CN106421930A - 一种无刺激人造皮肤的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种无刺激人造皮肤的制备方法，涉及人造皮肤制备技术领域。本发明利用混合酶酶解豆虫肉中丰富的蛋白质，再提取酶解后的氨基酸及多肽，通过提取的氨基酸中的羧基所构成的肽链，能消化溶解变性蛋质，对未变性的蛋白质分解、变稀，易于引流排除，促进肉芽组织新生，促进皮肤愈合的效果，减少了对皮肤的刺激，同时以天然提取物壳聚糖作为抗菌物，添加蒲黄炭降低抗原抗体反应，提高了人造皮肤与人体皮肤相容性，随后添加海藻酸钠、海藻纤维作等物质，制备得无刺激人造皮肤。本发明有效解决了人造皮肤抗原性强，刺激性大，与人体皮肤相容性不高的问题，取得了人造皮肤柔软度、随形性好，有强韧性，不易撕裂，润湿强度高的效果。

Description

一种无刺激人造皮肤的制备方法

技术领域

本发明公开了一种无刺激人造皮肤的制备方法，涉及人造皮肤制备技术领域。

背景技术

人造皮肤(亦称人工皮)，早有问世，60年代，国内外曾兴起一股″人工皮热″，其品种繁多，归纳起来，目前全世界已研究应用过的人造皮肤，有以下三类：(1)高分子塑料，合成多肽，人造纤维等合成材料制成的薄膜状，海棉状人造皮肤；(2)再生蛋白和动物组织羊膜，腹膜，胎膜等生物材料制成的人造皮肤；(3)全聚薄膜制成的薄片状人造皮肤。上述各类人造皮肤，在临床应用中，比如筛状植皮法是将拟植皮的人造皮肤切开许多小口，在一定的张力条件下，固定于创面，即可增加皮片的面积，同时也便于渗出液引流。

最新医学研究表明，在临床治疗中，为加快伤口愈合，促进肌体细胞生长，皮肤伤处需保持一定的润湿状态，即要求伤口处既不能过分干燥，又不能过度潮湿。以上几种工艺方案制成的人造皮肤在治疗过程中，由于其本身结构的限制，往往不能给皮肤伤处营造一个适合皮肤、肌体生长的环境，从而影响疗效。皮片生长后，这些小孔即自行愈合，遗留的斑状疤痕也可逐渐消退。但是，在植皮的过程中常会出现在植皮时，人造皮肤从切开的小口处被撕裂，从而使植皮失败。而其他的方法都存在不同方面和不同程度的缺点，或因粘附不牢，强度太差；或因抗原性太强，刺激性大；或因通透性能不好，易感染，或因阻碍自生体皮生长，疤痕累累；或因原料来源不易，成本太高；或因工艺繁什，制造困难，又难于贮存等，均先后被淘汰。″人工皮热″逐渐冷却，因此，现在临床单位在治疗烧伤实践中，仍采用一些传统方法，造成了患者疼痛，疤痕过大，治疗期长等现象。

发明内容

本发明主要解决的技术问题：针对现今人造皮肤抗原性强，刺激性大，与人体皮肤相容性不高的问题，提出了一种无刺激人造皮肤的制备方法，本发明利用混合酶酶解豆虫肉中丰富的蛋白质，再提取酶解后的氨基酸及多肽，通过提取的氨基酸中的羧基所构成的肽链，能消化溶解变性蛋质，对未变性的蛋白质分解、变稀，易于引流排除，促进肉芽组织新生，促进皮肤愈合，减少对皮肤的刺激，同时以天然提取物壳聚糖作为抗菌物，添加蒲黄炭降低抗原抗体反应，提高了人造皮肤与人体皮肤相容性，随后添加海藻酸钠、海藻纤维作等物质，制备得无刺激人造皮肤。本发明有效解决了人造皮肤抗原性强，刺激性大，与人体皮肤相容性不高的问题，取得了人造皮肤柔软度、随形性好，有强韧性，不易撕裂，润湿强度高的效果。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

（1）取豆虫放入挤肉机中挤出豆虫肉，按质量比1:3，取豆虫肉和质量分数30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用质量分数25％盐酸调节pH至4.5～5.5，再向酶解罐中加入豆虫肉质量7～9％的混合酶，设定温度为36～40℃，以130r/min搅拌酶解7～9h；所述混合酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶按质量比2:3混合而成；

（2）在上述酶解结束后，对酶解罐中的酶解混合物进行减压过滤，收集过滤液，并放入旋转蒸发仪中旋转蒸发去除乙醇，收集剩余液，放入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的50～60％，收集浓缩液，使用质量分数为15％氢氧化钠溶液调节pH至5.7～6.5，得无刺激人造皮肤基液；

（3）按重量份数计，取40～45份上述无刺激人造皮肤基液、22～24份蒸馏水

、19～21份壳聚糖、6～8份蒲黄炭、7～9份海藻酸钠、9～11份海藻纤维及4～6份丁二醇，首先将上述无刺激人造皮肤基液、蒸馏水、壳聚糖、海藻酸钠及海藻纤维放入容器中，设定温度50～60℃，以130r/min搅拌溶解6～8h；

（4）在上述溶解结束后，再加入上述重量份数中蒲黄炭及丁二醇，继续搅拌4～6h，随后静置2～3h，去除上层清液，将剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在30～40℃干燥22～26h后揭膜，得人造皮肤，再进行杀菌消毒，即可得无刺激人造皮肤。

本发明的应用方法：选取15位表皮受伤直径3～5cm的病人分3～5批进行实验，将本发明制得的无刺激性人造皮肤从-5～0℃的冰柜中取出，放置在20～25℃下自然解冻，消毒浸泡，同时在无菌环境下，移除病人伤口周围的死亡或非健康皮肤，用无菌盐溶液清洗，保持清洁，剪取伤口大小的本发明制得的无刺激性人造皮肤贴在病人创口上用敷料覆盖保证清洁，15～20天后，病人表皮痊愈率达90％以上，无疤痕遗留，检查无撕裂过敏、疤痕等症状。

本发明的有益效果：

（1）本发明制得的人造皮肤可以防止水分与体液流失，可消毒、灭菌，有与皮肤相似的透气透水性，对渗出液有吸收性，有接近正常皮肤的柔软性与伸缩性，即柔软度、随形性好，有强韧性，不易撕裂，润湿强度高；

（2）本发明制得的无全身或局部的毒性，无抗原性，与局部刺激组织相容性好，微生物不能在它上面生长、繁殖或穿透，生物分解性可控制，使用保存方便,来源广，制作工艺简单，价格低廉。

具体实施方式

取豆虫放入挤肉机中挤出豆虫肉，按质量比1:3，取豆虫肉和质量分数30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用质量分数25％盐酸调节pH至4.5～5.5，再向酶解罐中加入豆虫肉质量7～9％的混合酶，设定温度为36～40℃，以130r/min搅拌酶解7～9h；所述混合酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶按质量比2:3混合而成，在上述酶解结束后，对酶解罐中的酶解混合物进行减压过滤，收集过滤液，并放入旋转蒸发仪中旋转蒸发去除乙醇，收集剩余液，放入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的50～60％，收集浓缩液，使用质量分数为15％氢氧化钠溶液调节pH至5.7～6.5，得无刺激人造皮肤基液，按重量份数计，取40～45份上述无刺激人造皮肤基液、22～24份蒸馏水、19～21份壳聚糖、6～8份蒲黄炭、7～9份海藻酸钠、9～11份海藻纤维及4～6份丁二醇，首先将上述无刺激人造皮肤基液、蒸馏水、壳聚糖、海藻酸钠及海藻纤维放入容器中，设定温度50～60℃，以130r/min搅拌溶解6～8h，在上述溶解结束后，再加入上述重量份数中蒲黄炭及丁二醇，继续搅拌4～6h，随后静置2～3h，去除上层清液，将剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在30～40℃干燥22～26h后揭膜，得人造皮肤，再进行杀菌消毒，即可得无刺激人造皮肤。

实例1

取豆虫放入挤肉机中挤出豆虫肉，按质量比1:3，取豆虫肉和质量分数30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用质量分数25％盐酸调节pH至4.5，再向酶解罐中加入豆虫肉质量7％的混合酶，设定温度为36℃，以130r/min搅拌酶解7h；所述混合酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶按质量比2:3混合而成，在上述酶解结束后，对酶解罐中的酶解混合物进行减压过滤，收集过滤液，并放入旋转蒸发仪中旋转蒸发去除乙醇，收集剩余液，放入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的50％，收集浓缩液，使用质量分数为15％氢氧化钠溶液调节pH至5.7，得无刺激人造皮肤基液，按重量份数计，取40份上述无刺激人造皮肤基液、22份蒸馏水、19份壳聚糖、6份蒲黄炭、7份海藻酸钠、9份海藻纤维及4份丁二醇，首先将上述无刺激人造皮肤基液、蒸馏水、壳聚糖、海藻酸钠及海藻纤维放入容器中，设定温度50℃，以130r/min搅拌溶解6h，在上述溶解结束后，再加入上述重量份数中蒲黄炭及丁二醇，继续搅拌4h，随后静置2h，去除上层清液，将剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在30℃干燥22h后揭膜，得人造皮肤，再进行杀菌消毒，即可得无刺激人造皮肤。

选取15位表皮受伤直径3cm的病人分3批进行实验，将本发明制得的无刺激性人造皮肤从-5℃的冰柜中取出，放置在20℃下自然解冻，消毒浸泡，同时在无菌环境下，移除病人伤口周围的死亡或非健康皮肤，用无菌盐溶液清洗，保持清洁，剪取伤口大小的本发明制得的无刺激性人造皮肤贴在病人创口上用敷料覆盖保证清洁，15天后，病人表皮痊愈率达91％，无疤痕遗留，检查无撕裂过敏、疤痕等症状。

实例2

取豆虫放入挤肉机中挤出豆虫肉，按质量比1:3，取豆虫肉和质量分数30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用质量分数25％盐酸调节pH至5，再向酶解罐中加入豆虫肉质量8％的混合酶，设定温度为38℃，以130r/min搅拌酶解8h；所述混合酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶按质量比2:3混合而成，在上述酶解结束后，对酶解罐中的酶解混合物进行减压过滤，收集过滤液，并放入旋转蒸发仪中旋转蒸发去除乙醇，收集剩余液，放入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的55％，收集浓缩液，使用质量分数为15％氢氧化钠溶液调节pH至6.1，得无刺激人造皮肤基液，按重量份数计，取43份上述无刺激人造皮肤基液、23份蒸馏水、20份壳聚糖、7份蒲黄炭、8份海藻酸钠、10份海藻纤维及5份丁二醇，首先将上述无刺激人造皮肤基液、蒸馏水、壳聚糖、海藻酸钠及海藻纤维放入容器中，设定温度55℃，以130r/min搅拌溶解7h，在上述溶解结束后，再加入上述重量份数中蒲黄炭及丁二醇，继续搅拌5h，随后静置2.5h，去除上层清液，将剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在35℃干燥24h后揭膜，得人造皮肤，再进行杀菌消毒，即可得无刺激人造皮肤。

选取15位表皮受伤直径5cm的病人分5批进行实验，将本发明制得的无刺激性人造皮肤从0℃的冰柜中取出，放置在25℃下自然解冻，消毒浸泡，同时在无菌环境下，移除病人伤口周围的死亡或非健康皮肤，用无菌盐溶液清洗，保持清洁，剪取伤口大小的本发明制得的无刺激性人造皮肤贴在病人创口上用敷料覆盖保证清洁，20天后，病人表皮痊愈率达97％，无疤痕遗留，检查无撕裂过敏、疤痕等症状。

实例3

取豆虫放入挤肉机中挤出豆虫肉，按质量比1:3，取豆虫肉和质量分数30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用质量分数25％盐酸调节pH至5.5，再向酶解罐中加入豆虫肉质量9％的混合酶，设定温度为40℃，以130r/min搅拌酶解9h；所述混合酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶按质量比2:3混合而成，在上述酶解结束后，对酶解罐中的酶解混合物进行减压过滤，收集过滤液，并放入旋转蒸发仪中旋转蒸发去除乙醇，收集剩余液，放入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的60％，收集浓缩液，使用质量分数为15％氢氧化钠溶液调节pH至6.5，得无刺激人造皮肤基液，按重量份数计，取45份上述无刺激人造皮肤基液、24份蒸馏水、21份壳聚糖、8份蒲黄炭、9份海藻酸钠、11份海藻纤维及6份丁二醇，首先将上述无刺激人造皮肤基液、蒸馏水、壳聚糖、海藻酸钠及海藻纤维放入容器中，设定温度60℃，以130r/min搅拌溶解8h，在上述溶解结束后，再加入上述重量份数中蒲黄炭及丁二醇，继续搅拌6h，随后静置3h，去除上层清液，将剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在40℃干燥26h后揭膜，得人造皮肤，再进行杀菌消毒，即可得无刺激人造皮肤。

选取15位表皮受伤直径4cm的病人分4批进行实验，将本发明制得的无刺激性人造皮肤从-3℃的冰柜中取出，放置在22℃下自然解冻，消毒浸泡，同时在无菌环境下，移除病人伤口周围的死亡或非健康皮肤，用无菌盐溶液清洗，保持清洁，剪取伤口大小的本发明制得的无刺激性人造皮肤贴在病人创口上用敷料覆盖保证清洁，18天后，病人表皮痊愈率达94％，无疤痕遗留，检查无撕裂过敏、疤痕等症状。

Claims (1)

1.一种无刺激人造皮肤的制备方法，其特征在于具体制备为：

（1）取豆虫放入挤肉机中挤出豆虫肉，按质量比1:3，取豆虫肉和质量分数30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用质量分数25％盐酸调节pH至4.5～5.5，再向酶解罐中加入豆虫肉质量7～9％的混合酶，设定温度为36～40℃，以130r/min搅拌酶解7～9h；所述混合酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶按质量比2:3混合而成；

（2）在上述酶解结束后，对酶解罐中的酶解混合物进行减压过滤，收集过滤液，并放入旋转蒸发仪中旋转蒸发去除乙醇，收集剩余液，放入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的50～60％，收集浓缩液，使用质量分数为15％氢氧化钠溶液调节pH至5.7～6.5，得无刺激人造皮肤基液；

（3）按重量份数计，取40～45份上述无刺激人造皮肤基液、22～24份蒸馏水、19～21份壳聚糖、6～8份蒲黄炭、7～9份海藻酸钠、9～11份海藻纤维及4～6份丁二醇，首先将上述无刺激人造皮肤基液、蒸馏水、壳聚糖、海藻酸钠及海藻纤维放入容器中，设定温度50～60℃，以130r/min搅拌溶解6～8h；

（4）在上述溶解结束后，再加入上述重量份数中蒲黄炭及丁二醇，继续搅拌4～6h，随后静置2～3h，去除上层清液，将剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在30～40℃干燥22～26h后揭膜，得人造皮肤，再进行杀菌消毒，即可得无刺激人造皮肤。