CN1063491C - 改进的制备头孢菌素的方法 - Google Patents

改进的制备头孢菌素的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1063491C
CN1063491C CN93104639A CN93104639A CN1063491C CN 1063491 C CN1063491 C CN 1063491C CN 93104639 A CN93104639 A CN 93104639A CN 93104639 A CN93104639 A CN 93104639A CN 1063491 C CN1063491 C CN 1063491C
Authority
CN
China
Prior art keywords
group
methyl ester
amino
glycine methyl
phenyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN93104639A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1077749A (zh
Inventor
J·P·加德纳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eli Lilly and Co
Original Assignee
Eli Lilly and Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eli Lilly and Co filed Critical Eli Lilly and Co
Publication of CN1077749A publication Critical patent/CN1077749A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1063491C publication Critical patent/CN1063491C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
    • C12P35/06—Cephalosporin C; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P35/00—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin
    • C12P35/04—Preparation of compounds having a 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring system, e.g. cephalosporin by acylation of the substituent in the 7 position
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/01—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in linear amides (3.5.1)
    • C12Y305/01011—Penicillin amidase (3.5.1.11), i.e. penicillin-amidohydrolase

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Materials By The Use Of Ultrasonic Waves (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及一种改进的制备头孢菌素的方法，该方法利用诸如7-氨基-头孢菌烷酸、7-氨基-3-去乙酸基-头孢菌烷酸等化合物或它们的衍生物与α-氨基酸的衍生物在适当的固定化青霉素酰基转移酶存在下反应，反应时采用以下的单独一个或组合的条件：(1)在0℃至+20℃的温度下；或(2)在环境pH下；同时采用α-氨基酸与头孢菌烷酸核的高摩尔比。

Description

改进的制备头孢菌素的方法
本发明涉及一种具有工业优越性的改进的酶催方法，用相应的7-氨基头孢菌素核与α-氨基酸缩合制备头孢菌素。
在美国专利3，816，253中叙述了一种通过氨基酸衍生物和7-氨基头孢菌素核反应制备头孢菌素的酶催方法。在该专利的大多数实施例中，是将产生酶的微生物本身加到反应混合物中作为酶源。还举例说明了一种粗制的无细胞制剂和一种已经过两步层析的制剂。该专利提到反应进行的温度范围为5℃-50℃，以20℃-40℃最为合适。但是，在除了一个以外的所有实施例中，反应都是在37℃进行的。在唯一的一个例外中，反应是在25℃进行的，报导的产率为63％。
当在以上专利所列举的温度下操作时，由于竟争性反应形成了污染的副产物(主要是氨基酸衍生物的水解产物)，会使所要产物的产率降低。这些副产物不总是容易与反应混合物分离开来。但是，不管副产物多么容易分离，它们的存在增高了生产成本。
过去在采用酶催方法时，每次合成反应都消耗掉大量的酶。因此，酶的成本是此方法成本的相当大的一部分。
由于进行酶催方法的现行成本，它不象常规的有机化学方法那样具有工业吸引力。但是，酶催方法有许多胜过有机化学方法的优点，如果降低了酶催方法的成本，这在工业上将会更加重要。例如，酶催反应方法只需要一步反应，而有机化学方法需要几步反应。另外，有机化学反应费时间，需要诸如吡啶之类的大量溶剂，而且产生不需要的副产物。
基于以上考虑，工艺上需要一种能达到与先前的酶催方法同样高或者更高产率的酶催方法。
现已发现，利用在合适的反应介质/溶剂中在+20℃至0℃的温度范围内于固定化青霉素酰基转移酶存在下进行缩合反应(如下所述)，可以将所要的头孢菌素抗生索产物的产率增加到高于先有技术所公开的水平。
本发明方法的另一方面涉及进行缩合反应时令pH值保持为下面定义的环境值。
本发明方法的又一方面涉及采用α-氨基酸与头孢菌素核的高摩尔比进行缩合。
本发明的方法可以用来制备式(Ⅰ)的头孢菌素：
Figure 9310463900051
其中R是一个可任选取代的五元或六元烃环，或者R是一个含有1到4个杂原子(N、O或S)的五元杂环，该杂环可以任选地被取代；R1是氢、卤素、甲基、甲氧基或与一个有机基团键合的亚甲基，该亚甲基可以任选地通过桥氧、硫或氨原子与基团键合；R2是氢或一个羧基保护基。
这一方法包括使式(Ⅱ)的α-取代的α-氨基酸的反应活性衍生物(通过取代羧基部分的羟基形成衍生物)与式(Ⅱ)的7-氨基头孢菌素底物化合物反应：
Figure 9310463900061
式中的R、R1和R2是先前所述的基团，反应在青霉素酰基转移酶存在下进行，该酶最好是固定化的，反应的条件可独立地选择成：在0℃至+20℃的温度范围内，最好是从0℃至5℃；或者在环境pH下；或者在α-氨基酸与头孢菌素底物高摩尔比条件下进行。
现有技术中头孢菌素的酶催生产的特点是生成污染性副产物和在生产过程中酶的损失。在本发明的第一个实施方案中，由于采用在固定化酶存在和从约0℃到约20℃的温度下式(Ⅲ)的α-取代α-氨基酸与式(Ⅱ)的7-氨基头孢菌素底物之间进行缩合反应，减少了在制造这些抗生素化合物期间生成的污染物的数量。
在低温下，酶的活性一般降低，经常是显著降低。为解决这一问题，本发明通常使用较大数量的酶。利用这一方法，在很低的温度下、例如在0℃至5℃下，达到了良好的产物产率。
在实施这种生物催化的缩合方法中，一段时间之后达到最大产物浓度，这段时间随酶的数量、底物、温度和本领域普通技术人员会知道的其它变量而变。此后，产物的浓度在与为达到最大产物浓度所需时间大致成正比的一段时间内保持恒定。例如，如果在约2小时内达到最大产物浓度，则乎坦浓度区持续约1小时。随后产物浓度经常减小。在实施本发明时，最好是青霉素酰基转移酶的用量使稳定的产物浓度(或平坦浓度)持续约1小时，以便有足够的时间从反应器中取出产物。但是，在实施本发明时适用的平坦时间在约10分钟到约120分钟之间，最好是在约30分钟到约80分钟之间。
在本发明的另一实施方案中，令pH值保持为环境值，或者换句话说，不用诸如缓冲溶液之类的方法保持pH值恒定。环境pH条件是指pH值在反应期间可以不受干扰地漂移或变化。通常，pH值设定在约7-7.5，在反应期间可以下降到pH6-7。虽然不想作理论探讨，但是据信在环境pH值下，与最终产物的形成速度相比，D-苯基甘氨酸甲酯和最终产物的水解被减弱了。
一般来说，在本发明的所有实施方案中，酶的用量为每克7-氨基头孢菌素底物(Ⅱ)用50-3000国际单位的酶。当然，本领域的普通技术人员会认识到，在本发明方法中酶的合适用量将随底物的本质和数量、反应的规模、采用的温度和所用装置的类型而变。
关于以上的化学式，R可以是五元或六元脂族或芳族烃环(例如，苯基、环己二烯基、环己烯基或环己基)，任选地用一个或几个基团取代，这些基团包括但不限于羟基、卤素、烷基、烷氧基、羧基、硝基、氨基等；它也可以是一个含一个或几个杂原子(最好不多于四个)的五元杂环，杂原子选自O、N和S或是它们的组合(例如噻吩基、呋喃基等)，该杂环可以被一个或多个基团取代(最好不多于3个)，这些基团包括但不限于羟基、卤素、烷基、烷氧基、羧基、硝基、氨基等。特别优选的是产物化合物(Ⅰ)和相应的式(Ⅲ)化合物，其中R是一个未取代的苯基、对羟基苯基或1，4-环己二烯-1-基。
当R是一个杂环基团时，预期可以方便地采用4-噻唑基、呋喃基和噻吩基等基团。
R1本身又可以是氢原子、卤原子(Br、Cl、I、F)、甲氧基、甲基或与有机基团相键合的亚甲基，这些有机基团的实例有C1-C6烷氧基、C1-C6烷氧-羰基或是一个含有1到4个杂原子的五元或六元杂环，杂原子选自O、S和N或它们的组合，该亚甲基可任选地通过O、S或N等桥原子与有机基团键合，杂环基团也可以任选地带有一个或几个取代基，包括但不限于：羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羰基、羧基、氰基、氨基、硝基等。特别优选的R1是甲基、甲氧基、氯和乙酰氧基亚甲基。对于R1，优选的杂环基团(亚甲基和杂环可以藉以与内酰胺环体系连接的杂原子除外)是1H-1，2，3-三唑-4-基，1H-四唑-5-基和2-噻唑基基团。
可以用于本发明的α-取代的α-氨基酸活性衍生物是在羧基部分上的衍生物，其中羧基部分的羟基已用一个有机基团取代，它可以水解，通过暴露在要在缩合中使用的青霉素酰基转移酶之中而再生成羧酸。虽然不想作理论探讨，但是相信此实验确定了那些能与酶反应形成活性的酰基-酶中间体、接着与式(Ⅱ)的7-氨基头孢菌素核反应和形成酰胺键的衍生物。
可用的式(Ⅲ)α-氨基酸的活性衍生物的实例是烷基酯(例如甲酯、乙酯)、芳基烷基酯(例如苄基酯)、酰胺和二肽(即，与第二个氨基酸形成的酰胺)。D-苯基甘氨酸、D-对羟基苯基甘氨酸和D-1，4-环己二烯-1-基-甘氨酸的甲酯是优选的实施例。羧基保护基(R2)的其它实例可以在以下文献中找到：美国专利号4，892，942，
         E.Haslam，Protective Groups in OrganicChemistry，J.G.W.Mcomie，EdPlenum Press，N.Y.，N.Y.，1973，Chapter 5，和T.W.Greene，Protective Groups inOrganic Synthesis，John Wiley ＆ Sons，N.Y.，N.Y.，1981，Chapter 5，这些文献在本文中引用作为参考。
在式(Ⅱ)化合物之中，以下的酸特别重要：7-氨基-头孢菌烷酸、7-氨基-3-去乙酸基头孢菌烷酸和7-氨基-3-氯-头孢菌烷酸。
在本发明方法中使用的青霉素酰基转移酶可以由任何已知的微生物源衍生得到。其中包括黄单胞菌属、假单胞菌属、气单胞菌属、大肠埃希氏菌属、节孢子杆菌属、棒状杆菌属和杆菌属的微生物。
最好是使用由大肠埃希氏菌ATCC 9637衍生的青霉素酰基转移酶。
本发明的方法最好在固定化酶的存在下进行。固定化可以通过许多众所周知的固定化技术中的任何一种来完成，例如：吸收，与聚合物基质的离子键合或共价键合，交联，捕集在凝胶或纤维中，微包囊化或截留在膜反应器中的微过滤膜之后(即，膜分配)。最好是使用渗入到三乙酸纤维素纤维结构之中的酶或是与聚丙烯酰胺树脂共价键合的酶。
固定化的青霉素酰基转移酶，或是纤维捕集的或是与聚合物基质共价键合的，都可以从Recordati，S.P.A.，Biochemical UnitDe.Bi.(Cassi na de，Pecchi Italy)购得。
式(Ⅱ)化合物用约0.5％至约2％(wt/v)的浓度、最好是用1.4％至1.5％的浓度进行反应。在本发明的另一项实施方案中，式(Ⅲ)的活性衍生物以相对于式(Ⅱ)化合物数量的高摩尔比(在大约3至5之间)进行反应。
反应可以在从约0℃至约+20℃的温度范围内进行，但是温度以从0℃至2℃为宜。
一种优选的溶剂系统是仅用水。但是，可以在水溶液体系中使用合适的有机溶剂，包括乙二醇、低级醇(例如，甲醇、乙醇、异丙醇、2-丁醇)、丙酮等。
根据本发明的方法的反应进程中，反应的程度和产物质量可以用高效液体色普(HPLC)和其它已知方法监测。
在一种最优选的方法中，控制两个方便的变量，温度和比例，以达到最大产率，pH则保持环境值。
以下实施例更好地解释了本发明的特点和适用性，但是不限制本发明的范围。
为了说明本发明，使用7-氨基-3-氯-头孢菌烷酸(“7-ACCA”)作为头孢菌素底物。7-ACCA可以按R.R.Chauvette等在J.Med.Chem.18：403(1975)中所述制备。D-苯基甘氨酸甲酯(“PGME”)和D-对羟基苯基甘氨酸甲酯(“HPGME”)可以用标准的酯化步骤，例如用甲醇在HCl存在下处理，从市售的氨基酸(例如Sigma公司产品)制得。此法和其它经典的氨基酸衍生法在C.A.Buehler和D.E.Pearson的“Survey ofOrganic Synthesis”(wiley-Interscience，New York，1970)第1卷801-830页和第2卷(1977)711-726页中有说明。
                     实施例1
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
Figure 9310463900111
(1)将7-ACCA(1)(0.9388克，4.0007毫摩尔)和96.0毫升H2O合并到烧杯中。该pH为4.12。向烧杯中加入3M的氨水(1.78毫升)。该pH为7.57。向烧杯中加入D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2)(4.7594克，23.602毫摩尔)。该pH为5.68。将混合物冷却到5℃，加入3M的氨水(1.90毫升)将pH提高到7.00。加入酶(6.1442克，940国际单位/克核)。通过高效液体色车，得到以下反应速度数据：时间(分)    pH     温度(℃)    化合物1保留％   化合物2保留％   化合物3保留％
0      7.00       6             100            100              -
85     6.28       5             9.2            67.1            91.4
120    6.16       4             9.1            64.3            91.5
180    5.97      4.5            8.9            63.7            91.8
200    5.91      4.5            8.8            65.3            93.0
在时间=200分钟时，将该混合物过滤(除掉固定化酶)，标题产物的原位产率为93％。
                    实施例2
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
(1)将7-ACCA(1.0072克，4.000毫摩尔)和纯化水(550毫升)合并到烧杯中。该pH为3.39。向混合物中加入3M的氨水(4.10毫升)。该pH为6.73。向混合物中加入D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(4.8307克，24.000毫摩尔)。该pH为6.5。用水(13.77毫升)将该混合物稀释到75.09毫升。向此混合物中加入湿酶(3.0672克，-470国际单位/克核)。(在实验期间，每30分钟将该pH调节到6.5)。通过高压液体色谱得到以下数据：时间(分)        pH     温度(℃)    化合物1保留％  化合物2保留％    产物形成％
0          6.48       6           95.9           100              -
30         6.34       5.5         53.0           87.0            32.5
60         6.39       5.5         36.0           82.3            48.9
90         6.41       5           24.2           79.6            59.7
120        6.41       5.5         17.6           73.2            66.3
210        6.38       3.5         9.0            69.5            78.5
240        6.37       5           8.0            67.8            80.8
270        6.38       4.5         6.9            66.3            82.3
300        6.42       4.5         6.8            61.7            80.8
330        6.42       4.0         6.2            61.0            80.1
350        6.42       5           7.1            47.7            88.2
在350分钟之后，将该混合物过滤，标题产物的原位产率为88.2％。
                   实施例3-17
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
对于实施例3-17，采用以下的通用步骤：(1)将7-ACCA(1.0072克，4.00毫摩尔)与水合并。用3M氨水调节该混合物的pH值，得到溶液。加入以下表中所示指定数量的D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐。将该混合物冷却到5℃。然后加入-定数量的3M的氨水，使pH达到以下表中所示的数值。用水将该混合物稀释到下表中指定的浓度。然后加入湿酶(3.07克，500国际单位/克核)。除起始pH为6.5外，不对pH进行调节，其中反应pH保持在6.2-6.5之间。
反应条件：
a)1.0当量D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐
b)3.5当量D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐
c)6.0当量D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐
d)浓度0.5
e)浓度1.25
f)浓度2.0
g)起始pH6.5(在加酶时)
h)起始pH7.2 5(在加酶时)
i)起始pH8.0(在加酶时)
实施例    反应条件    时间(分)    产物产率
3         C，F，H      150        86.9
4         C，D，H      150        80.6
5         A，F，H      275        46.6
6         A，D，H      180        28.9
7         C，E，I      60         83.4
8         C，E，G      330        84.7
9         A，E，I      45         34.3
10        A，E，G      540        42.8
11        B，F，I      60         79.8
12        B，F，G      360        78.9
13        B，D，I      60         56.2
14        B，D，G      630        70.8
15        B，E，H      180        80.4
16        B，E，H      190        81.0
17        B，E，H      180        80.8
                  实施例18
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
(1)将7-ACCA(4.8338G，20毫摩尔)与水(150毫升)合并。pH是3.67。向混合物中加入3M浓度的氨水(8.40毫升)。该pH为8.20。向混合物中加入D-苯基甘氨酸甲酯(23.0克，114毫摩尔)。该pH为5.29 。该混合物经过助滤器过滤，用100毫升水稀释。溶液的体积为310毫升。加入5毫升水，将溶液冷却到1℃。pH为5.80。用浓度3 M的氨水(16.6毫升)将pH调节到7.28。体积为332毫升。加入水洗酶(15.34克)。以下是通过高效液体色谱得到的分析结果：时间(分)   pH       温度    化合物1保留％  /化合物2保留％      产物形成％
                 (℃)
0      7.28      2         96.0           94.5             -
90     6.94      1         8.1            61.5             87.7
120    6.83      1         6.6            56.0             84.8
145    6.76      1         7.1            58.5             89.8
                  实施例19
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氧-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内酯
(1)将7-ACCA(0.494克，2.000毫摩尔)和42.0毫升0.0033M K2HPO4 pH6.5缓冲液置于烧杯中。pH为5.91。向此溶液中加入45％K3PO4(0.92毫升)以便溶解。该pH为7.24。加入D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2.3797克，11.801毫摩尔)(2)。该pH为6.40。加入45％的K3PO4(1.10毫升)，以使pH约为7.0。加入酶(2.6120克，800国际单位/克核)。在T=43分钟时，用1.34毫升的45％K3PO4将pH调节到7.00。标题产物的最大产率为66.1％。时间(分)   pH      温度    化合物1保留％       化合物2保留％     产物形成％
               (℃)
0     6.95    0.25         93.6                95.1             0.0
5     6.72    26.5         32.0                66.8             54.8
10    6.62    27.5         20.6                55.7             64.0
15    6.50    28           17.6                48.8             66.1
20    6.36    28.5         16.6                42.8             64.5
25    6.27    28.5         16.6                40.3             64.5
30    6.18    29           17.0                37.9             64.1
35    6.10    29           17.0                36.6             64.8
40    6.03    29.5         17.3                34.2             61.6
45    6.95    29.5          -                  30.6             59.9
50    6.84    29.5         24.5                22.8             53.7
55    6.75    30           27.3                17.9             49.1
60    6.68    60           29.1                14.3             45.2
                        实施例20
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
重复实施例19的实验，但是改用2.2707克的干酶(2660国际单位/克核)。反应期间不调节pH。最大产率为67.5％。 时间(分)  pH     温度       化合物1保留％   化合物2保留％      产物％
              (℃)
0     7.00    23.5            99.6          99.4            -
5     6.95    24              62.7          80.8            275
10    6.88    25              40.2          74.1            49.0
15    6.85    25              30.1          68.6            58.5
20    6.78    25.5            22.2          63.7            63.7
25    6.71    26              18.0          58.5            66.1
30    6.65    26.5            16.8          55.6            67.5
35    6.59    27              15.5          51.7            66.8
40    6.54    27              15.5          49.8            66.5
45    6.49    27              16.7          46.3            65.5
50    6.44    27.5            16.2          44.8            64.8
55    6.38    27.5            16.2          42.8            63.5
60    6.34    28              16.2          41.4            63.2
180   5.75    27              17.4          32.7            50.8
                      实施例21
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
重复实施例19的实验，但有以下变化：
化合物1用量：0.4698克，2.002毫摩尔
化合物2用量：2.381克，11.8074毫摩尔
0.033M K2HPO4/pH 6.5缓冲液用量：44.0毫升
45％K3PO4用量：0.95毫升/1.06毫升
湿酶用量：8.1686克，2660国际单位/克核
在T=52分钟时用1.37   毫升45％K3PO4将pH调节到
7.00。
最大产率为65.6％。 时间(分)  pH     (温度)   化合物1保留％，     化合物2保留％       产物形成％
               (℃)
0     7.00    23.5        95.7                 95.6             -
5     6.72    24          19.9                 51.9             61.9
10    6.45    25          17.1                 40.9             65.6
15    6.26    25          17.8                 36.2             65.6
20    6.11    25.5        18.1                 32.4             63.5
25    5.99    26          18.7                 31.3             62.2
30    5.88    26          19.5                 30.4             62.7
35    5.81    26.5        19.7                 29.6             61.9
40    5.73    26.5        20.0                 28.9             61.1
45    5.66    27          20.1                 28.3             59.5
50    5.61    27          20.6                 28.5             60.4
55    6.90    27          29.6                 17.6             49.2
282   6.16    28          74.1                  -                0.9
                          实施例22
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
将7-ACCA(0.470克，2.0058毫摩尔)(1)和48.0毫升的0.033M K2HPO4(pH6.5缓冲液)置于烧杯中。pH为5.73。将烧杯置与20℃的浴中。加入45％K3PO4(1.06毫升)以便溶解。该pH为7.21。将D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2.3811克，11.8099毫摩尔)(2)加到溶液中。该pH为6.60。加入45％K3PO4(0.71毫升)，使pH为7.00。加入湿酶(3.0727克)。产物的最大原位产率为74.6％。 时间(分)  pH     温度    化合物1保留％      化合物2保留％     产物％
              (℃)
0     7.00    20.5       100                 100           -
5     6.89    20.5       43.4                76.1         48.7
10    6.78    20.5       25.4                62.0         62.1
15    6.68    21         21.8                59.5         71.0
20    6.60    21         20.1                56.0         74.0
25    6.52    21         18.9                52.2         73.5
30    6.45    21         18.6                49.1         72.0
35    6.40    20.5       19.1                47.8         74.6
40    6.35    20.5       19.0                46.9         73.4
45    6.31    21         18.7                44.2         71.2
50    6.27    20.5       19.3                46.0         72.9
55    6.22    21         19.5                44.5         72.5
60    6.19    21         19.8                43.7         72.4
实施例23
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
将7-ACCA(0.4710克，2.0071毫摩尔)(1)和48.0毫升的0.033M K2HPO4(pH6.5)加到烧杯中。pH为6.02。加入45％K3PO4(0.98毫升)以便溶解。该pH为7.34。向溶液中加入D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2)(2.3801克，11.803毫摩尔)。该pH为6.58。将该烧杯置于20℃的浴中。加入45％K3PO4(0.63毫升)将溶液的pH值调节到7.00。加入湿酶(3.0738克)。标题产物的最大产率为70.1％。
〔表注：对于从5分钟到50分钟的时间，在5分钟时间之前1分钟加入小份量的45％K3PO4，使溶液的pH突变至7.00左右)时间(分)   pH     (温度)     化合物1保留％    化合物2保留％    产物％
                (℃)
0      6.99    19.5           99.3           98.7          -
5      7.01    20             52.2           80.6          36.3
10     7.02    20             33.9           69.4          57.7
15     7.00    20             24.4           60.4          63.1
20     7.00    20             20.6           55.1          67.1
25     7.00    20             20.1           51.9          69.6
30     7.00    20             19.7           47.4          70.1
35     7.00    20             20.3           43.5          68.7
40     7.03    20             21.3           39.9          67.9
45     7.00    20             22.2           36.7          66.2
50     7.01    20             23.8           33.5          65.7
140    6.58    20             37.2           14.4          50.2
240    6.41    20             38.0           11.1          44.1
                           实施例24
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
将7-ACCA(0.4696克，2.0012毫摩尔)(1)和48.0毫升的水置于烧杯中。pH为3.5。将该溶液冷却到10℃。加入3M的氨水(2.47毫升)。该pH为7.10。加入D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2.3835克，11.8198毫摩尔)。该pH为5.65。加入3M的NH3(4.30毫升)。该pH为7.00。加入湿酶(3.0778克，1000国际单位/克核)。〔在T=256分钟时，用2.60毫升3M的NH3将该pH值调节到7.00〕。最大产率为71.1％。 时间(分)  pH     温度    化合物1保留％    化合物2保留％    产物形成％
              (℃)
0     6.98    10          97.0            96.7            -
5     6.89    10          55.9            81.8            33.6
10    6.80    10          36.3            76.0            52.0
15    6.73    10          27.3            71.0            58.3
20    6.65    10          22.3            69.5            61.8
25    6.56    10          19.3            69.3            68.3
30    6.50    10          17.3            67.9            70．5
35    6.44    10          15.7            65.4            71.1
40    6.37    10          14.2            62.5            62.5
45    6.31    10          14.1            64.0            64.0
50    6.27    10          13.6            65.7            65.7
55    6.22    10          13.0            63.4            63.4
75    6.07    10          12.1            62.8            62.8
236   5.50    10          10.9            61.4            61.4
257   7.00    10          10.9            59.5            59.5
276   6.64    10          11.5            51.1            51.1
313   6.25    10          11.1            45.6            45.6
                    实施例25
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
将7-ACCA(0.4694克，2.0003毫摩尔)(1)和48.0毫升水置于烧杯中。pH为3.25。将该溶液冷却到10℃。加入3M的氨水(3.05毫升)。该pH为7.08。加入D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2)(2.3809克，11.8069毫摩尔)。该pH为5.40。加入3M的氨水(7.24毫升)。使pH为7.00。加入湿酶(8.1840克，2870国际单位/克核)。〔在T=37分钟时，加入3M氨水(1.72毫升)将该pH调节到6.52。在T=298分钟时，加入3M氨水(1.72毫升)将该pH调节到6.55〕。最大产率为71.2％。 时间(分)  pH    (温度)    化合物1保留％  化合物2保留％   产物形成％
              (℃)
0     7.00    10           98.6           97.0           -
5     6.75    10           22.3           58.7           59.9
10    6.46    10           14.1           49.0           71.2
15    6.20    10           12.5           43.6           68.3
20    5.98    10           11.8           42.3           69.1
25    5.80    10           12.4           41.1           69.1
30    5.70    10           12.6           41.8           69.7
35    5.58    10           12.4           40.6           68.9
40    6.52    10           13.0           38.6           70.1
45    6.14    10           13.6           33.7           66.9
50    5.96    10           13.9           33.3           67.4
55    5.80    10           14.7           33.2           68.0
60    5.69    10           14.8           32.5           67.6
121   5.11    10           15.1           31.0           67.8
300   6.55    10           16.9           28.9           66.1
                              实施例26
7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氧-3-头孢菌烷-4-羧酸酯，内盐
将7-ACCA(1)(0.4698克，2.0002毫摩尔)和48.0毫升水置于烧杯中。pH为3.46。加入3M的氨水(3.50毫升)。该pH为7.23。加入D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2)(2.3798克，11.8015毫升)。该pH为5.48。将此混合物冷却到5℃。加入3M氨水(4.33毫升)。将该pH调节至7.00。加入湿酶(3.0710克，1000国际单位/克核)。〔在T=295分钟时加入2.87毫升3M氨水使pH为7.00〕。最大产率为79.5％。时间(分)  pH    温度    化合物1保留％      化合物2保留％    产物形成％
            (℃)
 0      7.03    5       95.3               94.8           -
 5      6.82    5       34.6               74.3           55.2
 30     6.63    6       19.8               67.4           67.8
 45     6.49    5       15.3               64.0           69.9
 80     6.20    5       12.0               62.3           73.6
 105    6.06    5.5     11.4               62.0           74.6
 120    6.04    4.5     10.9               61.0           73.8
 150    5.92    5       10.8               60.6           75.9
 180    5.81    6       10.7               61.7           77.0
 215    5.73    5.5     10.2               59.9           74.3
 240    5.69    5.5     10.4               62.1           75.9
 270    5.63    6       10.4               62.2           76.3
 300    6.96    6       10.3               58.9           76.4
 330    6.61    5.5     10.5               52.8           79.5

Claims (7)

1．一种制备化学式(Ⅰ)的头孢菌素的方法：式中R是被一个或多个选自氢、羟基、卤素、烷基、烷氧基、羧基、硝基和氨基的取代基取代的五元或六元烃环，或R是一个含有杂原子的五元杂环，杂原子选自氮、氧和硫，该杂环被一个或多个选自氢、羟基、卤素、烷基、烷氧基、羧基、硝基和氨基的取代基取代；
R1是一个氢原子、卤原子、甲氧基、甲基或是直接或通过氧、硫或氮原子与一个有机基团键合的亚甲基，该有机基团为烷氧基、烷氧羰基或是一个五元或六元杂环基，杂环基团中含有选自O、S和N的1到4个杂原子，该杂环被一个或多个选自氢、羟基、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羰基、羧基、氰基、氨基和硝基的取代基所取代；
R2是氢或羧基保护基团；
所述的方法包括使式(Ⅲ)的α-取代α-氨基酸的烷基酯、芳烷基酯、酰胺或二肽衍生物与式(Ⅱ)的头孢菌素底物在固定化青霉素酰基转移酶存在下反应，并且反应的pH值在5至8的范围内不受干扰地漂移或变化，
Figure 9310463900031
2．根据权利要求1的方法，其中R是苯基，R1是氯。
3．根据权利要求1的方法，其中式(Ⅲ)的α-取代α-氨基酸的反应活性衍生物选自D-苯基甘氨酸甲酯，D-对羟基苯基甘氨酸甲酯和D-1，4-环己二烯-1-基-甘氨酸甲酯，或是它们的可接受的盐。
4．按照权利要求1的方法，其中所述反应在0℃～+20℃的范围内进行。
5．根据权利要求4的方法，其中R是苯基，R1是氯。
6．根据权利要求4的方法，其中式(Ⅲ)的α-取代α-氨基酸的反应活性衍生物选自D-苯基甘氨酸甲酯，D-对羟基苯基甘氨酸甲酯和D-1，4-环己二烯-1-基-甘氨酸甲酯，以及它们的可接受的盐。
7．根据权利要求4的方法，其中的反应温度范围是从0℃到5℃。
CN93104639A 1992-04-24 1993-04-23 改进的制备头孢菌素的方法 Expired - Fee Related CN1063491C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US87425792A 1992-04-24 1992-04-24
US874,257 1992-04-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1077749A CN1077749A (zh) 1993-10-27
CN1063491C true CN1063491C (zh) 2001-03-21

Family

ID=25363336

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN93104639A Expired - Fee Related CN1063491C (zh) 1992-04-24 1993-04-23 改进的制备头孢菌素的方法

Country Status (22)

Country Link
US (1) US5801011A (zh)
EP (1) EP0567323B1 (zh)
JP (1) JPH069649A (zh)
KR (1) KR930021643A (zh)
CN (1) CN1063491C (zh)
AT (1) ATE183778T1 (zh)
AU (1) AU664078B2 (zh)
BR (1) BR9301627A (zh)
CA (1) CA2094686A1 (zh)
CZ (1) CZ69593A3 (zh)
DE (1) DE69326095T2 (zh)
DK (1) DK0567323T3 (zh)
ES (1) ES2135446T3 (zh)
FI (1) FI931815A (zh)
GR (1) GR3031739T3 (zh)
HU (1) HUT64352A (zh)
IL (1) IL105494A (zh)
MX (1) MX9302354A (zh)
NO (1) NO931483L (zh)
NZ (1) NZ247464A (zh)
YU (1) YU27893A (zh)
ZA (1) ZA932809B (zh)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998056945A1 (en) * 1997-06-10 1998-12-17 Dsm N.V. PROCESS FOR ENZYMATICALLY PREPARING A β-LACTAM ANTIBIOTIC AND THIS ANTIBIOTIC
CZ200782A3 (cs) 2007-01-31 2009-05-27 Mikrobiologický ústav AV CR, v.v.i. Sekvence nukleotidu o velikosti 2646 bp, kódující penicilinacylázu, nové konstrukty rekombinantní nukleové kyseliny a rekombinantní mikroorganismy nesoucí tuto sekvenci
CN101429538B (zh) * 2008-12-12 2011-05-25 河北九派制药有限公司 7-α-甲氧基-3-去乙酰基头孢噻吩苄星盐的制备方法
CN103805671B (zh) * 2013-11-11 2015-08-26 华北制药河北华民药业有限责任公司 一种制备头孢氨苄的方法
CN105002253B (zh) * 2015-07-09 2019-02-15 山东罗欣药业集团恒欣药业有限公司 一种新型头孢类抗感染药物的酶促合成工艺
US20170101660A1 (en) 2015-10-07 2017-04-13 Gwangju Institute Of Science And Technology Enzyme-immobilized porous membrane and preparation method of antibiotics using the same

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3816253A (en) * 1971-04-02 1974-06-11 Takeda Chemical Industries Ltd Method for the production of cephalosporins
CH640240A5 (en) * 1979-02-09 1983-12-30 I B S A Inst Biochimique Sa Preparation of penicillins and cephalosporins from precursors obtained by hydrolysis of natural penicillins/cephalosporins, using enzymatic complexes immobilised on solid carriers
US4892942A (en) * 1985-12-30 1990-01-09 Eli Lilly And Company 1-carbacephalosporin antibiotics
EP0473008A2 (en) * 1990-08-28 1992-03-04 RECORDATI S.A. CHEMICAL and PHARMACEUTICAL COMPANY Improved process for preparing penicillins and cephalosporins
CN1085252A (zh) * 1992-02-27 1994-04-13 藤泽药品工业株式会社 一种新的头孢菌素c酰基转移酶

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL39158A (en) * 1971-04-28 1977-08-31 Snam Progetti Enzymatic scission and synthesis of penicillins and cephalosporins
IT1045797B (it) * 1973-12-20 1980-06-10 Snam Progetti Procedimento per la sintesi enzimatica di penicilline e cefalosporine semisintetiche mediante una acilasi insolubile
US4113566A (en) * 1976-11-26 1978-09-12 Pfizer Inc. Process for preparing 6-aminopenicillanic acid
AU8208691A (en) * 1990-07-04 1992-02-04 Novo Nordisk A/S Process for preparation of beta -lactams
JPH07502168A (ja) * 1991-12-19 1995-03-09 ジスト―ブロカデス　ベスローテン　フェンノートシャップ 或る種のβ−ラクタム抗生物質の改善された製造方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3816253A (en) * 1971-04-02 1974-06-11 Takeda Chemical Industries Ltd Method for the production of cephalosporins
CH640240A5 (en) * 1979-02-09 1983-12-30 I B S A Inst Biochimique Sa Preparation of penicillins and cephalosporins from precursors obtained by hydrolysis of natural penicillins/cephalosporins, using enzymatic complexes immobilised on solid carriers
US4892942A (en) * 1985-12-30 1990-01-09 Eli Lilly And Company 1-carbacephalosporin antibiotics
EP0473008A2 (en) * 1990-08-28 1992-03-04 RECORDATI S.A. CHEMICAL and PHARMACEUTICAL COMPANY Improved process for preparing penicillins and cephalosporins
CN1085252A (zh) * 1992-02-27 1994-04-13 藤泽药品工业株式会社 一种新的头孢菌素c酰基转移酶

Also Published As

Publication number Publication date
CA2094686A1 (en) 1993-10-25
NO931483D0 (no) 1993-04-22
NO931483L (no) 1993-10-25
EP0567323A2 (en) 1993-10-27
IL105494A (en) 2000-08-13
MX9302354A (es) 1994-05-31
ATE183778T1 (de) 1999-09-15
EP0567323A3 (zh) 1994-04-27
CZ69593A3 (en) 1993-12-15
DK0567323T3 (da) 1999-12-13
EP0567323B1 (en) 1999-08-25
CN1077749A (zh) 1993-10-27
AU664078B2 (en) 1995-11-02
US5801011A (en) 1998-09-01
GR3031739T3 (en) 2000-02-29
FI931815A (fi) 1993-10-25
IL105494A0 (en) 1993-08-18
HUT64352A (en) 1993-12-28
ZA932809B (en) 1994-10-21
DE69326095T2 (de) 2000-01-20
DE69326095D1 (de) 1999-09-30
AU3712593A (en) 1993-10-28
NZ247464A (en) 1994-12-22
KR930021643A (ko) 1993-11-22
HU9301188D0 (en) 1993-07-28
JPH069649A (ja) 1994-01-18
BR9301627A (pt) 1993-10-26
YU27893A (sh) 1996-07-24
FI931815A0 (fi) 1993-04-22
ES2135446T3 (es) 1999-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1159444C (zh) 突变的青霉素g酰基转移酶基因
CN1229500C (zh) 碱性纤维素酶及其产生方法
CN1100144A (zh) 可用作制备紫杉烷的中间体用化合物的对映体混合物离析用酶促方法
CN1104634A (zh) 具有氨磺酰基和脒基的化合物，其制备方法以及含有这些化合物的药物组合物
CN1015473B (zh) 生物学生产酰胺的方法
CN1498273A (zh) 取代乙酰苯的立体选择还原
CN1063491C (zh) 改进的制备头孢菌素的方法
CN1756734A (zh) 谷氨酸衍生物和焦谷氨酸衍生物的制造方法和新型的制造用中间体
CN1286984C (zh) 用于制备含有机硅基团的光敏引发剂的酶促方法
CN1025676C (zh) 非肽的血管紧张肽原酶抑制剂的制备
CN1019494B (zh) 头孢烯衍生物的制备方法
CN1077599C (zh) 4－甲硫基丁腈的酶水解
CN101031652A (zh) 4－氨基－4－去氧分支酸盐/酯(adc)和[3r,4r]－4－氨基－3－羟基环己－1,5－二烯－1－羧酸（3,4－cha）的生物合成生产
CN1267560C (zh) 立体异构羧酸酯的制备方法
CN1708583A (zh) 用于制备d－氨基酸的突变株
CN1387566A (zh) 环状缩肽合成酶及其基因、以及环状缩肽的大规模生产系统
CN100343234C (zh) 用于检测氨肽酶的活性和/或从革兰氏阴性菌中区分革兰氏阳性菌的酶底物,含有该酶底物的培养基及其应用
CN1213400A (zh) N－保护d－脯氨酸衍生物的制备方法
CN1163472C (zh) 用于制备手性氨基酸的新方法
CN1108251A (zh) 聚氨基三嗪类化合物的制备方法
CN101040053A (zh) 光学活性(S或R)－β－氨基酸和光学活性(R或S)－β－氨基酸酯的制造方法、以及β－氨基酸2－烷氧基乙酯和光学活性(S或R)－β－氨基酸2－烷氧基乙酯
CN1222905A (zh) 新的合成的儿茶酚衍生物、其制备方法及其用途
CN1807421A (zh) 高光学活性手性苯酞类化合物和合成方法
CN1484631A (zh) 对映体纯的羟基酯和酸的制备
CN1297558C (zh) 新的4－氧代－4,6,7,8－四氢－吡咯并[1,2－a]吡嗪－6－甲酰胺化合物,其制备方法和包含它们的药物组合物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C19 Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee