CN106397438B - 从马铃果中提取它勃宁的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从马铃果中提取它勃宁的方法,该方法包括(一)采用50%~95%乙醇,超声提取3次,每次0.5~1小时,得乙醇提取物;(二)用有机溶剂对乙醇提取物萃取3~5次,每次3~5h,得有机萃取物;(三)利用HPD‑100大孔树脂对有机萃取物进行洗脱,得乙醇洗脱物;(四)向乙醇萃取物中加入酸进行萃取,得酸萃取物;(五)向酸萃取物中加入碱液,调节其pH值至碱性,再向其中加入氯仿进行萃取,得到它勃宁。本发明方法简单,成本低,可有效的提升它勃宁的提取纯度和收率。
Description
技术领域
本发明属于它勃宁的提取工艺技术领域,具体涉及一种从马铃果中提取它勃宁的方法。
背景技术
非洲马铃果(VoacangaafricanaStapf)为夹竹桃科乔木植物,又名非洲伏康树,其树皮为浅灰棕色,分枝具皮孔,叶柄短或无;叶片呈倒卵状长圆形或倒卵状椭圆形,先端钝或锐尖,背面的两面无毛或短柔毛。非洲马铃果主要分布于非洲,在中国的华南植物园、海南热带经济植物园和西双版纳热带植物园已经引种驯化成功。
非洲马铃果中因含有生物碱、黄酮、蒽醌、强心苷、皂素、淀粉、单宁等物质,因此具有抗菌活性,抗氧化性和抗炎、抗溃疡、致幻、降压、抗肿瘤、降血糖、利尿等作用。非洲马铃果中生物碱成分主要有伊波加因碱、它勃宁、伏康京碱等,具有较高的药用价值。
其中,它勃宁是一种很好的药材,有降压、抗肿瘤、降血糖和利尿作用以及用于治疗中风后遗症、缺血性高血压脑病和脑血管病引起的抑郁、焦虑不安和情绪不稳等疾病,适用于早衰性脑退化的症状消除,如眩晕、头疼记忆力衰退等,同时也是合成抗癌药物长春胺和长春西汀的重要原料。然而通过现有的提取方法提取它勃宁,存在纯度低、收率低等问题。
发明内容
针对现有技术中的上述不足,本发明提供一种从马铃果中提取它勃宁的方法,可有效解决现有提取方法中存在的纯度低、收率低等问题。
为解决上述的技术问题,本发明采用的技术方案为:
一种从马铃果中提取它勃宁的方法,包括以下步骤:
(一)提取:取马铃果种子,粉碎,过20-40目筛,得粉末,向粉末中加入4~8倍粉末重量的50%~95%乙醇,超声提取0.5~1小时,过滤,得第一滤液和第一滤渣;
向第一滤渣中加入4~8倍滤渣重量的50%~95%乙醇,超声提取0.5~1小时,过滤,得第二滤渣和第二滤液;
向第二滤渣中加入4~8倍滤渣重量的50%~95%乙醇,超声提取0.5~1小时,过滤,得第三滤液和第三滤渣;
收集合并第一滤液、第二滤液和第三滤液,减压浓缩,得到乙醇提取物;
(二)萃取:向乙醇提取物中加水溶解,然后用有机溶剂萃取3~5次,每次3~5h,收集有机萃取液,减压浓缩,得有机萃取物;
(三)上柱:将步骤(二)中所得的有机萃取物过大孔树脂,以20%~80%乙醇作为洗脱剂进行冲洗,减压浓缩,得乙醇洗脱物;
(四)酸化:向步骤(三)中所得的乙醇洗脱物中加入pH值为2~4的酸萃取,过滤,收集酸水萃取液;
(五)梯度萃取分离:向步骤(四)所得的酸水萃取液中呈梯度加入碱液,使萃取液以1为梯度在pH值为8~11的范围内增大,向所述各梯度的萃取液中分别加入氯仿进行萃取,收集各梯度萃取液,减压浓缩,冻干,即得它勃宁。
进一步地,步骤(二)中的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇和正丁醇中的一种或多种。
进一步地,步骤(二)中的有机溶剂为石油醚和乙酸乙酯(V:V=1:1)的混合物。
进一步地,步骤(三)中洗脱剂的洗脱梯度依次为80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇和20%乙醇。
进一步地,步骤(三)中的大孔树脂为HPD-100大孔树脂。
进一步地,步骤(四)中的酸为醋酸、甲酸、盐酸或硫酸。
进一步地,步骤(五)中的碱液为氨水、氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。
本发明提供的从马铃果中提取它勃宁的方法,具有以下益效果:
(1)步骤(一)中在超声条件下利用乙醇进行提取,超声提取具有提取率高、提取速度快等优点,乙醇在超声条件下可完全提取马铃果材料中的亲水性和亲脂性的化合物;
(2)步骤(二)中采用石油醚和乙酸乙酯(V:V=1:1)的混合物作为萃取剂,可使马铃果中的它勃宁最大程度的萃取出来,提升产品的收率;
(3)步骤(五)采用梯度萃取分离,尽可能的将酸萃取液中的它勃宁萃取出来,达到提升它勃宁纯度和收率的目的。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行描述,以便于本技术领域的技术人员理解本发明,但应该清楚,本发明不限于具体实施方式的范围,对本技术领域的普通技术人员来讲,只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内,这些变化是显而易见的,一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。
实施例1
一种从马铃果中提取它勃宁的方法,包括以下步骤:
(一)提取:取10kg马铃果种子粉碎,过40目筛网,得粉末,向粉末中加入6倍粉末重量的95%乙醇,超声提取0.5小时,过滤,得到第一滤液和第一滤渣;
向第一滤渣中加入6倍滤渣重量的95%乙醇,超声提取0.5小时,过滤,得到第二滤渣和第二滤液;
向第二滤渣中加入6倍滤渣重量的95%乙醇,超声提取0.5小时,过滤,得到第三滤液和第三滤渣;
收集合并第一滤液、第二滤液和第三滤液,减压浓缩,得到乙醇提取物;
(二)萃取:向乙醇提取物中加水溶解,用3倍体积的石油醚萃取5次,每次3h,石油醚萃取液为上层,下层为水层,分离石油醚萃取层与水层,得到石油醚萃取层,减压浓缩,得石油醚萃取物;
(三)上柱:将步骤(二)中所得的石油醚萃取物过HPD-100大孔树脂,采用乙醇为洗脱剂,按照80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇和20%乙醇的梯度对大孔树脂进行洗脱,收集80%~20%乙醇洗脱液,减压浓缩,得乙醇洗脱物;
(四)酸化:向步骤(三)中所得的乙醇洗脱物中加入pH值为2的硫酸,萃取,过滤,收集硫酸萃取液;
(五)梯度萃取分离:向步骤(四)所得的硫酸萃取液中加入氨水,使萃取液以1为梯度在pH值为8~11的范围内增大,向所述各梯度的萃取液中加入氯仿进行萃取,收集各梯度的氯仿萃取液,减压浓缩,利用冻干机冻干,得到它勃宁粉末305g,收率为3.05%,纯度为99.2%。
实施例2
一种从马铃果中提取它勃宁的方法,包括以下工艺步骤:
(一)提取:取10kg马铃果种子粉碎,过40目筛网,得粉末,向粉末中加入4倍粉末重量的85%乙醇,超声提取0.7小时,过滤,得到第一滤液和第一滤渣;
向第一滤渣中加入4倍滤渣重量的85%乙醇,超声提取0.7小时,过滤,得到第二滤渣和第二滤液;
向第二滤渣中加入4倍滤渣重量的85%乙醇,超声提取0.7小时,过滤,得到第三滤液和第三滤渣;
收集合并第一滤液、第二滤液和第三滤液,减压浓缩,得到乙醇提取物;
(二)萃取:向乙醇提取物中加水溶解,用5倍体积的石油醚和乙酸乙酯(V:V=1:1)的混合物萃取3次,每次5h,石油醚-乙酸乙酯萃取液为上层,下层为水层,分离石油醚-乙酸乙酯萃取层与水层,得到石油醚-乙酸乙酯萃取层,减压浓缩,得到石油醚-乙酸乙酯萃取物;
(三)上柱:将步骤(二)中所得的石油醚-乙酸乙酯萃取物过HPD-100大孔树脂,采用乙醇为洗脱剂,按照80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇和20%乙醇的梯度对大孔树脂进行洗脱,收集80%~20%乙醇的洗脱液,减压浓缩,得乙醇洗脱物;
(四)酸化:向步骤(三)中所得的乙醇洗脱物中加入pH值为3的硫酸,萃取,过滤,收集硫酸萃取液;
(五)梯度萃取分离:向步骤(四)所得的硫酸萃取液中加入氨水,使萃取液以1为梯度在pH值为8~11的范围内增大,向所述各梯度的萃取液中加入氯仿进行萃取,收集各梯度的氯仿萃取液,减压浓缩,利用冻干机冻干,得到它勃宁粉末350g,收率为3.5%,纯度为99.6%。
实施例3
一种从马铃果中提取它勃宁的方法,包括以下工艺步骤:
(一)提取:取10kg马铃果种子粉碎,过40目筛网,得粉末,向粉末中加入8倍粉末重量的50%乙醇,超声提取1小时,过滤,得到第一滤液和第一滤渣;
向第一滤渣中加入8倍滤渣重量的50%乙醇,超声提取1小时,过滤,得到第二滤渣和第二滤液;
向第二滤渣中加入8倍滤渣重量的50%乙醇,超声提取1小时,过滤,得到第三滤液和第三滤渣;
收集合并第一滤液、第二滤液和第三滤液,减压浓缩,得到乙醇提取物;
(二)萃取:向乙醇提取物中加水溶解,然后添加5倍体积的乙酸乙酯萃取3次,每次5h,乙酸乙酯萃取液为上层,水层为下层,分离乙酸乙酯萃取层与水层,得到乙酸乙酯萃取层,减压浓缩,得到乙酸乙酯萃取物;
(三)上柱:将步骤(二)中所得的乙酸乙酯萃取物过HPD-100大孔树脂,采用乙醇为洗脱剂,按照80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇和20%乙醇的梯度对大孔树脂进行洗脱,收集80%~20%乙醇的洗脱液,减压浓缩,得乙醇洗脱物;
(四)酸化:向步骤(三)中所得的乙醇洗脱物中加入pH值为3的硫酸,萃取,过滤,收集硫酸萃取液;
(五)梯度萃取分离:向步骤(四)所得的硫酸萃取液中加入氨水,使萃取液以1为梯度在pH值为8~11的范围内增大,向所述各梯度的萃取液中加入氯仿进行萃取,收集各梯度的氯仿萃取液,减压浓缩,利用冻干机冻干,得到它勃宁粉末324g,收率为3.24%,纯度为99.4%。
实施例4
一种从马铃果中提取它勃宁的方法,包括以下工艺步骤:
(一)提取:取10kg马铃果种子粉碎,过40目筛网,得粉末,向粉末中加入4倍粉末重量的55%乙醇,超声提取0.7小时,过滤,得到第一滤液和第一滤渣;
向第一滤渣中加入6倍滤渣重量的55%乙醇,超声提取1小时,过滤,得到第二滤渣和第二滤液;
向第二滤渣中加入6倍滤渣重量的55%乙醇,超声提取1小时,过滤,得到第三滤液和第三滤渣;
收集合并第一滤液、第二滤液和第三滤液,减压浓缩,得到乙醇提取物;
(二)萃取:向乙醇提取物中加水溶解,用5倍体积的石油醚萃取4次,每次5h,石油醚萃取液为上层,水层为下层,分离石油醚萃取层与水层,得到石油醚萃取层,减压浓缩,得到石油醚萃取物;
(三)上柱:将步骤(二)中所得的石油醚萃取物过HOD-100大孔树脂,采用乙醇为洗脱剂,按照80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇和20%乙醇的梯度对大孔树脂进行洗脱,收集80%~20%乙醇的洗脱液,减压浓缩,得乙醇洗脱物;
(四)酸化:向步骤(三)中所得的乙醇洗脱物中加入pH值为4的盐酸,萃取,过滤,收集盐酸萃取液;
(五)梯度萃取分离:向步骤(四)所得的盐酸萃取液中加入氨水,使萃取液以1为梯度在pH值为8~11的范围内增大,向所述各梯度的萃取液中加入氯仿进行萃取,收集各梯度的氯仿萃取液,减压浓缩,利用冻干机冻干,得到它勃宁粉末312g,收率为3.12%,纯度为99.2%。
实施例5
一种从马铃果中提取它勃宁的方法,包括以下工艺步骤:
(一)提取:取10kg马铃果种子粉碎,过40目筛网,得粉末,向粉末中加入4倍粉末重量的90%乙醇,超声提取0.7小时,过滤,得到第一滤液和第一滤渣;
向第一滤渣中加入4倍滤渣重量的90%乙醇,超声提取0.7小时,过滤,得到第二滤渣和第二滤液;
向第二滤渣中加入4倍滤渣重量的90%乙醇,超声提取0.7小时,过滤,得到第三滤液和第三滤渣;
收集合并第一滤液、第二滤液和第三滤液,减压浓缩,得到乙醇提取物;
(二)萃取:向乙醇提取物中加水溶解,然后添加5倍量的石油醚和乙酸乙酯(V:V=1:1)的混合物萃取3次,每次5h,石油醚-乙酸乙酯萃取液为上层,水层为下层,分离石油醚-乙酸乙酯萃取层与水层,得到石油醚-乙酸乙酯萃取层,减压浓缩,得到石油醚-乙酸乙酯萃取物;
(三)上柱:将步骤(二)中所得的石油醚-乙酸乙酯萃取物过HPD-100大孔树脂,采用乙醇为洗脱剂,按照80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇和20%乙醇的梯度对大孔树脂进行洗脱,收集80%~20%乙醇的洗脱液,减压浓缩,得乙醇洗脱物;
(四)酸化:向步骤(三)中所得的乙醇洗脱物中加入pH值为4的硫酸萃取,过滤,收集硫酸萃取液;
(五)梯度萃取分离:向步骤(四)所得的硫酸萃取液中加入氨水,使萃取液以1为梯度在pH值为8~11的范围内增大,向所述各梯度的萃取液中加入氯仿进行萃取,收集各梯度的氯仿萃取液,减压浓缩,利用冻干机冻干,得到它勃宁粉末342g,收率为3.42%,纯度为99.4%。
对比例
取50kg马铃果种子粉碎,粉碎目数为30目,将所得粉末加入150kg浓度为3%的盐酸水溶液中,于80℃搅拌提取,共提取3次,没次5h,得到提取液。
将上述三次提取液合并,采用浓度为25%的碳酸钠水溶液调节提取液酸碱度,使提取液pH值为9,防止沉淀过夜,离心,弃去上清液,得沉淀,沉淀重6.3kg。
向上述湿沉淀中加入25.2kg水,搅成悬浊液,继而采用31.5kg石油醚和正己烷(V:V=1:1)的混合液,共萃取3次,没次4h,分离有机层与水层,得萃取液,将三次萃取液合并浓缩至油状物3kg,将油状物放入冰箱中过夜,油中析出结晶,离心干燥,得到淡黄色粉末1.5kg,即为它勃宁,收率为3%,纯度为99.1%。
现有提取效果与本发明效果对比,对比结果见表1:
表1提取效果对比
收率(%) | 纯度(%) | |
实施例1 | 3.05 | 99.2 |
实施例2 | 3.5 | 99.6 |
实施例3 | 3.24 | 99.4 |
实施例4 | 3.12 | 99.2 |
实施例5 | 3.42 | 99.4 |
对比例 | 3.0 | 99.1 |
综上所述,通过实施例1~5的方法所提取的它勃宁,在收率和纯度上均较对比例有所提升,尤其是实施例2的效果最佳,收率达到了3.5%,纯度达到了99.6%。
虽然上述实施例对本发明进行了详细地描述,但不应理解为对本专利的保护范围的限定。在权利要求书所描述的范围内,本领域技术人员不经创造性劳动即可做出的各种修改和变形仍属本专利的保护范围。
Claims (7)
1.一种从马铃果中提取它勃宁的方法,其特征在于:包括以下工艺步骤:
(一)提取:取马铃果种子,粉碎,过20-40目筛,得粉末,向粉末中加入4~8倍粉末重量的50%~95%乙醇,超声提取0.5~1小时,过滤,得第一滤液和第一滤渣;
向第一滤渣中加入4~8倍滤渣重量的50%~95%乙醇,超声提取0.5~1小时,过滤,得第二滤渣和第二滤液;
向第二滤渣中加入4~8倍滤渣重量的50%~95%乙醇,超声提取0.5~1小时,过滤,得第三滤液和第三滤渣;
收集合并第一滤液、第二滤液和第三滤液,减压浓缩,得到乙醇提取物;
(二)萃取:向乙醇提取物中加水溶解,然后用有机溶剂萃取3~5次,每次3~5h,收集有机萃取液,减压浓缩,得有机萃取物;
(三)上柱:将步骤(二)中所得的有机萃取物过大孔树脂,以20%~80%乙醇作为洗脱剂进行冲洗,减压浓缩,得乙醇洗脱物;
(四)酸化:向步骤(三)中所得的乙醇洗脱物中加入pH值为2~4的酸,萃取,过滤,收集酸水萃取液;
(五)梯度萃取分离:向步骤(四)所得的酸水萃取液中呈梯度加入碱液,使萃取液以1为梯度在pH值为8~11的范围内增大,向所述各梯度的萃取液中分别加入氯仿进行萃取,收集各梯度萃取液,减压浓缩,冻干,即得它勃宁。
2.根据权利要求1所述的从马铃果中提取它勃宁的方法,其特征在于:步骤(二)中所述的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、氯仿和正丁醇中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的从马铃果中提取它勃宁的方法,其特征在于:步骤(二)中所述的有机溶剂为石油醚和乙酸乙酯按体积比为1:1混合的混合物。
4.根据权利要求1所述的从马铃果中提取它勃宁的方法,其特征在于:步骤(三)中所述的大孔树脂为HPD-100大孔树脂。
5.根据权利要求1所述的从马铃果中提取它勃宁的方法,其特征在于:步骤(三)中所述洗脱剂的洗脱梯度依次为80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇和20%乙醇。
6.根据权利要求1所述的从马铃果中提取它勃宁的方法,其特征在于:步骤(四)中所述的酸为醋酸、甲酸、盐酸或硫酸。
7.根据权利要求1所述的从马铃果中提取它勃宁的方法,其特征在于:步骤(五)中所述的碱液为氨水、氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。
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