CN106442974B - 一种用于检测人血清中AGEs含量的方法 - Google Patents

一种用于检测人血清中AGEs含量的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106442974B
CN106442974B CN201610894995.XA CN201610894995A CN106442974B CN 106442974 B CN106442974 B CN 106442974B CN 201610894995 A CN201610894995 A CN 201610894995A CN 106442974 B CN106442974 B CN 106442974B
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
buffer solution
deionized water
ages
added
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201610894995.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN106442974A (zh
Inventor
王贤俊
何丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201610894995.XA priority Critical patent/CN106442974B/zh
Publication of CN106442974A publication Critical patent/CN106442974A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106442974B publication Critical patent/CN106442974B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种用于检测人血清中AGEs含量的方法——胶乳免疫比浊法，该方法中提供的试剂包括碳酸盐缓冲液、稳定剂、偶联剂、防腐剂、抗人AGEs抗体的胶乳微球。该检测方法拓宽了检测的线性范围，并且该方法稳定性和线性好，特异性强，分析灵敏度高，操作简便等优点，可用于临床中常用的全自动生化分析仪。

Description

一种用于检测人血清中AGEs含量的方法
技术领域
本发明属于疾病的诊断或检测技术领域，具体涉及一种胶乳免疫比浊法用来检测人血清中AGEs的含量。
背景技术
AGEs是外源性或内源性的蛋白质、脂肪及核酸的氨基和还原糖发生非酶催化反应产生稳定的、不可逆的化合物，同时它能够和人体的组织和细胞相结合并造成严重的破坏。由于它的积聚会引发糖尿病等各种并发症，如糖尿病肾病、阿尔兹海默症、动脉粥样硬化、白内障等症，影响全身各系统，因此对其进行快捷、简单并准确的检验在临床诊断中具有重要意义。目前它的检测方法有放射受体分析法、放射免疫法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法等，但是这些方法操作过程繁琐，误差大，消耗时间长，自动化程度低，线性范围窄，费用高，灵敏度低，对于临床非常不利，一般只用来定性检测。
流行病学和临床研究表明，AGEs与多种疾病的密切相关，现今对其治病机制研究已经取得了很大的进展，同时相关靶点的药物也在不断开发，所以对其进行精确的诊断和准确定量成为了关键解决的限速步骤。因此开发检测该物质的其他方法，在该临床诊断中是具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于检测AGEs含量的方法。采用胶乳免疫比浊法检测血清中AGEs的含量，包括游离态的AGEs和结合态的AGEs，线性范围宽好，灵敏度高，特异性好、操作简单、方便快速等优点。它能够作为一项新的临床指标，AGEs检测对阐明这些疾病的发病机制和判定治疗效果有一定价值。
本发明采用以下步骤：
一种AGEs检测试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：
试剂R1中含有
试剂R2中含有
本发明中抗人AGEs抗体的胶乳微球的制备步骤：
1、每ml反应混合物加入下列各物：
a.去离子水是最后容积为1.0mL；
b.0.1mL的5x的贮备缓冲溶液，其pH值为6.0-7.0(一般可用0.5M MES缓冲溶液)；胶乳微球最终浓度为5％(W/V)；
c.按照二者呈现的0.2∶1～0.5∶1的比例范围加入50mg/ml的NHS在去离子水中的溶液和19.2mg/mL的EDAC在去离子水中的溶液中；
2、在室温将此混合物反应18min，不断搅拌；
3、用上述的MES缓冲液，除去未反应的NHS和EDAC；
4、重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为5％(w/v)；
5、将结合的蛋白质溶于MES缓冲溶液中，浓度为1mg/mL；
6、立即加入蛋白质溶液；
7、将混合物反应至少2h，轻轻搅拌；
8、按1mL反应混合液加入2.5μL乙醇胺混合，搅拌反应10分钟；
9、除去未结合的蛋白质和乙醇胺，贮于适宜的贮存缓冲溶液中。
本发明的优点：
1.采用的不同粒径的胶乳微球，提升了检测的线性范围和灵敏度。
2.采用的偶联剂NHS和EDAC的加入比例的多少，提升了抗体与微球的偶联效率。
3.试剂的线性范围宽，准确度高，使用方便，满足临床需要。
附图说明：
图1：实施例1与对比方法相关性图
图2：实施例2与对比方法相关性图
图3：实施例3与对比方法相关性图
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明，但是本发明要求保护的范围并不局限于实施例表述的范围。
实施例1
按照下面讲述的检测步骤，在550nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝4∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例0.5∶1，检测一批数量为40例血清样本。
本实施例描述的AGEs检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪，选用终点法进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：
表1操作程序
结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得AGEs含量。
实施例2
按照下面讲述的检测步骤，在600nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝5∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例0.2∶1，检测同实施例1相同的40例血清样本。
本实施例描述的AGEs检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪，选用终点法进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：
表2操作程序
结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得AGEs含量。
实施例3
按照下面讲述的检测步骤，按照上述的检测步骤，在580nm的波长下，试剂R1∶试剂R2＝6∶1，偶联剂NHS和EDAC的加入比例0.4∶1，检测同实施例1和实施例2相同的40例血清例样本。
本实施例描述的AGEs检测方法，使用双试剂全自动生化分析仪，例如贝克曼DXC800、日立7600等全自动分析仪，选用终点法进行测定。将R1和R2放置所设置好的位置上，在样本盘中对应位置放好蒸馏水、标准品和待测样本，操作如下：
表3操作程序
结果计算：以测定管ΔA，根据校准曲线可求得AGEs含量。
实施例4
将上述实施例1～3的相同血清样本进行荧光光谱法检测(对比方法)，实施例1～3的结果与对比方法比较。
表4所有实施例检测结果汇总(ng/mL)
综合上述结果实施例1～3中的结果采用BS-420全自动生化分析仪，对40个血清样本进行测定，并对测定值进行相关分析并与对比方法检测结果比较，其中实施例1的相关系数：r2＝0.997，线性方程为：y＝0.999x+0.067。其中实施例2的相关系数：r2＝0.982，线性方程为：y＝1.003x+0.124。其中实施例3的相关系数：r2＝0.964，线性方程为：y＝0.960x+0.469；结果表明实施例1中的试剂的检测与对比方法的相关性较好。

Claims (1)

1.一种检测AGEs含量方法所用的检测试剂，其特征包括试剂R1和试剂R2，试剂R1和试剂R2的体积比例为6∶1～4∶1，所述试剂R1和试剂R2的组成如下：
试剂R1中含有
试剂R2中含有
抗人AGEs抗体的胶乳微球的制备步骤：
(1)、每ml反应混合物加入下列各物：
a.去离子水是最后容积为1.0mL；
b.0.1mL的5x的贮备缓冲溶液，其pH值为6.0-7.0，所述5x的贮备缓冲溶液采用0.5MMES缓冲溶液；胶乳微球最终浓度为5％(W/V)；
c.按照二者呈现的0.2∶1～0.5∶1的比例范围加入50mg/ml的NHS去离子水溶液和19.2mg/mL的EDAC去离子水溶液；
(2)、在室温将此混合物反应18min，不断搅拌；
(3)、用上述的MES缓冲液，除去未反应的NHS和EDAC；
(4)、重新将胶乳微球在去离子水中悬浮，使其浓度为5％(w/v)；
(5)、将结合的蛋白质溶于MES缓冲溶液中，浓度为1mg/mL；
(6)、立即加入蛋白质溶液；
(7)、将混合物反应至少2h，轻轻搅拌；
(8)、按1mL反应混合液加入2.5μL乙醇胺混合，搅拌反应10分钟；
(9)、除去未结合的蛋白质和乙醇胺，贮于适宜的贮存缓冲溶液中。
CN201610894995.XA 2016-10-03 2016-10-03 一种用于检测人血清中AGEs含量的方法 Active CN106442974B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610894995.XA CN106442974B (zh) 2016-10-03 2016-10-03 一种用于检测人血清中AGEs含量的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610894995.XA CN106442974B (zh) 2016-10-03 2016-10-03 一种用于检测人血清中AGEs含量的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106442974A CN106442974A (zh) 2017-02-22
CN106442974B true CN106442974B (zh) 2019-06-18

Family

ID=58175192

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610894995.XA Active CN106442974B (zh) 2016-10-03 2016-10-03 一种用于检测人血清中AGEs含量的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106442974B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101046473A (zh) * 2006-03-31 2007-10-03 上海复星医药（集团）股份有限公司 改进胶乳结合的抗原或抗体粒子稳定性的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101046473A (zh) * 2006-03-31 2007-10-03 上海复星医药（集团）股份有限公司 改进胶乳结合的抗原或抗体粒子稳定性的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106442974A (zh) 2017-02-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sokoll et al. Multicenter analytical performance evaluation of the Elecsys® proBNP assay
CN103852584B (zh) 一种定量检测c肽的胶乳增强免疫比浊试剂盒
CN101915849B (zh) 一种方便加样的用于测定糖化血红蛋白百分比的检测试剂
JPS5825980B2 (ja) サイクリックヌクレオチドの定量法
Montagnana et al. Evaluation of biological variation of glycated albumin (GA) and fructosamine in healthy subjects
CN106198961A (zh) 一种定量检测血清淀粉样蛋白a的乳胶增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
CN101819208B (zh) 一种纳米微球免疫比浊法检测脑钠肽试剂盒
CN109374902A (zh) 一种定量检测IgG4的乳胶增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
CN105486875A (zh) 视黄醇结合蛋白检测试剂盒
CN106324251A (zh) 小片段BMG抗体的制备方法及β2‑微球蛋白检测试剂盒
CN104714040B (zh) 血清中葡萄糖氧化酶双试剂测定方法
CN102305866B (zh) 快速诊断急性心肌梗死的检测装置
CN106568944B (zh) 一种检测AGEs的胶乳免疫比浊试剂盒
CN106442974B (zh) 一种用于检测人血清中AGEs含量的方法
CN103837685A (zh) 一种血葡萄糖的检测方法及检测试剂盒
CN106501526A (zh) 一种组合定向剂优化胶乳偶联抗体检测前白蛋白（pa）的试剂盒
CN107490693A (zh) 一种定量检测心肌肌钙蛋白i和心型脂肪酸结合蛋白的荧光免疫层析方法
Banks et al. Detection of creatinine: technologies for point-of-care determination of glomerular filtration
CN106324234B (zh) 修饰的n-乙酰神经氨酸醛缩酶及其制备方法和应用
CN108593905A (zh) 一种地高辛免疫检测试剂及其制备和检测方法
CN104181303A (zh) 一种精密度好线性相关性强的肌钙蛋白检测试剂盒
CN114689771A (zh) 一种同时测定血清中三种游离雄激素含量的方法及试剂盒
CN110068687B (zh) 血清中心肌肌钙蛋白i复合物的非诊断目的的定量测量方法
Bernstone et al. A simplified, rapid LC-MS/MS assay for serum and salivary creatinine
CN110618275A (zh) 帕金森病的诊断标志物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant