CN106535931A - 卵蛋白制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本技术一般涉及包含卵清蛋白的制剂、制备卵蛋白制剂的方法和卵蛋白制剂的用途。特别地，多个实施方案涉及用于在受蛋过敏影响的受试者的免疫治疗中口服施用的卵蛋白制剂。本文还提供了用于鉴定和制备卵蛋白制剂的方法。

Description

卵蛋白制剂及其制备方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2014年8月25日提交的美国临时申请号62/041,362的优先权，其公开内容通过引用整体并入本文。

技术领域

本技术一般涉及包含卵蛋白(egg protein)的制剂，制备卵蛋白制剂的方法和干卵蛋白制剂的用途。特别地，多个实施方案涉及用于在受过敏影响的受试者的免疫治疗中口服施用的卵蛋白制剂。

背景

食物过敏或身体对来自食物中蛋白质的过敏性表位的免疫反应可严重影响成人和儿童的生活质量。蛋、牛奶和花生是受影响个体中过敏反应的最大来源，并且可占所有食物过敏病例的大约80％。过敏反应的严重程度可以在个体之间变化，并且可以在轻度刺激至过敏反应之间，其可以是如此严重以致威胁生命，并且蛋过敏在2.5岁时具有大约2.6％的患病率。目前治疗蛋过敏的方法是使儿童处于无蛋饮食下，直到不再过敏(约30％的儿童)，或使人无限期地保持无蛋饮食。然而，因为蛋在加工的食品和疫苗中很普遍，所以顺应性可能是困难的，并且对于蛋过敏个体及其护理者产生持续的挑战。

当受试者的免疫系统应答外来物质(例如，过敏原)时，导致过敏反应。通常，当受试者第一次暴露于特定的过敏原时，没有过敏反应。然而，这是对过敏原的初始反应，其为随后的过敏反应激发系统。特别地，过敏原被抗原呈递细胞(APC，例如巨噬细胞和树突细胞)摄取，所述细胞降解过敏原，然后将过敏原片段展示给T细胞。T细胞，特别是CD4+“辅助”T细胞通过分泌对其他免疫系统细胞具有作用的一些细胞因子来应答。由应答性CD4+T细胞分泌的细胞因子谱决定随后暴露于过敏原时是否会诱导过敏反应。两类CD4+T细胞(Th1和Th2；T淋巴细胞辅助型)影响针对过敏原的免疫应答的类型。

Th1型免疫应答涉及刺激对过敏原和感染剂的细胞免疫，并且其特征在于通过CD4+T辅助细胞分泌IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ和TNF-β以及产生IgG抗体。CD4+T细胞暴露于过敏原也可以激活细胞以发育成分泌IL-4、IL-5、IL-10和IL-13的Th2细胞。IL-4的产生刺激B细胞的成熟，后者产生对过敏原特异的IgE抗体。这些过敏原特异性IgE抗体附着于肥大细胞和嗜碱性粒细胞受体，在此处其引起对下一次暴露于过敏原的快速免疫应答。当受试者第二次遇到过敏原时，过敏原快速地被这些表面相关的IgE分子结合，导致组胺和引起过敏反应的其他物质的释放。已知具有高水平IgE抗体的受试者特别易于过敏。

概述

本文提供了用于治疗蛋过敏的卵蛋白制剂。本文还提供了用于鉴定和制备卵蛋白制剂的方法。

本文提供的卵蛋白制剂可以包含(a)卵清蛋白(egg white protein)，(b)稀释剂、润滑剂或填充剂中的一种或多种，和(c)胶囊壳或小袋。任选地，制剂可以包含一种或多种助流剂。

在一些实施方案中，卵蛋白制剂具有表征的卵类粘蛋白、卵白蛋白(ovalbuminprotein)和溶菌酶蛋白水平。

在另一些实施方案中，卵蛋白制剂在3、6、9、11、12、18、24或36个月的时期内是稳定的。在另一些实施方案中，与纯蛋白粉(egg white powder)相比，卵蛋白制剂具有改进的保质期和流动性。

在一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约0.1％至50％(w/w)的卵清蛋白；约40％至90％(w/w)的一种或多种稀释剂；约1％至30％(w/w)的一种或多种填充剂；约0.01％至10％(w/w)的一种或多种润滑剂；和胶囊壳或小袋。

在一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约0.1％至21％(w/w)的卵蛋白。

在一些实施方案中，卵蛋白制剂包含每个胶囊或小袋约0.2mg至约1000mg卵清蛋白；在另一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约0.2mg卵清蛋白；在另一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约1.0mg卵清蛋白；在另一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约10.0mg卵清蛋白；在另一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约20.0mg卵清蛋白；在另一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约100.0mg卵清蛋白。在另一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约200.0mg卵清蛋白。在另一些实施方案中，卵蛋白制剂包含约1000.0mg卵清蛋白。

在一些实施方案中，可以通过以下方法鉴定用于治疗受试者中的蛋过敏的卵蛋白制剂：a)通过一种或多种分析方法确定卵清蛋白组合物中卵类粘蛋白、卵白蛋白和/或溶菌酶蛋白的浓度；b)将所述蛋白质的浓度与参考标准品的浓度进行比较；以及c)鉴定用于治疗受试者中的蛋过敏的组合物，其中所述组合物包含至少为参考标准品的卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的浓度；

在另一些实施方案中，用于测定卵清蛋白组合物中卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白浓度的一种分析方法是尺寸排阻色谱法。

在一些实施方案中，可以通过以下步骤制备低剂量卵蛋白制剂：a)将一定量的包含表征的卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的卵清蛋白和稀释剂混合在第一共混物中；b)在第二共混物中加入50-99％的稀释剂；c)在最终共混物中加入稀释剂、填充剂和/或润滑剂；和d)将共混蛋白包封在胶囊或小袋中。

在一些实施方案中，卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的水平稳定3、6、9、11、12、18、24或36个月或更多月。

在一些实施方案中，卵蛋白制剂包含选自由以下组成的组的稀释剂：藻酸及其盐；纤维素衍生物；硅化微晶纤维素；微晶葡萄糖；直链淀粉；硅酸镁铝；多糖酸；膨润土；明胶；聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物；交联聚维酮；聚维酮；淀粉；预胶化淀粉；黄芪胶、糊精、糖；磷酸二钙；天然或合成树胶；聚乙烯吡咯烷酮、落叶松阿拉伯半乳聚糖、聚乙二醇、蜡、藻酸钠、淀粉；交联淀粉；交联聚合物；交联聚乙烯吡咯烷酮；藻酸盐；粘土；树胶；羟乙酸淀粉钠；膨润土；天然海绵；表面活性剂；树脂；柑橘浆；十二烷基硫酸钠；和淀粉组合的十二烷基硫酸钠。

在一些实施方案中，卵蛋白制剂包含选自由以下组成的组的填充剂：乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉、葡萄糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨醇、氯化钠和聚乙二醇。

在一些实施方案中，卵蛋白制剂包含选自由以下组成的组的润滑剂：硬脂酸、氢氧化钙、滑石、玉米淀粉、硬脂酰富马酸钠、碱金属盐和碱土金属盐、硬脂酸、硬脂酸钠、硬脂酸镁、硬脂酸镁、硬脂酸锌、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇、丙二醇、油酸钠、山嵛酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、苯甲酸甘油酯和月桂基硫酸镁或钠。

附图简述

图1是显示根据本技术方面的样品质量变化率(水分吸收率)的动态蒸气吸附(DVS)等温线图。测量蛋白粉的有机和水吸附等温线。

图2是显示根据本技术方面的卵清蛋白中水分吸收率的DVS等温线分析的表格。

图3是显示根据本技术方面的用于分析水分吸收率的卵清蛋白的质量DVS变化的图。

图4是根据本技术方面的暴露于1N HCl过夜的卵清蛋白(约1mg/mL蛋白质)、未处理的卵清蛋白(约1mg/mL储存在4℃的蛋白质)和酸性对照样品的色谱图重叠。

图5是根据本技术方面暴露于1N NaOH过夜的卵清蛋白(约1mg/mL蛋白质)、未处理的卵清蛋白(约1mg/mL储存在4℃的蛋白质)和碱性对照样品的色谱图重叠。

图6是根据本技术方面的暴露于3％过氧化氢过夜的卵清蛋白(约1mg/mL蛋白质)、未处理的卵清蛋白(约1mg/mL储存在4℃的蛋白质)和碱性对照样品的色谱图重叠。

图7是根据本技术方面的暴露于70℃加热过夜的卵清蛋白(约1mg/mL蛋白质)、未处理的卵清蛋白(约1mg/mL储存在4℃的蛋白质)和热对照样品的色谱图重叠。

图8是根据本技术方面的暴露于光过夜的卵清蛋白(约1mg/mL蛋白质)、未处理的卵清蛋白(约1mg/mL储存在4℃的蛋白质)和光对照样品的色谱图重叠。

图9是显示根据本技术方面的卵类粘蛋白标准品的第一抗体浓度对不同稀释度的包被抗原的吸光度的酶联免疫吸附测定(ELISA)图。

图10是显示根据本技术另外方面的卵类粘蛋白样品的第一抗体浓度对不同稀释度的包被抗原的吸光度的ELISA图

图11是显示根据本技术方面的卵白蛋白标准品的第一抗体浓度对不同稀释度的包被抗原的吸光度的ELISA图。

图12是显示根据本技术另外方面的卵白蛋白样品的第一抗体浓度对不同稀释度的包被抗原的吸光度的ELISA图，没有第二抗体。

图13是显示根据本技术的另外方面的卵白蛋白样品的第一抗体浓度对不同稀释度的包被抗原的吸光度的ELISA图

图14是显示根据本技术方面的溶菌酶蛋白标准品的第一抗体浓度对不同稀释度的包被抗原的吸光度的ELISA图。

图15是显示根据本技术方面的溶菌酶蛋白样品的第一抗体浓度对不同稀释度的包被抗原的吸光度的ELISA图。

图16是根据本技术方面使用两个串联的Phenomenex Yarra 2000SEC柱的(从上到下)鸡卵白蛋白(约0.04mg/mL)、胰蛋白酶抑制剂(约0.04mg/mL)、溶菌酶(约0.04mg/mL)和卵清蛋白(约0.01mg/ml)的色谱图重叠。

图17根据本技术方面的用安慰剂上清液制备的卵清蛋白安慰剂(淀粉1500)、卵清蛋白标准品(约0.02mg/mL蛋白)、掺入卵清蛋白的安慰剂(约0.02mg/mL蛋白)和卵清蛋白标准品的色谱图重叠。

图18是根据本技术方面使用尺寸排阻色谱法用PBS溶液稀释的1mg/mL卵清蛋白的色谱图重叠。

图19是根据本技术的方面使用尺寸排阻色谱法用50mM磷酸盐缓冲液溶液稀释的1mg/mL卵清蛋白的色谱图重叠。

图20是根据本技术的方面使用尺寸排阻色谱法用200mM磷酸盐缓冲液溶液稀释的1mg/mL卵清蛋白的色谱图重叠。

图21是显示根据本技术方面的卵蛋白共混物的样品重量(x轴)和氮峰面积(y轴)之间的线性的图。

图22是卵清蛋白标准品(底部)和0.2mg胶囊内容物均匀性样品,批号:14009A-1(顶部)的色谱图重叠。

图23是根据本技术方面的卵清蛋白标准品(底部)和1.0mg共混均匀性样品,批号:14010B-1(顶部)的色谱图重叠。

图24是根据本技术方面的卵清蛋白标准品(底部)和10mg胶囊内容物均匀性样品,批号:14011C-1(顶部)的色谱图重叠。

详述

I.概述

食物过敏在大多数情况下由对食物中的蛋白质的反应引起。在生命的早期，免疫系统仍在发育，并且可能无法产生对膳食抗原的耐受性(这也可以被描述为对口服耐受性的不足诱导)。结果，婴儿或儿童或年轻动物对膳食蛋白质产生过强的免疫应答，并对其产生过敏反应。儿童中最常见的食物过敏是乳、蛋、花生和坚果。目前没有有效的食物过敏治疗。避免刺激性过敏原是唯一被接受的管理食物过敏的策略。然而，严格的避免饮食可能是复杂的，因为标签难以解释以及在商业制备的食品中存在未宣布的或隐藏的过敏原。

对卵蛋白过敏的受试者所经历的症状可以是生理学上不同的以及具有不同的严重性。例如，症状可能涉及皮肤(特应性皮炎、荨麻疹/血管性水肿、皮疹)、胃肠道(生长病症、严重的胃食管反流、慢性腹泻、持续性便秘、吸收不良综合征、复发性呕吐、小肠结肠炎)，或潜在危及生命的过敏反应(声门水肿、直至休克的低血压、严重哮喘、急性皮肤和胃肠道症状)。在大多数情况下，发现肠粘膜的组织病理损伤非常类似于典型的腹腔疾病(各种程度的肠绒毛萎缩)，吸收不良病症的解剖-病理指标。症状的强度和数量随时间变化，不仅在受试者与受试者之间不同，而且在个体患者中也不同。

因为对蛋严重过敏的个体在消耗少量卵蛋白后可能具有危及生命的反应，所以他们的生活质量可能受到其过敏症的严重影响。尽管对于治疗具有需要，但是用于食物过敏的口服免疫治疗的临床开发进展缓慢，并且目前没有FDA批准的口服免疫治疗。在免疫治疗中使用食品/加工食品不是理想的，因为食品中存在的过敏原水平可能不一致；可能随时间和在某些条件下降解；并且在粉末食品的情况下，可以凝结或粘附到胶囊或其他包装上。由于微量食物过敏原可引起严重的过敏反应，因此任何这些原因引起的活性成分的波动可能使口服免疫治疗不可预测。

化学稳定性是药物组合物的设计和制造以及法规审查和批准中的关键方面。这些组合物的分解速率可受许多环境因素影响，包括温度、光、辐射、酶或其他催化剂、溶液的pH和离子强度、溶剂类型和缓冲剂物质。这种降解可能降低功效并缩短有效保质期。

本文提供的卵蛋白制剂可以提供提高的保质期和稳定性，并且可以通过提供一致的蛋过敏原剂量来减轻与蛋过敏症口服免疫治疗相关的风险。通过详细表征卵蛋白制剂中存在的蛋白质水平(和选择满足规定标准的批次)，以及通过改进存在于这种组合物中的蛋过敏原的稳定性，实现了一致的剂量。

近年来已经研究了口服免疫治疗(OIT)和舌下免疫治疗(SLIT)形式的用于食物过敏(包括蛋过敏)的特异性免疫治疗，并且已经在早期临床试验中证明了令人鼓舞的安全性和有效性，包括有益的免疫学变化。在大多数受试者中，OIT已经显示诱导脱敏的证据，随时间的免疫学变化指示向临床耐受前进(Skripak等,J.Allergy Clin Immunol.122(6):1154-1160,2008；Keet等,J.Allergy Clin Immunol.129(2):448-455,2012)。

本技术的各个方面提供了可以配制成药物组合物的包含卵清蛋白的制剂。当根据治疗方案向患者施用时，这些目前公开的制剂可以为对蛋和蛋制品过敏的受试者提供口服免疫治疗(OIT)。在治疗后，根据本技术的方面，施用口服食物激发(OFC)的受试者可以对卵蛋白部分或完全脱敏。

本文提供了根据本技术方面的用于蛋和卵蛋白产品的口服免疫治疗的组合物(即制剂)和方法。

本技术的各个方面提供了卵蛋白蛋白制剂，制备卵蛋白蛋白制剂的方法及其用途。在一些实施方案中，卵蛋白组合物可包含一种或多种助流剂、一种或多种润滑剂和一种或多种稀释剂和/或填充剂。例如，在另一些实施方案中，卵蛋白组合物可包含一种或多种助流剂、一种或多种润滑剂，以及一种或多种稀释剂和一种或多种填充剂。

在下面的详细描述和实施例中描述了本技术的几个实施方案的具体细节。虽然下文关于用于口服免疫治疗和/或用于卵蛋白的口服免疫治疗的临床试验的组合物(即，制剂)描述了许多实施方案，但是除了本文描述的那些以外的其他应用和其他实施方案也在本技术的范围内。另外，本技术的若干其他实施例可具有与本文所描述的那些不同的组分或过程。因此，本领域普通技术人员将因此理解，本技术可以具有具额外组分的其他实施方案，或者该技术可以具有没有以下所示和描述的几个方面的其他实施方案。

本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，通过引用并入本文，其程度如同每个参考文献被单独地和具体地指出通过引用并入本文并在本文中全部阐述。

II.定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本文所述的本技术所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。本文提及的所有专利和出版物通过引用并入本文。

单个数值的使用被表示为近似值，就如同该值前面有词语“约”或“大约”。类似地，除非另有明确说明，否则本申请中指定的各种范围中的数值被表示为近似值，如同在所述范围内的最小值和最大值之前都有词语“约”或“大约”。以这种方式，高于和低于所述范围的变化可用于实现与该范围内的值基本相同的结果。如本文所使用的，当提及数值时，术语“约”和“大约”应当对特定主题最密切相关的领域或所讨论范围或元素相关的领域中的普通技术人员具有其通常的普通含义。从严格的数值边界扩展的量取决于许多因素。例如，可以考虑的一些因素包括元素的临界性和/或给定量的变化对所要求保护的主题的性能的影响，以及本领域技术人员已知的其他考虑。如本文所使用的，对不同数值使用不同数量的有效数字并不意味着限制词语“约”或“大约”的使用如何用于扩展特定数值。因此，作为一般情况，“约”或“大约”扩展数值。此外，范围的公开旨在作为连续范围，包括最小值和最大值之间的每个值加上通过使用术语“约”或“大约”提供的范围的扩展。因此，除非本文另有说明，否则本文中的数值范围仅意图用作单独地指代落入该范围内的每个单独值的速记方法，并且每个单独的值被并入说明书中，如同其在本文中单独地引用一样。

术语“约”与术语“大约”同义使用。如本领域普通技术人员将理解的，“约”的确切边界将取决于组合物的组分。说明性地，术语“约”的使用表示稍微在所述值外的值，即加或减0.1％至10％，其也是有效和安全的。在另一些实施方案中，术语“约”的使用表示稍微在所述值外的值，即加或减0.1％至5％，其也是有效和安全的。在另一些实施方案中，术语“约”的使用表示稍微在所述值外的值，即加或减0.1％至2％，其也是有效且安全的。

应当理解，在本公开的上下文中(尤其是在所附权利要求书的上下文中)，可以由术语“一个”和“一种”和“该”和类似指示物形成或使用的任何范围、比例和比例范围应被解释为覆盖单数和复数，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。本文所述的所有方法可以以任何合适的顺序进行，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾。本文提供的任何和所有实例或示例性语言(如，例如，优选地、优选的)的使用仅旨在进一步示出本公开的内容，而不对本技术或权利要求书的范围构成限制。说明书中的语言不应被解释为指示任何未要求保护的元素对于本技术是必要的。

术语“吸收”通常是指蛋过敏原从胃肠道运动进入血管的过程。

本文所用的术语“动物”是指人以及非人动物，包括例如哺乳动物、鸟、爬行动物、两栖动物和鱼。在一些实施方案中，非人动物是哺乳动物(例如，啮齿类动物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、猫、灵长类动物或猪)。动物可以是转基因动物。

本文所用的术语“抗原”是指在动物中引起抗体应答(即体液应答)的产生和/或与T细胞的抗原特异性反应(即细胞应答)的分子。

本文所用的术语“过敏原”是指除抗体的其他同种型外还引起IgE产生的抗原亚组。术语“过敏原”、“天然过敏原”和“野生型过敏原”可以互换使用。用于本技术目的的过敏原的一些实例是蛋白质过敏原。

如本文所用的短语“过敏反应”是指IgE介导的免疫应答，其临床症状主要涉及皮肤(例如，uticana、血管性水肿(angiodema)、瘙痒)、呼吸道(例如哮喘、咳嗽、喉水肿、鼻漏、流泪/眼睛瘙痒)、胃肠道(例如呕吐、腹痛、腹泻)和心血管(即，如果发生全身反应)系统。

本文所用的短语“过敏性过敏原”是指在自然条件下在其天然状态下遇到时，被认为在过敏个体中产生过敏反应风险的过敏原亚群。例如，如本文所述，花粉过敏原、螨过敏原、动物毛皮或排泄物(例如唾液、尿)中的过敏原和真菌过敏原不被认为是过敏性过敏原。另一方面，食物过敏原、昆虫过敏原和橡胶过敏原(例如来自胶乳)通常被认为是过敏性过敏原。食物过敏原特别是用于本技术的实践的过敏性过敏原。特别地，坚果过敏原(例如来自卵、核桃、杏仁、山核桃、腰果、榛子、开心果、松子、巴西坚果)、乳品过敏原(例如来自卵、乳)、种子过敏原(例如来自芝麻、罂粟、芥子)、大豆、小麦和鱼过敏原(例如来自虾、螃蟹、龙虾、蛤、贻贝、牡蛎、扇贝、小龙虾)是根据本技术的过敏性食物过敏原。特别感兴趣的过敏性过敏原是那些反应通常如此严重以致产生死亡风险的过敏原。

本文所用的短语“过敏性”或“过敏反应”是指过敏反应的子集，其特征在于肥大细胞脱粒继发于由过敏性过敏原诱导的肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的高亲和力IgE受体的交联，随后的介质释放和在靶器官如气道、皮肤、消化道和心血管系统中产生严重的系统性病理反应。如本领域已知的，过敏反应的严重性可以例如通过测定皮肤反应、眼睛和口周围的浮肿、呕吐和/或腹泻，随后呼吸反应如喘息和劳动呼吸来监测。最严重的过敏反应可导致意识丧失和/或死亡。

如本文所使用的短语“抗原呈递细胞”或“APC”是指加工抗原并将其呈递给T细胞以引发抗原特异性应答的细胞，例如巨噬细胞和树突细胞。

当两个实体如本文所述彼此“缔合”时，它们通过直接或间接共价或非共价相互作用连接。优选地，所述缔合是共价的。期望的非共价相互作用包括例如氢键键合、范德华相互作用、疏水相互作用、磁相互作用等。

“生物利用度”是指递送到正在被研究的动物或人的体循环中的所施用蛋过敏原的重量的百分比。当静脉内施用时，药物的总暴露量(AUC(0-∞))通常定义为100％生物利用度(F％)。“口服生物利用度”是指当与静脉内注射相比口服摄取药物组合物时，蛋过敏原被吸收到体循环中的程度。

“血浆浓度”是指受试者血液的血浆成分中蛋过敏原的浓度。应当理解，由于代谢和/或与其他治疗剂的可能相互作用的可变性，蛋过敏原的血浆浓度可能在受试者之间显著变化。根据本技术的一个方面，蛋过敏原的血浆浓度可以随受试者而变化。同样，诸如最大血浆浓度(Cmax)或达到最大血浆浓度的时间(Tmax)或血浆浓度时间曲线下的总面积(AUC(0-∞))的值可以随受试者而变化。由于这种可变性，构成卵“过敏原的”治疗有效量的蛋过敏原的必需量可以随受试者而变化。

“载体材料”包括药学中任何常用的赋形剂，并且应当基于与蛋过敏原的相容性和所需剂型的释放特性来选择。载体材料的具体实例可包括粘合剂、悬浮剂、崩解剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、润滑剂、润湿剂、稀释剂等。

如本文所用的“赋形剂”是可以促进药物递送、吸收或溶解性的物质。赋形剂可包括稀释剂、填充剂、润滑剂和助流剂。

“药学上相容的载体材料”可以包括，但不限于，阿拉伯胶、明胶、胶体二氧化硅、甘油磷酸钙、乳酸钙、麦芽糖糊精、甘油、硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、胆固醇、胆固醇酯、酪蛋白酸钠、大豆卵磷脂、牛磺胆酸、磷脂酰胆碱、氯化钠、磷酸三钙、磷酸二钾、纤维素和纤维素结合物、糖硬脂酰乳酸钠、角叉菜胶、甘油单酯、甘油二酯、预胶凝淀粉等。参见，例如，Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第19版(Easton,Pa.:MackPublishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.和Lachman,L.编辑,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；和PharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery Systems,第7版(Lippincott Williams&Wilkins1999)。

如本文所用，术语“包括”，“包含”，和“例如”以其开放式非限定含义使用。

如本文所使用的短语“减少的过敏反应”涉及在与暴露于过敏性过敏原相关的症状的治疗后临床症状的减少，其可涉及通过皮肤、呼吸道、胃肠道和粘膜(例如眼睛、鼻和耳)表面或皮下注射(例如，通过蜂蜇)的暴露。

“脱敏”或“使脱敏”是指患者消耗小到大量的过敏性食物来源而不表现过敏反应的能力。脱敏与“耐受性”不同之处在于其需要用食物源长期治疗以维持“无过敏”状态。而在“耐受性”状态下，不再需要治疗。

“稀释剂”是通常用于膨化或稀释的惰性试剂，其不具有药理活性。稀释剂可以添加到小块中。用于本文提供的制剂的稀释剂包括但不限于，藻酸及其盐；纤维素衍生物，如羧甲基纤维素、甲基纤维素(例如，)、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素(例如，)、乙基纤维素(例如，)、微晶纤维素(例如，)；硅化微晶纤维素(例如，Prosolv SMCCProsolv HD)；微晶葡萄糖；直链淀粉；硅酸镁铝；多糖酸；膨润土；明胶；聚乙烯吡咯烷酮/醋酸乙烯酯共聚物；交联聚维；聚维酮；淀粉；预胶化淀粉；黄芪胶，糊精，糖，例如蔗糖(例如，)、葡萄糖、右旋糖、糖蜜、山梨醇、木糖醇(例如，)、乳糖(例如乳糖一水合物，无水乳糖等)；磷酸二钙；天然或合成树胶，如阿拉伯胶、黄芪胶、茄替胶、isapol皮的粘液(mucilage of isapol husks)，聚乙烯吡咯烷酮(例如， CL、 CL、 XL-10)，落叶松阿拉伯半乳糖，聚乙二醇，蜡，钠藻酸盐，淀粉，例如天然淀粉，如玉米淀粉或马铃薯淀粉，预糊化淀粉如Colorcon(淀粉1500(Starch 1500))，National 1551或或羟乙酸淀粉钠，如或交联淀粉，如羟乙酸淀粉钠；交联聚合物，如交联聚维酮；交联聚乙烯吡咯烷酮；藻酸盐(alginate)，如藻酸或藻酸的盐，如藻酸钠；粘土，如 HV(硅酸镁铝)；树胶，如琼脂、瓜尔胶、刺槐豆胶、Karaya、果胶或黄芪胶；羟乙酸淀粉钠；膨润土；天然海绵；表面活性剂；树脂，如阳离子交换树脂；柑橘果肉；月桂基硫酸钠；月桂基硫酸钠淀粉组合；及其组合。在一些实施方案中，所述制剂包含微晶纤维素或淀粉1500。在另一些实施方案中，所述制剂包含微晶纤维素和淀粉1500。

如本文所用的术语“表位”是指包含约6至15个氨基酸的氨基酸基序的结合位点，其可以被免疫球蛋白(例如IgE、IgG等)结合或在与主要组织相容性复合物(MHC)缔合而通过APC呈递时被T细胞受体识别。线性表位是其中氨基酸在简单线性序列的情况下被识别的表位。构象表位是其中氨基酸在特定三维结构的情况下被识别的表位。

如本文所用的“填充剂”是指増量剂(bulking agent)。例如，可以放入胶囊的惰性物质。用于本文提供的制剂的填充剂包括但不限于化合物例如乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉末、葡萄糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨醇、氯化钠、聚乙二醇及其组合。

根据本技术的过敏原“片段”是过敏原的任何片段或部分，其小于完整的天然过敏原。在本技术的某些实施方案中，所述过敏原是蛋白质，片段是肽。

“助流剂”是抗结块剂，并通过减少在例如胶囊的药物生产中使用的颗粒间摩擦而增强颗粒混合物的流动。用于本文提供的制剂中的助流剂包括但不限于胶体二氧化硅(Cab-O-Sil)和滑石(例如Ultra Talc4000)。在一些实施方案中，组合物包含滑石。

本文所用的短语“免疫优势表位”是指被敏感群体中的大百分比的抗体结合的表位，或其中相对于对同一抗原中存在的其他表位的抗体反应的百分比或滴度，所述抗体的滴度高。在一些实施方案中，免疫优势表位被敏感群体中超过50％的抗体结合，在另一些实例中，超过60％、70％、80％、90％、95％或99％。

本文所用的短语“免疫刺激序列”或“ISS”涉及细菌、病毒或无脊椎动物来源的寡脱氧核苷酸，其被APC摄取并激活它们以表达某些膜受体(例如B7-1和B7-2)并分泌各种细胞因子(例如IL-1、IL-6、IL-12、TNF)。这些寡脱氧核苷酸包含未甲基化的CpG基序，并且当与抗原一起注射到动物中时，似乎使免疫应答倾向于Th1型应答。参见，例如，Yamamoto等,Microbiol.Immunol.36:983,1992；Krieg等,Nature 374:546,1995；Pisetsky,Immunity5:303,1996；和Zimmerman等,J.Immunol.160:3627,1998。

当应用于多肽时，“分离的”(与“基本上纯的”可互换使用)是指已经与天然存在的其他蛋白质分离的多肽或其部分。通常，多肽还基本上(即，至少约70％至约99％)与用于纯化它的物质如抗体或凝胶基质(聚丙烯酰胺)分离。

如本文所用，“润滑剂”是防止成分凝结在一起以及粘附在药物胶囊或其他容器的壁上的物质。润滑剂允许排空胶囊而不会过多损失活性成分。用于本文提供的制剂中的润滑剂包括但不限于硬脂酸、氢氧化钙、滑石、玉米淀粉、硬脂酰富马酸钠，碱金属盐和碱土金属盐，例如铝、钙、镁、锌，硬脂酸、硬脂酸钠、硬脂酸镁、硬脂酸锌、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸，聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇，例如Carbowax^TM、PEG 4000、PEG 5000、PEG6000，丙二醇、油酸钠、山嵛酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、苯甲酸甘油酯、月桂基硫酸镁或月桂基硫酸钠及其组合。

“可测量的血清浓度”或“可测量的血浆浓度”描述血清或血浆浓度，通常以施用后吸收到血流中的每ml、dl或l血清中的治疗剂的mg、μg或ng测量。如本文所用，可测量的血浆浓度通常以ng/ml或μg/ml测量。

“口服食物激发(Oral food challenge)”是指用于食物过敏的高度准确的诊断测试。在食物激发期间，过敏症专科医生(allergist)以测量剂量向患者给予可疑食物，以不太可能引发症状的非常小的量开始。每次剂量后，观察患者一段时间的任何反应迹象。如果没有症状，患者逐渐接受越来越大的剂量。如果任何反应迹象是明显的，则停止食物激发，并且将患者表征为未能食物激发，并且在通过触发过敏反应的食物量确定的敏感性水平对食物过敏。

“口服免疫治疗”是指对患有过敏的患者的口服治疗，涉及对患者施用递增剂量的过敏原，以使患者对过敏原脱敏或提供耐受性。

“药效学”是指决定相对于作用部位的药物浓度观察到的生物反应的因素。

“药代动力学”是指决定在作用部位达到和维持适当药物浓度的因素。

“增塑剂”是可用于软化微胶囊材料或膜包衣以使其较不易碎的化合物。合适的增塑剂包括例如，聚乙二醇如PEG 300、PEG 400、PEG 600、PEG 1450、PEG 3350和PEG 800，硬脂酸、丙二醇、油酸、三乙基纤维素和三醋精。在一些实施方案中，增塑剂也可以用作分散剂或润湿剂。

“增溶剂”包括化合物如三醋精、柠檬酸三乙酯、油酸乙酯、辛酸乙酯、月桂基硫酸钠、多库酯钠(sodium doccusate)、维生素E TPGS、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮、N-羟乙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、羟丙基环糊精、乙醇、正丁醇、异丙醇、胆固醇、胆汁盐、聚乙二醇200-600、糖原质、卡必醇(transcutol)、丙二醇、二甲基异山梨醇及其组合。

如果本文提供的卵蛋白制剂中的总卵蛋白、卵类粘蛋白、卵白蛋白和/或溶菌酶蛋白的浓度为刚刚生产的卵蛋白制剂中这些蛋白质的初始浓度±10％，则认为其是“稳定的”。

本文所述的组合物可以配制用于通过任何常规方法向受试者施用，包括但不限于口服施用途径。如本文所用，术语“受试者”用于表示动物，例如哺乳动物，包括人或非人。制剂用于预防和治疗与儿童和成人中与有限量的蛋过敏原暴露相关的症状。在一些实施方案中，受试者为约1至约35岁，包括4至约26岁。

“治疗有效量”或“有效量”是实现药理作用所需的蛋过敏原的量。术语“治疗有效量”包括例如预防有效量。蛋过敏原的“有效量”是有效实现所需药理学作用或治疗改进而没有过多不良副作用的量。蛋过敏原的有效量将由本领域技术人员根据具体受试者和疾病水平选择。应当理解，由于受试者的代谢、年龄、体重、一般状况，所治疗的病症、所治疗病症的严重程度以及处方医师的判断，“有效量量”或“治疗有效量”可以根据受试者而变化。

对过敏原的“耐受性”是指免疫治疗的相对长期的影响，推测是由于对T细胞反应性的影响，其甚至在治疗中断后仍然持续(尽管耐受性可能不总是永久的)。

在过敏症相关疾病的情况下使用的“治疗”是指与过敏症相关的病症或疾病的任何治疗，例如预防可能易患病症或疾病，但是尚未被诊断患有病症或疾病的受试者中病症或疾病的发生；抑制病症或疾病，例如阻止病症或疾病的发展，缓解病症或疾病，引起病症或疾病消退，减轻由疾病或病症引起的病症，或停止疾病或病症的症状。

III.组合物/制剂

本文提供了用于口服免疫治疗的卵制剂和/或卵蛋白制剂。在一些实施方案中，制剂包含与一种或多种赋形剂混合的卵蛋白粉，或可选地，一种或多种从蛋粉分离的蛋白质。例如，除了从蛋粉分离的卵蛋白之外，制剂可以包含稀释剂、填充剂、助流剂、润滑剂、着色剂和胶囊壳组分中的一种或多种。

在一些实施方案中，卵清蛋白包含卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白。在另一些实施方案中，卵清蛋白含有作为活性成分的卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白。

在一些实施方案中，卵蛋白质制剂包含一种或多种稀释剂。在一些实施方案中，卵蛋白质制剂包含一种或多种助流剂。在一些实施方案中，卵蛋白质制剂包含一种或多种润滑剂。在一些实施方案中，卵蛋白质制剂包含一种或多种填充剂。

在一些实施方案中，最终卵蛋白制剂包含用稀释剂、填充剂和润滑剂以渐变剂量配制的卵清蛋白(含有表征的蛋过敏原蛋白质卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶)，其总卵清蛋白剂量为0.2mg、1mg、10mg、20mg、100mg、200mg和1000mg的每种卵清蛋白。可以在临施用前打开每个胶囊或容器制剂(例如小袋)并将内容物混入掩味食品中。

在另一些实施方案中，最终制剂包含用稀释剂和润滑剂以渐变剂量配制的卵清蛋白(含有表征的蛋过敏原蛋白质卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶)，其总卵清蛋白剂量为0.2mg、1.0mg、10mg、20mg、100mg、200mg、300mg、500mg或1000mg的每种卵清蛋白。可以在临施用前打开每个胶囊或容器制剂(例如小袋)并将内容物混入掩味食品中。

在一些实施方案中，包封包含卵蛋白的制剂(例如，0.2mg、1.0mg、10mg、20mg和100mg剂量)。在另一些实施方案中，包含卵蛋白的制剂是小包装包装的(例如100mg、200mg、300mg、500mg和1000mg剂量)。

该产品旨在递送增加浓度的干蛋粉，产生0.2mg、1.0mg、10.0mg、20mg、100.0mg、200.0mg、500.0mg和1000.0mg剂量的卵蛋白。可以包封0.2mg至100.0mg的剂量。可以用小袋(袋)包装300mg、500.0mg和1000mg剂量。在一些实施方案中，小袋可以是衬有例如药学上可接受和/或相容的衬垫(例如箔)的多层袋。在常规实践中，并且在一些实施方案中，在用所需量的药物组合物填充材料后，小袋被机械成型。期望在每个剂量强度下，胶囊和小袋内容物尽可能干净和完全地从胶囊壳或小袋包装膜中排空，因为在一些实施方案中，意图是将胶囊或小袋包装内容物作为粉末添加到食物中供患者消耗。将为每个剂量强度开发安慰剂。每种安慰剂用胶囊或小袋包装以匹配其相应的活性剂量。

在另一些实施方案中，通过尺寸排阻色谱法测量的卵蛋白的降解可用于测定稳定性。在另一个实施方案中，在三个月的储存(例如，在5℃/60％相对湿度下储存，在25℃/60％相对湿度下储存，在40℃/75％相对湿度下储存)下，水分含量、外观和气味没有显著变化的卵蛋白制剂可以确定为稳定的。在一些实施方案中，卵蛋白的水平稳定3、6、9、11、12、18、24或36或更多个月。在另一个实施方案中，卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的水平稳定3、6、9、11、12、18、24或36或更多个月。

卵清蛋白的各种来源可商购获得。例如，蛋清蛋白可以是来自Deb El FoodProducts，Elizabeth New Jersey的Deb El卵清蛋白或来自Michael Foods,Minnetonka,MN的EWP。卵清蛋白可以在cGMP条件下进一步处理。在另一些实施方案中，卵清蛋白(约85％卵蛋白w/w)包含颗粒，其中颗粒可以具有在约10μm至约250μm，包括75μm和150μm的直径。

在cGMP制造条件下，卵清蛋白与稀释剂、填充剂、助流剂和/或润滑剂一起配制，随后以0.2、1、10、20、100、200、300、500或1000mg卵蛋白包封在尺寸3或00的羟丙基甲基纤维素(HPMC)胶囊或小袋包装(对于较高剂量)中。在某些实施方案中，卵蛋白的浓度可为约0.05％至约50w/w％，或其中的任何整数。在另一些实施方案中，本文所述的组合物包含浓度为约0.1％至约25w/w％的一种或多种卵蛋白。在另一些实施方案中，本文所述的组合物包含浓度为约0.2％、约1％、约2％、约4％或约50w/w％的一种或多种卵蛋白。在另一些实施方案中，在较高剂量下，小袋包含浓度为约40％至约100％的一种或多种卵清蛋白，包括但不限于50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％。在另一些实施方案中，本文所述的组合物包含浓度为制剂的约0.1％、约0.67％、约2.1％、约4％或约21w/w％的一种或多种卵蛋白。

在一些实施方案中，本文所述的组合物包含一种或多种卵蛋白，其目标单位重量为约0.2mg/胶囊至约1000mg/小袋，或其中的任何整数。在另一些实施方案中，本文所述的组合物包含一种或多种卵蛋白，其目标单位重量为约0.2mg/胶囊至约1mg/胶囊、约10mg/胶囊、约100mg/胶囊或小袋，约300mg/胶囊或小袋，或约1000mg/小袋或袋。

用于本文所述方法的组合物包含但不限于约0.2mg、约1.0mg、约10mg、约20mg、约100mg、约200mg、约300mg、约500mg和/或约1000mg剂量的总卵蛋白。

在一些实施方案中，包含卵清蛋白的最终制剂的剂量为0.2mg，卵类粘蛋白的浓度包括约0.032至约0.048mg。在另一些实施方案中，组合物的剂量为1.0mg，卵类粘蛋白的浓度包括约0.16至约0.24mg；在另一些实施方案中，组合物的剂量为10.0mg，卵类粘蛋白的浓度为约1.6至约2.4mg；或在另一些实施方案中，组合物的剂量为100.0mg，卵类粘蛋白的浓度为约16至约24mg。在一些实施方案中，组合物的剂量为0.2mg，卵白蛋白的浓度为约0.092至约0.108mg；在另一些实施方案中，组合物的剂量为1.0mg，卵白蛋白的浓度为约0.46至约0.54mg；在另一些实施方案中，组合物的剂量为10.0mg，卵白蛋白的浓度为约4.6至约5.4mg；或在另一些实施方案中，组合物的剂量为100.0mg，卵白蛋白的浓度为约46至约54mg。在一些实施方案中，组合物的剂量为0.2mg，溶菌酶的浓度包括约0.002至约0.018mg；在另一些实施方案中，组合物的剂量为1.0mg，溶菌酶的浓度包括约0.01至约0.09mg；在另一些实施方案中，组合物的剂量为10.0mg，溶菌酶的浓度包括约0.1至约0.9mg；或在另一些实施方案中，组合物的剂量为100.0mg，溶菌酶的浓度为约1.0至约9.0mg。

在一些实施方案中，本文提供的组合物包含在胶囊内，包括但不限于白色不透明HPMC胶囊壳(例如，Capsugel)，并且在一些情况下还可以包含着色剂(例如颜料混合物和/或彩色)。在另一些实施方案中，胶囊可以是透明或不透明的HPMC胶囊壳或蓝色不透明胶囊壳。

在一些实施方案中，本文所述的组合物包含卵蛋白，其目标单位重量为约0.2mg/胶囊至约1000mg/小袋，或其中任何整数。在另一些实施方案中，本文所述的组合物包含卵蛋白，其目标单位重量为约0.2mg/胶囊至约1mg/胶囊，约10mg/胶囊，约20mg/胶囊，约100mg/胶囊或小袋的卵蛋白，约200mg/小袋，约300mg/小袋，约500mg/小袋或约1000mg/小袋。

稀释剂和/或填充剂提供了配制低剂量和高剂量以包含足够体积以便从打开的胶囊分散的机会。助流剂和润滑剂向卵清蛋白质添加流动性，使得可以通过自动包封机器重复地填充胶囊，并且优化受试者容易地清空胶囊的蛋白质的效率。对于临床试验，胶囊可以批量装入高密度聚乙烯(HDPE)瓶中。在使用时，可以打开包含卵蛋白的胶囊，并且在临时用前将内容物混入掩味食品中。

本文所述的卵蛋白制剂中稀释剂的浓度可以为约30％至约99w/w％。在一些实施方案中，稀释剂的浓度可以为组合物的约40％至约90w/w％。在一些实施方案中，稀释剂可以是硅化微晶纤维素，并且浓度可以为组合物的约50％至约90w/w％。在另一些实施方案中，稀释剂可以是硅化微晶纤维素，并且浓度可以为组合物的约45％、约46％、约47％、约48％、约49％、约50％、约51％、约52％、约53％、约54％、约55％、约56％、约57％、约58％、约59％、约60％、约61％、约62％、约63％、约64％、约65％、约66％、约67％、约68％、约69％、约70％、约71％、约72％、约73％、约74％、约75％、约76％、约77％、约78％、约79％、约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、87、约88％、约89％或约90w/w％。在一些实施方案中，使用多于一种类型的硅化微晶纤维素以获得组合物的所需w/w。

本文所述组合物中助流剂的浓度可为组合物的约0.01％至约10w/w％。在一些实施方案中，本文所述组合物中的助流剂可为约0.01％至约3.0％。在一些实施方案中，助流剂是滑石，并且本文所述的组合物中助流剂的浓度可为组合物的约0.01％、约0.05％、约0.1％、约0.25％、约0.2％、约0.75％、约1.0％、约1.25％、1.5％或约2.5w/w％。

助流剂的目标单位重量可以为约.05至约5mg/胶囊。在一些实施方案中，助流剂是滑石，目标单位重量是约0.725、约2.625或约3.0mg/胶囊。在另一些实施方案中，助流剂是胶体二氧化硅(例如Cab-O-Sil)，目标单位重量为约0.5mg、约1.0mg、约2mg、约3.0mg或约5mg/胶囊。

本文所述的组合物中润滑剂的浓度可以为组合物的约0.01％至约10w/w％。在一些实施方案中，本文所述的组合物中的润滑剂可以为约0.1％至约1.0％。在一些实施方案中，润滑剂是硬脂酸镁，并且本文所述的组合物中润滑剂的浓度可以为组合物的约0.01％、约0.05％、约0.1％、约0.25％、约0.4％、约0.5％、约0.75％、约1.0％、约1.25％或约1.5w/w％。

润滑剂的目标单位重量可以为约.05至约5mg/胶囊。在一些实施方案中，润滑剂是硬脂酸镁，目标单位重量是约0.75、约0.79或约2.4mg/胶囊。

本文所述的组合物中填充剂的浓度可以为组合物的约1％至约30w/w％。在一些实施方案中，本文所述的组合物中的填充剂可以为约10％至约15％。在一些实施方案中，填充剂是甘露糖醇，并且本文所述的组合物中填充剂的浓度可以为组合物的约5％、约10％、约15％或约20w/w％。

填充剂的目标单位重量可以为约15.0至约47.5mg/胶囊。在一些实施方案中，填充剂是甘露糖醇，目标单位重量是约7.5、约15、约15.8或约47.5mg/胶囊。

应当理解，定量公式将根据制造的最终填充重量进行调整。最终填充重量可以为约150mg至约450mg至约1000mg。在一些实施方案中，制备含有约0.2mg卵蛋白的卵蛋白制剂，其最终填充重量为约158mg。在另一些实施方案中，制备含有约1.0mg卵蛋白的卵蛋白制剂，其最终填充重量为约150mg。在另一些实施方案中，制备含有约10.0mg卵蛋白的卵蛋白制剂，其最终填充重量为约450mg。在另一些实施方案中，制备含有约100mg卵蛋白的卵蛋白制剂，其最终填充重量为约450mg。

在一些实施方案中，固体剂型可以是片剂(包括悬浮片剂、快速熔化片剂、咬嚼崩解片剂、快速崩解片剂、泡腾片剂或囊片)、丸剂、粉末(包括无菌包装的粉末(例如“棒状包装”或箔袋)、可分配粉末或泡腾粉末)、胶囊(包括软或硬胶囊，例如由动物来源的明胶或植物来源的HPMC制备的胶囊，或“喷洒胶囊(sprinkle capsule)”)、固体分散体、固溶体、小丸或颗粒。在另一些实施方案中，制剂是粉末的形式。另外，制剂可以作为单个胶囊或以多个胶囊剂型施用。在一些实施方案中，制剂以两个、三个或四个胶囊或片剂或粉末包装施用。

在一些实施方案中，通过将包含表征的蛋过敏原的卵清蛋白与一种或多种药物赋形剂混合以形成本体共混组合物(bulk blend composition)来制备固体剂型，例如片剂、泡腾片剂和胶囊剂。当将这些本体共混组合物称为均匀时，是指颗粒均匀地分散在整个组合物中，使得组合物可容易地分成等效的单位剂型，例如片剂、丸剂和胶囊。单个单位剂量还可以包含薄膜包衣，其在口服摄取时或在与稀释剂接触时崩解。这些制剂可以通过常规药理学技术制备。

常规药理学技术包括例如以下方法之一或组合：(1)干混合、(2)直接压缩、(3)研磨、(4)干或非水制粒、(5)湿法制粒或(6)融合。参见例如Lachman等，The Theory andPractice of Industrial Pharmacy(1986)。其他方法包括例如喷雾干燥、锅包衣、熔体制粒、制粒、流化床喷雾干燥或包衣(例如，Wurster包衣)、切向包衣、顶部喷雾、压片，挤出等。

本文所述的药物固体剂型可包含本文所述的组合物和一种或多种药学上可接受的添加剂，例如相容的载体、粘合剂、填充剂、悬浮剂、调味剂、甜味剂、崩解剂、分散剂、表面活性剂、润滑剂、着色剂、稀释剂、增溶剂、湿润剂、增塑剂、稳定剂、渗透促进剂、润湿剂、消泡剂、抗氧化剂、防腐剂或其一种或多种组合。在另一些方面，使用标准涂覆程序，例如在Remington's Pharmaceutical Sciences，第20版(2000)中描述的那些，在制剂周围提供薄膜包衣。在一些实施方案中，部分或全部颗粒被涂覆。在另一些实施方案中，一些或所有颗粒是微胶囊化的。在另一些实施方案中，一些或所有蛋过敏原是用惰性赋形剂涂覆和/或微胶囊化的无定形材料。在另一些实施方案中，颗粒未被微胶囊化并且是未包衣的。

压缩片剂是通过压制上述本体共混制剂制备的固体剂型。在多个实施方案中，设计成在口中溶解的压缩片剂将包含一种或多种调味剂。在另一些实施方案中，压缩片剂将包含围绕最终压缩片剂的膜。在一些实施方案中，薄膜包衣可以提供制剂的延迟释放。在另一些实施方案中，膜包衣有助于受试者顺应性(例如，包衣或糖衣)。包含的膜包衣通常占片剂重量的约1％至约3％。在另一些实施方案中，压缩片剂包含一种或多种赋形剂。

胶囊可以例如通过将如上所述的本体共混制剂置于胶囊中来制备。在一些实施方案中，将制剂(非水性悬浮液和溶液)置于软明胶胶囊中。在另一些实施方案中，将制剂置于标准明胶胶囊或非明胶胶囊中，如包含HPMC的胶囊中。在另一些实施方案中，将制剂置于喷洒胶囊中，其中胶囊可以整体吞咽或者可以打开胶囊，并且在进食之前将内容物喷洒在食物上。在一些实施方案中，治疗剂量分为多个(例如，两个、三个或四个)胶囊。在一些实施方案中，制剂的全部剂量以胶囊形式递送。

在多个实施方案中，将颗粒和一种或多种赋形剂干混并压制成团块，例如片剂，其硬度足以提供在小于约30分钟、小于约35分钟、小于约40分钟、小于约45分钟、小于约50分钟、小于约55分钟或小于约60分钟内基本上崩解的药物组合物，从而将制剂释放到胃肠道流体中。

在一些方面，剂型可包括微胶囊化制剂。在一些实施方案中，一种或多种其他相容性材料存在于微胶囊化材料中。示例性材料包括但不限于pH调节剂、侵蚀促进剂、消泡剂、抗氧化剂、调味剂和载体材料如粘合剂、悬浮剂、崩解剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、稳定剂、润滑剂、润湿剂和稀释剂。

用于本文所述的微胶囊化的材料包括与蛋过敏原相容的材料，其充分地将蛋过敏原与其他不相容的赋形剂分离。与蛋过敏原相容的材料是那些延迟蛋过敏原在体内释放的材料。

可用于延迟制剂释放的微胶囊材料的实例包括但不限于：羟丙基纤维素醚(HPC)，如或Nisso HPC；低取代的羟丙基纤维素醚(L-HPC)；羟丙基甲基纤维素醚(HPMC)，如Seppifilm-LC、Metolose SR、Opadry YS、PrimaFlo、Benecel MP824和Benecel MP843；甲基纤维素聚合物，如羟丙基甲基纤维素乙酸酯硬脂酸酯Aqoat(HF-LS、HF-LG、HF-MS)和乙基纤维素(EC)及其混合物，如E461、聚乙烯醇(PVA)，如Opadry AMB；羟乙基纤维素，如羧甲基纤维素和羧甲基纤维素(CMC)的盐，如聚乙烯醇和聚乙二醇共聚物，如Kollicoat甘油单酯(Myverol)、甘油三酯(KLX)、聚乙二醇、改性食品淀粉；丙烯酸和丙烯酸聚合物与纤维素醚的混合物，如 EPO、 L30D-55、 FS 30D L100-55、 L100、 S100、 RD100、 E100、L12.5、 S12.5、 NE30D和 NE 40D；醋酸纤维素邻苯二甲酸酯，sepifilm，如HPMC和硬脂酸的混合物，环糊精，以及这些材料的混合物。

微胶囊化的蛋过敏原可以通过本领域普通技术人员已知的方法配制。这些已知的方法包括例如喷雾干燥法、旋转圆盘-溶剂法、热熔融法、喷雾冷却法、流化床、静电沉积、离心挤出、旋转悬浮分离、液气或固气界面聚合、压力挤出、或喷雾溶剂萃取浴。除了这些之外，还可以使用多种化学技术，例如，复合凝聚、溶剂蒸发、聚合物-聚合物不相容性、液体介质中的界面聚合、原位聚合、液体内干燥和液体介质中的去溶剂化。此外，也可以使用其他方法，例如辊压、挤出/滚圆、凝聚或纳米颗粒涂覆。

考虑到个体受试者的临床状况、施用部位和方法、施用时间安排和医疗从业者已知的其他因素，根据良好的医疗实践施用和给药本文所述的制剂。

IV.使用方法

本文所述的制剂可用于口服免疫治疗(OIT)以治疗患有蛋过敏的受试者。

卵和卵清蛋白粉是许多食品中常见的食物和添加剂。与许多食品中含有的量相比，本发明的卵蛋白制剂可以包含相对少量(0.2至100mg/胶囊)的卵蛋白，并且可以通过与经口摄取的含蛋的产品相同的途径递送。

用本文所述的制剂治疗的受试者可以表现出降低的过敏反应，涉及在与暴露于过敏性过敏原相关的症状的治疗后临床症状的减少，其可以涉及通过皮肤、呼吸、胃肠和粘膜(例如，眼、鼻和耳)表面或皮下注射(例如，通过蜂刺)的暴露。在一些实施方案中，与接收安慰剂的受试者或不接受治疗的受试者相比，受试者可表现出约2％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或更高的降低的过敏反应。

用本文所述的组合物治疗的受试者在治疗后可显示降低的体液应答和/或T细胞应答。在一些实施方案中，与接收安慰剂的受试者或不接受治疗的受试者相比，受试者可表现出约2％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或更高的降低的体液应答和/或T细胞应答。

用本文所述的组合物治疗的受试者在治疗后可显示降低的IgE应答和/或降低的肥大细胞应答。在一些实施方案中，与接收安慰剂的受试者或不接受治疗的受试者相比，受试者可表现出约2％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或更高的降低的IgE应答和/或降低的肥大细胞应答。

用制剂治疗的受试者还可以表现出增加的IgG4应答，其代替IgE抗体并且抑制对过敏原的免疫应答，从而减少过敏反应的可能性。

用本文所述制剂治疗的受试者在治疗后可以更好地经受住口服食物激发(OFC)。

用本文所述的组合物治疗的受试者可以在治疗后对蛋过敏脱敏。在一些实施方案中，与接收安慰剂的受试者或不接受治疗的受试者相比，受试者可以脱敏约2％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或更多。

本文所述的组合物可以以递增方案施用。在一些实施方案中，在治疗的第1天向受试者施用递增剂量。例如，受试者可以在第1天施用1、2、3、4或5个剂量的本文所述的组合物。在另一个实施例中，受试者可以在第一天以30分钟的增量施用5个剂量的本文所述的组合物。受试者在第2天返回并接受最大耐受剂量。在第2天观察到具有中度症状的受试者可在第3天返回，并且在监测的临床环境中观察下一较低剂量。能够在治疗的最初日经受治疗的受试者可以施用一个或多个另外的剂量的本文所述的组合物。

在一些实施方案中，受试者还施用1、2、3、4、5、6、7、8或9个另外的递增剂量的本文所述的组合物。可以以两周的间隔向受试者施用另外的递增剂量。

在最终施用后，在一些情况下，受试者可以进行口服食物激发以确定受试者是否已经对蛋过敏脱敏。

在一些实施方案中，初始日递增方案示出在表1中。

表1：初始日递增方案

以每30分钟的频率标准施用剂量。在第一天结束时，耐受小于1.6mg单剂量的受试者可以在一些情况下认为是初始日递增脱敏失败。

耐受1.6或3mg单剂量的受试者可以每天给予最大耐受剂量(在观察的临床环境下给予第一剂量)进行。所有递增在至少2周后发生，并且可以尝试在临床中从1.6到3mg的单剂量增加。

所有受试者在第2天返回并在直接观察下接受其最大耐受剂量。在第2天观察到具有中度症状的受试者将第3天返回并且在监测的临床环境中观察下一较低剂量。在第2、3和4天的剂量可以是至少1.6mg，或者在一些情况下，可以认为受试者是递增失败。

在初始递增后，如果受试者没有不良事件，在一些实施方案中可以遵循表2所示的递增剂量方案。

表2:递增剂量方案

剂量号	剂量(蛋白质)	间隔(周)	增加％
				6	6mg	2
7	12mg	2	100％
				8	20mg	2	67％
9	40mg	2	100％
				10	80mg	2	100％
11	120mg	2	50％
				12	160mg	2	33％
13	200mg	2	25％
				14	240mg	2	20％
15	300mg	2	25％

在另一些实施方案中，递增给药方案可包括如表3所示的第1天递增至50mg以及每日给药的32周剂量递增。

表3：初始日和递增给药方案

在此类方法的一些实施方案中，在临施用前，可将胶囊化的胶囊制剂打破并将成分混合到掩味食品中。

在另一些实施方案中，受试者继续主动治疗3个月、6个月、12个月、24个月或更长的维持期。在另一些实施方案中，受试者剂量升高至300mg(根据剂量17)，然后其将在300mg维持长时间(最少3-6个月)。在另一些实施方案中，受试者剂量升高至1000mg，然后在1000mg维持长时间(最少3-6个月)和长达几年或终身。这些不同于持续剂量升高，因为受试者的剂量升高到特定剂量并维持很长时间。

可以监测受试者的全身症状的发作，包括例如潮红、皮肤上的强烈瘙痒，以及打喷嚏和流鼻涕。也可能发生热感、一般不适和烦乱/焦虑。

在一些实施方案中，向患有蛋过敏的受试者施用本文提供的制剂一天或多天。

在一些实施方案中，与施用安慰剂或不接受治疗的受试者相比，受试者能够将其在没有过敏反应的情况下可以消耗的蛋白质量提高至少约100％。

在另一些实施方案中，受试者表现出降低的体液应答和/或降低的T细胞应答。在另一些实施方案中，受试者表现出降低的过敏反应、降低的肥大细胞反应、降低的IgE反应、降低的荨麻疹或其组合。

在一些实施方案中，本文提供的制剂可以与食品结合施用。

受试者可以在治疗的第一天施用1、2、3、4或5个剂量的本文提供的制剂。在一些实施方案中，受试者在治疗的第一天施用10个剂量。在另一些实施方案中，以30分钟间隔向受试者施用所述剂量。在一些情况下，该方法还可包括一种或多种另外的治疗。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗包括以两周的间隔施用组合物。在另一些实施方案中，一种或多种另外的治疗包括1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多剂量的组合物。

本文提供了使患有蛋过敏的受试者脱敏的方法，其包括施用一个或多个剂量的根据本技术方面的组合物，其中所述方法可包括以下步骤：(a)在治疗方案的第1天以30分钟的间隔向受试者施用0.2mg、1.0mg、1.5mg、3.0mg和6.0mg递增剂量；(b)任选地，在治疗方案的第2天向患者施用最大耐受剂量；以及(c)以两周间隔向受试者施用12mg、20mg、40mg、80mg、120mg、160mg、200mg、240mg、300mg、360mg、440mg、500mg、700mg、1000mg、1200mg、1500mg、1800mg和2000mg的单剂量。

在一些实施方案中，所述方法可以进一步包括在完成治疗方案后施用口服食物激发(OFC)。

V.联合治疗

本文所述的制剂和方法还可以与其他众所周知的治疗化合物联合使用，所述治疗化合物根据其针对正在治疗的病症的特定有用性而选择。一般而言，本文所述的制剂和在使用联合疗法的实施方案中，其他化合物不必在相同制剂中施用，并且由于不同的物理和化学特性，可能必须通过不同的途径施用，或者其可以组合在单一制剂中。在可能的情况下，在相同制剂中确定施用模式和施用的可取性在本领域技术人员的知识范围内。初始施用可以根据本领域已知的建立的方案进行，然后基于观察到的效果，临床医师可以修改剂量、施用方式和施用时间。

使用的化合物的具体选择将取决于主治医师的诊断及其对受试者的病症和适当的治疗方案的判断。取决于受试者的病症和所使用的化合物的实际选择，化合物可以同时(例如，同时、基本上同时或在同一治疗方案内)或依次施用。在评估所治疗的蛋过敏的严重性和受试者的病症后，在治疗方案期间确定施用次序和每种治疗剂的重复施用次数在本领域技术人员的知识范围内。

应当理解，治疗、预防或改进蛋过敏的剂量方案可以根据多种因素进行修改。这些因素包括受试者的年龄、体重、性别、饮食和/或医学状况。因此，实际使用的剂量方案可广泛变化，因此可偏离本文所述的剂量方案。

多个施用步骤之间的时间段可以在几分钟至几小时的范围内，这取决于每种药剂的性质，例如药剂的效力、溶解度、生物利用度、血浆半衰期和动力学特性。靶分子浓度的昼夜变化也可以决定最佳剂量间隔。

在一些实施方案中，所述制剂与至少一种其他抗组胺剂、皮质类固醇、β激动剂、抗炎剂、抗IgE抗体(例如奥马珠单抗)和/或肾上腺素一起施用。在一些实施方案中，所述制剂与至少一种膜稳定剂(例如色甘酸)一起施用。膜稳定剂用于稳定肥大细胞的膜，使得其不能释放诱导过敏反应的分子。

VI.实施例

通过参考以下非限制性实施例，可以更好地理解本发明的技术。提供以下实施例是为了更充分地说明某些实施方案，而不应以任何方式解释为限制本技术的广泛范围。虽然在本文中已经示出并描述了本技术的某些实施方案，但是显然的是，这些实施方案仅以示例的方式提供。在不脱离实施方案的情况下，本领域技术人员可以想到许多变化、改变和替换；应当理解，在实践本文所述的方法时可以采用本文所述的实施方案的各种替代方案。

在实施例中，在各种条件下测试卵清蛋白和包含卵清蛋白的制剂的稳定性。如果本文提供的卵蛋白制剂中的总卵蛋白、卵类粘蛋白、卵白蛋白和/或溶菌酶蛋白的浓度为刚刚生产的卵蛋白制剂中这些蛋白质的初始浓度±10％，则认为其是“稳定的”。

实施例1：蛋白粉的评价

本实施例描述了卵清蛋白的物理表征。卵清蛋白(Deb El卵清蛋白粉批号PK049/2013)用作卵蛋白的来源，并通过肉眼检查外观和流动来进行物理表征。还使用网式过滤器进行粒度研究。发现卵清蛋白具有以下性质(参见表4)：

表4：蛋白粉性质：

进行动态蒸气吸附分析(DVA)以确定卵清蛋白水分含量显著增加(潜在地降低流动和蛋白质稳定性)的条件，并用作与本文提供的卵蛋白制剂比较的基线。使用Deb El卵清蛋白粉批号PK049/2013，发现具有下表5所列的性质。此外，如图1-3所示，样品质量的变化率(水分吸收率)在高于50％相对湿度的值时显著增加。如表12所示，与单独的卵白蛋白相比，在75％相对湿度下，本文提供的卵蛋白制剂吸收较少水分。

表5：Deb El蛋白粉性质

实施例2：蛋白粉的强制降解

本实施例描述了在酸、碱、过氧化物、光和热的存在下测定卵清蛋白的稳定性的测试。使用酸、碱、过氧化物和热来应激卵清蛋白溶液，并评价稳定性。样品降解的评价基于与未应激样品相比，应激样品中卵清蛋白的色谱测定。

如下评价酸应激样品：将卵清蛋白溶解在H₂O中以形成1.0mg/mL溶液，并暴露于1.0N HCl中以产生酸应激样品。将酸应激样品、仅含有1mg/ml未处理的卵清蛋白溶液的未处理样品和含有1N HCl的酸对照在4℃下静置过夜。在这时间段结束时，将试验溶液用1.0mL的0.1N NaOH中和并萃取以制备色谱法。

如下制备碱应激样品：将卵清蛋白溶解于H₂O中以形成1.0mg/mL溶液，并暴露于1.0N NaOH以产生碱应激样品。将碱应激样品、仅含有1mg/ml未处理的卵清蛋白溶液的未处理样品和含有1N NaOH的碱对照在4℃下静置过夜。在这时间段结束时，将试验溶液用1.0mL的0.1N HCl中和并萃取。

如下制备过氧化物应激样品：将卵清蛋白溶解在H₂O中以形成1.0mg/mL溶液，并暴露于3％过氧化氢以产生过氧化物应激样品。将过氧化物应激样品、仅含有1mg/ml未处理的卵清蛋白溶液的未处理样品和含有[3％过氧化氢]的过氧化物对照在4℃下静置过夜。

如下制备热应激样品：将卵清蛋白溶解在H₂O中以形成1.0mg/mL溶液，并暴露于70℃过夜以产生热应激样品。将含有1mg/ml未加热的卵清蛋白溶液的未加热样品和对照在4℃下静置过夜。

如下制备光暴露样品：将卵清蛋白溶解在H₂O中以形成1.0mg/mL溶液，并暴露于光过夜以产生光暴露样品。将在黑暗中储存的含有1mg/ml卵清蛋白溶液的样品和对照在4℃下静置过夜。

在以下条件下使用HPLC系统(尺寸排阻色谱法-SEC)分析来自降解研究的样品：柱(两个串联)：Phenomenex Yarra SEC 2000,3μm,300×7.8mm，具有以下试剂和条件：流动相：0.05M Na2HPO4，0.05M NaH2PO4，0.15M NaCl，pH 6.8；流速：0.5mL/min；进样体积：20μL；运行时间：约60分钟；检测器：UV 220nm；泵模式：等压；柱温：环境；以及针洗涤：水。

图4-8中的结果显示在对照制剂中没有干扰峰。定性地评价峰，并且如图4-8所示，暴露于酸、碱和热时发生显著降解，而卵清蛋白溶液被证明对过氧化物和光较不敏感。

实施例3：卵清蛋白的鉴定和定量

在本实施例中，开发了几种测定法以便于三种主要卵蛋白过敏原卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的定量。测试的测定是ELISA测定，尺寸排阻色谱方法和免疫印迹技术。

ELISA测定如下进行：将包被抗原在4℃孵育过夜，然后用PBS w/0.05％Tween 20洗涤3次。然后在40℃下用PBS中的1％BSA封闭抗原1小时，用PBS w/0.05％Tween 20洗涤3次。加入第一抗体，并在40℃孵育1.5小时，用PBS w/0.05％Tween 20洗涤3次。加入第二抗体(卵类粘蛋白和卵白蛋白1:10000，溶菌酶1:5000，无稀释)，并在40℃孵育1.5小时。加入检测底物并孵育，直至在室温下有颜色变化，此时加入终止溶液。使用自动化微量滴定板ELISA读数器在450nm读取吸光度。微量滴定板的实例如下表6所示：

表6：微量滴定稀释

使用在不同的第一抗体稀释度下每种蛋白质的各种稀释液(由图9-15中的不同谱线表示)进行ELISA测定，并用于确定每种试剂的最佳条件，使得可以从滴定曲线的最敏感(最陡峭的斜率)部分确定每种卵蛋白的量。对于每种蛋白质的每种稀释度，第一抗体浓度对吸光度示于图9-15中。除非另有说明，否则所有溶菌酶样品的第二抗体浓度为1:5000，所有卵类粘蛋白和卵清蛋白样品的第二抗体浓度为1:10000。

在实施例2的强制降解分析中使用的SEC条件下进行使用单种卵蛋白以及共混粉末的尺寸排阻色谱法(SEC)测定。图16显示了使用两个串联的Phenomenex Yarra 2000SEC柱的鸡卵白蛋白(约0.4mg/mL)、胰蛋白酶抑制剂(约0.4mg/mL)，溶菌酶(约0.4mg/mL)和卵清蛋白(约1.0mg/mL)的色谱图重叠。图17显示用安慰剂上清液制备的卵清蛋白安慰剂(淀粉1500)、卵清蛋白标准品(约0.02mg/mL蛋白)、掺入卵清蛋白的安慰剂(约0.02mg/mL蛋白)和卵清蛋白标准品的色谱图重叠。

在实施例2中使用的SEC条件下进行使用表7所示的不同溶剂中的卵蛋白的尺寸排阻色谱法(SEC)测定。

表7：使用尺寸排阻色谱法的1mg/mL卵蛋白峰面积

ND＝未检测到

图18显示使用尺寸排阻色谱法用PBS溶液稀释的1mg/mL卵清蛋白的色谱图重叠。图19显示使用尺寸排阻色谱法用50mM磷酸盐缓冲液溶液稀释的1mg/mL卵清蛋白的色谱图重叠。图20显示使用尺寸排阻色谱法用200mM磷酸盐缓冲液溶液稀释的1mg/mL卵清蛋白的色谱图重叠。如下进行氮燃烧蛋白质定量(Dumas方法燃烧)：燃烧测定允许样品中相对少量蛋白质的定量。进行这样的测定，其中将卵清蛋白样品燃烧以测定样品中的N₂的量。使用每mg样品1.4mL的O₂流速和约140mg EDTA标准量燃烧样品。使用以下计算，使用N₂的量来确定样品中的总蛋白质含量(表8中的数据)：测定(LC％)＝(N-CF％)×TCFW/LC×5.46/100×100％，其中：氮％＝样品中获得的氮％，CF＝在安慰剂中发现的氮含量，TCFW＝目标胶囊填充重量，LC＝药物产品的标签声明，5.46＝从氮到蛋白质含量的转换因子。图21显示了通过Dumatherm方法测定的样品重量(x轴)和氮峰面积(y轴)之间的混合卵蛋白的线性。因此，随着每个峰(蛋白质)的重量在分子量上的增加(较晚的洗脱时间)，所绘制的每个峰的总氮％面积以比例和线性方式增加(R²＝0.97)。结果表明，通过Dumatherm方法证实的柱方法可以用于分离卵清蛋白和确定样品中的总蛋白。

表8：N 2的量

结果显示，任何测定均可用于鉴定和定量卵清中的蛋白质，以提供具有一致水平的卵蛋白卵白蛋白、卵类粘蛋白和溶菌酶的制剂。

实施例4：赋形剂与卵清蛋白的相容性

这种相容性研究的目的是鉴定用于干混过程的促进以下目的的赋形剂：在包封和小袋或袋包装设备上的加工性，从胶囊壳或小袋包装中清洁地排空内容物，以及与施用的卵蛋白的化学相容性。如表9所示，在本研究中评价的赋形剂按功能分为填充剂、稀释剂、助流剂、着色剂、胶囊壳组分和润滑剂。稀释剂和填充剂以与卵蛋白(其构成卵清蛋白的91重量％)1:1的比例进行评价。润滑剂、助流剂、着色剂和胶囊壳材料以10:1的比例(卵蛋白与赋形剂或成分)评价。在早期制剂开发中发现一些赋形剂与卵清蛋白不相容，并排除。这些是基于每种类型的赋形剂和/或测试材料的功能性的正常接受的范围/比率。

评价了十二种赋形剂，包括一种填充剂、三种稀释剂、两种助流剂/抗结块剂、两种润滑剂和四种颜色的胶囊壳材料。

表9：在相容性研究期间使用的赋形剂

A.赋形剂

1.填充剂

评价填充剂。甘露糖醇被评价为单一有机填充剂，因为其具有低吸湿性。

2.稀释剂

评价代表三种化学类别的稀释剂：复合有机、无机和组合共加工的复合有机/无机(例如，超级赋形剂)。微晶纤维素评价为PROSOLV HD90，因为共加工的Prosolv形式即使在制剂中的低水平下也可以赋予有利的加工性能。评价淀粉1500，因为其具有赋予更好的流动性和润滑性以及对湿气敏感的活性物质和低剂量几何混合应用特别有效的多种功能。评价A-Tab，这是一种无水无机赋形剂，其可能提供防止水分吸附的保护。

3.助流剂

在制剂评价中包括Cab-O-Sil(胶体二氧化硅)作为潜在助流剂/抗结块剂。由于其小的粒度和大的比表面积，已知胶体二氧化硅具有流动增强能力和水分螯合能力。由于具有与胶体二氧化硅类似的助流剂/抗结块性质，在制剂评价中包括作为Cab-O-Sil的替代物的滑石(USP)。

4.润滑剂

在制剂评价中将硬脂酸镁和硬脂酰富马酸钠(例如PRUV)都评价为润滑剂。硬脂酸镁是制药工业中最常用的润滑剂，但在一些情况下，可易于与各种药物分子不相容，并且在一些情况下，可易于“过度共混”，其可影响释放速率。在本研究中也评价了PRUV。PRUV可以避免诸如不相容性和过度润滑的问题，这可提高混合材料的疏水性。因此，通过使用PRUV作为润滑剂可以提高某些活性物质的生物利用度。

5.胶囊壳

选择羟丙基甲基纤维素(HPMC)胶囊壳用于在本制剂研究中评价。已知HPMC胶囊壳降低明胶胶囊壳和“活性”卵蛋白之间蛋白质/蛋白质相互作用的风险。用研磨的HPMC有色胶囊壳进行相容性研究，在最终产品中使用天然、白色和蓝色壳。以10:1(蛋白粉:研磨胶囊壳)比例制备代表三种胶囊壳颜色的样品基质。

B.制剂

评价十六种制剂基质(包括仅具有卵清蛋白的对照)，并如表10所示。由于含量均匀性可能是含有极低水平的一种或多种成分的制剂中的挑战，几何混合技术用于确保低水平成分均匀分布在混合物中。

表10：混合制剂

¹本研究中制剂1仅含有卵清蛋白作为对照。

注意：制剂2-8含有与赋形剂的比例为1:1或10:1的卵清蛋白。制剂9-11含有与胶囊壳材料的比例为10:1的卵清蛋白。制剂12-13包含比例为10:10:1:1:1的蛋白粉、赋形剂、Cab-O-Sil、硬脂酸镁和胶囊壳材料的混合物。制剂14含有比例为10:10:1:1的蛋白粉、赋形剂、硬脂酸镁和胶囊壳材料的混合物。

C.工艺/制造

对于每个评价的蛋白粉/赋形剂比，制备约6克的微混合物用于在控制的储存条件下评价。样品基质用于确定可接受的制剂赋形剂，其然后可以在共同的地方制造过程中使用。

1.程序：样品制剂和分析

1.将表10中的每种制剂原型在小瓶中或在研钵和杵中共混约10分钟。

2.然后将每种微混合物放置在用于“包装”样品制剂的带有特富龙衬里螺旋盖的透明硼硅酸盐玻璃小瓶中。

3.将样品储存在40℃/75％相对湿度的储存条件下。

4.在时间零、两周、一个月、两个月和三个月对稳定性样品进行化学测试和外观测试。外观评价涉及粉末的颜色、质地以及确定材料是粘结的还是自由流动。

5.通过HPLC分析进行稳定性样品的生物化学分析。如果在干卵蛋白/赋形剂混合物和未暴露于赋形剂的干卵蛋白之间没有看到色谱中的显著变化，则确定了活性物质与各赋形剂的相容性。使用约1.0g的样品进行化学分析。

6.对初始(T＝O)样品和两个月时评价干燥失重。将约2g的样品用于LOD测试。将样品加热至低于其熔点并测量水分含量(水分损失)。

D.3个月的赋形剂相容性研究结果

本文给出了3个月赋形剂相容性研究的结果。该研究遵循如上所述的参数，并且将制剂样品储存在40℃/75％相对湿度下。

如上表10中所示，在3个月的时间段内评价共混物制剂的许多稳定性特征。通过尺寸排阻色谱法评估的随时间的蛋白质完整性示出在表11中(每个蛋白质峰的面积％)的5个时间点。

表11：蛋白质完整性(报告的数据，不包括安慰剂峰)

在T＝0时，Σ4-6＝98.07。可接受的范围是初始+/-2％，得到的96.11-100.03的范围。所有样品的Σ4-6落在此范围内。

外观观察包括颜色、质地和流动性。在T＝0和在2个月时间点测试干燥失重。外观及干燥失重的数据列于表12中。

表12：外观和干燥失重

如表12所示，三种共混物(12-14)在三个月后是自由流动的。结果表明，在75％的相对湿度，卵蛋白质制剂(共混物12-14)比单独卵清蛋白质吸收更少水分。

实施例5：卵蛋白制剂

基于实施例4中的相容性研究的结果，制备表13-16中所示的制剂并作为示例性制剂进行测试。包括ProSolv SMCC 50和ProSolv HD90作为稀释剂，包括甘露糖醇作为填充剂，包括硬脂酸镁作为润滑剂。然而，也可以使用其他稀释剂、填充剂和润滑剂，并具有可比的结果。实施例6提供了示例性制剂的填充和回收测试的结果。

表13：0.2mg胶囊的制剂

项目号	成分	w/w％	mg/剂量
				1	EWP预混物批号14004(1.78％蛋白质)	7.15	11.3
2	ProSolv SMCC 50	36.58	57.8
				3	ProSolv HD90	45.76	72.3
4	甘露糖醇200SD	10.00	15.8
				5	硬脂酸镁	0.50	0.79
	总计	100	158

表14 1.0mg胶囊的制剂

表15：10.0mg胶囊的制剂

表16：100.0mg胶囊的制剂

实施例6：填充和回收分析

当配制在胶囊中时，测试表13-16中的制剂的填充和回收。评估卵清蛋白的4个剂量强度的胶囊填充和回收：0.2mg、1.0mg、10.0mg和100.0mg。对于每个剂量强度，使用手动封装单元制备100个胶囊。每组胶囊的可接受范围为来自制剂的目标填充重量的±3％。使用的所有胶囊都进行重量检查，以确保其在可接受范围内。对于0.2、1.0、10.0和100.0mg胶囊，回收数据分别示于表17-20中。

表17：填充回收0.2mg胶囊

表18：填充回收1.0mg胶囊

表19：填充回收10.0mg胶囊

表20：填充回收100.0mg胶囊

对于所有测试的胶囊，对于0.2mg、1.0mg、10.0mg和100.0mg胶囊制剂，胶囊中材料的回收率为98％至100％。这表明表13-16中提供的制剂可以有效地用于生产含有卵清蛋白的胶囊化药物。

实施例7：共混和含量均匀性分析

基于如下表13-16中的那些，对制剂进行共混和含量均匀性的分析。使用MichaelFoods EWP，批号1248944制备表21中所示的普通卵清蛋白粉(EWP)预混物。然后将普通混合物稀释，得到三个剂量强度(0.2mg、1.0mg和10.0mg)。在普通混合物以及0.2mg和1.0mg剂量强度的稀释中使用几何稀释。几何稀释或几何混合是用于混合不等量的两种成分的技术。一个以最小的量开始，并且添加等量的具有较大量的成分。然后继续该过程，直到使用了所有成分。

表21普通预混制剂

*基于含81.85％蛋白质的卵清蛋白粉(混合物最初基于含有85.71％蛋白质的EWP配制，其将给予预混物1.86％的蛋白质浓度。表格已经调整以反映实际的蛋白质含量)。

发现Michael Foods EWP的“用作(use as)”蛋白质含量为81.85％。由于该信息在混合时不可得，所以原始制剂基于Deb El材料的略高的蛋白质含量(85.71％)。调整所有制剂以反映迈克尔食品值(Michael Food value)。所有批次的调整制剂示于表22-24中。

表22：批次054-MFG-14009A的制剂(0.2*/0.19mg*＊蛋白质)

*基于85.71％蛋白质的卵清蛋白粉。

**基于81.85％蛋白质的卵清蛋白粉。

(混合物最初基于含有85.71％蛋白质和预混合浓度为1.86％的EWP配制，以得到每剂量0.2mg蛋白质。表中调整的列反映了实际的蛋白质含量。)

表23：批次054-MFG-14010B的制剂(1.0*/0.96mg**蛋白质)

*基于85.71％蛋白质的卵清蛋白粉。

**基于81.85％蛋白质的卵清蛋白粉。

(混合物最初基于含有85.71％蛋白质和预混合浓度为1.86％的EWP配制，以得到每剂量1.0mg蛋白质。表中调整的列反映了实际的蛋白质含量)。

表24：批次054-MFG-14011C的制剂(10.0*/9.55mg**蛋白质)

*基于85.71％蛋白质的卵清蛋白粉。

**基于81.85％蛋白质的卵清蛋白粉。

(共混物最初基于含有85.71％蛋白质和预混合浓度为1.86％的EWP配制，以得到每剂量10.0mg蛋白质。表中调整的列反映了实际的蛋白质含量)。共混物比预期的密度低，并且没有填充目标重量。调整该批次的标签声明。(目标填充重量为600mg，实际填充重量为478mg，调整标签声明8mg)。

对所有共混物取样用于共混均匀性测试。共混均匀性测量混合方法的均匀性。重要的是活性成分在制剂中均匀混合。使用1.0cc取样器从混合器的10个独特区域获得样品。将取得的样品直接送入配衡的标记的样品杯中。将样品的重量确定为空杯和填充杯之间的差。分析测试利用整个样品，而不是取样材料的一部分。使用适当大小的ProFill系统手工填充胶囊壳。

使用实施例2中提供的尺寸排阻色谱法进行卵蛋白含量和共混均匀性的分析。由色谱图重叠来定量含量均匀性、共混均匀性和总蛋白(用于卵蛋白的测定)的计算如下：

含量均匀性(标签声明％)

标签声明％(LC％)＝(RU/RS)×CSTD×(VSPL/LC)×100

其中

Ru＝样品中卵清蛋白的面积

Rs＝所有标准中卵清蛋白平均峰面积

Cstd＝工作标准浓度(mg/mL)

Vspl＝工作样品体积

LC＝标签声明

100＝到百分比的转换系数

共混均匀性(标签声明％)

标签声明％(LC％)＝(R_U/R_S)×C_STD×(V_SPL/Wt_SPL)×(TCFW/LC)×100

其中：

R_u＝样品中卵清蛋白的面积

R_s＝所有标准中卵清蛋白平均峰面积

C_std＝工作标准浓度(mg/mL)

V_spl＝工作样品体积

Wt_spl＝工作样品重量

TCFW＝目标胶囊填充重量

LC＝标签声明

100＝到百分比的转换系数

用于卵清蛋白的测定

测定＝(R_U/R_S)×C_STD×(V_样品/Wt_样品)×(ACFW/LC)×100

其中：

R_u＝样品中卵清蛋白的面积

R_s＝所有标准中卵清蛋白平均峰面积

C_STD＝工作标准浓度(mg/mL)

V_样品＝工作样品体积(mL)

Wt_样品＝样品中滥情蛋白的重量(mg)

ACFW＝平均胶囊填充重量

LC＝标签声明

100＝到百分比的转换系数

图22显示蛋清蛋白标准品(底部)和0.2mg胶囊内容物均匀性样品(上部)的色谱图重叠。图23显示卵清蛋白标准品(底部)和1.0mg胶囊内容物(上部)均匀性样品的色谱图重叠。图24显示卵清蛋白标准品(底部)和10.0mg胶囊内容物均匀性样品(上部)的色谱图重叠。所有批次的共混物分析数据示于表25-28中。含量均匀性是用于胶囊或片剂的质量控制的药物分析技术。随机选择多个胶囊或片剂，并且应用合适的分析方法来测定每个胶囊或片剂中的活性成分的个别含量。如果不超过一个(全部在限度内)个体含量超出平均含量的85％至115％的限度，并且没有超出平均含量的75％至125％的限度，则该制剂符合。结果表明，从均匀性的角度来看，所有共混物均可接受，RSD<约5％。

填充胶囊的含量均匀性和测定结果示于表29-31中。含量均匀性对于RSD<约4％的0.2mg和1.0mg胶囊来说是可接受的。然而，10.0mg胶囊的含量均匀性具有8％的RSD。这比单独的共混物具有显著更多的变化性。

表25：共混物分析，批次054-MFG-14008(普通预混物)

表26：共混物分析，批次054-MFG-14009A(0.2mg)

表27：共混物分析，批次054-MFG-14010B(1.0mg)

表28：共混物分析，批次054-MFG-14011C(10.0mg)

表29：含量均匀性，批次054-MFG-14009A(0.2mg)

表30:含量均匀性，批次054-MFG-14010B(1.0mg)

表31：含量均匀性，批次054-MFG-14011C(10.0mg)

在批次054-002-14009A中制备的共混物的新填充胶囊上进行含量均匀性测试。新胶囊鉴定为批次L0136-42。

基于Deb El蛋白粉中的蛋白质含量配制批次054-002-14009A中的原始共混物。Michael Foods卵清蛋白蛋白的蛋白质含量的结果要求将该批次的标签声明调整至0.19mg。原始批次054-002-14009A的制剂示于表32中。

表32：批次054-002-14009A的制剂(0.2*/019mg*＊蛋白质)

*基于85.71％蛋白质的卵清蛋白粉。

**基于81.85％蛋白质的卵清蛋白粉。

(共混物最初基于含有85.71％蛋白质和预混合浓度为1.86％的EWP配制，以得到每剂量0.2mg蛋白质。表中调整的列反映了实际的蛋白质含量)。

将来自原始批次的共混物以较高的填充重量包封，得到真实的0.2mg剂型。这些胶囊被鉴定为批次L0136-42。调整的制剂示于表33中。含量均匀性结果示于表34-37中。

表33：批次L0136-42的制剂(0.2mg蛋白质)

*基于85.71％蛋白质的卵清蛋白粉。

**基于81.85％蛋白质的卵清蛋白粉。

表34:含量均匀性，批次054-MFG-14009A(0.19mg)

表35:含量均匀性，批次L0136-42(0.2mg)(n＝10)

表36:含量均匀性，批次L0136-42(0.2mg),(重复@n＝20)

表37:含量均匀性，批次L0136-42(n＝30)

平均值	93.58
		标准差	5.20
RSD％	5.55

在批次054-002-14012C和054-002-14013D上通过将制剂在混合器中混合10-30分钟并在每个时间点对样品取样来进行共混物和含量均匀性测试。分别在10mg和100mg剂量强度的批次进行测试。两个批次均包含来自批号4043W-3的Michael Foods卵清蛋白粉。将10mg批次作为几何稀释加工，而100mg批次作为直接混合加工。批次的制剂在表38和39中给出。10mg批次的共混物和含量均匀性数据示于表40和41中。100mg批次的共混物和含量均匀性数据示于表42和43中。

表38：批次054-MFG-14012C的制剂

*基于含有81.85％蛋白质的蛋白粉。

表39：批次054-MFG-14013D的制剂

*基于含有81.85％蛋白质的蛋白粉。

表40：共混分析，批次054-MFG-14012C(10.0mg)

表41：含量均匀性，批次054-MFG-14012C

表42：共混分析，批次054-MFG-14013D(100.0mg)

表43：含量均匀性，批次054-MFG-14013D

进行工艺研究以确定制剂在不同的混合时间如何共混。该研究如下使用1.0mg剂量强度：对五组共混样品取样：1.在用SMCC50对蛋白粉几何稀释之后；2.与所有稀释剂混合10分钟；3.与所有稀释剂混合20分钟；4.与所有稀释剂和润滑剂混合30分钟，取样大小为1-3X单位剂量；5.与所有稀释剂和润滑剂混合30分钟，取样大小为5-10X单位剂量。研究结果表明，制剂混合10分钟时间。

还进行拭子回收研究以观察从混合器中移出的效率。收集两个样品，一个来自v壳混合器的一个腿。批次054-d02 14014B的制剂示于表44中。共混物取样回收结果示于表45-49中。拭子回收结果示于表50中，并且表明该制剂的回收率是优异的。回收的蛋白质的测量是总卵清蛋白的测量。结果表明，非常有效地从混合器回收混合制剂。

表44：1mg剂量的制剂

*基于含83.3％蛋白质的蛋白粉的制剂

表45：共混物取样，步骤8：用SMCCSO稀释

样品	回收率％
		1	96.89
2	90.46
		3	66.70
4	91.77
		5	140.54
6	92.43
		Ave	96.47
标准差	24.10
		RSD％	.24.98

表46：共混物取样，步骤10：10分钟混合时间

样品	回收率％
		1	91.76
2	92.09
		3	92.86
4	90.52
		5	90.28
6	89.20
		7	90.88
8	93.65
		9	91.73
10	91.40
		Ave	91.44
标准差.	1.29
		RSD％	1.41

表47：共混物取样，步骤12：20分钟混合时间

样品	回收率％
		1	93.17
2	87.15
		3	91.38
4	88.17
		5	95.89
6	90.92
		7	93.78
8	89.33
		9	87.61
10	88.41
		Ave	90.58
标准差	2.95
		RSD％	3.26

表48：共混物取样，步骤15：30分钟混合时间，样品大小1-3X单位剂量

样品	回收率％
		1	84.35
2	83.56
		3	83.40
4	82.93
		5	83.31
6	87.34
		7	103.47
8	82.34
		9	84.87
10	81.90
		Ave	85.75
标准差.	6.41
		RSD％	7.48

表49：共混物取样，步骤15：30分钟混合时间，样品大小5-10X单位剂量

样品	回收率％
		1	87.17
2	87.22
		3	87.57
4	87.74
		5	87.84
6	87.89
		7	87.93
8	88.56
		9	88.09
10	86.53
		Ave	87.65
标准差.	0.56
		RSD％	0.64

表50:拭子回收

实施例8：高剂量流量回收分析

高剂量小袋(小包)共混物通常用于大于100mg的剂量，因为其不再适合在胶囊内(例如，100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg和1000mg)。高剂量袋共混物通常放在小袋或糖包中。分析高剂量袋共混物的流动性和填充回收率。研究流动性和回收率以确保可以通过自动封装机器可重复地填充胶囊，并且优化通过受试者容易地清空胶囊粉末的效率。初始制剂仅含有蛋白粉和滑石。这些共混物的流动性非常差。下一组原型包含蛋白粉、 HD90、甘露糖醇和硬脂酸镁。这些共混物的流动性也非常差。从用于第三组原型的制剂中除去甘露糖醇。在第三组中，研究了两个滑石浓度以确定是否可以在足够低的水平下获得改进的流动，以避免对口感的负面影响。这些共混物的流动性明显优于具有“尚可”流动特征的之前原型。

所有原型的制剂示于表51-53中。原型的流动数据示于表54中。为了比较，表55示出了流动性的量表。回收率数据示于表56中。

表51：原型的制剂，组A

表52：原型的制剂，组B

表53：原型的制剂，组C

表54：流动性、回收率和观察

表55：流动性量表

Carr指数(％)	流动特征	Hausner比率
			<10	极好	1.00-1.11
11-15	好	1.12-1.18
			16-20	一般	1.19-1.25
21-25	尚可	1.26-1.34
			26-31	差	1.35-1.45
32-37	非常差	1.46-1.59
			>38	非常非常差	>1.60

表56：袋回收率

作为研究的结果，确定滑石制剂对于高剂量共混物的流动性更有用。在一个实施方案中，在高剂量袋中使用1％滑石制剂。对于500mg剂量强度使用约1.2g的填充重量，对于1000mg使用约2.4g的填充重量。精确重量基于每批中使用的蛋白粉的蛋白质含量确定。

实施例9：六个月稳定性研究

对于0.2mg、1.0mg、10mg和100mg胶囊，分析卵清蛋白质胶囊的稳定性6个月。表57-60中的示例性制剂用于鉴定本文所述的卵清蛋白制剂的一般稳定性。使用Michael Foods蛋白粉(批号4043W-3)将用于该研究的所有共混物作为GMP示范批次处理。用于本研究的胶囊以以下批次生产：D14089，0.2mg卵清蛋白胶囊；D14084，1.0mg卵清蛋白胶囊；D14072，10.0mg卵清蛋白胶囊；以及D14070，100.0mg卵清蛋白胶囊。

稳定性方案如下：将样品在25℃/60％RH和30℃/65％RH下储存。将胶囊包装并储存在具有干燥剂和CRC热密封盖的HDPE瓶中。每个瓶子的计数为0.2mg 10个在30cc瓶中，1.0mg 200个在150cc瓶中，10.0mg 200个在500cc瓶中，10mg 200个在500cc瓶中。每个试验测试的胶囊数如下：外观和嗅觉：n＝10，LOD：2g(0.2、1.0mg 14个胶囊/10、100mg 5个胶囊)；卵类粘蛋白的效力(ELISA)：n＝10；测定(通过HPLC测定的蛋白质含量)：n＝10，可递送质量：n＝10，含量均匀性：n＝20(仅在T＝0时进行)和Micro：15g(0.2和1.0为100个/10.0和100.0为32个)。当生产批次时，测试样品的T＝0数据。在1M、2M、3M和6M(对于实施例10为11M)，从室中抽取样品。测试每个样品的外观(壳和内容物)、嗅觉、LOD，卵类粘蛋白效力、测定和可递送质量。在T＝0下进行含量均匀性测试，在T＝0和T＝12M下进行微生物限度测试(对于每个测试，参见实施例1-8)。

批次的制剂在表57至60中给出。外观和气味总结于表61至64中。干燥失重结果的损失示于表65中。卵类粘蛋白的效力(ELISA)示于表66中。测定结果示于表67中。含量均匀性结果示于表68中。共混均匀性结果示于表69中。可递送质量数据示于表70中。

表57：EOIT的制剂；批次D14089(0.2mg)

*基于含81.85％蛋白质的蛋白粉。包括5％的卵清蛋白过量。

表58：EOIT的制剂；批次D14084(1.0mg)

*基于含81.85％蛋白质的蛋白粉。包括3％的卵清蛋白过量。

表59：EOIT的制剂；批次D14072(10.0mg)

*基于含81.85％蛋白质的蛋白粉。

表60：EOIT的制剂；批次D14070(100.0)

*基于含81.85％蛋白质的蛋白粉。

表61：批次14089(0.2mg)的物理特征

表62：批次14084(1.0mg)的物理特征

表63：批次14072(10.0mg)的物理特征

表64：批次14070(100.0mg)的物理特征

表65：干燥失重

表66：卵类粘蛋白的效力(ELISA)

*具有地方强化标准**具有常规标准

表67:测定(HPLC)

表68:含量均匀性(仅在T＝0时运行)

表69:共混均匀性(仅在T＝0时运行)

表70：可递送质量(报告为百分比)

上述测试用于建立示例性制剂的蛋白粉胶囊的稳定性。在表65中，对于0.2mg、1mg、10mg和100mg，干燥失重表明制剂的干燥失重变化很小，但是在1个月、2个月、3个月、4.5个月和6个月之间没有显著差异。

卵类粘蛋白用作示例性卵蛋白以测试蛋白质随时间的特定效力。表66中示出的卵类粘蛋白的效力(ELISA)再次显示一些变化，但是直到6个月时间没有一致的损失。表67中所示的HPLC测定结果显示在6个月内卵蛋白没有显著损失。含量一致性(表68)、共混均匀性(表69)和可递送质量数据(表70)证实了这些结果。

6个月的结果表明，在该制剂的两个温度下，蛋白质水分含量和物理特性没有变化。因此，测试的共混物稳定6个月，因此，制剂的药物制剂可以可靠地使用至少6个月。

实施例10：11个月稳定性研究

对于0.2mg、1.0mg、10mg和100mg胶囊，分析卵清蛋白质胶囊的稳定性11个月。使用实施例9中的稳定性方案。使用Michael Foods蛋白粉(批号4043W-3)将用于该研究的所有共混物作为GMP示范批次处理。用于本研究的胶囊以以下批次生产：D14089，0.2mg卵清蛋白胶囊；D14084，1.0mg卵清蛋白胶囊；D14072，10.0mg卵清蛋白胶囊；以及D14070，100.0mg卵清蛋白胶囊。

表71：批次14089(0.2mg)物理特征

表72：批次14084(1.0mg)的物理特征

表73：批次14072(10.0mg)的物理特征

表74：批次14070(100.0mg)的物理特征

表75：干燥失重

表76：可递送质量(报告为百分比)

批次的制剂在上表57至60中给出。外观和气味总结于表71-74中。干燥失重结果示于表75中。可递送质量结果提供在表76中。表77和78提供了11个月后关于卵蛋白的数据，显示在11个月时HPLC测定结果(表77)与1个月、2个月等的那些没有显著差异。

表77:测定(HPLC)

表78：卵类粘蛋白的效力(ELISA)

*具有地方强化标准**具有常规标准

11个月稳定性研究的结果显示，剂量、水分含量、总蛋白和卵类粘蛋白效能在可接受的变化内保持相同。因此，制剂提供允许水分含量保持稳定的环境。然而，表78显示在高温下的一些效力损失，表明制剂应保持在不高于室温下以获得最佳稳定性。

实施例11：制造方案

将下列材料通过20目筛过筛并加入16夸脱V混合器：干卵清蛋白和SMCC50(硅化微晶纤维素，NF)。将材料共混5分钟。将16夸脱V壳的内容物放出并通过60目筛过筛。将筛选的材料返回到16夸脱的V壳中。用 SMCC50冲洗空袋，并通过60目筛冲洗材料，将筛选的材料返回16夸脱V壳，并混合10分钟。重复。

将以下材料依次通过20目筛过筛并加入16夸脱V混合器： SMCC50。混合15分钟。通过20目筛依次筛选以下材料，并加入16夸脱V混合器： SMCC HD90和甘露糖醇,NF(200SD)。将合并的材料混合15分钟。将硬脂酸镁、NF(植物来源)通过40目筛并加入到共混物中。混合10分钟。将合并的共混物排放到衬有2个聚乙烯袋的适当尺寸的容器中。分析共混物的蛋白质含量和均匀性，并适当地包装到胶囊或小袋中。

VII.其他实施方案

以下实例说明本技术的若干实施方案。

1.一种药物制剂，其包含干燥的卵清蛋白粉、稀释剂、填充剂和助流剂和/或润滑剂。

2.实例1的药物制剂，其包含：a)约0.1％至90％(w/w)的卵清蛋白；b)约40％-90％的稀释剂；c)约1％-30％的填充剂；d)约0.01％-10％的润滑剂或助流剂；和e)胶囊壳或小袋。

3.实例1的药物制剂，其中所述卵清蛋白粉中的卵清蛋白的水平在所述药物制剂中稳定约3、6、9、11或36个月。

4.实例1的药物制剂，其中卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白中的一种或多种的浓度在所述药物制剂中稳定约3、6、9或11或36个月。

5.实例1的药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的稀释剂：藻酸及其盐；纤维素衍生物；微晶葡萄糖；直链淀粉；硅酸镁铝；多糖酸；膨润土；明胶；聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物；交联聚维酮；聚维酮；淀粉；预胶化淀粉；黄芪胶；糊精、糖；磷酸二钙；天然或合成树胶、聚乙烯吡咯烷酮、落叶松阿拉伯半乳聚糖、聚乙二醇、蜡、藻酸钠、淀粉、羟乙酸淀粉钠、交联淀粉；交联聚合物；交联聚乙烯吡咯烷酮；藻酸盐；粘土；羟乙酸淀粉钠；膨润土；天然海绵；表面活性剂；树脂；柑橘浆；十二烷基硫酸钠；和淀粉组合的十二烷基硫酸钠；及其组合。

6.实例1的药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的润滑剂：硬脂酸、氢氧化钙、滑石、玉米淀粉、硬脂酰富马酸钠、碱金属盐和碱土金属盐、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇(PEG)、甲氧基聚乙二醇、丙二醇、油酸钠、山嵛酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、苯甲酸甘油酯、月桂基硫酸镁、月桂基硫酸钠及其组合。

7.实例1的药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的填充剂：乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉、葡萄糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨醇、氯化钠、聚乙二醇及其组合。

8.实例1的药物制剂，其中所述卵清蛋白在约0.1％至21％(w/w)的范围内。

9.实例1的药物制剂，其包含约0.1％蛋清蛋白。

10.实例1的药物制剂，其中所述卵清蛋白的重量范围为每个胶囊或小袋约0.2mg至约1000mg。

11.实例1的药物制剂，其包含约0.2mg卵清蛋白。

12.实例1的药物制剂，其包含约1.0mg卵清蛋白。

13.实例1的药物制剂，其包含约10.0mg卵清蛋白。

14.实例1的药物制剂，其包含约100.0mg卵清蛋白。

15.实例1的药物制剂，其包含约200.0mg卵清蛋白。

16.实例1的药物制剂，其包含约1000.0mg卵清蛋白。

17.实例1的药物制剂，其中所述稀释剂是Prosolv。

18.实例17的药物制剂，其中所述Prosolv是Prosolv SMCC 50和Prosolv HD90的组合。

19.实例1的药物制剂，其中所述填充剂是甘露糖醇。

20.实例1的药物制剂，其中所述润滑剂是硬脂酸镁。

21.实例1的药物制剂，其中所述助流剂是滑石。

22.一种药物制剂，其包含：a)约0.1％至50％(w/w)的卵清蛋白；b)约40％-90％的Prosolv SMCC 50和/或Prosolv HD90；c)约1％-30％的甘露糖醇；d)约0.01％-10％的硬脂酸镁和/或滑石；和e)胶囊壳或小袋。

23.一种鉴定用于治疗受试者中的蛋过敏的药物制剂的方法，其包括：a)通过一种或多种分析方法确定卵清蛋白组合物中卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的浓度；b)将所述蛋白质的浓度与参考标准品的浓度进行比较；以及c)鉴定用于治疗受试者中的蛋过敏的组合物，其中所述组合物包含至少为所述参考标准品的卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的浓度。

24.实例23的方法，其中所述分析方法是尺寸排阻色谱法。

25.一种制造低剂量卵蛋白制剂的方法，其包括：

a)一定量的蛋白粉与第一共混物中的稀释剂混合，所述蛋白粉包含具有表征的卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的卵清蛋白；

b)第二共混物中加入50-99％的稀释剂；

c)最终共混物中加入稀释剂、填充剂、润滑剂或助流剂中的一种或多种；以及

d)所述共混粉末提供在胶囊或小袋中。

26.实例25的方法，其中每个胶囊的卵清蛋白剂量为约0.2mg卵清蛋白。

27.实例25的方法，其中每个胶囊的卵清蛋白剂量为约1.0mg卵清蛋白。

28.实例25的方法，其中每个胶囊的卵清蛋白剂量为约10.0mg卵清蛋白。

29.实例25的方法，其中所述卵清蛋白的剂量为20mg或更多，并且所述共混粉末提供在胶囊中。

30.实例25的方法，其中所述卵清蛋白的剂量为100mg或更多，并且所述共混粉末提供在小袋中。

31.实例25的方法，其中所述卵清蛋白的剂量为300mg或更多，并且所述共混粉末提供在小袋中。

32.实例25的方法，其中所述卵清蛋白的剂量为1000mg或更多，并且所述共混粉末提供在小袋中。

33.实例25的方法，其中所述卵清蛋白粉中的卵清蛋白的水平在所述药物制剂中稳定约3、6、9、11或或更多个月。

34.实例25的方法，其中所述制剂中卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白中的一种或多种的浓度稳定约3、6、9或11或更多个月内。

35.实例25的方法，其中所述稀释剂选自由以下组成的组：藻酸及其盐；纤维素衍生物；硅化微晶纤维素；微晶葡萄糖；直链淀粉；硅酸镁铝；多糖酸；膨润土；明胶；聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物；交联聚维酮；聚维酮；淀粉；预胶化淀粉；黄芪胶；糊精、糖；磷酸二钙；天然或合成树胶、聚乙烯吡咯烷酮、落叶松阿拉伯半乳聚糖、聚乙二醇、蜡、藻酸钠、淀粉；交联淀粉；交联聚合物；交联聚乙烯吡咯烷酮；藻酸盐；粘土；树胶；羟乙酸淀粉钠；膨润土；天然海绵；表面活性剂；树脂；柑橘浆；十二烷基硫酸钠；和淀粉组合的十二烷基硫酸钠。

36.实例25的方法，其中所述填充剂选自由以下组成的组：乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉、葡萄糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨醇、氯化钠和聚乙二醇。

37.实例25的方法，其中所述润滑剂选自由以下组成的组：硬脂酸、氢氧化钙、滑石、玉米淀粉、硬脂酰富马酸钠、碱金属盐和碱土金属盐、硬脂酸、硬脂酸钠、硬脂酸镁、硬脂酸锌、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇、丙二醇、油酸钠、山嵛酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、苯甲酸甘油酯和月桂基硫酸镁或钠。

38.实例25的方法，其中通过尺寸排阻色谱法表征所述表征的卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白。

39.实例25的方法，其中所述稀释剂是Prosolv。

40.实例25的方法，其中所述稀释剂是Prosolv SMCC和Prosolv HD90的共混物。

41.实例25的方法，其中所述填充剂是甘露糖醇。

42.实例25的方法，其中所述润滑剂是硬脂酸镁。

43.实例25的方法，其中所述助流剂是滑石。

44.实例25的方法，其中步骤(d)还包括使所述共混材料通过筛网。

45.一种制备胶囊制剂的方法，其包括：(a)在第一共混物中混合卵清蛋白粉和稀释剂；(b)排出共混材料；(c)使所述共混材料通过筛网并将过筛材料共混在第二共混物中；(d)在第三共混物中加入填充剂、助流剂和/或稀释剂；以及(e)包封所述共混粉末。

46.实例45的方法，其还包括在包封之前对步骤(d)的共混材料取样一次或多次。

47.实例45的方法，其中所述剂量包含约0.2至约1000mg卵清蛋白。

48.实例45的方法，其中步骤(c)的所述网筛包括#20目筛。

49.实例45的方法，其中所述卵清蛋白包含溶菌酶、卵类粘蛋白和卵白蛋白。

50.实例45的方法，其中通过尺寸排阻色谱法(SEC)-HPLC表征溶菌酶、卵类粘蛋白和卵白蛋白的浓度。

51.实例45的方法，其中所述浓度为至少参考标准品的量。

52.实例45的方法，其中所述包封制剂稳定至少约3、6、9、12、24或36个月。

53.实例45的方法，其中所述包封制剂在约2℃至约30℃的温度下是稳定的。

54.实例45的方法，其中所述胶囊包含羟丙基甲基纤维素(HPMC)。

55.实例45的方法，其还包括将所述制剂储存在容器中。

56.实例55的方法，其中所述容器是瓶。

57.实例56的方法，其中所述瓶是高密度丙基乙烯瓶。

58.实例55的方法，其中所述容器还包括干燥剂包以控制所述容器的水分含量。

VIII.结论

除非上下文明确要求，否则在整个说明书和权利要求书中，词语“包括”、“包含”等应以包括的意义来解释，而不是排除或穷尽意义；也就是说，在“包括但不限于”的意义上。使用单数或复数的词也分别包括复数或单数。另外，当在本申请中使用时，词语“本文”、“上文”和“下文”以及类似含义的词语应当是指本申请的整体，而不是本申请的任何特定部分。

本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地和单独地指明通过引用并入。

本公开的实施方案的描述不旨在穷举或将本公开限于所公开的精确形式。虽然为了说明的目的在此描述了本公开的具体实施方案和实施例，但是如相关领域的技术人员将认识到的，在本公开的范围内的各种等同修改是可能的。例如，虽然以给定的顺序呈现了处理步骤、制剂组分或功能，但是可选实施方案可以包括不同顺序或基本上同时的这些。本文提供的本公开的教导可以应用于其他组合物，而不仅仅是本文所述的组合物。本文所述的各种实施方案可以组合以提供另外的实施方案。

任何前述实施方案的具体元素可以组合或替代其他实施方案中的元素。此外，虽然与本公开的某些实施方案相关联的方面已经在这些实施方案的背景中进行了描述，但是其他实施方案也可以展示这样的方面，并且并非所有实施方案都需要展现这样的方面以落入本公开的范围内。因此，除了所附权利要求书之外，本公开不受限制。

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种稳定药物制剂，其包含干燥的卵清蛋白粉、稀释剂、填充剂和助流剂和/或润滑剂。

2.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其包含：a)约0.1％至90％(w/w)的卵清蛋白；b)约40％-90％的稀释剂；c)约1％-30％的填充剂；d)约0.01％-10％的润滑剂或助流剂；和e)胶囊壳或小袋。

3.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述卵清蛋白粉中的卵清蛋白的水平在所述药物制剂中稳定约3、6、9、11或36个月。

4.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白中的一种或多种的浓度在所述药物制剂中稳定约3、6、9或11或36个月。

5.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的稀释剂：藻酸及其盐；纤维素衍生物；微晶葡萄糖；直链淀粉；硅酸镁铝；多糖酸；膨润土；明胶；聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物；交联聚维酮；聚维酮；淀粉；预胶化淀粉；黄芪胶；糊精、糖；磷酸二钙；天然或合成树胶、聚乙烯吡咯烷酮、落叶松阿拉伯半乳聚糖、聚乙二醇、蜡、藻酸钠、淀粉、羟乙酸淀粉钠、交联淀粉；交联聚合物；交联聚乙烯吡咯烷酮；藻酸盐；粘土；羟乙酸淀粉钠；膨润土；天然海绵；表面活性剂；树脂；柑橘浆；十二烷基硫酸钠；和淀粉组合的十二烷基硫酸钠；及其组合。

6.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的润滑剂：硬脂酸、氢氧化钙、滑石、玉米淀粉、硬脂酰富马酸钠、碱金属盐和碱土金属盐、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇(PEG)、甲氧基聚乙二醇、丙二醇、油酸钠、山嵛酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、苯甲酸甘油酯、月桂基硫酸镁、月桂基硫酸钠及其组合。

7.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的填充剂：乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉、葡萄糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨醇、氯化钠、聚乙二醇及其组合。

8.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述卵清蛋白在约0.1％至21％(w/w)的范围内。

9.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其包含约0.1％蛋清蛋白。

10.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述卵清蛋白的重量范围为每个胶囊或小袋约0.2mg至约1000mg。

11.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其包含约0.2mg卵清蛋白。

12.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其包含约1.0mg卵清蛋白。

13.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其包含约10.0mg卵清蛋白。

14.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其包含约100.0mg卵清蛋白。

15.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其包含约200.0mg卵清蛋白。

16.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其包含约1000.0mg卵清蛋白。

17.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述稀释剂是Prosolv。

18.根据权利要求17所述的稳定药物制剂，其中所述Prosolv是Prosolv SMCC 50和Prosolv HD90的组合。

19.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述填充剂是甘露糖醇。

20.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述润滑剂是硬脂酸镁。

21.根据权利要求1所述的稳定药物制剂，其中所述助流剂是滑石。

22.一种稳定药物制剂，其包含：a)约0.1％至50％(w/w)的卵清蛋白；b)约40％-90％的Prosolv SMCC 50和/或Prosolv HD90；c)约1％-30％的甘露糖醇；d)约0.01％-10％的硬脂酸镁和/或滑石；和e)胶囊壳或小袋。

23.一种鉴定用于治疗受试者中的蛋过敏的药物制剂的方法，其包括：a)通过一种或多种分析方法确定卵清蛋白组合物中卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的浓度；b)将所述蛋白质的浓度与参考标准的浓度进行比较；以及c)鉴定用于治疗受试者中的蛋过敏的组合物，其中所述组合物包含至少为所述参考标准的卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的浓度。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述分析方法是尺寸排阻色谱法。

Claims (24)

1.一种药物制剂，其包含干燥的卵清蛋白粉、稀释剂、填充剂和助流剂和/或润滑剂。

2.根据权利要求1所述的药物制剂，其包含：a)约0.1％至90％(w/w)的卵清蛋白；b)约40％-90％的稀释剂；c)约1％-30％的填充剂；d)约0.01％-10％的润滑剂或助流剂；和e)胶囊壳或小袋。

3.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述卵清蛋白粉中的卵清蛋白的水平在所述药物制剂中稳定约3、6、9、11或36个月。

4.根据权利要求1所述的药物制剂，其中卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白中的一种或多种的浓度在所述药物制剂中稳定约3、6、9或11或36个月。

5.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的稀释剂：藻酸及其盐；纤维素衍生物；微晶葡萄糖；直链淀粉；硅酸镁铝；多糖酸；膨润土；明胶；聚乙烯吡咯烷酮/乙酸乙烯酯共聚物；交联聚维酮；聚维酮；淀粉；预胶化淀粉；黄芪胶；糊精、糖；磷酸二钙；天然或合成树胶、聚乙烯吡咯烷酮、落叶松阿拉伯半乳聚糖、聚乙二醇、蜡、藻酸钠、淀粉、羟乙酸淀粉钠、交联淀粉；交联聚合物；交联聚乙烯吡咯烷酮；藻酸盐；粘土；羟乙酸淀粉钠；膨润土；天然海绵；表面活性剂；树脂；柑橘浆；十二烷基硫酸钠；和淀粉组合的十二烷基硫酸钠；及其组合。

6.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的润滑剂：硬脂酸、氢氧化钙、滑石、玉米淀粉、硬脂酰富马酸钠、碱金属盐和碱土金属盐、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、聚乙二醇(PEG)、甲氧基聚乙二醇、丙二醇、油酸钠、山嵛酸甘油酯、棕榈酸硬脂酸甘油酯、苯甲酸甘油酯、月桂基硫酸镁、月桂基硫酸钠及其组合。

7.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述制剂包含一种或多种选自由以下组成的组的填充剂：乳糖、碳酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、硫酸钙、微晶纤维素、纤维素粉、葡萄糖、葡萄糖结合剂、葡聚糖、淀粉、预胶化淀粉、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨醇、氯化钠、聚乙二醇及其组合。

8.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述卵清蛋白在约0.1％至21％(w/w)的范围内。

9.根据权利要求1所述的药物制剂，其包含约0.1％蛋清蛋白。

10.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述卵清蛋白的重量范围为每个胶囊或小袋约0.2mg至约1000mg。

11.根据权利要求1所述的药物制剂，其包含约0.2mg卵清蛋白。

12.根据权利要求1所述的药物制剂，其包含约1.0mg卵清蛋白。

13.根据权利要求1所述的药物制剂，其包含约10.0mg卵清蛋白。

14.根据权利要求1所述的药物制剂，其包含约100.0mg卵清蛋白。

15.根据权利要求1所述的药物制剂，其包含约200.0mg卵清蛋白。

16.根据权利要求1所述的药物制剂，其包含约1000.0mg卵清蛋白。

17.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述稀释剂是Prosolv。

18.根据权利要求17所述的药物制剂，其中所述Prosolv是ProsolvSMCC 50和ProsolvHD90的组合。

19.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述填充剂是甘露糖醇。

20.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述润滑剂是硬脂酸镁。

21.根据权利要求1所述的药物制剂，其中所述助流剂是滑石。

22.一种药物制剂，其包含：a)约0.1％至50％(w/w)的卵清蛋白；b)约40％-90％的Prosolv SMCC 50和/或Prosolv HD90；c)约1％-30％的甘露糖醇；d)约0.01％-10％的硬脂酸镁和/或滑石；和e)胶囊壳或小袋。

23.一种鉴定用于治疗受试者中的蛋过敏的药物制剂的方法，其包括：a)通过一种或多种分析方法确定卵清蛋白组合物中卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的浓度；b)将所述蛋白质的浓度与参考标准品的浓度进行比较；以及c)鉴定用于治疗受试者中的蛋过敏的组合物，其中所述组合物包含至少为所述参考标准品的卵类粘蛋白、卵白蛋白和溶菌酶蛋白的浓度。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述分析方法是尺寸排阻色谱法。