CN106386485B - 一种促进罗汉果种子性别分化的处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种促进罗汉果种子雌株分化的处理方法，属于罗汉果种植技术领域。主要采用激素诱导及机械损伤促使罗汉果种子分化成雌株，本发明将罗汉果种子进行预处理，通过酒精溶剂、升汞溶液进行种子消毒，形成无菌种子，再通过GA溶液处理及机械损伤处理，然后放入培养基中培养。通过上述方式，能够快速形成脱毒种苗、稳定雌株等优点。本发明方法简单，操作便利成本低廉，所选用的材料安全，将罗汉果种子分化为雌株的成功率较高，科研、生产领域均适用。
Description
技术领域
本发明涉及罗汉果种植技术领域，具体来说，涉及一种促进罗汉果种子性别分化的处理方法。
背景技术
罗汉果(Siraitiagrosvenorii(Swingle)C.Jeffery ex lu et Z.Y.Zhang)属于葫芦科罗汉果属药食两用植物，具有润肺止咳、生津止渴的功效，适用于肺热或肺燥咳嗽、百日咳及暑热伤津口渴等，此外还有润肠通便的功效。现代医学证明，罗汉果对支气管炎、高血压等疾病有显著疗效，对冠心病、肥胖症、血管硬化有一定的防治作用，其甜度是蔗糖的300倍，具有丰富的营养的价值。近年来对罗汉果的研究逐渐深入，在成分提取、药理作用及栽培等成果显著，但对诱导种子性别分化尚未见报道，由于罗汉果雌雄异株，自然情况下采用种子培育出的植株中有80％以上为雄性植株，众所周知，雄性植株不会结果，要获得雌性植株非常困难，大大提高了罗汉果雌性植株的培育成本，抑制着罗汉果产业的发展。因此，对罗汉果雌性植株的培育的研究具有较大的经济价值。
发明内容
有鉴于此，本发明对罗汉果种子进行激素及机械损伤诱导在发芽过程中分化成为雌株，解决人工控制罗汉果性别分化，同时解决罗汉果雌株短缺问题，获得高产大量雌株罗汉果脱毒种苗等。
本发明通过以下技术方案解决上述技术问题：
一种促进罗汉果种子性别分化的处理方法，包括以下步骤：
(1)清洗、消毒：先将罗汉果种子清洗之后，然后进行消毒；
(2)杀菌：将处理后的罗汉果种子进行杀菌；
(3)机械损伤：将杀菌处理后的罗汉果种子进行无菌处理，接着破除罗汉果种子表面的活性物质，接着进行消毒、清洗后，用升汞溶液浸泡一段时间，接着将罗汉果种子进行清洗，接着从罗汉果种子中取出胚，待用；
(4)浸泡：将罗汉果种子的胚用GA溶液浸泡一段时间后取出；
(5)培养：将罗汉果种子的胚放入培养基中，在一定的温度和光照条件下培养，即得罗汉果的雌性植株。
优选地，所述步骤(1)中，是将采集回来的罗汉果去除果皮及果囊，取出种子用清水冲洗，再用酒精对罗汉果种子进行消毒处理，接着用无菌水冲洗，待用。
更优选地，所述步骤(1)中，是将采集回来的罗汉果去除果皮及果囊，取出种子用清水冲洗1～2h，用浓度为75％的医用酒精对种子进行消毒处理1～6min，用无菌水冲洗3～4次，待用。
优选地，所述步骤(2)中，采用紫外灯对罗汉果种子杀菌20～40min。
优选地，所述步骤(3)中，将杀菌处理后的罗汉果种子进行无菌处理，接着破除罗汉果种子表面的活性物质，接着用酒精浸泡消毒1～3min，再用无菌水冲洗3～5次，接着用升汞溶液浸泡5～15min，将种子从升汞溶液中取出后用无菌水浸泡1～5min，接着冲洗3～4次，接着用镊子和解剖刀从罗汉果种子中去除胚乳取出胚。
优选地，所述升汞溶液的浓度为0.1～0.3％。
优选地，所述步骤(4)中，采用GA溶液浸泡的时间为1～2h，将种子从溶液中取出后用无菌水冲洗2～3次。
优选地，所述GA溶液的质量浓度为10～20mg/L。
优选地，所述步骤(5)中，培养温度控制在25～35℃，光照条件 为2500～3000lx。
优选地，所述基本培养基是MS，采用NAA、6-BA、GA、蔗糖以及琼脂混合后，调节pH值为5～7，再经高压灭菌制成。
优选地，所述培养基为MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
本发明的有益效果在于：
首先，本发明通过机械损伤处理能够使罗汉果种子胚更好的吸收GA溶液，促进罗汉果种子胚诱导成雌性植株分化。
其次，本发明配制的培养基为种子在发芽过程中诱导分化成为雌性植株提供充足的营养和激素需求，诱导出稳定的雌性植株。
再次，本发明的工艺能够人为控制罗汉果性别分化，有效解决自然情况下难以获得罗汉果雌性植株问题。
具体实施方式
为了方便本领域的技术人员理解，下面将结合实施例对本发明做进一步的描述。实施例仅仅是对该发明的举例说明，不是对本发明的限定，实施例中未作具体说明的步骤均是已有技术，在此不做详细描述。
实施例一
一种促进罗汉果种子性别分化的处理方法，包括以下步骤：
(1)清洗、消毒：将采集回来的500个罗汉果去除果皮及果囊，取出种子用清水冲洗1h，将种子放入烧杯中，向烧杯中加入浓度为75％的医用酒精对种子进行消毒处理，酒精的用量以淹没所用烧杯中种子为宜，处理1min后，用无菌水冲洗3次，待用；
(2)杀菌：将处理后的罗汉果种子放入无菌烧杯中，再将烧杯放入超净台里，打开紫外灯杀菌处理20min；
(3)机械损伤：将杀菌处理后的罗汉果种子进行无菌处理，接 着破除罗汉果种子表面的活性物质，将种子放入无菌烧杯中，接着用酒精浸泡消毒1min，酒精的用量以淹没种子为宜，再用无菌水冲洗3次，接着用浓度为0.1％的升汞溶液浸泡5min，将种子从升汞溶液中取出后用无菌水浸泡1min，接着冲洗3次，接着用镊子和解剖刀从罗汉果种子中去除胚乳取出胚，待用；
(4)浸泡：将罗汉果种子的胚用质量浓度为10mg/L的GA溶液浸泡1h后取出，用无菌水冲洗2次，待用；
(5)培养：将罗汉果种子的胚放入装有培养基的培养箱中，培养温度控制在25℃，光照条件为2500lx，培养1个月后，将培养出的幼苗进行性别鉴定，获得的幼苗有86％以上为雌性(表1)。所述基本培养基是MS，采用NAA、6-BA、GA、蔗糖以及琼脂混合后，调节pH值为5，再经高压灭菌制成，制得的培养基为MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
表1
实施例二
一种促进罗汉果种子性别分化的处理方法，包括以下步骤：
(1)清洗、消毒：将采集回来的500个罗汉果去除果皮及果囊，取出种子用清水冲洗2h，将种子放入烧杯中，向烧杯中加入浓度为75％的医用酒精对种子进行消毒处理，酒精的用量以淹没所用烧杯中种子为宜，处理6min后，用无菌水冲洗5次，待用；
(2)杀菌：将处理后的罗汉果种子放入无菌烧杯中，再将烧杯放入超净台里，打开紫外灯杀菌处理40min；
(3)机械损伤：将杀菌处理后的罗汉果种子进行无菌处理，接着破除罗汉果种子表面的活性物质，将种子放入无菌烧杯中，接着用酒精浸泡消毒3min，酒精的用量以淹没种子为宜，再用无菌水冲洗4次，接着用浓度为0.3％的升汞溶液浸泡15min，将种子从升汞溶液中取出后用无菌水浸泡5min，接着冲洗4次，接着用镊子和解剖刀从罗汉果种子中去除胚乳取出胚，待用；
(4)浸泡：将罗汉果种子的胚用质量浓度为20mg/L的GA溶液浸泡2h后取出，用无菌水冲洗3次，待用；
(5)培养：将罗汉果种子的胚放入装有培养基的培养箱中，培养温度控制在35℃，光照条件为3000lx，培养1个月后，将培养出的幼苗进行性别鉴定，获得的幼苗有92％以上为雌性(表2)。所述基本培养基是MS，采用NAA、6-BA、GA、蔗糖以及琼脂混合后，调节pH值为7，再经高压灭菌制成，制得的培养基为MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
表2
实施例三
一种促进罗汉果种子性别分化的处理方法，包括以下步骤：
(1)清洗、消毒：将采集回来的500个罗汉果去除果皮及果囊，取出种子用清水冲洗1.5h，将种子放入烧杯中，向烧杯中加入浓度为75％的医用酒精对种子进行消毒处理，酒精的用量以淹没所用烧杯中种子为宜，处理3min后，用无菌水冲洗4次，待用；
(2)杀菌：将处理后的罗汉果种子放入无菌烧杯中，再将烧杯 放入超净台里，打开紫外灯杀菌处理30min；
(3)机械损伤：将杀菌处理后的罗汉果种子进行无菌处理，接着破除罗汉果种子表面的活性物质，将种子放入无菌烧杯中，接着用酒精浸泡消毒3min，酒精的用量以淹没种子为宜，再用无菌水冲洗4次，接着用浓度为0.2％的升汞溶液浸泡10min，将种子从升汞溶液中取出后用无菌水浸泡3min，接着冲洗3次，接着用镊子和解剖刀从罗汉果种子中去除胚乳取出胚，待用；
(4)浸泡：将罗汉果种子的胚用质量浓度为15mg/L的GA溶液浸泡1.5h后取出，用无菌水冲洗3次，待用；
(5)培养：将罗汉果种子的胚放入装有培养基的培养箱中，培养温度控制在30℃，光照条件为2800lx，培养1个月后，将培养出的幼苗进行性别鉴定，获得的幼苗全部为雌性(表3)。所述基本培养基是MS，采用NAA、6-BA、GA、蔗糖以及琼脂混合后，调节pH值为6，再经高压灭菌制成，制得的培养基为MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
表3
Claims (6)
1.一种促进罗汉果种子性别分化的处理方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)清洗、消毒：先将罗汉果种子清洗之后，然后进行消毒，待用；
(2)杀菌：将处理后的罗汉果种子进行杀菌，待用；
(3)机械损伤：将杀菌处理后的罗汉果种子进行无菌处理，接着破除罗汉果种子表面的活性物质，接着进行消毒、清洗后，用升汞溶液浸泡一段时间，接着将罗汉果种子进行清洗，接着从罗汉果种子中取出胚，待用；
(4)浸泡：将罗汉果种子的胚用GA溶液浸泡一段时间后取出，待用；
(5)培养：将罗汉果种子的胚放入培养基中，在一定的温度和光照条件下培养，即得罗汉果的雌性植株；
所述培养基为MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LGA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂；
所述步骤(4)中，采用GA溶液浸泡的时间为1～2h，将种子从溶液中取出后用无菌水冲洗2～3次；
所述GA溶液的质量浓度为10～20mg/L。
2.如权利要求1所述的促进罗汉果种子性别分化的处理方法，其特征在于：所述步骤(1)中，是将采集回来的罗汉果去除果皮及果囊，取出种子用清水冲洗1～2h，用浓度为75％的医用酒精对种子进行消毒处理1～6min，用无菌水冲洗3～4次，待用。
3.如权利要求1所述的促进罗汉果种子性别分化的处理方法，其特征在于：所述步骤(2)中，采用紫外灯对罗汉果种子杀菌20～40min。
4.如权利要求1所述的促进罗汉果种子性别分化的处理方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将杀菌处理后的罗汉果种子进行无菌处理，接着破除罗汉果种子表面的活性物质，接着用酒精浸泡消毒1～3min，再用无菌水冲洗3～5次，接着用升汞溶液浸泡5～15min，将种子从升汞溶液中取出后用无菌水浸泡1～5min，接着冲洗3～4次，接着用镊子和解剖刀从罗汉果种子中去除胚乳取出胚。
5.如权利要求1或4所述的促进罗汉果种子性别分化的处理方法，其特征在于：所述升汞溶液的浓度为0.1～0.3％。
6.如权利要求1所述的促进罗汉果种子性别分化的处理方法，其特征在于：优选地，所述步骤(5)中，培养温度控制在25～35℃，光照条件为2500～3000lx。
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