CN106248664A - 土壤蔗糖酶的测定方法 - Google Patents
土壤蔗糖酶的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106248664A CN106248664A CN201610565839.9A CN201610565839A CN106248664A CN 106248664 A CN106248664 A CN 106248664A CN 201610565839 A CN201610565839 A CN 201610565839A CN 106248664 A CN106248664 A CN 106248664A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glucose
- soil
- obtains
- solution
- buffer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000002689 soil Substances 0.000 title claims abstract description 90
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 title claims abstract description 40
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 238000003556 assay Methods 0.000 title claims abstract description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 91
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 87
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 56
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 26
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 26
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 101710184309 Probable sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102400000472 Sucrase Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 101710112652 Sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 claims abstract description 14
- LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 3,5-dinitrosalicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC([N+]([O-])=O)=C1O LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 61
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 49
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 34
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 31
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 25
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 25
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 20
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 15
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 15
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 13
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 11
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 10
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 10
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 9
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000004064 recycling Methods 0.000 claims description 9
- VZOPRCCTKLAGPN-ZFJVMAEJSA-L potassium;sodium;(2r,3r)-2,3-dihydroxybutanedioate;tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Na+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O VZOPRCCTKLAGPN-ZFJVMAEJSA-L 0.000 claims description 7
- 229940074446 sodium potassium tartrate tetrahydrate Drugs 0.000 claims description 7
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims description 6
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 claims description 6
- -1 citric acid monohydrate compound Chemical class 0.000 claims description 6
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical group [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 claims description 5
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 claims description 5
- 229940005654 nitrite ion Drugs 0.000 claims description 5
- 238000005498 polishing Methods 0.000 claims description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 15
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- IZQZNLBFNMTRMF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;phosphoric acid Chemical compound CC(O)=O.OP(O)(O)=O IZQZNLBFNMTRMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 2
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- JFTUSFFYSRNFBA-UHFFFAOYSA-N 3-amino-5-nitrosalicylic acid Chemical compound NC1=CC([N+]([O-])=O)=CC(C(O)=O)=C1O JFTUSFFYSRNFBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001394 Disaccharidases Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 125000005498 phthalate group Chemical group 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N2021/775—Indicator and selective membrane
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
土壤蔗糖酶的测定方法,它及蔗糖酶活性的测定方法。本发明的目的要解决现有比色法测定蔗糖酶活性准确性较低的问题。方法:一、配制显色剂3,5‑二硝基水杨酸溶液;二、配制质量分数为8%的蔗糖溶液;三、配制缓冲液;四、土样培养,得到培养后土样;五、测定步骤四的培养后土样过滤滤液在分光光度计上于波长508nm处比色;六、标准葡萄糖溶液配制;七、在分光光度计上于波长508nm处进行比色,比色检测后以光密度值为纵坐标,以葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线;八、空白对照检测;九、确定葡萄糖浓度;十、根据Suc=a×V×n/m计算结果。优点:平行性好,变异系数小,方法可行性高。本发明主要用于测定土壤蔗糖酶。
Description
技术领域
本发明涉及蔗糖酶活性的测定方法。
背景技术
蔗糖酶广泛存在于所有土壤中,它是表征土壤生物活性重要的酶。蔗糖酶(β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC3.2.1.26)是一种水解酶。它能催化非还原性双糖(蔗糖)的1,2-糖苷键裂解,将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。蔗糖酶主要是将碳水化合物水解产生的糖类进一步分解形成单糖,从而为微生物的繁殖提供营养,常用蔗糖酶活性表征土壤的熟化程度和肥力水平。
测定土壤蔗糖酶活性的方法-比色法,是目前比较常用的测定土壤蔗糖酶活性的方法。该方法采用8%蔗糖为基质,基质在土壤蔗糖酶的作用下生成葡萄糖,葡萄糖和3,5-二硝基水杨酸反应生成橙黄色的3-氨基-5硝基水杨酸,在508nm波长下有最大吸光值。但是该方法存在许多的不足,蔗糖酶活性在酸性的介质中最大,为了让反应在最适pH,以往常用多种缓冲液,醋酸盐缓冲液(pH4.5-5.5),磷酸盐缓冲液(pH4.9-5.5),醋酸盐-磷酸盐缓冲液(pH5.5),但是缓冲液的不同会使土壤蔗糖酶活性测量的结果存在一定的差异,导致测定的结果不够准确。不仅如此,这些缓冲液存放的时间短,在测定过程中受试剂影响较大,导致比色法测定蔗糖酶活性准确性较低。
发明内容
本发明的目的要解决现有比色法测定蔗糖酶活性准确性较低的问题,而提供土壤蔗糖酶的测定方法。
土壤蔗糖酶的测定方法,具体是按以下步骤进行:
一、配制显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液:首先向20mL~21mL 2mol/L氢氧化钠水溶液中加入50mL~51mL去离子水,并混匀,然后加入0.49g~0.51g二硝基水杨酸,二硝基水杨酸完全溶解后再加入30.00g~30.10g酒石酸钾钠,最后利用去离子水定容至100mL,即得到显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液;
二、配制蔗糖溶液:将8.00g蔗糖溶入去离子水中,定容至100mL,得到质量分数为8%的蔗糖溶液;
三、配制缓冲液:缓冲液储备液:将12.10g~12.14g三(羟甲基)氨基甲烷、11.60g~11.64g顺丁烯二酸、14.00g~14.10g柠檬酸一水化合物和6.30g~6.34g硼酸依次溶于500mL~510mL 1mol/L的NaOH水溶液中,并利用蒸馏水定容至1000mL,缓冲液储备液;取200mL~210mL缓冲液储备液转移至1000mL容量瓶中,并利用0.10mol/L~0.14mol/L HCl将200mL~210mL缓冲液储备液的pH调节至6.0,再用去离子水定容至1000mL,得到缓冲液;
四、土样培养:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.01g~5.04g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯4~5滴,加入15mL步骤二得到的质量分数为8%的蔗糖溶液,加入5mL步骤三得到的缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37℃~38℃下培养23.5h~24.5h,得到培养后土样;
五、测定:将步骤四的培养后土样过滤,取0.5mL~1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min~6min,然后移至自来水流下冷却3min~4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
六、标准葡萄糖溶液配制;将葡萄糖先在温度为50~58℃条件下真空干燥至恒重,得到干燥的葡萄糖,然后取500mg干燥的葡萄糖溶于100mL蒸馏水中,即得到标准葡萄糖溶液,再将标准葡萄糖溶液稀释10倍,制成葡萄糖工作液,所述的葡萄糖工作液中葡萄糖的浓度为0.5mg/mL;
七、标准曲线的绘制:
依次称取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL和5mL步骤六得到的葡萄糖工作液,分别注入6只50mL容量瓶中,用蒸馏水依次补齐至10mL,然后分别加3mL 3,5-二硝基水杨酸,并在沸腾水浴锅中加热5min,随即将6只50mL容量瓶移至自来水流下冷却3min,最后用蒸馏水稀释至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色,比色检测后以光密度值为纵坐标,以葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线;
八、空白对照检测:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.01g~5.04g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯4~5滴,加入5mL步骤三得到的缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37℃~38℃下培养23.5h~24.5h,得到空白对照培养后土样;将空白对照培养后土样过滤,取0.5mL~1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min~6min,然后移至自来水流下冷却3min~4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
九、确定葡萄糖浓度:根据步骤七得到的标准曲线依次确定步骤五中葡萄糖浓度a1和步骤八中葡萄糖浓度a2,a1-a2=a,a为步骤五中剩余葡萄糖浓度;
十、结果计算:蔗糖酶活性以24h后1g过完筛的待测土壤中葡萄糖的质量表示蔗糖酶活性Suc:
Suc=a×V×n/m
式中:a为步骤五中剩余葡萄糖浓度,单位mg/mL;V为显色液体积50mL;n为
分取倍数;m为烘干土重,单位g。
本发明优点:
通过使用改进的通用缓冲液代替醋酸盐缓冲液(pH4.5-5.5),磷酸盐缓冲液(pH4.9-5.5),醋酸盐-磷酸盐缓冲液(pH5.5)缓冲液,培养溶液的次序进行调整后,提高了蔗糖酶活性测定的准确性。同时采用本发明方法与原有的普通方法多种缓冲液测定同一土壤蔗糖酶活性,本发明方法得到的值分别为102.14、107.87、109.74、115.45、95.47,标准值为106.13±7.62,原有方法采用的缓冲液测定得到值分别为253.97±20.87,144.61±23.44、141.30±26.96,本发明测定土壤蔗糖酶活性平行性好,变异系数小,方法可行性高。
具体实施方式
具体实施方式一:本实施方式是土壤蔗糖酶的测定方法,具体是按以下步骤进行:
一、配制显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液:首先向20mL~21mL 2mol/L氢氧化钠水溶液中加入50mL~51mL去离子水,并混匀,然后加入0.49g~0.51g二硝基水杨酸,二硝基水杨酸完全溶解后再加入30.00g~30.10g酒石酸钾钠,最后利用去离子水定容至100mL,即得到显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液;
二、配制蔗糖溶液:将8.00g蔗糖溶入去离子水中,定容至100mL,得到质量分数为8%的蔗糖溶液;
三、配制缓冲液:缓冲液储备液:将12.10g~12.14g三(羟甲基)氨基甲烷、11.60g~11.64g顺丁烯二酸、14.00g~14.10g柠檬酸一水化合物和6.30g~6.34g硼酸依次溶于500mL~510mL 1mol/L的NaOH水溶液中,并利用蒸馏水定容至1000mL,缓冲液储备液;取200mL~210mL缓冲液储备液转移至1000mL容量瓶中,并利用0.10mol/L~0.14mol/L HCl将200mL~210mL缓冲液储备液的pH调节至6.0,再用去离子水定容至1000mL,得到缓冲液;
四、土样培养:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.01g~5.04g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯4~5滴,加入15mL步骤二得到的质量分数为8%的蔗糖溶液,加入5mL步骤三得到的缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37℃~38℃下培养23.5h~24.5h,得到培养后土样;
五、测定:将步骤四的培养后土样过滤,取0.5mL~1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min~6min,然后移至自来水流下冷却3min~4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
六、标准葡萄糖溶液配制;将葡萄糖先在温度为50~58℃条件下真空干燥至恒重,得到干燥的葡萄糖,然后取500mg干燥的葡萄糖溶于100mL蒸馏水中,即得到标准葡萄糖溶液,再将标准葡萄糖溶液稀释10倍,制成葡萄糖工作液,所述的葡萄糖工作液中葡萄糖的浓度为0.5mg/mL;
七、标准曲线的绘制:
依次称取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL和5mL步骤六得到的葡萄糖工作液,分别注入6只50mL容量瓶中,用蒸馏水依次补齐至10mL,然后分别加3mL 3,5-二硝基水杨酸,并在沸腾水浴锅中加热5min,随即将6只50mL容量瓶移至自来水流下冷却3min,最后用蒸馏水稀释至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色,比色检测后以光密度值为纵坐标,以葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线;
八、空白对照检测:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.01g~5.04g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯4~5滴,加入5mL步骤三得到的缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37℃~38℃下培养23.5h~24.5h,得到空白对照培养后土样;将空白对照培养后土样过滤,取0.5mL~1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min~6min,然后移至自来水流下冷却3min~4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
九、确定葡萄糖浓度:根据步骤七得到的标准曲线依次确定步骤五中葡萄糖浓度a1和步骤八中葡萄糖浓度a2,a1-a2=a,a为步骤五中剩余葡萄糖浓度;
十、结果计算:蔗糖酶活性以24h后1g过完筛的待测土壤中葡萄糖的质量表示蔗糖酶活性Suc:
Suc=a×V×n/m
式中:a为步骤五中剩余葡萄糖浓度,单位mg/mL;V为显色液体积50mL;n为分取倍数;m为烘干土重,单位g。
具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一的不同点是:步骤一中配制显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液:首先向20mL 2mol/L氢氧化钠水溶液中加入50mL去离子水,并混匀,然后加入0.50g二硝基水杨酸,二硝基水杨酸完全溶解后再加入30.00g酒石酸钾钠,最后利用去离子水定容至100mL,即得到显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液。其他与具体实施方式一相同。
具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是:步骤三中将12.10g三(羟甲基)氨基甲烷、11.60g顺丁烯二酸、14.00g柠檬酸一水化合物和6.30g硼酸依次溶于500mL 1mol/L的NaOH水溶液中,并利用蒸馏水定容至1000mL,缓冲液储备液;取200mL缓冲液储备液转移至1000mL容量瓶中,并利用0.10mol/L HCl将200mL缓冲液储备液的pH调节至6.0,再用去离子水定容至1000mL,得到缓冲液。其他与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是:步骤四中在温度为37.5℃下培养24h,得到培养后土样。其他与具体实施方式一至三相同。
具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是:步骤八中在温度为37.5℃下培养24h,得到空白对照培养后土样。其他与具体实施方式一至四相同。
本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容,其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。
采用下述试验验证本发明效果
实施例1:土壤蔗糖酶的测定方法,具体是按以下步骤进行:
一、配制显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液:首先向20mL 2mol/L氢氧化钠水溶液中加入50mL去离子水,并混匀,然后加入0.50g二硝基水杨酸,二硝基水杨酸完全溶解后再加入30.00g酒石酸钾钠,最后利用去离子水定容至100mL,即得到显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液;
二、配制蔗糖溶液:将8.00g蔗糖溶入去离子水中,定容至100mL,得到质量分数为8%的蔗糖溶液;
三、配制缓冲液:缓冲液储备液:将12.10g三(羟甲基)氨基甲烷、11.60g顺丁烯二酸、14.00g柠檬酸一水化合物和6.30g硼酸依次溶于500mL 1mol/L的NaOH水溶液中,并利用蒸馏水定容至1000mL,缓冲液储备液;取200mL缓冲液储备液转移至1000mL容量瓶中,并利用0.10mol/L HCl将200mL缓冲液储备液的pH调节至6.0,再用去离子水定容至1000mL,得到缓冲液;
四、土样培养:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.02g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯5滴,加入15mL步骤二得到的质量分数为8%的蔗糖溶液,加入5mL步骤三得到的缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37.5℃下培养24h,得到培养后土样;
五、测定:将步骤四的培养后土样过滤,取1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热6min,然后移至自来水流下冷却4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
六、标准葡萄糖溶液配制;将葡萄糖先在温度为55℃条件下真空干燥至恒重,得到干燥的葡萄糖,然后取500mg干燥的葡萄糖溶于100mL蒸馏水中,即得到标准葡萄糖溶液,再将标准葡萄糖溶液稀释10倍,制成葡萄糖工作液,所述的葡萄糖工作液中葡萄糖的浓度为0.5mg/mL;
七、标准曲线的绘制:
依次称取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL和5mL步骤六得到的葡萄糖工作液,分别注入6只50mL容量瓶中,用蒸馏水依次补齐至10mL,然后分别加3mL 3,5-二硝基水杨酸,并在沸腾水浴锅中加热5min,随即将6只50mL容量瓶移至自来水流下冷却3min,最后用蒸馏水稀释至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色,比色检测后以光密度值为纵坐标,以葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线;
八、空白对照检测:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.02g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯5滴,加入5mL步骤三得到的缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37.5℃下培养24h,得到空白对照培养后土样;将空白对照培养后土样过滤,取1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热6min,然后移至自来水流下冷却4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
九、确定葡萄糖浓度:根据步骤七得到的标准曲线依次确定步骤五中葡萄糖浓度a1和步骤八中葡萄糖浓度a2,a1-a2=a,a为步骤五中剩余葡萄糖浓度;
十、结果计算:蔗糖酶活性以24h后1g过完筛的待测土壤中葡萄糖的质量表示蔗糖酶活性Suc:
Suc=a×V×n/m
式中:a为步骤五中剩余葡萄糖浓度,单位mg/mL;V为显色液体积50mL;n为分取倍数;m为烘干土重,单位g。
实施例2:对比试验1:
一、配制显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液:首先向20mL 2mol/L氢氧化钠水溶液中加入50mL去离子水,并混匀,然后加入0.50g二硝基水杨酸,二硝基水杨酸完全溶解后再加入30.00g酒石酸钾钠,最后利用去离子水定容至100mL,即得到显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液;
二、配制蔗糖溶液:将8.00g蔗糖溶入去离子水中,定容至100mL,得到质量分数为8%的蔗糖溶液;
三、土样培养:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.02g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯5滴,加入15mL步骤二得到的质量分数为8%的蔗糖溶液,加入5mL缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37.5℃下培养24h,得到培养后土样;所述的缓冲液为酸盐缓冲液,其pH为4.5~5.5;
四、测定:将步骤三的培养后土样过滤,取1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热6min,然后移至自来水流下冷却4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
五、标准葡萄糖溶液配制;将葡萄糖先在温度为55℃条件下真空干燥至恒重,得到干燥的葡萄糖,然后取500mg干燥的葡萄糖溶于100mL蒸馏水中,即得到标准葡萄糖溶液,再将标准葡萄糖溶液稀释10倍,制成葡萄糖工作液,所述的葡萄糖工作液中葡萄糖的浓度为0.5mg/mL;
六、标准曲线的绘制:
依次称取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL和5mL步骤五得到的葡萄糖工作液,分别注入6只50mL容量瓶中,用蒸馏水依次补齐至10mL,然后分别加3mL 3,5-二硝基水杨酸,并在沸腾水浴锅中加热5min,随即将6只50mL容量瓶移至自来水流下冷却3min,最后用蒸馏水稀释至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色,比色检测后以光密度值为纵坐标,以葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线;
七、空白对照检测:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.02g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯5滴,加入5mL缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37.5℃下培养24h,得到空白对照培养后土样;将空白对照培养后土样过滤,取1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热6min,然后移至自来水流下冷却4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;所述的缓冲液为酸盐缓冲液,其pH为4.5~5.5;
八、确定葡萄糖浓度:根据步骤六得到的标准曲线依次确定步骤三中葡萄糖浓度a1和步骤七中葡萄糖浓度a2,a1-a2=a,a为步骤三中剩余葡萄糖浓度;
九、结果计算:蔗糖酶活性以24h后1g过完筛的待测土壤中葡萄糖的质量表示蔗糖酶活性Suc:
Suc=a×V×n/m
式中:a为步骤五中剩余葡萄糖浓度,单位mg/mL;V为显色液体积50mL;n为分取倍数;m为烘干土重,单位g。
实施例3:对比试验2:步骤三中所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液,其pH为4.9~5.5;步骤七中所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液,其pH为4.9~5.5。其它步骤与实施例2相同。
实施例4:对比试验3:步骤三中所述的缓冲液为醋酸盐-磷酸盐缓冲液,其pH为5.5;步骤七中所述的缓冲液为醋酸盐-磷酸盐缓冲液,其pH为5.5。其它步骤与实施例2相同。
按照实施例1至4方法分别对同种过完筛的待测土壤进行检测5次,检测结果如表1所示。
表1
表1为4个实施例的有效分光比色值。其中样品编号A为采用实施例1方法测定的5份过完筛的待测土壤蔗糖酶活性的测试结果,样品编号B为采用实施例2的方法测定的5份过完筛的待测土壤蔗糖酶活性的测试结果,样品编号C为采用实施例3的方法测定的5份过完筛的待测土壤蔗糖酶活性的测试结果,样品编号D为采用实施例4的方法测定的5份过完筛的待测土壤蔗糖酶活性的测试结果。采用实施例1测定得到的土壤蛋白酶活性变异系数为0.60%,显示出较好的准确性。
Claims (5)
1.土壤蔗糖酶的测定方法,其特征在于它是按以下步骤进行:
一、配制显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液:首先向20mL~21mL 2mol/L氢氧化钠水溶液中加入50mL~51mL去离子水,并混匀,然后加入0.49g~0.51g二硝基水杨酸,二硝基水杨酸完全溶解后再加入30.00g~30.10g酒石酸钾钠,最后利用去离子水定容至100mL,即得到显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液;
二、配制蔗糖溶液:将8.00g蔗糖溶入去离子水中,定容至100mL,得到质量分数为8%的蔗糖溶液;
三、配制缓冲液:缓冲液储备液:将12.10g~12.14g三(羟甲基)氨基甲烷、11.60g~11.64g顺丁烯二酸、14.00g~14.10g柠檬酸一水化合物和6.30g~6.34g硼酸依次溶于500mL~510mL1mol/L的NaOH水溶液中,并利用蒸馏水定容至1000mL,缓冲液储备液;取200mL~210mL缓冲液储备液转移至1000mL容量瓶中,并利用0.10mol/L~0.14mol/L HCl将200mL~210mL缓冲液储备液的pH调节至6.0,再用去离子水定容至1000mL,得到缓冲液;
四、土样培养:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.01g~5.04g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯4~5滴,加入15mL步骤二得到的质量分数为8%的蔗糖溶液,加入5mL步骤三得到的缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37℃~38℃下培养23.5h~24.5h,得到培养后土样;
五、测定:将步骤四的培养后土样过滤,取0.5mL~1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min~6min,然后移至自来水流下冷却3min~4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
六、标准葡萄糖溶液配制;将葡萄糖先在温度为50~58℃条件下真空干燥至恒重,得到干燥的葡萄糖,然后取500mg干燥的葡萄糖溶于100mL蒸馏水中,即得到标准葡萄糖溶液,再将标准葡萄糖溶液稀释10倍,制成葡萄糖工作液,所述的葡萄糖工作液中葡萄糖的浓度为0.5mg/mL;
七、标准曲线的绘制:
依次称取0mL、1mL、2mL、3mL、4mL和5mL步骤六得到的葡萄糖工作液,分别注入6只50mL容量瓶中,用蒸馏水依次补齐至10mL,然后分别加3mL 3,5-二硝基水杨酸,并在沸腾水浴锅中加热5min,随即将6只50mL容量瓶移至自来水流下冷却3min,最后用蒸馏水稀释至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色,比色检测后以光密度值为纵坐标,以葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线;
八、空白对照检测:将待测土壤用孔径为2mm的筛子过筛,称取过完筛的待测土壤5.01g~5.04g置于50mL三角瓶中,用胶头滴管加入甲苯4~5滴,加入5mL步骤三得到的缓冲液,摇匀混合物后,再用保鲜膜密封,放入已预热的恒温箱,在温度为37℃~38℃下培养23.5h~24.5h,得到空白对照培养后土样;将空白对照培养后土样过滤,取0.5mL~1mL滤液移入50mL容量瓶中,加入3mL步骤一得到的显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min~6min,然后移至自来水流下冷却3min~4min,再利用蒸馏水稀释定容至50mL,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色检测;
九、确定葡萄糖浓度:根据步骤七得到的标准曲线依次确定步骤五中葡萄糖浓度a1和步骤八中葡萄糖浓度a2,a1-a2=a,a为步骤五中剩余葡萄糖浓度;
十、结果计算:蔗糖酶活性以24h后1g过完筛的待测土壤中葡萄糖的质量表示蔗糖酶活性Suc:
Suc=a×V×n/m
式中:a为步骤五中剩余葡萄糖浓度,单位mg/mL;V为显色液体积50mL;n为分取倍数;m为烘干土重,单位g。
2.根据权利要求1所述的土壤蔗糖酶的测定方法,其特征在于步骤一中配制显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液:首先向20mL 2mol/L氢氧化钠水溶液中加入50mL去离子水,并混匀,然后加入0.50g二硝基水杨酸,二硝基水杨酸完全溶解后再加入30.00g酒石酸钾钠,最后利用去离子水定容至100mL,即得到显色剂3,5-二硝基水杨酸溶液。
3.根据权利要求1所述的土壤蔗糖酶的测定方法,其特征在于步骤三中将12.10g三(羟甲基)氨基甲烷、11.60g顺丁烯二酸、14.00g柠檬酸一水化合物和6.30g硼酸依次溶于500mL1mol/L的NaOH水溶液中,并利用蒸馏水定容至1000mL,缓冲液储备液;取200mL缓冲液储备液转移至1000mL容量瓶中,并利用0.10mol/L HCl将200mL缓冲液储备液的pH调节至6.0,再用去离子水定容至1000mL,得到缓冲液。
4.根据权利要求1所述的土壤蔗糖酶的测定方法,其特征在于步骤四中在温度为37.5℃下培养24h,得到培养后土样。
5.根据权利要求1所述的土壤蔗糖酶的测定方法,其特征在于步骤八中在温度为37.5℃下培养24h,得到空白对照培养后土样。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610565839.9A CN106248664B (zh) | 2016-07-18 | 2016-07-18 | 土壤蔗糖酶的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610565839.9A CN106248664B (zh) | 2016-07-18 | 2016-07-18 | 土壤蔗糖酶的测定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106248664A true CN106248664A (zh) | 2016-12-21 |
CN106248664B CN106248664B (zh) | 2019-02-19 |
Family
ID=57613315
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610565839.9A Expired - Fee Related CN106248664B (zh) | 2016-07-18 | 2016-07-18 | 土壤蔗糖酶的测定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106248664B (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108507958A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-09-07 | 黑龙江大学 | 一种土壤纤维素酶的测定方法 |
CN108956594A (zh) * | 2018-07-31 | 2018-12-07 | 黑龙江大学 | 土壤脲酶的测定方法 |
CN108956499A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-07 | 浙江农林大学 | 一种使用dns法测定土壤中葡萄糖的方法 |
CN110609033A (zh) * | 2019-10-31 | 2019-12-24 | 中国农业科学院蜜蜂研究所 | 一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1207173A (zh) * | 1995-10-30 | 1999-02-03 | 株式会社京都第一科学 | 物质的测定方法及试片 |
US6713045B1 (en) * | 1995-06-02 | 2004-03-30 | Research Corporation Technologies, Inc. | Targeted magnetic resonance imaging agents for the detection of physiological processes |
CN102061332A (zh) * | 2010-11-05 | 2011-05-18 | 深圳市博锐德生物科技有限公司 | 果糖定量检测试剂盒及其用途和精浆果糖定量检测方法 |
CN102816832A (zh) * | 2012-08-25 | 2012-12-12 | 浙江大学 | 桑叶中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物及用途 |
CN103543263A (zh) * | 2013-10-31 | 2014-01-29 | 大连大公环境检测有限公司 | 饮用水中大肠杆菌的检测方法 |
CN105238849A (zh) * | 2015-10-29 | 2016-01-13 | 上海应用技术学院 | 一种测定生菜保卫细胞蔗糖转化酶活力的方法 |
-
2016
- 2016-07-18 CN CN201610565839.9A patent/CN106248664B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6713045B1 (en) * | 1995-06-02 | 2004-03-30 | Research Corporation Technologies, Inc. | Targeted magnetic resonance imaging agents for the detection of physiological processes |
CN1207173A (zh) * | 1995-10-30 | 1999-02-03 | 株式会社京都第一科学 | 物质的测定方法及试片 |
CN102061332A (zh) * | 2010-11-05 | 2011-05-18 | 深圳市博锐德生物科技有限公司 | 果糖定量检测试剂盒及其用途和精浆果糖定量检测方法 |
CN102816832A (zh) * | 2012-08-25 | 2012-12-12 | 浙江大学 | 桑叶中具α-葡萄糖苷酶抑制活性的化合物及用途 |
CN103543263A (zh) * | 2013-10-31 | 2014-01-29 | 大连大公环境检测有限公司 | 饮用水中大肠杆菌的检测方法 |
CN105238849A (zh) * | 2015-10-29 | 2016-01-13 | 上海应用技术学院 | 一种测定生菜保卫细胞蔗糖转化酶活力的方法 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
刘善江 等: "土壤酶的研究进展", 《土壤酶的研究进展》 * |
吴金水 等: "《土壤微生物生物量测定方法及其应用》", 31 July 2006, 气象出版社 * |
张忠义 等: "蜂蜜中蔗糖转化酶测定方法探讨", 《食品科学》 * |
李东坡 等: "长期定位培肥黑土土壤蔗糖酶活性动态变化及其影响因素", 《中国生态农业学报》 * |
杨星: "黄顶菊对土壤中微生物群落、酶活性及养分的影响", 《中国优秀硕士论文全文数据库 农业科技辑》 * |
许光辉 等: "《土壤微生物分析方法手册》", 31 December 1986, 农业出版社 * |
赵仁竹 等: "吉林西部盐碱田土壤蔗糖酶活性和有机碳分布特征及其相关关系", 《生态环境学报》 * |
陈红军 等: "两种生物农药对土壤蔗糖酶活性的影响", 《生态环境》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108507958A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-09-07 | 黑龙江大学 | 一种土壤纤维素酶的测定方法 |
CN108956594A (zh) * | 2018-07-31 | 2018-12-07 | 黑龙江大学 | 土壤脲酶的测定方法 |
CN108956499A (zh) * | 2018-08-07 | 2018-12-07 | 浙江农林大学 | 一种使用dns法测定土壤中葡萄糖的方法 |
CN110609033A (zh) * | 2019-10-31 | 2019-12-24 | 中国农业科学院蜜蜂研究所 | 一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106248664B (zh) | 2019-02-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106248664A (zh) | 土壤蔗糖酶的测定方法 | |
CN101717814B (zh) | 测定血清、血浆中钾离子含量的液体双试剂诊断试剂盒 | |
EP3208613A1 (en) | Serum fucosidase detection kit | |
CN105420345B (zh) | 一种稳定、抗干扰能力强的血清5’-核糖核苷酸水解酶检测试剂及检测方法 | |
CN108949903B (zh) | 一种甘油三酯测定试剂盒及其测定方法 | |
CN108414767A (zh) | 糖化血红蛋白测定试剂盒 | |
CN102033050A (zh) | 植物样品中果胶含量的测定方法 | |
CN102980856B (zh) | 一种羧甲基纤维素酶活力的测定方法 | |
CN1731146A (zh) | 一种检测α-L-岩藻糖苷酶活力的方法及试剂 | |
CN106868096A (zh) | 一种稳定性强且成本低的己糖激酶法葡萄糖检测试剂 | |
CN113584125A (zh) | 一种液态稳定的5’-核苷酸酶校准品及检测试剂盒及其应用 | |
CN104195222A (zh) | 一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂 | |
KR101277749B1 (ko) | 벌꿀의 순도 분석을 위한 혼입화분 분석법 | |
Nummi et al. | Nephelometric and turbidometric assays of cellulase activity | |
CN102033051B (zh) | 植物中果胶含量的连续流动测定方法 | |
CN104048928A (zh) | 直接胆红素检测试剂盒 | |
CN101832920B (zh) | 甘油磷酸钠中游离磷酸盐的检测方法 | |
CN104673878B (zh) | 一种单体系测定糖化白蛋白与白蛋白浓度比值的试剂盒 | |
CN106191213A (zh) | 一种游离脂肪酸测定试剂盒及其制备方法 | |
CN102183512A (zh) | 一种基于化学发光原理的活细胞检测方法 | |
Ogando et al. | Control of reducing sugars in sugarcane bioenergy industries by colorimetric methods: Is it always possible? | |
Božinović et al. | Standardization of 3, 5-dinitrosalicylic acid (DNS) assay for measuring xylanase activity: detecting and solving problems | |
CN110609033B (zh) | 一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法 | |
CN102608280B (zh) | 直接滴定法测定总糖、还原糖含量用的稳定剂及其制法 | |
CN109521013A (zh) | 一种游离脂肪酸检测试剂盒及生产工艺 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190219 |