将级分34-39收集并浓缩。根据NMR，将标题化合物XII鉴别并分离(590mg,55％)。
(6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XIII：在微波小瓶中，将叔丁氧羰基(6-(8-((叔丁氧羰基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)-3-氯吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯XII(300mg,0.44mmol)、甲基硼酸(794.39mg,13.27mmol)、四(三苯基膦)钯(51.12mg,0.04mmol)和2M Na2CO3(0.44ml)在DME(1.77ml)中混合，并在微波中在150℃辐射20分钟。使用25％MeOH/DCM和水对反应实施后处理。将有机层合并，干燥，过滤并浓缩。将粗物质加载至硅胶上，并使用0-5-15-25-50％(30％MeOH/DCM)历经45柱体积从40g Gold柱洗脱。浓缩希望的级分，得到作为次要产物的(6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XIII和作为不可分离的混合物的希望的最终化合物1(总共208mg)，并用于TFA反应中。
6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺(1)：向6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XIII(48mg,0.09mmol)和6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺(1,160mg,0.35mmol)在DCM(2.5ml)中的溶液添加TFA(0.16ml,2.15mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。根据LCMS，该反应未完成。向反应混合物中加入另外的TFA(0.16ml,2.15mmol)，并搅拌1小时。根据LCMS，该反应未完成，向反应混合物中加入另外的TFA(0.32ml,4.3mmol)，并再搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至0℃并用饱和NaHCO3淬灭，然后用DCM(5ml x 3)萃取，并将合并的有机层用水(5ml x 2)、盐水(5ml x 1)洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩得到粗产物。将粗物质吸附至硅胶上，并使用0-15-25-40-100％(30％MeOH/DCM)从24g Gold Isco柱洗脱。将希望的级分合并，并浓缩，得到希望的化合物(1,67.5mg,34％)。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：458.22。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ：9.48(s,1H),8.54(s,1H),8.41(s,1H),8.11(s,1H),7.95(d,2H),7.6(s,1H),6.98(d,2H),6.2(s,2H),4.58-4.45(dt,4H),3.3(m,1H),3.14(t,4H),2.50-2.4(dt,4H),2.33(s,1H)。替代地，可将化合物XII直接用于该步骤并相似地脱保护以提供5-氯吡嗪取代的类似物。
实施例2.6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺(2)的制备
2-双(叔丁氧羰基)氨基-6-溴吡嗪XIV：向6-溴吡嗪-2-胺(5g,28.7mmol)和二碳酸二叔丁酯(25.09g,114.94mmol)的混合物中加入DCM(10ml)，随后加入DMAP(0.351g,29mmol)。将该反应于55℃加热1小时，冷却至室温，将反应混合物在水和DCM之间分配，在硅胶上纯化并浓缩，得到10.75g(87％产率)的2-双(叔丁氧羰基)氨基-6-溴吡嗪XIV。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：374.14.1H NMR(DMSO)δ：8.84(d,2H),1.39(s,18H)。
(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XVI–化学A路线：将4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基(6-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯V(215mg,0.291mmol)与2-双(叔丁氧羰基)氨基-6-溴吡嗪XIV(217.58mg,0.581mmol)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(30.61mg,0.044mmol)和1,4-二噁烷(5ml)混合。将反应混合物在微波反应器中在120℃搅拌30分钟。将反应混合物用饱和KF淬灭，用EtOAc萃取，在硅胶上纯化，用EtOAc洗脱。将希望的级分合并，并浓缩，得到100mg(46％收率)的(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XVI。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：744.4。1H NMR(300MHz d6-DMSO)δ：9.37(s,1H),9.18(s,1H),8.77(s,1H),8.33(d,1H),7.87(d,1H),7.28-7.25(d,2H),6.92-6.89(d,2H),4.55-4.41(m,4H),3.4(m,1H),3.14-3.11(m,4H),2,37-2.34(m,4H),1.37(s,18H),1.3(s,9H)。
(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XVI–化学B路线：步骤1：向干燥的250mL圆底烧瓶添加2-双(叔丁氧羰基)氨基-6-溴吡嗪XIV(1.0g,1.0当量,2.67mmol)、KOAc(790mg,8.02mmol,3.0当量)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(750mg,2.94mmol,1.1当量)、Pd(dba)(171mg,0.187mmol,0.07当量)和X-phos(128mg,0.267mmol,0.1当量)，然后添加1,4-二噁烷(25mL)，并将溶液超声处理5分钟，然后用氮气吹洗5分钟。然后将具有内容物的烧瓶置于氮气气氛下并在110℃加热90分钟。一旦通过LCMS发现实现了向频哪醇硼酸酯的完全转化，则将反应混合物移除加热并冷却至室温。一旦冷却，将反应内容物通过硅藻土过滤，并用3x 20mL EtOAc洗涤滤饼。然后将所得溶液浓缩至深红色-橙色浆液，从而得到N,N-双(叔丁氧羰基)6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-胺XV，其直接用于后续步骤中。
步骤2：将新鲜形成的N,N-双(叔丁氧羰基)6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-胺XV(2.67mmol，基于100％转化，2.0当量，基于溴化物)溶解在20ml 1,2-二甲氧基乙烷中，并向此溶液添加(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯IV(707mg,1.34mmol,1.0当量)、Na2CO3(283mg,2.67mmol,2.0当量)、Pd(PPh3)4(155mg,0.134mmol,0.1当量)和水(10mL)，并将溶液使用氮气脱气5分钟。然后将反应置于N2气氛下并在110℃加热90分钟。LCMS显示溴化物起始物质完全消耗，将反应混合物从加热移除并冷却至室温。将反应混合物用100mL水和100mL 20％MeOH/DCM稀释，将有机层回收，用1x饱和NaHCO3、1x饱和盐水萃取，然后经Na2SO4干燥。然后将溶液过滤并浓缩至橙色-红色固体。然后将样品在温热MeOH中浆化，超声处理，然后过滤，用2x 20mL冷MeOH洗涤，然后将奶油色固体在高真空下干燥过夜，得到905mg的(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XVI，90％产率，经2步(每步为95％)。
6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺(2)：向(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XVI(200mg,0.269mmol)在DCM(2ml)中的溶液添加TFA(0.5ml,6.578mmol)。将反应混合物在室温搅拌16小时，添加饱和碳酸氢钠，用EtOAC萃取并在硅胶上纯化，用5％MeOH/EtOAc,20％MeOH/EtOAc洗脱。将希望的级分合并，并浓缩，得到100mg(83％产率)的标题化合物2。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：444.2。1H NMR(300MHz d6-DMSO)δ：9.5(s,1H),8.588(s,1H),8.47(s,1H),8.12(d,1H),7.95-7.92(d,2H),7.88(s,1H),7.62(s,1H),6.99-6.96(d,2H),6.46(s,2H),4.57-4.53(m,2H),4.48-4.44(m,2H),3.43(m,1H),3.15-3.12(m,4H),2.41-2.38(m,4H)。
实施例3.(R)-(4-(4-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)吗啉-2-基)甲醇(3)的制备
(R)-(4-(4-((6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)吗啉-2-基)甲醇XVII：在配有冷凝器的250mL圆底烧瓶中加入6,8-二溴咪唑并[1,2-a]吡嗪(2000mg,7.22mmol)并添加30mL异丙醇，然后添加N,N-二异丙基乙胺(2.52ml,14.44mmol)和(R)-(4-(4-氨基苯基)吗啉-2-基)甲醇(1504.12mg,7.22mmol)。将反应混合物加热至回流(95℃油浴)过夜。将反应混合物冷却，将析出物通过过滤收集并先后用异丙醇和己烷洗涤，得到希望的化合物XVII，2.92g，95％产率。
(R)-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)吗啉代)苯基)氨基甲酸叔丁酯XVIII：在250mL圆底烧瓶中加入(R)-(4-(4-((6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)吗啉-2-基)甲醇XVII(2.80g,6.9mmol)并添加DCM，然后添加三乙胺(2.9mL,2.1g,20.8mmol)、DMAP(63g,0.52mmol)和二碳酸二叔丁酯(3.8g,17.3mmol)。将反应混合物搅拌过夜，然后用DCM和水稀释，分离，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质通过色谱法纯化：具有25g硅胶加载器的ISCO 40g硅胶，用0-100％EtOAc/己烷洗脱，得到化合物XVIII(1.66g,40％)。
(R)-(4-(2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)吗啉代)苯基)(6-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯XIX：根据实施例中间体1.01的类似方法，将(R)-(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)吗啉代)苯基)氨基甲酸叔丁酯XVIII反应，得到(R)-(4-(2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)吗啉代)苯基)(6-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯XIX。
(R)-(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)吗啉代)苯基)氨基甲酸叔丁酯XX：根据如实施例2中所述的化学A的类似方法，将(R)-(4-(2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)吗啉代)苯基)(6-(三丁基甲锡烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基甲酸叔丁酯XIX与2-双(叔丁氧羰基)氨基-6-溴吡嗪XIV反应，得到希望的化合物(R)-(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)吗啉代)苯基)氨基甲酸叔丁酯XX。
(R)-(4-(4-((6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)吗啉-2-基)甲醇(3)：将在DCM中的(R)-(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(2-(((叔丁氧羰基)氧基)甲基)吗啉代)苯基)氨基甲酸叔丁酯XX(460mg,0.56mmol)添加至圆底烧瓶，并添加TFA(1.29ml,16.85mmol)。反应在搅拌～5小时之后部分完成。添加另外的10eq TFA并搅拌过夜，然后在减压下浓缩。添加10％MeOH/DCM(～100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液，并搅拌15分钟，分离，用～100mL 10％MeOH/DCM萃取。将有机层合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩并在真空下干燥。将所得固体用DCM研磨，经过滤收集固体并在真空下干燥，得到褐色固体，125mg，通过NMR和LC-MS鉴定确认为化合物3。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：419.2。1H NMR(300MHz d6-DMSO)δ：9.57(s,1H),8.59(s,1H),8.47(s,1H),8.13(d,J＝1.2Hz,1H),8.06–7.90(m,2H),7.87(s,1H),7.62(d,J＝1.1Hz,1H),7.05–6.93(m,2H),6.49(s,2H),4.78(t,J＝5.8Hz,1H),3.98–3.87(m,1H),3.71–3.36(m,7H),2.63(td,J＝11.7,3.4Hz,1H),2.37(dd,J＝12.1,10.5Hz,1H)。相应的(S)异构体或者化合物的外消旋混合物在第一步骤中分别使用(S)-(4-(4-氨基苯基)吗啉-2-基)甲醇或者(4-(4-氨基苯基)吗啉-2-基)甲醇的外消旋混合物相似地制备。
实施例4.6-(6-氨基吡嗪-2-基)-5-甲基-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺(4)的制备
(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)-5-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXI：根据如实施例2中所述的化学B的方法，将(6-溴-5-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯X与XV反应，得到希望的化合物XXI。
6-(6-氨基吡嗪-2-基)-5-甲基-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺(4)：通过实施例2中所述的类似方法，将化合物(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)-5-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXI脱保护，得到希望的化合物4。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：458.32。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ：9.28(s,1H),8.28(s,1H),8.04(s,1H),7.89(d,2H),7.83(s,1H),7.7(s,1H),6.91(d,2H),6.46(s,2H),4.6-4.4(dt,4H),3.43(m,1H),3.1(t,4H),2.49(s,3H),2.4(t,4H)。
实施例5.2-(5-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇(5)的制备
2-(2-(2-氟-5-硝基苯氧基)乙氧基)四氢-2H-吡喃XXII：将2-氟-5-硝基苯酚(4g,25mmol)、2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃(4.4mL,28mmol)和碳酸钾(4.2g 30mmol)在DMF(50mL)中的混合物在50℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc和H2O稀释。将含水层分离并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取液用H2O(5次，以除去DMF)和盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。将所得残留物通过柱色谱法ISCO Rf(40g柱)用100％己烷–1:1己烷:EtOAc的梯度洗脱纯化，得到2-(2-(2-氟-5-硝基苯氧基)乙氧基)四氢-2H-吡喃XXII(1.5g,21％)。
1-(4-硝基-2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪XXIII：将2-(2-(2-氟-5-硝基苯氧基)乙氧基)四氢-2H-吡喃XXII(1550mg,5.43mmol)、1-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪(772mg,5.43mmol)和碳酸钾(1126.41mg,8.15mmol)在NMP(6mL)中的混合物在100℃搅拌8小时。将含水层分离并用EtOAc萃取。将合并的有机萃取液用H2O(5次，以除去NMP)和盐水洗涤并经硫酸钠干燥。将所得残留物通过柱色谱法ISCORf(24g柱)用100％DCM–60:35:5DCM:Et2O:MeOH的梯度洗脱纯化，得到1-(4-硝基-2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪XXIII(2.1g,94％)。
4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯胺XXIV：在500-mL Parr氢化瓶中向1-(4-硝基-2-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)-4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪XXIII(2100mg,5.1mmol)在乙醇(50mL)中的悬浮液添加10％Pd/C(50％湿的,390mg干重)。将瓶抽空，用氢气填充至50psi的压力并在Parr氢化设备上在室温摇晃2小时。将反应混合物过滤，并用乙醇洗涤。将滤液真空浓缩，得到4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯胺XXIV(1850mg,95％)。
6-溴-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺XXV：向4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯胺XXIV(619mg,2.17mmol)和6,8-二溴咪唑并[1,2-a]吡嗪(601mg,2.2mmol)在IPA(15mL)中的溶液添加N,N-二异丙基乙胺(0.95ml,5.43mmol)。将混合物在110℃搅拌16小时。然后，添加DCM(10mL)和饱和NaHCO3水溶液(15mL)。将水层分离并用DCM(2×10mL)萃取。将合并的有机萃取液用盐水(10mL)洗涤并经硫酸钠干燥。将所得残留物通过柱色谱法ISCO Rf(24g柱)，用100％DCM–60:35:5DCM:Et2O:MeOH的梯度洗脱纯化，得到6-溴-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺XXV(1.2g,定量的)。
(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXVI：根据中间体实施例1.01中所述的类似方法(III转化成IV)，将6-溴-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺XXV(1.2g,2.4mmol)反应，得到(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXVI(639mg,37％)。
(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXVII：根据如实施例2中所述的化学B的方法，将(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXVI与XV反应，得到希望的化合物(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXVII(313mg,59％)。
2-(5-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇(5)：通过实施例2中所述的类似方法，将化合物(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXVII(313mg,0.35mmol)脱保护，得到2-(5-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇(5)。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：504.3。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ：9.52(s,1H),8.61(s,1H),8.51(s,1H),8.14(d,J＝1.1Hz,1H),7.89(s,1H),7.81(d,J＝2.3Hz,1H),7.74–7.60(m,2H),6.90(d,J＝8.6Hz,1H),6.47(s,2H),5.74(s,1H),4.86–4.76(m,1H),4.50(dt,J＝25.6,6.3Hz,4H),4.04(t,J＝5.1Hz,2H),3.73(q,J＝5.1Hz,2H),3.51–3.42(m,1H),3.02(s,4H),2.40(s,4H).
实施例6.2-((4-(4-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)丙-1,3-二醇(6)的制备
氧杂环丁烷-3-甲醛XXVIII：在配有搅拌棒的圆底烧瓶中，将氧杂环丁烷-3-基甲醇(2.00g,22.7mmol)溶解在DCM(50mL)中，并一次性添加戴斯-马丁高碘烷(10.67g,28.38mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将固体通过硅藻土过滤，并用DCM(3mL x 5)洗涤。将滤液移除并真空浓缩，将所得粗的氧杂环丁烷-3-甲醛XXVIII直接用于后续步骤中。
1-(4-硝基苯基)-4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪XXIX：向配有搅拌棒的圆底烧瓶添加氧杂环丁烷-3-甲醛XXVIII(0.977g,11.35mmol)、在DCM(100mL)中的1-(4-硝基苯基)哌嗪(1.18g,5.68mmol)和在DCM(2mL)中的HOAc(1.70g,28.38mmol)。在5分钟之后，添加NaBH(OAc)3(24.06g,113.05mmol)。将所得混合物在室温搅拌2小时。将大部分挥发物真空除去。添加DCM(200mL)，然后添加饱和NaHCO3水溶液(20mL)，并将所得混合物搅拌20分钟。将有机相分离，用饱和NaHCO3水溶液(20mL x 3)、盐水(20mL x 1)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将残留物通过硅胶柱(MeOH:DCM＝0:100至5:95至25:75)，得到黄色固体的希望的化合物XXIX，2.10g。
4-(4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯胺XXX：向配有搅拌棒的圆底烧瓶添加1-(4-硝基苯基)-4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪XXIX(3.20g,11.54mmol)、乙醇(60mL)和水(60mL)。添加铁(4.51g,80.77mmol)和氯化铵(4.32g,80.77mmol)后，将反应混合物在80℃加热1小时，然后通过硅藻土过滤并用DCM(5mL x 5)洗涤。将所得滤液用DCM(20mL x3)萃取。将合并的有机萃取液用水(20mL x 2)、盐水(20mL x 1)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。得到希望的4-(4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯胺XXX，1.19g。
6-溴-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺XXXI：向配有搅拌棒的密封管添加4-(4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯胺XXX(1.19g,4.81mmol)、6,8-二溴咪唑并[1,2-a]吡嗪(1.33g,4.81mmol)、异丙醇(24.1mL)，和二异丙基乙胺(1.37g,10.58mmol)，并将反应混合物在100℃加热过夜。真空除去大部分溶剂并将DCM(200mL)添加至混合物。将溶液用H2O(20mL x 2)、盐水(20mL x 1)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将所得残留物通过硅胶柱(MeOH:DCM＝5:95)，得到作为希望的化合物XXXI的浅红色固体，0.692g(产率32.4％)。
(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(1-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌啶-4-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXXII：向配有搅拌棒的圆底烧瓶添加6-溴-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺XXXI(560mg,1.27mmol)、DCM(11mL)、二碳酸二叔丁酯(414.4mg,1.90mmol)，和三乙胺(640.5mg,6.33mmol)。将反应混合物在50℃加热过夜。添加DCM(200mL)，将所得溶液用水(20mL x 2)、盐水(20mL x 1)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。进行柱色谱法处理，得到为黄色固体的希望的化合物XXXII；640mg(产率93.2％)。
(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXXIII：向配有搅拌棒的圆底烧瓶添加(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXXII(150mg,0.276mmol)、在DME(2.3mL)中的N,N-双(叔丁氧羰基)6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡嗪-2-胺XV(255.8mg,0.607mmol)、Pd(PPh3)4(16.0mg,0.14mmol)、Na2CO3水溶液(1.0N,0.91mL,0.91mmol)，和DME(2mL)。将混合物在75℃加热2小时，然后添加DCM(200mL)，将所得混合物用水(30mL x 3)、盐水(30mL x1)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并真空除去溶剂。通过硅胶柱(MeOH:DCM＝5:95)纯化，得到希望的化合物XXXIII，250mg。
2-((4-(4-((6-(6-氨基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)丙-1,3-二醇(6)：向(6-(6-(双(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXXIII(250mg,0.33mmol)在DCM(30mL)中的溶液添加TFA(940.3mg,8.25mmol)。将所得混合物在室温搅拌过夜。再次添加TFA(752.2mg,6.60mmol)并在室温搅拌过夜。真空除去大部分溶剂，添加DCM(200mL)和饱和NaHCO3水溶液(30mL)，并将所得混合物搅拌30分钟。将有机相分离，用饱和NaHCO3水溶液(20mL x 4)、盐水(20mL x 1)洗涤。用DCM(30mL x 2)萃取水相。将合并的有机相用盐水(20mL x 1)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并真空除去溶剂。将粗物质在ISCO柱上纯化(MeOH:DCM＝0:100至5:95至7.5:92.5至25:75，以洗脱希望的化合物)。得到两种化合物，第一种是氧杂环丁烷化合物(26.8mg)；另一种是希望的化合物(6，49.3mg，产率31.4％)。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：476。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ：9.51(s,1H),8.60(s,1H),8.49(s,1H),8.14(d,J＝1.5Hz,1H),7.95(d,J＝9Hz,2H),7.90(s,1H),7.64(s,1H),6.99(d,J＝9Hz,2H),6.48(s,2H),4.51(宽S,2H),3.43(d,J＝6Hz,4H),3.12(宽m,4H),2.54(宽m,4H),2.34(d,J＝7.2Hz,2H),1.83(m,1H)。
实施例7.2-(5-((6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇(7)的制备
叔丁氧羰基(6-(8-((叔丁氧羰基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)-3-氯吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯XXXIV：向配有回流冷凝器的烧瓶添加(6-溴咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基甲酸叔丁酯XXVI(如实施例5中所述制备)(352mg,0.52mmol)、2-(双-boc-氨基)-3-氯-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡嗪(通过与实施例2中用于制备化合物XV使用的方法类似的方法制备)(500mg,1.1mmol)、在碳酸钠(1.6mL,1M的H2O溶液)中的Pd(PPh3)4(30mg,0.03mmol)和DME(4.8mL)。将混合物加热回流1小时。将反应混合物冷却至室温，用DCM和H2O稀释。将水层分离并用DCM萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物通过柱色谱法ISCO Rf(4g柱)，用100％DCM–100％60/35/5DCM/Et2O/MeOH的梯度洗脱纯化，合并适当的级分，并浓缩，提供希望的化合物叔丁氧羰基(6-(8-((叔丁氧羰基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)-3-氯吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯XXXIV(258mg,53％)。
叔丁氧羰基(6-(8-((叔丁氧羰基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)-3-甲基吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯XXXV：向微波小瓶添加叔丁氧羰基(6-(8-((叔丁氧羰基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)-3-氯吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯XXXIV(258mg,0.28mmol)、甲基硼酸(503mg,8.4mmol)、在碳酸钠(0.8mL,1M的H2O溶液)中的Pd(PPh3)4(32mg,0.03mmol)和DME(2.5mL)。将混合物在150℃加热20分钟。将反应混合物冷却至室温，用DCM和H2O稀释。将水层分离并用DCM萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物通过柱色谱法ISCO Rf(4g柱)，用100％DCM–100％75/18/7DCM/Et2O/MeOH的梯度洗脱纯化，提供希望的化合物叔丁氧羰基(6-(8-((叔丁氧羰基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)-3-甲基吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯XXXV(165mg,65％)。
2-(5-((6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇(7)：向叔丁氧羰基(6-(8-((叔丁氧羰基)(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-3-(2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)乙氧基)苯基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-6-基)-3-甲基吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯XXXV(165mg,0.18mmol)在DCM(2.2mL)中的溶液添加TFA(1.1mL,0.11mmol)。将混合物在室温搅拌16小时。将反应混合物用9:1DCM:MeOH和H2O稀释。将水层分离并用9:1DCM:MeOH萃取。将合并的有机萃取液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将所得残留物通过柱色谱法，用100％75/18/7DCM/Et2O/MeOH-100％70/20/10DCM/Et2O/MeOH的梯度洗脱纯化，提供希望的化合物2-(5-((6-(6-氨基-5-甲基吡嗪-2-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)氨基)-2-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯氧基)乙醇(7,56mg,59％)。LCMS-ESI+(m/z)：[M+H]+：518.2。1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ：9.49(s,1H),8.56(s,1H),8.44(s,1H),8.13(d,J＝1.1Hz,1H),7.85–7.66(m,2H),7.62(d,J＝1.1Hz,1H),6.90(d,J＝8.6Hz,1H),6.25(s,2H),4.87–4.77(m,1H),4.50(dt,J＝25.2,6.3Hz,4H),4.04(t,J＝5.1Hz,2H),3.74(q,J＝5.2Hz,2H),3.51–3.39(m,1H),3.10-2.95(m,4H),2.45-2.35(m,4H),2.34(s,3H)。替代地，化合物XXXIV可直接用于该步骤并相似地脱保护，提供5-氯吡嗪取代的类似物。
生物实施例
实施例8：高通量Syk生物化学测试
Syk活性利用KinEASE(Cisbio)，时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)免疫分析进行测试。在该测试中，Syk催化XL665-标记的肽底物的磷酸化。铕缀合的磷酸化酪氨酸特异性抗体结合所得到的磷酸化的肽。磷酸化肽的形成通过TR-FRET，利用铕作为供体，XL665作为受体，于2-步终点测试进行定量。简言之，利用Echo 550Acoustic Liquid Dispenser将连续稀释于DMSO中的测试化合物递送至Corning白色、小体积、非-结合384孔板。利用Multi-Flo(Bio-Tek Instruments)将Syk酶和底物分配于测试板。该标准的5μL反应混合物含有在反应缓冲液(50mM Hepes,pH 7.0,0.02％NaN3,0.1％BSA,0.1mM原钒酸盐,5mM MgCl2,1mM DTT,0.025％NP-40)中的20μM ATP、1μM生物素标记肽、0.015nM的Syk。在室温培养30分钟后，添加5μL终止液和检测溶液(1:200铕穴状化合物标记的抗-磷酸化的肽抗体溶液和125nM链亲和素-XL665Tracer，于50mM Hepes pH 7.0检测缓冲液(含足够的EDTA))。然后将板在室温再培养120分钟，利用Envision2103Multilabeled Reader(PerkinElmer)，分别在340nm/615nm/665nm的激发/发射/FRET发射读数。在615nm和665nm发射波长的荧光强度表示为比例(665nm/615nm)。抑制百分比如下计算：％抑制＝100x(比例样品–比例0％抑制)/(比例100％抑制–比例0％抑制)，其中0.1％DMSO(0％抑制)为阴性对照，1uMK252a(100％抑制)用作阳性对照。实施例1-7化合物的活性在下表中提供，证实所述化合物为IC50低于50nM的Syk抑制剂。
实施例9：384孔HTBS全血CD63嗜碱性粒细胞测试
Syk活性与在人全血嗜碱性粒细胞细胞测试(25％血)中通过CD63的表达测得的嗜碱性粒细胞的活化降低相关地评价。嗜碱性粒细胞活化在人全血中测得，使用Flow CAST试剂盒(Buhlmann Laboratories AG,Baselstrasse,Switzerland)，遵循由制造商提供的规程并进行微小改动。将在肝素中的新鲜人全血收集并在同一天递送(AllCells,Emeryville,CA)。将全血样品用DMSO(最终1％)或者在DMSO中的连续稀释的化合物在37℃孵育60分钟。将嗜碱性粒细胞使用抗-FceRI mAb活化并用抗-CD63-FITC和抗-CCR3-PE在37℃染色20分钟(每孔：将50μL全血与113μL刺激缓冲液、8.5μL抗-FceRI mAb、8.5μL Ab染色剂CCR3-PE/CD63-FITC混合)。将细胞以1000x g离心18分钟并除去150μL/孔的上清液。红细胞裂解，并将细胞通过2轮细胞裂解固定：将细胞团粒用150μL/孔的1X溶胞缓冲剂重新悬浮，在室温孵育10分钟，并通过以1200rpm离心5分钟收集细胞团粒。将细胞用150μL/孔的洗涤缓冲剂洗涤两次，并重新悬浮在最终体积为75μL/孔的洗涤缓冲剂中，用于立即流式细胞检测分析，或者在4℃孵育过夜然后进行流式细胞检测分析。脱粒化(嗜碱性粒细胞活化)通过在CCR3阳性细胞上的CD63表面表达检测。将在门控的(gated)嗜碱性粒细胞种群中的CD63阳性细胞百分比测定并归一化至DMSO(阴性对照)和对照化合物(阳性对照)。实施例1-7化合物的活性在下表中提供，证实所述化合物在降低嗜碱性粒细胞的活化中有效，EC50低于200nM。
实施例10：动力学溶解度
评价了化合物在pH 7.4的磷酸盐缓冲剂中的动力学溶解度。将待测试的化合物以10mM浓度溶解在二甲基亚砜中。将3μl储存样品用297μl pH 7.4的磷酸盐缓冲剂(杜伯科磷酸盐缓冲盐水(Sigma-Aldrich D8662)，总体摩尔浓度为0.149M和pH 7.43)稀释。然后将样品在摇晃下在37℃孵育24小时，离心并取等分试样相对于0.1mM的已知标准浓度测试。实施例1-7化合物的动力学溶解度在下表中提供，证实所述化合物在pH 7.4的动力学溶解度大于90μM。
实施例11：人肝细胞稳定性测试
评价了化合物的作为预计的肝细胞清除率的人血细胞稳定性(以L/hr/kg计)。将待测试的化合物稀释至200μM(4μl的10mM DMSO储液稀释至196μl ACN:H2O(50:50)中)。普萘洛尔用作阳性对照，以及仅不含肝细胞的缓冲剂用作0％对照。将4μl的这些物质用891μlKHB缓冲剂(InVitroGRO目录编号Z99074)进一步稀释，以提供2X投配溶液。在24孔板的每孔中，将250μl 2X投配溶液添加至每孔，每孔具有250μl肝细胞(每孔1x 106个活细胞/ml)或者用于对照样品的KHB，在孵育期间实现1μM的最终化合物浓度。最终溶剂浓度为0.01％DMSO和0.25％ACN。将培养板置于振荡器上并在37℃,5％CO2孵育。在0、1、3和6小时收集样品。母体化合物的损失使用LC-MS方法针对标准曲线测定。实施例1-7化合物的活性在下表中提供，显示约0.12L/hr/kg或者更少的肝细胞清除率。
实施例12：与已知Syk抑制剂的比较
使用实施例8-11的测试比较本申请所述化合物与本领域已知化合物。实施例1-7化合物与前述化合物进行比较的数据在下表中提供。从这些结果明显看出，本申请所述化合物作为Syk抑制剂是理想的，相对于已知化合物具有改善的Syk和CD63活性，改善的动力学溶解度(溶解度比已知化合物高至少约9倍)和肝细胞清除率(清除率最多为已知化合物的约1/2)。同样，改善的Syk和CD63抑制活性与改善的动力学溶解度和清除率的组合提供了预期以改善的药代动力学性质有效地治疗本申请所述疾病的化合物。
包括以下实施例用以说明本发明的实施方案，但并不旨在限制本发明的范围。本领域技术人员应理解，本发明所公开的技术代表用于实施本发明的技术。本领域技术人员将理解，依据本发明，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可对本发明实施例进行变化。
实施例13
在恶性DLBCL B细胞系DHL-10中，式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺和长春新碱的组合效果与式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺和长春碱的组合效果的比较
该实施例评价了在恶性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞系DHL-10中，式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺或其药学上可接受的盐与长春新碱的组合抑制恶性B细胞活力的效力。该实施例还评价并比较了在恶性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞系DHL-10中，式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺或其药学上可接受的盐与长春碱组合抑制恶性B细胞活力的效力。
细胞滴度Glo活力测定：将长春新碱和长春碱单独或与100nM的式(I)化合物组合进行测定。将DLBCL细胞系DHL-10以每孔10,000个细胞铺板，重复两次，并在补充有10％FBS和100U/L青霉素-链霉素的RPMI中，在37℃，5％CO2下孵育72小时。按照厂商说明书的操作，使用细胞滴度Glo(CTG)(Promega,Madison,WI)对细胞活力进行评估。记录单一化合物处理和组合处理的CTG信号。结果示于图1中。
图1示出并总结了在DLBCL细胞系DHL-10中，当共同给药化合物时，图1的化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺分别与两种长春花生物碱(长春新碱(图1A)和长春碱(图1B))之一的组合的抑制作用(图1)。
实施例14
式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺和长春新碱的组合在表达Syk的实体瘤细胞系中的效果与式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺和长春新碱的组合在不表达Syk的实体瘤细胞系中的效果的比较
该实施例评价了式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺或其药学上可接受的盐与长春新碱的组合在表达Syk的恶性结肠细胞系MiaPaca中抑制细胞活力的效力。该实施例还评价了式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺和长春新碱的组合在不表达Syk的细胞系HepG2中抑制细胞活力的效力。
细胞滴度Glo活力测定：将长春新碱单独或与4个浓度的式(I)化合物(300、100、33和11nM)组合在恶性结肠细胞系MiaPaca和在HepG2细胞中进行测定。将细胞以每孔5,000个细胞铺板，重复两次，并在补充有10％FBS和100U/L青霉素-链霉素的RPMI中，在37℃，5％CO2下孵育72小时。按照厂商说明书的操作，使用细胞滴度Glo(CTG)(Promega,Madison,WI)对细胞活力进行评估。记录单一化合物处理和组合处理的CTG信号。结果示于图2中。
图2总结了式I化合物6-(6-氨基吡嗪-2-基)-N-(4-(4-(氧杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-胺(化合物A)和长春新碱的组合在表达Syk的恶性结肠细胞系MiaPaca(图2A)和在不表达Syk的恶性结肠细胞系HepG2(图2B)中对细胞活力的抑制作用。
Syk蛋白质测定：细胞系在补充有10％FBS和100U/L青霉素-链霉素的RPMI中以对数生长过夜。通过在室温在300x g下离心8分钟，在50mL管中收集1x 107个细胞。将细胞团粒在200uL的含有蛋白酶(Roche,Palo Alto CA)和磷酸酶抑制剂(Sigma,Saint Louis MO；Santa Cruz Technologies,Dallas TX)的1XRIPA缓冲液(Cell Signaling Technology,Danvers MA)中在冰上裂解15分钟。将细胞裂解液转移到96孔V底板中，并直接使用或在-80℃冰冻在第二天使用。使用4-12％SDS-Bis/Tris凝胶分离蛋白质，并印迹到硝酸纤维素上。将印迹在Rockland Odyssey阻断液中阻断，并用总Syk抗体、4D10(Santa Cruz)和pSyk-Y525/6(Cell Signaling Technologies)孵育。将一抗以1：1000稀释，并在室温孵育1小时。将印迹用含有1.0％Tween(TBS-T)的Tris-缓冲生理盐水洗涤5分钟3次。然后将印迹在室温用山羊α小鼠IgG(H+L)、AlexaFluor 680(Life Sciences,Inc)和山羊α兔IgG(H+L)、DyLight800(Thermo Scientific)(每个在阻断液中以1：20,000稀释)孵育1小时。然后将印迹在TBS-T中洗涤5分钟3次，并在奥德赛(Odyssey)凝胶成像仪(LI-COR)上进行分析。
图3示出了在MiaPaca和HepG2恶性结肠细胞系(图3)中的Syk表达水平。
实施例15
一些恶性实体瘤细胞系中的Syk表达的测定
Syk蛋白质测定：使细胞系以对数生长过夜，并通过在室温在300x g下离心8分钟，在50mL管中收集1x 107个细胞。将细胞团粒在200uL的含有蛋白酶(Roche,Palo Alto CA)和磷酸酶抑制剂(Sigma,Saint Louis MO；Santa Cruz Technologies,Dallas TX)的1XRIPA缓冲液(Cell Signaling Technology,Danvers MA)中在冰上裂解15分钟。将细胞裂解液转移到96孔V底板中，并直接使用或在-80℃冰冻在第二天使用。使用4-12％SDS-Bis/Tris凝胶分离蛋白质，并印迹到硝酸纤维素上。将印迹在Rockland Odyssey阻断液中阻断，并用总Syk抗体、4D10(Santa Cruz)孵育。将一抗以1：1000稀释，并在室温孵育1小时。将印迹用含有1.0％Tween(TBS-T)的Tris-缓冲生理盐水洗涤5分钟3次。然后将印迹在室温用山羊α小鼠IgG(H+L)、AlexaFluor 680(Life Sciences,Inc)(每个在阻断液中以1：20,000稀释)孵育1小时。然后将印迹在TBS-T中洗涤5分钟3次，并在奥德赛凝胶成像仪(LI-COR)上进行分析。参见图4。
在整个说明书中，引用了各种专利、专利申请和其他类型的出版物(例如，期刊文章)。出于所有目的，将本发明所引用的全部专利、专利申请和出版物的公开内容引入本发明作为参考。

Claims (28)

1.在有此需要的受试者中治疗人中的疾病或者病症的方法，所述疾病或者病症选自炎性疾病、变态反应性疾病、自身免疫性疾病和癌症，所述方法包括向有此需要的人给药治疗有效量的长春花生物碱或其药学上可接受的盐和治疗有效量的具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1选自其中＊表示式I的所示苯环中R1所连接的碳原子；
R2为H或2-羟基乙氧基；
R3为H或甲基；和
R4为H或甲基。
2.权利要求1的方法，其中所述疾病或者病症为选自血液恶性肿瘤和实体瘤的癌症。
3.权利要求2的方法，其中所述疾病或者病症为选自淋巴瘤、多发性骨髓瘤或者白血病的血液恶性肿瘤。
4.权利要求2的方法，其中所述疾病或者病症选自小淋巴细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、惰性非霍奇金淋巴瘤、顽固性非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、脾边缘区B细胞淋巴瘤(+/-绒毛淋巴细胞)、结节边缘区淋巴瘤(+/-单核细胞样B细胞)、粘膜相关淋巴样组织型的结节外边缘区B细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、结节外T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、B细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、纵隔大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、急性淋巴细胞性白血病、急性T细胞型淋巴母细胞性白血病、急性B细胞型淋巴细胞性白血病、B细胞幼淋巴细胞性白血病、急性髓细胞样白血病、慢性淋巴细胞性白血病、幼年粒单核细胞性白血病、微小残留病灶、毛细胞性白血病、原发性骨髓纤维化、继发性骨髓纤维化、慢性髓细胞样白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性疾病和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。
5.权利要求2的方法，其中所述疾病或者病症为实体瘤，其中所述实体瘤为选自以下的癌症：胰腺癌、泌尿器癌、膀胱癌、结肠直肠癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肝细胞癌、甲状腺癌、胆囊癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌、小细胞肺癌)、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、子宫内膜癌、食管癌、头颈癌、黑色素瘤、神经内分泌癌、CNS癌症、脑瘤(例如，神经胶质瘤、间变性少突神经胶质瘤、成人多形性胶质母细胞瘤和成人间变性星形细胞瘤)、骨癌、软组织肉瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、腹膜渗漏、恶性胸腔积液、间皮瘤、维尔姆斯瘤、滋养层肿瘤、血管外皮细胞瘤、卡波西肉瘤、粘液癌、圆细胞癌、鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌、口腔癌、肾上腺皮质癌和产生ACTH的肿瘤。
6.权利要求2的方法，其中所述疾病或者病症选自：系统性红斑狼疮、重症肌无力、古德帕斯彻综合征、肾小球肾炎、出血、肺出血、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、单关节炎、骨关节炎、痛风性关节炎、脊椎炎、贝赫切特病、自身免疫性甲状腺炎、雷诺综合征、急性播散性脑脊髓炎、慢性特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、自身免疫性溶血性贫血、组织移植排斥、移植器官的超急性排斥、同种异体移植排斥、移植物抗宿主病、涉及白细胞渗出的疾病、由于白细胞恶液质和转移导致的疾病、粒细胞输注相关综合征、细胞因子诱导的毒性、硬皮病、脉管炎、哮喘、牛皮癣、慢性炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、坏死性小肠结肠炎、肠易激综合征、皮肌炎、艾迪生病、帕金森病、阿尔茨海默病、糖尿病、I型糖尿病、脓毒症、感染性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒症、革兰氏阳性脓毒症、中毒性休克综合征、继发于败血病的多器官损伤综合征、创伤、低血容量性休克、变应性结膜炎、春季结膜炎、甲状腺相关性眼病、嗜酸性肉芽肿、湿疹、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征、变应性鼻炎、鼻炎、花粉症、支气管哮喘、硅肺病、肺结节病、胸膜炎、肺泡炎、肺气肿、肺炎、细菌性肺炎、支气管扩张症、肺型氧中毒、心肌或脑或四肢的再灌注损伤、热伤、囊性纤维化、瘢痕疙瘩形成或者瘢痕组织形成、由于感染导致的发热和肌痛、由于微创导致的脑或者脊髓损伤、涉及白细胞渗出的疾病、急性超敏反应、迟发型超敏反应、荨麻疹、食物过敏、皮肤晒伤、盆腔炎性疾病、尿道炎、葡萄膜炎、鼻窦炎、肺炎、脑炎、脑膜炎、心肌炎、肾炎、骨髓炎、肌炎、肝炎、酒精性肝炎、胃炎、肠炎、接触性皮炎、特应性皮炎、牙龈炎、阑尾炎、胰腺炎、胆囊炎、真性红细胞增多症、特发性血小板增多症和多囊性肾病。
7.权利要求2的方法，其中所述疾病或者病症选自系统性红斑狼疮、重症肌无力、类风湿性关节炎、急性播散性脑脊髓炎、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、银屑病、自身免疫性溶血性贫血、哮喘、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠易激疾病、慢性阻塞性肺病、系统性红斑狼疮、重症肌无力、类风湿性关节炎、急性播散性脑脊髓炎、特发性血小板减少性紫癜、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、银屑病、自身免疫性溶血性贫血、哮喘、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、肠易激疾病和慢性阻塞性肺病。
8.权利要求2的方法，其中所述疾病或者病症选自哮喘、类风湿性关节炎、多发性硬化、慢性阻塞性肺病和系统性红斑狼疮。
9.治疗有此需要的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者给药治疗有效量的权利要求1的式I化合物或药学上可接受的盐和治疗有效量的长春花生物碱或药学上可接受的盐。
10.根据权利要求2的方法，其中式I化合物为
且所述长春花生物碱选自长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、desoxyvincaminol、vincaminol、长春布宁、长春蔓晶和长春内日定。
11.根据权利要求10的方法，其中所述长春花生物碱选自长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨。
12.根据权利要求11的方法，其中所述长春花生物碱为长春新碱。
13.根据权利要求11的方法，其中所述长春花生物碱为长春碱。
14.根据权利要求11的方法，其中在给药所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐之前给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
15.根据权利要求11的方法，其中在给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐之前给药长春花生物碱或其药学上可接受的盐。
16.根据权利要求11的方法，其中同时给药式(I)化合物或其药学上可接受的盐和所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐。
17.根据权利要求11的方法，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐以50mg至300mg的剂量给药，且所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐以0.1mg-M2至1.5mg-M2的剂量给药。
18.根据权利要求11的方法，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐以100mg至250mg的剂量给药，且所述长春花生物碱或其药学上可接受的盐以0.25mg-M2至1.0mg-M2的剂量给药，其中所述长春花生物碱选自长春新碱和长春碱。
19.根据权利要求11的方法，所述患有癌症的人(i)对至少一种化学疗法有顽固性，或(ii)在用化学疗法治疗后复发，或其组合。
20.根据权利要求11的方法，其中所述癌症为血液恶性肿瘤。
21.根据权利要求20的方法，其中所述癌症为白血病。
22.根据权利要求20的方法，其中所述白血病为慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。
23.根据权利要求20的方法，其中所述癌症为淋巴瘤。
24.根据权利要求23的方法，其中所述淋巴瘤为非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
25.根据权利要求20的方法，其中所述NHL为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。
26.根据权利要求20的方法，其中所述癌症选自急性淋巴细胞性白血病(ALL)、急性髓细胞样白血病(AML)、伯基特淋巴瘤(BL)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、骨髓增生异常综合征(MDS)、骨髓增殖性疾病(MPD)、慢性髓细胞样白血病(CML)、多发性骨髓瘤(MM)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、惰性非霍奇金淋巴瘤(iNHL)、顽固性非霍奇金淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡淋巴瘤(FL)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)、T细胞淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)和边缘区淋巴瘤(MZL)。
27.根据权利要求20的方法，其中所述癌症是实体瘤并表达脾酪氨酸激酶(Syk)活性。
28.根据权利要求27的方法，其中所述实体瘤癌症选自：胰腺癌、肺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、腺癌、食管癌和肝细胞癌。
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