CN106442763A

CN106442763A - 一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法

Info

Publication number: CN106442763A
Application number: CN201610791059.6A
Authority: CN
Inventors: 范峰; 卢秀莲; 袁洪雨; 姜瑞玲; 张小龙
Original assignee: CISEN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: CISEN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2016-08-31
Filing date: 2016-08-31
Publication date: 2017-02-22

Abstract

本发明属于药物检测技术领域，具体来说，涉及到一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法。其具体步骤为：采用高效液相色谱法进行进检测，检测波长为220nm；样品溶解溶剂为50％‑95％的乙腈磷酸盐缓冲液溶液；用辛烷基键合硅胶、十八烷基键合硅胶或N‑氧化石松碱M键合硅胶为填料的色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲液和乙腈；所述磷酸盐缓冲液均为取磷酸氢二铵2.64g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至7.3所得；采用梯度流动相洗脱。与现有技术相比，本发明所述检测方法可以很好地将盐酸右美托咪定与其他非活性物质分离，可以准确地测定其杂质的含量，结果准确可靠，专一性强的特点。

Description

一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体来说，涉及到一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法。

背景技术

盐酸右美托咪定是一种全新的α2-肾上腺素受体激动剂，具有强效镇静作用，是可乐定作用的8倍。主要作用于脑桥和延髓以及脑干篮斑的肾上腺素受体，具有抗交感疗效，半衰期2.3h，镇静效果强大兼具其他麻醉辅助作用。主要适用于重症监护治疗期间最初插管和使用呼吸机病人的镇静，可在机械通气患者拔管之前、拔管中和拔管后连续使用，在拔管前无需停药；也可用于非插管患者在尹术和其他操作前和/或术中的镇静。在美国应用5年多的临床经验表明，盐酸右美托咪定可产生稳定的镇定和觉醒作用，对重症病人的生理及心理方面的需求有独特的协同作用，可明显减少诱导麻醉所需的麻醉剂用量；术前给予本品可减少术前和术后的阿片或非阿片类止痛剂的用量，这一特性对于麻醉和重症监护有重要的意义；还可以促进儿茶酚胺血流动力学的稳定性，有效减轻气管插管、手术应激和麻醉及恢复早期血流动力学应答。

目前，盐酸右美托咪定原料和制剂有关物质测定方法还未有国家标准。李鸿雁曾采用如下方法对盐酸右美托咪定中的有关物质：采用Welch Ultimate AQ C18(250mm×4.6mm，3μm)为色谱柱，柱温35℃；以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相，进行梯度洗脱；流速为1.0mL·min^-1；检测波长为220nm。该测定方法验证结果表明：盐酸右美托咪定与各已知杂质及强制破坏产生的降解产物均分离良好；七种杂质在各自的线性范围内质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，且校正因子(相对于盐酸右美托咪定)分别为1.73、1.55、0.98、1.45、0.92、0.98、1.04；且六种杂质的平均回收率及该法精密度试验都符合要求。但上述方法专属性不强，灵敏度较低，不能满足盐酸右美托咪定的各种制剂。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种专属性强、灵敏度高的盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法。

本发明所述的一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，所述测定方法具体步骤为：采用高效液相色谱法进行进检测，检测波长为220nm；样品溶解溶剂为50％-95％的乙腈磷酸盐缓冲液溶液；用辛烷基键合硅胶、十八烷基键合硅胶或N-氧化石松碱M键合硅胶中的一种为填料的色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲液和乙腈；所述磷酸盐缓冲液均为取磷酸氢二铵2.64g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至7.3所得；采用梯度流动相洗脱，以流动相体积比为100％计，流动相的梯度设置如下：

本发明所述的一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，所述样品溶解溶剂为50％的乙腈磷酸盐缓冲液溶液；所述流动相的梯度设置如下：

时间(min)	磷酸盐缓冲液(％)	乙腈(％)
			0	70	30
15	50	50
			30	50	50
35	70	30
			40	70	30

本发明所述的一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，所述样品溶解溶剂为80％的乙腈磷酸盐缓冲液溶液；所述流动相的梯度设置如下：

时间(min)	磷酸盐缓冲液(％)	乙腈(％)
			0	60	40
15	40	60
			30	40	60
35	60	40
			40	60	40

本发明所述的一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，所述N-氧化石松碱M键合硅胶的制备步骤为：1)取20g活化的硅胶于500mL三口瓶中，再量取100mL甲苯和40mL的γ-氨丙基三乙氧基硅烷，120℃下油浴，搅拌回流13h，待冷却后，产物依次用甲苯，乙醇洗涤抽滤至无胶状物存在；在60℃下干燥24h，干燥箱内冷却；2)在500mL的单口瓶中加入步骤1)的产物，然后依次加入120mL 35％的甲醛溶液和2mL的乙酸溶液，室温搅拌反应2h，经无水乙醇抽滤后，置于500mL三口瓶中备用；取N-氧化石松碱M 4g溶于适量水溶液中，调节溶液的pH值至8.0，加入上述三口瓶中，60℃搅拌下反应10h；待产物冷却，依次用大量二次水、无水乙醇洗涤抽滤至滤液清亮；60℃恒温干燥6h，于干燥箱内冷却后装棕色瓶内即得。

与现有技术相比，本发明所述盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法可以很好地将盐酸右美托咪定与其他非活性物质分离，可以准确地测定其杂质的含量。采用本发明的检测方法，用50-95％的乙腈磷酸盐缓冲液溶液作为溶剂可以迅速溶解样品，并以乙腈、磷酸盐缓冲液作为流动相进行梯度洗脱，分离过程所用时间大幅度缩短，适合盐酸右美托咪定原料或制剂的有关物质的检测。本发明所建立的高效液相色谱法具有操作简单，主峰的峰纯度符合要求且灵敏度高，结果准确可靠，专一性强的特点。

附图说明

图1是盐酸右美托咪定系统适用性HPLC图谱；图2是盐酸右美托咪定小试粗品有关物质HPLC图谱；图3是盐酸右美托咪定原料有关物质HPLC图谱；图4是盐酸右美托咪定有关物质定量限HPLC图谱；图5是盐酸右美托咪定有关物质检测限HPLC图谱；图6是盐酸右美托咪定原料在50％的甲醇磷酸盐缓冲液溶液中降解HPLC图谱；图7是盐酸右美托咪定注射液空白辅料HPLC图谱

；图8是盐酸右美托咪定注射液样品有关物质HPLC图谱。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明所述盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法做进一步说明，但是本发明的保护范围并不限于此。

实施例1

仪器与条件：Agilent 1260液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：Waters C18(250×4.6mm，5μm)；检测波长：220nm；以磷酸盐缓冲液为流动相A、乙腈为流动相B，按表1进行梯度洗脱。

表1流动相的浓度梯度

试验步骤：

1、系统适用性试验：取盐酸右美托咪定原料约10mg，置10ml量瓶中，加6％的双氧水1ml，60℃烘箱中加热30分钟，用乙腈-磷酸盐缓冲液(1:1)稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，HPLC图谱见附图1。

由图1可见：盐酸右美托咪定主峰的保留时间8.5min，与其相邻两杂质峰的分离度分别为2.9、6.2，均符合测定要求。

2、盐酸右美托咪定小试粗品有关物质的测定：取盐酸右美托咪定小试粗品约10mg，置10ml量瓶中，加乙腈-磷酸盐缓冲液(1:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图2。

由图2可见：盐酸右美托咪定最后一杂质峰在梯度条件下保留时间29.1min，同时，其主峰峰纯度符合规定。

3、盐酸右美托咪定原料有关物质的测定：取盐酸右美托咪定原料约10mg，置10ml量瓶中，加乙腈-磷酸盐缓冲液(1:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图3。

4、灵敏度试验：取盐酸右美托咪定对照品适量，加乙腈-磷酸盐缓冲液(1:1)稀释制成每1ml中含0.25μg(0.05％)、0.125μg(0.025％)的溶液，精密量取10μl，依法检查，结果见附图4、5。

由图4-5可见：浓度为0.25μg/ml时，信噪比为27.7，浓度为0.125μg/ml时，信噪比为23.6，结果表明本方法的灵敏度高，0.025％的杂质也能检出。证明该方法灵敏度较好。

5、盐酸右美托咪定在甲醇磷酸盐缓冲液溶液中的稳定性测定试验：取盐酸右美托咪定原料适量，加50％的甲醇磷酸盐缓冲液溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，室温放置24小时，HPLC图谱见附图6。

6、由图6可见：盐酸右美托咪定在50％的甲醇磷酸盐缓冲液溶液中的稳定性差，本发明的检测方法能将盐酸右美托咪定与其降解产物很好分离。

7、取盐酸右美托咪定注射液空白辅料适量(约相当于盐酸右美托咪定10mg)置于10ml量瓶中，加乙腈-磷酸盐缓冲液(1:1)溶解并稀释至刻度，摇匀，依法测定，HPLC图谱见附图7。

由图7可见：空白辅料对样品的有关物质测定无干扰。

8、取盐酸右美托咪定注射液，依法测定，HPLC图谱见附图8。

由图8可见：盐酸右美托咪定注射液有关物质检查符合规定，同时盐酸右美托咪定峰的峰纯度符合要求。

由上述试验结果可知：利用本发明的检测方法能将盐酸右美托咪定与其杂质峰很好分离、检测波长选择合理、主峰的峰纯度符合要求且灵敏度高，因此本方法可用于盐酸右美托咪定及其制剂的质量控制。

实施例2

仪器与条件：Agilent 1260液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：Welch MaterialsC8(150×4.6mm，5μm)；检测波长：220nm；以磷酸盐缓冲液为流动相A、乙腈为流动相B，按表2进行梯度洗脱。

表2流动相的浓度梯度

实验步骤：取盐酸右美托咪定原料约10mg，置10ml量瓶中，加6％的双氧磷酸盐缓冲液1ml，60℃烘箱中加热30分钟，用乙腈-磷酸盐缓冲液(8:2)稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，依法测定。

由试验结果可知：利用本发明的检测方法能将盐酸右美托咪定与其最难分离的氧化降解产物很好分离，同时主峰的峰纯度符合要求，较难洗脱的杂质峰也能较快洗脱下来，本发明方法可用于盐酸右美托咪定及其制剂的质量控制。

实施例3

仪器与条件：Agilent 1260液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：N-氧化石松碱M键合硅胶柱(250×4.6mm，5μm)；检测波长：220nm；以磷酸盐缓冲液为流动相A、乙腈为流动相B，按表3进行梯度洗脱。

表3流动相的浓度梯度

实验步骤：取盐酸右美托咪定原料约10mg，置10ml量瓶中，加6％的双氧磷酸盐缓冲液1ml，60℃烘箱中加热30分钟，用乙腈-磷酸盐缓冲液(9.5:0.5)稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，依法测定。

所述N-氧化石松碱M键合硅胶柱的制备步骤为：1)取20g活化的硅胶于500mL三口瓶中，再量取100mL甲苯和40mL的γ-氨丙基三乙氧基硅烷，120℃下油浴，搅拌回流13h，待冷却后，产物依次用甲苯，乙醇洗涤抽滤至无胶状物存在；在60℃下干燥24h，干燥箱内冷却；2)在500mL的单口瓶中加入步骤1)的产物，然后依次加入120mL 35％的甲醛溶液和2mL的乙酸，室温搅拌反应2h，经无水乙醇抽滤后，置于500mL三口瓶中备用；取N-氧化石松碱M4g溶于适量水溶液中，调节溶液的pH值至8.0，加入上述三口瓶中，60℃搅拌下反应10h；待产物冷却，依次用大量二次水、无水乙醇洗涤抽滤至滤液清亮；60℃恒温干燥6h，于干燥箱内冷却后装棕色瓶内得N-氧化石松碱M键合硅胶；3)将N-氧化石松碱M键合硅胶常规装柱，即得。

试验结果表明，和以往采用辛烷基键合硅胶、十八烷基硅烷键合硅胶柱相比，采用N-氧化石松碱M键合硅胶柱后，各杂质峰之间分离更好，同时对流动相的梯度洗脱条件选择性要求相对可以更低。

由试验结果可知：利用本发明的检测方法能将盐酸右美托咪定与其最难分离的氧化降解产物很好分离，同时主峰的峰纯度符合要求，较难洗脱的杂质峰也能较快洗脱下来，本方法可用于盐酸右美托咪定及其制剂的质量控制。

Claims

1.一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述测定方法具体步骤为：采用高效液相色谱法进行检测，检测波长为220nm；样品溶解溶剂为体积分数50％-95％的乙腈的磷酸盐缓冲液溶液；用辛烷基键合硅胶、十八烷基键合硅胶或N-氧化石松碱M键合硅胶中的一种为填料的色谱柱，流动相为磷酸盐缓冲液和乙腈；所述磷酸盐缓冲液均为取磷酸氢二铵2.64g，加水溶解并稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至7.3所得；采用梯度流动相洗脱，以流动相体积比为100％计，流动相的梯度设置如下：

时间(min) 磷酸盐缓冲液(％) 乙腈(％) 0 60-80 20-40 15 40-60 40-60 30 40-60 40-60 35 60-80 20-40 40 60-80 20-40

2.根据权利要求1所述的一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述样品溶解溶剂为50％的乙腈磷酸盐缓冲液溶液；所述流动相的梯度设置如下：

3.根据权利要求1所述的一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述样品溶解溶剂为80％的乙腈磷酸盐缓冲液溶液；所述流动相的梯度设置如下：

时间(min) 磷酸盐缓冲液(％) 乙腈(％) 0 80 20 15 60 40 30 60 40 35 80 20 40 80 20

4.根据权利要求1所述的一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述样品溶解溶剂为80％的乙腈磷酸盐缓冲液溶液；所述流动相的梯度设置如下：

5.根据权利要求1所述的一种盐酸右美托咪定原料或制剂有关物质的检测方法，其特征在于，所述N-氧化石松碱M键合硅胶的制备步骤为：1)取20g活化的硅胶于500mL三口瓶中，再量取100mL甲苯和40mL的γ-氨丙基三乙氧基硅烷，120℃下油浴，搅拌回流13h，待冷却后，产物依次用甲苯，乙醇洗涤抽滤至无胶状物存在；在60℃下干燥24h，干燥箱内冷却；2)在500mL的单口瓶中加入步骤1)的产物，然后依次加入120mL 35wt％的甲醛溶液和2mL的乙酸溶液，室温搅拌反应2h，经无水乙醇抽滤后，置于500mL三口瓶中备用；取N-氧化石松碱M 4g溶于适量水溶液中，调节溶液的pH值至8.0，加入上述三口瓶中，60℃搅拌下反应10h；待产物冷却，依次用大量二次水、无水乙醇洗涤抽滤至滤液清亮；60℃恒温干燥6h，于干燥箱内冷却后装棕色瓶内即得。