CN106188083A - 一种从艾叶中提取1，8‑桉叶素挥发油的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从艾叶中提取1,8‑桉叶素挥发油的方法，包括如下步骤：预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20‑25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料；1,8‑桉叶素挥发油的提取：A将艾叶原料与7‑10倍水加入渗漉器中渗漉提取，取渗漉液，除去废渣；B将渗漉液加入蒸馏器，加入提取助剂，加温至70℃‑75℃，蒸馏提取70‑90min，得到油水混合物；C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，静置分层24小时；D分离提纯后得到的1,8‑桉叶素挥发油。

Description

一种从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油的方法
技术领域
本发明属于药液提取技术领域，具体涉及一种艾草有效成分的提取方法。
背景技术
艾草（Artemisia argyi H. Lév. & Vaniot），别名：萧茅、冰台、遏草、香艾、蕲艾、艾萧、艾蒿、艾蒿、蓬藁、艾﹑灸草﹑医草﹑黄草﹑艾绒等。多年生草本或略成半灌木状。现代药理发现，艾叶挥发油含量多，1,8-桉叶素（占50%以上），其它有α-侧柏酮、倍半萜烯醇及其酯。风干叶含矿物质10.13%，脂肪2.59%，蛋白质 25.85%，以及维生素A、B1、B2、C等。全草入药，有温经、去湿、散寒、止血、消炎、平喘、止咳、安胎、抗过敏等作用。艾叶晒干捣碎得“艾绒”，制艾条供艾灸用，又可作“印泥”的原料。《本草纲目》记载：艾以叶入药，性温、味苦、无毒、纯阳之性、通十二经、具回阳、理气血、逐湿寒、止血安胎等功效，亦常用于针灸。其在妇产科多个方面均有作用，调经止血﹑安胎止崩﹑散寒除湿之效。治月经不调﹑经痛腹痛﹑流产﹑子宫出血， 根治风湿性关节炎﹑头风﹑月内风等。因它可削冰令圆，又可炙百病，为医家最常用之药。现代实验研究证明，艾叶具有抗菌及抗病毒作用；平喘、镇咳及祛痰作用；止血及抗凝血作用；镇静及抗过敏作用；护肝利胆作用等。艾草可作“艾叶茶”、“艾叶汤”、“艾叶粥”等食谱，以增强人体对疾病的抵抗能力。故艾草又被称为“医草”，台湾正流行的“药草浴”，大多就是选用艾草。
对艾草中的有效成分提取，对最大限度的发挥艾草的药用价值有重要意义， 目前针对艾草中有效成分的提取分为三类，一类为对艾草中挥发油的提取，一类为对艾草中黄酮类物质的提取。如中国专利：申请公布号 CN 103421609 A为的专利：一种从植物艾蒿中制取精油的生产方法，步骤如下：1.艾 蒿的预处理2.艾蒿粗油的压榨；3.艾蒿粗油水合物静置分层；4.艾蒿精油的精馏：将静置分层 的上部分含艾蒿精油的水合液体投入精馏工序精 馏，即得到艾蒿精油。尾渣的处理，尾渣含有有机质，将压榨后的残渣经粉碎即可以得到含45%以上有机质的原料。申请公布号为CN1580215A的专利：艾蒿油提取工艺：步骤为：先将艾蒿除杂，然后蒸馏；冷却后分离，得到精油。申请公布号为：CN 102988442 A的专利：一种艾草液的提取。步骤为：现将鲜艾草叶洗净，放到石油醚中浸泡一段时间后，冷却后，放至乙酸乙酯中浸泡，三次回流提取后，冷却得到艾草液。而对于黄酮类的提取，有如下已知专利或发明：授权公开号为：CN101264117B的发明：艾蒿黄酮的提取工艺及应用，其方法为：以艾蒿为原料，加水提取、减压或常压浓缩、喷雾干燥，再经石油醚萃取、乙醇或乙酸乙酯或乙酸丁酯萃取，最后经浓缩、干燥，得到艾蒿黄酮成品，其发明还公开了艾蒿黄酮作为配制治疗面部痤疮的药物原料的应用。申请公开号为CN101791326A的专利：艾蒿黄酮的提取、纯化方法，其提取步骤为：将艾蒿原粉在40-59℃条件下加入配比为8:2的规格为60-90的石油醚和乙酸乙酯混合液，用渗漉法进行脱脂脱色，得到去脂艾蒿粉，将去脂艾蒿粉在60-80℃条件下加入70%乙醇，用渗漉法得到的提取液2浓缩至原体积的五分之一，加酸调节PH直至有沉淀物出现，离心得艾蒿黄酮粗品；将艾蒿黄酮粗品用70%乙醇溶解后，加5%三氯乙酸，经过滤甲酸离心后得到艾蒿黄酮精品。可以看出，以上提取方案均是针对某类或某种物质成分进行定向选择提取，在提取挥发油的同时，黄酮类及萜类物质将损失掉，在提取黄酮类物质时，同样如此，会损失掉挥发油类物质，还有一类为粗提取，即只将艾草做水提取，得到的物质应用至相关用途，但是在粗提过程中，如果不限定条件，得到的只是一类复杂的混合物，对药效的发挥有很大的限制作用。
1,8-桉叶素为无色油状透明液体，有樟脑气息和清凉的草药味道。沸点176～177℃，熔点1～1.5℃，凝固点1℃，闪点47～48℃。溶于乙醇(1mL溶于5mL 60%乙醇)、乙醚、氯仿、冰醋酸、丙二醇、甘油和大多数非挥发性油，微溶于水。香气检出阈值1～64μg/kg。天然品存在于桉叶油等270余种天然精油中，其多用于止咳糖和薄荷中，1,8-桉叶素挥发油为艾叶中挥发油中一种特定组分，而目前上述介绍的挥发油提取方法均未提及1,8-桉叶素挥发油的提取方法。
发明内容
本发明目的是提供一种从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油的方法及其用途，为进一步开发艾叶资源提供了理论基础。
本研究中从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油的方法，包括如下步骤：
一、预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20-25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料，备用。
二、1,8-桉叶素挥发油的提取：
A将艾叶原料与7-10倍水加入渗漉器中，渗漉时间7-10天，取渗漉液，除去废渣。
B将渗漉液加入蒸馏器，加入亮氨酸、甘油或乳酸中的任意一种的提取助剂，加温至70℃-75℃，蒸馏提取70-90min，得到油水混合物；发明人经研究发现，通过筛选合适的提取助剂有助于快速提取艾叶中的1,8-桉叶素挥发油，所选助剂应具有以下特点：无毒、无腐蚀性、热稳定性好，能吸附低萜类化物；助剂与桉叶油发生缔合作用，含有羟基的助剂，羟基与桉叶油素分子的氢原子形成氢键，导热相对于不加助剂时需要更多的热量来破坏氢键，相当于增大了桉叶油的沸点，使桉叶油不从系统中蒸馏出来或是被破坏。发明人筛选了多种提取助剂，发现亮氨酸、甘油和乳酸这三种助剂易溶于水，提取出来的桉叶油能完全与水和助剂分离 。
C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，400目筛过滤后静置分层24小时。
D分离提纯：将由C步骤得到的静置分层的油水混合物精馏，收集68-73℃的馏分，即得到含量为85-95%的1,8-桉叶素挥发油。
所述提取助剂的使用计量为：按照重量份计：亮氨酸：艾叶为1-2：10；甘油：艾叶为2-5：10；乳酸：艾叶为1-3：10。
与现有技术相比，本发明的有益效果为 ：
一、发明从艾叶中提取1,8-桉叶素挥发油制备方法简单、工艺成熟、成本低，稳定可靠，并经多次以上试验，均取得了相同或相近似的结果。
二、本发明从艾叶中提取的1,8-桉叶素挥发油具有明显的止咳祛痰效果。前期实验发现，其对小白鼠止咳作用具有明显的延长潜伏期，减少咳嗽次数的效果；而通过酚红排出量的实验测试，发现使用过1,8-桉叶素挥发油之后，其能明显促进酚红的排出量，说明其也具有显著的祛痰效果。
三、从艾叶中提取的1,8-桉叶素挥发油改变了传统用药习惯，由于其具有较高的效果，可以将其开发为服用、携带方便的止咳祛痰类药剂，不仅比传统的化学药剂安全性高，也能达到相同效果，同时，中药制剂能延缓抗药性的产生，临床意义大，开发前景广阔。
具体实施方式
实施例1 从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油方法一
一、预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20-25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料，备用。
二、1,8-桉叶素挥发油的提取：
A将艾叶原料与7倍水加入渗漉器中，渗漉时间7-10天，取渗漉液，除去废渣。
B将渗漉液加入蒸馏器，加入亮氨酸，亮氨酸：艾叶重量比为:1：2；加温至70℃，蒸馏提取70-90min，得到油水混合物。
C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，400目筛过滤后静置分层24小时。
D分离提纯：将由C步骤得到的静置分层的油水混合物精馏，收集68-73℃的馏分，即得到含量为88.92%的1.8-桉叶素挥发油。
实施例2 从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油方法二
一、预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20-25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料，备用。
二、1,8-桉叶素挥发油的提取：
A将艾叶原料与10倍水加入渗漉器中，渗漉时间7-10天，取渗漉液，除去废渣。
B将渗漉液加入蒸馏器，加入亮氨酸，亮氨酸：艾叶重量比为：1：10；加温:75℃，蒸馏提取70-90min，得到油水混合物。
C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，400目筛过滤后静置分层24小时。
D分离提纯：将由C步骤得到的静置分层的油水混合物精馏，收集68-73℃的馏分，即得到含量为90.93%的1,8-桉叶素挥发油。
实施例3 从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油方法三
一、预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20-25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料，备用。
二、1,8-桉叶素挥发油的提取：
A将艾叶原料与9倍水加入渗漉器中，渗漉时间7-10天，取渗漉液，除去废渣。
B将渗漉液加入蒸馏器，加入甘油，甘油与艾叶重量比为：1:2；加温至70℃℃，蒸馏提取70-90min，得到油水混合物。
C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，400目筛过滤后静置分层24小时。
D分离提纯：将由C步骤得到的静置分层的油水混合物精馏，收集68-73℃的馏分，即得到含量为85.09%的1,8-桉叶素挥发油。
实施例4 从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油方法四
一、预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20-25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料，备用。
二、1,8-桉叶素挥发油的提取：
A将艾叶原料与8倍水加入渗漉器中，渗漉时间7-10天，取渗漉液，除去废渣。
B将渗漉液加入蒸馏器，加入甘油，甘油与艾叶重量比为：1:5；加温至72℃，蒸馏提取90min，得到油水混合物。
C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，400目筛过滤后静置分层24小时。
D分离提纯：将由C步骤得到的静置分层的油水混合物精馏，收集68-73℃的馏分，即得到含量为89.87%的1,8-桉叶素挥发油。
实施例5 从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油方法五
一、预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20-25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料，备用。
二、1,8-桉叶素挥发油的提取：
A将艾叶原料与7倍水加入渗漉器中，渗漉时间7-10天，取渗漉液，除去废渣。
B将渗漉液加入蒸馏器，加入乳酸，乳酸与艾叶重量比为：1:3；加温至73℃，蒸馏提取70-90min，得到油水混合物。
C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，400目筛过滤后静置分层24小时。
D分离提纯：将由C步骤得到的静置分层的油水混合物精馏，收集68-73℃的馏分，即得到含量为94.00%的1,8-桉叶素挥发油。
实施例6 从艾叶中提取1，8-桉叶素挥发油方法六
一、预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20-25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料，备用。
二、1,8-桉叶素挥发油的提取：
A将艾叶原料与8倍水加入渗漉器中，渗漉时间7-10天，取渗漉液，除去废渣。
B将渗漉液加入蒸馏器，加入乳酸，乳酸与艾叶重量比为：1:10；加温至75℃，蒸馏提取80min，得到油水混合物。
C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，400目筛过滤后静置分层24小时。
D分离提纯：将由C步骤得到的静置分层的油水混合物精馏，收集68-73℃的馏分，即得到含量为95.00%的1,8-桉叶素挥发油。
效果实施例
从艾叶中提取1,8-桉叶素挥发油，在制备止咳药品中的应用。发明人对从艾叶中提取的1.8-桉叶素挥发油的止咳化痰作用进行了深入研究，结果如下：
一、从艾叶中提取1,8-桉叶素挥发油止咳药理作用研究
1、对小白鼠的止咳作用
采用氨水引咳法处理小白鼠：取小白鼠100只，雌雄各半，随机分为10组，分别为空白对照组（A）、1,8-桉叶素挥发油低剂量组（B）200mg/kg、1,8-桉叶素挥发油中剂量组（C）400mg/kg、1,8-桉叶素挥发油高剂量组（D）800mg/kg和阳性对照组（磷酸可待因，E）3mg/kg，每组10只。各小鼠每天按0.15mL/10g体重灌胃给药1次，连续5天。末次给药后30min，将小白鼠逐一放入钟罩内，均匀地喷入氨水的气雾，持续30s，把小鼠移置钟罩外，立即进行观察，记录各小鼠的咳嗽潜伏期及3min内咳嗽次数（注：小鼠咳嗽的判断以剧烈收缩腹肌并张嘴为准，时可听到轻微咳嗽声，潜伏期指从开始喷雾到产生咳嗽的时间）。结果见表1：
注：与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表1可以看出，从艾叶中提取的1,8-桉叶素挥发油在800mg/kg剂量下，对小白鼠止咳作用与磷酸可待因3mg/kg剂量相当，均与对照组和低剂量组有显著化差异，说明从艾叶中提取的1,8-桉叶素挥发油有明显的止咳作用。
2.对小白鼠的祛痰实验
取健康小白鼠100只，雌雄各半，按体重和性别随机分为2组，每组50只，分别为空白对照组、艾叶1,8-桉叶素挥发油组。空白对照组给予同体积蒸馏水，给药剂量按人和小鼠20倍等效剂量折算，给药体积为1.0ml/100g。每日给药 1 次，连续6天。末次给药30min后，腹腔注射5%的酚红溶液(0.1ml/10g)，注射酚红30 min后处死小鼠，剪开颈部皮肤，小心分离气管（操作过程中避免出血），剥离气管周围组织，剪取自甲状软骨气管至气管分支处的一段气管。放进盛有 2 mL 0.9% 氯化钠的试管中，再加1mol/L NaOH 溶液0.1mL，后用紫外分光光度计于波长546nm 测吸光度值，用已知浓度酚红溶液做一标准曲线，根据曲线计算小鼠气管中酚红含量（μg/ml）并与空白组比较。
酚红标准曲线的制备：用万分之一（分析）天平精密称取一定量苯酚红，以 5%碳酸氢钠溶解，配成1ml含100ug酚红的溶液，然后依次稀释成每毫升含苯酚0.2、0.4、0.6、1、3、7、10ug，以5%碳酸氢钠溶液为空白对照，用分光光度计在546nm处，测吸光度值，每个浓度平行测定3次，取其平均值，以苯酚红剂量为横坐标，吸光度值为纵坐标，得酚红标准曲线方程Y =0.1544X+0.0031（r = 0.9998）。
本实施例艾叶1,8-桉叶素挥发油对小鼠气管酚红排泌量的影响：与空白对照组比较，艾叶1,8-桉叶素挥发油组能显著增加小鼠气管酚红排泌量，有显著性差异（P<0.05），表明艾叶1,8-桉叶素挥发油组具有祛痰作用。结果见表 2。
注：与空白组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表2可以看出，从艾叶中提取的1,8-桉叶素挥发油对小白鼠能明显促进酚红的排出量，有明显的止咳祛痰效果。

Claims (4)

1.一种从艾叶中提取1,8-桉叶素挥发油的方法，其特征在于：包括如下步骤：
一、预处理：将无病虫害侵染的艾草叶片洗净，除去表面水分，20-25℃下室内阴干，将叶片粉碎或切小段，即制得艾叶原料，备用；
二、1,8-桉叶素挥发油的提取：
A将艾叶原料与7-10倍水加入渗漉器中，渗漉时间7-10天，取渗漉液，除去废渣；
B将渗漉液加入蒸馏器，加入提取助剂，加温至70℃-75℃，蒸馏提取70-90min，得到油水混合物；
C将得到的油水混合物储存在不锈钢容器内，400目筛过滤后静置分层24小时；
D分离提纯：将由C步骤得到的静置分层的油水混合物精馏，收集68-73℃的馏分，即得到含量为85-95%的1,8-桉叶素挥发油。
2.根据权利要求1所述的从艾叶中提取1,8-桉叶素挥发油的方法，其特征在于：所述提取助剂为亮氨酸、甘油或乳酸中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的从艾叶中提取1,8-桉叶素挥发油的方法，其特征在于：所述提取助剂的使用计量为：按照重量份计：亮氨酸：艾叶为1-2：10；甘油：艾叶为2-5：10；乳酸：艾叶为1-3：10。
4.权利要求1-3任一项方法提取的1,8-桉叶素挥发油，在制备止咳药品中的应用。
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