CN106172259A - 一种昆虫病原线虫清洗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种昆虫病原线虫清洗方法，其特征在于：具体步骤包括：(a)将线虫连同固体培养物浸泡在水中通过通气震荡快速使线虫从碎海绵中爬出；(b)静置分离，让线虫通过筛网，留下海绵等杂质，通过压滤机过滤混有硅藻土粉的线虫原液快速得到干净的线虫；(c)封包储存。本发明针对的是昆虫病原线虫固体培养方法的线虫快速收获清洗储存问题，能够达到较好的收获效果，对线虫的损伤小，后期制成的线虫产品中线虫成活率高。
Description
【技术领域】
本发明涉及生物繁殖培养的技术领域，特别是昆虫病原线虫清洗方法的技术领域。
【背景技术】
近年来，作为新型生物杀虫剂，昆虫病原线虫已广泛应用于农林、牧草和卫生害虫的安全防治，受到国内外学者及商业部门的高度重视，并走向商品化生产。昆虫病原线虫肠道内携带共生细菌，它们互惠共生，作为昆虫的“蛔虫”与其体内专化性携带的共生细菌一起致死寄主昆虫。它们搜索寄主能力强，侵染致死有效性高，起效时间快，对人畜、天敌、环境安全，是一类重要的害虫生物防治因子，在工业化国家的生物农药市场中，此类线虫的市场销售额排生物杀虫剂第二位。目前全球已有超过60个国家的100多个实验室在研究此类有益生物。在我国，昆虫病原线虫也已经商业化生产，并应用于防治多种农林、草地、花卉以及卫生害虫等。
昆虫病原线虫是昆虫的专化性寄生天敌，是以昆虫为寄主的致病性线虫，一般专指斯氏线虫科和异小杆线虫科两类。它们是目前国际上新型的生物杀虫剂。与其它生物杀虫剂相比，这类线虫具有广泛的寄主范围；对寄主具主动搜索能力，特别对土栖性及钻蛀性害虫；对人畜、植物及有益生物安全，在欧美的一些国家可以豁免注册使用；易于大量培养；使用方便；在环境中可循环利用；能与多种化学和生物杀虫剂混用；并可用传统药械或灌溉设施来施用等优点。
昆虫病原线虫的培养经历了从活体培养到离体培养的过程，离体培养又从无菌培养到单菌培养。目前，线虫的商业化生产主要是通过无菌操作技术于人工培养基中加入单一共生细菌和无菌线虫完成的，即体外单菌培养系统。根据培养基质可分为固体培养和液体发酵培养，两者在技术上不尽相同，如培养容器、培养基配比、培养过程等，但培养过程的控制参数基本相同，一般来说，昆虫病原线虫的商业化生产过程包括共生菌的分离制备、线虫繁殖、收获、清洗及储存。
【发明内容】
本发明的目的就是解决现有技术中的问题，提出一种昆虫病原线虫清洗方法，能够提高侵染期线虫产量，降低生产成本，发展前景好。
为实现上述目的，本发明提出了一种昆虫病原线虫清洗方法，具体步骤包括：
(a)培养容器中包括培养基、碎海绵、共生细菌、线虫，将培养好的线虫收获，先将线虫连同固体培养物浸泡在装有清水的较大容器中，容器中设有活动筛网；容器中设有通气震荡装置；
(b)静置分离，让线虫通过筛网，留下海绵等杂质，95％左右的感染期线虫从培养物中爬出；
(c)产业化生产中将除去杂质的线虫原液按10:1的比例加入硅藻土粉，通过压滤机进行固液分离，压滤机压力设置小于3公斤；所得含线虫的硅藻土粉进行计数分包存储。
作为优选，所述(a)步骤中，当线虫培养到最佳时间后，感染期线虫的产量最高，其他虫态的线虫比例最小，这时应立即收获，线虫最佳培养周期为24d～28d。
作为优选，所述(b)步骤中，保存的线虫必须尽量去掉培养物中的杂质和其他虫态，否则会影响线虫的保存时间和质量。
作为优选，所述(b)步骤中，静置分离时间1小时，线虫沉降到容器底部，将筛网连同固体培养物移走，清洗3～4次，通过通气震荡海绵培养基可提高线虫收获率。
作为优选，所述(c)步骤中，利用硅藻土粉吸附线虫的保存方法，并且在含线虫的硅藻土粉中加入1％的苯并异噻啉，防止长霉菌，并将封包好的产品保存于4℃的冷库中。
本发明的有益效果：本发明针对的是昆虫病原线虫固体培养方法的线虫收获清洗储存问题，固体培养方法的生产成本要明显低于液体培养方法，固体培养方法生产的线虫致病力也要明显高于液体培养方法。因此，当市场需求量增大，固体培养方法更具产业化生产发展前景，本发明的清洗方法能够达到较好的收获效果，对线虫的损伤小，后期制成的线虫产品中线虫成活率高。
本发明的特征及优点将通过实施例进行详细说明。
【具体实施方式】
本发明一种昆虫病原线虫清洗方法，具体步骤包括：
(d)步骤一、培养容器中包括培养基、碎海绵、共生细菌、线虫，将培养好的线虫收获，先将线虫连同固体培养物浸泡在装有清水的较大容器中，容器中设有活动筛网；容器中设有通气震荡装置；
步骤二、静置分离，让线虫通过筛网，留下海绵等杂质，95％左右的感染期线虫从培养物中爬出；
步骤三、产业化生产中将除去杂质的线虫原液按10:1的比例加入硅藻土粉，通过压滤机进行固液分离，压滤机压力设置小于3公斤，所得含线虫的硅藻土粉进行计数分包存储。
所述(a)步骤中，当线虫培养到最佳时间后，感染期线虫的产量最高，其他虫态的线虫比例最小，这时应立即收获，线虫最佳培养周期为24d～28d。所述(b)步骤中，保存的线虫必须尽量去掉培养物中的杂质和其他虫态，否则会影响线虫的保存时间和质量。所述(b)步骤中，静置分离时间1小时，线虫沉降到容器底部，将筛网连同固体培养物移走，通过通气震荡海绵培养基可提高线虫收获率。所述(c)步骤中，利用硅藻土粉吸附线虫的保存方法，并且在含线虫的硅藻土粉中加入1％的苯并异噻啉，防止长霉菌，并将封包好的产品保存于4℃的冷库中。
本发明针对的是昆虫病原线虫固体培养方法的线虫收获清洗储存问题，固体培养方法的生产成本要明显低于液体培养方法，固体培养方法生产的线虫致病力也要明显高于液体培养方法。因此，当市场需求量增大，固体培养方法更具产业化生产发展前景，本发明的清洗方法能够解决固体培养快速回收干净线虫的难题，对线虫的损伤小，后期制成的线虫产品中线虫成活率高。
上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种昆虫病原线虫清洗方法，其特征在于：具体步骤包括：
(a)培养容器中包括培养基、碎海绵、共生细菌、线虫，将培养好的线虫收获，先将线虫连同固体培养物浸泡在装有清水的较大容器中，容器中设有活动筛网；容器中带有通气震荡装置
(b)静置分离，让线虫通过筛网，留下海绵等杂质，95％左右的感染期线虫从培养物中爬出；
(c)产业化生产中将除去杂质的线虫原液按10:1的比例加入硅藻土粉，通过压滤机进行固液分离，压滤机压力设置小于3公斤，所得含线虫的硅藻土粉进行计数分包存储。
2.如权利要求1所述一种昆虫病原线虫清洗方法，其特征在于：所述(a)步骤中，当线虫培养到最佳时间后，感染期线虫的产量最高，其他虫态的线虫比例最小，这时应立即收获，线虫最佳培养周期为24d～28d。
3.如权利要求1所述一种昆虫病原线虫清洗方法，其特征在于：所述(b)步骤中，保存的线虫必须尽量去掉培养物中的杂质和其他虫态，否则会影响线虫的保存时间和质量。
4.如权利要求1所述一种昆虫病原线虫清洗方法，其特征在于：所述(b)步骤中，静置分离时间1小时，线虫沉降到容器底部，将筛网连同固体培养物移走，通过通气震荡海绵培养基可提高线虫收获率。
5.如权利要求1所述一种昆虫病原线虫清洗方法，其特征在于：所述(c)步骤中，利用硅藻土粉吸附线虫的保存方法，并且在含线虫的硅藻土粉中加入1％的苯并异噻唑啉，防止长霉菌，并将封包好的产品保存于4℃的冷库中。
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