CN106290833B - 一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸及制备方法 - Google Patents

一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸及制备方法，所述试纸包括底板，底板一面依次粘有样品垫、纳米金结合垫、检测垫、吸水垫、保护膜；所述检测垫为硝酸纤维膜，其上设置包括质控线和检测线，所述质控线上包被有兔抗鼠单克隆抗体，所述检测线上包被有粪类圆线虫‑牛清血蛋白偶联物；所述纳米金结合垫上包被有纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。本发明试纸用于检测粪类圆线虫病，操作简单，灵敏度高，为粪类圆线虫病的早中期检查提供了很好的依据，弥补了本病在该技术领域不易被检测的问题。

Description

一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸及制备方法
技术领域
本发明涉及消化内科疾病检测技术领域，具体涉及一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸及制备方法。
背景技术
粪类圆线虫病是有世代交替的兼性寄生虫，它的自生世代在地面泥土上进行，寄生世代在人体内进行，生活史较复杂，发病过程长，国内本虫感染率在10％左右。本病多数无复核临床症状，但因虫体能引起反复自身感染，当人体抵抗力低下时，如患各种疾病，营养不良，免疫缺陷或接受激素及其他免疫抑制剂治疗，常可反复发生重度自身感染，出现相当严重的症状，甚至死亡。肛周皮肤无临床症状：当丝状蚴经肛门周围皮肤侵入后，局部皮肤则出现水肿，刺痛及瘙痒，并常伴有线状或带状荨麻疹，由于幼虫在皮肤内移行较快，故引起的荨麻疹蔓延速度也很快，曾有报道1例患者荨麻疹蔓延速度每小时达10～12cm，荨麻诊在肛周皮肤的出现及快速蔓延，常是粪类圆线虫幼虫在皮肤内移行时的重要诊断依据；肠道症状与体征：粪类圆线虫引起的肠道症状主要表现为长期腹泻，频繁性下痢，可见水样便或粘液血样便，有里急后重，其次为腹痛，多位于右上腹，偶见便秘，重度感染时常伴有恶心，呕吐，还可出现麻痹性肠梗阻，腹胀，电解质紊乱，脱水，甚至肠穿孔，全身衰竭及死亡，有些急性患者可排出恶息，多泡味的白色粪便，甚至出现严重的脂肪痢，其原因可能与吸收不良或肠淋巴管扩张破裂，脂肪进入肠腔有关；其他症状与体征：本虫幼虫在肺脏移行时，可引起过敏性肺炎和哮喘，表现为轻度发热，咳嗽，咯痰，X线胸片检查有局限性或弥漫性炎症阴影，幼虫如在肺脏停留发育为成虫，所产幼虫有时侵入胸腔而引起胸膜炎，此外，虫体的代谢产物及死亡崩解产物还可引起全身中毒症状，如发热，贫血及神经症状如烦躁，失眠等，急性感染时可引起嗜酸性粒细胞增多，常达15％～85％。
本病临床表现复杂，病程又长，易于误诊，现有的检查方法有常规粪便涂片法、贝氏分离法、改良醛醚离心法，操作复杂，患者无法实现初步自检，从而使病情延误，所以需要一种简单易操作的检测方法用于中轻度患者的检查，便于病情及早发现。
发明内容
本发明解决的技术问题就是提供一种快速准确地检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸及制备方法。
本发明的技术方案为：一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸，所述试纸包括底板，底板一面依次粘有样品垫、纳米金结合垫、检测垫、吸水垫、保护膜；所述检测垫为硝酸纤维膜，其上设置包括质控线和检测线，所述质控线上包被有兔抗鼠单克隆抗体，所述检测线上包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物；所述纳米金结合垫上包被有纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。
优选的，所述底板为PVC胶板，材质轻，且具有很好的防蛀、防腐蚀特点。
优选的，所述样品垫经处理液处理，可促进反应层析作用的发生，可提高试纸的灵敏度，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在7-8。
优选的，所述保护膜为PE材质，位于在试纸最上层，其检测端印有MAX标记线，所述检测线位于靠近MAX标记线的位置，所述质控线位于远离MAX标记线的位置。
优选的，所述粪类圆线虫抗原是将粪类圆线虫丝状蚴在抗菌培养液中于常温下培养30h，分离出丝状蚴虫体，冷冻真空粉碎后用离心法离心过滤出上清液，灭菌后封存，所述抗菌培养液为RPMI 1640细胞培养液。
优选的，所述抗粪类圆线虫单克隆抗体是以粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物为免疫原制备而得。
优选的，所述的纳米金是通过柠檬酸钠还原法制备而得，所述制备的纳米金直径为15nm。
优选的，所述的纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理2-4次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。
一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸的制备方法为：
步骤一：将样品垫经处理液处理，可促进反应层析作用的发生，提高试纸的灵敏度，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在7-8。
步骤二：纳米金结合垫制备方法：
(1)纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理2-4次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体，备用；
(2)将(1)中制备好的纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体均匀喷涂于玻璃纤维膜上，冷冻后干燥处理，即为纳米金结合垫，备用；
步骤三：硝酸纤维素膜的包被方法为：在硝酸纤维素膜上划出检测线和质控线的位置，将粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物和兔抗鼠单克隆抗体用包被缓冲液配制成0.3-0.6mg/mL的包被液，用点喷方式将包被液分别包被到硝酸纤维膜上的检测线和质控线上，检测线上喷涂包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物，包被量为20-40μg，质控线上喷涂包被有兔抗鼠单克隆抗体，包被量为15-30μg，备用；
步骤四：试纸制备：将样品垫、纳米金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和保护膜依次相互叠加粘贴在底板上，36-40℃下干燥处理后用斩切机切成3mm宽的试纸条，包封，即为所述检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸。
本发明的有益效果体现在：本发明试纸用于检测粪类圆线虫病，操作简单，灵敏度高，为粪类圆线虫病的早中期检查提供了很好的依据，弥补了本病在该技术领域不易被检测的问题。
本发明试纸的使用方法：将试纸插入待检血清样品中，印有“MAX”标记端朝下，使其充分浸润在检测样品中，室温下反应5-10分钟，读取质控线和检测线颜色变化判断结果：当质控线和检测线均显色，即为阳性；当质控线显色，检测线不显色，即为阴性；当质控线不显色，无论检测线显色与否均判断为无效。
具体实施方式
实施例1：
一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸，所述试纸包括底板，底板一面依次粘有样品垫、纳米金结合垫、检测垫、吸水垫、保护膜；所述检测垫为硝酸纤维膜，其上设置包括质控线和检测线，所述质控线上包被有兔抗鼠单克隆抗体，所述检测线上包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物；所述纳米金结合垫上包被有纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。
其中，所述底板为PVC胶板，材质轻，且具有很好的防蛀、防腐蚀特点；所述样品垫经处理液处理，可促进反应层析作用的发生，可提高试纸的灵敏度，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在7；所述保护膜为PE材质，位于在试纸最上层，其检测端印有MAX标记线，所述检测线位于靠近MAX标记线的位置，所述质控线位于远离MAX标记线的位置；所述粪类圆线虫抗原是将粪类圆线虫丝状蚴在抗菌培养液中于常温下培养30h，分离出丝状蚴虫体，冷冻真空粉碎后用离心法离心过滤出上清液，灭菌后封存，所述抗菌培养液为RPMI 1640细胞培养液；所述抗粪类圆线虫单克隆抗体是以粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物为免疫原制备而得；所述的纳米金是通过柠檬酸钠还原法制备而得，所述制备的纳米金直径为15nm；所述的纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理2次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。
一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸的制备方法为：
步骤一：将样品垫经处理液处理，可促进反应层析作用的发生，提高试纸的灵敏度，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在7。
步骤二：纳米金结合垫制备方法：
(1)纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理2次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体，备用；
(2)将(1)中制备好的纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体均匀喷涂于玻璃纤维膜上，冷冻后干燥处理，即为纳米金结合垫，备用；
步骤三：硝酸纤维素膜的包被方法为：在硝酸纤维素膜上划出检测线和质控线的位置，将粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物和兔抗鼠单克隆抗体用包被缓冲液配制成0.3mg/mL的包被液，用点喷方式将包被液分别包被到硝酸纤维膜上的检测线和质控线上，检测线上喷涂包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物，包被量为20μg，质控线上喷涂包被有兔抗鼠单克隆抗体，包被量为15μg，备用；
步骤四：试纸制备：将样品垫、纳米金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和保护膜依次相互叠加粘贴在底板上，36℃下干燥处理后用斩切机切成3mm宽的试纸条，包封，即为所述检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸。
实施例2：
一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸，所述试纸包括底板，底板一面依次粘有样品垫、纳米金结合垫、检测垫、吸水垫、保护膜；所述检测垫为硝酸纤维膜，其上设置包括质控线和检测线，所述质控线上包被有兔抗鼠单克隆抗体，所述检测线上包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物；所述纳米金结合垫上包被有纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。
其中，所述底板为PVC胶板，材质轻，且具有很好的防蛀、防腐蚀特点；所述样品垫经处理液处理，可促进反应层析作用的发生，可提高试纸的灵敏度，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在7.5；所述保护膜为PE材质，位于在试纸最上层，其检测端印有MAX标记线，所述检测线位于靠近MAX标记线的位置，所述质控线位于远离MAX标记线的位置；所述粪类圆线虫抗原是将粪类圆线虫丝状蚴在抗菌培养液中于常温下培养30h，分离出丝状蚴虫体，冷冻真空粉碎后用离心法离心过滤出上清液，灭菌后封存，所述抗菌培养液为RPMI 1640细胞培养液；所述抗粪类圆线虫单克隆抗体是以粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物为免疫原制备而得；所述的纳米金是通过柠檬酸钠还原法制备而得，所述制备的纳米金直径为15nm；所述的纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理3次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。
一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸的制备方法为：
步骤一：将样品垫经处理液处理，可促进反应层析作用的发生，提高试纸的灵敏度，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在7.5。
步骤二：纳米金结合垫制备方法：
(1)纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理3次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体，备用；
(2)将(1)中制备好的纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体均匀喷涂于玻璃纤维膜上，冷冻后干燥处理，即为纳米金结合垫，备用；
步骤三：硝酸纤维素膜的包被方法为：在硝酸纤维素膜上划出检测线和质控线的位置，将粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物和兔抗鼠单克隆抗体用包被缓冲液配制成0.45mg/mL的包被液，用点喷方式将包被液分别包被到硝酸纤维膜上的检测线和质控线上，检测线上喷涂包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物，包被量为30μg，质控线上喷涂包被有兔抗鼠单克隆抗体，包被量为22.5μg，备用；
步骤四：试纸制备：将样品垫、纳米金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和保护膜依次相互叠加粘贴在底板上，38℃下干燥处理后用斩切机切成3mm宽的试纸条，包封，即为所述检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸。
实施例3：
一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸，所述试纸包括底板，底板一面依次粘有样品垫、纳米金结合垫、检测垫、吸水垫、保护膜；所述检测垫为硝酸纤维膜，其上设置包括质控线和检测线，所述质控线上包被有兔抗鼠单克隆抗体，所述检测线上包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物；所述纳米金结合垫上包被有纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。
其中，所述底板为PVC胶板，材质轻，且具有很好的防蛀、防腐蚀特点；所述样品垫经处理液处理，可促进反应层析作用的发生，可提高试纸的灵敏度，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在8；所述保护膜为PE材质，位于在试纸最上层，其检测端印有MAX标记线，所述检测线位于靠近MAX标记线的位置，所述质控线位于远离MAX标记线的位置；所述粪类圆线虫抗原是将粪类圆线虫丝状蚴在抗菌培养液中于常温下培养30h，分离出丝状蚴虫体，冷冻真空粉碎后用离心法离心过滤出上清液，灭菌后封存，所述抗菌培养液为RPMI 1640细胞培养液；所述抗粪类圆线虫单克隆抗体是以粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物为免疫原制备而得；所述的纳米金是通过柠檬酸钠还原法制备而得，所述制备的纳米金直径为15nm；所述的纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理4次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体。
一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸的制备方法为：
步骤一：将样品垫经处理液处理，可促进反应层析作用的发生，提高试纸的灵敏度，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在8。
步骤二：纳米金结合垫制备方法：
(1)纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理4次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体，备用；
(2)将(1)中制备好的纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体均匀喷涂于玻璃纤维膜上，冷冻后干燥处理，即为纳米金结合垫，备用；
步骤三：硝酸纤维素膜的包被方法为：在硝酸纤维素膜上划出检测线和质控线的位置，将粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物和兔抗鼠单克隆抗体用包被缓冲液配制成0.6mg/mL的包被液，用点喷方式将包被液分别包被到硝酸纤维膜上的检测线和质控线上，检测线上喷涂包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物，包被量为40μg，质控线上喷涂包被有兔抗鼠单克隆抗体，包被量为30μg，备用；
步骤四：试纸制备：将样品垫、纳米金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和保护膜依次相互叠加粘贴在底板上，40℃下干燥处理后用斩切机切成3mm宽的试纸条，包封，即为所述检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸。
临床统计试验：
本发明者收集20例粪类圆线虫病早中期患者阳性样本，用本发明实施例2制备的试纸进行检测，结果显示全部为阳性，假阴性率为0，说明本发明可对粪类圆线虫病早中期患者进行快速检测，具有很好的医学意义。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (1)

1.一种检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸，其特征在于，所述试纸包括底板，底板一面依次粘有样品垫、纳米金结合垫、检测垫、吸水垫、保护膜；所述检测垫为硝酸纤维膜，其上设置包括质控线和检测线，所述质控线上包被有兔抗鼠单克隆抗体，所述检测线上包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物；所述纳米金结合垫上包被有纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体；
所述底板为PVC胶板；
所述样品垫经处理液处理，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在7-8；
所述保护膜在试纸最上层，其检测端印有MAX标记线，所述检测线位于靠近MAX标记线的位置，所述质控线位于远离MAX标记线的位置；
所述粪类圆线虫抗原是将粪类圆线虫丝状蚴在抗菌培养液中于常温下培养30h，分离出丝状蚴虫体，冷冻真空粉碎后用离心法离心过滤出上清液，灭菌后封存；
所述抗粪类圆线虫单克隆抗体是以粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物为免疫原制备而得；
所述的纳米金是通过柠檬酸钠还原法制备而得，所述制备的纳米金直径为15nm；
所述的纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理2-4次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体；
所述检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸制备方法为：
步骤一：将样品垫经处理液处理，所述处理液为Tris溶液，还含有1.5％的牛血清白蛋白、1.2％的PVP、0.9％的Tween20，pH调节在7-8；
步骤二：纳米金结合垫制备方法：
(1)纳米金标记抗体的制备方法为：取纳米金溶液10mL，加入抗粪类圆线虫单克隆抗体25μg，搅拌5min后加入0.5mL浓度为8％的氯化钠溶液和质量浓度为5％的胎牛血清，胎牛血清的加入量为使总溶液最终浓度为0.9％，先低速离心10min，除去纳米金颗粒沉淀，再以较高转速4℃下离心30min，所得沉淀物加到原体积的0.015m磷酸盐缓冲液中，调节pH在7.8，离心处理2-4次，所得沉淀溶解于原体积15％的上述磷酸盐缓冲溶液中，4℃保存，即为纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体，备用；
(2)将(1)中制备好的纯化的纳米金标记的抗粪类圆线虫单克隆抗体均匀喷涂于玻璃纤维膜上，冷冻后干燥处理，即为纳米金结合垫，备用；
步骤三：硝酸纤维素膜的包被方法为：在硝酸纤维素膜上划出检测线和质控线的位置，将粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物和兔抗鼠单克隆抗体用包被缓冲液配制成0.3-0.6mg/mL的包被液，用点喷方式将包被液分别包被到硝酸纤维膜上的检测线和质控线上，检测线上喷涂包被有粪类圆线虫抗原-牛清血蛋白偶联物，质控线上喷涂包被有兔抗鼠单克隆抗体，备用；
步骤四：试纸制备：将样品垫、纳米金结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和保护膜依次相互叠加粘贴在底板上，36-40℃下干燥处理后用斩切机切成3mm宽的试纸条，包封，即为所述检测粪类圆线虫病的纳米金免疫层析试纸。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108490196B (zh) * 2018-05-16 2021-03-26 江苏维尔生物科技有限公司 一种检测尿液中盘尾丝虫代谢物natog的测试条及其制备方法、测试卡

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101271109A (zh) * 2008-03-29 2008-09-24 中国农业科学院兰州兽医研究所 弓形虫循环抗原免疫金标快速检测试剂及其制备方法
CN101408547A (zh) * 2008-08-05 2009-04-15 深圳市疾病预防控制中心 一种检测广州管圆线虫病的金标试剂盒和制备方法
CN105044335A (zh) * 2015-07-10 2015-11-11 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条及其制备方法
CN105158461A (zh) * 2015-09-22 2015-12-16 浙江大学 适用于茶叶中啶虫脒残留的速测方法及相应的试纸条
CN105319355A (zh) * 2014-07-25 2016-02-10 江苏维赛科技生物发展有限公司 敌百虫胶体金试纸条的制备及使用方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101271109A (zh) * 2008-03-29 2008-09-24 中国农业科学院兰州兽医研究所 弓形虫循环抗原免疫金标快速检测试剂及其制备方法
CN101408547A (zh) * 2008-08-05 2009-04-15 深圳市疾病预防控制中心 一种检测广州管圆线虫病的金标试剂盒和制备方法
CN105319355A (zh) * 2014-07-25 2016-02-10 江苏维赛科技生物发展有限公司 敌百虫胶体金试纸条的制备及使用方法
CN105044335A (zh) * 2015-07-10 2015-11-11 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所 一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条及其制备方法
CN105158461A (zh) * 2015-09-22 2015-12-16 浙江大学 适用于茶叶中啶虫脒残留的速测方法及相应的试纸条

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Specific monoclonal antibodies to Strongyloides stercoralis: a potential diagnostic reagent for strongyloidiasis;Taweethavonsawat P et;《Asian Pac J Allergy Immunol》;20021231;第20卷(第4期);247-256
Use of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay and Dipstick Assay for Detection of Strongyloides stercoralis Infection in Humans;H. Rogier van Doorn et al;《Journal of Clinical Microbiology》;20070228;第45卷(第2期);438-44

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