CN106344918A - 口服病毒疫苗运送载体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种口服病毒疫苗运送载体极其制备方法。根据本发明，可以使口服病毒疫苗在低pH环境下不经破损的条件下有效地传达到肠内。

Description

口服病毒疫苗运送载体
技术领域
本发明涉及一种口服疫苗运送载体及其制备方法。
背景技术
病毒感染引起的疾病是作为病原体的病毒感染宿主生物而引起的疾病。病毒感染部位及种类可引发多种症状，因肠道内的感染引发的最常见的症状是腹泻、腹膜炎等。
具有代表性的例子有如猪流行性腹泻(PED; porcine epidemic diarrhea)最初在比利时和英国有报道过，之后又在养猪业发达的国家（欧洲、包括日本、中国、韩国等的亚洲）出现，使国家遭受较大的经济损失。引起猪流行性腹泻的PEDV(猪流行性腹泻病毒)主要在小肠绒毛细胞上进行增殖，使绒毛上皮细胞发生变性或坏死，并伴有绒毛的萎缩及脱落，从而导致吸收障碍，最终引发持续性水泻（watery diarrhea）。无论猪的年龄是多少，均会引发肠炎并伴有严重的腹泻和脱水现象，甚至猪仔的致死率达到80%-90%。
在国内，猪流行性腹泻是从1992年PED病毒被分离出来之后持续肆虐了2年，由于在临床上无法与TGEV(猪传染性胃肠炎病毒) 进行辨别而导致巨大的经济损失。最近，比起PED的单独发生，往往与TGE一起混合感染的情况增加，且不分季节或主要在冬季频发。发病率和致死率均高的猪流行性腹泻的预防最为重要，如今可商购的用于在肠内中和户外病毒的口服PEDV疫苗。
然而，口服病毒疫苗在给药时不会伴有痛苦与压力，因此具有容易接种、便于供应及流通等优点。然而，作为口服病毒疫苗，需要将它稳定地运送到肠内，但在胃中由于胃酸所致的低PH环境下，它会变得不稳定，从而阻碍疫苗的效果。
因此，人们需要研发一种新技术，使口服病毒疫苗在低PH环境下不经破坏有效地运送到肠道内。
【现有技术文献】
【专利文献】
(专利文献1)韩国专利申请号1998-0011874。
发明内容
技术问题
本发明在于提供一种口服病毒疫苗运送载体及其制备方法，该运送载体可以在低pH环境下使病毒疫苗不经破坏并稳定地运送到肠道内。
技术方案
本发明提供一种口服病毒疫苗运送载体，该运送载体包含：口服病毒疫苗粒子；所述病毒疫苗粒子上形成的阳离子型高分子层；及所述阳离子型高分子层上形成的pH敏感性高分子层。
此外，本发明提供一种口服病毒疫苗运送载体，该运送载体包含：口服病毒疫苗粒子；所述病毒疫苗粒子上形成的pH敏感性高分子层；及所述pH敏感性高分子层上形成的阳离子型高分子层。
此外，本发明提供口服病毒疫苗运送载体的制备方法，该方法包括：通过混合口服病毒疫苗粒子与阳离子型高分子来在口服病毒疫苗粒子上形成阳离子型高分子层的步骤；和通过使形成有所述阳离子型高分子层的口服病毒疫苗粒子与pH敏感性高分子进行混合来在所述阳离子型高分子层上形成pH敏感性高分子层的步骤。
此外，本发明提供口服病毒疫苗运送载体的制备方法，该方法包括：通过混合口服病毒疫苗粒子与pH敏感性高分子来在口服病毒疫苗粒子上形成pH敏感性高分子层的步骤；和通过使形成有所述pH敏感性高分子层的口服病毒疫苗粒子与阳离子型高分子进行混合来在所述pH敏感性高分子层上形成阳离子型高分子层的步骤。
此外，本发明提供用于预防病毒感染的方法，该方法包括：口服给药所述病毒疫苗运送载体。
有益效果
根据本发明，将口服病毒疫苗在所述低pH环境下不经破坏并有效地传送至肠道内。
附图说明
图1展示了根据本发明的一个实施例的口服病毒疫苗运送载体的结构的模拟图。
图2展示了确认根据本发明的一个实施例的口服病毒疫苗运送载体的pH变化的结果。
图3展示了根据本发明的一个实施例的口服病毒疫苗运送载体的pH变化的稳定性变化的结果。
具体实施方式
对用于预防肠内增殖病毒的感染的口服病毒疫苗而言，为了将病毒疫苗运送到肠道，首先要通过胃。与肠道不同，胃具有1-3之间的低pH值，因此有必要保持在低pH条件下的病毒疫苗的稳定性。然而，那些可商购的口服病毒疫苗在低pH下并不稳定，从而难以使疫苗有效地运送到肠内，进而疫苗的病毒预防效果不够有效。
因此，本发明人为了解决口服病毒疫苗的运送问题，经过反复研究验证了以下内容并完成了本发明，通过利用阳离子型高分子及pH敏感性高分子，使口服病毒疫苗粒子在低pH条件下不受破坏并稳定地运送到肠内。
因此，本发明提供包含形成有阳离子型高分子层和pH敏感性高分子层的口服病毒疫苗粒子的口服病毒疫苗运送载体。图1展示了根据本发明的一个实施例的口服病毒疫苗运送载体的结构模拟图。在本发明中，可以将阳离子型高分子层和pH敏感性高分子层不分顺序形成在口服病毒疫苗粒子上。
在本发明中，“…上形成”，不仅有将这些组成要素通过直接接触进行叠层之意，还有在这些组成要素之间包含其他要素而形成之意。例如，“…上形成”，不仅包括在第一组成要素的表面上直接接触第二组成要素之意，还包括在第一组成要素与第二组成要素之间可进一步形成第三组成要素之意。
在一个实施例中，本发明提供一种口服病毒疫苗运送载体，该运送载体包含：口服病毒疫苗粒子；所述病毒疫苗粒子上形成的阳离子型高分子层；及所述阳离子型高分子层上形成的pH敏感性高分子层。
在另一个实施例中，本发明提供一种口服病毒疫苗运送载体，该运送载体包含：口服病毒疫苗粒子；所述病毒疫苗粒子上形成的pH敏感性高分子层；及所述pH敏感性高分子层上形成的阳离子型高分子层。
所述疫苗粒子是指在被病原体感染之前人为注射到人体内并起激活免疫系统的活性成分，例如，可以为衰减性或未被激活的病原体、蛋白质或片段，但不限于此。所述疫苗粒子可根据种类优选固体形态，此外还包括水溶液形态。
在一个具体实施例中，口服病毒疫苗粒子的平均粒径可以为0.1-10um，但不限于此。然而，所述口服病毒疫苗粒子的形状可不限于完整的球形，还可包括类似于球形的形状、部分直径更长的长形椭圆形状或类似于四边形的形状。
所述疫苗粒子的表面可带有包括中性电荷、负电荷和正电荷的电荷。无论粒子所带的电荷为何种，在所述粒子上形成的高分子层可通过改变叠层顺序来包含在疫苗运送载体内。此外，在一个优选实施例中，当所述疫苗粒子带负电荷时，本发明的疫苗运送载体可包含在所述粒子上形成的阳离子型高分子层及在该阳离子型高分子层上形成的pH敏感性高分子层。此外，当所述疫苗粒子带正电荷时，本发明的疫苗运送载体可包含在所述粒子上形成的pH敏感性高分子层和在该pH敏感性高分子层上形成的阳离子型高分子层。此外，当所述疫苗粒子不带任何电荷或中性电荷时，疫苗运送载体可包含在该粒子上不分顺序形成的pH高分子层和阳离子型高分子层。该实施例仅用来展示更容易形成高分子层的一个实施例，本发明并不仅限于此。
本发明的口服病毒疫苗粒子的使用可不受限制，只要是针对用于引起肠内感染的病毒的疫苗即可。例如，根据本发明的一个实施例的口服病毒疫苗可以为针对阿尔法冠状病毒、轮状病毒（Rotavirus）、札如病毒(Sapovirus)、猫肠道冠状病毒（Feline entriccorona virus）、细小病毒（Parvovirus）和杯状病毒（Calicivirus）属（genus）中的任一种病毒的疫苗。更具体地，例如有用于预防选自流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎（TGE）病毒、轮状病毒、肠道杯状病毒、泛白细胞减少症（panleukopenia）病毒、传染性腹膜炎病毒、细小病毒和诺如病毒（Norovirus）中的病毒感染的病毒疫苗。
所述疫苗的受体可以为包含人在内的哺乳动物，具体例子包括猪、猫、狗和人。
更具体地，所述疫苗可以为用于预防选自猪流行性腹泻（PED）病毒、猪传染性胃肠炎（TGE）病毒、轮状病毒、猪肠道杯状病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫传染性腹膜炎病毒、犬细小病毒和诺如病毒中的病毒感染所致的疾病的病毒疫苗。
在一个实施例中，本发明的口服猪流行性腹泻病毒疫苗的使用不受限制，只要是用于预防和治疗猪流行性腹泻病毒的口服疫苗即可。例如，口服猪流行性腹泻病毒疫苗可从绿十字兽医药品中购得。可商购的口服猪流行性腹泻病毒疫苗在pH7-8的范围内最为稳定，而在低于pH5或高于pH11的环境下病毒将迅速死亡而受到破坏。最终，难以有效地运送到肠道。然而，当在所述口服猪流行性腹泻病毒疫苗粒子上涂有pH高分子层和阳离子型高分子层时，即使在低于pH5或pH1-3的低pH范围内，也不会使病毒粒子死亡或受到破坏(参见实施例)。
由于口服猪流行性腹泻病毒疫苗带有弱的负电荷，在所述病毒疫苗粒子上可以更好地形成由阳离子型高分子组成的涂层。通过形成阳离子型高分子层，帮助在低pH环境下保持病毒疫苗粒子的稳定性。此外，阳离子型高分子层会被肠内的如胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶等进行分解，从而将病毒疫苗有效地运送到肠内。
在一个具体实施例中，阳离子型高分子可优选为阳离子型聚氨基酸。所述阳离子型高分子包括聚赖氨酸、聚组氨酸和聚精氨酸，但不限于此。所述阳离子型高分子层可包括一种或以上的阳离子型高分子或可由一种或以上的阳离子型高分子组成。
在一个具体实施例中，阳离子型高分子可由以下化学式1表示。
【化学式1】
(聚合-M)k
在上述化学式中，M表示赖氨酸、组氨酸或精氨酸，k表示2-50。
在一个具体实施例中，阳离子型高分子层的厚度可以为1nm-1um、5nm-500nm、10nm-300nm、10nm-200nm、10nm-100nm、10nm-90nm、10nm-70nm、10nm-50nm、10nm-30nm或10nm-20nm。在上述范围内，能使病毒疫苗粒子的稳定性在pH1-3的范围内得到有效维持，既不引起免疫反应，也将病毒疫苗以未受破坏的状态有效地运送至作为目的地的肠道内。此外，在阳离子型高分子层上形成pH敏感性高分子层时，如阳离子型高分子层的厚度在上述范围内时，能够良好地形成pH敏感性高分子层。
在本发明中，pH敏感性高分子层在pH1-3的范围内可保持其结构，而在pH7-9的范围内发生离子化。例如，根据本发明的一个实施例的pH敏感性高分子的pKa值为4.66，pKb值为7.0。当pKb范围小于所述pKa值时，由于高分子层内的氢键保持不变，高分子层的结构也能稳定不变，而当pKa范围高于所述pKb值时，由于高分子发生离子化而生成阴离子，结果会诱导静电排斥现象，使高分子发生分解，最终排放病毒疫苗粒子。因此，通过形成pH敏感性高分子层，可以防止病毒疫苗粒子在低pH范围内出现死亡和/或受损，同时保持疫苗粒子的稳定性，且在肠内的pH条件下排放出病毒疫苗。
在一个具体实施例中，pH敏感性高分子层的特征在于，在pH7-9的范围内发生离子化。
在一个具体实施例中，pH敏感性高分子层可以包含丙烯酸酯类高分子，或者由丙烯酸酯类高分子组成，但不限于此。
丙烯酸酯类高分子可选自聚（甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯）、聚（甲基丙烯酸-共-甲基丙烯酸甲酯）和聚（丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸）中的一种或多种物质，但不限于此。可商购的丙烯酸酯类高分子可使用EUDRAGIT®的L 30 D-55、L 100-55、L 100、L12,5、S 100、S 12,5、FS 30 D。所述丙烯酸酯类高分子的重均摩尔质量可以为100000-400000g/mol、100000-350000g/mol、120000-330000g/mol。
在一个具体实施例中，pH敏感性高分子层的厚度可以为1nm-1um、5nm-500nm、10nm-300nm、10nm-200nm、10nm-100nm、10nm-90nm、10nm-70nm、10nm-50nm、10nm-30nm或10nm-20nm。当厚度在上述范围内时，在pH1-3的范围内可以有效地保持病毒疫苗粒子的稳定性，在pH5-9的范围内病毒疫苗粒子可以得到有效排放。此外，当pH敏感性高分子层的厚度在上述范围内时，不会引起免疫反应，同时将病毒疫苗粒子有效地运送至目的地。此外，当阳离子型高分子层和pH敏感性高分子层的厚度同时满足上述范围时，可以使效果进一步最大化。
此外，本发明提供口服病毒疫苗运送载体的制备方法，该方法包括：通过混合口服病毒疫苗粒子与阳离子型高分子来在口服病毒疫苗粒子上形成阳离子型高分子层的步骤；和通过使形成有所述阳离子型高分子层的口服病毒疫苗粒子与pH敏感性高分子进行混合来在所述阳离子型高分子层上形成pH敏感性高分子层的步骤。
如上所述，阳离子型高分子层与pH敏感性高分子层的叠层顺序不受限制。因此，本发明还提供口服病毒疫苗运送载体的制备方法，该方法包括：通过混合口服病毒疫苗粒子与pH敏感性高分子来在口服病毒疫苗粒子上形成pH敏感性高分子层的步骤；和通过使形成有所述pH敏感性高分子层的口服病毒疫苗粒子与阳离子型高分子进行混合来在所述pH敏感性高分子层上形成阳离子型高分子层的步骤。
在本发明中，口服病毒疫苗粒子的使用不受限制，只要是针对肠内病毒的疫苗即可。例如，本发明的一个实施例的口服病毒疫苗可以为针对阿尔法冠状病毒、轮状病毒、札如病毒、猫肠道冠状病毒、细小病毒和杯状病毒（Calicivirus）属（genus）中的任一种病毒的疫苗。
病毒疫苗粒子和病毒可参见上述描述。
在一个具体实施例中，口服病毒疫苗粒子的平均粒径可以为0.1-10um，但不限于此。然而，所述口服病毒疫苗粒子的形状不限于完整的球形，还可包括类似于球形的形状、部分直径更长的长形椭圆形状或类似于四边形的形状。
在一个具体实施例中，可以在低于7的pH值或在5-6的pH值范围内形成pH敏感性高分子层。本发明的pH敏感性高分子层，由于在pH7-9的范围内发生离子化，在如上所述的既不损害病毒疫苗粒子的稳定性又能顺利形成pH敏感性高分子层的pH值下，形成pH敏感性高分子层。此外，在上述pH值范围下，除了形成pH敏感性高分子层，还进行阳离子型高分子层的形成和口服病毒疫苗运送载体的制备等全过程。
在一个具体实施例中，pH敏感性高分子层还可以包含丙烯酸酯类高分子，或者由丙烯酸酯类高分子组成，但不限于此。
丙烯酸酯类高分子可选自聚（甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯）、聚（甲基丙烯酸-共-甲基丙烯酸甲酯）和聚（丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸）中的一种或多种物质，但不限于此。可商购的丙烯酸酯类高分子可使用EUDRAGIT®的L 30 D-55、L 100-55、L 100、L12,5、S 100、S 12,5、FS 30 D。所述丙烯酸酯类高分子的重均摩尔质量可以为100000-400000g/mol、100000-350000g/mol、120000-330000g/mol。
在一个具体实施例中，基于100重量份的口服病毒疫苗粒子，可以混合0.5-20重量份、1-15重量份或5-10重量份的pH敏感性高分子。在上述重量份的范围内，可以形成具有适当厚度的pH敏感性高分子层。
在一个具体实施例中，阳离子型高分子可选自聚赖氨酸、聚组氨酸和聚精氨酸中的一种或多种物质，但不限于此。
在一个具体实施例中，阳离子型高分子可由以下化学式1表示。
【化学式1】
(聚合-M)k
在上述化学式中，M表示赖氨酸、组氨酸或精氨酸，k表示2-50。
在一个具体实施例中，基于100重量份的口服病毒疫苗粒子，可以混合0.5-20重量份、1-15重量份或5-10重量份的阳离子型高分子。在上述重量份的范围内，可以形成具有适当厚度的阳离子型高分子层。
此外，本发明提供用于预防病毒感染的方法，该方法包括：口服给药本发明的病毒疫苗运送载体。
在本发明中，口服病毒疫苗粒子的使用不受限制，只要是针对肠内病毒的疫苗即可，具体内容可见上述描述。
所述口服给药通常可通过疫苗或医药制剂的口服给药方法来进行，具体的给药次数、给药量、给药途径可根据给药对象的年龄、体重、性别及其他特征所决定。例如，所述给药可与其他食品或饲料等一同混合进行，因此可将有效剂量分一次或多次进行给药。
所述病毒感染是指病毒进入受体体内并感染细胞等的现象，根据包含在疫苗运送载体内的疫苗粒子的种类，引起感染的病毒可以不同，具体通过提高针对肠内病毒的疫苗的运送效率来获得更优秀的预防效果。
下面，通过实施例具体说明本发明。以下实施例仅用于说明本发明，并不用来限制本发明的范围。
实施例
【对比实施例1】口服病毒疫苗运送载体的制备：病毒疫苗粒子-阳离子型高分子层
在1ml的DMEM培养基内溶解30mg阳离子型高分子聚赖氨酸。将1ml的所述混合液以小量滴入到进行600rpm搅拌中的5ml口服病毒疫苗（PEDV，绿十字兽医药品）水溶液（pH5-6）中。然后，在600rpm下搅拌1小时，从而合成涂有阳离子型高分子的口服病毒疫苗的载体。
【对比实施例2】口服病毒疫苗运送载体的制备：病毒疫苗粒子-pH敏感性高分子层
在由1ml乙醇和1ml的DMEM培养基组成的共溶剂内溶解20mg的pH敏感性高分子（Eudragit S100）。将50ul的所述混合液以小量滴入到进行600rpm搅拌中的5ml口服病毒疫苗（PEDV，绿十字兽医药品）水溶液中。然后，在600rpm下搅拌1小时，去除乙醇后，从而合成涂有pH敏感性高分子的口服病毒疫苗的载体。
【制备实施例1】口服病毒疫苗运送载体的制备：病毒疫苗粒子-阳离子型高分子层-pH敏感性高分子层
在由1ml乙醇和1ml的DMEM培养基组成的共溶剂内溶解20mg的pH敏感性高分子（Eudragit S100）。将50ul的所述混合液以小量滴入到进行600rpm搅拌中的5ml对比实施例1的运送载体溶液中。然后，在600rpm下搅拌1小时，去除乙醇后，制备由病毒疫苗粒子-阳离子型高分子层-pH敏感性高分子层组成的口服病毒疫苗运送载体。图1展示了本发明的口服病毒疫苗运送载体的制备过程。
【制备实施例2】口服病毒疫苗运送载体的制备：病毒疫苗粒子- pH敏感性高分子层-阳离子型高分子层
在1ml的DMEM培养基内溶解30mg阳离子型高分子聚赖氨酸。将1ml的所述混合液以小量滴入到进行600rpm搅拌中的5ml对比实施例2的运送载体溶液中。然后，在600rpm下搅拌1小时，从而制备由病毒疫苗粒子-pH敏感性高分子层-阳离子型高分子层组成的口服病毒疫苗运送载体。
【实验实施例1】口服病毒疫苗运送载体的稳定性的鉴定
为了鉴定本发明的口服病毒疫苗运送载体根据pH值的中间变化，通过利用猪流行性腹泻病毒快速试剂盒（PEDV Rapid kit），测定稳定性。
将未形成涂层的pH7-8的口服PEDV疫苗、未形成涂层的pH5-6的口服PEDV疫苗及仅涂有pH敏感性高分子的PEDV疫苗运送载体（对比实施例2）用作对照组，将制备实施例1（先形成阳离子型高分子层的疫苗运送载体）和制备实施例2（先形成pH敏感性高分子层的疫苗运送载体）用作实验组，然后利用快速试剂盒，针对三组对照组及两组实验组进行口服病毒疫苗运送载体的稳定性的鉴定。
实验条件为，为了鉴定根据pH值的中间变化，将pH值先降至胃内环境下的pH1-2，而后提高至肠内环境下的pH7.6-8.5，然后利用快速试剂盒鉴定稳定性。
在鉴定稳定性之前，首先通过利用pH指示剂酚红来确认pH的变化。将各组中的运送载体处理至含有酚红的DMEM培养基内，先将pH值降至1（胃内pH值），然后提高至8（肠内pH值），而后确认颜色变化。其结果可见，如图2所示，通过酚红（低于pH6.8时显示黄色，pH6.8-8时显示红色（紫红色））的颜色变化，可确认各组的运送载体的环境变成胃内的pH环境和肠内的pH环境。
在图3中展示了快速试剂盒的实验结果。图3中的对照组（Control）显示，当利用快速试剂盒处理阳性对照组时应当出现线条。测试（TEST）线作为确认PEDV存在与否的线条，当出现线条时可确认PEDV的存在。
在图3中，1号为未形成涂层的纯口服PEDV疫苗（pH8.77）的结果，2号为未形成涂层的口服PEDV疫苗（pH5.8），2号(低->高）展示了将2号的pH值先降至1后提高至8之后的结果。
3号中的第一次为将阳离子型高分子聚赖氨酸（pLys）涂在2号的PEDV疫苗上时的结果，3号中的第二次为将pH敏感性高分子进一步涂在3号的第一次上时的结果，3号(低->高）展示了将3号中第二次的pH值先降到1后提高至8之后的结果。
4号中的第一次为将pH敏感性高分子涂在2号的PEDV疫苗上时的结果，4号中的第二次为将阳离子型高分子聚赖氨酸（pLys）进一步涂在4号中的第一次上时的结果，4号(低->高）展示了将4号中的第二次的pH值先降到1后提高至8之后的结果。
5号中的第一次为将pH敏感性高分子涂在2号的PEDV疫苗上时的结果，5号(低->高）展示了将5号中的第一次的pH值先降到1后提高至8之后的结果。
结果可见，当同时形成阳离子型高分子层和pH敏感性高分子层时，不分涂层的顺序（3号和4号的低->高），即使在低pH条件下也能确认病毒疫苗粒子的稳定性。与此相反，未形成涂层或仅形成pH敏感性高分子层时，可确认稳定性的降低。

Claims (14)

1.口服病毒疫苗运送载体，其包含：口服病毒疫苗粒子；所述病毒疫苗粒子上形成的阳离子型高分子层；及所述阳离子型高分子层上形成的pH敏感性高分子层。
2.口服病毒疫苗运送载体，其包含：口服病毒疫苗粒子；所述病毒疫苗粒子上形成的pH敏感性高分子层；及所述pH敏感性高分子层上形成的阳离子型高分子层。
3.根据权利要求1或2所述的口服病毒疫苗运送载体，其特征在于，所述口服病毒疫苗粒子的平均粒径为0.1-10um。
4.根据权利要求1或2所述的口服病毒疫苗运送载体，其特征在于，所述口服病毒疫苗为针对选自猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪肠道杯状病毒、猫泛白细胞减少症病毒、猫传染性腹膜炎病毒、犬细小病毒和诺如病毒中的病毒的疫苗。
5.根据权利要求1或2所述的口服病毒疫苗运送载体，其特征在于，所述阳离子型高分子层由选自聚赖氨酸、聚组氨酸和聚精氨酸中的一种或多种阳离子型高分子组成。
6.根据权利要求5所述的口服病毒疫苗运送载体，其特征在于，所述阳离子型高分子由以下化学式1表示：
【化学式1】
(聚合-M)k，
在上述化学式中，M表示赖氨酸、组氨酸或精氨酸，k表示2-50。
7.根据权利要求1或2所述的口服病毒疫苗运送载体，其特征在于，所述pH敏感性高分子层在7-9的pH值范围内发生离子化。
8.根据权利要求1或2所述的口服病毒疫苗运送载体，其特征在于，所述pH敏感性高分子层可选自聚（甲基丙烯酸-共-丙烯酸乙酯）、聚（甲基丙烯酸-共-甲基丙烯酸甲酯）和聚（丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸甲酯-共-甲基丙烯酸）中的一种或多种高分子。
9.根据权利要求1或2所述的口服病毒疫苗运送载体，其特征在于，所述阳离子型高分子层的厚度为1nm-1um。
10.根据权利要求1或2所述的口服病毒疫苗运送载体，其特征在于，所述pH敏感性高分子层的厚度为1nm-1um。
11.口服病毒疫苗运送载体的制备方法，该方法包括：通过混合口服病毒疫苗粒子与阳离子型高分子来在口服病毒疫苗粒子上形成阳离子型高分子层的步骤；和通过使形成有所述阳离子型高分子层的口服病毒疫苗粒子与pH敏感性高分子进行混合来在所述阳离子型高分子层上形成pH敏感性高分子层的步骤。
12.口服病毒疫苗运送载体的制备方法，该方法包括：通过混合口服病毒疫苗粒子与pH敏感性高分子来在口服病毒疫苗粒子上形成pH敏感性高分子层的步骤；和通过使形成有所述pH敏感性高分子层的口服病毒疫苗粒子与阳离子型高分子进行混合来在所述pH敏感性高分子层上形成阳离子型高分子层的步骤。
13.根据权利要求11或12所述的口服病毒疫苗运送载体的制备方法，其特征在于，在低于pH7下形成所述pH敏感性高分子层。
14.用于预防病毒感染的方法，该方法包括：口服给药根据权利要求1或2所述的病毒疫苗运送载体。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111298128A (zh) * 2019-12-25 2020-06-19 中国科学院长春应用化学研究所 一种高效靶向纳米疫苗载体及其制备方法、靶向纳米疫苗及其制备方法

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11102775B2 (en) * 2015-11-26 2021-08-24 Huawei Technologies Co., Ltd. Resource block channelization for OFDM-based numerologies
KR20210021767A (ko) 2019-08-19 2021-03-02 명지대학교 산학협력단 유드라짓을 포함하는 조류독감 경구용 바이러스 백신 전달체

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3725545A (en) * 1971-02-03 1973-04-03 R Maes Enhancement of antibody production by nucleic acid-polycation complexes
US4152413A (en) * 1978-08-18 1979-05-01 Chromalloy American Corporation Oral vaccine for swine dysentery and method of use
CN102083419A (zh) * 2008-07-01 2011-06-01 日东电工株式会社 包含表面被覆了的微粒的医药组合物
CN102485274A (zh) * 2010-12-01 2012-06-06 吉林大学 Plga微球作为核酸疫苗载体的制备方法及应用
CN102614527A (zh) * 2012-04-14 2012-08-01 南开大学 具有pH敏感特性的抗酸纳米口服DNA抗肿瘤疫苗及制备方法
CN102908332A (zh) * 2011-08-04 2013-02-06 纳米及先进材料研发院有限公司 用于口服胰岛素递送的包含阳离子纳米粒子的肠溶包衣胶囊

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1290141A (zh) * 1968-05-31 1972-09-20
US3823228A (en) * 1971-09-29 1974-07-09 Univ Illinois Tge virus vaccine
US5562909A (en) 1993-07-12 1996-10-08 Massachusetts Institute Of Technology Phosphazene polyelectrolytes as immunoadjuvants
KR980011874A (ko) 1996-07-19 1998-04-30 김광호 스터드 비트 라인 형성방법
KR19980011874U (ko) 1996-08-23 1998-05-25 김주용 콤펙트 디스크의 자동 선택장치
KR100502008B1 (ko) * 2003-04-29 2005-07-18 녹십자수의약품(주) 약독화된 돼지 유행성설사병 바이러스, 그를 포함하는면역원성 조성물 및 상기 바이러스를 검출하는 방법

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3725545A (en) * 1971-02-03 1973-04-03 R Maes Enhancement of antibody production by nucleic acid-polycation complexes
US4152413A (en) * 1978-08-18 1979-05-01 Chromalloy American Corporation Oral vaccine for swine dysentery and method of use
CN102083419A (zh) * 2008-07-01 2011-06-01 日东电工株式会社 包含表面被覆了的微粒的医药组合物
CN102485274A (zh) * 2010-12-01 2012-06-06 吉林大学 Plga微球作为核酸疫苗载体的制备方法及应用
CN102908332A (zh) * 2011-08-04 2013-02-06 纳米及先进材料研发院有限公司 用于口服胰岛素递送的包含阳离子纳米粒子的肠溶包衣胶囊
CN102614527A (zh) * 2012-04-14 2012-08-01 南开大学 具有pH敏感特性的抗酸纳米口服DNA抗肿瘤疫苗及制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JACQUELINE D. DUNCAN等: "Comparative analysis of oral delivery systems for live rotavirus vaccines", 《JOURNAL OF CONTROLLED RELEASE》 *
郑爱萍等: "胸腺五肽pH一敏感壳聚糖纳米粒的制备、体外释放及生物活性", 《中国药学杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111298128A (zh) * 2019-12-25 2020-06-19 中国科学院长春应用化学研究所 一种高效靶向纳米疫苗载体及其制备方法、靶向纳米疫苗及其制备方法
CN111298128B (zh) * 2019-12-25 2021-07-02 中国科学院长春应用化学研究所 一种高效靶向纳米疫苗载体及其制备方法、靶向纳米疫苗及其制备方法

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