CN106474155B - 含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂及其制备方法和用途 - Google Patents

含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂及其制备方法和用途，含有人脐带间充质干细胞提取物和凝胶溶液，其中人脐带间充质干细胞提取物为饥饿培养后的提取物，凝胶溶液含有海藻酸钠和复方电解质注射液，并含有保湿剂、透皮吸收促进剂，使其形成稳定均一的凝胶状物质。可用于制备治疗皮肤溃疡、烧伤、烫伤、湿疹、外伤等疾病的药物。

Description

含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂及其制备方 法和用途
技术领域
本发明涉及干细胞提取物制剂，尤其一种含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂及其制备方法和用途。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。它们具有自我更新能力、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如：脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，此外还能够向及其它胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞\血管内皮细胞分化。
间充质干细胞培养体系中含有多种大量的活性成分，如：干细胞生长因子(SCF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、内皮细胞生长因子(VEGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、细胞集落刺激因子、白细胞介素(IL)、胶原蛋白、透明质酸等80余种活性物质。目前，也已经有将间充质干细胞应用于病人的报道，在深度烧伤的患者的创面涂布自体的间充质干细胞悬液，能够促进皮肤再生和血管的新生。但是由于活性细胞的存活条件比较苛刻，很容易死亡因此由活细胞所起的作用也会大打折扣。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种活性稳定的含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂及其制备方法和用途，利用干细胞分泌的多种细胞因子为治疗皮肤损伤等疾病提供了安全、有效、使用方便的治疗药物。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂，按照体积份数，包括以下成分：
人脐带间充质干细胞提取物 占总体积的50％
凝胶溶液 占总体积的50％
外用凝胶制剂的pH值为6.0-8.0；
其中，每100ml凝胶溶液中,包括以下成分：
人脐带间充质干细胞提取物是将人脐带间充质干细胞按照饥饿培养的方法进行培养得到的，饥饿时间为12-24小时。
所述药用高分子稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖和羟乙基淀粉中的一种。
所述保湿剂为丙二醇或甘油。
所述复方电解质注射液为中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖MG3注射液。
所述透皮吸收促进剂为二甲基亚砜。
上述含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)人脐带间充质干细胞提取物制备：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO2进行培养，待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养12-24小时，待细胞生长程度达到90％-95％后，收取细胞培养上清3000-4500g条件下离心5-8min，以0.22um滤膜过滤，按照质量体积比2％-4％加入人血清白蛋白，混合均匀后待用；
(2)凝胶溶液制备：按配比，将药用高分子稳定剂、保湿剂、透皮吸收促进剂,溶于复方电解质溶液中，配制成均一的凝胶溶液待用；
(3)制备外用凝胶制剂：按体积比，凝胶溶液:人脐带间充质干细胞提取物＝1:1的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到预充注射器中，放到-80℃冰箱中冻存待用。
上述含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂在制备治疗皮肤溃疡、烧伤、烫伤、湿疹、外伤药物中的用途。
本发明的有益效果是：将凝胶添加到细胞提取物中，使得细胞分泌的各种活性成分都得到了保存和利用，而且存活的时间可以更长，可达到长时间促进表皮细胞增长，可以缩短创口的愈合时间，并起到消除炎症，促进经久不愈的溃疡愈合的等作用。
附图说明
图1为本发明的方法培养的间充质干细胞图；
图2为不同饥饿时间提取物中有效因子分泌量比较图。
具体实施方式
下面结合附图与具体实施方案对本发明进一步说明，其具体实施方案应该理解为仅为举例说明，不是限定性的，不能以下述举例说明来限定本发明的保护范围。
本发明的含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂，按照体积份数，包括以下成分：
人脐带间充质干细胞提取物 占总体积的50％
凝胶溶液 占总体积的50％
外用凝胶制剂的pH值为6.0-8.0；
其中，每100ml凝胶溶液中,包括以下成分：
人脐带间充质干细胞提取物是将人脐带间充质干细胞按照饥饿培养的方法进行培养得到的，饥饿时间为12-24小时。
所述药用高分子稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖和羟乙基淀粉中的一种。
所述保湿剂为丙二醇或甘油。
所述复方电解质注射液为中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖MG3注射液。
所述透皮吸收促进剂为二甲基亚砜。
上述含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)人脐带间充质干细胞提取物制备：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO2进行培养，待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养12-24小时，待细胞生长程度达到90％-95％后，收取细胞培养上清3000-4500g条件下离心5-8min，以0.22um滤膜过滤，按照质量体积比2％-4％加入人血清白蛋白，混合均匀后待用；
(2)凝胶溶液制备：按配比，将药用高分子稳定剂、保湿剂、透皮吸收促进剂,溶于复方电解质溶液中，配制成均一的凝胶溶液待用；
(3)制备外用凝胶制剂：按体积比，凝胶溶液:人脐带间充质干细胞提取物＝1:1的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到预充注射器中，放到-80℃冰箱中冻存待用。
上述含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂在制备治疗皮肤溃疡、烧伤、烫伤、湿疹、外伤药物中的用途。
本发明，脐带间充质干细胞在培养过程中会分泌多种大量的细胞因子，这些细胞因子能够深入皮肤基底层，促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生长，从而促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，减少疤痕组织的产生；可调节局部组织微环境，促进血管新生，改善局部供血，从而达到缓解缺血症状、促进组织新生的效果；还可调节局部组织的免疫功能，减少创面组织的细菌感染及炎症反应。
实施例1
(1)人脐带间充质干细胞提取物：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO2进行培养，待细胞生长程度达到70％-80％(见图1)，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养12小时，待细胞生长程度达到90％--95％后，收取细胞培养上清3000g条件下离心8min，以0.22um滤膜过滤，按照质量体积比2％加入人血清白蛋白，混合均匀后待用；
(2)凝胶溶液制备：按配比，将药用高分子稳定剂海藻酸钠2.5g，无菌的保湿剂丙二醇5ml,透皮吸收促进剂二甲基亚砜5ml,溶于90ml复方电解质溶液中，配制成均一的凝胶溶液待用；
(3)制备外用凝胶制剂：按体积比凝胶溶液：人来源活间充质干细胞提取物＝1:1的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到预充注射器中，放到-80℃冰箱中冻存待用。
实施例2
(1)人脐带间充质干细胞提取物：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO2进行培养，待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养12小时，待细胞生长程度达到90％--95％后，收取细胞培养上清4000g条件下离心6min，以0.22um滤膜过滤，按照质量体积比3％加入人血清白蛋白，混合均匀后待用；
(2)凝胶溶液制备：按配比，将药用高分子稳定剂透明质酸钠5g，无菌的保湿剂丙二醇7.5ml,透皮吸收促进剂二甲基亚砜7.5ml,溶于85ml复方电解质溶液中，配制成均一的凝胶溶液待用；
(3)制备外用凝胶制剂：按体积比凝胶溶液：人来源活间充质干细胞提取物＝1:1的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到预充注射器中，放到-80℃冰箱中冻存待用。
实施例3
(1)人脐带间充质干细胞提取物：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO2进行培养，待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养24小时(见图2)，待细胞生长程度达到90％--95％后，收取细胞培养上清4500g条件下离心5min，以0.22um滤膜过滤，按照质量体积比4％加入人血清白蛋白，混合均匀后待用；
(2)凝胶溶液制备：按配比，将药用高分子稳定剂壳聚糖10g，无菌的保湿剂甘油10ml,透皮吸收促进剂二甲基亚砜10ml,溶于80ml复方电解质溶液中，配制成均一的凝胶溶液待用；
(3)制备外用凝胶制剂：按体积比凝胶溶液：人来源活间充质干细胞提取物＝1:1的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到预充注射器中，放到-80℃冰箱中冻存待用。
实施例4
(1)人脐带间充质干细胞提取物：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO2进行培养，待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养24小时，待细胞生长程度达到90％--95％后，收取细胞培养上清4500g条件下离心5min，以0.22um滤膜过滤，按照质量体积比4％加入人血清白蛋白，混合均匀后待用；
(2)凝胶溶液制备：按配比，将药用高分子稳定剂羟乙基淀粉10g，无菌的保湿剂甘油10ml,透皮吸收促进剂二甲基亚砜10ml,溶于80ml复方电解质溶液中，配制成均一的凝胶溶液待用；
(3)制备外用凝胶制剂：按体积比凝胶溶液：人来源活间充质干细胞提取物＝1:1的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到预充注射器中，放到-80℃冰箱中冻存待用。
对比实验
(1)选取7周龄的SD大鼠12只，平均分为3组，①空白组；②阴性对照组；③实验组制备大鼠皮损模型，皮损面积为直径2厘米的伤口。
(2)造模成功后，按照①空白组在皮损部位涂抹生理盐水；②阴性对照组涂抹未添加细胞提取物的海藻酸钠凝胶；③实验组涂抹实施例1制得的细胞提取物凝胶，进行治疗，分别在给药后的第1、3、5、7、9、11、13天对伤口的直径进行测量，并统计。
(3)数据分析，分析各实验组伤口愈合的时间差异。
表1动物实验伤口愈合统计表
综上所述，本发明的内容并不局限在上述的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。

Claims (7)

1.一种含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂，其特征在于，按照体积份数，包括以下成分：
人脐带间充质干细胞提取物 占总体积的50％
凝胶溶液 占总体积的50％
外用凝胶制剂的pH值为6.0-8.0；
其中，每100ml凝胶溶液中,包括以下成分：
所述人脐带间充质干细胞提取物制备：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/F12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO2进行培养，待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养12-24小时，待细胞生长程度达到90％-95％后，收取细胞培养上清3000-4500g条件下离心5-8min，以0.22um滤膜过滤，按照质量体积比2％-4％加入人血清白蛋白，混合均匀后待用。
2.根据权利要求1所述的含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂，其特征在于，所述药用高分子稳定剂为海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖和羟乙基淀粉中的一种。
3.根据权利要求1所述的含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂，其特征在于，所述保湿剂为丙二醇或甘油。
4.根据权利要求1所述的含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂，其特征在于，所述复方电解质注射液为中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖MG3注射液。
5.根据权利要求1所述的含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂，其特征在于，所述透皮吸收促进剂为二甲基亚砜。
6.如权利要求1-5任一项所述含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)人脐带间充质干细胞提取物制备：从细胞库中选取细胞进行复苏，用无酚红DMEM/F12和体积比浓度为10％胎牛血清做完全培养基，T75细胞培养瓶在37℃，5％CO2进行培养，待细胞生长程度达到70％-80％，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养12-24小时，待细胞生长程度达到90％-95％后，收取细胞培养上清3000-4500g条件下离心5-8min，以0.22um滤膜过滤，按照质量体积比2％-4％加入人血清白蛋白，混合均匀后待用；
(2)凝胶溶液制备：按配比，将药用高分子稳定剂、保湿剂、透皮吸收促进剂,溶于复方电解质溶液中，配制成均一的凝胶溶液待用；
(3)制备外用凝胶制剂：按体积比，凝胶溶液:人脐带间充质干细胞提取物＝1:1的比例进行混合，直到混合均匀后，分装到预充注射器中，放到-80℃冰箱中冻存待用。
7.如权利要求1-5任一项所述含有人脐带间充质干细胞提取物的外用凝胶制剂在制备治疗皮肤溃疡、烧伤、烫伤、湿疹、外伤药物中的用途。
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