CN106442501A - 一种电子烟烟液中烟碱含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种电子烟烟液中烟碱含量的检测方法，其包括：a)对电子烟烟液进行样品前处理，获得样品溶液；b)用连续流动分析法检测样品溶液中的烟碱含量；其中，步骤a)的样品前处理包括：i)将电子烟烟液溶于异丙醇水溶液，异丙醇水溶液的浓度为5～15体积％，优选为5～10体积％。本发明方法测定结果准确可靠，能够客观评价电子烟烟液中的烟碱含量。

Description

一种电子烟烟液中烟碱含量的检测方法

技术领域

本发明属于烟碱检测领域，特别是涉及一种电子烟烟液中烟碱含量的检测方法。

背景技术

电子烟作为一种新型烟草制品，是传统卷烟的重要补充产品。电子烟通过雾化手段，将电子烟烟液中的烟碱、香精香料、溶剂等物质颗粒化、蒸汽化后让用户吸食。因此电子烟具有与传统卷烟近似的烟雾、香气、与吸食劲头。此外，由于其非燃烧的工作原理，电子烟减少了传统烟草中因燃烧产生的有害成分，近年来在市场的占有率取得巨大增长。

尼古丁(Nicotine)，俗名烟碱，是一种存在于茄科植物(茄属)中的生物碱，也是烟草的重要成分。烟碱是产生吸食口感与劲头以及吸食成瘾性的主要成分。电子烟生产者通过调整电子烟烟液中的烟碱添加量来满足不同消费者吸食的生理需求与产品自身的口感。准确测定电子烟烟液中烟碱含量十分必要。

国家标准YC/T 468-2013中记载了，用连续流动(硫氰酸钾)法测定烟草及烟草制品的总植物碱，具体包括：用水萃取烟草样品，萃取液中的总植物碱(以烟碱计)与对氨基苯磺酸和氯化氰反应，氯化氰由硫氰酸钾和二氯氢尿酸钠的在先反应产生，反应产物用比色计在460nm测定。该方法的检测对象主要是烟草本身，而非电子烟烟液。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种电子烟烟液中烟碱含量的检测方法。本发明的再一个目的是提供一种准确检测电子烟烟液中烟碱含量的检测方法。本发明的再一个目的是提供一种能够客观评价电子烟烟液中烟碱含量的检测方法。

发明人将电子烟烟液溶于5～15体积％的异丙醇水溶液，然后用连续流动分析法检测电子烟烟液中的烟碱含量。发明人发现，该方法获得的检测结果准确，能够客观地评价电子烟烟液中的烟碱含量。

本发明第一方面提供一种电子烟烟液中烟碱含量的检测方法，其包括：

a)对电子烟烟液进行样品前处理，获得样品溶液；

b)用连续流动分析法检测样品溶液中的烟碱含量；

其中，步骤a)的样品前处理包括：

i)将电子烟烟液溶于异丙醇水溶液，异丙醇水溶液的浓度为5～15体积％，优选为5～10体积％。

发明人发现，电子烟烟液成分中有机物的含量较高，在水中的溶解性不佳，若采用纯水作为电子烟烟液的溶剂，会有萃取不完全的现象发生。

发明人进一步发现，用5～10体积％的异丙醇水溶液作为溶剂溶解电子烟烟液，能充分溶解电子烟烟液和其中的烟碱，由此获得的样品溶液能够准确反映电子烟烟液中的烟碱含量，获得的检测结果更为客观准确。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，其中步骤i)：每0.1g电子烟烟液溶于5～15ml的异丙醇水溶液。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，其中步骤i)：每0.1g电子烟烟液溶于10～12ml的异丙醇水溶液。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，前处理还包括：

ii)用涡旋振荡器震荡步骤i)的溶有电子烟烟液的异丙醇水溶液；

优选地，涡旋振荡器的震荡速度为2000～3000r/min；

优选地，涡旋振荡器的震荡时间为30～60秒。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，前处理还包括：

iii)用离心机离心步骤ii)震荡后的溶液，并取离心后的异丙醇水溶液层清液作为样品溶液。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，步骤b)中，所述连续流动分析法使用比色法检测样品溶液中的烟碱含量。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，所述比色法包括：使样品溶液与对氨基苯磺酸和氯化氰发生变色反应得到反应溶液，用比色计测定反应溶液的吸光度；

优选地，氯化氰由氰化钾与二氯异氰尿酸钠在连续流动分析仪上在线反应产生，

优选地，氯化氰由氰化钾与氯胺T在连续流动分析仪上在线反应产生；

优选地，氯化氰由氰化钾与次氯酸钠在连续流动分析仪上在线反应产生；

优选地，用比色计在450～480nm(例如460nm)测定反应溶液的吸光度。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，步骤b)中，所述反应溶液不经过加热装置加热，直接导入到比色计内测定反应溶液的吸光度。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，步骤b)中，连续流动分析法中，样品溶液管径为0.76mm，缓冲溶液A管径为1.14mm，缓冲溶液B管径为1.42mm，二氯异氰尿酸钠为管径为0.64mm，硫氰酸钾为管径为0.64mm，解毒液A为管径为1.30mm，解毒液B为管径为1.30mm，空气管径为0.25mm，溶剂到取样器管径为2.06mm。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，其包括以下一步或多步：

α)将电子烟烟液溶于异丙醇水溶液，异丙醇水溶液的浓度为5～15体积％，优选为5～10体积％，

可选地，还对溶有电子烟烟烟液的异丙醇水溶液还进行涡旋震荡和离心分离的步骤；

β)取异丙醇水溶液层作为样品溶液；

γ)以步骤α中所述的异丙醇水溶液溶解烟碱，配制成不同烟碱浓度的系列标准工作溶液；

δ)用连续流动分析法检测系列标准工作溶液的吸光度；

ε)绘制吸光度-烟碱浓度的标准工作曲线；

ζ)用连续流动分析法检测样品溶液的吸光度；

η)将样品溶液的吸光度值代入到标准工作曲线，计算获得电子烟烟液中的烟碱浓度。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，其包括，用异丙醇水溶液溶解电子烟烟液样品，获得样品溶液，再用连续流动分析法检测样品溶液中的烟碱含量。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，其中，样品前处理包括：称取电子烟烟液0.1g，加入10ml 5～15体积％的异丙醇水溶液，溶解混合，获得样品溶液。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，其包括，在连续流动分析过程中，样品溶液中的烟碱与对氨基苯磺酸和氯化氰混合后发生反应，反应溶液中生成黄色络合产物，用比色计在450～480nm波长处测定反应溶液的吸光度。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，混合、反应与测定步骤均在连续流动分析仪上自动完成。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，连续流动分析过程中，以5～15体积％的异丙醇水溶液为空白，测定反应溶液在450nm～480nm波长处的吸光度值。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，连续流动分析仪的管路图如图1所示。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，标准工作曲线按如下方法绘制：称取一定量烟碱标准物质，用一级水定容，获得烟碱标准储备液；再将烟碱标准储备液用5～15体积％(优选5～10体积％)的异丙醇水溶液稀释，得到不同浓度的系列标准工作溶液；再用连续流动分析仪分别检测系列标准工作溶液的吸光度值，并绘制吸光度-烟碱含量标准工作曲线。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，将系列标准工作溶液上机测量结果绘制标准工作曲线，再将样品溶液的测量结果带入标准工作曲线得到样品溶液浓度c(mg/ml)。

在一个实施方案中，本发明任一项的方法，电子烟烟液中烟碱含量的结果由以下公式计算得出(以重量百分比表示)

式中：

a--电子烟烟液样品中烟碱含量，单位为重量百分比(重量％)；

c--样品溶液烟碱的仪器观测值，单位为毫克每毫升(mg/ml)；

v--样品溶液的体积，为便于计算约等于加入的溶剂的体积，单位为毫升(ml)；

m--试样的质量，单位为克(g)。

本发明的有益效果：

本发明的检测方法具有以下一项或多项有益效果：

a)能更客观地评价电子烟烟液中烟碱含量；

b)样品消耗量少；

c)检出限低；

d)定量限低；

e)回收率接近100％；

f)多次测量的准确度高，标准差小；

g)多次测量的变异系数低；

h)涡旋震荡配合离心分离的前处理辅助方法能够获得澄清的样品溶液，提高检测结果的准确度和平行性。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本申请的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的限定。在附图中：

图1为连续流动分析仪的管路图；

图2为实施例4的系列标准工作曲线；

图3为平均烟碱含量与异丙醇浓度关系曲线。

具体实施方式

下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

(一)材料和试剂

1.1材料

市售4种牌号的电子烟烟液，编号A～D。

1.2试剂

除特别要求外，均应使用分析纯(AR)以上纯度级别试剂，水符合GB/T6682中一级水的规定。具体包括：

1.2.1烟碱标准物质(98.5％，国家标准物质中心购买)。

1.2.2四硼酸钠(Na₂B₄O₇·10H₂O),纯度99.0％。

1.2.3氯化钠(NaCl),纯度>99.0％。

1.2.4磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)，纯度>99.0％。

1.2.5柠檬酸[COH(COOH)(CH₂COOH)₂·H₂O，纯度>99.0％。

1.2.6对氨基苯磺酸(NH₂C₆H₄SO₃H)，纯度>99.8％。

1.2.7硫氰酸钾(KSCN)，纯度>98.5％。

1.2.8二氯异氰尿酸钠(C₃Cl₂N₃NaO₃)，纯度>90％。

1.2.9硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)，纯度>99.0％。

1.2.10碳酸钠(Na₂CO₃)，纯度>99.8％。

1.2.11异丙醇，分析纯(AR)

1.2.12异丙醇水溶液：如配制a体积％的异丙醇水溶液，则移取10a ml异丙醇至1000ml容量瓶中，用一级水定容至刻度。

1.2.13Brij35(聚乙氧基月桂醚)溶液：将250g Brij35加入到1L水中，加热搅拌直至溶解。

1.2.14缓冲溶液A：称取3.80g四硼酸钠(1.2.2)、1.175g氯化钠(1.2.3)至烧杯中，用水溶解，然后转入500ml容量瓶中，用水定容至刻度，加入1ml Brij35溶液(1.2.13)，混匀。使用前用定性滤纸过滤。

1.2.15缓冲溶液B：称取32.77g磷酸氢二钠(1.2.4)、2g柠檬酸(1.2.5)、3.5g对氨基苯磺酸(1.2.6)至烧杯中，用水溶解，然后转入500ml容量瓶中，用水定容至刻度，加入1mlBrij35溶液(1.2.13)，混匀。使用前用定性滤纸过滤。

1.2.16硫氰酸钾溶液：称取2.88g硫氰酸钾(1.2.7)至烧杯中，用水溶解，然后转入250ml容量瓶中，用水定容至刻度，加入1ml Brij35溶液(1.2.13)，混匀。使用前用定性滤纸过滤。

1.2.17二氯异氰尿酸钠溶液：称取2.20g二氯异氰尿酸钠(1.2.8)至烧杯中，用水溶解，然后转入250ml容量瓶中，用水定容至刻度，加入1ml Brij35溶液(1.2.13)，混匀。使用前用定性滤纸过滤。该溶液应现配现用。

1.2.18解毒溶液A：称取1g柠檬酸(1.2.5)、10g硫酸亚铁(1.2.9)至烧杯中，用水溶解，然后转入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度。

1.2.19解毒溶液B：称取10g碳酸钠(1.2.10)至烧杯中，用水溶解，然后转入1000ml容量瓶中，用水定容至刻度。

1.2.20烟碱标准溶液

1.2.20a标准储备液

称取适量的烟碱标准物质(1.2.1)于250ml容量瓶中，精确至0.0001g，用异丙醇水溶液或一级水定容至刻度，得到烟碱标准储备液。此标准储备液烟碱含量在1.0～2.0mg/ml区间范围之内。该标准储备液在0℃-4℃冰箱中保存，有效期为三个月。

1.2.20b系列标准工作溶液

由标准储备液(1.2.20a)与异丙醇水溶液(1.2.12)制备至少5个系列标准工作溶液，其浓度范围应覆盖预计检测到的样品含量。该工作溶液在0℃-4℃冰箱中保存，有效期为2周。

1.2.21其它溶剂

0.5体积％硝酸水溶液(65质量％的浓硝酸0.5体积份，用水定容至100体积份)；

0.5体积％乙酸水溶液(纯乙酸0.5体积份，用水定容至100体积份)；

1体积％硫酸水溶液(98质量％的浓硫酸1体积份，用水定容至100体积份)；

0.5体积％盐酸水溶液(37质量％的浓盐酸0.5体积份，用水定容至100体积份)；

50体积％乙醇水溶液(纯乙醇50体积份，用水定容至100体积份)。

(二)仪器

2.1具盖离心管，15ml。

2.2容量瓶。

2.3定量加液器或移液管。

2.4快速定性滤纸。

2.5分析天平，感量0.0001g。

2.6涡旋振荡器。

2.7离心机。

2.8连续流动分析仪(法国Alliance Futura)，包括部件：

——取样单元(三维全自动取样器)；

——控制单元(蠕动比例泵)；

——管路模块(manifold)；

——检测器(比色计digital colormeter)，配置450～480nm单波长滤光片，如460nm滤光片；

——数据处理装置或PC工作站。

在下述实施例中，连续流动分析仪的管路图如图1所示，其中，各管路管径如下表1所示。

表1连续流动分析仪各管路管径

在下述实施例中，连续流动分析仪在比色计前不设置加热装置。也就是说，样品溶液与氯化氢和对氨基苯磺酸反应的反应溶液不经加热，直接导入检测器。

(三)分析步骤

3.1样品前处理

称取电子烟烟液0.1g试样，精确至0.0001g，置于15mL具盖离心管中，加入10ml异丙醇水溶液(1.2.12所配制)，摇晃溶解混合，静置后作为分析之用。

3.2样品检测

上机运行系列标准工作溶液和样品溶液。

以异丙醇水溶液(1.2.12所配制)为空白，用连续流动分析仪测定上述待测液在450nm～480nm波长处的吸光度值。

将配制好的各试剂溶液倒入试剂盒接入连续流动分析仪，将前处理完成样品溶液各取2ml装入连续流动样品杯中置于自动进样器内。开机待各试剂运行平稳，仪器信号基线运行平稳后开始检测实验。每组实验进行了2次平行实验，

如样品溶液中烟碱浓度超出系列标准工作溶液的浓度范围，则应使用相同溶剂稀释后再测定。

3.3结果计算

将系列标准工作溶液上机测量结果绘制标准工作曲线并拟合曲线方程。再将样品结果带入标准工作曲线得到样品溶液浓度c(mg/ml)。

结果由以下公式计算得出(以重量百分比表示)

式中：

a--电子烟烟液样品中烟碱含量，单位为百分含量(％)重量百分比；

c--样品溶液烟碱的仪器观测值，单位为毫克每毫升(mg/ml)；

v--样品溶液的体积，为便于计算约等于加入的溶剂的体积，单位为毫升(ml)；

m--试样的质量，单位为克(g)。

(四)结果的表达

以两次平行测定结果的平均值作为测定结果，结果精确至0.01％。两次平行测定结果绝对值之差不应大于0.05％，否则重新实验。

实施例1

以5体积％异丙醇水溶液萃取电子烟烟液，按照上述步骤(一)至(四)测定电子烟中烟碱的含量。

特别地，1.2.20烟碱标准溶液按如下方法配制：准确称取0.4129g烟碱标准物质(1.2.1)于250ml玻璃容量瓶内，加入一级水定容至刻度，混匀，得到1.6268mg/ml烟碱标准储备液。然后参照表2准确移取烟碱标准储备液至相应容量瓶，使用5体积％异丙醇水溶液定容，得到表2的系列标准工作溶液。将配制好的系列标准工作溶液用实施例1的连续流动分析仪分析，将得到的吸光度结果绘制标准工作曲线。测得的标准工作曲线方程为:

烟碱含量＝2.4604吸光度+0.0009 变异系数R²＝0.9997。

表2系列标准工作溶液配制表

特别地，步骤3.1按如下方法操作：取A品牌电子烟烟液(标称烟碱含量为1.7重量％)，准确称取0.1g(精确至0.0001g)烟液样品，加入10ml 5体积％异丙醇水溶液作为溶剂，混合后获得样品溶液。

特别地，步骤3.2按如下方法操作：在进样器溶剂管路的试剂盒中加入5体积％异丙醇水溶液，其他试剂管路的试剂盒中加入按照步骤1.2配制后的试剂。

按步骤3.2～3.3进行测量，将结果代入上述标准工作曲线，计算电子烟烟液中的烟碱含量(重量％)。进行2次平行实验。电子烟烟液中烟碱含量如表1所示。

对比例1

按照上述步骤(一)至(四)测定电子烟中烟碱的含量。

特别地，步骤1.2.20b烟碱系列标准工作溶液分别按如下方法配制：

分别使用1.2.21配置的0.5体积％硝酸水溶液、0.5体积％乙酸水溶液、1体积％硫酸水溶液、0.5体积％盐酸水溶液、50体积％乙醇水溶液，以及一级水作为溶剂，按照表2所示的浓度梯度配制系列标准工作溶液。将配制好的系列标准工作溶液用连续流动分析仪分析，将得到的结果分别绘制标准工作曲线如下：

0.5体积％硝酸水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝3.2213吸光度+0.0029 变异系数R²＝0.9991

5体积％乙酸水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝3.6196吸光度+0.0040 变异系数R²＝0.9984

1体积％硫酸水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝9.9526吸光度+0.0010 变异系数R²＝0.9506

0.5体积％盐酸水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝2.8536吸光度-0.0032 变异系数R²＝0.9996

50体积％乙醇水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝4.2184吸光度-0.0041 变异系数R²＝0.9982

一级水配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝2.8517吸光度+0.0023 变异系数R²＝0.9997

特别地，步骤3.1按如下方法操作：

取A品牌电子烟烟液，准确称取0.1g(精确至0.0001g)烟液样品各6份，在6份样品中分别加入10ml 0.5体积％硝酸水溶液、10ml 0.5体积％乙酸水溶液、10ml 1体积％硫酸水溶液、10ml 0.5体积％盐酸水溶液、10ml 50体积％乙醇水溶液、10ml一级水，得到6份不同样品溶液。

特别地，步骤3.2按如下方法操作：

根据所检测的样品，分批次在进样器溶剂管路的试剂盒中加入0.5体积％硝酸水溶液、0.5体积％乙酸水溶液、1体积％硫酸水溶液、0.5体积％盐酸水溶液、50体积％乙醇水溶液、一级水，其他试剂管路的试剂盒中加入按照步骤1.2配制后试剂。

按步骤3.2～3.3对上述6份样品溶液分别测量，代入对比例1的相应的标准工作曲线，获得电子烟烟液中的烟碱含量(重量％)。每组样品进行2次平行实验。

实施例1和对比例1的烟碱含量测量结果参见表3。

表3烟碱含量结果

实验结果表明，实施例1采用5％的异丙醇水溶液作为溶解电子烟烟液的溶剂，其烟碱检测值更接近样品标称值。这说明相比于其它溶剂，电子烟烟液以及其中的烟碱能够更稳定地溶解于异丙醇水溶液。因此，使用5体积％异丙醇水溶液溶解电子烟烟液，再用连续流动分析法测量，能够更准确、客观地评价电子烟烟液中烟碱含量。

实施例2

分别以10体积％和15体积％异丙醇水溶液萃取电子烟烟液，按照上述步骤(一)至(四)测定电子烟中烟碱的含量。

特别地，步骤1.2.20b烟碱系列标准工作溶液按如下方法配制：

分别使用10体积％异丙醇水溶液、15体积％异丙醇水溶液作为溶剂，配制表2的系列标准工作溶液。将配制好的系列标准工作溶液用连续流动分析仪分析，将得到的结果分别绘制标准工作曲线。

使用10体积％异丙醇水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝3.5571吸光度-0.0005 变异系数R²＝0.9989

使用15体积％异丙醇水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝3.5089吸光度+0.0074 变异系数R²＝0.9990

特别地，步骤3.1、3.2按如下方法操作：

步骤3.1：取A品牌电子烟烟液，准确称取0.1g(精确至0.0001g)烟液样品各2份，在2份样品中分别加入配制的异丙醇水溶液(体积比浓度分别为10％，15％)10ml。

步骤3.2：根据所检测的2个样品的溶剂浓度，分批次在进样器溶剂管路的试剂盒中分别加入10体积％异丙醇水溶液、15体积％异丙醇水溶液，其他试剂管路的试剂盒中加入按照步骤1.2配制后试剂。

按步骤3.2～3.3对上述2份样品溶液分别测量，代入到实施例2的对应溶剂浓度标准工作曲线中进行计算，获得电子烟烟液中的烟碱含量(重量％)如表4所示。每组样品进行2次平行实验。

对比例2

分别以20体积％、50体积％异丙醇水溶液萃取电子烟烟液，按照上述步骤(一)至(四)测定电子烟中烟碱的含量。

特别地，步骤1.2.20b烟碱系列标准工作溶液按如下方法配制：

分别使用20体积％异丙醇水溶液、50体积％异丙醇水溶液作为溶剂，配制表2的系列标准工作溶液。将配制好的系列标准工作溶液用连续流动分析仪分析，将得到的结果分别绘制标准工作曲线。

使用20体积％异丙醇水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝3.7129吸光度+0.0030 变异系数R²＝0.9989

使用50体积％异丙醇水溶液配制的标准工作溶液曲线:

烟碱含量＝3.5697吸光度+0.0064 变异系数R²＝0.9975

特别地，步骤3.1、步骤3.2按如下方法操作：

步骤3.1：取A品牌电子烟烟液，准确称取0.1g(精确至0.0001g)烟液样品各2份，在2份样品中分别加入配制的异丙醇水溶液浓度分别为20％，50％。

步骤3.2：根据所检测的2个样品的溶剂浓度，分批次在进样器溶剂管路的试剂盒中加入20体积％异丙醇水溶液、50体积％异丙醇水溶液，其他试剂管路的试剂盒中加入按照步骤1.2配制后试剂。

按步骤3.2～3.3对上述2份样品溶液分别测量，代入到对比例2的对应溶剂浓度系列标准工作曲线中进行计算，获得电子烟烟液中的烟碱含量(重量％)。每组样品进行2次平行实验。电子烟烟液中烟碱浓度如表4所示。

实施例1、实施例2和对比例2的实验结果见表4所示。

表4溶剂浓度变化实验结果表

图3为根据表4绘制的平均烟碱含量与异丙醇浓度的关系曲线。如图所示，实验结果表明，异丙醇浓度为5～15％时检测值较为接近，随着溶液浓度增大，检测结果升高。这说明电子烟烟液样品检测结果有可能受到溶液背景基质的干扰。因此，使用5～15％的异丙醇水溶液作为溶剂溶解电子烟烟液，能够更准确、客观地评价电子烟烟液中烟碱含量。

实施例3对特殊品牌的前处理辅助

B品牌电子烟烟液中含有超细烟叶固体粉末或者使用大量甘油三酯类有机溶剂的电子烟液。当采用异丙醇水溶液作为溶剂时，仅通过实施例1的摇晃静置方法无法得到完整的萃取溶液，有悬浊或溶剂分层现象。

针对上述问题，实施例3采用涡旋振荡再离心分离的前处理辅助方法溶解B品牌电子烟烟液。按照上述步骤(一)至(四)测定电子烟中烟碱的含量。特别地，步骤3.1按如下方法操作：

准确称取0.1g(精确至0.0001g)B品牌烟液样品置于带盖离心管内，加入10ml 5％异丙醇溶剂，装入涡旋振荡器内，以3000r/min的速度振荡1min，然后移入离心机将液固两相分离，将异丙醇水溶液层的清液装入样品杯中按步骤3.2～3.3进行测量，代入到实施例1的系列标准工作曲线中进行计算。进行2次平行实验。电子烟烟液中烟碱浓度如表5所示。

对比例3

不采用实施例3中的涡旋振荡、再离心分离的前处理辅助方法，仅按照实施例1的方法检测B品牌电子烟烟液中烟碱含量(重量％)。进行2次平行实验。电子烟烟液中烟碱浓度如表5所示。

实施例3和对比例3的实验结果见表5所示：

表5不同辅助前处理手段实验结果表

烟碱含量	实施例3	对比例3
			平行1/重量％	2.9162	2.8640
平行2/重量％	2.9191	2.6798
			偏差	0.0029	0.1842

对比实施例3和对比例3的实验结果可见，对于用样品溶液有浑浊的情况，采用涡旋振荡－离心的辅助前处理手段后，能够获得澄清的样品溶液。而且，经过涡旋振荡－离心的辅助前处理后，电子烟烟液以及其中的烟碱更充分地溶于样品溶液，使得测量值更为客观准确。而且，两个平行的偏差更小，测试结果平行性好。

实施例4检出限和定量限实验

检出限采用IUPAC推荐的光谱类化学检出限测量方法进行测定。

用浓度为1.6268mg/ml的烟碱标准储备液。参照配制表6的配制量，准确移取烟碱标准储备液使用5％异丙醇稀释定容，得到烟碱系列标准工作溶液。

表6系列标准工作溶液配制表

将配制好的系列标准工作溶液用连续流动分析仪分析，将得到的吸光度结果绘制标准工作曲线，如图2所示。标准曲线的方程为y＝3.5915x+0.0002，相关系数达到r＝0.9991，能够满足检测所需相关性要求。

为验证本发明方法的检测限，取5％的异丙醇水溶液作为空白样品溶液。在实施例4的连续流动分析仪上机连续测定20次，带入标准工作曲线(参见步骤3.3)计算空白样品仪器显示浓度，并计算得到20次测定结果的标准偏差δ＝0.0002mg/ml，取4.6倍标准偏差为检出限，则检出限为DL＝0.0009mg/ml。取10倍标准偏差为定量限，则定量限为QL＝0.0020mg/ml。

实施例5方法回收率实验

配制系列标准溶液及绘制曲线：

C品牌电子烟烟液中烟碱含量的测量平均值为1.2741重量％。取C品牌的电子烟烟液，分别称量3份0.1g(精确至0.0001g)电子烟烟液样品，分别加入10ml 5％异丙醇水溶液。再分别加入浓度为1.6268mg/ml的烟碱标准溶液0.4ml、0.8ml、1.5ml。按步骤3.2～3.3用实施例4的连续流动分析仪对上述3份样品溶液分别测量，代入到实施例4的系列标准工作曲线中进行计算。烟碱含量测定值，加标样品测定值和加标量的单位都是重量％。每组样品重复3次测量。检测结果见表7所示。

表7烟碱回收率的测定

从上表可以看出本方法的加标回收率在99.15～108.61％之间，总平均回收率为103.4％，说明本方法对电子烟烟液中烟碱的提取比较充分，测定方法准确可靠。

实施例6方法重复性实验

取C品牌和D品牌两种不同烟碱含量的电子烟烟液样品，按照上述步骤(一)至(四)分别测定电子烟烟液中烟碱含量。

特别地，步骤3.1按如下方法操作：

取C品牌和D品牌的电子烟烟液，分别准确称取0.1g(精确至0.0001g)烟液样品，分别加入10ml 5％异丙醇水溶液作为溶剂，用实施例4的连续流动分析仪分别按步骤3.2～3.3进行测量，代入到实施例4的系列标准工作曲线中进行计算，获得电子烟烟液中的烟碱含量(重量％)。每个样品进行6次平行实验，其结果见表8所示。

表8烟碱测定的重复性实验

从实验结果可以看出，两种电子烟液烟碱含量经6次重复测定得到的变异系数均不大于1.1％，说明该方法重复性良好。

最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。

Claims (10)

1.一种电子烟烟液中烟碱含量的检测方法，其包括：

a)对电子烟烟液进行样品前处理，获得样品溶液；

b)用连续流动分析法检测样品溶液中的烟碱含量；

其中，步骤a)的样品前处理包括：

i)将电子烟烟液溶于异丙醇水溶液，异丙醇水溶液的浓度为5～15体积％，优选为5～10体积％。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤i)：每0.1g电子烟烟液溶于5～15ml的异丙醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤i)：每0.1g电子烟烟液溶于10～12ml的异丙醇水溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，前处理还包括：

ii)用涡旋振荡器震荡步骤i)的溶有电子烟烟液的异丙醇水溶液；

优选地，涡旋振荡器的震荡速度为2000～3000r/min；

优选地，涡旋振荡器的震荡时间为30～60秒。

5.根据权利要求4所述的方法，前处理还包括：

iii)用离心机离心步骤ii)震荡后的溶液，并取离心后的异丙醇水溶液层清液作为样品溶液。

6.根据权利要求1所述的方法，步骤b)中，所述连续流动分析法使用比色法检测样品溶液中的烟碱含量。

7.根据权利要求6所述的方法，所述比色法包括：使样品溶液与对氨基苯磺酸和氯化氰发生变色反应得到反应溶液，用比色计测定反应溶液的吸光度；

优选地，氯化氰由氰化钾与二氯异氰尿酸钠在连续流动分析仪上在线反应产生，

优选地，氯化氰由氰化钾与氯胺T在连续流动分析仪上在线反应产生；

优选地，氯化氰由氰化钾与次氯酸钠在连续流动分析仪上在线反应产生；

优选地，用比色计在450～480nm(例如460nm)测定反应溶液的吸光度。

8.根据权利要求7所述的方法，步骤b)中，所述反应溶液不经过加热装置加热，直接导入到比色计内测定反应溶液的吸光度。

9.根据权利要求1所述的方法，步骤b)中，连续流动分析法中，样品溶液管径为0.76mm，缓冲溶液A管径为1.14mm，缓冲溶液B管径为1.42mm，二氯异氰尿酸钠为管径为0.64mm，硫氰酸钾为管径为0.64mm，解毒液A为管径为1.30mm，解毒液B为管径为1.30mm，空气管径为0.25mm，溶剂到取样器管径为2.06mm。

10.根据权利要求1～9任一项所述的方法，其包括以下一步或多步：

α)将电子烟烟液溶于异丙醇水溶液，异丙醇水溶液的浓度为5～15体积％，优选为5～10体积％，

可选地，还对溶有电子烟烟烟液的异丙醇水溶液还进行涡旋震荡和离心分离的步骤；

β)取异丙醇水溶液层作为样品溶液；

γ)以步骤α中所述的异丙醇水溶液溶解烟碱，配制成不同烟碱浓度的系列标准工作溶液；

δ)用连续流动分析法检测系列标准工作溶液的吸光度；

ε)绘制吸光度-烟碱浓度的标准工作曲线；

ζ)用连续流动分析法检测样品溶液的吸光度；

η)将样品溶液的吸光度值代入到标准工作曲线，计算获得电子烟烟液中的烟碱浓度。