CN108770688A - 一种千里香的快速繁殖方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种千里香的快速繁殖方法。该方法包括如下步骤：(1)以千里香的种子、带顶芽的茎段或带腋芽的茎段为外植体，进行预处理和消毒处理，得到消毒处理后的外植体；(2)将消毒处理后的外植体接种到启动培养基中进行培养，得带有新梢的外植体；(3)将带有新梢的外植体接种到增殖培养基中进行培养，得到无根苗；(4)将无根苗接种到生根培养基中进行培养，得到种苗，其中生根培养基为：在1/2MS培养基加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0～1.5mg/L IBA和0～1.5mg/L NAA，pH5.8‑6.0。该方法可实现千里香的快速增殖且得到的种苗具有很好的质量。

Description

一种千里香的快速繁殖方法

技术领域

本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种千里香的快速繁殖方法。

背景技术

千里香(Murraya paniculata(L).Jack.)，又名，黄金桂、四季春、青木香，为芸香科(Rutaceae)九里香属(Murraya)植物的小乔木，其主要生长于疏林中或干燥的坡地，分布于广东、福建、海南及贵州等地。千里香的根、叶及带叶嫩枝作为入药部位，具有行气止痛、活血散瘀的功效，用于治疗胃痛，风湿痹痛，牙痛、跌打肿痛和虫蛇咬伤等。例如，目前市售的三九胃泰颗粒及胶囊中使用的九里香药材均来源于千里香的叶和带叶的嫩枝。

千里香的叶和带腋嫩枝一般种植3年之后方可采收使用，而且由于采收的是地上的部分枝条，第一年采收后，第二年的产量会降低，因此为获得大量的叶和带腋嫩枝，需要大量种植，才能满足生产上的需求。而现有的千里香的繁殖方法主要以播种繁殖为主，但由于千里香一般至少需要种植四年才能够开始开花，而且千里香开花少，进而导致可收集种子少，并且只有在秋天才能采集种子，进一步增大了千里香的种子的收集难度，从而以播种繁殖无法满足大量生产的需求。

为了解决千里香大量生产的需求的问题，现有技术有文献公开了：一种适用于中草药千里香种苗的组织培养方法，其步骤为(1)预处理：将中草药千里香的种子、顶芽或腋芽，经过无菌处理后接种在盛放有萌发培养基的试管或培养瓶中进行萌发培养，将试管或培养瓶中接种一颗种子或顶芽或腋芽然后置于培养基中；(2)从生芽诱导培养：将在萌发培养基中培养得到的萌发小苗转入从生芽诱导培养集中进行诱导培养，5-6周后进行扩培继代培养，得到无根苗；(3)不定根诱导培养：将无根苗转入不定根诱导培养基中，培养5-7周得到种苗。该方法通过种子、顶芽或腋芽通过植物组织培养方法，缩短了生长周期，实现了千里香的快速的繁殖。然而，该方法得到的种苗的根长为0.4-1.5cm(即平均根长为0.9cm)，而且该文献也未公开生根率和根数，因此无法全面评估得到的千里香的种苗的质量。

发明内容

因此，本发明要解决的第一个技术问题在于克服现有技术中的千里香的组织培养方法得到的种苗的平均根长较短的缺陷，本发明要解决的第二个技术问题在于克服现有技术中的千里香的组织培养方法得到的种苗的生根率和根数未知的缺陷，从而提供一种千里香的快速繁殖方法，该方法可实现千里香的快速增殖且得到的种苗具有很好的质量。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种千里香的快速繁殖方法，包括如下步骤：(1)外植体的预处理和消毒处理：以千里香的种子、带顶芽的茎段或带腋芽的茎段为外植体，先进行预处理，再进行消毒处理，得到消毒处理后的外植体；(2)外植体的启动培养：将所述消毒处理后的外植体接种到启动培养基中进行培养，得带有新梢的外植体；(3)增殖培养：将所述带有新梢的外植体接种到增殖培养基中进行培养，得到无根苗；(4)生根培养：将所述无根苗接种到生根培养基中进行培养，得到种苗，所述生根培养基为：在1/2MS培养基加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0～1.5mg/L IBA和0～1.5mg/L NAA，pH5.8-6.0。

优选的，所述生根培养基为：在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0～1.5mg/L IBA和0～0.5mg/L NAA，pH5.8-6.0。

所述生根培养基为：在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖和0.5mg/LIBA，pH5.8-6.0或在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖和1.0mg/L IBA，pH5.8-6.0或在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖和1.5mg/L IBA，pH5.8-6.0或在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖，pH5.8-6.0或在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖和0.5mg/L NAA，pH5.8-6.0或在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5mg/L IBA和0.5mg/L NAA，pH5.8-6.0。

进一步优选的，所述生根培养基为：在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、1.0～1.5mg/L IBA和0～0.5mg/L NAA，pH5.8-6.0。

所述生根培养基为：在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、1.0mg/LIBA和0.5mg/L NAA，pH5.8-6.0或在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、1.5mg/L IBA和0.5mg/L NAA，pH5.8-6.0。

优选的，所述增殖培养基为：在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5～2.0mg/L的6-BA，pH5.8-6.0。

进一步优选的，所述增殖培养基还包括以下成分中的至少一种：0.5mg/L的KT、0.5mg/L的IBA、0.5～1.0mg/L的GA₃、0.5mg/L的NAA。

所述带腋芽茎段或带顶芽茎段为外植体的增殖培养基为：在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT和0.5mg/L的NAA，pH5.8-6.0或在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、2.0mg/L的6-BA和0.5mg/L的IBA，pH5.8-6.0。

所述种子为外植体的增殖培养基为：在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT和0.5mg/L的NAA，pH5.8-6.0或在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、2.0mg/L的6-BA和0.5mg/L的IBA，pH5.8-6.0或在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、1.0mg/L的6-BA和0.5mg/L的NAA，pH5.8-6.0。优选的，所述启动培养基为：在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5～1.0mg/L的6-BA和0.5～2.0mg/L的KT，pH5.8-6.0。

进一步优选的，所述启动培养基还包括以下成分中的一种：0.5mg/L的NAA、0.5mg/L的IBA、0.5～1.0mg/L的GA₃。

所述启动培养基为：在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、1.0mg/L的6-BA、1.0mg/L的KT和0.5mg/L的NAA，pH5.8-6.0或在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5mg/L的6-BA、1.0mg/L的KT和0.5mg/L的GA₃，pH5.8-6.0或在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5mg/L的6-BA、1.0mg/L的KT和0.5mg/L的NAA，pH5.8-6.0或在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、1.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT和0.5mg/L的IBA，pH5.8-6.0或在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、1.0mg/L的6-BA、0.5mg/L的KT和0.5mg/L的GA₃，pH5.8-6.0。

优选的，以带顶芽的茎段或带腋芽的茎段为外植体，预处理方法为：剪取生长健壮、无病虫害的千里香半木质化枝条，去掉叶片，将其剪成2-3cm的带腋芽茎段，置于饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h；消毒方法为：先用体积浓度为75％的乙醇水溶液消毒30s，再用滴加吐温的质量分数为0.1％的HgCl₂溶液消毒8-14min；或者先用滴加吐温的质量分数为1.0-3.0％的NaClO₃水溶液消毒15min，再用质量分数为0.1％的HgCl₂溶液消毒8-12min。

进一步优选的，消毒方法为：先用滴加吐温的质量分数为1.0％的NaClO₃水溶液消毒15min，再用质量分数为0.1％的HgCl₂溶液消毒10min或12min或先用滴加吐温的质量分数为3.0％的NaClO₃水溶液消毒15min，再用质量分数为0.1％的HgCl₂溶液消毒8-12min。

以千里香的种子为外植体，预处理方法为：用饱和洗衣粉水浸泡约10min，然后在流水下冲洗至少1h；消毒方法为：先用体积浓度为75％的乙醇水溶液消毒1min，再用滴加吐温的质量分数为0.1％的HgCl₂溶液消毒6-12min。

优选的，所述外植体的启动培养的培养条件为：温度为24-26℃，湿度为50％-60％，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；所述增殖培养的培养条件为：温度为24-26℃，湿度为50％-60％，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；所述生根培养的培养条件为：温度为24-26℃，湿度为50％-60％，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明的千里香的快速繁殖方法，以千里香的种子、带顶芽的茎段或带腋芽的茎段为外植体，依次经过外植体的预处理和消毒处理—外植体的启动培养—增殖培养—生根培养的步骤，得到种苗。本发明通过选择特定的生根培养的培养基的配方，使得种苗的平均根长度2.34cm，而且平均根数为4.58根，平均生根率为52.00％，有利于后续的移植栽培，进而提高种苗的存活率。

2.本发明的千里香的快速繁殖方法，带腋芽的茎段或待顶芽的茎段作为外植体通过选择特定的增殖培养的培养基的配方，使得平均芽数可达5.61，平均芽增殖系数可达5.73；种子作为外植体通过选择特定的增殖培养的培养基的配方，使得平均芽数为9.63，平均芽增殖系数为9.63。

3.本发明的千里香的快速繁殖方法，通过选择特定的启动培养的培养基的配方，使得腋芽诱导率可达95.83％。

4.本发明的千里香的快速繁殖方法，以千里香的种子为外植体，通过选择特定的消毒处理方法，使得种子的平均萌发率可达93.43％，平均染菌率可低至11.31％；以带顶芽的茎段或带腋芽的茎段为外植体，通过选择特定的消毒处理方法，使得平均染菌率可低至16.67％，褐化率可低至6.67％平均存活率可达68.33％。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式中的技术方案，下面将对具体实施方式描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为千里香带腋芽茎段在不同配方的启动培养基中腋芽诱导的结果图，其中配方1-17对应表7中编号1-17的配方组成；

图2为千里香带腋芽茎段在不同配方的启动培养基中腋芽诱导的结果图，其中配方1-24对应表8中编号1-24的配方组成；

图3为千里香带腋芽茎段在不同配方的启动培养基中腋芽诱导的结果图，其中配方1-8对应表9中编号1-8的配方组成；

图4为千里香带新梢茎段在不同配方的增殖培养基中的丛生芽诱导的结果图，其中配方1-5对应表10中编号1-5的配方组成；

图5、图6为千里香无根苗在不同配方的生根培养基中的生根结果图，其中配方1-16对应表12中编号1-12的配方组成，A为种苗的根苗的形态图；B为种苗的根系形态图。

具体实施方式

下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明以下实施例和实验例中，MS培养基是多数植物组织培养快速繁殖用的基本培养基，特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，其硝酸盐含量高，养分的数量和比例合适；IBA指的是吲哚丁酸；NAA指的是α-萘乙酸；6-BA指的是6-苄氨基腺嘌呤；KT指的是6-糖基氨基嘌呤；GA₃指的是赤霉素；1/2MS培养基指的是把MS培养基中的微量元素减少到原来的1/2；大田苗茎段均取自2015年华润三九医药股份有限公司从广西引种栽培至广州中医药大学大学城校区一号山体的千里香植株；

吐温为吐温20；

1％NaClO₃、1.5％NaClO₃、2％NaClO₃和3％NaClO₃指的是质量分数；0.1％HgCl₂指的是质量分数；

n％NaClO₃(滴加吐温)指的是在n％NaClO₃中滴加吐温，其中吐温和n％NaClO₃的体积比为1:1000，例如1％NaClO₃(滴加吐温)指的是在1％NaClO₃中滴加吐温，其中吐温和1％NaClO₃的体积比为1:1000；

0.1％HgCl₂(滴加吐温)指的是在0.1％HgCl₂中滴加吐温，其中0.1％HgCl₂和吐温的体积为1000：1。

实施例1

本实施例提供了一种千里香快速繁殖方法，具体过程为：

(1)外植体的预处理和消毒处理：剪取生长健壮、无病虫害的千里香半木质化枝条，去掉叶片，将其剪成2-3cm的带腋芽茎段，置于饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理带腋芽茎段，于超净工作台下，采用质量分数为1％次氯酸钠和吐温的混合液(1％次氯酸钠50mL，吐温0.5mL)灭菌15min，然后用质量分数为0.1％HgCl₂灭菌10min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的带腋芽茎段；

(2)外植体的启动培养：将消毒后的带腋芽茎段放入铺有无菌滤纸的培养皿中，剪掉消毒后的带腋芽茎段两端与次氯酸钠和HgCl₂直接接触的部分，使其成为1.5-2cm的一个带腋芽茎段，随后将其接种到启动培养基中，在培养温度为25℃，空气相对湿度为50％，光照时间为12h/d，光照强度为1500Lx的条件下进行带腋芽茎段的启动培养，培养30天后得到带有新梢的茎段；

(3)增殖培养：从带有新梢的茎段上切下1.0-2.0cm腋芽接种到增殖培养基中，在培养温度为24℃，空气相对湿度为60％，光照时间为12h/d，光照强度为1500Lx的条件下进行增殖培养，培养40天后得到无根苗；

(4)生根培养：将无根苗接种生根培养基中，在培养温度为26℃，空气相对湿度为60％，光照时间为12h/d，光照强度为2000Lx的条件下进行生根培养，培养40天后得到种苗。

其中，启动培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA 0.1mg、KT 0.1mg和NAA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得启动培养基。

增殖培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA 0.05mg、KT 0.05mg和NAA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得增殖培养基。

生根培养基的制备方法为：在1/2MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、IBA 0.15mg和NAA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得生根培养基。

实施例2

本实施例提供了一种千里香快速繁殖方法，其以种子作为外植体，与实施例1的区别在于，

(1)外植体的预处理和消毒处理为：将千里香种子用饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理种子，于超净工作台下，采用体积分数为75％的乙醇灭菌1min，再用质量分数为0.1％HgCl₂和吐温的混合液(0.1％HgCl₂50mL，吐温0.5mL)灭菌8min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的种子；

(2)外植体的启动培养：将消毒后的种子放入铺设有无菌滤纸的培养皿中，吸干材料表面的水分，用镊子和手术刀祛除种皮，得到祛除种皮种子，随后将其接种到启动培养基中，在培养温度为25℃，空气相对湿度为50％，光照时间为12h/d，光照强度为1500Lx的条件下进行带腋芽茎段的启动培养，培养30天后得到种子无菌实生苗；

(3)将种子无菌实生苗种到增殖培养基中，在培养温度为24℃，空气相对湿度为60％，光照时间为12h/d，光照强度为1500Lx的条件下进行增殖培养，培养40天后得到无根苗。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例3

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，生根培养的生根培养的制备方法：在1/2MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g和IBA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得生根培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例4

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，生根培养的生根培养的制备方法：在1/2MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g和IBA 0.15mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得生根培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例5

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，生根培养的生根培养的制备方法：在1/2MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g和NAA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得生根培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例6

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，生根培养的生根培养的制备方法：在1/2MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、IBA 0.05mg和NAA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得生根培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例7

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，生根培养的生根培养的制备方法：在1/2MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、IBA 0.1mg和NAA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得生根培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例8

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，生根培养的生根培养的制备方法：在1/2MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g和IBA 0.1mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得生根培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例9

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，增殖培养的增殖培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA 0.2mg和IBA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得增殖培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例10

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例2的区别仅在于，增殖培养的增殖培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA 0.2mg和IBA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得增殖培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例2相同。

实施例11

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例2的区别仅在于，增殖培养的增殖培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA 0.1mg和NAA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得增殖培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例2相同。

实施例12

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，启动培养的启动培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA0.05mg、KT 0.1mg和GA₃ 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得启动培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例13

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，启动培养的启动培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA0.05mg、KT 0.1mg和NAA0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得启动培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例14

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，启动培养的启动培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA 0.1mg、KT 0.05mg和IBA 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得启动培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例15

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，启动培养的启动培养基的制备方法为：在MS基本培养基100mL中加入蔗糖3g、琼脂粉0.8g、6-BA 0.1mg、KT 0.05mg和GA₃ 0.05mg，用1mol/L的HCl和1mol/L的氢氧化钠将培养基的pH调到5.8，随后加热煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高温灭菌25min，即得启动培养基。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例16

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，外植体的预处理和消毒处理方法为：剪取生长健壮、无病虫害的千里香半木质化枝条，去掉叶片，将其剪成2-3cm的带腋芽茎段，置于饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理带腋芽茎段，于超净工作台下，采用质量分数为1％次氯酸钠和吐温的混合液(1％次氯酸钠50mL，吐温0.5mL)灭菌15min，然后用质量分数为0.1％HgCl₂灭菌12min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的带腋芽茎段。

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例17

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，外植体的预处理和消毒处理方法为：剪取生长健壮、无病虫害的千里香半木质化枝条，去掉叶片，将其剪成2-3cm的带腋芽茎段，置于饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理带腋芽茎段，于超净工作台下，采用质量分数为3％次氯酸钠和吐温的混合液(3％次氯酸钠50mL，吐温0.5mL)灭菌15min，然后用质量分数为0.1％HgCl₂灭菌8min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的带腋芽茎段

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例18

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，外植体的预处理和消毒处理方法为：剪取生长健壮、无病虫害的千里香半木质化枝条，去掉叶片，将其剪成2-3cm的带腋芽茎段，置于饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理带腋芽茎段，于超净工作台下，采用质量分数为3％次氯酸钠和吐温的混合液(3％次氯酸钠50mL，吐温0.5mL)灭菌15min，然后用质量分数为0.1％HgCl₂灭菌10min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的带腋芽茎段

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例19

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例1的区别仅在于，外植体的预处理和消毒处理方法为：剪取生长健壮、无病虫害的千里香半木质化枝条，去掉叶片，将其剪成2-3cm的带腋芽茎段，置于饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理带腋芽茎段，于超净工作台下，采用质量分数为3％次氯酸钠和吐温的混合液(3％次氯酸钠50mL，吐温0.5mL)灭菌15min，然后用质量分数为0.1％HgCl₂灭菌12min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的带腋芽茎段

其余实验步骤和实验条件与实施例1相同。

实施例20

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例2的区别仅在于，外植体的预处理和消毒处理为：将千里香种子用饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理种子，于超净工作台下，采用体积分数为75％的乙醇灭菌1min，再用质量分数为0.1％HgCl₂和吐温的混合液(0.1％HgCl₂ 50mL，吐温0.5mL)灭菌12min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的种子。

其余实验步骤和实验条件与实施例2相同。

实施例21

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例2的区别仅在于，外植体的预处理和消毒处理为：将千里香种子用饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理种子，于超净工作台下，采用体积分数为75％的乙醇灭菌1min，再用质量分数为0.1％HgCl₂和吐温的混合液(0.1％HgCl₂ 50mL，吐温0.5mL)灭菌10min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的种子。

其余实验步骤和实验条件与实施例2相同。

实施例22

本实施例提供的千里香的快速繁殖的方法与实施例2的区别仅在于，外植体的预处理和消毒处理为：将千里香种子用饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h，得到预处理种子，于超净工作台下，采用体积分数为75％的乙醇灭菌1min，再用质量分数为0.1％HgCl₂和吐温的混合液(0.1％HgCl₂ 50mL，吐温0.5mL)灭菌6min，最后用无菌水冲洗6次得到消毒后的种子。

其余实验步骤和实验条件与实施例2相同。

实验例

试验材料为千里香大田苗茎段。该茎段取自2015年华润三九医药股份有限公司从广西引种栽培至广州中医药大学大学城校区一号山体的千里香植株。材料的采摘方式为于天气晴朗的上午剪取生长健壮、无病虫害的千里香半木质化枝条，剪成2-3cm左右的带芽茎段。

取回的材料去掉叶片，剪成2-3cm的带腋芽茎段，将材料放置在饱和洗衣粉水中浸泡约10min，然后在流水下冲洗至少1h，在无菌条件下，采用不同的消毒方式进行消毒，消毒完后以无菌水清洗至少六次备用。接种前切除茎段两端与消毒剂接触的部分，然后再接种于无菌培养基上。

根据试验设计，以MS基本培养基，并根据需要添加不同浓度的NAA、IBA、KT、TDZ、6-BA等植物生长调节物质，琼脂粉8g/L，蔗糖30g/L，用1mol/L的HCl和NaOH将培养基pH调到5.8-6.0，煮沸，待琼脂融化后，分装到组培瓶中，在121℃下，高压灭菌25min，取出待用。

所有培养条件均为:日光灯照明，培养温度为(25±1)℃，空气相对湿度50％-60％，光照时间12h/d，光强为1500-2000Lx。

1外植体的消毒

污染是组培中被公认的三大难题之一，尤其是木本植物的组织培养，外植体的污染率一直较高，因此，采取适宜的消毒方法非常重要。

本实验以千里香的茎段为外植体采用表1的方法进行消毒。在超净工作台下，用消毒剂消毒后，用无菌水冲洗至少6次。经消毒后的茎段放到灭菌的带盖组培瓶中备用，每次接种前将外植体放入铺有无菌滤纸的培养皿中，用剪刀剪掉两端的部分，使成为1.5cm－2.0cm左右的带一个腋芽的小段，接种到MS基本培养基中。每个处理接至少20瓶，每瓶接1个茎段，定期观察记录，接种后20d统计污染率、褐化率，比较各种处理的消毒效果。

表1千里香大田苗茎段消毒方法

本实验以千里香的种子为外植体采用表2的方法进行消毒。将千里香种子用饱和洗衣粉水浸泡约10min，然后在流水下冲洗至少1h，在无菌条件超净工作台上用75％乙醇溶液处理1min,再用0.1％HgCl₂溶液(滴加吐温)消毒6min-12min,无菌水漂洗6遍,每次3min。经消毒后的种子放到灭菌的带盖组培瓶中备用，每次接种前将消毒好的种子放入铺有无菌滤纸的培养皿中，吸干材料表面的水分，用镊子和手术刀祛除种皮，然后接种到MS基本培养基中。每个处理接至少15瓶，每瓶接2颗种子，重复3次。接种后20d统计污染率及种子萌发率，比较各种处理的消毒效果及对种子萌发的影响。

表2千里香种子消毒方法

2外植体的启动培养

选用6-BA、KT、NAA、IBA、GA₃进行腋芽诱导，具体组合及浓度见表7、表8和表9，每个处理至少30瓶，每瓶1个外植体。一个月后通过观察腋芽诱导数目、颜色等，以便筛选出诱导新梢茎段启动的最佳培养基配方。

3增殖培养

千里香进行腋芽启动培养后可以得到不定芽，但是数量非常有限，需要扩大繁殖系数，才能获得大量的种苗满足生产上的需求，因而继代增殖培养是实现千里香大规模繁殖的重要步骤，根据前面启动培养得到的经验发现，添加适量的GA₃可促使侧芽生成。因此设计腋芽增殖培养基配方如表3，为以MS为基本培养基附加不同浓度的6-BA、IBA、KT、NAA、GA₃。继代增殖培养的方法为在初代培养30d后，将1.0-2.0cm腋芽切下转入增殖培养基中，诱导腋芽形成丛芽。继代培养后，定期观察芽的长势，40d后，统计芽的数量，然后计算增殖系数。

表3千里香腋芽继代增殖培养基

种子实生苗诱导丛生芽的研究中，设计种子实生苗诱导丛生苗培养基配方如表4，

表4千里香种子实生苗诱导从生芽培养基

4生根培养

当幼苗增殖到一定数量，分株较多时，可将一部分继续增殖，另一部分进行壮苗生根阶段，本实验以MS基本培养基为对照组，以1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的NAA与IBA设计实验，选择苗高尽量整齐一致的单苗进行生根壮苗培养。每个处理接种15个芽，重复三次，40d后统计各处理的生根率、平均根数和平均根长度，考察不同生长素及生长素的组合及浓度对生根的影响。

5数据统计分析

材料接种后，定期观察记录千里香的生长情况，统计污染率，褐化率、腋芽诱导率、芽增殖系数等。用Excel 2003进行数据处理和作图，SPSS 20方差分析软件进行数据分析。

染菌率(％)＝染菌的外植体数/接种的外植体数×100％

褐化率(％)＝褐化的外植体数/接种的外植体数×100％

腋芽诱导率(％)＝30d后诱导出的芽数/接种时的总茎段数×100％

芽增殖系数＝40d后形成的总芽数/接种时的总芽数

生根率(％)＝生根的芽苗数/接种的芽苗数×100％

6结果分析和讨论

外植体的消毒

茎段接种20d后，观察外植体的染菌情况，统计各消毒处理外植体的染菌率、褐化率及存活率，用SPSS 20进行方差分析，以筛选出最佳的消毒方法，方差分析结果见表5。

表5不同消毒方法对茎段消毒的影响

注：同一列中字母相同表示在0.05水平上无显著差异。

由表5的消毒结果可知，75％乙醇结合0.1％HgCl₂的消毒方法(见处理编号1-4)中，千里香大田苗茎段最后存活率均较低，当HgCl₂消毒14min，成活率最高才达到33.39％，HgCl₂消毒10min时存活率最低为19.92％。于是在HgCl₂中滴加0.1％的吐温作为表面活性剂以期降低染菌率，实验结果(见处理编号5-8)显示在升汞溶液中滴加吐温后，染菌率逐渐降低，且在8min与10min时，两种消毒方式(处理1与5，2与6)有显著性差异。但是该种消毒方式其成活率依然还是很低，当升汞消毒时间为14min时，其存活率最高才达55％。因此乙醇结合HgCl₂的消毒剂组合对千里香茎段的消毒效果并不理想。于是将75％乙醇换成不同浓度的次氯酸钠结合0.1％HgCl₂进行外植体茎段的消毒，实验结果(处理编号9-20)显示次氯酸钠与升汞合用消毒效果比乙醇合用升汞好，其存活率较高，存活率最高可达68.33％。

由表5实验结果可以看出，存活率最高的为处理10(1％NaClO₃(滴加吐温)15min+0.1％HgC1₂ 12min)、处理11(1％NaClO₃(滴加吐温)15min+0.1％HgC1₂ 12min)，茎段存活率可高达68.33％，其次为3％NaClO₃(吐温)15min+0.1％HgCl₂ 10、8、12min茎段存活率均高达60％以上，且方差分析结果显示处理10、11、18、19、20之间并无显著性差异，因此选择存活率最高、次氯酸钠使用浓度低、褐化率低的10号处理。

综上所述，千里香大田苗茎段的最佳消毒方法为1％NaClO₃(滴加吐温)15min+0.1％HgCl₂10min。

种子接种20d统计污染率及种子萌发率，统计各消毒处理种子的染菌率及存活率，用SPSS 20进行方差分析，以筛选出最佳的消毒方法,方差分析结果见表6。

表6不同消毒方法对种子消毒的影响

由表6的结果可知，千里香种子的消毒方式为75％乙醇1min+HgCl₂ 8min(滴加吐温)时种子萌发率最高，染菌率也仅为12.3％。而种子消毒前去掉外种皮之后再以消毒剂消毒，结果发现种子胚容易受消毒剂影响从而使种子萌发时间较长，萌发率很低(约20％)。

带腋芽茎段为外植体的启动培养

千里香的启动培养分别以6-BA、KT进行单个激素诱导或者与NAA、IBA结合使用诱导腋芽启动，共设计17种培养基配方，17种配方的外植体腋芽诱导情况及诱导率进行分析，其结果见表7。

表7不同激素种类及浓度对腋芽诱导的影响1

由表7可知，单独使用细胞分裂素(处理1～11)对千里香的腋芽诱导效果较差，最高诱导率仅为58.33％。单独使用6-BA进行腋芽的诱导的配方中(处理1～5)，发现随着6-BA浓度的升高，腋芽的诱导率有逐渐升高，但是腋芽的长势差，叶柄处可发现产生愈伤组织而导致叶片掉落(见图1，配方1～5)，这与Tallon et al.在阿雷檬的快速繁殖研究结果相似；单独使用KT发现(处理6～9)，腋芽诱导率先随着KT浓度的升高而升高，当KT为2mg/L时诱导率最高达58.33％，当KT浓度再升高时，诱导率反而逐渐降低，另外发现单独使用KT时，芽的状态不会像6-BA一样出现叶片掉落的情况(见图1，配方6～9)；当单独使用GA₃时(处理10～11)，芽的长势较单独使用6-BA及KT要好(见图1，配方10～11)，但是诱导率之间差距不大。因此，单独使用6-BA、KT、GA₃对大田苗茎段的腋芽诱导并不合适。由处理12-17的实验结果可知，细胞分裂素与生长素结合使用对腋芽的诱导率作用不一，当6-BA与NAA及6-BA与IBA结合使用时，发现腋芽诱导率明显提高，这显然与Tallon et al.的研究是不一样的，Tallon et al.的研究表明单独添加6-BA对腋芽的效果较6-BA与其他激素合用的效果好。而当KT与NAA结合使用时，其腋芽诱导率反而降低，因此KT与NAA合用不适合诱导千里香腋芽萌发。6-BA与NAA及6-BA与IBA合用时，虽然腋芽诱导率有提高，但是芽的状态不理想(见图1，配方12～17)，推测可能二者比值不适合，需再进一步进行实验设计。

于是再设计以不同浓度的6-BA和NAA、不同浓度的6-BA和IBA进行试验设计，对24种培养基的外植体腋芽诱导情况及启动率进行分析，其结果见表8。

表8不同激素种类及浓度对茎段启动培养的影响2

由表8的实验结果可知，当细胞分裂素(6-BA)与生长素(NAA)的浓度比值在1-30范围内其腋芽的启动率都均能达50％以上，处理14腋芽诱导率最高可达88％。因此通过上表确认细胞分裂素与生长素结合适宜对大田苗茎段的腋芽进行诱导腋芽。另外通过腋芽状态发现，当细胞分裂素/生长素比值大于4小于10时，腋芽长势较差，且有落叶情况出现(见图2，配方1、配方8、配方11、配方13、配方16、配方20、配方23、配方24)；当细胞分裂素/生长素比值大于10时腋芽情况非常差，落叶情况十分明显，且玻璃化现象明显(见图2，配方4、配方7、配方10、配方19、配方22)；而当细胞分裂素/生长素比值在1-4时，腋芽生长情况良好，叶片较少出现脱落情况，叶片偏绿(见图2，配方2、配方3、配方5、配方9、配方15、配方21)。

随后又在前24个配方的基础上进行修改配方，如将细胞分裂素由单一的6-BA换成6-BA结合KT，设计配方见表9。

表9不同激素种类及浓度对茎段启动培养的影响3

由表9的实验结果可知，三种激素组合使用腋芽诱导情况表现均较好，大约一周腋芽开始萌动，其中MS+6-BA 1.0mg/L+KT 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L配方诱导效果最好，诱导率可达95.83％，一个月后可以长到约平均2cm长度(见图3，配方1)；后将NAA换成GA₃，即MS+6-BA 0.5mg/L+KT 1.0mg/L+GA₃ 0.5mg/L，其诱导结果表现也较好，一周腋芽即开始萌动，腋芽启动率比不上NAA，但腋芽有分枝(见图3，配方4、配方5)。因此MS+6-BA 1.0mg/L+KT1.0mg/L+NAA 0.5mg/L进行千里香的腋芽诱导为合适的培养基配方。

因此，由表7的结果可知，细胞分裂素结合生长素使用对千里香腋芽的诱导效果优于单一细胞分裂素的使用；由表8表9可知，两种细胞分裂素结合生长素使用比一种细胞分裂素结合生长素使用对腋芽的诱导效果更好，两种细胞分裂素结合使用的诱导培养基配方中，1个月左右千里香茎段的腋芽可生长至2cm,其腋芽的启动率可达80％以上。另外发现KT浓度升高，其腋芽启动率降低。另外发现添加GA₃的培养基腋芽分枝较多，可以为下一步的丛生芽诱导提供参考。

千里香带腋芽茎段增殖培养

当腋芽诱导出来后，为扩大增殖系数，需要进一步诱导腋芽增殖形成丛生芽，其增殖结果见表10。

表10不同激素种类及浓度对丛生芽诱导的影响

注：同一列中字母相同表示在0.05水平上无显著差异。

由表10可知，5个芽增殖配方中，配方4其6-BA：KT：NAA＝1：1：1的增殖效果最好，平均芽数达到5.61个(见图4)。配方1、3、4均为0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT的基础上附加0.5mg/L的IBA、GA₃、NAA，但结果发现在腋芽的启动培养中具有促进侧芽萌发的激素GA₃在腋芽诱导丛生芽的作用中并不明显，配方3与配方4的平均芽数虽然在统计学上没有显著性差异，但含有GA₃的培养基芽的诱导数较NAA少。

因此，经过40d的增殖培养，最佳增殖培养基配方为MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA0.5mg/L，不同培养基配方对丛芽的增殖影响差异不大。

种子无菌实生苗诱导从生芽的增殖结果见表11。

表11不同激素种类及浓度对无菌苗茎段诱导的影响

注：同一列中字母相同表示在0.05水平上无显著差异。

无根苗的生根培养

千里香丛生芽诱导出来后需进行生根诱导才能形成完整的无菌苗，因此生根培养是组织培养中非常关键的环节。千里香的壮苗生根培养采用不同浓度的IBA(0、0.5、1.0、1.5mg/L)与NAA(0、0.5、1.0、1.5mg/L)进行设计实验，生根情况见图5，实验结果见表12。

表12不同激素配比及浓度对试管苗生根的影响

注：同一列中字母相同表示在0.05水平上无显著差异。

由表12的实验结果可以看出，丛生芽在配方8(1/2MS+IBA1.5mg/L+NAA0.5mg/L)的培养基中生根率最高，生根率为52.00％，平均根长为2.34cm，平均根数为4.58条。

为了进一步探讨IBA及NAA对丛生芽生根的影响，于是对两种激素进行方差分析，结果如表13。

表13无菌苗生根试验的方差分析结果

由表13可知，IBA与NAA对无菌苗的生根诱导中生根率、生根数及根长均具有显著的影响。

为了进一步验证单一外源生长素对生根影响，于是将数据整理成表14。

表14单一外源激素对生根的影响

注：同一列中字母相同表示在0.05水平上无显著差异

由表14可以看出，在以IBA为单一浓度诱导生根时，1.5mg/L IBA诱导生根率最高为51.00％，根条数为，根长5.38cm；且发现随着IBA浓度的升高，生根率也逐渐升高，但IBA1.0mg/L与1.5mg/L其生根率、根长、生根数均无显著性差异。在以NAA为单一浓度时，生根最佳的处理是NAA浓度为0.5mg/L，生根率最高为30.67％，根条数为1.47，根长1.79cm，当NAA浓度再升高时，生根率、根长逐渐降低；当NAA浓度为0时，生根率、根长、根数均与NAA0.5mg/L时无显著性差异。

因此使用单一生长素诱导千里香无菌苗生根中，当IBA浓度为1.0mg/L时，生根率已经达到稳定值。而IBA的浓度对根长及根数则没有显著的影响；NAA单一使用对千里香无菌苗生根诱导并未有明显的作用，反而随着NAA浓度的升高，基部出现大量愈伤组织，生根率降低。

而表12的研究发现，当IBA与NAA合用时，生根诱导率则出现明显的变化，因此两种激素的合用是会对丛生芽的生根有重要影响的，于是进一步进行IBA与NAA的组合生长素对千里香生根的结果分析。

由表12可以看出，生根效果最好的是处理8，该配方为1/2MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L，生根率最高达52.00％，平均根条数4.58条，平均根长2.34cm(见图5，配方8)。生根率较其次的是处理4，其培养基配方为1/2MS+6-BA1.5mg/L，生根率为51％，平均根条数1.28条，平均根长5.38cm。处理4与处理8的区别在于，处理8为在处理4的基础上附加0.5mg/L的NAA，而结果则出现显著性差异，其差异在于处理8相对于处理4其生根率升高，生根数目增多，而根长减少，由此可以看出，在含有IBA的培养基中添加0.5mg/LNAA可以提高丛生芽的生根率，增加根的数目，但是会抑制根的伸长。当固定IBA的浓度为1.5mg/L时，逐渐增加NAA的浓度(见处理8、12、16)，其生根率出现显著性变化，其变化规律为先下降，当NAA浓度也为1.5mg/L时，其生根率出现升高的趋势；生根数与根长度是呈现下降趋势的，但1.0mg/LNAA与1.5mg/LNAA无显著性差异。由此可以推测，在千里香丛生芽的生根诱导中，在含有IBA的生根培养基中添加低浓度的NAA可以促进丛生芽的生根率，增加生根数目，但是会出现抑制根的伸长生长；当添加NAA浓度较高时，则会抑制生根，生根率、根的数目及长度均会受到抑制。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种千里香的快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)外植体的预处理和消毒处理：以千里香的种子、带顶芽的茎段或带腋芽的茎段为外植体，先进行预处理，再进行消毒处理，得到消毒处理后的外植体；

(2)外植体的启动培养：将所述消毒处理后的外植体接种到启动培养基中进行培养，得带有新梢的外植体；

(3)增殖培养：将所述带有新梢的外植体接种到增殖培养基中进行培养，得到无根苗；

(4)生根培养：将所述无根苗接种到生根培养基中进行培养，得到种苗，所述生根培养基为：在1/2MS培养基加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0～1.5mg/L IBA和0～1.5mg/LNAA，pH5.8-6.0。

2.根据权利要求1所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，所述生根培养基为：在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0～1.5mg/L IBA和0～0.5mg/L NAA，pH5.8-6.0。

3.根据权利要求2所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，所述生根培养基为：在1/2MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、1.0～1.5mg/L IBA和0～0.5mg/L NAA，pH5.8-6.0。

4.根据权利要求1-3任一项所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，所述增殖培养基为：在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5～2.0mg/L的6-BA，pH5.8-6.0。

5.根据权利要求4所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，所述增殖培养基还包括以下成分中的至少一种：0.5mg/L的KT、0.5mg/L的IBA、0.5～1.0mg/L的GA₃、0.5mg/L的NAA。

6.根据权利要求1-5任一项所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，所述启动培养基为：在MS培养基中加入8g/L的琼脂粉、30g/L的蔗糖、0.5～1.0mg/L的6-BA和0.5～2.0mg/L的KT，pH5.8-6.0。

7.根据权利要求6所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，所述启动培养基还包括以下成分中的一种：0.5mg/L的NAA、0.5mg/L的IBA、0.5～1.0mg/L的GA₃。

8.根据权利要求1-7任一项所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，

以带顶芽的茎段或带腋芽的茎段为外植体，预处理方法为：剪取生长健壮、无病虫害的千里香半木质化枝条，去掉叶片，将其剪成2-3cm的带腋芽茎段，置于饱和洗衣粉水中浸泡10min，流水冲洗1h；消毒方法为：先用体积浓度为75％的乙醇水溶液消毒30s，再用滴加吐温的质量分数为0.1％的HgCl₂溶液消毒8-14min；或者先用滴加吐温的质量分数为1.0-3.0％的NaClO₃水溶液消毒15min，再用质量分数为0.1％的HgCl₂溶液消毒8-12min。

9.根据权利要求1-7任一项所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，以千里香的种子为外植体，预处理方法为：用饱和洗衣粉水浸泡约10min，然后在流水下冲洗至少1h；消毒方法为：先用体积浓度为75％的乙醇水溶液消毒1min，再用滴加吐温的质量分数为0.1％的HgCl₂溶液消毒6-12min。

10.根据权利要求1-9任一项所述的千里香的快速繁殖方法，其特征在于，

所述外植体的启动培养的培养条件为：温度为24-26℃，湿度为50％-60％，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；

所述增殖培养的培养条件为：温度为24-26℃，湿度为50％-60％，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx；

所述生根培养的培养条件为：温度为24-26℃，湿度为50％-60％，光照时间为12h/d，光照强度为1500-2000Lx。