CN106456749A - 抗SIRPα抗体和双特异性巨噬细胞增强型抗体 - Google Patents

抗SIRPα抗体和双特异性巨噬细胞增强型抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN106456749A
CN106456749A CN201580013178.2A CN201580013178A CN106456749A CN 106456749 A CN106456749 A CN 106456749A CN 201580013178 A CN201580013178 A CN 201580013178A CN 106456749 A CN106456749 A CN 106456749A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
cell
seq
cdr
sirp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201580013178.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106456749B (zh
Inventor
K·A·魏斯可夫
A·M·林
J-P·沃克曼
I·L·威斯曼
N·G·林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Leland Stanford Junior University
Original Assignee
Leland Stanford Junior University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Leland Stanford Junior University filed Critical Leland Stanford Junior University
Publication of CN106456749A publication Critical patent/CN106456749A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106456749B publication Critical patent/CN106456749B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)

Abstract

提供抗SIRPα抗体，包括多特异性抗SIRPα抗体，以及相关的组合物和方法。本发明的抗体结合至SIRPα，并能够阻断某一细胞上的CD47与吞噬细胞上的SIRPα的相互作用。对于SIRPα和第二抗原具有双特异性的抗体被称作双特异性巨噬细胞增强型(BiME)抗体，并且具有新兴的特性。主题抗SIRPα抗体可用于多种治疗方法。本发明的实施方式包括分离的抗体及其衍生物和片段，包含一种或多种所述抗SIRPα抗体的药物制剂；和产生所述抗体的细胞系。还提供了示例性抗SIRPα抗体的氨基酸序列。

Description

抗SIRPα抗体和双特异性巨噬细胞增强型抗体
背景技术
细胞更新始于凋亡程序的诱导或其它细胞变化(使其被标记为待移除)，然后由吞噬细胞(包括巨噬细胞、树突细胞等)识别标志物。该过程需要特定且选择性地移除不需要的细胞。与健康的细胞不同，不需要的/衰老的/死亡中的细胞显示称为“吃掉我(eat-me)”信号的标志物或配体，即“改变的自身(altered self)”，其可进而被吞噬细胞上的受体识别。健康的细胞可显示“别吃我(don’t eat-me)”信号，其积极地抑制吞噬作用；这些信号在死亡中的细胞中被下调，其以改变的构象存在，或它们被“吃掉我”或促噬细胞信号的上调所替代。健康细胞上的细胞表面蛋白CD47，及其在吞噬细胞受体SIRPα中的参与，构成了关键的“别吃我”信号，这可关闭由多种形式(包括凋亡细胞清除和FcR介导的吞噬作用)介导的吞食。阻断吞噬细胞上CD47介导的SIRPα参与可能会造成对于携带“吃掉我”信号的活细胞的移除。
CD47是广泛表达的跨膜糖蛋白，其具有单一Ig样结构域和五个跨膜区域，其发挥SIRPα的细胞配体的功能，其中通过SIRPα的NH2末端V样结构域介导结合。SIRPα主要在骨髓细胞上表达，包括巨噬细胞、粒细胞、骨髓树突细胞(DC)、肥大细胞，及其前体细胞，包括造血干细胞。介导CD47结合的SIRPα上的结构决定簇由Lee等.(2007)J.Immunol.179:7741-7750；Hatherley等.(2007)J.B.C.282:14567-75讨论；并且SIRPα在CD47结合中的顺式二聚化的作用由Lee等.(2010)J.B.C.285:37953-63讨论。与CD47抑制正常细胞的吞噬作用的作用一致，证据表明其在造血干细胞(HSC)和祖细胞上于它们刚迁移期之前和期间瞬时上调，并且这些细胞上的CD47水平决定了它们在体内被吞食的概率。
程序性细胞死亡(PCD)和吞噬细胞移除是机体为了移除受损的、癌前或感染的细胞而响应的常见方式。经历了该宿主响应而存活的细胞(例如，癌性细胞、慢性感染的细胞等)具有逃避PCD和/或吞噬细胞移除的经设计的方法。CD47，“别吃我”信号，在广泛的患病细胞、癌细胞和感染的细胞上组成性地上调，从而允许这些细胞逃避吞噬作用。阻断某一细胞上的CD47(例如，癌细胞、感染的细胞等)和另一细胞上的SIRPα(例如，吞噬细胞)之间的相互作用的抗CD47试剂能阻碍CD47表达的增加，并促进对癌细胞和/或感染的细胞的吞噬作用。因此，抗CD47试剂可用于治疗和/或保护以抵抗广泛的病症/紊乱。事实上，抗CD47和抗SIRPα阻断性抗体能显著增加对于癌细胞的体外和体内吞噬作用。已显示它们在治疗植入了多种人癌症(从白血病到实体瘤)的小鼠中是有效的。然而，在一些情况中，初始高剂量的抗CD47剂可能会通过结合至RBC表面上的CD47来导致小鼠和非人灵长类(NHP)模型中的剂量依赖性血红细胞(RBC)损失。该贫血的严重性可能会妨碍实现与治疗功效相关联的持续血清浓度所需的更高剂量的应用。
本发明提供抗SIRPα抗体，其阻断某一细胞(例如，癌细胞、感染的细胞等)上的CD47与另一细胞(例如，吞噬细胞)上的SIRPα的相互作用，并且促进对于CD47表达型细胞的吞噬作用。还公开了对于SIRPα和第二抗原(例如，肿瘤抗原)具有双特异性的抗体。这些双特异性巨噬细胞增强型(BiME)抗体显示增强的性质。
发明内容
提供与抗SIRPα抗体相关的组合物和方法。本发明的抗体结合至人SIRPα，并且能够阻断感兴趣的靶细胞上表达的CD47与吞噬细胞上表达的SIRPα的相互作用。该主题抗体可用于多种治疗方法。在一些情况中，本发明的抗SIRPα抗体可结合SIRPα，但不刺激表达SIRPα的细胞中的SIRPα信号转导。本发明的实施方式包括分离的抗体及其衍生物和片段、包含一种或多种所述主题抗SIRPα抗体的药物制剂；和产生这些抗SIRPα抗体的细胞系。还提供了示例性抗体的氨基酸序列。感兴趣的抗体包括提供的抗SIRPα抗体，及其变体。本发明的抗SIRPα抗体特别有利于作为用于治疗人类中的与CD47相关联的疾病(例如，癌症、慢性感染等)的试剂。
本文中提供多种抗体形式。例如，抗SIRPα抗体可以是全长嵌合或人源化抗体，例如具有任何同种型或修饰的人免疫球蛋白恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA等；或抗体片段，例如F(ab')2片段，和F(ab)片段等。包含CDR区域的片段也是感兴趣的。示例性形式还包括单链Fv物质(scFv)，其具有通过柔性肽接头共价连接的一个重链和一个轻链可变结构域。此外，所述抗体可用可检测标记物标记，固定在固相上和/或与异源性化合物偶联。所述抗体还可以双特异性或多特异性抗体形式提供，其与第二抗原具有反应性，尤其包括癌症抗原和/或慢性感染的抗原。本发明还提供组合物，其包含主题抗SIRPα抗体和结合至第二抗原(例如，癌细胞标志物、慢性感染的标志物等)的抗体。
还提供用于确定SIRPα表达型细胞的存在的方法，所述方法包括使疑似包含SIRPα表达型细胞的患者样品接触抗SIRPα抗体，和，确定所述抗体与所述样品的结合。就该应用而言，本发明提供一种试剂盒，其包含所述抗体和用于使用所述抗体的说明书。
本发明的抗体有效治疗疾病。在一些实施方式中，提供治疗方法，其包括使个体接触有效剂量的本发明抗体，其中，所述有效剂量提供本发明抗体与吞噬细胞的结合，由此增强对于表达CD47的靶细胞的吞噬作用。治疗可以是全身性或局部的，例如，通过肿瘤内注射等递送。
本发明的实施方式包括包含来自本文所述的组中的至少一个、通常至少3个CDR序列的分离抗体及其衍生物和片段，其通常联合来自人可变区的框架序列。在一些实施方式中，抗体或其衍生物或片段包含至少一个轻链，其含有本文提供的一组3个轻链CDR序列，所述轻链CDR序列位于可变区框架中，所述可变区框架可以是，但不限于，人、犬、小鼠等的可变区框架；和至少一个重链，其包含本文提供的一组3个重链CDR序列，所述重链CDR序列位于可变区框架中，所述可变区框架可以是，但不限于，人、犬、小鼠等的可变区框架或其它合适的蛋白质支架。
在其它实施方式中，所述抗体包含所提供的抗体的CDR中的一个或多个的氨基酸序列变体，所述变体包含位于CDR残基内或附近的一个或多个氨基酸插入，和/或位于CDR残基内或附近的一个或多个缺失，和/或CDR残基的一个或多个取代(其中所述一个或多个取代优选是能够产生所述变体的氨基酸变化类型)。所述变体将通常与人SIRPα具有10-5M或更好(例如，10-6M或更好、10-8M或更好等)的结合亲和性，并且能与具有本文所示那些氨基酸序列的抗体结合至相同的表位。
本发明还提供：编码所述抗体及其变体的分离的核酸；包含所述核酸的载体，所述核酸任选地操作性地连接至由转化了所述载体的宿主细胞识别的控制序列；包含所述载体的宿主细胞；用于产生所述抗体的方法，其包括培养所述宿主细胞，从而该核酸被表达，和任选地，从该宿主细胞培养物(例如从宿主细胞培养基)回收所述抗体。本发明还提供一种组合物，其包含一种或多种所述抗SIRPα抗体和药学上可接受的运载体或稀释剂。该组合物用于治疗应用时是无菌的，并且可被冻干，例如，以单位剂量与稀释剂和递送装置(例如吸入器、注射器等)的预包装(pre-pack)形式提供。
附图的简要说明
结合附图，通过以下详述更好地理解本发明。需要强调，按照惯例，附图的各个特征不成比例。相反，各种特征的尺寸被任意放大或者缩小以清楚显示。附图部分包括如下的附图。
图1A-C. KWAR23，一种单克隆CD47-阻断性抗人SIRPα抗体。(A-B)通过阻断CD47与THP-1细胞(一种SIRPα表达型细胞系，用于研究单核细胞和巨噬细胞的功能与调控)的结合的KWAR23与SIRPα的结合试验。LH和HL单体是工程改造的KWAR23scFv单体，其具有包含KWAR23CDR的轻链，该轻链通过接头连接至包含KWAR23CDR的重链(HL，N末端重链；LH，N末端轻链)。“Geo.MFI”是几何平均荧光强度比值。(C)KWAR23scFv阻断CD47结合，这通过检测CD47与SIRPα展示型酵母的结合来测试。
图2A-C描述了，在指示的抗体(西妥昔单抗、曲妥单抗或利妥昔单抗)的存在下，具有或不具有KWAR23抗体的情况中，人巨噬细胞对于癌细胞的吞噬作用。西妥昔单抗(抗EGFR，DLD-1细胞)；曲妥单抗(抗HER2，SKBR3细胞)；和利妥昔单抗(抗CD20，Raji细胞)
图3 KWAR 23增强全部人IgG同种型的功效。(A)KWAR23增强了全部测试的IgG同种型的抗CD20功效。(B)KWAR23增强了测试的抗EGFR(表皮生长因子受体)的两种同种型的功效。尽管它们都靶向EGFR，帕尼单抗(IgG2)和西妥昔单抗(IgG1)在其同种型方面存在差异。
图4A-C.双特异性巨噬细胞增强型(BiME)抗体。(A)示例性主题双特异性抗体的活性的示意图，其活性包括利用巨噬细胞上的Fc受体，活化ITAM；阻断CD47-SIRP相互作用，去除ITIM抑制；和将巨噬细胞物理交联至癌细胞。(B)示例性抗CD20(和抗SIRPα)BiME抗体的示意图。(C)对于暴露至主题抗CD20(和抗SIRPα)BiME抗体之后的Raji细胞的吞噬作用。
图5A-5B.通过FACS来证明CD20BiME的双特异性。A.通过偶联至Alexa fluor-647的抗人IgG4Fc抗体和偶联至FITC的抗利妥昔单抗抗体检测CD20BiME与表达hSIRPα的酵母的结合。B.通过抗人IgG4Fc抗体而非抗利妥昔单抗抗体检测KWAR23与表达hSIRPα的酵母的结合。
图6A-6E.抗SIRPα抗体(KWAR23)增强癌症-靶向性抗体的ADCP和ADCC。A-C.抗SIRPα抗体(KWAR23)通过人巨噬细胞增强癌症-靶向性抗体的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)：A.KWAR23+利妥昔单抗(抗CD20)，用于人淋巴瘤癌细胞(Raji)；B.KWAR23+曲妥单抗(抗Her2)，用于人乳腺癌细胞(SKBR3)；C.KWAR23+伐色珠单抗(vorsetuzumab)(抗CD70)，用于人肾细胞癌症(RCC10，TK10，Caki1)。D-E.抗SIRPα抗体(KWAR23)增强人中性粒细胞对癌症-靶向性抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)：D.KWAR23+利妥昔单抗(抗CD20)，用于人淋巴瘤癌细胞(Raji)；E.KWAR23+曲妥单抗(抗Her2)，用于人乳腺癌细胞(SKBR3)。
图7.相较于亲本癌症-靶向性抗体，双特异性巨噬细胞增强型抗体(BiME)增强ADCP和ADCC。A-C.抗SIRPα抗体(KWAR23)BiME增强人巨噬细胞对癌症-靶向性抗体的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)：A.抗CD20BiME(KWAR23+利妥昔单抗(抗CD20))，用于人淋巴瘤癌细胞(Raji)；B.抗Her2BiME(KWAR23+曲妥单抗(抗Her2))，用于人乳腺癌细胞(SKBR3)；C.抗CD70BiME(KWAR23+伐色珠单抗(抗CD70))，用于人肾细胞癌症(RCC10，TK10，Caki1)。D-E.抗SIRPα抗体(KWAR23)BiME增强人中性粒细胞对癌症-靶向性抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)：D.抗CD20BiME(KWAR23+利妥昔单抗(抗CD20))，用于人淋巴瘤癌细胞(Raji)；E.抗Her2BiME(KWAR23+曲妥单抗(抗Her2))，用于人乳腺癌细胞(SKBR3)。
图8.在EGFR信号转导通路中存在下游突变的情况下，KWAR23增强响应西妥昔单抗的吞噬作用。A.EGFR在人结肠癌细胞系的表面上的表达，通过西妥昔单抗的结合测定。黑色点线表示用同种型对照抗体染色的DLD-1细胞。B.对于采用指示疗法治疗的GFP+结肠癌细胞系的人巨噬细胞吞噬作用。KRAS和BRAF的突变状态如先前报道。数据表示采用来自四个独立的血液供者的巨噬细胞的平均和标准偏差。wt＝野生型；ns＝不显著，*p<0.05，**p<0.01，****p<0.0001，针对KWAR23+西妥昔单抗对比全部其它治疗或指示的比较，如通过采用Sidak校正的双向ANOVA(用于多重比较)所评估。
图9. KWAR23响应糖化工程改造的抗体增强吞噬作用。响应利妥昔单抗或糖化工程改造的抗CD20抗体奥滨尤妥珠单抗的Raji淋巴瘤细胞的人巨噬细胞吞噬作用。点表示采用来自独立血液供者的巨噬细胞的分析，短线表示全部供者间的中值。ns＝不显著，*p<0.05，针对通过采用Sidak校正的双向ANOVA(用于多重比较)进行的指示比较，。
具体实施方式
本发明涉及抗体，包括但不限于，人源化的单克隆抗体，其对于SIRPα具有特异性。还公开了所述抗体的核酸和氨基酸序列。所述抗体可用于与SIRPα相关联的治疗和诊断方法。
在描述本方法和组合物之前，应理解，本发明不限于所述的具体方法或组合物，因为它们当然可能变化。还应理解，本文所用术语的目的仅是描述具体实施方式，不用来构成限制，因为本发明的范围仅受所附权利要求书的限制。
提供数值范围时，也应视作具体公开了该范围的上限和下限之间以下限单位十分之一为间隔的各中间数值，除非上下文另有明确说明。本发明还包括设定范围内任何设定数值或中间数值和该设定范围内任何其它设定数值或中间数值之间的各较小范围。所述范围可独立地包含或排除这些较小范围的上限、下限，本发明也包括这些较小范围不包含限值、包含任一或两个限值的各范围，以设定范围内任何限值的明确排除为准。设定范围包含一个或两个限值时，本发明也包括排除所述限值之一个或两个的范围。
除非另有说明，本文所用的所有科技术语与本发明所属领域普通技术人员所理解的通常含义相同。虽然也可采用与本文所述类似或等同的任何方法和材料实施或测试本发明，但在此描述一些潜在和优选的方法和材料。本文提及的所有出版物均通过引用纳入本文，与所引用出版物相关联来公开和描述这些方法和/或材料。应理解，出现抵触时，用本公开内容代替任何本文所纳出版物的公开内容。
正如本领域技术人员在阅读本公开后所能显见的，本文描述和说明的每个单独的实施方式具有离散的组成和特征，这些组成和特征可方便地分离或与任何其余多个实施方式的特征结合而不偏离本发明的范围和精神。任意提及的方法可以所提及的事件顺序进行或以逻辑上可行的任意其它序列进行。
必须注意到，本文和所附权利要求书所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数含义，除非上下文另有明确说明。因此，例如，提到“一个细胞”包括多个这样的细胞，提到“肽”包括本领域技术人员已知的一种或多种肽及其等同物(例如，多肽)等等。
提供本文讨论的出版物仅针对其在本申请提交日之前的公开。本文中所有内容均不应解释为承认本发明不能凭借在先发明而先于这些出版物。此外，所提供的出版日期可能与实际公开日期不同，这可能需要单独确认。
定义
术语“靶细胞”可根据上下文以不同方式应用。一般而言，“靶细胞”是将要被吞噬细胞(例如，吞噬细胞)吞噬的细胞，其中所述吞噬作用因给予主题抗SIRPα抗体而增强。因此，术语“靶细胞”可指CD47表达型细胞，因为主题抗SIRPα抗体，通过抑制CD47表达型细胞和SIRPα表达型吞噬细胞之间的相互作用，来促进对于CD47表达型细胞的吞噬作用。
然而，在一些情况中，所述靶细胞不需要表达高水平的CD47(并且在一些情况中，根本不需要表达CD47)，以供于主题多特异性抗体来诱导对于靶细胞的吞噬作用。例如，在多特异性(例如，双特异性)抗体的情况中，主题多特异性(例如，双特异性)抗体的SIRPα结合区域(第一结合区域)结合至吞噬细胞上的SIRPα(例如，巨噬细胞)，这允许该多特异性抗体发挥系绳(tether)的功能，以将吞噬细胞带到表达抗原(例如，癌细胞标志物)的细胞附近，而所述抗原被所述多特异性抗体的第二结合区域(例如，双特异性抗体的第二结合区域)识别(特异性结合)。因此，在多特异性抗体的情况中，靶细胞可以是不表达高水平的CD47的细胞(并且也可以是不表达CD47的细胞)。在一些实施方式中，靶细胞是哺乳动物细胞，例如人细胞。靶细胞可由下文所述的任何个体(例如，患者，对象等)形成。
在一些情况中，靶细胞是“受影响的(inflicted)”细胞(例如，来自“受影响的”个体的细胞)，其中，本文中所用的术语“受影响的”指的是具有可用主题抗SIRPα抗体治疗的症状、病症或疾病的对象。“受影响的”对象可患有癌症，可携带感染(例如，慢性感染)，和/或可患有其它过度增殖性疾病，例如硬化症、纤维化等等。“受影响的细胞”可以是造成所述症状、病症或疾病的那些细胞。作为非限制性的示例，受影响的患者的受影响的细胞可以是CD47表达型癌细胞、感染的细胞、炎性细胞、免疫细胞等。病症或疾病可用主题抗SIRPα抗体治疗的一项指标是，涉及的细胞(即，受影响的细胞，例如，癌性细胞、感染的细胞、炎性细胞、免疫细胞等)表达CD47(例如，在一些情况中，相较于正常细胞类型的正常细胞，具有升高水平的CD47)。
本文所用术语“疗法”、“治疗”、“处理”等通常指获得所需的药理学和/或生理学作用。从完全或部分防止疾病或其症状方面来说，这种作用可以是预防性的，和/或从部分或完全稳定或治愈疾病和/或由该疾病产生的不良影响来说，这种作用可以是治疗性的。术语“治疗"涵盖对于哺乳动物(尤其是人)中的疾病的任何治疗，并且包括：(a)在可能易患该疾病和/或症状但尚未诊断患有的对象中防止该疾病或症状的发生；(b)抑制所述疾病和/或症状，即阻滞其发展；或(c)缓解所述疾病症状，即引起该疾病和/或症状消退。需要治疗的那些包括已经受影响的那些(例如，患有癌症的那些、具有感染的那些等)，以及有预防需要的那些(例如，具有增加的癌症易感性的那些、具有增加的感染可能性的那些、疑似患有癌症的那些、疑似具有感染的那些等)。
治疗性治疗是指对象在给予之前受影响的治疗，而预防性治疗是对象在给予之前未受影像的治疗。在一些实施方式中，所述对象在治疗之前变得在受影响方面具有增加的可能性或疑似受影响。在一些实施方式中，所述对象疑似在变得受影响方面具有增加的可能性。
可用主题抗SIRPα抗体治疗的症状、病症和/或疾病的示例包括但不限于，癌症(任何形式的癌症，包括但不限于：癌、软组织肿瘤、肉瘤、畸胎瘤、黑素瘤、白血病、淋巴瘤、脑癌、实体瘤、间皮瘤(MSTO)等)；感染(例如，慢性感染)；和免疫学疾病或紊乱(例如，炎性疾病)(例如，多发性硬化、关节炎等)(例如，对于免疫抑制治疗)。例如，其中癌细胞表达CD47(例如，在一些情况中，相较于非癌细胞，癌细胞显示增加的CD47表达)的任何癌症是待通过主题方法和组合物治疗的合适的癌症。主题抗SIRPα抗体还可用于移植物条件调整(例如，干细胞移植物、骨髓移植物等)。(例如，为了破坏恶性细胞，以提供免疫抑制来防止患者的身体对供者的细胞/干细胞等产生排斥)。例如，在一些情况中，主题抗体组合或双特异性抗体(例如，抗SIRPα联合抗CD117)可用于移植物条件调节。例如，主题抗体组合或双特异性抗体(例如，抗SIRPα联合抗CD117)可用于骨髓移植物条件调节。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体(例如，抗体组合)可用于免疫抑制治疗。
本文中所用的“癌症”包括任何形式的癌症，包括但不限于，实体瘤癌症(例如，肺癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、结肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、肝癌、成胶质细胞瘤、成神经管细胞瘤、平滑肌肉瘤、头与颈鳞状细胞癌、黑素瘤、神经内分泌癌等)，和液体癌症(例如，血液学癌症)；癌(carcinomas)；软组织肿瘤；肉瘤；畸胎瘤；黑素瘤；白血病；淋巴瘤；和脑癌，包括微小残留病，并且包括原发性和转移性肿瘤。其中癌细胞表达CD47(例如，在一些情况中，相较于非癌细胞，癌细胞显示增加的CD47表达)的任何癌症是待通过主题方法和组合物(例如，主题抗SIRPα抗体)治疗的合适的癌症。
癌(carcinomas)是上皮组织中起源的恶性病。上皮细胞覆盖身体的外表面，填塞(line)内腔，且形成腺组织线。癌(carcinomas)的例子包括但不限于：腺癌(在腺(分泌)细胞中起始的癌症)，例如，乳腺、胰腺、肺、前列腺和结肠的癌症可以是腺癌；肾上腺皮质癌；肝细胞癌；肾细胞癌；卵巢癌；原位癌；导管癌；乳腺癌；基底细胞癌；鳞状细胞癌；移行细胞癌；结肠癌；鼻咽癌；多囊性肾细胞癌；燕麦细胞癌；大细胞肺癌；小细胞肺癌；非小细胞肺癌；等。癌可见于前列腺、胰腺、结肠、脑(通常为次生转移)、肺、乳腺、皮肤等。
软组织肿瘤是罕见肿瘤的高度多样化组，其源自结缔组织。软组织肿瘤的示例包括但不限于：腺泡状软组织肉瘤；血管瘤样纤维组织细胞瘤；软骨粘液样纤维瘤；骨骼软骨肉瘤；骨外黏液样软骨肉瘤；亮细胞肉瘤；促结缔织增生性小圆细胞瘤；皮肤纤维肉瘤隆突；子宫内膜基质瘤；尤文氏肉瘤；纤维瘤(硬纤维瘤)；婴儿期纤维肉瘤；胃肠基质瘤；骨巨细胞瘤；腱鞘巨细胞瘤；炎性肌纤维母细胞瘤；子宫肌瘤；平滑肌肉瘤；成脂细胞瘤；典型脂肪瘤；梭形细胞或多形态脂肪瘤；典型脂肪瘤；软骨样脂肪瘤；成熟分化的脂肪肉瘤；黏液样/圆细胞脂肪肉瘤；多形态脂肪肉瘤；黏液样恶性纤维组织细胞瘤；高级恶性纤维组织细胞瘤；肌纤维母细胞肉瘤；恶性周围神经鞘瘤；间皮瘤；成神经细胞瘤；骨软骨瘤；骨肉瘤；原始神经外胚层肿瘤；腺泡状横纹肌肉瘤；胚胎性横纹肌肉瘤；良性或恶性神经鞘瘤；滑液肉瘤；伊文氏瘤；结节性筋膜炎；韧带样型纤维瘤；孤立性纤维性肿瘤；皮肤纤维肉瘤隆突(DFSP)；血管肉瘤；上皮样血管内皮瘤；腱鞘巨细胞瘤(TGCT)；色素绒毛结节性滑膜炎(PVNS)；纤维性结构不良；肌纤维母细胞肉瘤；纤维肉瘤；滑液肉瘤；恶性周围神经鞘瘤；神经纤维瘤；和软组织的多形态腺瘤；和源自成纤维细胞、肌成纤维细胞、组织细胞、脉管细胞/内皮细胞和神经鞘细胞的瘤形成。
肉瘤是癌症的罕见类型，其在间质来源的细胞中产生，例如，骨中或身体软组织中，包括软骨、脂肪、肌肉、血管、纤维组织或其它结缔组织或支持组织。不同类型的肉瘤基于癌症形成的位置。例如，骨肉瘤形成于骨中，脂肪肉瘤形成于脂肪中，而横纹肌肉瘤形成于肌肉中。肉瘤的例子包括但不限于：阿斯金氏瘤；葡萄状肉瘤；软骨肉瘤；尤文氏肉瘤；恶性血管内皮瘤；恶性神经鞘瘤；骨肉瘤；和软组织肉瘤(例如，腺泡状软组织肉瘤；血管肉瘤；叶状囊皮肤纤维肉瘤隆突(DFSP)；韧带样瘤；促纤维增生性小圆细胞瘤；上皮样肉瘤；骨外软骨肉瘤；骨外骨肉瘤；纤维肉瘤；胃肠基质瘤(GIST)；血管外皮细胞瘤；血管肉瘤(更常称为"血管肉瘤")；卡波西氏肉瘤；平滑肌肉瘤；脂肪肉瘤；淋巴管肉瘤；恶性周围神经鞘瘤(MPNST)；神经纤维肉瘤；滑液肉瘤；未分化的多形态肉瘤等)。
畸胎瘤是生殖细胞瘤的一种类型，其包括数种不同类型的组织(例如，可包括源自任何和/或全部三个胚层的组织：内胚层、中胚层和外胚层)，包括例如，毛发、肌肉和骨骼。畸胎瘤最常见于女性卵巢、男性睾丸，以及儿童尾骨。
黑素瘤是始于黑素细胞(产生色素黑色素的细胞)的癌症类型。其可始于痣(皮肤黑素瘤)，但也可始于其它色素组织，例如眼中或肠中。
白血病是源于血液形成组织例如骨髓的癌症，其产生大量异常血细胞并进入血流。例如，白血病可源于在血流中正常成熟的骨髓源性的细胞。白血病的命名根据该疾病发展与进展的速度(例如，急性对比慢性)并且根据受影响的血液白细胞类型(例如，骨髓对比淋巴)。骨髓性白血病也称作髓系或成髓细胞白血病。淋巴性白血病也称作成淋巴细胞性或淋巴细胞性白血病。淋巴性白血病细胞可在淋巴结中收集，所述淋巴结可变得肿胀。白血病的例子包括但不限于：急性骨髓性白血病(AML)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性骨髓性白血病(CML)，和慢性淋巴细胞性白血病(CLL)。
淋巴瘤是始于免疫系统的细胞的癌症。例如，淋巴瘤可起源于在淋巴系统中正常成熟的骨髓源性的细胞。淋巴瘤有两个基本类别。一类是霍奇金淋巴瘤(HL)，其特征是存在称为里-斯细胞(Reed-Sternberg cell)的类型的细胞。目前识别出6种HL类型。霍奇金淋巴瘤的示例包括：结节硬化典型霍奇金淋巴瘤(CHL)、混合细胞性CHL、淋巴细胞-损耗型CHL、淋巴细胞-富集型CHL，和结节淋巴细胞为主型HL。
另一类淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，其包括大且多样组的免疫系统细胞癌症。非霍奇金淋巴瘤还可分为进展缓慢(缓慢生长)的癌症和侵略性进展(快速生长)的那些。目前有61种识别的NHL类型。非霍奇金淋巴瘤的示例包括但不限于：AIDS相关的淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞淋巴瘤、急变性NK-细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、伯基特样淋巴瘤(小无裂细胞淋巴瘤)、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤、皮肤侵犯型T-细胞淋巴瘤、弥散性大B-细胞淋巴瘤、肠病型T-细胞淋巴瘤、滤泡淋巴瘤、肝脾型γ-δT-细胞淋巴瘤、T-细胞白血病、成淋巴细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘带淋巴瘤、鼻T-细胞淋巴瘤、小儿淋巴瘤、外围T-细胞淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、转化淋巴瘤、治疗相关的T-细胞淋巴瘤、和华氏巨球蛋白血症。
脑癌包括脑组织的任何癌症。脑癌的例子包括但不限于：神经胶质瘤(例如、成胶质细胞瘤、星型细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤等)、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原始神经外胚层肿瘤(成神经管细胞瘤)等。
本文所用的术语“感染”指的是生物体(即，对象)的至少一种细胞被感染性因素感染的任何状态(例如，对象具有胞内病原体感染，例如，慢性胞内病原体感染)。本文所用的术语“感染性因素”指的是外来生物实体(即，病原体)，其诱导感染的生物体的至少一种细胞的CD47表达(例如，增加的CD47表达)。例如，感染性因素包括但不限于：细菌、病毒、原生动物和真菌。尤其对胞内病原体感兴趣。感染性疾病是由感染性因素造成的紊乱。一些感染性因素在某种条件下不导致可识别的症状或疾病，但具有在变化的条件下造成症状或疾病的潜力。主题方法可用于治疗慢性病原体感染，例如包括但不限于病毒感染，例如逆转录病毒、慢病毒、嗜肝性DNA病毒、疱疹病毒、痘病毒、人刺瘤病毒等；胞内细菌感染，例如分支杆菌(Mycobacterium)、嗜衣体属(Chlamydophila)、埃立克体属(Ehrlichia)，立克次体属(Rickettsia)，布鲁菌属(Brucella)，军团菌属(Legionella)，弗朗西斯氏菌属(Francisella)，李斯特菌属(Listeria)，柯克斯氏体属(Coxiella)，奈瑟氏菌属(Neisseria)，沙门氏菌属(Salmonella)，耶尔森菌属(Yersinia sp)，幽门螺旋菌(Helicobacter pylori)等；和胞内原生动物病原体，例如疟原虫(Plasmodium sp)，锥体虫(Trypanosoma sp.)，贾第虫(Giardia sp.)，弓形虫(Toxoplasma sp.)，利什曼虫(Leishmania sp.)等。
术语“受体”、“个体”、“对象”、“宿主”和“患者”在本文中互换使用，指任何需要诊断、处理或治疗的哺乳动物对象，尤其是人。可被治疗的“哺乳动物”是指可被分类为哺乳动物的任何动物，其中包括人、家畜、以及动物园动物、体育动物或宠物，如狗、马、猫、牛、绵羊、山羊、猪等。优选的哺乳动物是人。
本发明中所用的术语"表位"指，抗原上的与抗体的互补位结合的任何抗原性决定簇。表位决定区通常由分子的化学活性表面基团(如氨基酸或糖侧链)组成且通常有特定的三维结构性质以及特定的电荷性质。
术语"抗体"以最广泛含义使用，并且特别涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，和抗体片段，只要其显示所需的生物活性即可。"抗体"(Ab)和"免疫球蛋白"(Ig)是具有相同结构特点的糖蛋白。尽管抗体显示对于特定抗原的结合特异性，免疫球蛋白包括抗体和缺乏抗原特异性的其它抗体样分子。后一种的多肽，例如，由淋巴系统以低水平产生，并由骨髓瘤以增加的水平产生。
本文所用的术语“抗体”指的是这样的多肽：其包含足以提供与特定靶抗原的特异性结合的典型免疫球蛋白序列元件。如本领域已知，天然产生的完整抗体是约150kD的四聚体物质，其包含两个相同重链多肽(各约50kD)和两个相同轻链多肽(各约25kD)，其彼此联系成通常所称的“Y型”结构。各重链包含至少四个结构域(各长约110个氨基酸)–氨基末端可变(VH)结构域(位于Y结构尖端)，后跟三个恒定结构域：CH1、CH2，和羧基末端CH3(位于Y的茎部的基底)。称为“转换体”的短区域连接重链可变区与恒定区。“铰链”将CH2和CH3结构域连接至抗体的剩余部分。完整抗体中，该铰链中的两个二硫键将两个重链多肽彼此连接。各轻链包含两个结构域–氨基末端可变(VL)结构域，后跟羧基末端恒定(CL)结构域，彼此由另一“转换体”隔开。完整抗体四聚体包含两个重链-轻链二聚体，其中重链和轻链通过一个二硫键彼此相连；另两个二硫键将重链铰链区域彼此连接，从而所述二聚体彼此连接，由此形成所述四聚体。天然产生的抗体也是糖基化的，通常在CH2结构域上糖基化。天然抗体中的各结构域具有如下结构特点：由两个β折叠(例如，3-、4-或5-股折叠)形成的“免疫球蛋白折叠”，其在压缩的反平行β桶中彼此相对包装。各可变结构域包含三个高变环，其称为“互补决定区”(CDR1、CDR2和CDR3)和四个某种程度上不变的“框架”区域(FR1、FR2、FR3和FR4)。当天然抗体折叠时，FR区域形成β折叠，该β折叠提供结构域的结构框架，并且来自重链和轻链的CDR环区域在三维空间中彼此接近，从而其产生位于Y结构端部的一个高变抗原结合位点。
天然形成的抗体的Fc区结合至补体系统的元件，并且也结合至效应物细胞上的受体，包括例如，介导细胞毒性(包括特异性ADCP)的效应物细胞。本领域已知，Fc区域对于Fc受体的亲和性和/或其它结合属性可通过糖基化或其它修饰形式来调节。在一些实施方式中，本发明中生成和/或使用的抗体包含糖基化的Fc结构域，包括具有经修饰或工程改造的所述糖基化的Fc结构域。出于本发明目的，在某些实施方式，包括天然抗体中所见的充分的免疫球蛋白结构域序列的任何多肽或多肽的复合物可称作和/或用作“抗体”，不论该多肽是天然产生(例如，通过生物体响应抗原反应而产生)还是通过重组工程改造、化学合成或其它人工系统或方法产生。在一些实施方式中，抗体是多克隆抗体；在一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。
在一些实施方式中，抗体的恒定区序列具有小鼠、兔、灵长类或人抗体特性。在一些实施方式中，抗体序列元件是人源化的、灵长类源化的、嵌合的等，如本领域中已知。
此外，本文所用的术语“抗体”可在合适的实施方式(除非另有说明或基于上下文明确的)中指任何本领域已知的或已开发的用于以其它表现形式利用抗体结构和功能特征的构建体或形式。例如，实施方式，用于本发明方的抗体的形式选自，但不限于，完整IgG、IgE和IgM、双特异性或多特异性抗体(例如、等)、单链Fvs、多肽-Fc融合物、Fab、类骆驼抗体、掩蔽的抗体(例如、)、小模块免疫药物(“SMIPsTM”)、单链或串联双功能抗体VHH、小抗体、锚蛋白重复蛋白或DART、TCR样抗体、 微小蛋白、和在一些实施方式中，抗体可能缺乏其天然产生的形式中所具有的共价修饰(例如，连接聚糖)。在一些实施方式中，抗体可包含共价修饰(例如，连接聚糖、负荷物，例如，可检测部分、治疗部分、催化部分等或其它附属基团[例如，聚乙二醇等]。
示例性抗体试剂包括但不限于，人抗体、灵长类源化抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、人源化抗体、偶联的抗体(即，偶联或融合至其它蛋白质、放射性标记物、细胞毒素的抗体)、小模块免疫药物(“SMIPsTM”)、单链抗体、类骆驼抗体，和抗体片段。本文所用的术语“抗体物质”还包括完整单克隆抗体、多克隆抗体、单域抗体(例如，鲨鱼单域抗体(例如，IgNAR或其片段))、多特异性抗体(例如双特异性抗体)，其由至少两个完整抗体，以及抗体片段(只要其显示所需的生物活性即可)形成。在一些实施方式中，该术语涵盖重要的(stapled)肽。在一些实施方式中，该术语涵盖一种或多种抗体样结合模拟肽。在一些实施方式中，该术语涵盖一种或多种抗体样结合支架蛋白。在一些实施方式，该术语涵盖单抗体(monobody)或阿德耐汀(adnectin)。
在许多实施方式中，抗体物质是或包含多肽，所述多肽的氨基酸序列包括本领域技术人员已知为互补决定区(CDR)的一个或多个结构元件；在一些实施方式中，抗体物质是或包含多肽，所述多肽的氨基酸序列包括至少一个CDR(例如，至少一个重链CDR和/或至少一个轻链CDR)，其与参照抗体中所见的基本相同。在一些实施方式中，所包括的CDR与参照CDR基本相同，其中，其与参照CDR相比，在序列方面相同，或包含1-5个氨基酸取代。在一些实施方式中，所包括的CDR与参照CDR基本相同，其中，其显示与参照CDR具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列相同性。在一些实施方式中，所包括的CDR与参照CDR基本相同，其中，其显示与参照CDR具有至少96％、96％、97％、98％、99％或100％的序列相同性。在一些实施方式中，所包括的CDR与参照CDR基本相同，其中，与参照CDR相比，所包括的CDR中的至少一个氨基酸被删除、添加或取代，但所包括的CDR具有其它情况下与参照CDR相同的氨基酸序列。在一些实施方式中，所包括的CDR与参照CDR基本相同，其中，与参照CDR相比，所包括的CDR中的1-5个氨基酸被删除、添加或取代，但所包括的CDR具有其它情况下与参照CDR相同的氨基酸序列。在一些实施方式中，所包括的CDR与参照CDR基本相同，其中，与参照CDR相比，所包括的CDR中的至少一个氨基酸被取代，但所包括的CDR具有其它情况下与参照CDR相同的氨基酸序列。在一些实施方式中，所包括的CDR与参照CDR基本相同，其中，与参照CDR相比，所包括的CDR中的1-5个氨基酸被删除、添加或取代，但所包括的CDR具有其它情况下与参照CDR相同的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗体物质是或包含多肽，所述多肽的氨基酸序列包括本领域技术人员已知为免疫球蛋白可变结构域的结构元件。在一些实施方式中，抗体物质是多肽蛋白，所述多肽蛋白具有与免疫球蛋白-结合结构域同源或高度同源的结合结构域。
“天然抗体和免疫球蛋白”通常是约150,000道尔顿的异源四聚体糖蛋白，它们由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。各轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而不同免疫球蛋白同种型的重链之间的二硫键连接数不同。各重链和轻链也具有规则间隔的链内二硫桥键。各重链的一端具有可变区(VH)，后接若干恒定区。各轻链的一端具有可变区(VL)，另一端具有恒定区，轻链的恒定区与重链的第一恒定区对应排列，轻链可变区与重链可变区对应排列。认为具体的氨基酸残基能够形成轻链和重链可变结构域之间的界面(Clothia等.，J.Mol.Biol.186:651(1985)；Novotny和Haber，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82:4592(1985))。
术语“可变”指以下事实：不同抗体之间可变域的某些部分的序列广泛不同，这些序列用于产生各种具体抗体与其特定抗原的结合与特异性。然而，可变性并不是均匀地分布在抗体的可变域上。其在轻链和重链可变域中称为互补决定区(CDR)或高变区的三个区段中比较集中。可变结构域的更高度保守的部分称为框架(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，主要采取β-片层构型，通过三个CDR连接，形成环连接β-片层结构，在一些情况下形成β-片层结构的一部分。各链中的CDR被FR区聚集在一起，紧密相邻，与另一条链的CDR一起形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等，《免疫学感兴趣的蛋白质的序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第5版，国立卫生研究院(National Institutes of Health)，美国马里兰州贝塞斯达(Bethesda,MD)(1991))。恒定结构域在抗体与抗原的结合中并不直接参与，但显示多种效应物功能，例如抗体在抗体依赖性细胞毒性中的参与。
感兴趣的可变区序列包括关于本文称为“KWAR23”的抗SIRPα抗体所提供的可变区序列：SEQ ID NO:1(可变重链)，和SEQ ID NO:5(可变轻链)。KWAR23CDR序列如序列表中所示，包括SEQ ID NO:2-4(可变重链的CDR)；和SEQ ID NO:6-8(可变轻链的CDR)。在一些实施方式中，KWAR23中所示的用于具体的重链和轻链组合的CDR序列将维持在组合形式，即，主题抗体(例如，人源化抗体)将包含KWAR23重链CDR序列和KWAR23轻链CDR序列。
抗体的木瓜蛋白酶消化产生各含单个抗原结合位点的两个相同抗原结合片段，称为"Fab"片段，和残留的"Fc"片段，该命名反映易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生具有两个抗原结合位点并仍能交联抗原的F(ab')2片段。
"Fv"是含有完整抗原识别与结合位点的最小抗体片段。在双链Fv物质中，该区域由一个重链和一个轻链可变结构域的紧密、非共价联结的二聚体组成。在单链Fv物质(scFv)中，一个重链和一个轻链可变结构域可通过柔性肽接头共价连接，从而所述轻链和重链可以类似于双链Fv物质中所见的"二聚"结构相联。在该构象中各可变结构域的三个CDR相互作用限定VH-VL二聚体表面的抗原结合位点。六个CDR共同将抗原结合特异性赋予抗体。但是，即使单个可变结构域(或仅含3个抗原特异性CDR的Fv一半)仍具有识别并结合抗原的能力，尽管亲和性通常低于完整的结合位点。有关scFv的综述参见Pluckthun，《单克隆抗体的药理学》(The Pharmacology of Monoclonal Antibodies)，第113卷，Rosenburg和Moore编，纽约施普林格出版社(Springer-Verlag,New York)，第269-315页(1994)。
所述Fab片段也包含轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab'片段与Fab片段的区别在于重链CH1结构域羧基末端处添加有数个额外残基，包括抗体绞链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文对Fab'的命名，其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离巯基。F(ab')2抗体片段最初生成为中间有铰链半胱氨酸的成对Fab'片段。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。
有五种主要的免疫球蛋白类型：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，这些中的几种还可分成亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2。对应于不同类型的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为a(α)、d(δ)、e(ε)、g(γ)和m(μ)。不同类型的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。免疫球蛋白亚类的工程改造的变体，包括增加或降低免疫效应物功能、半衰期或血清稳定性的那些，也涵盖在该技术中。
本文中所用的"抗体片段"，及其全部语法变体，定义为包含完整抗体的抗原结合位点或可变区的完整抗体的部分，其中，所述部分不含完整抗体的Fc区的恒定重链结构域(即CH2、CH3和CH4，视抗体同种型而定)。抗体片段的示例包括Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2和Fv片段；双抗体；是由连续氨基酸残基的不间断序列组成的一级结构的多肽的的任何抗体片段(本文称作"单链抗体片段"或"单链多肽")，包括但不限于(1)单链Fv(scFv)分子，(2)单链多肽，所述单链多肽仅包含一个轻链可变结构域或其含有所述轻链可变结构域的三个CDR的片段，不含相联的重链部分，和(3)单链多肽，所述单链多肽仅包含一个重链可变区或其含有所述重链可变区的三个CDR的片段，不含相联的轻链部分；和由抗体片段形成的多特异性或多价结构。在包含一个或多个重链的抗体片段中，所述一个或多个重链可包含完整抗体的非Fc区中所见的任何恒定结构域序列(例如，IgG同种型中的CH1)，和/或可包含完整抗体中所见的任何铰链序列，和/或可包含融合至或位于铰链序列或所述重链的恒定结构域序列中的亮氨酸拉链序列。
除非另有不同说明，本文所述并请求保护的术语"偶联物(conjugate)"定义为一种异质性分子，其由一个或多个抗体片段与一个或多个聚合物分子相连而形成，其中，所述异质性分子是水溶性的，即，可溶于生理液体，例如血液，并且其中，所述异质性分子不含任何有结构的聚集。一种感兴趣的偶联物是PEG。在前述定义的内容中，术语"有结构的聚集"指的是(1)水性溶液中具有球状体或球状体壳结构的任何分子聚集，从而所述异质性分子不处于胶束或其它乳液结构中，也不锚着于脂双层、载剂或脂质体；和(2)固体或不溶性形式(例如，色谱珠基质)中的任何分子聚集，其在接触水相之后不将异质性分子释放进入溶液。因此，本文定义的术语"偶联物"涵盖沉淀物、沉积物、生物可消化基质或能够在固体的水合作用之后将所述异质性分子释放进入水性溶液的其它固体中的前述的异质性分子。
本文所用术语“单克隆抗体”(mAb)指获自基本均一抗体群体的抗体，即除了少数出现可能的天然产生突变外，群体包含的单独抗体是相同的。单克隆抗体具有针对某一抗原性位点的高度特异性。各mAb针对所述抗原上的单一决定簇。除其特异性以外，所述单克隆抗体在以下方面是有利的，其中，它们可通过杂交瘤培养，不被其它免疫球蛋白污染。定语"单克隆"表明抗体的特征在于获自基本均一的抗体群，而不应解释为需要通过任何特定方法来生产抗体。例如，本发明所用的单克隆抗体可在固定的B细胞或其杂交瘤中制备，或可通过重组DNA方法制备。
本文所述的抗SIRPα抗体包括杂合与重组抗体，其通过剪接抗SIRPα抗体的可变(包括高变)结构域与恒定结构域(例如"人源化"抗体)，或轻链与重链，或来自一个物种的链与来自另一物种的链，或与异源性蛋白质融合来生成，无关来源物种或免疫球蛋白类别或亚类名称，以及抗体片段(例如，Fab、F(ab')2和Fv)，只要它们显示所需的生物活性即可。
本文所述的抗SIRPα抗体特别包括"嵌合"抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的部分与源自具体物种的抗体或属于具体的抗体类别或亚类的抗体中对应的序列相同或同源，而所述链的剩余部分与源自另一物种的抗体或属于另一抗体类别或亚类的抗体的对应的序列相同或同源，以及所述抗体的片段，只要它们显示所需的生物活性即可。
"分离"抗体是已从其天然环境的组成中鉴定并分离和/或回收的抗体。其自然环境的污染成分是会干扰抗体的诊断或治疗应用的材料，并可以包含酶、激素和其他蛋白质或非蛋白质的溶质。在一些实施方式中，所述抗体将被纯化(1)至，通过劳里(Lowry)法测定为大于75％(以所述抗体的重量计)，且最优选大于80％、90％或99％(以重量计)(2)至，通过还原或非还原条件下进行SDS-PAGE(采用考马斯蓝或优选银染)测定为同质。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为该抗体天然环境中的至少一种组分将不存在。然而，通常，将通过至少一个纯化步骤制备分离的抗体。
本文中所用的术语"表位带标签的"指的是与"表位标签"融合的抗SIRPα抗体(或片段)。所述表位标签多肽具有足够的残基来提供能够制备抗体的表位，并且，其还足够短，从而其不干扰所述抗SIRPα抗体的活性。所述表位标签优选充分独特，从而对于该表位具有特异性的抗体基本不与其它表位交叉反应。合适的标签多肽一般具有至少6个氨基酸残基，并且通常介于约8-50个氨基酸残基之间(优选介于约9-30残基之间)。示例包括c-myc标签及其8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10抗体(Evan等.，Mol.Cell.Biol.5(12):3610-3616(1985))；以及单纯疱疹病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体(Paborsky等.，ProteinEngineering 3(6):547-553(1990))。另一个示例是“组氨酸标签”或“富含组氨酸的亲和肽”，其为富含组氨酸(例如，6xHis标签、HAT标签、6xHN标签等)的金属离子亲和肽。组氨酸标签还可特异性地结合至抗His抗体。
本文中所用的词汇"标记物"指的是可检测的化合物或组合物，其直接或间接偶联至抗体。所述标记物本身可被检测(例如，放射性同位素标记物或荧光标记物)，或者，在酶促标记物的情况中，其可催化底物化合物或组合物的化学变化，所述化学变化可被检测。
"固相"指本发明的抗体可附着的非水性基质。本文涵盖的固相的示例包括部分或完全由玻璃形成的那些(例如可控孔径玻璃)、多糖(例如，琼脂糖)、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚乙烯醇和聚硅酮。在某些实施方式中，根据上下文，所述固相可包含试验板的孔；在其它情况中，其为纯化柱(例如，亲和性色谱柱)。该术语还包括离散颗粒的不连续固相，例如美国专利号4,275,149中所述那些。
术语“特异性结合”、“特异性地结合”等指的是，相对于溶液或反应混合物中的其它分子或部分，非共价或共价优先结合至某一分子(例如，相对于其它可及多肽，抗体特异性结合至具体多肽或表位)。在一些实施方式中，一种分子对其特异性结合的另一分子的亲和性的特征是Kd(离解常数)为10-5M或更少(例如，10-6M或更少，10-7M或更少，10-8M或更少，10-9M或更少，10-10M或更少，10-11M或更少，10-12M或更少，10-13M或更少，10-14M或更少，10-15M或更少或10-16M或更少)。“亲合力”指结合的强度：提高的结合亲合力与较低的Kd关联。
本文中所用的术语“特异性结合成员”指的是特异性结合对中的成员(即，两种分子，通常是两种不同的分子，其中所述分子之一，例如，第一特异性结合成员，通过非共价方式特异性结合至另一分子，例如，第二特异性结合成员)。
术语"共同给予"、“共给予”和"与……联合(组合)"包括同时、并行或无特别时间限制地依次给予两种或更多种治疗剂。在一个实施方式中，所述治疗剂在细胞中或对象身体中同时存在，或同时发挥其生物学或治疗作用。在一个实施方式中，所述治疗剂处于同一组合物或单位剂型中。在其它实施方式中，所述治疗剂处于分开的组合物或单位剂型中。在某些实施方式中，可在给予第二治疗剂之前(如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、同时，或之后(如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)给予第一治疗剂。
多肽
在一方面中，本发明涉及抗体(和产生所述抗体的细胞系)，所述抗体特异性地结合人SIRPα(即、抗SIRPα抗体)并且降低某一细胞上的CD47(例如，癌性细胞、感染的细胞等)与另一细胞上的SIRPα(例如，吞噬细胞)之间的相互作用。主题抗SIRPα抗体可结合SIRPα而不抑制吞噬作用(活化或刺激通过SIRPα的信号转导能抑制吞噬作用)。因此，主题抗SIRPα抗体可结合SIRPα而不活化或刺激通过SIRPα的信号转导(例如，主题抗SIRPα抗体不将SIRPα信号转导刺激至抑制吞噬作用的水平)。换言之，主题抗SIRPα抗体可结合SIRPα，但阻滞CD47-诱导的SIRPα信号转导。因此，相比正常细胞，合适的抗SIRPα抗体能通过抑制CD47-诱导的SIRPα信号转导来促进对于受影响的细胞(例如，癌性细胞、感染的细胞等)的优先吞噬作用。在一些情况中，合适的抗-SIRPα抗体特异性结合SIRPα(没有活化/刺激足够的信号转导应答以抑制吞噬作用)并且阻断SIRPα和CD47之间的相互作用。合适的抗-SIRPα抗体包括这类抗体的全人、人源化或嵌合版本。由于它们的低抗原性，人源化抗体可特别用于人的体内应用。类似地，犬源化、猫源化抗体等分别特别用于狗、猫和其他物种中的应用。感兴趣的抗体包括人源化抗体，或犬源化、猫源化、马源化、牛源化、猪源化抗体等及其变体。
提供示例性抗体的可变区域。感兴趣的抗体包括这些提供的组合，以及所述可变区域与合适的恒定区或恒定区片段的融合物，例如，以生成F(ab)’抗体。感兴趣的可变区域包括提供的抗SIRPα抗体的至少一个CDR序列，其中CDR可以是3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个氨基酸。或者，感兴趣的抗体包括提供的抗体中所示的可变区或本文所示的可变区域序列对。
感兴趣的多肽可包含与SEQ ID NO:1-18中任一项所示的氨基酸序列80％或更多，85％或更多，90％或更多，92％或更多，95％或更多，97％或更多，98％或更多，99％或更多，99.5％或更多或100％相同的氨基酸序列。主题抗SIRPα抗体可包括：(i)一个或多个(例如，2或更多个，3或更多个，4或更多个，5或更多个或6或更多个)CDR序列(例如，SEQ ID NO:2-4和6-8中所示那些)；(ii)完整可变区(例如，SEQ ID NO:1和5中所示那些)；(iii)单链可变片段(例如，SEQ ID NO:9-10中所示那些)；(iv)嵌合抗体序列(例如，SEQ ID NO:11-12中所示那些)；和/或(v)双特异性抗体序列(例如，SEQ ID NO:13-18中所示那些)。如本领域已知的，可变区序列可融合至任何合适的恒定区序列。
在一些实施方式中，主题抗SIRPα抗体包括包含SEQ ID NO:2-4和6-8中所示的氨基酸序列的一个或多个CDR(例如，2或更多个，3或更多个，4或更多个，5或更多个或6个CDR)。主题抗SIRPα抗体可包括与SEQ ID NO:2-4和6-8中所示的CDR氨基酸序列相比相差至多6个氨基酸(例如，至多5个氨基酸，至多4个氨基酸，至多3个氨基酸，至多2个氨基酸或至多1个氨基酸)的CDR序列。
在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括一个或多个CDR(例如，2或更多个，3或更多个，4或更多个，5或更多个，6个，或6或更多个)，所述一个或多个CDR具有与SEQ ID NO:2-4和6-8中任一项所示的CDR氨基酸序列相比相差至多6个氨基酸(例如，至多5个氨基酸，至多4个基酸，至多3个氨基酸，至多2个氨基酸或至多1个氨基酸)的氨基酸序列。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括两个或更多个CDR(例如，3或更多个，4或更多个，5或更多个，6个，或6或更多个)，所述两个或更多个CDR具有与SEQ ID NO:2-4和6-8中任一项所示的CDR氨基酸序列相比相差至多6个氨基酸(例如，至多5个氨基酸，至多4个氨基酸，至多3个氨基酸，至多2个氨基酸或至多1个氨基酸)的氨基酸序列。
在一些实施方式中，主题抗SIRPα抗体包括与SEQ ID NO:2-4和6-8中任一项所示的CDR氨基酸序列具有80％或更多，85％或更多，90％或更多，92％或更多，95％或更多，97％或更多，98％或更多，99％或更多，99.5％或更多或100％相同性的氨基酸序列。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:2-4中所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，两个或更多个，三个或更多个或3个)的重链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:2-4所示氨基酸序列的全部3个的重链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:6-8中所示的氨基酸序列中的一个或多个(例如，两个或更多个，三个或更多个或3个)的轻链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:6-8所示氨基酸序列的全部3个的轻链。
在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:6-8所示的氨基酸序列的全部3个的轻链，和具有SEQ ID NO:2-4所示的氨基酸序列的全部3个的重链。
在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有三个CDR的重链，其中CDR-H1具有如SEQID NO:2所示的氨基酸序列，CDR-H2具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，且CDR-H3具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有三个CDR的轻链，其中CDR-L1具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，CDR-L2具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，且CDR-L3具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括：(i)具有三个CDR的重链，其中CDR-H1具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，CDR-H2具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，且CDR-H3具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；和(ii)具有三个CDR的轻链，其中CDR-L1具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，CDR-L2具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，且CDR-L3具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:9-10中任一项所示的氨基酸序列的重链，所述氨基酸序列是单链可变片段的示例。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:1、11、13、15和17中任一项所示的氨基酸序列的重链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:5、12、14、16和18中任一项所示的氨基酸序列的轻链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:1、11、13、15和17中任一项所示的氨基酸序列的重链；和具有SEQ ID NO:5、12、14、16和18中任一项所示的氨基酸序列的轻链。
在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ IDNO:11的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:15的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO:16的氨基酸序列的轻链。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体包括具有SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链，和具有SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链。
在一些实施方式中，主题抗体是双特异性抗体。术语“多特异性”或“双特异性”抗体(也称为双功能抗体或多功能抗体)指的是如下的抗体，所述抗体通过具有对第一抗原具有特异性的至少一个区(例如，源自第一抗体的可变区)，和对第二抗原具有特异性的至少第二区(例如，源自第二抗体的可变区)，来识别两种或更多种不同的抗原。双特异性抗体特异性结合至两种靶标抗原，因此，是一类多特异性抗体。多特异性抗体可通过重组DNA方法生成，或包括但不限于，通过任何便利的方法化学生成的抗体。双特异性抗体包括能够识别两种不同抗原的所有抗体或抗体的偶联物或抗体的聚合形式。双特异性抗体包括这样的抗体，其已被简化和重新形成以保留其二价特点，以及经化学偶联的抗体，从而它们可具有针对各抗原的数个抗原识别位点。
在一些情况中，主题多特异性(例如，双特异性)抗体的SIRPα结合区域(第一结合区域)结合至巨噬细胞上的SIRPα，因此，该多特异性抗体可起系绳作用，以将SIRPα表达型吞噬细胞带至表达被所述多特异性抗体的第二结合区域(例如，双特异性抗体的第二结合区域)所识别(特异性结合)的抗原的细胞的附近。因此，在一些情况中，所述靶细胞不需要表达高水平的CD47(并且在一些情况中，根本不需要表达CD47)，以供于主题多特异性抗体来诱导对于靶细胞的吞噬作用。例如，多特异性抗体的Fc区可被吞噬细胞识别(参见图4)。因此，在一些情况中，主题多特异性(例如，双特异性)抗体包括促吞噬抗体Fc链。
主题双特异性抗体针对SIRPα和第二抗原。主题双特异性抗体将允许对于表达第二抗原的细胞群的吞噬作用(参见图4)。示例性双特异性抗体包括靶向SIRPα和癌细胞标志物(例如，CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2、HAVCR2(TIM3)等)的组合的那些。如此，在一些情况中，主题抗体是特异性结合至SIRPα和至少第二抗原的双特异性或多特异性抗体。在一些此类情况中，第二抗原选自：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2、HAVCR2(TIM3)。
在一些情况中，示例性双特异性抗体包括本文所公开的提供与SIRPα的特异性结合的序列(例如，CDR)，以及来自结合癌细胞标志物的抗体的序列(例如，CDR)。具有提供与癌细胞标志物的特异性结合的CDR的抗体的示例包括但不限于：西妥昔单抗(结合EGFR)、帕尼单抗(结合EGFR)、利妥昔单抗(结合CD20)、曲妥单抗(结合HER2)、PERTUZUMAB(结合HER2)、ALEMTUZUMAB(结合CD52)、BRENTUXIMAB(结合CD30)等。
产生双特异性抗体的方法在文献，例如在USPN 5989830，USPN 5798229中描述，其通过引用纳入本文。Holliger和Hudson(2005)Nature Biotechnology 23:1126-1136描述了更高级的特异性，例如三特异性抗体。
全长双特异性抗体的传统生产方法是基于两个免疫球蛋白重链-轻链对的共同表达，其中这两条链具有不同特异性(Millstein等，1983，Nature，305:537-539)。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤)可能产生10种不同抗体分子的混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤纯化正确的分子，亲和层析颇为烦琐，且产率较低。WO 93/08829和Traunecker等，EMBO J.，10:3655-3659(1991)公开了相似方法。
按照WO 96/27011所述的另一方法，可工程改造一对抗体分子之间的界面以最大程度提高从重组细胞培养物中回收的异源二聚体百分比。所述界面可包含抗体恒定结构域的至少部分CH3结构域。在这种方法中，用较大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)取代第一抗体分子界面上的一个或多个较小氨基酸侧链。通过用较小氨基酸侧链(如丙氨酸或苏氨酸)取代较大氨基酸侧链，在第二抗体分子界面上产生与较大侧链相同或相似大小的补偿性“空穴”。这提供了提高异源二聚体相对于不希望的终产物如同源二聚体的产率的机制。替代性方法将两种不同单链可变区域连接至热稳定抗原(HSA)。采用HSA作为接头能够延长血清半衰期，并且具有低免疫原性的益处。
双特异性抗体包括交联或“异源偶联”的抗体。例如，异源偶联物中的一种抗体可偶联于亲和素，另一种偶联于生物素。计划用这类抗体(例如)使免疫系统细胞靶向不良细胞(美国专利号4,676,980)，并用于治疗HIV感染(WO 91/00360、WO 92/200373和EP03089)。可采用任何常规的交联方法制备异源偶联物抗体。合适的交联剂是本领域众所周知的，参见美国专利号4,676,980以及许多交联技术。
文献中也已描述从抗体片段产生双特异性抗体的技术。例如，可利用化学连接制备双特异性抗体。Brennan等，Science 229:81(1985)描述了一种方法，其中通过蛋白水解切割完整抗体以产生F(ab')2片段。在二硫醇复合剂亚砷酸钠存在下还原这些片段可稳定邻近的二硫醇并阻止分子间二硫键形成。然后将产生的Fab’片段转变成巯基硝基苯甲酸酯(thionitrobenzoate，TNB)衍生物。然后用巯基乙胺还原将Fab’-TNB衍生物之一再转变成Fab’-硫醇，与等摩尔量的另一Fab’-TNB衍生物混合从而形成双特异性抗体。所产生的双特异性抗体可用作酶的选择性免疫试剂。
从重组细胞培养物直接制备和分离双特异性抗体片段的各种技术也已有描述。例如，利用亮氨酸拉链产生双特异性抗体。Kostelny等，J.Immunol.148(5):1547-1553(1992)。Fos和Jun蛋白质的亮氨酸拉链肽通过基因融合连接于两种不同抗体的Fab’部分。在绞链区还原该同质二聚体抗体形成单体，然后再氧化形成异质二聚体抗体。也可用该方法产生抗体同质二聚体。
Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:6444-6448(1993)所述的“双体(diabody)”技术为制备双特异性抗体片段提供了替代机制。这些片段包含通过接头与轻链可变区(VL)相连的重链可变区(VH)，所述接头短到不允许同一链上的两个结构域之间成对。因此，一个片段的VH和VL结构域被迫与另一片段的互补VL和VH结构域成对，从而形成两个抗原结合位点。还报道了另一使用单链Fv(sFv)二聚体制备双特异性抗体片段的策略。参见Gruber等，J.Immunol.152:5368(1994)。或者，所述抗体可以是"线性抗体"，如Zapata等.Protein Eng.8(10):1057-1062(1995)中所述。简言之，这些抗体包含一对串联Fd区段(VH-CH1-VH-CH1)，其形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性或单特异性。
双重可变结构域(DVD)双特异性抗体以及产生它们的方法也已被描述(例如，参见Wu等,Nat Biotechnol.2007年11月；25(11):1290-7,Gu等,Methods Enzymol.2012；502:25-41,和美国专利申请20130195871、20130171059、20130004416、20120263722、20120258108、20120189541、20120087858、20120034160、20120014957、20110318349、20110263827、20110212094、20110091463、20110091372、20110044980、20110008766、20100260668、20100233079、20100076178、20100047239、20090311253、20090304693、20090215992和20070071675；其全部通过引用其全文纳入本文)。在该形式中，两种多肽(例如，两种单克隆抗体)的靶标-结合可变结构域可通过结构联合，以生成四价、多靶向性(例如，双靶向性)单一试剂(双特异性和/或多特异性抗体)。生成的试剂可以是双重特异性、四价免疫球蛋白G(IgG)样分子，称为双重可变-结构域免疫球蛋白(DVD-Ig)，其可由任何两种抗体(例如，单克隆抗体)工程改造，同时保留亲本抗体的活性。该类型的分子可由哺乳动物细胞高效生成，并显示良好的物理化学和药物动力学性质。
在本发明内容中，抗体理解为包括单克隆抗体和多克隆抗体、抗体片段(例如，Fab和F(ab')2)、嵌合抗体双功能或双特异性抗体以及四聚抗体复合物。本发明抗体还可描述为或在其结合亲和性方面具有特点，包括以Kd(离解常数)为10-5M或更少(例如，10-6M或更少，10-7M或更少，10-8M或更少，10-9M或更少，10-10M或更少，10-11M或更少，10-12M或更少，10- 13M或更少，10-14M或更少，10-15M或更少或10-16M或更少)为特征的那些。对于双特异性和/或多特异性抗体，其具有多于一种特异性(即，多于1个结合常数)，各抗原特异性区域可具有10-5M或更少(例如，10-6M或更少，10-7M或更少，10-8M或更少，10-9M或更少，10-10M或更少，10-11M或更少，10-12M或更少，10-13M或更少，10-14M或更少，10-15M或更少或10-16M或更少)的Kd(离解常数)。
除了Fab以外，与SIRPα的至少一个表位具有结合特异性的较小抗体片段和表位-结合肽也由本发明考虑并可用于主题方法。例如，单链抗体可根据授予Ladner等的美国专利号4,946,778的方法来构建，其通过引用其全文纳入本文。单链抗体可包括通过柔性接头部分接合的轻链和重链的可变区域。示例性的合适的单链抗体可包括本文所示的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO:2-4、6-8和/或9-10)(SEQ ID NO:2-4和6-8是CDR)(SEQ ID NO:9是KWAR23scFv重-轻)(SEQ ID NO:10是KWAR23scFv轻-重)。
而较小的是称为单域抗体的该抗体片段，其包含分离的VH单域。用于获得具有其来源的完整抗体的至少一些接合特异性的单域抗体的技术本领域已知。例如，Ward等，于"大肠杆菌分泌的单一免疫球蛋白可变结构域组分的结合活性(Binding Activities of aRepertoire of Single Immunoglobulin Variable Domains Secreted fromEscherichia coli)"Nature 341:644-646，公开了筛选以获得抗体重链可变区(H单域抗体)的方法，所述抗体重链可变区对于其以分离形式结合的靶向表位具有足够的亲和性。
核酸
本发明还提供编码主题抗SIRPα抗体(例如，包括上述任何多肽)的分离的核酸、包含所述核酸的载体和宿主细胞，以及用于生成所述抗体的重组技术。感兴趣的核酸可编码与SEQ ID NO:1-18中任一项所示的氨基酸序列具有80％或更多，85％或更多，90％或更多，92％或更多，95％或更多，97％或更多，98％或更多，99％或更多，99.5％或更多或100％相同性的氨基酸序列。主题核酸可包括如下序列，其编码(i)一个或多个(例如，2或更多个，3或更多个，4或更多个，5或更多个或6或更多个)CDR序列(例如，SEQ ID NO:2-4和6-8所示那些)；(ii)完整可变区(例如，SEQ ID NO:1和5所示那些)；(iii)单链可变片段(例如，SEQ IDNO:9-10所示那些)；(iv)嵌合抗体序列(例如，SEQ ID NO:11-12所示那些)；和/或(v)双特异性抗体序列(例如，SEQ ID NO:13-18所示那些)。如本领域已知的，可变区序列可融合至任何合适的恒定区序列。
对于抗体的重组生成，可将编码核酸插入可复制的载体供于进一步克隆(DNA扩增)或供于表达。用常规方法(例如，利用能特异性结合编码所述抗体重链和轻链基因的寡核苷酸探针)易分离和测序编码主题抗体的DNA。有许多可用的载体。载体组分一般包括但不限于下述的一种或多种：信号序列、复制起点、一种或多种标志物基因、增强子元件、启动子，和转录终止序列。
本发明的主题抗SIRPα抗体可重组产生，其不仅直接产生，也可作为与异源性或同源性多肽的融合物形式产生，其包括信号序列或在成熟的蛋白质或多肽、免疫球蛋白恒定区序列等的N末端具有特异性切割位点的其它多肽。所选的异源性信号序列优选是可被宿主细胞识别和处理的(即，通过信号肽酶切割)。对于不识别和处理原始抗体信号序列的原核宿主细胞，所述信号序列被所选的原核信号序列取代。
"分离的"核酸分子是经鉴定并与其在抗体核酸的天然来源中一般关联的至少一种污染核酸分子分离的核酸分子。分离的核酸分子不同于其在天然中发现的形式或状态。分离的核酸分子因此可与其在天然细胞中存在的核酸分子区分。然而，分离的核酸分子包括包含在一般表达所述抗体的细胞中的核酸分子，其中，例如，所述核酸分子位于与天然细胞中不同的染色体位置。
用于克隆或表达主题核酸的合适的宿主细胞的示例包括但不必限于：原核细胞，酵母或更高级的真核细胞。有用的哺乳动物宿主细胞系的示例是通过SV40转化的猴肾CV1系(COS-7，ATCC CRL 1651)；人胚肾细胞系(293或亚克隆用于在悬浮培养基中生长的293细胞，Graham等,J.Gen Virol.36:59(1977))；婴儿仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵细胞/-DHFR(CHO,Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；小鼠支持细胞(TM4,Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))；猴肾细胞(CV1ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76,ATCC CRL-1587)；人宫颈癌细胞(HELA,ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK,ATCCCCL 34)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A,ATCC CRL 1442)；人肺细胞(W138,ATCC CCL 75)；人肝细胞(Hep G2,HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562,ATCC CCL51)；TR1细胞(Mather等,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1.982))；MRC 5细胞；FS4细胞；和人肝癌细胞系(HepG2)。宿主细胞用上述用于抗SIRPα抗体生成的表达或克隆载体转化，并在经改良以合适于诱导启动子、选择转化子或扩增编码所需序列的基因的常规营养培养基中培养。
由所述细胞制备的抗体组合物可采用，例如，羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析，和亲和性色谱纯化，其中亲和性色谱是优选的纯化技术。蛋白A作为亲和配体的适当性取决于抗体中的免疫球蛋白Fc区的种类和同种型。可利用蛋白A纯化基于人g1、g2或g4重链的抗体(Lindmark等，J.Immunol.Meth，62:1-13(1983))。蛋白质G通常推荐用于人g3(Guss等.，EMBO J.5:15671575(1986))。最常见的连接亲和配体的基质是琼脂糖，但也可采用其它基质。与琼脂糖相比，机械稳定的基质如可控孔径玻璃或聚(苯乙烯二乙烯基)苯可实现较快的流动速率和较短的加工时间。抗体包含CH3结构域时，Bakerbond ABXTM树脂(特鲁利贝克(J.T.Baker)；新泽西州菲利浦斯勃格)用于纯化。根据待回收抗体，也可使用其它蛋白质纯化技术，例如在离子交换柱上分离、乙醇沉淀、反相HPLC、二氧化硅色谱、在阴离子或阳离子交换树脂(如聚天冬氨酸柱)上进行的肝素SEPHAROSETM色谱、色谱聚焦、SDS-PAGE和硫酸铵沉淀。
初步纯化步骤后，对包含感兴趣抗体和污染物的混合物进行低pH疏水相互作用色谱，该色谱使用pH约为2.5-4.5的洗脱缓冲液，优选低盐浓度下进行(如约0-0.25M的盐)。
使用方法
本文提供的主题抗SIRPα抗体可用于调节吞噬作用(例如诱导吞噬作用)。例如，本文提供的主题抗SIRPα抗体可用于希望阻断某一细胞上的CD47和另一细胞上的SIRPα之间的相互作用的任何方法中。采用主题抗SIRPα抗体的示例性方法包括但不限于如下美国专利申请中所述的方法：20130142786、20120282174、20110076683、20120225073、20110076683、20110015090、20110014119、20100239579、20090191202、20070238127、20070111238和20040018531；其通过引用其全文纳入本文。例如，可给予抗体组合物以诱导对于表达CD47的癌细胞、炎性细胞和/或慢性感染的细胞的吞噬作用。
本文提供的主题抗SIRPα抗体可单独或联合另一抗体(例如，以双特异性抗体形式)给予对象，以治疗症状、病症和/或疾病。可用主题抗SIRPα抗体治疗的症状、病症和/或疾病的示例包括但不限于，癌症(任何形式的癌症，包括但不限于：癌、软组织肿瘤、肉瘤、畸胎瘤、黑素瘤、白血病、淋巴瘤、脑癌、实体瘤、间皮瘤(MSTO)等)；感染(例如，慢性感染)；和免疫学疾病或紊乱(例如，炎性疾病)(例如，多发性硬化、关节炎等)(例如，用于免疫抑制治疗)。主题抗SIRPα抗体还可用于移植物条件调整(例如，干细胞移植物、骨髓移植物等)。(例如，为了破坏恶性细胞，以提供免疫抑制来防止患者的身体对供者的细胞/干细胞等产生排斥)。
本文中所用的“癌症”包括本文所述的任何形式的癌症。其中癌细胞表达CD47(例如，在一些情况中，相较于非癌细胞，癌细胞显示增加的CD47表达)的任何癌症是待通过主题方法和组合物治疗的合适的癌症。
在一些实施方式中，主题抗SIRPα抗体可抑制免疫细胞的活化，因此可抑制免疫细胞的细胞因子和/或趋化因子生成，尤其是在细胞表面上表达CD47的免疫细胞。与免疫细胞相互作用的免疫复合物(即，抗原-抗体复合物)的存在能活化免疫细胞，并诱导通过该免疫细胞的细胞因子生成，其可被主题抗SIRPα抗体抑制。免疫复合物能够通过触发Fc-受体介导的炎症(数种人免疫学疾病中涉及的过程，例如，全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎，和肖格伦综合征(Sjoergen's syndrome)来破坏组织。因此，本文所述的主题抗SIRPα抗体可用于改变免疫细胞的免疫响应性，由此可用于治疗或预防免疫学疾病或紊乱。
主题抗SIRPα抗体可用于治疗或预防、抑制、减缓或减少与免疫学疾病或紊乱相关的症状。免疫学紊乱包括炎性疾病或紊乱和自身免疫疾病或紊乱。尽管炎症或炎性响应是宿主对于损伤的正常且保护性的响应，但炎症可能会导致不需要的损伤。例如，动脉粥样硬化至少部分是对于动脉损伤和最终的炎性级联事件的病理学响应。可被治疗的心血管疾病或紊乱(可包括也被视为免疫学疾病/紊乱的疾病或紊乱)，包括例如，动脉粥样硬化、心内膜炎、高血压或外围缺血性疾病。代谢疾病或紊乱包括糖尿病、肥胖，和与异常会变化的线粒体功能相关联的疾病和紊乱。
免疫学疾病或紊乱可以是自身免疫疾病或炎性疾病。在某些实施方式中，免疫学疾病或紊乱是多发性硬化、类风湿性关节炎、脊柱关节病、全身性红斑狼疮、移植物抗宿主疾病、抗体介导的炎性或自身免疫疾病或紊乱、败血症、糖尿病、牛皮癣、动脉粥样硬化、肖格伦综合征、进展型全身性硬化、硬皮病、急性冠脉综合征、缺血性再灌注、克罗恩氏病、子宫内膜异位、血管球性肾炎、重症肌无力、特发性肺纤维化、哮喘、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、血管炎或炎性自身免疫肌炎。脊柱关节病包括，例如，强直性脊柱炎、反应性关节炎、与炎性肠疾病相关联的肠病关节炎、牛皮癣性关节炎、分离的急性前葡萄膜炎、未分化脊柱关节病、贝塞特氏综合征，和幼年特发性关节炎。本文所述的抗SIRPα抗体还可用于治疗心血管疾病或紊乱，例如动脉粥样硬化、心内膜炎、高血压或外围缺血性疾病。在某些实施方式中，所述炎性疾病是多发性硬化或关节炎(例如，类风湿性关节炎)。例如，在一些情况中，主题抗体组合或双特异性抗体(例如，抗SIRPα联合抗CD19，CD20，CD22，CD52等)可用于治疗炎性疾病。例如，主题抗体组合或双特异性抗体(例如，抗SIRPα联合抗CD19，CD20，CD22，CD52等)可用于治疗B细胞损耗。
在一些实施方式中，主题抗SIRPα抗体可用于改变(以统计学显著的或生物学显著的方式增强或遏制)免疫细胞的免疫响应性。本文所述的主题抗SIRPα抗体可通过发挥生物功能或作用(包括如下的任何一种或多种(或至少一种))来改变或影响免疫细胞的免疫响应性：抑制树突细胞成熟；削减原初T细胞向Th1效应物细胞的发育；遏制由树突细胞释放的细胞因子；改变细胞迁移；抑制至少一种细胞因子的生成，例如，TNF-α、IL-12、IL-23、IFN-γ、GM-CSF和IL-6中的至少一种；抑制免疫复合物-诱导的通过免疫细胞(例如，树突细胞)的至少一种细胞因子的生成；抑制表达CCD47配体(例如SIRP-α)的免疫细胞的活化，抑制免疫细胞产生趋化因子；抑制Fc介导的细胞因子生成；和遏制促炎性响应。
一般而言，免疫应答包括(1)体液应答，其中对抗原具有特异性的抗体由分化的B淋巴细胞(已知为血浆细胞)生成，和(2)细胞介导的应答，其中，不同类型的T淋巴细胞通过多种机制消除抗原。例如，能够识别特定抗原的辅助性T细胞可通过释放可溶性介导物(例如细胞因子)来响应，以招募免疫系统的其它细胞来参与免疫应答。并且，能够进行特定抗原识别的细胞毒性T细胞可通过结合至抗原的细胞或颗粒并将其摧毁或破坏来响应。
宿主或对象中的免疫应答可通过任何数量的熟知的免疫学方法来测定。所述试验包括但不限于，体内或体外测定可溶抗体、可溶介导物如细胞因子(例如，IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IL-6、IL-23、TNF-α，和TGF-β)、淋巴因子、趋化因子、激素、生长因子等，以及其它可溶性小肽、碳水化合物、核苷酸和/或脂质介导物；细胞活化状态变化，通过改变免疫系统的细胞的功能或结构性质来确定，例如细胞增殖、改变的运动性、特殊活性的降低，例如特定基因表达或细胞裂解性表现；细胞成熟，例如响应刺激的树突细胞成熟；Th1应答和Th2应答之间的关系的改变；免疫系统的细胞的细胞分化，包括改变的表面抗原表达概况，或凋亡(程序性细胞死亡)的起始。进行这些和类似试验的方法可见于，例如，Lefkovits(《免疫学方法手册：综合技术资料》(Immunology Methods Manual:The ComprehensiveSourcebook of techniques)，1998)。还参见《新编免疫学方案)(Current Protocols inImmunology)；Weir，《实验免疫学手册》(Handbook of Experimental Immunology)，布莱克威尔科学公司(Blackwell Scientific)，马萨诸塞州波士顿.(1986)；Mishell和Shigii(编)《细胞免疫学选择方法》(Selected Methods in Cellular Immunology)，费曼出版公司(Freeman Publishing)，加利福尼亚州旧金山.(1979)；Green和Reed，Science 281:1309(1998)，以及其中所引用的参考文献)。
细胞因子的水平可通过任何便利的方法测定，包括ELISA、ELISPOT、质谱，和流式细胞术(以检测胞内细胞因子)。由对免疫应答的抗原特异性诱导或刺激造成的免疫细胞增殖和克隆扩增可通过分离淋巴细胞(例如脾细胞或来自淋巴结的细胞)、用抗原刺激所述细胞，并检测细胞因子生成、细胞增殖和/或细胞活力，例如通过引入氚化胸腺嘧啶或非放射性试验(例如MTT试验等)来测定。本文所述的主题抗SIRPα抗体对于Th1免疫应答和Th2免疫应答之间的平衡的作用可被检测，例如，通过测定Th1细胞因子(例如IFN-γ、IL-12、IL-2和TNF-β)和2型细胞因子(例如IL-4、IL-5、IL-9、IL-10和IL-13)的水平。
例如，在一些情况中，主题抗体组合或双特异性抗体(例如，抗SIRPα联合抗CD19，CD20，CD22，CD52等)可用于治疗炎性疾病。例如，主题抗体组合或双特异性抗体(例如，抗SIRPα联合抗CD19，CD20，CD22，CD52等)可用于治疗B细胞损耗。
本文提供的主题抗SIRPα抗体可用于针对人病原体和/或人癌症进行的疫苗接种的方法。例如，患者自身的SIRPα表达型吞噬细胞(例如，巨噬细胞，例如，自体同源的巨噬细胞)可与受影响的细胞(例如，癌细胞、具有胞内感染的细胞等)合并(例如，离体/体外)，并用主题抗SIRPα抗体处理以诱导摄入(例如，吞噬作用)。可将所述吞噬细胞移植回患者身体中，以向宿主免疫系统呈递抗原(例如，来自癌细胞的抗原、来自病原体的抗原等)，由此产生获得性免疫应答。
本文提供的主题抗SIRPα抗体可体外用于免疫测定，其中，它们可用于液相或结合至固相载体。此外，这些免疫测定中的抗SIRPα抗体可通过多种方式被可检测标记。可利用本发明的抗SIRPα抗体的免疫测定的类型的示例有流式细胞术，例如FACS、MACS、免疫组化、竞争性和非竞争性免疫测定，其以直接或间接形式进行；等。采用本发明的抗体来检测抗原可利用免疫测定进行，所述免疫测定以正向、反向或同时两种模式进行，包括在生理学样品上进行的免疫组化试验。本领域技术人员将已知或能够容易地识别，其它免疫测定形式而无需过度实验。
本发明的抗SIRPα抗体可结合至许多种不同的运载体，并用于检测SIRPα表达型细胞的存在。熟知的运载体的示例包括玻璃、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、右旋糖苷、尼龙、淀粉酶、天然和改性纤维素、聚丙烯酰胺、琼脂糖和磁铁矿。出于本发明的目的，运载体的性质可以是可溶或不可溶的。本领域技术人员将知晓用于结合抗SIRPα抗体的其它合适的运载体，或将能够采用常规实验确定此类载体。
存在许多本领域普通技术人员已知的不同的标记物和标记方法(例如，以产生可检测标记的主题抗SIRPα抗体)，其可用作治疗方法中的追踪，用于诊断和/或预后方法等。可将标记物共价或非共价地连接至本发明抗体或其片段，包括由CDR序列组成或包含CDR序列的片段。可用于本发明的标记物的类型的示例包括酶、放射性同位素、荧光化合物、胶体金属、化学发光化合物，和生物发光化合物。本领域普通技术人员将知晓用于结合本发明的抗SIRPα抗体的其它合适的标记物，或将能够采用常规实验确定此类载体。此外，这些标记物与本发明的抗SIRPα抗体的结合可采用本领域普通技术人员常用的标准技术来完成。
在一些实施方式中，主题抗SIRPα抗体(例如，标记的抗SIRPα抗体)可用于成像(例如，用于癌症成像，用于炎症成像等)。例如，主题抗SIRPα抗体可用于检测个体中SIRPα表达型细胞的方法。因为主题抗SIRPα抗体可用于靶向特定细胞(例如，SIRPα表达型吞噬细胞，例如，巨噬细胞)，所述主题抗SIRPα抗体可用于检测此类细胞(例如，SIRPα表达型吞噬细胞)在感兴趣的身体区域中(例如，瘤中、发炎区域中、感染的区域中等)的存在。在一些情况中，采用主题抗SIRPα抗体对SIRPα表达型吞噬细胞的检测(例如，通过采用主题抗SIRPα抗体来成像)可用于诊断和/或预后目的。例如，主题抗SIRPα抗体可用于检测瘤相关的巨噬细胞，其相关于多种癌症类型中的较差预后。作为另一示例，主题抗SIRPα抗体可用于检测炎症-和/或感染相关的巨噬细胞。在一些情况中，主题抗SIRPα抗体用放射性同位素标记(即，所述抗体是带放射性标记的)，并且用于癌症、炎症和/或感染的成像方法中，例如，通过正电子放射断层造影术(PET)、单光子发射计算机断层扫描(SPECT)等。
在一些实施方式中，所述抗体或其片段连接至纳米颗粒，例如，用于成像。有用的纳米颗粒是本领域已知的那些，例如，包括但不限于，拉曼-硅土-金-纳米颗粒(R-Si-Au-NP)。所述R-Si-Au-NP由拉曼有机分子组成，其具有窄带光谱特征，吸附至金核上。因为拉曼有机分子可被改变，各纳米颗粒可携带其自身的特征，由此允许多种纳米颗粒同时通过多重法被独立地检测。将整个纳米颗粒包封在硅土壳中以将拉曼有机分子固着在金纳米核心上。任选对R-Si-Au-NP进行聚乙二醇(PEG)化以提高其生物相容性并提供功能“手柄”用于连接靶向部分(参见Thakor等(2011)Sci Transl Med.3(79):79ra33；Jokerst等.(2011)Small.7(5):625-33；Gao等.(2011)Biomaterials.32(8):2141-8；其各自特定地通过引用纳入本文)。
出于本发明目的，当存在于生物液体中和组织上时(体内或体外)，SIRPα可通过本发明的抗SIRPα抗体检测。可采用包含可检测的量的SIRPα的任何样品。样品可以是液体，例如尿液、唾液、脊液、血液、血清等，或固体或半固体，例如组织、粪便、活检物等，或固体组织，例如常用于组织诊断的那些。
可导致更高灵敏度的另一标记技术由将所述抗体偶联至低分子量半抗原组成。然后，这些半抗原可通过第二反应来特异性地检测。例如，常用半抗原，例如生物素，其与亲和素反应，或二硝基酚、吡哆醛或荧光素，其可与特定抗半抗原抗体反应。
在一些实施方式中，主题抗SIRPα抗体(包括，例如，双特异性巨噬细胞参与抗体)与另一抗体联用以治疗个体。在一个实施方式中，主题抗SIRPα抗体可与针对一种或多种癌症标志物(例如，CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2、HAVCR2(TIM3)等)的单克隆抗体联用(共同给予)。在一些情况中，相较于采用单一抗体，联合组合物可在增强对于靶细胞的吞噬作用方面具有协同性。作为原理的证明，CD47导向的试剂(例如，抗CD47抗体)与针对瘤特异性抗原的单克隆抗体(mAbs)(例如针对B-细胞淋巴瘤的利妥昔单抗(抗CD20)和针对HER2+乳腺癌的曲妥单抗(抗HER2))显示显著的抗肿瘤协同性。这些mAb的Fc片段活化巨噬细胞上的Fc受体(FcR)以驱动通过受体的ITAM(免疫受体基于酪氨酸的活化基序)传送的磷酸化作用级联事件。作为通过对立-相反ITIM(免疫受体基于酪氨酸的抑制基序)的SIRPα信号，阻断SIRPα能使平衡倾斜而有利于ITAM信号转导，由此加强吞噬作用。
在一些实施方式中，主题抗SIRPα抗体与特异性地结合第二抗原的抗体共同给予(即，联合给予)，所述第二抗原例如，CD47表达型细胞的标志物(例如，癌细胞标志物、感染的细胞的标志物等)。在一些实施方式中，第二抗原是选自下组的抗原：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2，和HAVCR2(TIM3)。在一些实施方式中，主题抗SIRPα抗体与各特异性结合至选自下组的抗原的一种或多种(例如，2或更多种，3或更多种等)抗体共同给予(即，联合给予)：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2，和HAVCR2(TIM3)。例如，在一些情况中，主题抗SIRPα抗体与选自下组的一种或更多种抗体共同给予：西妥昔单抗(结合EGFR)、帕尼单抗(结合EGFR)、利妥昔单抗(结合CD20)、曲妥单抗(结合HER2)、颇妥珠单抗(PERTUZUMAB)(结合HER2)、阿勒妥珠单抗(ALEMTUZUMAB)(结合CD52)、和布兰妥昔单抗(BRENTUXIMAB)(结合CD30)、杰妥珠单抗(GEMTUZUMAB)(结合CD33)、罗瓦妥珠单抗(LORVOTUZUMAB)(结合CD56)、依皮单抗(IPILIMUMAB)(结合CTLA-4(CD152))、尼瓦单抗(NIVOLUMAB)(结合PD-1(CD279))。
在一些情况中，给予个体的主题抗SIRPα抗体是多特异性抗体(例如，双特异性抗体)。在一些情况中，所述双特异性抗体特异性结合至SIRPα和第二抗原(例如，癌细胞标志物)。在一些情况中，第二抗原选自：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2，和HAVCR2(TIM3)。
包含本发明的一种或多种抗体的治疗制剂通过如下方式制备用于贮存：将具有所需纯度的抗体与任选的生理学上可接受的运载体、赋形剂或稳定剂(Remington'sPharmaceutical Sciences(《雷明顿药物科学》)第16版，Osol，A.编，1980)混合，来制备冻干制剂或水性溶液形式。所述抗体组合物可以与良好医学实践一致的方式配制、给药和给予。这种情况下，考虑的因素包括治疗的具体病症、治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床状况、所述病症的起因、试剂的递送位点、给药方法、给药安排，以及医学从业人员已知的其它因素。待给予的抗体的"治疗有效量"将由此类考虑来管理，并且是预防CD47相关疾病所需的最小量。
治疗剂量可以是至少0.01mg/kg体重，至少0.05mg/kg体重；至少0.1mg/kg体重，至少0.5mg/kg体重，至少1mg/kg体重，至少2.5mg/kg体重，至少5mg/kg体重，和不多于300mg/kg体重。本领域技术人员应理解，所述指导方针将根据所述活性剂的分子量调节，例如，用于抗体片段的应用或用于抗体偶联物的应用。所述剂量还可根据用于局部给予还是全身给予而不同，所述局部给予例如鼻内、吸入等，所述全身给予例如i.m.、i.p.、i.v.等。
所述抗体不必需，但任选地与加强活性或其它情况下增加治疗作用的一种或多种其它试剂配制。这些一般用于相同剂量，并采用与上文所用的给予途径，或迄今为止所用剂量的约1-99％。
在所用剂量和浓度下，可接受的载体、赋形剂或稳定剂对接受者无毒，包括：缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸缓冲剂；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷酯，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于10个残基)的多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷胺酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它糖，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的抗衡离子，如钠；金属络合物(如Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。用于体内给药的制剂必须是无菌的。这可通过无菌滤膜过滤容易地实现。
活性成分也可包入通过(例如)凝聚技术或界面聚合制备的微胶囊中，例子分别是羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊，或包入胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)或包入乳浊液(macroemulsion)中。这类技术可参见《雷明顿药物科学》第16版，Osol,A.编(1980)。
抗SIRPα抗体通过任何合适的手段给予，包括胃肠外、皮下、腹膜内、肺内和鼻内。腹膜外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。此外，所述抗SIRPα抗体能通过脉冲输注、尤其是采用抗体的递减剂量来合适地给予。
对于预防或治疗疾病，合适剂量的抗体将取决于待治疗的疾病类型，如上所述，疾病的严重程度和疾病病程、该抗体是否给予用于预防性目的、先前治疗、患者的临床史和对所述抗体的响应，以及主治医师的判断。所述抗体适于以一次或经一系列治疗给予所述患者。
在本发明的另一实施方式中，提供包含可用于治疗本文所述病症的物质的制品。所述制品包含容器和标记物。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器和试管。该容器可由各种材料如玻璃或塑料制成。所述容器装载有效于治疗所述病症的组合物，并且可具有无菌进入端口(例如，所述容器可以是具有皮下注射针可刺穿塞子的静脉输液袋或小瓶)。所述组合物中的活性剂可以是所述抗SIRPα抗体。所述容器上或与所述容器相联的标记物可指示所述组合物用于治疗所选病症。该制品还可包括含有药学上可接受缓冲剂(如磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和/或右旋糖溶液)的第二容器。所述制品还可包括从商业和使用者立场来看可能需要的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、填充剂、针头、注射器和具有使用说明书的插页。
主题本发明的抗SIRPα抗体可在试剂盒(或药盒)中提供，即，包装的预定量的试剂的组合，其具有用于给药和/或用于进行试验的说明书。在一些情况中，主题试剂盒可包含一种或多种其它抗体，所述其它抗体可与抗SIRPα抗体联用。例如，在一些情况中，主题试剂盒包含各自结合第二抗原(例如，癌细胞标志物)的一种或多种抗体。在一些实施方式中，第二抗原是选自下组的抗原：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2，和HAVCR2(TIM3)。在一些实施方式中，主题试剂盒包括对象SIRPα抗体和选自下组的一种或多种抗体：西妥昔单抗(结合EGFR)、帕尼单抗(结合EGFR)、利妥昔单抗(结合CD20)、曲妥单抗(结合HER2)、颇妥珠单抗(结合HER2)、阿勒妥珠单抗(结合CD52)，和布兰妥昔单抗(结合CD30)、杰妥珠单抗(结合CD33)、罗瓦妥珠单抗(结合CD56)、依皮单抗(结合CTLA-4(CD152))和尼瓦单抗(结合PD-1(CD279))。
当抗体用酶标记时，所述试剂盒可包含底物和通过所述酶进行检测所需的辅因子(例如，底物前体，其能提供可检测的发色团或荧光团)。此外，可包含其它添加剂，例如稳定剂、缓冲剂(例如，封闭缓冲剂或裂解缓冲剂)等。各种试剂的相对量可广泛变化，以提供使试验的灵敏度基本最优化的试剂的溶液中浓度。具体而言，所述试剂可以干粉形式提供，通常是冻干的形式，包括在溶解时能提供具有合适浓度的试剂溶液的赋形剂。
序列表关键信息
KWAR23可变重链(VH)(CDR带下划线)
EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVQQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKYAPKFQDKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCARWGAYWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:1)
KWAR23可变重链的CDR(由IMGT定义)
CDR-H1:GFNIKDYY(SEQ ID NO:2)
CDR-H2:IDPEDGET(SEQ ID NO:3)
CDR-H3:ARWGAY(SEQ ID NO:4)
KWAR23可变轻链(VL)(CDR带下划线)
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPRTFGAGTKLELK
(SEQ ID NO:5)
KWAR23可变轻链的CDR(由IMGT定义)
CDR-L1:SSVSSSY(SEQ ID NO:6)
CDR-L2:STS(SEQ ID NO:7)
CDR-L3:HQWSSYPRT(SEQ ID NO:8)
单链可变片段(重-轻(HL)和轻-重形式(LH))：
KWAR23 scFv HL(CDR带下划线)
EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVQQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKYAPKFQDKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCARWGAYWGQGTLVTVSGGGGSGGGGSGGGGSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYP RTFGAGTKLELK
(SEQ ID NO:9)
KWAR23 scFv LH(CDR带下划线)
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPRTFGAGTKLELKGTTAASGSSGGSSSGAEVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVQQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKYAPKFQDKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCARW GAYWGQGTLVTVS
(SEQ ID NO:10)
嵌合Fab(小鼠可变结构域，人IgG1CH1，人κCL)：
KWAR23 chiFab重链(HC)(CDR带下划线)
EVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVQQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKYAPKFQDKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCARWGAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
(SEQ ID NO:11)
KWAR23 chiFab轻链(LC)(CDR带下划线)
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPRTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(SEQ ID NO:12)
双特异性巨噬细胞增强型抗体(BiME)的序列：
抗CD20/抗SIRPα：
2B8_K23_DVD_VH(CDR带下划线)
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYNMHWVKQTPGRGLEWIGAIYPGNGDTSYNQKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARSTYYGGDWYFNVWGAGTTVTVSSASTKGPEVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVQQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKYAPKFQDKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCARWGAYWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:13)
2B8_K23_DVD_VL(CDR带下划线)
QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVSYIHWFQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPVRFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWTSNPPTFGGGTKLEIKRTVAAPQIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPRTFGAGTKLELK
(SEQ ID NO:14)
抗HER2/抗SIRPα：
4D5_K23_DVD_VH(CDR带下划线)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPEVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVQQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKYAPKFQDKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCA RWGAYWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:15)
4D5_K23_DVD_VL(CDR带下划线)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPQIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPRTFGAGTKLELK
(SEQ ID NO:16)
抗CD56/抗SIRPα：
56_K23_DVD_VH(CDR带下划线)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSGSFTIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARMRKGYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPEVQLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYIHWVQQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKYAPKFQDKATITADTSSNTAYLHLSSLTSEDTAVYYCARW GAYWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO:17)
56_K23_DVD_VL(CDR带下划线)
DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQIIIHSDGNTYLEWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQGSHVPHTFGQGTKVEIKRTVAAPQIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSS VSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCHQWSSYPRTFGAGTKLELK
(SEQ ID NO:18)
现在详细描述本发明，本领域普通技术人员应理解，可以进行多种修改和改变而不背离本发明的精神或范围。
实验部分
提供以下实施例的目的是向本领域普通技术人员完整地公开和描述如何制备和使用本发明，这些实施例不意在限制发明人认为的发明范围，也不代表下述实验是所进行的所有或仅有的实验。努力保证所用数值(如量、温度等)的准确性，但应允许一些实验误差和偏差。除非另有说明，份数是重量份数，分子量是重量平均分子量，温度是摄氏度，压力是大气压或接近大气压。
本说明书引用的所有发表物和专利申请通过引用纳入本文，就好像各发表物或专利申请特定和单独地通过引用纳入本文那样。
本发明已就本发明人发现或提出的具体实施方式进行了描述，以包含用于实践本发明的优选模式。本领域技术人员应理解，在本发明的教导下，可在示例性的具体实施方式中进行多种改变和修改而不背离本发明的预定范围。例如，由于密码子冗余，可对DNA序列进行改变而不影响蛋白质序列。此外，出于生物学功能等价的考量，可对蛋白质结构进行改变而不影响生物学功能的类型或量。所有这些修改均应包括在所附权利要求书的范围之内。
为了构建双特异性巨噬细胞增强型(BiME)抗体，我们首先将我们的工作着重于获得阻断CD47以高亲和性结合的单克隆抗SIRPα抗体。我们在大肠杆菌中重组表达了人SIRPα(残基1-118)的CD47-结合性N末端IgV结构域，并用该纯化蛋白免疫了小鼠。获得杂交瘤并通过ELISA对于SIRPα结合进行筛选。作为额外的筛选步骤，通过细胞-结合试验来评估CD47-阻断性。表达内源性SIRPα的人THP-1细胞与杂交瘤上清液孵育，并用偶联至人CD47的生物素化的IgSF结构域的荧光链霉亲和素四聚体染色。通过流式细胞术评估CD47与THP-1细胞的结合，并且进一步亚克隆抑制CD47结合的克隆。选择最高表达的克隆，KWAR23，用于进一步表征。
我们试图粗略估计KWAR23对于SIRPα的亲和性，并确定其是否会加强对于癌细胞的吞噬作用。KWAR23抗体通过蛋白质G色谱从杂交瘤上清液纯化，并在100nM荧光CD47/链霉亲和素四聚体的存在下在THP-1细胞上滴定。如图1所示，KWAR23以约270pM的IC50有力地抑制了CD47结合。
对KWAR23的可变区域测序。为了验证所述序列，KWAR23scFv采用位点重叠延伸(SOE)PCR以两个方向构建：具有N末端轻链(LH scFv，参见SEQ ID NO:10)，相反地，具有N末端重链(HL scFv，参见SEQ ID NO:9)。两个scFv均在所述可变片段之间包含15-氨基酸(GGGGS)3(SEQ ID NO:19)接头。然后，在大肠杆菌中以单体形式表达所述scFv，产生了以约35nM的IC50(图1a)抑制CD47与THP-1细胞结合的功能蛋白质。预计了完整KWAR23和及其scFv之间的表观亲和性，由于所述抗体二聚体提供不由scFv单体参与的活性。
KWAR23对于肿瘤吞噬作用的功能功效通过基于流式细胞术的试验评估(图2)。简言之，GFP+DLD-1结肠癌细胞、GFP+SK-BR-3乳腺癌细胞或GFP+Raji淋巴瘤细胞与原代人巨噬细胞分别在饱和浓度(10μg/ml)的KWAR23和不同浓度的西妥昔单抗(抗EGFR)、曲妥单抗(抗HER2)或利妥昔单抗(抗CD20)的存在下共培养。通过测定巨噬细胞的GFP阳性百分比来检测吞噬作用。相较于载剂(PBS)，KWAR23大幅增加了由单独的西妥昔单抗、曲妥单抗或利妥昔单抗诱导的对于肿瘤细胞吞噬作用的功效(约10倍较低的EC50)和功效(约50-100％较高的E最大)(图2)。
随后评估了KWAR23增强具体抗体类型和/或同种型的能力(图3)。测试了不同的抗CD20类型和同种型，包括：人IgG1、2、3和4；人IgM；人IgA1和2；人IgE；小鼠IgG1和2a；和小鼠IgA(图3A)。数据显示，KWAR23增强了测试的全部抗CD20IgG同种型(人和小鼠)的功效，但当抗CD20是IgM、IgA或IgE时，未显著地增强抗CD20的功效。KWAR23还增强了抗EGFR同种型IgG1(西妥昔单抗)和同种型IgG2(帕尼单抗)的功效，证明结果并非对于抗CD20特定(图3B)。因此，数据显示KWAR23能够增强全部IgG同种型的功效。
基于上述数据，提供能够结合SIRPα和第二抗原(例如，癌症标志物，例如CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2、HAVCR2(TIM3)等)的多特异性抗体。图4A说明了示例性主题双特异性抗体(也称作双特异性巨噬细胞增强型(BiME)抗体)的提出的活性的示意图。图4B说明了示例性抗CD20(和抗SIRPα)BiME抗体的示意图。为了证明主题双特异性抗体的功效，当Raji淋巴瘤细胞与主题双特异性抗体在吞噬细胞的存在下接触时，测试吞噬作用(图4C)。测试的双特异性抗体是双-可变-结构域免疫球蛋白(DVD-Ig)(其中重链具有SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，并且轻链具有SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列)其特异性地结合SIRPα和CD20(参见图4B)。数据显示，相较于仅采用抗CD20抗体(利妥昔单抗)的情况(即，在不存在SIRPα结合试剂的情况下)，测试的双特异性抗体显示了较大的功效。
双特异性抗体采用CD20和KWAR23抗体产生。图5A-5B显示CD20BiME与表达hSIRPα的酵母的结合，通过偶联至Alexa fluor-647的抗人IgG4Fc抗体和偶联至FITC的抗利妥昔单抗抗体检测。KWAR23与表达hSIRPα的酵母的结合通过抗人IgG4Fc抗体而非抗利妥昔单抗抗体检测。
抗SIRPα抗体(KWAR23)增强癌症-靶向性抗体的ADCP和ADCC，如图6A-E所示。抗SIRPα抗体(KWAR23)增强人巨噬细胞对癌症-靶向性抗体的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)：A.KWAR23+利妥昔单抗(抗CD20)，用于人淋巴瘤癌细胞(Raji)；B.KWAR23+曲妥单抗(抗Her2)，用于人乳腺癌细胞(SKBR3)；C.KWAR23+伐色珠单抗(vorsetuzumab)(抗CD70)，用于人肾细胞癌症(RCC10，TK10，Caki1)。抗SIRPα抗体(KWAR23)通过人中性粒细胞增强癌症-靶向性抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)：D.KWAR23+利妥昔单抗(抗CD20)，用于人淋巴瘤癌细胞(Raji)；E.KWAR23+曲妥单抗(抗Her2)，用于人乳腺癌细胞(SKBR3)。
相较于亲本癌症-靶向性抗体，双特异性巨噬细胞增强型抗体(BiME)增强ADCP和ADCC，如图7A-7E所示。抗SIRPα抗体(KWAR23)BiME通过人巨噬细胞增强癌症-靶向性抗体的抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)：A.抗CD20BiME(KWAR23+利妥昔单抗(抗CD20))，用于人淋巴瘤癌细胞(Raji)；B.抗Her2BiME(KWAR23+曲妥单抗(抗Her2))，用于人乳腺癌细胞(SKBR3)；C.抗CD70BiME(KWAR23+伐色珠单抗(抗CD70))，用于人肾细胞癌症(RCC10，TK10，Caki1)。抗SIRPα抗体(KWAR23)BiME增强人中性粒细胞对癌症-靶向性抗体的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)：D.抗CD20BiME(KWAR23+利妥昔单抗(抗CD20))，用于人淋巴瘤癌细胞(Raji)；E.抗Her2BiME(KWAR23+曲妥单抗(抗Her2))，用于人乳腺癌细胞(SKBR3)。
KWAR23增强在EGFR信号转导通路中的下游突变的存在下响应西妥昔单抗的吞噬作用，如图8所示。A.EGFR在人结肠癌细胞系表面上的表达，通过西妥昔单抗的结合测定。黑色点线表示用同种型对照抗体染色的DLD-1细胞。B.对于采用指示疗法治疗的GFP+结肠癌细胞系的人巨噬细胞吞噬作用。KRAS和BRAF的突变状态如先前报道。数据表示采用来自四个独立的血液供者的巨噬细胞的平均和标准偏差。wt＝野生型；ns＝不显著，*p<0.05，**p<0.01，****p<0.0001，针对KWAR23+西妥昔单抗对比全部其它治疗或指示的比较，如通过采用Sidak校正的双向ANOVA(用于多重比较)所评估。
KWAR23增强响应糖化工程改造的抗体的吞噬作用，如图9所示。响应利妥昔单抗或糖化工程改造的抗CD20抗体奥滨尤妥珠单抗的Raji淋巴瘤细胞的人巨噬细胞吞噬作用。点表示采用来自独立血液供者的巨噬细胞的分析，短线表示全部供者间的中值。ns＝不显著，*p<0.05，针对通过采用Sidak校正的双向ANOVA(用于多重比较)进行的指示比较。

Claims (37)

1.一种抗体，其特异性结合至人SIRPα并且包含一种或多种CDR，所述一种或多种CDR的氨基酸序列与SEQ ID NO:2-4和6-8中任一项所示的CDR氨基酸序列相比相差不多于3个氨基酸。
2.如权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体包含如SEQ ID NO:2-4和6-8中所示的6种序列中的一种或多种CDR序列。
3.如权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体包含轻链，所述轻链包含如SEQ ID NO:6-8所示的CDR氨基酸序列中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的抗体，其中，所述抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO:6-8所示的3种CDR氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体包含重链，所述重链包含如SEQ ID NO:2-4所示的CDR氨基酸序列中的一种或多种。
6.如权利要求5所述的抗体，其中，所述抗体包含重链，所述重链包含SEQ ID NO:2-4所示的3种CDR氨基酸序列。
7.如权利要求1所述的抗体，其包含：
(i)轻链，所述轻链包含如SEQ ID NO:6-8所示的CDR氨基酸序列中的一种或多种；和
(ii)重链，所述重链包含如SEQ ID NO:2-4所示的CDR氨基酸序列中的一种或多种。
8.如权利要求7所述的抗体，其中，所述重链包含如SEQ ID NO:2-4所示的各CDR序列，并且所述轻链包含如SEQ ID NO:6-8所示的各CDR序列。
9.如权利要求1所述的抗体，其包含：
(i)具有三个CDR的重链，其中，CDR-H1具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，CDR-H2具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，并且CDR-H3具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；和
(ii)具有三个CDR的轻链，其中，CDR-L1具有如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，CDR-L2具有如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，并且CDR-L3具有如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
10.如权利要求9所述的抗体，其包含SEQ ID NO:9-10中任一项所示的氨基酸序列。
11.如权利要求9所述的抗体，其中，所述重链包含SEQ ID NO:1、11、13、15和17中任一项所示的氨基酸序列。
12.如权利要求9所述的抗体，其中，所述轻链包含SEQ ID NO:5、12、14、16和18中任一项所示的氨基酸序列。
13.如权利要求9所述的抗体，其中：
(a)所述重链包含SEQ ID NO:1、11、13、15和17中任一项所示的氨基酸序列；和
(b)所述轻链包含SEQ ID NO:5、12、14、16和18中任一项所示的氨基酸序列。
14.如权利要求9所述的抗体，其中：
(a)所述重链包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且所述轻链包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；
(b)所述重链包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，并且所述轻链包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列；
(c)所述重链包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列，并且所述轻链包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列；
(d)所述重链包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，并且所述轻链包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列；或
(e)所述重链包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，并且所述轻链包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。
15.如权利要求1-14中任一项所述的抗体，其中，所述抗体在结合后不活化SIRPα。
16.如权利要求1-15中任一项所述的抗体，其中，所述抗体是嵌合抗体或人源化抗体。
17.如权利要求16所述的抗体，其中，所述抗体是人源化的单克隆抗体。
18.如权利要求1-17中任一项所述的抗体，其中，所述抗体是特异性结合至SIRPα和至少第二抗原的多特异性抗体。
19.如权利要求18所述的抗体，其中，所述第二抗原是表达CD47的细胞的标志物。
20.如权利要求19所述的抗体，其中，所述第二抗原选自：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2，和HAVCR2(TIM3)。
21.一种编码如权利要求1-20中任一项所述的抗体的多核苷酸。
22.一种产生如权利要求1-20中任一项所述的抗体的细胞。
23.一种包含如权利要求1-20中任一项所述的抗体的药物组合物。
24.如权利要求23所述的药物组合物，其还包含第二抗体，所述第二抗体特异性地结合至表达CD47的癌细胞的标志物。
25.如权利要求24所述的药物组合物，其中，所述第二抗体特异性地结合至选自下组的一种或多种标志物：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2，和HAVCR2(TIM3)。
26.如权利要求23所述的药物组合物，其包含药学上可接受的赋形剂。
27.一种诱导个体中的吞噬作用的方法，所述方法包括：
以有效诱导吞噬作用的剂量给予个体包含如权利要求1-20中任一项所述的抗体的组合物。
28.如权利要求27所述的方法，其中，所述个体是人。
29.如权利要求28所述的方法，其中，所述个体具有选自下组的病症或疾病：癌症、实体瘤、白血病、淋巴瘤、慢性感染、炎性疾病、多发性硬化，和关节炎。
30.如权利要求28或权利要求29所述的方法，其中，所述组合物包含第二抗体，所述第二抗体特异性地结合表达CD47的细胞的标志物。
31.如权利要求30所述的方法，其中，所述第二抗体特异性地结合癌细胞标志物。
32.如权利要求31所述的方法，其中，所述癌细胞标志物选自：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、EGFR、HER2、CD117、C-Met、PTHR2，和HAVCR2(TIM3)。
33.一种检测生物样品或组织中SIRPα的存在的方法，所述方法包括：使所述生物样品或组织接触如权利要求1-20中任一项所述的抗体，和，检测结合至所述生物样品或组织的抗体的存在与否。
34.一种检测个体中的表达SIRPα的细胞的方法，包括：
给予所述个体如权利要求1-20中任一项所述的抗SIRPα抗体，其中，所述抗体带有可检测标记物；和
检测所述个体中是否存在所述标记物。
35.如权利要求34所述的方法，其中，所述可检测标记物是放射性同位素标记物。
36.如权利要求35所述的方法，其中，所述检测步骤包括：采用正电子放射断层造影术(PET)检测是否存在所述标记物。
37.如权利要求34-36中任一项所述的方法，其中，所述个体患有或疑似患有癌症、炎症、炎性疾病和/或慢性感染。
CN201580013178.2A 2014-03-11 2015-03-11 抗SIRPα抗体和双特异性巨噬细胞增强型抗体 Active CN106456749B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461951226P 2014-03-11 2014-03-11
US61/951,226 2014-03-11
PCT/US2015/019954 WO2015138600A2 (en) 2014-03-11 2015-03-11 Anti sirp-alpha antibodies and bi-specific macrophage enhancing antibodies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106456749A true CN106456749A (zh) 2017-02-22
CN106456749B CN106456749B (zh) 2021-03-30

Family

ID=54072584

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580013178.2A Active CN106456749B (zh) 2014-03-11 2015-03-11 抗SIRPα抗体和双特异性巨噬细胞增强型抗体

Country Status (8)

Country Link
US (2) US10081680B2 (zh)
EP (1) EP3116544A4 (zh)
JP (1) JP6606505B2 (zh)
CN (1) CN106456749B (zh)
AU (1) AU2015229448B2 (zh)
CA (1) CA2939293C (zh)
SG (1) SG11201607143UA (zh)
WO (1) WO2015138600A2 (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109535258A (zh) * 2018-10-26 2019-03-29 上海科弈药业科技有限公司 一种针对Her2+肿瘤的多功能融合蛋白及其应用
WO2019109357A1 (zh) * 2017-12-08 2019-06-13 杭州翰思生物医药有限公司 抗pd-1/cd47的双特异性抗体及其应用
CN110650976A (zh) * 2017-04-13 2020-01-03 艾杜罗生物科技欧洲控股有限责任公司 抗SIRP α抗体
CN111448210A (zh) * 2017-07-26 2020-07-24 四十七公司 抗SIRP-α抗体及相关方法
CN112384532A (zh) * 2018-06-29 2021-02-19 艾利妥 抗SIRP-β1抗体及其使用方法
WO2021032078A1 (en) * 2019-08-20 2021-02-25 Elpiscience (Suzhou) Biopharma, Ltd. Novel anti-sirpa antibodies
WO2021129697A1 (en) * 2019-12-24 2021-07-01 Lanova Medicines Limited Company ANTI-SIRPα MONOCLONAL ANTIBODIES AND USES THEREOF
CN113412279A (zh) * 2018-11-15 2021-09-17 拜奥迪斯私人有限公司 人源化抗SIRPα抗体
CN113631576A (zh) * 2019-03-26 2021-11-09 四十七公司 用于治疗癌症的多特异性药剂
CN115052895A (zh) * 2020-12-11 2022-09-13 浙江博锐生物制药有限公司 抗SIRPα抗体及其用途
WO2023020459A1 (zh) * 2021-08-17 2023-02-23 杭州九源基因工程有限公司 靶向SIRPα的单克隆抗体及其用途
US11723348B2 (en) 2017-03-31 2023-08-15 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Genetically modified mice expressing humanized CD47
WO2023202672A1 (en) * 2022-04-20 2023-10-26 Biosion Inc. Antibodies targeting sirp-alpha and uses thereof

Families Citing this family (92)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3722317A1 (en) 2008-01-15 2020-10-14 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Markers of acute myeloid leukemia stem cells
US11072655B2 (en) 2008-01-15 2021-07-27 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Markers of acute myeloid leukemia stem cells
HUE039849T2 (hu) 2011-03-16 2019-02-28 Argenx Bvba CD70 elleni ellenanyagok
US10391168B1 (en) 2014-08-22 2019-08-27 University Of Bern Anti-CD70 combination therapy
WO2016033201A1 (en) 2014-08-26 2016-03-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Engraftment of stem cells with a combination of an agent that targets stem cells and modulation of immunoregulatory signaling
US10550187B2 (en) * 2014-10-24 2020-02-04 Incept, Llc Extra luminal scaffold
EP3012271A1 (en) 2014-10-24 2016-04-27 Effimune Method and compositions for inducing differentiation of myeloid derived suppressor cell to treat cancer and infectious diseases
US20170151281A1 (en) 2015-02-19 2017-06-01 Batu Biologics, Inc. Chimeric antigen receptor dendritic cell (car-dc) for treatment of cancer
AR106184A1 (es) 2015-09-29 2017-12-20 Celgene Corp Proteínas de unión a pd-1 y sus métodos de uso
WO2017068164A1 (en) 2015-10-21 2017-04-27 Ose Immunotherapeutics Methods and compositions for modifying macrophage polarization into pro-inflammatory cells to treat cancer
CA3005911A1 (en) * 2015-12-11 2017-06-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Treatment of cancer with dual targeting of cd47 and egfr
US11001629B2 (en) * 2015-12-28 2021-05-11 Innate Pharma Variable regions for NKp46 binding proteins
CN114716552B (zh) 2016-01-11 2024-05-24 四十七公司 人源化、小鼠或嵌合抗cd47单克隆抗体
CN107149682B (zh) * 2016-03-04 2022-01-04 复旦大学 一种靶向cd47的免疫检查点抑制剂药物组合物及其制备方法
UA126658C2 (uk) * 2016-04-14 2023-01-11 Осе Іммьюнотерапьютікс НОВІ АНТИТІЛА ДО SIRPa ТА ВАРІАНТИ ЇХ ТЕРАПЕВТИЧНОГО ЗАСТОСУВАННЯ
SG11201808465UA (en) * 2016-04-14 2018-10-30 Ose Immunotherapeutics NEW ANTI-SIRPa ANTIBODIES AND THEIR THERAPEUTIC APPLICATIONS
US9957576B2 (en) 2016-04-21 2018-05-01 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for determining responsiveness to an anti-CD47 agent
CN109475603B (zh) 2016-06-20 2023-06-13 科马布有限公司 抗pd-l1抗体
JP2019527204A (ja) * 2016-07-01 2019-09-26 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー 抑制性免疫受容体阻害方法および組成物
WO2018009466A1 (en) 2016-07-05 2018-01-11 Aduro Biotech, Inc. Locked nucleic acid cyclic dinucleotide compounds and uses thereof
US20190153095A1 (en) * 2016-07-05 2019-05-23 National University Corporation Kobe University Antitumor Agent
US11618784B2 (en) 2016-07-19 2023-04-04 Teva Pharmaceuticals Australia Pty Ltd. Anti-CD47 combination therapy
EP3493845A4 (en) * 2016-08-03 2020-04-15 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University INTERRUPTION OF FC RECEPTOR USE ON MACROPHAGES TO IMPROVE THE EFFECTIVENESS OF ANTI-SIRPALPHA ANTIBODY THERAPY
EP3515944A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING IMMUNE DISORDERS WITH PD-1 BINDING PROTEINS
EP3515943A4 (en) 2016-09-19 2020-05-06 Celgene Corporation METHODS OF TREATING VITILIGO WITH PD-1 BINDING PROTEINS
JOP20190009A1 (ar) 2016-09-21 2019-01-27 Alx Oncology Inc أجسام مضادة ضد بروتين ألفا منظم للإشارات وطرق استخدامها
SG10201912879YA (en) * 2016-12-09 2020-02-27 Alector Llc Anti-sirp-alpha antibodies and methods of use thereof
US20230139592A1 (en) * 2016-12-22 2023-05-04 Wake Forest University Health Sciences Sirp-gamma targeted agents for use in the treatment of cancer
KR102642385B1 (ko) * 2017-02-06 2024-03-04 오리오니스 바이오사이언시스 엔브이 표적화된 키메라 단백질 및 이의 용도
WO2018149938A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Ose Immunotherapeutics New uses of anti-sirpg antibodies
WO2018165015A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Treatment of pediatric brain tumors with targeting of cd47 pathway
NL2018708B1 (en) * 2017-04-13 2018-10-24 Aduro Biotech Holdings Europe B V ANTI-SIRPα ANTIBODIES
US11555056B2 (en) 2017-04-26 2023-01-17 Mayo Foundation for Medical Education and Research and Board of Regents Methods and materials for treating cancer
UY37695A (es) 2017-04-28 2018-11-30 Novartis Ag Compuesto dinucleótido cíclico bis 2’-5’-rr-(3’f-a)(3’f-a) y usos del mismo
AU2018268304A1 (en) * 2017-05-16 2019-11-14 Byondis B.V. Anti-SIRPα antibodies
AU2018308191B2 (en) * 2017-07-24 2023-12-21 Scenic Immunology B.V. Treating pathological conditions by direct and indirect targeting of SIRPa - CD47 interaction
US11401329B2 (en) 2017-08-02 2022-08-02 Phanes Therapeutics, Inc. Anti-CD47 antibodies and uses thereof
US11713356B2 (en) 2017-10-13 2023-08-01 Ose Immunotherapeutics Modified bifunctional anti-human signal regulatory protein alpha (SIRPa) antibody and method of use thereof for treating cancer
PL3697817T3 (pl) 2017-10-18 2023-01-23 Forty Seven, Inc. Terapia nowotworu złośliwego jajnika w oparciu o środek anty-cd47
US10899843B2 (en) 2017-10-24 2021-01-26 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the depletion of CD117+ cells
WO2019084057A2 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Magenta Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR DEPLOYING CD117 + CELLS
WO2019084067A1 (en) * 2017-10-24 2019-05-02 Magenta Therapeutics, Inc. ANTI-CD117 ANTIBODIES AND METHODS OF USE
GB201800649D0 (en) * 2018-01-16 2018-02-28 Argenx Bvba CD70 Combination Therapy
WO2019157432A1 (en) 2018-02-12 2019-08-15 Forty Seven, Inc. Anti-cancer regimen using anti-cd47 and anti-cd20 antibodies
AU2019233577A1 (en) 2018-03-13 2020-09-03 Ose Immunotherapeutics Use of anti-human SIRPa v1 antibodies and method for producing anti-SIRPa v1 antibodies
BR112020018927A2 (pt) 2018-03-21 2021-01-05 ALX Oncology Inc. Anticorpos contra proteína alfa reguladora de sinal e métodos de uso
EP3802602A1 (en) 2018-05-25 2021-04-14 Alector LLC Anti-sirpa antibodies and methods of use thereof
CA3104462C (en) * 2018-07-10 2023-12-19 Daiichi Sankyo Company, Limited Anti-sirp.alpha. antibody
WO2020068752A1 (en) * 2018-09-27 2020-04-02 Celgene Corporation SIRPα BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF
US11591390B2 (en) 2018-09-27 2023-02-28 Celgene Corporation SIRP-α binding proteins and methods of use thereof
CA3118326A1 (en) * 2018-10-29 2020-05-07 Umc Utrecht Holding B.V. Iga mediated killing of aberrant cells by cd47- sirpalpha checkpoint inhibition of neutrophils
WO2020097193A1 (en) 2018-11-06 2020-05-14 The Regents Of The University Of California Chimeric antigen receptors for phagocytosis
US20220023348A1 (en) 2018-11-28 2022-01-27 Forty Seven, Inc. Genetically modified hspcs resistant to ablation regime
TW202038958A (zh) 2018-12-18 2020-11-01 比利時商阿根思公司 Ｃｄ７０組合治療
AR117327A1 (es) 2018-12-20 2021-07-28 23Andme Inc Anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos
JOP20210233A1 (ar) 2019-02-26 2023-01-30 Janssen Biotech Inc علاجات مركبة وتطابق المريض مع الأجسام ثنائية النوعية المضادة لـ EGFR/c-Met.
CN114096559A (zh) 2019-03-27 2022-02-25 蒂嘉特克斯公司 工程化iga抗体及其使用方法
US11026973B2 (en) 2019-04-30 2021-06-08 Myeloid Therapeutics, Inc. Engineered phagocytic receptor compositions and methods of use thereof
WO2020230091A1 (en) 2019-05-14 2020-11-19 Janssen Biotech, Inc. Combination therapies with bispecific anti-egfr/c-met antibodies and third generation egfr tyrosine kinase inhibitors
MX2021015452A (es) 2019-06-25 2022-02-11 Gilead Sciences Inc Proteinas de fusion flt3l-fc y metodos de uso.
WO2021046243A2 (en) 2019-09-03 2021-03-11 Myeloid Therapeutics, Inc. Methods and compositions for genomic integration
JP7371243B2 (ja) 2019-10-18 2023-10-30 フォーティ セブン， インコーポレイテッド 骨髄異形成症候群及び急性骨髄性白血病を治療するための併用療法
CN114599392A (zh) 2019-10-31 2022-06-07 四十七公司 基于抗cd47和抗cd20的血癌治疗
US10980836B1 (en) 2019-12-11 2021-04-20 Myeloid Therapeutics, Inc. Therapeutic cell compositions and methods of manufacturing and use thereof
MX2022007930A (es) 2019-12-24 2022-08-08 Carna Biosciences Inc Compuestos moduladores de diacilglicerol quinasa.
WO2021163064A2 (en) 2020-02-14 2021-08-19 Jounce Therapeutics, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to ccr8 and uses thereof
EP4185387A1 (en) * 2020-07-24 2023-05-31 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Compositions and methods for modulation of sirpalpha-mediated signaling
JP2023549140A (ja) 2020-11-04 2023-11-22 マイエロイド・セラピューティクス，インコーポレーテッド 操作されたキメラ融合タンパク質組成物およびその使用方法
EP4322937A1 (en) 2021-04-14 2024-02-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) New method to improve the anti-tumoral activity of macrophages
TW202302145A (zh) 2021-04-14 2023-01-16 美商基利科學股份有限公司 ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合及ＮＥＤＤ８活化酶Ｅ１調節次單元之共抑制以用於治療癌症
US20220389394A1 (en) 2021-05-18 2022-12-08 Gilead Sciences, Inc. METHODS OF USING FLT3L-Fc FUSION PROTEINS
KR20240027677A (ko) 2021-06-04 2024-03-04 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 항-sirp-알파 항체
AU2022299051A1 (en) 2021-06-23 2023-12-07 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
EP4359413A1 (en) 2021-06-23 2024-05-01 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
WO2022271677A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CA3222439A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
US20240165229A1 (en) 2021-06-29 2024-05-23 Seagen Inc. Methods of treating cancer with a combination of a nonfucosylated anti-cd70 antibody and a cd47 antagonist
AU2022375782A1 (en) 2021-10-28 2024-05-02 Gilead Sciences, Inc. Pyridizin-3(2h)-one derivatives
AU2022376954A1 (en) 2021-10-29 2024-05-02 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2023094698A1 (en) 2021-11-29 2023-06-01 Ose Immunotherapeutics Specific antagonist anti-sirpg antibodies
WO2023122581A2 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
AU2022417491A1 (en) 2021-12-22 2024-05-23 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
WO2023154578A1 (en) 2022-02-14 2023-08-17 Sana Biotechnology, Inc. Methods of treating patients exhibiting a prior failed therapy with hypoimmunogenic cells
WO2023178181A1 (en) 2022-03-17 2023-09-21 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023183313A1 (en) 2022-03-22 2023-09-28 Sana Biotechnology, Inc. Engineering cells with a transgene in b2m or ciita locus and associated compositions and methods
US20230355796A1 (en) 2022-03-24 2023-11-09 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
TW202345901A (zh) 2022-04-05 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療結腸直腸癌之組合療法
TW202400138A (zh) 2022-04-21 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 Ｋｒａｓ ｇ１２ｄ調節化合物
WO2024006929A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2024064668A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Gilead Sciences, Inc. FOCAL IONIZING RADIATION AND CD47/SIRPα DISRUPTION ANTICANCER COMBINATION THERAPY
WO2024105180A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Boehringer Ingelheim International Gmbh Predictive efficacy biomarkers for anti-sirpa antibodies

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005036180A1 (en) * 2003-10-08 2005-04-21 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Department Of Health And Human Services Analysis methods using biomarkers concentrated with biomarkers attractant molecules
CN101880324A (zh) * 2010-05-25 2010-11-10 中国人民解放军第二军医大学 一种抗人SIRPα的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
US20130022623A1 (en) * 2011-07-01 2013-01-24 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
WO2013056352A1 (en) * 2011-10-19 2013-04-25 University Health Network Antibodies and antibody fragments targeting sirp-alpha and their use in treating hematologic cancers

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1267926A2 (en) 2000-03-17 2003-01-02 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Method of inhibiting stenosis and restenosis with a mixture of antibodies anti cd18 and anti ccr2
US20040213792A1 (en) 2003-04-24 2004-10-28 Clemmons David R. Method for inhibiting cellular activation by insulin-like growth factor-1
US7297336B2 (en) * 2003-09-12 2007-11-20 Baxter International Inc. Factor IXa specific antibodies displaying factor VIIIa like activity
WO2008143679A2 (en) 2006-06-01 2008-11-27 Verenium Corporation Nucleic acids and proteins and methods for making and using them
WO2009021026A1 (en) * 2007-08-06 2009-02-12 University Of Kentucky Research Foundation Semi-synthetic antibodies as recognition elements
CA2702217A1 (en) 2007-10-11 2009-04-16 Jayne Danska Modulation of sirp.alpha. - cd47 interaction for increasing human hematopoietic stem cell engraftment and compounds therefor
EP3722317A1 (en) 2008-01-15 2020-10-14 The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University Markers of acute myeloid leukemia stem cells
DK3056514T3 (da) 2008-01-15 2019-07-01 Univ Leland Stanford Junior Fremgangsmåder til at manipulere fagocytose medieret af cd47
EP2111869A1 (en) * 2008-04-23 2009-10-28 Stichting Sanquin Bloedvoorziening Compositions and methods to enhance the immune system
SI2403528T1 (sl) * 2009-03-02 2016-07-29 Aduro Biotech Holdings, Europe B.V. Protitelesa proti proliferacijo inducirajočemu ligandu (april)
SI2477648T1 (sl) 2009-09-15 2022-09-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Sinergijska terapija proti CD47 za krvne rake
US9334515B2 (en) * 2010-07-30 2016-05-10 The Regents Of The University Of California Polypeptides for use in the deconstruction of cellulose

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005036180A1 (en) * 2003-10-08 2005-04-21 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Department Of Health And Human Services Analysis methods using biomarkers concentrated with biomarkers attractant molecules
CN101880324A (zh) * 2010-05-25 2010-11-10 中国人民解放军第二军医大学 一种抗人SIRPα的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用
US20130022623A1 (en) * 2011-07-01 2013-01-24 Cellerant Therapeutics, Inc. Antibodies that specifically bind to tim3
WO2013056352A1 (en) * 2011-10-19 2013-04-25 University Health Network Antibodies and antibody fragments targeting sirp-alpha and their use in treating hematologic cancers

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIPP WEISKOPF等: "Engineered SIRPα variants as immunotherapeutic adjuvants to anti-cancer antibodies", 《SCIENCE》 *

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11723348B2 (en) 2017-03-31 2023-08-15 Biocytogen Pharmaceuticals (Beijing) Co., Ltd. Genetically modified mice expressing humanized CD47
CN110650976A (zh) * 2017-04-13 2020-01-03 艾杜罗生物科技欧洲控股有限责任公司 抗SIRP α抗体
CN110650976B (zh) * 2017-04-13 2024-04-19 赛罗帕私人有限公司 抗SIRPα抗体
CN111448210A (zh) * 2017-07-26 2020-07-24 四十七公司 抗SIRP-α抗体及相关方法
CN111448210B (zh) * 2017-07-26 2024-05-14 四十七公司 抗SIRP-α抗体及相关方法
US11680099B2 (en) 2017-12-08 2023-06-20 Hanx Biopharmaceutics, Inc Anti-PD-1/CD47 bispecific antibody and application thereof
WO2019109357A1 (zh) * 2017-12-08 2019-06-13 杭州翰思生物医药有限公司 抗pd-1/cd47的双特异性抗体及其应用
CN112384532A (zh) * 2018-06-29 2021-02-19 艾利妥 抗SIRP-β1抗体及其使用方法
CN109535258A (zh) * 2018-10-26 2019-03-29 上海科弈药业科技有限公司 一种针对Her2+肿瘤的多功能融合蛋白及其应用
CN113412279A (zh) * 2018-11-15 2021-09-17 拜奥迪斯私人有限公司 人源化抗SIRPα抗体
CN113631576A (zh) * 2019-03-26 2021-11-09 四十七公司 用于治疗癌症的多特异性药剂
CN112867507A (zh) * 2019-08-20 2021-05-28 科望(苏州)生物医药科技有限公司 新型抗sirpa抗体
WO2021032078A1 (en) * 2019-08-20 2021-02-25 Elpiscience (Suzhou) Biopharma, Ltd. Novel anti-sirpa antibodies
CN114040925A (zh) * 2019-12-24 2022-02-11 礼新医药科技(上海)有限公司 抗SIRPα单克隆抗体及其用途
CN114040925B (zh) * 2019-12-24 2023-04-28 礼新医药科技(上海)有限公司 抗SIRPα单克隆抗体及其用途
WO2021129697A1 (en) * 2019-12-24 2021-07-01 Lanova Medicines Limited Company ANTI-SIRPα MONOCLONAL ANTIBODIES AND USES THEREOF
CN115052895A (zh) * 2020-12-11 2022-09-13 浙江博锐生物制药有限公司 抗SIRPα抗体及其用途
WO2023020459A1 (zh) * 2021-08-17 2023-02-23 杭州九源基因工程有限公司 靶向SIRPα的单克隆抗体及其用途
WO2023202672A1 (en) * 2022-04-20 2023-10-26 Biosion Inc. Antibodies targeting sirp-alpha and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017510251A (ja) 2017-04-13
EP3116544A4 (en) 2017-08-23
US10081680B2 (en) 2018-09-25
AU2015229448B2 (en) 2020-09-03
US20180319883A1 (en) 2018-11-08
WO2015138600A3 (en) 2015-11-26
JP6606505B2 (ja) 2019-11-13
AU2015229448A1 (en) 2016-09-01
WO2015138600A2 (en) 2015-09-17
CA2939293C (en) 2023-10-03
CA2939293A1 (en) 2015-09-17
US20170073414A1 (en) 2017-03-16
US10781256B2 (en) 2020-09-22
CN106456749B (zh) 2021-03-30
SG11201607143UA (en) 2016-09-29
EP3116544A2 (en) 2017-01-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106456749A (zh) 抗SIRPα抗体和双特异性巨噬细胞增强型抗体
CN105473615B (zh) 抗-CD38抗体和与致弱干扰素α-2B的融合体
CN103703024B (zh) 能够与人和非人cd3结合的cd3结合分子
CN113015749B (zh) 靶向cd3的抗体、双特异性抗体及其用途
CN105820251B (zh) 具有共同轻链的双特异性抗体或抗体混合物
CN109862910A (zh) 破坏巨噬细胞上的Fc受体接合增强抗SIRPα抗体疗法的功效
CN108473569A (zh) 针对人白介素-2的免疫刺激性人源化单克隆抗体及其融合蛋白
CN104080809B (zh) 抗cd134(ox40)抗体及其应用
CN107001476A (zh) 用于增强的免疫应答和癌症治疗的组合物和方法
CN108779180A (zh) 新型抗-pd-l1抗体
CN106459213A (zh) 修饰的j链
CN108738324A (zh) 抗糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(gitr)抗体及其用途
CN109970860A (zh) 三链抗体、其制备方法及其用途
CN106397593A (zh) 抗磷脂酰肌醇蛋白多糖‑3的抗体及其应用
CN103987731B (zh) Agr2阻断抗体及其用途
CN109535257A (zh) 新型双特异性cd3/cd19多肽复合物
CN107001474A (zh) 抗cd73抗体及其用途
CN107840887A (zh) 一种新的pd‑1单克隆抗体
CN108463245A (zh) 具有修饰的j链的结合分子
CN109069622A (zh) 特异性结合人cd40的拮抗性抗体和使用方法
CN103703026A (zh) 单特异性和双特异性抗igf-1r和抗erbb3抗体
TW202126692A (zh) 抗人Claudin18.2抗體及其應用
CN107488229A (zh) Pd‑l1抗体及其用途
US20210269521A1 (en) Bispecific antibody and use thereof
CN106243225A (zh) 新型抗-pd-l1抗体

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant