CN107028793A - 一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液及其制备方法 - Google Patents

一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种含有人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液及其制备方法，人间充质干细胞在培养过程中会分泌多种大量的细胞因子，这些细胞因子能够深入皮肤基底层促进皮肤组织分化、血管新生以及肉芽组织的生长，促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，促进老化细胞的清除以及细胞的新生，从而保持和恢复肌肤的年轻态。本发明中人间充质干细胞活性因子为饥饿培养后提取，其余成分为修复原液基础配方成分，另外添加促进皮肤修复的寡肽‑1、寡肽‑2、寡肽‑5，可用于皮肤的紧致修复，解决各种皮肤问题。

Description

一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液及其制备 方法
技术领域
本发明涉及干细胞提取物，尤其是一种基于人间充质干细胞分泌的活性因子修复原液及其制备方法。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。它们具有自我更新能力、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如：脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，此外还能够向其它胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞/血管内皮细胞分化。
间充质干细胞培养体系中含有多种大量的活性成分，如：干细胞生长因子(SCF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、内皮细胞生长因子(VEGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、细胞集落刺激因子、白细胞介素(IL)、胶原蛋白、透明质酸等80余种活性物质。修复原液基础配方成分，另外添加促进皮肤修复的寡肽-1能促进细胞的增殖分化，以新生细胞代替衰老细胞和死亡细胞，使肌肤保持最佳生理状态，是决定肌肤活力和健康的源泉，寡肽-2能够促进成纤维细胞增殖分化，具有深层修复作用，可用于新产生的痘坑、激光后、点斑点痣祛痘后修复，红血丝修复。调理肤质：改善细胞生长的内环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，调理肌肤纹理，还原肤色红润光泽，使皮肤柔软润滑、富有弹性，寡肽-5能够促进表皮角质细胞生长，修复受损细胞，加速细胞的新陈代谢，增加皮肤的免疫力和抵抗力，使肌肤回复健康，亮白状态。可用于皮肤的紧致修复，解决各种皮肤问题。目前，已经有将间充质干细胞分泌的活性因子应用于皮肤的修复及治疗的报道。但是用于化妆品中用于修复面部以及身体各种皮肤问题的修复未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种具有高效修复活性的基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液及其制备方法，利用干细胞分泌的多种细胞因子用于皮肤各种问题的修复、保湿，使皮肤细腻有光泽。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液的制备方法，包括以下步骤：
(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2-P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)第一批次细胞融合度达到70％-80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养12-24小时后，第一批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养12-24小时后，第二批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养12-24小时后，第三批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)间充质干细胞提取物与修复原液按比例进行配比，按体积比，提取物：修复原液为1:0.5～4；
所述修复原液的配方如下，百分比为质量百分比：
上述的基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液的制备方法制得的修复原液。
本发明的有益效果是：将细胞进行饥饿培养，使得细胞分泌的各种活性成分的浓度都得到了提高，可促进皮肤的损伤修复，并起到消除炎症，促进皮肤新陈代谢等作用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明：
本发明的基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液的制备方法，包括以下步骤：
(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2-P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)第一批次细胞融合度达到70％-80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养12-24小时后，第一批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养12-24小时后，第二批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养12-24小时后，第三批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)间充质干细胞提取物与修复原液按比例进行配比，按体积比，提取物：修复原液为1:0.5～4；
所述修复原液的配方如下，百分比为质量百分比：
上述的基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液的制备方法制得的修复原液。
制备的基于细胞饥饿培养的活性细胞因子的修复原液可用于皮肤的修复、保湿以及促进皮肤的新陈代谢解决各种皮肤问题。
本发明间充质干细胞在培养过程中会分泌多种大量的细胞因子，这些人间充质干细胞分泌的活性细胞因子能够促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，减少疤痕组织的产生；可调节局部组织微环境，促进血管新生，改善局部供血，从而达到缓解缺血症状、促进组织新生的效果；还可调节局部组织的免疫功能，减少创面组织的细菌感染及炎症反应，对于皮肤状态的调节，皮肤各种问题的解决修复有很好的效果。
其中人间充质干细胞活性因子为饥饿培养后提取，其余成分为修复原液基础配方成分，另外添加促进皮肤修复的寡肽-1能促进细胞的增殖分化，以新生细胞代替衰老细胞和死亡细胞，使肌肤保持最佳生理状态，是决定肌肤活力和健康的源泉，寡肽-2能够促进成纤维细胞增殖分化，具有深层修复作用，可用于新产生的痘坑、激光后、点斑点痣祛痘后修复，红血丝修复。调理肤质：改善细胞生长的内环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，调理肌肤纹理，还原肤色红润光泽，使皮肤柔软润滑、富有弹性，寡肽-5能够促进表皮角质细胞生长，修复受损细胞，加速细胞的新陈代谢，增加皮肤的免疫力和抵抗力，使肌肤回复健康，亮白状态。可用于皮肤的紧致修复，解决各种皮肤问题。
实施例1
(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2的人脐带间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的60％、40％、30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳浓度体积比浓度5％；
(2)20小时后，第一批次细胞融合度达到70％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液(中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖MG3注射液)进行饥饿培养；
(3)饥饿培养24小时后，第一批次细胞融合度达90％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到75％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养24小时后，第二批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到75％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养24小时后，第三批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物。
(8)干细胞活性因子提取物与修复原液基础配方按照一定的比例进行配比，比例为体积比按照提取物：基础配方为1:1，修复原液基础配方为：
名称 原料质量百分比范围
注射用水 96.8
胶原蛋白液 1.5
透明质酸 1.5
寡肽1 0.1
寡肽2 0.05
寡肽5 0.05
实施例2
(1)人脂肪间充质干细胞培养：从细胞库中选取P4的人脂肪间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的60％、40％、30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳浓度体积比浓度5％；
(2)24小时后，第一批次细胞融合度达到70％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养24小时后，第一批次细胞融合度达90％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到75％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养24小时后，第二批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到75％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养24小时后，第三批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物。
(8)干细胞活性因子提取物与修复原液基础配方按照一定的比例进行配比，比例为体积比按照提取物：基础配方为1:2，修复原液基础配方为：
名称 原料质量百分比范围
注射用水 95.8
胶原蛋白液 2
透明质酸 2
寡肽1 0.1
寡肽2 0.05
寡肽5 0.05
实施例3
(1)人脐带间充质干细胞培养：从细胞库中选取P6的人脐带间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的65％、45％、35％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳浓度体积比浓度5％；
(2)20小时后，第一批次细胞融合度达到70％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养24小时后，第一批次细胞融合度达90％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到75％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养24小时后，第二批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到75％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养24小时后，第三批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物。
(8)干细胞活性因子提取物与修复原液基础配方按照一定的比例进行配比，比例为体积比按照提取物：基础配方为1:0.5，修复原液基础配方为：
例1，黄XX,女性，30岁，时尚达人，皮肤本身是比较好的，但一直受痘痘的困扰，额头总是飙生闭口，刚长的时候还略微有点泛红，不冒白头也没法挤出来，一直尝试着不同的产品与方式进行治疗，但都没得到根本的解决，不是没有效果就是好一段时间后总会复发，依赖性强，自从通过微针导入修复原液2次后，皮肤明显有光泽了，痘痘也少了，痘印也变淡，在治愈后半年痘痘没有复发的迹象。
例2，许XX，女性，46岁，平时工作压力大，经常熬夜加班，生活不规律，虽然平时也注重保养皮肤，使用各种名牌护肤产品，但也抵不住年华的逝去，眼部已经有少量较深的皱纹，经朋友介绍在眼部导入修复原液后，明显看出眼部较深的皱纹变浅了，眼部肌肤更加紧致了，人也更加有精神了，经过半年的使用大家都说我又回到了20岁时的状态了。
综上所述，本发明的内容并不局限在上述的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。

Claims (2)

1.一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2-P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)第一批次细胞融合度达到70％-80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养12-24小时后，第一批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养12-24小时后，第二批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养12-24小时后，第三批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物；
(8)间充质干细胞提取物与修复原液按比例进行配比，按体积比，提取物：修复原液为1:0.5～4；
所述修复原液的配方如下，百分比为质量百分比：
2.如权利要求1所述的基于人间充质干细胞分泌活性因子的修复原液的制备方法制得的修复原液。
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