CN106232801A - 自动化细胞培养和收获装置 - Google Patents

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Abstract

公开了一种自动化细胞培养装置，其扩增、脱离和制备准备在体内植入的细胞。该装置是由多层细胞培养室、细胞制备室、和自动驱动细胞培养基循环、更换及再填充的关键参数控制单元所构成。根据本发明的装置的特征在于所有与细胞和培养基接触的组件构成完全可弃式的“盒”以避免交叉污染和改进安全性。该装置尤其适用于扩增及制备用于骨关节炎(OA)治疗的间充质干细胞，和用于哺乳动物中的其他以细胞为基础的治疗。

Description

自动化细胞培养和收获装置
本发明涉及一种用于体内移植或植入的细胞培养和收获装置。更具体而言，本发明涉及一种确保细胞培养的完全自动化和受控扩增，并确保待体内移植或植入的细胞悬浮液的完全自动化和受控制备的装置。细胞以单层培养。细胞还可在三维(3D)结构上或适当筏体(raft)或珠上进行培养以增加培养表面。
对于在三维(3D)环境中如在3D结构或支架上生长细胞的兴趣日渐增加。在3D支架上的细胞培养在组织工程中可用于产生可植入的组织结构。
WO2011/073261A1描述了一种用于培养粘附在三维结构上供体内移植或植入用的哺乳动物细胞的细胞处理装置(生物反应器)，其包括循环系统、培养装置、流体贮器和泵。
EP0402272B1描述了一种由高分子基质组成的微生物或细胞培养基质，所述高分子基质在其相对表面的至少一者上经在其分子单元中具有含氮杂环的α,β-烯不饱和单体的(共)聚合物组成的合成高分子薄膜层包被。
US2013/0058907描述了一种细胞培养系统，其并入了可弃式培养器皿模块和一种可以自动化、无污染方式扩增细胞(包括原代细胞及细胞系以及患者特异性细胞或细胞系)的可重复使用的精简仪器基础装置。
WO2010/048417描述了一种灌流生物反应器，其包括具有入口和出口的外壳、和细胞生长基质，其中细胞生长基质是平面的、折皱的、或环绕中心核心螺旋卷绕的。
US2008/0032398A1描述了一种用于支撑多个细胞培养灌流流径组成盒的温育架，其包括：具有含多个各自适于支撑流径组成盒的沟槽的表面的水平基座；多个用于在该架与该多个盒间传输数据的数据介面连接器；和至少一个用于在该架与外部电脑间通讯的控制介面。
US2008/0220523A1描述了一种离体扩增细胞的方法，该方法包括：将细胞接种于中空纤维基质上，使得细胞粘附至基质；扩增基质上的粘附细胞；从基质移除扩增细胞，其中所述细胞是非胚胎干、非生殖细胞，其中所述细胞表达端粒酶、未经转化，且具有正常的染色体核型(karotype)。
US2013/0210130A1描述了一种自动化细胞培养配置，其包括一个密闭式细胞培养模块(该模块包括一个生物反应器，密闭式细胞培养模块为密闭系统)；和多个工具模块，包括一个泵及一个额外的工具模块，其中该额外工具模块中的至少一个可相对于该密闭式细胞培养模块或相对于该密闭式细胞培养模块的一或数个组件移动，且经配置或可经配置以作用于或监测生物反应器的内容物，而不用打开密闭式细胞培养模块或将密闭式细胞培养模块从自动化细胞培养设置拆下。
US2013/0244322A1描述了一种自动化细胞培养装置，其包括培养基、生长因子和待培养细胞的罐；具有恒温罩的培养器，其中装入用于细胞培养或扩增的容器；和控制电脑系统，其包括用于输入及记录目的在于控制罩中的培养条件的数据和管理用于以预定顺序分配流体的阀的构件，其中其包括用于支撑及搅拌细胞培养物的装置和由该电脑系统控制且装于该罩内的扩增容器，且其中该容器由细胞扩增袋形成，所述细胞扩增袋具有至少一个连接至所述罐的入口及一个连接至于培养后收获及储存细胞的构件的出口，这些收获和储存构件和所述罐位于罩的外部且通过管道连接至该细胞扩增袋的所述端口，所述管道与该细胞扩增袋共同形成置于该罩内的预组装模块，且穿过该罩的壁以允许向细胞扩增袋输送所述培养基、生长因子和待培养的细胞，并在保持罩封闭的情况下收获该收获和储存构件中的所述细胞扩增袋的内容物。
US2012/0315693A1描述了一种细胞生长装置，其包括：多个细胞生长室，其分别具有可透过气体、不可透过液体的薄膜、相对表面、和至少一个连接至该可透过气体、不可透过液体的薄膜和该相对表面中的至少一者的侧壁；与至少一个细胞生长室的至少一个可透过气体、不可透过液体的薄膜相通的至少一个气管空间；其中该至少一个气管空间包括在该气管空间的周边边缘上的周边支撑物；其中在该气管空间的周边边缘上的支撑物被间隔开以产生多个间隙，从而允许气体从外部环境经由周边支撑物间的多个间隙流入气管空间中；及歧管，其中该歧管为多个细胞生长室中的至少一者提供通道。
US2009191620描述了一种多层细胞培养装置，其包括三个细胞培养室，每个细胞培养室具有至少一个端口，每个端口具有端口盖；两个整体气管室，其中每个端口经结构化并设置成与铰接的端口盖结合，以提供可释放液体的紧密密封。
WO08112845A2描述了一种用于细胞扩增的可弃式装置，其具有至少一个包括细胞生长区域及供给区域的生物反应器，该细胞生长区域与板相邻且经由薄膜与该供给区域分隔。该生物反应器包括多个具有粗糙表面或波纹表面的板。至少有薄膜片分隔相邻的板。相邻板间的两片材可由网状物分隔。
因此，与细胞培养装置相关的一个问题是由于人为操作以及将同一设备用于不同细胞培养所致的污染。
需要提供高度自动化的培养并制备待体内植入或移植的细胞的方法，以避免人为操作和污染，并提供一种由可弃式部件构成的装置，以防止不同细胞系间的交叉污染。
我们现发现了一种自动化细胞培养和收获装置，其自动地扩增、脱离并制备准备体内植入的细胞，其中与细胞和培养基接触的组件构成完全可弃式“盒”，以避免交叉污染并改进安全性。
因此，本发明的一个目的是一种自动化细胞培养装置，其自动地扩增、脱离和制备准备体内植入的细胞，其中与细胞和培养基接触的组件构成完全可弃式“盒”。
根据本发明的细胞培养和收获装置的所有与细胞和细胞培养基接触的组件是完全可弃式(一次性)的，以完全避免一种培养物与另一种培养物间的交叉污染，且无需洗涤或就地清洁装置的任何组件。
根据本发明的细胞培养和收获装置由一组不与细胞和细胞培养基接触的组件(阀、泵、传感器、致动马达、温度控制系统、非侵入性参数控制传感器)构成。该组组件可构成装置的“硬件”部分。
与细胞和培养基接触的组件组(管件系统、细胞培养室、细胞制备室、贮器、废料缸)可构成装置的可弃式部分，即“盒系统”或“盒”。
本发明的装置对象优选由经调节处于不同温度的分离隔室构成。
优选地，对其中发生细胞接种和扩增的第一隔室进行温度控制，以维持约37℃的温度，且其可包括细胞培养的关键组件(如培养室)和一定量的循环细胞培养基。
优选地，对第二隔室进行温度控制，以维持约4℃-约8℃的温度，且其可包括新鲜培养基贮器、和将在最终操作期用于细胞脱离的一定量的细胞脱离剂。
优选将新鲜培养基和脱离剂维持在低温，以保留其关键组分的生物活性。
优选地，根据本发明的装置具有培养基的连续循环，其确保营养物分布于细胞培养室内部，和有效率的气体交换，以将pH维持于约7。此外，培养基更换(即排出耗尽的培养基并重新填充新鲜培养基)对于维持最佳营养物浓度和在细胞数目增加后降低分解代谢产物浓度是重要的。
术语“营养物”或“营养液”，目的在于包括含有对于培养哺乳动物或脊椎动物细胞而言至关重要的那些营养物质的液体溶液。营养液还可影响所培养细胞的表型的特定变化。可用于本发明的适当营养物为本领域已知，且可包括胎牛血清、人自体血清、L-抗坏血酸、抗生素、氨基酸补充物、抗氧化剂、矿物质、细胞调节剂、活化剂或抑制剂。
在本发明的装置对象中，监测营养物和分解代谢产物浓度允许根据本领域已知的原理，即营养物浓度绝不应低于某一临界值且分解代谢产物浓度绝不应超过某一值，来自动执行培养基更换。
优选地，培养基更换操作包括从本发明的装置对象的第二隔室输入新鲜培养基，和将培养基排放至废料缸。
在培养粘附和生长在表面上的细胞的情况中，在细胞培养室内的均匀细胞接种是自动化装置中的常见问题。为确保待接种细胞的适当分布，优选将本发明的装置对象的细胞培养室设计成包括数个生长表面(层)和介于层与外部壳之间的空间。
在本发明的装置对象的接种期操作中，细胞培养室的旋转和空间的存在可确保细胞均匀分布于接种表面上。
本领域已知的自动化细胞培养装置的另一问题在于细胞脱离和收获。
本发明的另一目的是提供一种还可自动脱离粘附细胞并将其制备成可用于植入体内的自动化细胞培养装置。
本装置特征在于在细胞脱离期中伴随细胞培养室的旋转和振动一起自动施用脱离剂，其确保有效率和均匀的细胞收获。
在细胞制备室中，浓缩细胞同时弃置脱离剂。
细胞培养室优选由任何生物相容性材料构成，优选地，外部壳和导流板(deflector)选自聚苯乙烯(PS)、聚碳酸酯(PC)、聚甲醛，且内部层由聚苯乙烯(PS)所构成，其最终经处理以增强细胞粘附。
优选地，用于细胞粘附的处理包括氧等离子体表面处理、聚-D-赖氨酸处理、活性肽丙烯酸酯处理。或者，可用适用于后续细胞脱离的物质来包被层。优选地，用添加或不添加粘着斑(adhesion focal plaque)组分(RGD)或细胞表面粘附分子的藻酸盐凝胶来包被层。
细胞制备室优选连接至本领域已知用于立即收集细胞(“输出细胞”)的注射器或其他提取装置。“输出细胞”指在装置中扩增后从装置收获的细胞。输出细胞优选用于临床或用于其他用途，如研究、临床试验等。
整个操作并不包括使细胞或细胞培养基与外部环境接触，因此避免了污染的可能性。此外，操作完全由自动致动器控制，因此防止可能的人为误差。
将在本装置中接种、扩增、制备和收获的优选细胞类型包括但不限于，由任何合意的组织(包括但不限于骨髓、脂肪组织、脐带血、脐带基质(umbilical cord matrix)、外周血、胎盘、胎盘血、肌肉、脑、肾和其他实体器官或分泌流体)制备的非胚胎干非生殖细胞。
优选地，将在本发明的装置对象中接种、扩增、制备和收获的细胞是可在体外存活并粘附增殖的细胞，优选是来源于脂肪的间充质干细胞(AD-MSC)、来源于骨髓的间充质干细胞(BMSC)。
本发明的装置对象的优选用途是在需要使粘附依赖型细胞(adhesion-dependentcells)悬浮以注射的所有应用中，如在骨关节炎(OA)(也称为退化性关节炎或退化性关节疾病或骨关节病)治疗或其他需要免疫调节和/或组织修复的疾病中，扩增间充质干细胞用于体内细胞治疗。
因此，本发明的另一目的是使用自动化细胞培养装置用于扩增和制备供哺乳动物体内细胞治疗用的间充质干细胞，优选用于其中需要使粘附依赖型细胞悬浮以注射的所有应用，更优选用于制造供治疗骨关节炎或其他需要免疫调节及/或组织修复的疾病的细胞。
附图简述
图1呈现了显示本发明的优选实施方案的自动化细胞培养和收获装置的整体框图。
图2呈现了4层培养室(A：俯视图；B：纵向剖面图)。
图3呈现了显示本发明优选实施方案的自动化细胞培养和收获装置的主要组件的详细视图。
发明详述
图1包括允许细胞培养基在装置的不同组件内循环和流动的管件系统1；在其中接种、生长和脱离细胞的细胞培养室5，其允许由操作人员通过入口输入细胞(输入)；外部新鲜细胞培养基贮器2；内部缓冲细胞培养基贮器3；外部细胞脱离剂贮器7；气体混合物瓶6，其连接至内部缓冲剂贮器3；废料缸4；细胞制备室8，其允许由操作人员通过出口输出制备的细胞(输出)；参数获取系统9，其连接至参数监测系统10。
通过入口的构件将细胞注入至细胞培养室5中；细胞培养基在管件系统1内从内部缓冲剂贮器3连续流动至细胞培养室5，并通过参数控制系统9循环回同一缓冲剂贮器3；定期地，根据参数获取系统9和监测系统10在一定的参数值下，将确定量的新鲜细胞培养基从外部新鲜培养基贮器2输入至内部缓冲剂培养基贮器3，同时将相同量排出至废料缸4；在细胞培养结束时，将确定量的细胞脱离剂从外部细胞脱离剂贮器7输入至细胞培养室5中；在细胞脱离操作所需的确定时间后，将脱离细胞输出至细胞制备室8；其中，当将过量的脱离剂排出至废料缸4时，可通过出口输出所需体积的制备细胞。
图2呈现了细胞培养室，其连接至管件系统以从室的一侧输入细胞培养基1a，并使其在室外部流至另一侧1b。壳2内包含数个在其上粘附及生长细胞的层3，且其通过多个锚定器4与壳2相连。这决定了空间5，其在随后操作期中允许细胞和培养基优选分布。各层3由平坦表面制成，其在其中心处具有圆形间隙6。壳2以及导流板7可由任何生物相容性材料构成。适当材料的非排他性实例为聚苯乙烯(PS)、聚碳酸酯(PC)、聚甲醛等等。层3可由任何适用于培养细胞的生物相容性材料构成，其最终经处理以增进细胞粘附。适当材料的非排他性实例为聚苯乙烯(PS)。用于细胞粘附处理的非排他性实例为氧等离子体表面处理、聚-D-赖氨酸处理、活性肽丙烯酸酯处理。或者，可用适用于后续细胞脱离的物质来包被层。涂层的非排他性实例是添加或不添加粘着斑组分(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)或其他分子的藻酸盐凝胶。
在室的两侧上的导流板7由多个管(每层一个管8)组成，以区分进入的细胞培养基流1a和离开的细胞培养基流1b，并提供培养基的准确分配至各层3。位于室顶部、置于系列圆形间隙6上方的注射器插塞11允许将待接种的细胞初始注入至所述层上。细胞可通过注射针的方式或任何其他适合连接至插塞且在无菌条件下穿入至室中的构件注射。圆形间隙的存在允许注射针(或任何其他适当构件)不仅到达上层，而且到达室的最内部空间，以确保细胞在接种期中更均匀的分布。
将细胞注射于室内后，在接种期通过与用于旋转的致动马达连结的旋转齿轮9的方式在整个培养室保持温和旋转。旋转确保细胞的更准确的分布，且还归因于在壳与层之间存在空间5，其允许培养基和细胞在旋转期间沿室的内壁循环。由于室的两侧上存在自由旋转接头10，因此管件系统支持室的旋转。温和旋转可仅在注射后发生于一段短暂的确定时间，以及在持续直至24小时的接种期的稍后时刻发生一段短暂的确定时间。在此期间，细胞将粘附于层的上及下表面两者上。接种期后，细胞培养基的流动连同室的旋转允许未粘附细胞流至室外。
图3呈现了细胞培养和收获装置，其中操作始于通过注射器1或任何其他适当构件的方式通过插塞3将细胞注射至细胞培养室2中。于非排他性实例中，插塞可为硅隔片、或任何其他确保注射期间无菌性的构件。接种包括细胞培养室2的数次短暂温和旋转(其由用于旋转的齿轮系统4和其致动马达5实现)、和数个其间室保持静止、其层呈水平位置的长时间间隔。在接种期中，没有培养基流经过整个细胞培养室。接种期总时间的非排他性实例为6至24小时。将在接种期中致动的旋转次数的非排他性实例为1至12次。各次旋转的持续时间的非排他性实例为1至5分钟。上述操作可称为“接种期”。
管件系统14连接内部细胞培养基缓冲剂贮器6至细胞培养室2且至装置的其他组件，其运送细胞培养基，这是由蠕动泵15或任何其他构件的作用驱动的。管件系统可由任何适当的生物相容性材料制成。生物相容性管件材料的非排他性实例为硅酮(silicone)、聚氯乙烯(PVC)、BPT。贮器瓶6还与气体混合物瓶25连接，以提供与细胞培养基的气体交换，并在细胞培养基内存在碳酸盐缓冲剂的情况中维持pH。在该实例中，10b、11b和12b是通常关闭的阀(在实例中为电动阀)，而10、11和12是通常开启的阀(在实例中为电动阀)。由于上述的阀配置，泵15的作用驱动细胞培养基9从贮器瓶6至细胞培养室2，并通过14b管件部件回到贮器瓶6。上述培养基的流动可称作“循环期”。
接种期后，培养基贯穿整个细胞培养室流动将确保移除未粘附的细胞并更换细胞培养室内的细胞培养基。通过关闭通常开启的阀11并打开通常关闭的阀11b，培养基将从细胞培养室流至废料缸13。上述培养基的流动可称作“洗涤期”，且可利用一定量经缓冲的细胞培养基。
洗涤期后，已排出至废料缸13的细胞培养基的量应由相同量的新鲜细胞培养基取代。为此，泵7(或任何其他适当构件)和连接贮器瓶6与外部新鲜培养基贮器8的管件系统的作用确保将新鲜培养基输入至贮器瓶中。上述新鲜培养基的流动可称作“再填充期”。
粘附细胞在细胞培养室内的生长(或者表示为“扩增”)持续一段时间，所述时间是获得预期的细胞数目所必需的，即获得层表面可获得的最大细胞数目所需的时间。在细胞生长期间，循环期与数个洗涤期和再填充期交替。洗涤期和再填充期的数目及其时间取决于数个表征循环细胞培养基的参数的值。可使用数个参数传感器(在本实施方案中为28和29)来监测、记录和控制循环培养基的组成。根据设定在特定参数值和特定临界值的传感器数据，在循环期后可以是洗涤和再填充期，以恢复循环培养基的适当组成。该操作由自动地作用于上述的阀11、11b和泵7的参数控制单元来自动地控制。待监测、记录和控制的参数的非排他性实例为pH、葡萄糖浓度、溶氧浓度、乳酸浓度。具体而言，在非排他性实例中，葡萄糖消耗速率可源自细胞生长期中的葡萄糖浓度动力学，其被用作室内细胞浓度的间接指标。因此，细胞生长期的终点可由装置自动决定。
如上文所述，适当的细胞生长后，需要使在室内生长于层上的粘附细胞脱离。为此，通过关闭阀10和11并通过打开阀11b(同时阀10b和12b保持关闭)；因为细胞培养基被排至废料缸13，泵15的作用将导致培养室排空。上述培养基的弃置可称作“排空期”。
一旦细胞培养室排空(即内部不存在细胞培养基)，即打开阀10b(同时阀10保持关闭，如上文所述)，以允许泵15使一定量的脱离剂16流入细胞培养室内。脱离剂的量是预定的且足以填充细胞培养室。脱离剂的非排他性实例为：柠檬酸盐(当细胞培养层用藻酸盐凝胶包被时)、胰蛋白酶/EDTA、胶原蛋白酶(当细胞粘附于塑胶上时)。
伴随脱离剂对粘附细胞的脱离作用，为了改进脱离效率，可进行细胞培养室的快速旋转。如上文所述，旋转通过用于供旋转的齿轮系统4及其致动马达5进行。此外，为进一步改进细胞脱离效率，可使细胞培养室经受由振动马达17所致动的振动移动。振动时间的非排他性实例大约为30秒，同时振动强度为0.1至10赫兹(Hertz)。上述细胞的脱离可称作“脱离期”。
细胞脱离后，关闭阀12，同时打开阀12b；由此，泵15将使脱离细胞连同脱离剂一起流至细胞培养室外，到达细胞制备室19。细胞制备室在其圆锥形底部处设有过滤器20。该过滤器的孔隙设计成允许脱离剂和任何其他液体物质通过，同时阻挡细胞。过滤器20的孔隙尺寸的非排他性实例为1微米。一旦细胞制备室填充了脱离的细胞和脱离剂，泵18将使液体通过过滤器20流向废料缸13，同时在制备室的圆锥形底部留下浓缩细胞21。上述细胞的浓缩和脱离剂的弃置可称作“制备期”。
为收获浓缩细胞，可将注射器23(或任何其他适当构件)连接至插塞22。在非排他性实例中，插塞可为硅隔片、或任何其他确保注射期间无菌性的构件。可将注射器活塞23b连接至活塞致动马达24。致动马达向上拉引活塞，以用脱离的浓缩细胞填充注射器。在非排他性实例中，致动马达还可上下拉动活塞数次，以确保浓缩细胞的均匀再悬浮。注射器还可包含一种或多种适当物质如稀释剂、防腐剂、载剂。这些物质的非排他性实例为玻尿酸溶液、生理溶液、盐水缓冲液、胶原蛋白溶液、富血小板血浆(PRP)。上述从细胞制备室最终收获细胞可称作“收获期”。
可将含有收获的细胞和如上文所述的最终其他稀释剂的注射器23(或任何其他适当构件)取出并用于直接将细胞植入体内。植入部位的非排他性实例为关节、乳房组织、心脏、肝脏、脑脊液(CSF)、血液。
包括细胞培养室2、缓冲培养基贮器6、管件系统14的所有上述组件及相关组件包含在通过适当温度控制系统26进行了温度控制的隔室(如图3所示)内。用于接种和扩增细胞的最佳温度为37℃。气体交换瓶25、废料缸13、细胞制备室19和相关组件可以是未经温度控制的，且可在室温作用。外部新鲜培养基贮器8和脱离剂16包含在通过适当温度控制系统27进行了温度控制的分离隔室(如图3所示)内。培养基贮器和脱离剂维持在约4℃-约8℃的温度。
参照图3，构成可弃式“盒”系统的组件为：2、3、6、14、19、20、22、23、23b。组件8、13和16也为可弃式，且通过管件系统的方式适当地连接至“盒”系统。

Claims (15)

1.一种自动化细胞培养和收获装置，其扩增、脱离和制备准备在体内植入的细胞，其中与细胞和培养基接触的组件构成完全可弃式“盒”。
2.根据权利要求1的自动化细胞培养和收获装置，其包括允许细胞培养基在装置的不同组件内循环和流动的管件系统1；在其中接种、生长和脱离细胞的细胞培养室5，所述细胞培养室5允许由操作人员通过入口输入细胞(输入)；外部新鲜细胞培养基贮器2；内部缓冲细胞培养基贮器3；外部细胞脱离剂贮器7；气体混合物瓶6，其连接至内部缓冲剂贮器3；废料缸4；细胞制备室8，其允许由操作人员通过出口输出所制备细胞(输出)；连接至参数监测系统10的参数获取系统9。
3.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其由经调节处于不同温度的分离隔室构成。
4.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其中使第一隔室经温度控制以维持约37℃的温度，且其包括细胞培养室和一定量的循环细胞培养基；并使第二隔室经温度控制以维持约4℃-约8℃的温度，且其包括新鲜培养基贮器、和一定量的细胞脱离剂。
5.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其提供有培养基的连续循环。
6.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养装置，其中所述培养基更换操作包括从所述装置的第二隔室输入新鲜培养基，和将培养基排出至废料缸。
7.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其中所述培养室包括数个生长表面(层)和介于层与外部壳之间的空间。
8.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其中所述细胞培养室由任何生物相容性材料构成，优选地，外部壳及导流板选自聚苯乙烯(PS)、聚碳酸酯(PC)、聚甲醛，且内部层由聚苯乙烯(PS)所构成，其最终经处理用于增强细胞粘附。
9.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其中所述用于细胞粘附的处理包括氧等离子体表面处理、聚-D-赖氨酸处理、活性肽丙烯酸酯处理，或用适用于后续细胞脱离的物质的层包被，优选地，用添加或不添加粘着斑组分(RGD)或分子的藻酸盐凝胶包被。
10.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其中在细胞脱离期中伴随旋转及振动细胞培养室一起自动施用脱离剂。
11.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其中所述细胞制备室连接至用于立即收集细胞的注射器或其他提取装置，所述细胞优选用于临床或其他目的，如研究、临床试验等。
12.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其中所述待接种、扩增、制备和收获的细胞是由任何合意的组织，优选骨髓、脂肪组织、脐带血、脐带基质、外周血、胎盘、胎盘血、肌肉、脑、肾和其他实体器官或分泌流体所制备的非胚胎干非生殖细胞。
13.如前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置，其中可注入至细胞培养室中的细胞是可于体外存活和粘附增殖的细胞，优选为来源于脂肪的间充质干细胞(AD-MSC)或来源于骨髓的间充质干细胞(BMSC)。
14.一种前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置的用途，其用于扩增和制备供哺乳动物体内细胞治疗用的间充质干细胞。
15.一种前述权利要求任一项的自动化细胞培养和收获装置的用途，其用于生成供治疗骨关节炎或其他需要免疫调节及/或组织修复的疾病的细胞。
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