CN107137339A - 基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜及其制备方法 - Google Patents

基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜及其制备方法，人间充质干细胞在培养过程中会分泌多种大量的细胞因子，这些细胞因子能够深入皮肤基底层促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生长，促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，促进老化细胞的清除以及细胞的新生，从而保持和恢复肌肤的年轻态，淡化色素沉着。相比于传统的身体霜，基于间充质干细胞分泌的活性因子的身体霜能够从根本上解决全身肌肤的老化问题，并且无毒副作用。本发明中人间充质干细胞分泌物为重复饥饿培养后提取，含有复方电解质注射液等成份。可用于各种原因引起的全身皮肤老化问题的缓解和修复。

Description

基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜及其制 备方法
技术领域
本发明涉及干细胞提取物，尤其是一种基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜及其制备方法。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。它们具有自我更新能力、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如：脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，此外还能够向及其它胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞、血管内皮细胞分化。
间充质干细胞培养体系中含有多种大量的活性成分，如：干细胞生长因子(SCF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、内皮细胞生长因子(VEGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、细胞集落刺激因子、白细胞介素(IL)、胶原蛋白、透明质酸等80余种活性物质。身体霜基础配方成分中，另外添加促进皮肤修复的寡肽-1能促进细胞的增殖分化，以新生细胞代替衰老细胞和死亡细胞，使肌肤保持最佳生理状态，是决定肌肤活力和健康的源泉，寡肽-2能够促进成纤维细胞增殖分化，具有深层修复作用，可用于新产生的痘坑、激光后、点斑点痣祛痘后修复，红血丝修复。调理肤质：改善细胞生长的内环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，调理肌肤纹理，还原肤色红润光泽，使皮肤柔软润滑、富有弹性，寡肽-5能够促进表皮角质细胞生长，修复受损细胞，加速细胞的新陈代谢，增加皮肤的免疫力和抵抗力，使肌肤回复健康，亮白状态。可用于皮肤的紧致修复，解决各种皮肤问题。目前，已经有将间充质干细胞分泌的活性因子应用于皮肤的修复及治疗的报道。但是用于修复面部以及身体各种皮肤问题的化妆品没有报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜及其制备方法，用高浓度的间充质干细胞分泌的多种细胞因子用于皮肤各种问题的修复、保湿，使皮肤细腻有光泽。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜的制备方法，包括以下步骤:
(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2-P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；培养细胞所用完全培养基为无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)第一批次细胞融合度达到70％-80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养12-24小时后，第一批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养12-24小时后，第二批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养12-24小时后，第三批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清,得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)高浓度间充质干细胞提取物与身体霜基础配方液按照质量比1:5到1:100配比得到身体霜；
所述身体霜基础配方液的配方如下，百分比为质量百分比：
所述人间充质干细胞包括人脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞。
上述的制备方法制得的基于人间充质干细胞分泌活性因子的身体霜。
本发明有益效果：将细胞进行饥饿培养，使得细胞分泌的各种活性成分的浓度都得到了提高，并且在短时间内使用饥饿上清重复饥饿间充质干细胞，使细胞提取物浓度进一步增加。而高浓度的间充质干细胞提取物可促进内膜组织分化、血管新生、肉芽组织生长，促使损伤皮肤组织结构再生修复，减少疤痕结缔组织的产生，调节皮肤免疫微环境，减少创面组织的细菌感染及炎症反应，另外添加促进皮肤修复的寡肽能更好的解决肌肤问题。
附图说明
图1为本发明的方法培养的间充质干细胞图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明：
本发明的基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜的制备方法，包括以下步骤:
(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2-P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；培养细胞所用完全培养基为无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)第一批次细胞融合度达到70％-80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养12-24小时后，第一批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养12-24小时后，第二批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养12-24小时后，第三批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清,得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)高浓度间充质干细胞提取物与身体霜基础配方液按照质量比1:5到1:100配比得到身体霜；
所述身体霜基础配方液的配方如下，百分比为质量百分比：
所述人间充质干细胞包括人脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞。
上述的制备方法制得的基于人间充质干细胞分泌活性因子的身体霜。
本发明间充质干细胞在培养过程中会分泌多种细胞因子，这些人间充质干细胞分泌的活性细胞因子能够促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，减少疤痕组织的产生；可调节局部组织微环境，促进血管新生，改善局部供血，从而达到缓解缺血症状、促进组织新生的效果；还可调节局部组织的免疫功能，减少创面组织的细菌感染及炎症反应，对于皮肤状态的调节，皮肤各种问题的解决修复有很好的效果。
其中人间充质干细胞活性因子为饥饿培养后提取，其余成分为身体霜基础配方成分，另外添加促进皮肤修复的寡肽-1能促进细胞的增殖分化，以新生细胞代替衰老细胞和死亡细胞，使肌肤保持最佳生理状态，是决定肌肤活力和健康的源泉，寡肽-2能够促进成纤维细胞增殖分化，具有深层修复作用，可用于新产生的痘坑、激光后、点斑点痣祛痘后修复，红血丝修复。调理肤质：改善细胞生长的内环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，调理肌肤纹理，还原肤色红润光泽，使皮肤柔软润滑、富有弹性，寡肽-5能够促进表皮角质细胞生长，修复受损细胞，加速细胞的新陈代谢，增加皮肤的免疫力和抵抗力，使肌肤回复健康，亮白状态。可用于皮肤的紧致修复，解决各种皮肤问题。
实施例1
(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取P4的人脐带间充质干细胞复苏。接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的60％(每瓶接种细胞数：9*106,接种细胞十瓶)、40％(每瓶接种细胞数：6*106，接种细胞十瓶)、20％(接种细胞数：3*106，接种细胞十瓶),培养体系均为40ml。培养细胞所用完全培养基为无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清，接种细胞瓶为T-175培养瓶。细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)培养30小时,此时第一批次细胞融合度达到75％时，见(图1)，以生理盐水清洗细胞2次，每瓶用40ml复方电解质注射液(中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖MG3注射液)进行饥饿培养；
(3)饥饿培养18小时后，第一批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清放于4℃备用；
(4)取培养的第二批次细胞，此时细胞融合度达到70％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，每瓶用步骤(3)中细胞培养上清40ml进行饥饿培养；
(5)饥饿培养18小时后，第二批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清放于4℃备用；
(6)取培养的第三批次细胞，此时细胞融合度达到70％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，每瓶用步骤(5)中细胞培养上清40ml进行饥饿培养；
(7)饥饿培养24小时后，第三批次细胞融合度达90％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清,得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)高浓度间充质干细胞提取物与身体霜基础配方液按照质量比1:49配比得到身体霜。
身体霜基础配方液为：
实施例2
(1)人脂肪间充质干细胞培养：从细胞库中选取P3的人脂肪间充质干细胞复苏。接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的60％(每瓶接种细胞数：9*106,接种细胞十瓶)、40％(每瓶接种细胞数：6*106，接种细胞十瓶)、20％(接种细胞数：3*106，接种细胞十瓶),培养体系均为40ml。培养细胞所用完全培养基为无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清，接种细胞瓶为T-175培养瓶。细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)培养24小时,此时第一批次细胞融合度达到75％时，见(图1)，以生理盐水清洗细胞2次，每瓶用40ml复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养20小时后，第一批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清放于4℃备用；
(4)取培养的第二批次细胞，此时细胞融合度达到70％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，每瓶用步骤(3)中细胞培养上清40ml进行饥饿培养；
(5)饥饿培养20小时后，第二批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清放于4℃备用；
(6)取培养的第三批次细胞，此时细胞融合度达到70％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，每瓶用步骤(5)中细胞培养上清40ml进行饥饿培养；
(7)饥饿培养20小时后，第三批次细胞融合度达90％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清,得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)高浓度间充质干细胞提取物与身体霜基础配方液按照质量比1:60配比得到身体霜。
身体霜基础配方液为：
实施例3
(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取P6的人脐带间充质干细胞复苏。接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的60％(每瓶接种细胞数：9*106,接种细胞十瓶)、40％(每瓶接种细胞数：6*106，接种细胞十瓶)、20％(接种细胞数：3*106，接种细胞十瓶),培养体系均为40ml。培养细胞所用完全培养基为无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清，接种细胞瓶为T-175培养瓶。细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)培养30小时,此时第一批次细胞融合度达到75％时，见(图1)，以生理盐水清洗细胞2次，每瓶用40ml复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养18小时后，第一批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清放于4℃备用；
(4)取培养的第二批次细胞，此时细胞融合度达到70％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，每瓶用步骤(3)中细胞培养上清40ml进行饥饿培养；
(5)饥饿培养18小时后，第二批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清放于4℃备用；
(6)取培养的第三批次细胞，此时细胞融合度达到70％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，每瓶用步骤(5)中细胞培养上清40ml进行饥饿培养；
(7)饥饿培养24小时后，第三批次细胞融合度达90％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心8min除去沉淀，取离心后上清,得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)高浓度间充质干细胞提取物与身体霜基础配方液按照质量比1:80配比得到身体霜。
身体霜基础配方液为：
制备的基于细胞饥饿培养的活性细胞因子的身体霜可用于皮肤的修复、保湿以及促进皮肤的新陈代谢解决各种皮肤问题。
例1，向XX，女性，47岁，由于平时只注重脸部保养，而忽视了身体的护理，导致皮肤干燥，颈部有几条比较淡的小细纹，经朋友介绍使用了这款身体霜，使用一个月后，小细纹明显变淡，皮肤干燥问题得到解决，连续使用三个月以后颈纹淡到几乎看不到。
例2，游XX，女性，32岁，由于刚刚生完二胎，腹部妊娠纹特别明显，而且面积较大，分布不均。修完产假出来工作时正好为夏天，由于日晒的因素更加重了妊娠斑的颜色，开始使用各种大牌子的美白产品，效果甚微。偶然的机会了解了本款产品，抱着试试看的态度使用大约5周，妊娠斑明显变淡。大约两个月后妊娠斑几乎消失。
综上所述，本发明的内容并不局限在上述的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。

Claims (3)

1.一种基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2-P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；培养细胞所用完全培养基为无酚红DMEM/DF12和体积比浓度为10％胎牛血清；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)第一批次细胞融合度达到70％-80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养12-24小时后，第一批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养12-24小时后，第二批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养12-24小时后，第三批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清,得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)高浓度间充质干细胞提取物与身体霜基础配方液按照质量比1:5到1:100配比得到身体霜；
所述身体霜基础配方液的配方如下，百分比为质量百分比：
2.根据权利要求1所述基于人间充质干细胞分泌的活性因子提取物的身体霜的制备方法，其特征在于，所述人间充质干细胞包括人脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞。
3.如权利要求1或2所述的制备方法制得的基于人间充质干细胞分泌活性因子的身体霜。
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