CN106163526B - 抗性痤疮的治疗 - Google Patents

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Abstract

本公开文本总体而言涉及用于对一般意义上的细菌感染、特别是抗生素抗性病原体的细菌感染进行治疗的新型分子、组合物和制剂。

Description

抗性痤疮的治疗
相关申请
本申请要求2014年1月29日提交的印度专利申请No.269/DEL/2014和2014年11月10日提交的印度专利申请No.3247/DEL/2014的优先权，以引用的方式将这两个申请的内容整体并入本文。
技术领域
本公开文本总体而言涉及用于对一般意义上的细菌感染、特别是抗生素抗性病原体的细菌感染进行治疗的新型分子、组合物和制剂。
背景技术
寻常痤疮是影响全人类超过85％的皮肤病症。痤疮是通常发生在面部、颈部和上部躯干上的堵塞毛孔的医学病症的术语。以下是目前已知有助于形成寻常痤疮的四个主要因素：(1)增加的皮脂产量造成油性、油腻皮肤；(2)增加的细菌活性，通常归因于痤疮丙酸杆菌的细菌过剩；(3)毛囊或毛囊皮脂腺管道的堵塞(过度角化)；以及(4)炎症。堵塞的毛孔导致黑头、白头、丘疹或更深的肿块(例如囊肿或结节)。痤疮的严重情况可能导致永久性疤痕或毁容。
虽然寻常痤疮是多因素的，但共生皮肤细菌(痤疮丙酸杆菌)在痤疮病变的形成中起着主要作用。它是皮肤中毛囊皮脂腺、油腺的一种感染。在大多数情况下，痤疮的突然爆发可能与受影响的个体中皮脂的产生突然增加有关。在青春期，雄性激素起着至关重要的作用。它导致毛囊皮脂腺生产过剩的皮脂。这种情况通过从毛囊的内衬不规则地脱落死皮而进一步加剧。随着死皮细胞在油性环境中结块在一起，它们可形成堵塞毛囊孔的塞。由皮肤脱落而堵塞的孔被称为粉刺。
这为痤疮丙酸杆菌细菌的生长创建了非常有利的厌氧环境。痤疮丙酸杆菌的过度增殖导致毛囊壁的破坏，并且它向宿主免疫系统发送危险的信号。痤疮丙酸杆菌可通过活化固有免疫细胞上的Toll样受体2(TLR2)，在非常早期(引发微粉刺的)和晚期(炎性的)痤疮病变中触发固有的免疫反应。TLR活化最终触发了各种细胞因子(如IL-6、IL-8、IL-12和IL-17等)以及刺激其它宿主免疫细胞募集的趋化因子的表达[Jeremy等，2003；Thibout等，2014]。按照严重程度，痤疮病变包括：黑头、白头和丘疹；以及更严重的病变，如更深的肿块、囊肿和结节。
尽管可以商购获得各种非处方产品以消解痤疮病症(诸如局部使用的抗痤疮剂，包括水杨酸；硫；乳酸；乙醇酸；丙酮酸；脲；间苯二酚；N-乙酰半胱氨酸；视黄酸；异维甲酸；维甲酸；阿达帕林；tazoretene；抗细菌剂，诸如克林霉素、四环素和红霉素；维生素，诸如叶酸和烟酰胺；矿物质，诸如锌；过氧化苯甲酰；羟甲辛吡酮(octopirox)；三氯生；壬二酸；苯氧乙醇；苯氧丙醇；和类黄酮)，但这些试剂往往缺乏缓解痤疮病症的潜力，并且当设计为常规局部制剂时，可能具有消极的副作用。已对局部制剂的使用构成限制的主要挑战是缺乏具有理想物理化学特性和高载药量的制剂，该制剂通过随时间推移促进恰当程度的渗透而在施用部位保持显著高于MIC的浓度，但具有最低的全身暴露量。针对这些未满足的需求的制剂在治疗痤疮中可能是显著的进步。
此外，如在[Taglietti等，2008]中所述，当涉及将药物递送至特定部位时，有效的局部制剂可能是开发的最具挑战的产品之一。一旦将产品施用于皮肤上，在制剂、活性化合物和皮肤本身之间将发生复杂的相互作用。活性化合物按照菲克第一扩散定律渗透进入皮肤，菲克第一扩散定律描述了作为各种成分的浓度、治疗表面区域的尺寸和皮肤渗透性的函数的溶质传输速率。然而，皮肤的渗透性可受到多种因素的影响，诸如干燥、保湿或制剂中赋形剂的阻塞作用，其中，多种因素的组合可以对产品在治疗部位的释放进行调控。在痤疮的情况下，作用的位点在毛囊皮脂腺单元内部，因此，有效的抗痤疮制剂应当促进活性化合物向该极端亲脂环境中渗透。因此，有效的局部制剂需要在合适的配药容器中提供稳定的化学环境，以容纳可能具有不同(如果没有不相容的情况下)物理化学特性的多种化合物[Tagleitti等，2008]。一旦被施用，局部制剂必须与皮肤环境相互作用，这可以影响化合物的释放速率以达到足够的皮肤吸收，并且在皮肤上产生另外的物理效应(诸如干燥、阻塞或保湿)[Tagleitti等，2008]。例如，即使活性剂非常有效，并且经由全身途径起效，其在局部给药的情况下可能表现得完全不同，即，如果在毛囊皮脂腺(或皮肤)单元未达到所期望的浓度，将不能发挥有效的抗痤疮治疗作用。类似地，如果以不同的组成进行配制，分子或药物可能表现得完全不同，我们将在后面的实例中进行论证。类似地，两种分子或活性剂在相同的制剂或组合物中可能表现得完全不同。因此，由于无法预测何种组成以及何种活性剂与赋形剂的比例将提供所期望的效力益处，需要被配制用于局部皮肤施用的每种新的分子构成了新的并且独立的挑战。
此外，新出现的状况是痤疮丙酸杆菌菌株的进化，所述菌株对于当前批准用于治疗痤疮的抗生素药剂(诸如克林霉素、四环素和红霉素)不响应。而较早的教导是抗生素失效的出现归因于“抗性”菌株的选择，即，导致抗生素靶标改变的突变使它无效，但新的证据表明，抗生素的失效比这个简单的理解更加复杂。假设是，如果发展为抗性，即，抗生素的靶标被改变，有可能通过更换另一种抗生素来对状况进行治疗，后者的靶标在细菌中仍然完好。然而，最近的知识已经提出这种假设是错误的。例如，Regoes等，2004表明，即使在不存在任何抗性的情况下，细菌的子集可以只呈现出对抗生素耐受，即不经受溶菌。由于在暴露于抗生素的细菌中观察到的生理(代谢)和形态学变化，这种情况可能会出现。例如，公开于Science[Miller等，2004]的研究表明，响应于氨苄青霉素的SOS的短暂诱导可保护大肠杆菌对抗氨苄青霉素的杀菌作用。Regoes等，2004提出，耐受机制可能在一些抗生素之间跨越，即，抗生素A可能由于抗性的发展而变得无效，但可能的是，具有完全不同的作用靶标目标/机制、并且证明在不同的或敏感的细菌菌株中具有活性的抗生素B，也可能由于共享耐受机制而在抗性菌株中变得无效。事实上，已经观察到基因表达的巨大变化导致大肠杆菌在暴露于氨苄青霉素和氧氟沙星期间，其代谢的蛋白质合成、应激响应途径和细胞分裂发生变化，并且在该基因表达水平中的许多这样的这些变化在暴露于氨苄青霉素和氧氟沙星的细菌之间共享，表明尽管两种药物有不同的靶标，但不响应于氨苄青霉素的细菌可能也不响应于氧氟沙星。我们在筛选针对痤疮丙酸杆菌(对于克林霉素(林可酰胺)敏感或不响应的)的不同菌株的抗生素库时，看到了类似的观察结果。如图1A所示，不响应于克林霉素的痤疮丙酸杆菌菌株在将与克林霉素的不同部位作为靶标的罗红霉素(大环内酯)的存在下也表现出增加的存活能力[Keren等，2004]。在大肠杆菌中专门的存留细胞和多药耐受性机制(J.Bacteriol，186：8172-8180)表明，在基因表达中的随机波动引起专门的存留细胞的形成。如Regoes等，2004所称，针对抗生素的表型耐受性实际上可以预防清除。其结果是，虽然本领域中仍然需要用于治疗不响应于当前所用试剂(特别是克林霉素、米诺环素、红霉素或多西环素)的痤疮的组合物、制剂和方法，耐受的概率使得它难以预测可能针对痤疮丙酸杆菌起效的药物。
此外，正日益变得明显的是，在分子的化学结构中的细微变化可以显著改变针对靶蛋白的分子活性。例如，红霉素(大环内酯)和克林霉素结合于相似的50S核糖体单元，但晶体结构[Schulzen等，2001]示出了在药剂和存在于50S核糖体亚单元中的氨基酸残基之间不同的结合模式。存在已知的抗克林霉素的痤疮丙酸杆菌的细菌菌株，但其可以不响应于或易感于红霉素，反之亦然。有趣的是，泰利霉素(红霉素的半合成衍生物)在同时抗红霉素和克林霉素的细菌菌株中效果很好[Beitru等，2003]。类似地，在另一实例中，8-氯基团的引入显著增强了莫西沙星的效力，但在加替沙星中的类似变化则对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和大肠杆菌无效。此外，同一类分子对于不同细菌中相同的蛋白质靶标而言可以具有不同的亲和力。例如，已经发现，在金黄色葡萄球菌中，贝西沙星和莫西沙星均比环丙沙星更有效地结合至DNA促旋酶上。相反，在大肠杆菌中，结合至DNA促旋酶的环丙沙星比莫西沙星或贝西沙星更有效。类似地，发现贝西沙星是抗肺炎链球菌最有效的分子，其次是莫西沙星和环丙沙星[Cambau等，2009]。因此，无法基于它与针对相同微生物或不同微生物表现出活性的另一药物在结构上的相似性，来预测分子针对细菌或微生物的活性，即使它们可能具有相似的作用机制。事实上，如图1所示，我们观察到结构非常相似的分子对痤疮丙酸杆菌具有完全不同的活性，即，针对克林霉素敏感的和非抗性痤疮丙酸杆菌而言，其中一个无活性，而另一个则非常有效(图1A和图1B)。在我们将在后面讨论的另一实例中，我们观察到了非林可酰胺分子，其在抗克林霉素的痤疮丙酸杆菌菌株非常有效，但在克林霉素敏感的痤疮丙酸杆菌中无活性(图1A和图1B)。因此，在痤疮丙酸杆菌的系统筛选过程中，通过意外发现，出现了针对敏感的痤疮丙酸杆菌以及克林霉素、米诺环素、红霉素或多西环素无响应的痤疮丙酸杆菌发挥作用的有效药物的鉴别。
此外，虽然出现的问题在于不响应于本领域中公知的组合物和化合物的微生物抗性菌株的发展，但在本领域中仍需要更为有效的抗生素，其不仅作用于抗性微生物，还降低了微生物对这个新的抗生素产生抗性的风险。因此，作为有效的抗生素、并且还“防止”或降低抗性发展的分子可能是微生物疾病治疗中的一大进步。
痤疮的炎性特征已与靶向痤疮丙酸杆菌的宿主免疫应答相关联，体外研究表明，痤疮丙酸杆菌全细胞或细胞碎片刺激免疫细胞、角化细胞和皮脂细胞释放细胞因子和基质金属蛋白酶[Kim等，2002；Liu等，2005；Nagy等，2006；Lee等，2010]。虽然痤疮丙酸杆菌早已存在于卵泡区，但它们只在卵泡破裂后与真皮中的免疫细胞直接接触。先天免疫系统经由TLR2识别痤疮丙酸杆菌[Kim等，2002]，导致炎性细胞因子(包括IL-6、IL-8、IL-12等)的分泌。卵泡破裂发生在疾病过程的非常晚的阶段。但也有多个证据表明，由于活化的T辅助细胞1(Th1)淋巴细胞向早期痤疮病变募集，适应性免疫应答甚至在痤疮的早期阶段观察到的炎症中具有显著作用[Mouser等，2003]。因此，可能的痤疮治疗需要解决炎症，并应能够靶向这些炎症途径。
因此，痤疮的理想治疗需要在两个以上靶标起效的分子。下述分子可成为治疗痤疮的有力策略：针对抗生素敏感的痤疮丙酸杆菌菌株以及对克林霉素、米诺环素、红霉素和多西环素耐受的或无响应的痤疮丙酸杆菌菌株起效、并且还可以抑制痤疮丙酸杆菌活化的炎症介质的分子；或者靶向这些微生物中两个以上靶标同时还对痤疮丙酸杆菌活化的炎症介质发挥抑制作用、并且被配制为使得在局部施用之后在皮肤或毛囊皮脂腺区域具有所需浓度的活性剂的最佳制剂的分子。
发明内容
DART
设计并合成了一系列新的DART(双效合理疗法)分子，用于治疗由敏感的抗革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌的细菌感染，尤其是用于治愈痤疮以及不同的皮肤和皮肤结构感染，并且还防止抗性的发展。DART分子可以在微生物(诸如细菌)中通过两种截然不同的作用机制而增强其活性，并且在细菌的两个靶标位点的突变发展方面产生较少的机会。此外，它也可以通过对免疫应答(例如改变炎性细胞因子的水平)进行调控而在宿主水平发挥作用。
DART的设计包括两个活性结构域。两个活性结构域可选自不同的族，例如，β-内酰胺、β-内酰胺衍生物、2-喹诺酮和4-喹诺酮、在中央环系的C-6或C-7位连接有卤代原子(尤其是氟原子)的喹诺酮、在中央环系的C-8位连接有卤代原子(尤其是氯原子)的氟喹诺酮、四环素、噁唑烷酮、羟基吡啶酮、羟基吡啶酮衍生物、截短侧耳素、吡咯、硝基咪唑、单氧羧酸(monoxycarbolic acid)类、夫西地酸、磺胺、磺胺衍生物、类视黄醇(retinoid)、不同的脂肪酸(饱和的、不饱和的)、丙二醇和不同脂肪酸的甘油衍生物、以及各个族的策略性组合。在策略上通过将两个活性结构域以同时对于两个活性结构域而言正确的空间排列进行布置，以维持其抗细菌或抗真菌的功能而进行设计。总之，这些分子随炎症的减轻具有更快的细菌杀灭作用，并针对抗性病原体具有活性。这些分子还显示出抗性发展的较低风险。
在一些实施方式中，DART分子具有至少两个化学结构域。每个所述化学结构域结合至靶细胞中的截然不同的或不同的活性位点。在优选的实施方式中，可能存在第三个化学结构域。在进一步优选的实施方式中，所述两个化学结构域可以通过所述第三结构域结合在一起。在一些实施方式中，DART分子具有至少两种截然不同的或不同的抗细菌作用机制。在一些实施方式中，DART分子具有至少两种截然不同的或不同的抗痤疮作用机制。非限制性地，DARP可作用于相同的靶标上或作用于不同的靶标上，例如细菌和宿主。在一些实施方式中，DART作用于至少两个不同的靶标上。在一些实施方式中，靶标中的至少一个不同于受常规抗生素影响的靶标。
在一些实施方式中，DART分子具有β-内酰胺环和喹诺酮核、或喹诺酮核和硝基杂环、或β-内酰胺环和硝基杂环。
在一些实施方式中，DART具有至少两种截然不同的抗细菌作用机制，例如，抑制DNA促旋酶或拓扑异构酶IV和转肽酶介导的肽聚糖交联、抑制异戊二烯基焦磷酸酯和转肽酶介导的肽聚糖交联、抑制异戊二烯基焦磷酸酯和拓扑异构酶IV的DNA促旋酶、抑制叶酸合成和拓扑异构酶IV的DNA促旋酶、抑制叶酸合成和转肽酶介导的肽聚糖交联、抑制DNA促旋酶或拓扑异构酶IV和细菌中的30S核糖体亚基、抑制DNA促旋酶或拓扑异构酶IV和细菌中的50S亚基、抑制转肽酶介导的肽聚糖交联和细菌中的30S核糖体亚基或50S核糖体亚基、抑制叶酸合成和细菌中的30S亚基或50S亚基、或者抑制异戊二烯基焦磷酸酯和细菌中的30S亚基或50S亚基；或者引起DNA修饰，例如诱导的DNA缺口，同时抑制DNA负超螺旋的诱导；或者改变细胞膜的流动性，同时在DNA上发挥活性；或者改变细胞中金属离子的水平，同时诱导DNA变化。在一些实施方式中，第一作用机制是抗细菌作用，第二作用机制是抗炎或免疫调节。
在一些实施方式中，DART分子具有至少两种截然不同的治疗痤疮的作用机制，并对至少两个不同的靶标进行调控。在一些实施方式中，第一机制是抗细菌作用，第二作用机制是抑制角化细胞增殖和分化。在一些实施方式中，DART分子具有两种截然不同的痤疮治疗作用机制，并且其中，第一机制是抗细菌作用，第二作用机制是抗炎。在一些实施方式中，DART分子针对低响应于含有克林霉素、或多西环素、或红霉素、或米诺环素的抗痤疮产品的痤疮丙酸杆菌的形式有效。在一些实施方式中，它们针对痤疮丙酸杆菌的克林霉素、米诺环素、红霉素、和/或多西环素的耐受菌株或抗性菌株中的一种或多种有效。在一些实施方式中，它防止痤疮丙酸杆菌的抗性发展。
在一些实施方式中，DART分子具有至少两种截然不同的抗细菌作用机制，并对针对病原体的至少两个不同靶标进行调控。此类病原体的非限制性实例为：汉赛巴尔通体(Bartonella henselae)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)、胎儿弯曲菌(Campylobacterfetus)、沙眼衣原体(Chlamydiatrachomatis)、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chylamydiapsittaci)、Simkania negevensis、大肠杆菌(Escherichia coli)(例如O157:H7和K88)、埃立克次体(Ehrlichia chafeensis)、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、流感嗜血杆菌(Haemophilius influenzae)、杜克雷嗜血杆菌(Haemophilius ducreyi)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、百日咳杆菌(Bordetellapertussis)、伯纳特氏立克次氏体(Coxiella burnetii)、解脲支原体(Ureaplasmaurealyticum)、生殖支原体(Mycoplasma genitalium)、Trichomatis vaginalis、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、亚洲分枝杆菌(Mycobacterium asiaticum)、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)、隐藏分枝杆菌(Mycobacterium celatum)、龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)、偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)、日内瓦分枝杆菌(Mycobacterium genavense)、嗜血分枝杆菌(Mycobacterium haemophilum)、胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)、堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、玛尔魔分枝杆菌(Mycobacterium malmoense)、海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)、瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)、猿分枝杆菌(Mycobacterium simiae)、斯氏分枝杆菌(Mycobacterium szulgai)、溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)、蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diptheriae)、马红球菌(Rhodococcus equi)、埃氏立克次体(Rickettsia aeschlimannii)、非洲立克次体(Rickettsia africae)、康诺尔立克次体(Rickettsia conorii)、溶血隐秘杆菌(Arcanobacterium haemolyticum)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、单核胞增生李斯特菌(Lysteria monocytogenes)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitides)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)、牛链球菌(Streptococcus bovis)、溶血性链球菌(Streptococcus hemolyticus)、变形链球菌(Streptococcus mutans)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、肺炎葡萄球菌(Staphylococcus pneumoniae)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum)、念珠菌(Candida)、隐球菌(Cryptcooccus)、隐孢子虫(Cryptosporidium)、贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)、微孢子虫(Microsporidia)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystiscarinii)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、须毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)、环孢子虫(Cyclospora cayetanensis)、海伦脑炎微孢子虫(Encephalitozoon hellem)、家兔脑胞内原虫(Encephalitozoon cuniculi)，还有其它细菌、古生菌、原生动物和真菌。
在一些实施方式中，第一结构域和第二结构域独立地具有针对葡萄球菌属的抗细菌活性。葡萄球菌属的实例包括但不限于：金黄色葡萄球菌群(例如，金黄色葡萄球菌(S.aureus)、猿葡萄球菌(S.simiae))、耳葡萄球菌群(例如，耳葡萄球菌(S.auricularis))、肉葡萄球菌群(例如，肉葡萄球菌(S.carnosus)、康帝蒙提葡萄球菌(S.condimenti)、马赛葡萄球菌(S.massiliensis)、鱼发酵葡萄球菌(S.piscifermentans)、模仿葡萄球菌(S.simulans))、表皮葡萄球菌群(例如，头状葡萄球菌(S.capitis)、山羊葡萄球菌(S.caprae)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、解糖葡萄球菌(S.saccharolyticus))、溶血葡萄球菌群(例如，S.devriesei、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、人葡萄球菌(S.hominis))、猪中间葡萄球菌群(例如，产色葡萄球菌(S.chromogenes)、猫葡萄球菌(S.felis)、海豚葡萄球菌(S.delphini)、猪葡萄球菌(S.hyicus)、中间葡萄球菌(S.intermedius)、水獭葡萄球菌(S.lutrae)、田鼠葡萄球菌(S.microti)、蝇葡萄球菌(S.muscae)、伪中间葡萄球菌(S.pseudintermedius)、S.rostri、施莱福葡萄球菌(S.schleiferi))、路邓葡萄球菌群(例如，路邓葡萄球菌(lugdunensis))、腐生葡萄球菌群(例如，阿尔莱特葡萄球菌(S.arlettae)、孔氏葡萄球菌(S.cohnii)、马胃葡萄球菌(S.equorum)、鸡葡萄球菌(S.gallinarum)、克氏葡萄球菌(S.kloosii)、S.leei、尼泊尔葡萄球菌(S.nepalensis)、腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)、琥珀葡萄球菌(S.succinus)、木糖葡萄球菌(S.xylosus))、松鼠葡萄球菌群(例如，S.fleurettii、缓慢葡萄球菌(S.lentus)、松鼠葡萄球菌(S.sciuri)、S.stepanovicii、小牛葡萄球菌(S.vitulinus))、模仿葡萄球菌群(例如，模仿葡萄球菌(S.simulans))以及沃氏葡萄球菌群(例如，巴斯德葡萄球菌(S.pasteuri)、沃氏葡萄球菌(S.warneri))。
非限制性地，DART可以处于颗粒、粉末、悬浮液、分散体、乳剂、脂质体、微胶粒、小球、溶液、囊泡、聚集体、霜剂、凝胶剂等形式。
本公开文本还提供了包含DART作为活性药物成分(API)的制剂。
抗生素
本公开文本还提供了包含非DART的抗生素的制剂。在一些实施方式中，抗生素药剂是8-氯氟喹诺酮。示例性的8-氯氟喹诺酮包括但不限于贝西沙星、克林沙星和西他沙星。在一些实施方式中，所述制剂包含贝西沙星作为API。
在各种实施方式中，API可以被微粉化、悬浮或增溶。在一些实施方式中，API可处于颗粒、粉末、悬浮液、分散体、乳剂、脂质体、微胶粒、小球、溶液、囊泡和聚集体等形式。在一些实施方式中，API可处于载药体的形式。
在一些实施方式中，API可以是被涂布的。在其它一些实施方式中，API可以是未涂布的。
非限制性地，该制剂可处于选自于由以下组成的组的形式：洗剂、霜剂、凝胶剂、乳胶剂、油剂、精华素、粉剂、喷雾剂、软膏剂、溶液剂、悬浮剂、分散剂、糊剂、泡沫剂、剥离剂、薄膜剂、面膜剂、贴剂、棒状剂、滚珠剂、清洁液洗涤剂、清洁固体棒剂、糊剂、泡沫剂、粉剂、剃须膏剂和浸渍织物等。在一些实施方式中，该制剂处于选自于由以下组成的组的形式：凝胶剂、霜剂、喷雾剂、洁面剂、皂条、沐浴露、洗剂、悬浮载药凝胶、悬浮载药霜剂以及它们的任意组合。
在一些实施方式中，API或制剂可用于治疗不响应于抗生素的痤疮。具体而言，它针对低响应于含有克林霉素、或多西环素、或红霉素、或米诺环素的抗痤疮产品的痤疮丙酸杆菌的形式发挥更好的效力。
在一些实施方式中，API或制剂可通过发挥抗炎作用而用于治疗痤疮。
在一些实施方式中，API或制剂可通过杀死对克林霉素、米诺环素、红霉素和/或多西环素中的一种或多种敏感的痤疮丙酸杆菌菌株、并通过抑制痤疮丙酸杆菌介导的炎症通路发挥更好的效力(即，双重作用机制)而用于治疗痤疮。
组合
本公开文本还提供了包含两种以上抗生素药剂的组合的制剂。例如，8-氯氟喹诺酮与另一种抗痤疮剂组合。在一些实施方式中，该制剂包含两种以上不同的8-氯氟喹诺酮。在一些实施方式中，该制剂包含贝西沙星和类视黄醇，例如阿达帕林。
在一些实施方式中，该制剂包含抗痤疮剂和抗炎剂。例如，该制剂可包含8-氯氟喹诺酮和抗炎剂。
在一些实施方式中，两种以上的抗生素药剂可以是DART分子、或两种以上不同的DART分子。在一些实施方式中，两种以上抗生素药剂中的一种是DART，另一种不是DART分子。
如本文所述，本公开文本提供了包含DART和/或非DART抗生素药剂作为API的制剂。这样，用于制剂的示例性的API包括DART、抗细菌剂、抗真菌剂和抗痤疮剂。在一些实施方式中，API可处于载药体的形式，即，API可以被纳米化(nanotized)，涂布，制成囊泡、脂质体、乳剂等用于制剂。非限制性地，可以对该制剂或组合物进行配制，从而通过本领域中已知的任何合适的给药途径进行给药，所述途径包括但不限于局部(包括口腔和舌下)和口服或肠胃外途径(包括静脉内、肌内、皮下、经皮、气道(气溶胶)、肺和鼻内给药。
本文所公开的DART和制剂可用于对归因于革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌的细菌感染进行治疗。此外，DART针对病原体的抗性形式有效。此外，该DART有效地防止病原体抗性形式的发展。因此，本文所公开的DART和制剂可用于对抗生素耐受的或抗性的细菌感染进行治疗。示例性的细菌感染包括但不限于，汉赛巴尔通体(Bartonella henselae)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)、胎儿弯曲菌(Campylobacterfetus)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chylamydia psittaci)、Simkania negevensis、大肠杆菌(Escherichia coli)(例如O157:H7和K88)、埃立克次体(Ehrlichia chafeensis)、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、流感嗜血杆菌(Haemophilius influenzae)、杜克雷嗜血杆菌(Haemophilius ducreyi)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、百日咳杆菌(Bordetella pertussis)、伯纳特氏立克次氏体(Coxiella burnetii)、解脲支原体(Ureaplasma urealyticum)、生殖支原体(Mycoplasmagenitalium)、Trichomatis vaginalis、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、亚洲分枝杆菌(Mycobacterium asiaticum)、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)、隐藏分枝杆菌(Mycobacterium celatum)、龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)、偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)、日内瓦分枝杆菌(Mycobacterium genavense)、嗜血分枝杆菌(Mycobacterium haemophilum)、胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)、堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、玛尔魔分枝杆菌(Mycobacterium malmoense)、海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)、瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)、猿分枝杆菌(Mycobacterium simiae)、斯氏分枝杆菌(Mycobacterium szulgai)、溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)、蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diptheriae)、马红球菌(Rhodococcus equi)、埃氏立克次体(Rickettsia aeschlimannii)、非洲立克次体(Rickettsia africae)、康诺尔立克次体(Rickettsia conorii)、溶血隐秘杆菌(Arcanobacterium haemolyticum)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、单核胞增生李斯特菌(Lysteria monocytogenes)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitides)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)、牛链球菌(Streptococcus bovis)、溶血性链球菌(Streptococcus hemolyticus)、变形链球菌(Streptococcus mutans)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、肺炎葡萄球菌(Staphylococcus pneumoniae)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum)、念珠菌(Candida)、隐球菌(Cryptcooccus)、隐孢子虫(Cryptosporidium)、贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)、微孢子虫(Microsporidia)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、须毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)、环孢子虫(Cyclospora cayetanensis)、海伦脑炎微孢子虫(Encephalitozoon hellem)、家兔脑胞内原虫(Encephalitozoon cuniculi)，还有其它细菌、古生菌、原生动物和真菌。在一些实施方式中，被葡萄球菌种感染。
在一些实施方式中，本文所公开的DART和制剂可用于对痤疮进行治疗。在一些实施方式中，本文所公开的DART和制剂针对低响应于含有克林霉素、或多西环素、或红霉素、或米诺环素的抗痤疮产品的痤疮丙酸杆菌的形式有效。在一些实施方式中，本文所公开的DART和制剂针对痤疮丙酸杆菌的对克林霉素、米诺环素、红霉素和/或多西环素中的一种或多种耐受的或抗性的菌株有效。为了对感染进行治疗，本文所公开的DART或制剂可作为单剂量或多次剂量一次或每日给予受试者。
附图说明
图1A和图1B示出了不同抗生素针对痤疮丙酸杆菌的MTCC 1951和CCARM 9010菌株的剂量响应曲线。虽然MTCC 1951被克林霉素杀死，但该药对CCARM 9010无影响。不同的抗生素对属于来自克林霉素不同族的不同菌株的作用是不同的且不可预测的。
图1C和图1D是示出了DART化合物90、91、94、113、115和116在克林霉素敏感的(MTCC 1951)(图1C)和克林霉素无响应的(CCARM 9010)(图1D)痤疮丙酸杆菌菌株中的浓度效力曲线的线形图。分子对痤疮丙酸杆菌的MTCC 1951和CCARM9010菌株具有不同的且和不可预测的活性。化合物91针对两种细菌菌株表现出了高度有效的杀菌谱。化合物90在不响应于克林霉素的痤疮丙酸杆菌中显示活性，但在响应于克林霉素的痤疮丙酸杆菌菌株中是无活性的。
图2A和图2B示出了化合物91对DNA促旋酶活性(超螺旋)的浓度依赖性抑制。图2A：琼脂糖凝胶电泳示出了化合物91对由DNA促旋酶造成的大肠杆菌质粒DNA的超螺旋的作用。图2B：在浓度增加的化合物91的存在下，由DNA促旋酶造成的DNA超螺旋的百分比。
图3A为柱状图，其示出了在松弛的大肠杆菌质粒DNA和化合物90、91、94、113、115和116的存在下，由DNA促旋酶造成的DNA超螺旋的百分比。在所有比较物中，化合物91和化合物116似乎具有最好的促旋酶抑制活性。虽然这个观察结果主要与针对痤疮丙酸杆菌的MIC数据相关，但对于化合物91而言观察到一些菌种特异性优势。
图3B为柱状图，其示出了在松弛的大肠杆菌质粒DNA以及那氟沙星和化合物91的存在下，由DNA促旋酶造成的DNA超螺旋的百分比。化合物91示出了比那氟沙星更好的效力。
图4A和图4B为柱状图，其示出了化合物91对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞因子IL-6(图4A)、IL-8(图4B)在THP-1细胞中的释放的影响。化合物91针对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞因子的产生发挥抗炎活性。使用Student t检验进行统计分析(*p＝0.05；**p＝0.005)。
图5A和图5B为柱状图，其示出了化合物91对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞因子IL-1α(图5A)、IL-β(图5B)在THP-1细胞中的释放的影响。
图6为示出了一些示例性局部用凝胶制剂对痤疮丙酸杆菌的最小抑制值的柱状图。
图7为示出了一些示例性局部用凝胶制剂对痤疮丙酸杆菌的抑制区(ZOI)的剂量响应曲线的线形图。
图8为示出了一些示例性凝胶制剂对痤疮丙酸杆菌的时间杀菌动力学的线形图。
图9的曲线图示出了在体内皮肤感染模型中，贝西沙星局部制剂在痤疮丙酸杆菌中的效力。贝西沙星凝胶制剂具有在最初24小时内清除几乎1.5log CFU(～95％)的克林霉素抗性痤疮丙酸杆菌接种体的能力。
图10为示出了一些示例性贝西沙星制剂对抗痤疮丙酸杆菌MTCC1951的时间杀菌动力学的线形图，其示出了制剂的组成可以改变抗生素的效力。
图11为示出了一些示例性贝西沙星制剂和贝西沙星API对金黄色葡萄球菌(S.aureus)的时间杀菌动力学的线形图。
图12为示出了贝西沙星对痤疮丙酸杆菌(CCARM 9010)的时间杀菌动力学的线形图。
图13的曲线图示出了对于相同的抗生素而言，具有不同的赋形剂组成的局部制剂可以导致在SD大鼠的皮肤中和全身循环中不同的谱。出于比较目的，使用完全悬浮的1％贝西沙星凝胶(VLN-F19/BSF/GL/068)、完全可溶的1％贝西沙星凝胶(VLN-F21/BSF/GL/001A)和完全悬浮的1％贝西沙星凝胶(VLN-F20/BSF/CR/004)。为了实现有效性，制剂不仅应该与抗生素在物理化学方面相容，而且应使得抗生素的浓度维持在大于MIC水平的浓度。
图14A和图14B为柱状图，其示出了贝西沙星对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞因子IL-6(图14A)而不是IL-8(图14B)在THP-1细胞中释放的浓度依赖抑制作用。使用Student t检验进行统计分析(*p＝0.005；**p＝0.0005)。
图15A和图15B为柱状图，其示出了贝西沙星和阿达帕林的组合增加了对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞因子IL-6(图15A)在THP-1细胞中的释放的效力，但对IL-8(图15B)在THP-1细胞中的释放无效。使用Student t检验进行统计分析(*p＝0.005；**p＝0.001)。
具体实施方式
寻常痤疮是影响全人类超过85％的皮肤病症。痤疮是通常发生在面部、颈部和上部躯干上的堵塞毛孔的医学病症的术语。以下是目前已知有助于形成寻常痤疮的四个主要因素：(1)增加的皮脂产量造成油性、油腻皮肤；(2)增加的细菌活性，通常归因于痤疮丙酸杆菌的细菌过剩；(3)毛囊或毛囊皮脂腺管道的堵塞(过度角化)；以及(4)炎症。堵塞的毛孔导致黑头、白头、丘疹或更深的肿块(例如囊肿或结节)。痤疮的严重情况可能导致永久性疤痕或毁容。
如在http://thescienceofacne.com/antibiotic-susceptibility-of- propionibacterium-acnes/中所示，过去四十年的研究结果清楚地表明，随着时间的推移，痤疮丙酸杆菌细菌已日益对某些类的抗生素产生抗性。特别重要的是，观察到从痤疮患者中分离的显著百分比例的细菌目前对在痤疮治疗中最常用的抗生素(克林霉素、红霉素、四环素、多西环素和米诺环素)具有抗性。此外，这类抗性菌株或抗生素耐受菌株可引起痤疮复发，并且还引起其它疾病状态。需要可以杀死痤疮丙酸杆菌、同时使能够在抗生素暴露环境下生存的耐受菌株或突变体的发展的可能性最小化的抗生素，以及可针对不响应于当前药物的菌株发挥作用的抗生素。此外，如果这些新型分子能够以痤疮形成中另外的步骤(例如炎症)作为靶标，则其在痤疮中的临床效果可大于现有疗法。
皮肤是人体的主要器官，并且除了充当屏障以外，还执行了许多基本功能，例如维持内稳态。除了痤疮以外，还具有由皮肤的细菌定植引起的许多其它皮肤病。对于轻度至中度皮肤感染(例如，急性细菌性皮肤和皮肤结构感染(ABSSSI))而言，最常见的细菌为葡萄球菌(Staphylococcus)和链球菌(Streptococcus)。此类细菌可同时感染儿童和成人患者的皮肤；主要在住院或居住在疗养院期间发展，同时在园艺或游泳时发展。一些人处于发展为皮肤感染的特殊风险状态，例如，患有糖尿病、人免疫缺陷病毒(HIV)或AIDS或其它免疫疾病、或肝炎的人，以及正在接受化疗或抑制免疫系统的其它药物治疗的人。
常见的皮肤细菌感染包括蜂窝织炎、丹毒、脓疱病、毛囊炎、以及疖和痈。蜂窝织炎是真皮和皮下组织的疼痛的、红斑感染，其特征为发热、水肿和边界推进，并且其通常是由链球菌属或葡萄球菌属引起的。丹毒是边界划定清晰的蜂窝织炎的表面形式，并且几乎是仅由链球菌引起的。脓疱病也是由链球菌或葡萄球菌引起的，并可能导致提升角质层，产生常见的大疱作用。毛囊炎是毛囊的炎症，并且它最常见于由葡萄球菌引起。如果毛囊的感染更深并牵扯更多毛囊，则它进入了疖痈阶段，通常需要切开引流。由于细菌产生的毒素，发生两种不同类型的皮肤疾病，包括通常影响到不足5岁的儿童、肾功能衰竭的成人的葡萄球菌鳞状皮肤综合征(SSSS)，另一种是中毒性休克综合征。在患有湿疹和过敏性皮炎(一种炎症性、复发性、非传染性的皮肤瘙痒症)患者中发现金黄色葡萄球菌有更多机会定植。因此，金黄色葡萄球菌感染在特应性皮炎(AD)或特应性湿疹(AE)中起重要作用。不幸的是，金黄色葡萄球菌的某些菌株已对甲氧西林和被称为MRSA的其它类似抗生素产生抗性。最近已经发现，皮肤细菌感染的所有病例中的一半以上是由MRSA菌种引起的。与MRSA菌种相关的感染不能用传统的青霉素相关药物治愈。相反，必须用替代的抗生素对MRSA进行治疗。
然而，如在http://thescienceofacne.com/antibiotic-susceptibility-of- propionibacterium-acnes/中所述，“并非所有抗生素都生来平等”。对细菌而言，同样是真理。一些种类的抗生素对某些种类的细菌非常有效，而对其它细菌则基本无效。此外，抗生素敏感性和抗性是不断变化的动态过程。随着时间的推移，一些种类的细菌可能获得或失去对特定抗生素的抗性。标准的、基于实验室的抗生素抗性测试的主要问题是，当它在培养皿中生长与当它在你身体中生长时，细菌对抗生素的敏感性往往是不同的。这是因为细菌不是静态的生物，它们适应于它们的环境。生长在毛囊并以皮脂为食的痤疮丙酸杆菌细菌具有不同于生长在培养皿上并以细菌营养补充物为食的痤疮丙酸杆菌细菌的代谢谱。此外，根据它们的环境，细胞对表面蛋白、细胞壁结构和基因进行调控，并且这些变化可能对它们对于特定抗生素的敏感性产生深远的影响。其结果是，在局部抗生素用于治疗皮肤细菌病症的情况下，不存在先验知识，即，没有任何机制来预测抗生素是否对痤疮丙酸杆菌或任何其它皮肤细菌状况有效，直至在细菌菌株中对它进行测试。例如，如http:// thescienceofacne.com/antibiotic-susceptibility-of-propionibacterium-acnes/中所示，据报道，痤疮丙酸杆菌对硝基咪唑(甲硝唑)或四环素(赖甲环素)具有高度抗性，但部分响应于多西环素(另一种四环素)，并显示出对环丙沙星无抗性而对另一种氟喹诺酮左氧氟沙星具有抗性。因此，不可能基于在其它细菌菌株中先验的活性来预测抗生素是否发挥作用。需要对显示出抗痤疮活性的新型抗生素进行系统开发。
在这方面，DART分子可以作为理想的候选药物，用于由痤疮丙酸杆菌引起的痤疮，并另外用于由其它细菌(例如MRSA)引起的皮肤和皮肤结构感染的治疗。DART被设计为含有两个截然不同的化学结构域，所述化学结构域选自于前面提到的不同的族，例如，β-内酰胺环和喹诺酮核、或喹诺酮核和硝基杂环、或β-内酰胺环和硝基杂环，这赋予了两种截然不同的作用机制。这会在细菌的两个靶位点的突变发生创造较少机会，导致更少地发展为针对这些抗生素的抗性。一些分子能够发挥另外的抗炎机制，以降低宿主炎症反应，进一步增强了抗痤疮效力。
本文所公开的各个方面的实施方式是基于由本发明人所设计的分子，其可在至少两个不同的或截然不同的靶标上发挥作用。一般而言，该分子包含至少两个不同的或截然不同的化学结构域。所述化学结构域中的每个结合至靶细胞中截然不同的或不同的活性位点。所述化学结构域可通过第三结构域结合在一起。本文所使用的术语“化学结构域”是指分子中涉及期望特性的部分。例如，化学结构域可以是分子中涉及分子与靶标的结合的部分，或者是涉及对靶标活性进行调控的部分。
在一些实施方式中，第一化学结构域和第二化学结构域独立地具有抗细菌活性或杀灭细菌活性。在一些实施方式中，第一化学结构域和第二结构域可独立地包含抗细菌剂。本文所使用的术语“抗细菌剂”或“抗生素药剂”被定义为对于与化合物接触的细菌具有杀灭细菌或抑制细菌作用的化合物。本文所使用的术语“杀灭细菌”被定义为是指对细菌具有破坏性杀伤作用。本文所使用的术语“抑制细菌”被定义为是指对于细菌的生长具有抑制作用。抗细菌剂的实例包括但不限于，大环内酯或酮内酯，例如红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、醋竹桃霉素、螺旋霉素、泰利霉素、卡波霉素A、交沙霉素、吉他霉素、醋酸麦迪霉素、竹桃霉素、索利霉素、螺旋霉素、醋竹桃霉素、喹红霉素、索利霉素、螺旋霉素、安莎霉素、竹桃霉素、卡波霉素和泰乐菌素；β-内酰胺类，包括青霉素、头孢菌素和碳青霉烯类，例如碳青霉烯、亚胺培南和美罗培南；单内酰胺类，例如青霉素G、青霉素V、甲氧西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、奈夫西林、氨苄西林、阿洛西林、阿莫西林、羧苄西林、替卡西林、美洛西林、哌拉西林、阿洛西林、替莫西林、氟氯西林、头孢菌素、头孢匹林、头孢拉定、头孢霉素、头孢唑林、头孢孟多、头孢呋辛、头孢氨苄、头孢丙烯、头孢克洛、氯碳头孢、头孢西丁、头孢美唑、头孢噻肟、头孢唑肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶、头孢克肟、头孢泊肟、头孢布烯、头孢地尼、头孢匹罗、头孢吡肟、头孢羟氨苄、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢呋辛、头孢妥仑、头孢他啶、头孢唑肟、头孢洛林酯、头孢洛林、头孢吡普、氨曲南、厄他培南、多尼培南和西司他丁；青霉素组合，例如阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、以及替卡西林/克拉维酸盐；喹诺酮类，例如萘啶酸、噁喹酸、诺氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、替马沙星、洛美沙星、氟罗沙星、格帕沙星、司帕沙星、曲伐沙星、克林沙星、加替沙星、莫西沙星、西他沙星、加雷沙星、吉米沙星、帕珠沙星、贝西沙星、尤利沙星、普卢利沙星、西诺沙星、吡咯米酸、吡哌酸、罗索沙星、芦氟沙星、巴洛沙星、妥舒沙星、德拉沙星、萘诺沙星；抗细菌磺胺和抗细菌对氨基苯磺酰胺，包括对氨基苯甲酸、磺胺嘧啶、磺胺嘧啶银、磺胺异噁唑、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺甲二唑和酞磺胺噻唑、磺胺米隆、磺胺醋酰、磺胺二甲异嘧啶、磺胺、柳氮磺吡啶和2,4-二氨基偶氮苯-4-磺酰胺；氨基糖苷类，例如链霉素、新霉素、卡那霉素、巴龙霉素、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、奈替米星、大观霉素、西索米星、dibekalin、异帕米星、双氢链霉素、新霉素B、核糖霉素、阿贝卡星、卡那霉素B、地贝卡星、潮霉素B、甲基姿苏霉素和阿司米星；四环素类，四环素、金霉素、去甲金霉素、美满霉素、土霉素、美他环素、多西环素、氯莫环素、赖甲环素、甲氯环素、青哌环素和吡甲四环素；利福霉素类，例如利福平(rifampicin，也称为rifampin)、利福喷汀、利福布汀、bezoxazin、orifamycin和利福昔明；林可酰胺类，例如林可霉素和克林霉素；脂肽，如达托霉素；糖肽类，例如万古霉素、特拉万星和替考拉宁；链阳性菌素类，例如奎奴普汀和达福普汀(daflopristin)；安沙霉素类，例如格尔德霉素、除莠霉素、利福昔明；噁唑烷酮类，例如利奈唑胺、依哌唑胺、泼斯唑来、雷得唑来、ranbezolid、舒特唑胺(sutezolid)和特地唑胺；截短侧耳素类，例如瑞他莫林、泰妙菌素、沃尼妙林；抗细菌固醇类，例如夫西地酸；酰胺醇类，例如氯霉素、叠氮氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考；硝基呋喃类，例如呋喃唑酮、呋喃妥因；链阳性菌素类，例如普那霉素、奎奴普汀/达福普汀维吉尼亚霉素；其它抗菌药物，例如胂凡纳明、磷霉素、莫匹罗星、平板霉素、替加环素、甲氧苄啶、多粘菌素、杆菌肽、多粘菌素、粘杆菌素、甲硝唑、复方新诺明和磷霉素；以及抗分枝杆菌药物，例如氯苯吩嗪、氨苯砜、卷曲霉素、环丝氨酸、乙胺丁醇、乙硫异酰胺、异烟肼、吡嗪酰胺、利福平、利福布汀、利福喷丁、链霉素。在一些实施方式中，抗细菌剂可选自于由阿奇霉素、罗红霉素、头孢洛林、头孢噻肟、头孢西丁、头孢曲松、头孢菌素、米诺环素、那氟沙星、莫西沙星、贝西沙星、尤利沙星、普卢利沙星、瑞他莫林、甲硝唑、奥硝唑以及它们的任意组合所组成的组。在一些实施方式中，抗细菌剂可以是透明质酸或其衍生物。
在DART分子的一些实施方式中，第一结构域和第二结构域独立地具有抗痤疮活性。在一些实施方式中，第一化学结构域和第二化学结构域独立地为抗痤疮剂。本文所使用的术语“抗痤疮剂”是指在痤疮/或与其相关的症状的治疗中有效的任何化学物质。抗痤疮剂在本领域中是公知的，例如美国专利公开号2006/0008538和美国专利5607980，通过引用将这两者的内容并入本文。有用的抗痤疮剂的实例包括但不限于：角质层分离剂，例如水杨酸、水杨酸衍生物和间苯二酚；类视黄醇类，例如视黄酸、维甲酸、阿达帕林、他扎罗汀；含硫的D-氨基酸和L-氨基酸，以及它们的衍生物和盐；硫辛酸；抗生素和抗微生物剂，例如过氧化苯甲酰、三氯生、氯己定葡糖酸盐、羟甲辛吡酮、四环素、2,4,4'-三氯-2'-羟基二苯醚、3,4,4'-三氯对称二苯脲、烟酰胺、茶树油、罗非考昔、壬二酸及其衍生物、苯氧乙醇、苯氧丙醇、苯氧基异丙醇、乙酸乙酯、克林霉素、红霉素和甲氯环素；sebostats，例如类黄酮；以及胆盐，例如鲨胆甾醇硫酸盐及其衍生物、脱氧胆酸盐和胆酸盐；以及它们的组合。这些试剂是公知的，并常用于个人护理领域。
在一些实施方式中，抗痤疮剂可以是具有针对痤疮丙酸杆菌的活性的抗微生物肽。抗微生物肽在自然界中普遍存在，并在许多物种的先天免疫系统中起重要作用[Zasloff等，2002；和Epand等，1999]。抗微生物肽可以是天然存在的肽或其类似物，或者它可以是合成肽。本文中所使用的“类似物”指的是已经化学修饰而提高其效力和/或降低其毒副作用的天然存在的抗微生物肽。抗微生物肽可以是已知针对革兰氏阳性菌有效的肽。非限制性实例包括羊毛硫抗生素，例如乳酸链球菌肽、枯草菌素、表皮素和gallidermin；防御素；附加素，例如麻蝇抗菌肽；天蚕素，例如天蚕素A、杀菌素和鳞翅目；爪蟾抗微菌肽；蜂毒肽；富组蛋白；brevinins；以及它们的组合。另外，已经报道了针对痤疮丙酸杆菌具有活性的抗微生物肽，例如，在美国专利公开号2005/0282755、2005/02455452、2005/0209157、以及美国专利号6255279中予以报道，通过引用将所有这些内容并入本文。已经报道针对痤疮丙酸杆菌具有活性的抗微生物肽的合适实例包括但不限于novispirins(Hogenhaug，见上文)，以及在美国专利公开号2007/0265431中所述的那些抗微生物肽，通过引用将其内容并入本文。在一些实施方式中，抗微生物肽可以是cathilicidine及其衍生物。
在一些实施方式中，抗细菌剂可以是游离脂肪酸(FFA)或脂肪酸衍生物或丙二醇(PG)的脂肪酸酯或甘油(G)衍生物以及它们的任意组合。例如，月桂酸、硬脂酸、肉豆蔻酸、油酸、亚油酸、肉豆蔻油酸、棕榈油酸、亚油酸、亚麻酸、十六烯酸(sapienic acid)、不同的多不饱和FA(PUFA)、单月桂酸丙二醇酯、单月桂酸甘油酯和/或二月桂酸甘油酯、单油酸丙二醇酯、单油酸甘油酯和/或二油酸甘油酯以及在本领域中已知的其它衍生物。脂肪酸是公知的抗微生物剂[Kabara等，1972]，并且它们的活性随存在于丙二醇或甘油骨架中的脂肪酸酯的链长、不饱和度和数目的变化而变化。FA和衍生物的主要靶标是细菌的细胞膜，这实质上是非特异性的。细菌膜的破坏会导致破坏细胞内电子转运活性、或氧化磷酸化、或抑制特定酶活性、或减少细胞能量产生、或损伤营养吸收、或降解产物的自氧化、或产生毒性过氧化、或细菌细胞的直接溶解。它们的非特异性活性的广谱使得它们可作为有希望的抗微生物候选物，用于治疗和预防由大量产生各种皮肤感染和皮肤结构感染的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌引起的抗微生物感染。在一些实施方式中，FA和衍生物单独或与任何抗生素或与任何抗生素的共价缀合物(例如DART)的组合对抗生素易感痤疮丙酸杆菌以及低响应于含有克林霉素、或多西环素、或红霉素、或米诺环素的抗痤疮产品的痤疮丙酸杆菌是有效的。在一些实施方式中，它们对痤疮丙酸杆菌的克林霉素、米诺环素、红霉素和/或多西环素耐受或抗性菌株中的一种或多种是有效的。在一些实施方式中，它可以防止病原体抗性形式的发展。
在一些实施方式中，本文所公开的DART或制剂中的第一抗痤疮剂和第二抗痤疮剂独立地选自于由以下试剂组成的组：阿维A(acetretin)、阿达帕林、阿利维甲酸、壬二酸、阿奇霉素、过氧化苯甲酰、贝西沙星、贝沙罗汀、头孢噻肟、头孢西丁、头孢洛林、头孢吡罗、头孢曲松、头孢噻吩、克林霉素、红霉素、依曲替酯、加雷沙星、乙醇酸、异维甲酸、乳酸、米诺环素、莫西沙星、N-乙酰半胱氨酸、那氟沙星、羟甲辛吡酮、苯氧乙醇、苯氧丙醇、普卢利沙星、丙酮酸、雷得唑来(RX-1741)、间苯二酚、瑞他莫林、视黄酸、罗红霉素、水杨酸、西他沙星、磺胺醋酰钠、螺内酯、磺胺醋酰、硫、他扎罗汀、维甲酸、三氯生、尤利沙星、甲硝唑、奥硝唑、脲以及它们的任意组合。
在一些实施方式中，第一化学结构域和第二化学结构域独立地为抗真菌剂。本文所使用的术语“抗真菌剂”是指能够抑制或防止真菌细胞的生长、存活和/或繁殖的物质。优选的抗真菌剂是那些能够预防或治疗动物或植物中的真菌感染的试剂。优选的抗真菌剂是广谱抗真菌剂。然而，抗真菌剂也可以特异于一个或多个特定种类的真菌。
抗真菌剂的实例包括但不限于：唑类(例如，氟康唑、艾沙康唑、伊曲康唑、酮康唑、咪康唑、克霉唑、伏立康唑、泊沙康唑、雷夫康唑和环吡酮等)、多烯类(例如，那他霉素、鲁斯霉素、制霉菌素和两性霉素B等)、棘白菌素类(例如，卡泊芬净)、普拉定霉素类(例如，beanomicins、尼可霉素类、sordarins、烯丙胺类等)、三氯生、吡罗克及其乙醇胺盐(olamine salt)、丁苯吗啉、特比萘芬、及其衍生物和类似物。另外的抗真菌剂包括在以下专利中描述的试剂：例如，国际专利公开号WO2001/066551、WO2002/090354、WO2000/043390、WO2010/032652、WO2003/008391、WO2004/018485、WO2005/006860、WO2003/086271、WO2002/067880，美国专利申请公开号2008/0194661、2008/0287440、2005/0130940、2010/0063285、2008/0032994、2006/0047135、2008/0182885，以及美国专利号6,812,238、4,588,525、6,235,728、6,265,584、4,942,162和6,362,172，通过引用将所有这些内容并入本文。
在一些实施方式中，抗真菌剂是羟基吡啶硫酮(pyrithione)盐。有用的羟基吡啶硫酮盐的实例包括但不限于，羟基吡啶硫酮锌、羟基吡啶硫酮钠、羟基吡啶硫酮钾、羟基吡啶硫酮锂、羟基吡啶硫酮铵、羟基吡啶硫酮铜、羟基吡啶硫酮钙、羟基吡啶硫酮镁、羟基吡啶硫酮锶、羟基吡啶硫酮银、羟基吡啶硫酮金、羟基吡啶硫酮锰以及它们的组合。也可以使用羟基吡啶硫酮的非金属盐，例如羟基吡啶硫酮的乙醇胺盐、脱乙酰壳多糖盐和二硫化物盐(市售名称为OMADINE MDS或OMDS)。该羟基吡啶硫酮盐可以任何颗粒形式使用，包括但不限于结晶形式(例如片晶、棒晶、针晶、块晶)、圆形和无定形、规则或不规则形状的颗粒。
在一些实施方式中，羟基吡啶硫酮盐是羟基吡啶硫酮锌。羟基吡啶硫酮锌在治疗头皮屑和脂溢性皮炎的用途是最为公知的。它还具有抗细菌性能，并且针对来自链球菌和葡萄球菌属的许多病原体有效。它的其它医疗应用包括治疗牛皮癣、湿疹、癣、真菌、足癣、皮肤干燥、特应性皮炎、体癣和白癜风。
在一些实施方式中，抗真菌剂是抗真菌肽。抗真菌肽在本领域中是公知的(参见例如De Lucca等，2000]。抗真菌肽可以是天然存在的肽或其类似物，或者其可以是合成肽。本文所使用的术语“类似物”指的是已被化学修饰而提高其效力和/或减少其毒性/副作用的天然存在的抗真菌肽。示例性的抗真菌肽可以包括但不限于，丁香霉素类、syringostatins、丁香毒素类(syringotoxins)、尼可霉素类、棘白菌素类、纽莫康定类(pneumocadins)、阿枯菌素类(aculeacins)、牟伦多菌素类(mulundocadins)、天蚕素类(cecropins)、α-防御素类、β-防御素类、novispirins以及它们的组合。其它抗真菌肽包括在以下专利中所描述的试剂，例如，美国专利号6,255,279和美国专利申请公开号2005/0239709、2005/0187151、2005/0282755和2005/0245452，通过引用将其所有内容并入本文。
在一些实施方式中，第一化学结构域是抗细菌剂，第二化学结构域是抗痤疮剂或抗真菌剂。
非限制性地，DART中的第一化学结构域和第二化学结构域可以共价地彼此结合。本领域技术人员清楚地知道化学结构域中可用于共价地将第一化学结构域与第二化学结构域相结合的不同的官能团。例如，第一化学结构域可以包含用于与第二化学结构域结合的、选自于由以下基团组成的组的官能团：氨基基团、N-取代氨基基团、羧基基团、羰基基团、酸酐基团、醛基团、羟基基团、环氧基基团、硫醇、二硫基团、烯基基团、肼基团、酰肼基团、氨基脲基团、氨基硫脲基团、酰胺基团、芳基基团、酯基团、醚基团、缩水甘油基基团、卤素基团、氢化物基团、异氰酸酯基团、脲基团、氨基甲酸酯基团以及它们的任意组合。在一些实施方式中，第二化学结构域包含用于与第一化学结构域结合的、选自于由以下基团组成的组的官能团：氨基基团、N-取代氨基基团、羧基基团、羰基基团、酸酐基团、醛基团、羟基基团、环氧基基团、硫醇、二硫基团、烯基基团、肼基团、酰肼基团、氨基脲基团、氨基硫脲基团、酰胺基团、芳基基团、酯基团、醚基团、缩水甘油基基团、卤素基团、氢化物基团、异氰酸酯基团、脲基团、氨基甲酸酯基团以及它们的任意组合。在一些实施方式中，第一化学结构域和第二化学结构域经由相同的官能团彼此结合。在一些实施方式中，第一化学结构域和第二化学结构域经由不同的官能团彼此结合。
在一些实施例中，第三结构域可以增强或增加至少一个化学结构域的活性。例如，至少一个化学结构域的活性相对于不存在第三结构域时而增加或增强。在一些实施方式中，第三结构域可增加或增强DART中至少一个化学结构域的抗细菌活性。在一些实施方式中，第三结构域可增加或增强DART中至少一个化学结构域的抗痤疮活性。在一些实施方式中，第三结构域可增加或增强DART中至少一个化学结构域的抗炎活性。
在一些实施方式中，第三结构域自身具有生物活性。例如，第三结构域可以是活性剂。在一些实施方式中，第三结构域可具有抗细菌活性或抗真菌活性。在一些实施例中，第三结构域可具有抗炎活性。
DART的第三结构域可以是直接的键或原子(例如氧或硫)、单元(例如NR1、C(O)、C(O)O、C(O)NH、SS、SO、SO2、SO2NH)或原子链(例如取代或未取代的烷基、取代或未取代的烯基、取代或未取代的炔基、芳基烷基、芳基烯基、芳基炔基、杂芳基烷基、杂芳基烯基、杂芳基炔基、杂环基烷基、杂环基烯基、杂环基炔基、芳基、杂芳基、杂环基、环烷基、环烯基、烷基芳基烷基、烷基芳基烯基、烷基芳基炔基、烯基芳基烷基、烯基芳基烯基、烯基芳基炔基、炔基芳基烷基、炔基芳基烯基、炔基芳基炔基、烷基杂芳基烷基、烷基杂芳基烯基、烷基杂芳基炔基、烯基杂芳基烷基、烯基杂芳基烯基、烯基杂芳基炔基、炔基杂芳基烷基、炔基杂芳基烯基、炔基杂芳基炔基、烷基杂环基烷基、烷基杂环基烯基、烷基杂环基炔基、烯基杂环基烷基、烯基杂环基烯基、烯基杂环基炔基、炔基杂环基烷基、炔基杂环基烯基、炔基杂环基炔基、烷基芳基、烯基芳基、炔基芳基、烷基杂芳基、烯基杂芳基、炔基杂芳基，其中，一个或多个亚甲基可以被O、S、S(O)、SO2、N(R1)2、C(O)、C(O)O、可断裂的连接基团、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂环中断或终止)，其中，R1是氢、酰基、脂族基团或取代的脂族基团。
在一些实施方式中，第一化学结构域和第二化学结构域经由包含至少一个可断裂基团的第三结构域共价地彼此结合。可断裂基团是在第一组条件下足够稳定、并且可发生断裂以释放由可断裂基团保持在一起的两部分的基团。在优选的实施方式中，可断裂基团在第一参考条件(例如，可被选择以模拟或代表细胞内条件)下比在第二参考条件(例如，可被选择以模仿或代表在血液或血清中的条件)下断裂快至少10倍以上、优选快至少100倍以上。
可断裂基团对断裂剂敏感，例如，pH、氧化还原电位或降解分子的存在。通常，在包含可断裂基团的分子的作用所需位点上，断裂剂的存在更为普遍，或者发现其具有更高的水平或活性。这种降解剂的实例包括：存在于细胞中被选择用于特定底物或无底物特异性的氧化还原剂，包括例如氧化酶或还原酶、或可以通过还原来降解氧化还原可断裂连接基团的还原剂(例如硫醇)；酯酶；酰胺酶；可产生酸性环境的试剂或核内体，例如，使得pH在5以下的试剂或核内体；可以通过充当广义酸、肽酶(其可以是底物特异性的)和蛋白酶来水解或降解酸性可断裂连接基团的酶，以及磷酸酶。
示例性的可断裂基团包括但不限于，氧化还原可断裂基团(例如，-S-S-和-C(R)2-S-S-，其中，R为H或C1-C6烷基，至少一个R为诸如CH3或CH2CH3的C1-C6烷基)；基于磷酸酯的可断裂连接基团(例如，-O-P(O)(OR)-O-、-O-P(S)(OR)-O-、-O-P(S)(SR)-O-、-S-P(O)(OR)-O-、-O-P(O)(OR)-S-、-S-P(O)(OR)-S-、-O-P(S)(ORk)-S-、-S-P(S)(OR)-O-、-O-P(O)(R)-O-、-O-P(S)(R)-O-、-S-P(O)(R)-O-、-S-P(S)(R)-O-、-S-P(O)(R)-S-、-O-P(S)(R)-S-、-O-P(O)(OH)-O-、-O-P(S)(OH)-O-、-O-P(S)(SH)-O-、-S-P(O)(OH)-O-、-O-P(O)(OH)-S-、-S-P(O)(OH)-S-、-O-P(S)(OH)-S-、-S-P(S)(OH)-O-、-O-P(O)(H)-O-、-O-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-O-、-S-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-S-和-O-P(S)(H)-S-，其中，R是任选取代的直链或支链C1-C10烷基)；酸可断裂基团(例如，腙、酯、以及-OC(O)-、-C＝NN-和氨基酸的酯)；基于酯的可断裂基团(例如，-C(O)O-)；基于肽的可断裂基团(例如，由酶(例如肽酶和蛋白酶)断裂的基团，例如–NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-，其中，RA和RB是两个相邻氨基酸的R基团)。基于肽的可断裂基团包含两个以上氨基酸。在一些实施方式中，基于肽的可断裂基团包含氨基酸序列，对于发现于痤疮丙酸杆菌中或由痤疮丙酸杆菌分泌的肽酶或蛋白酶而言，该氨基酸序列为底物。
在一些实施方式中，可断裂基团是酸不稳定的基团。通常，酸可断裂基团在pH约6.5以下(例如，约6.5、6.0、5.5、5.0、4.5、4.0、3.5、3.0以下)的酸性环境中是可断裂的，或者由诸如可充当广义酸的酶的试剂断裂。
在一些实施方式中，第一化学结构域和第二化学结构域通过第三结构域共价地结合在一起，所述第三结构域选自于由以下基团所组成的组：11-羟基十一碳烯酸、1,10-癸二醇、1,3-丙二醇、1,5-戊二醇、10-羟基癸烯酸、琥珀酸、乳酸、3-羟基丙酸以及它们的任意组合。
在一些实施方式中，第三结构域可以是接头，例如，可断裂的接头或不可断裂的接头。
第一化学结构域可以经由直接的键或原子(如氧或硫)、单元(例如NH、C(O)、C(O)O、C(O)NH、SS、SO、SO2或SO2NH)结合至第二化学结构域，或结合至连接第一化学结构域和第二化学结构域的结构域。
类似地，第二化学结构域可以经由直接的键或原子(如氧或硫)、单元(例如NH、C(O)、C(O)O、C(O)NH、SS、SO、SO2或SO2NH)结合至第一化学结构域，或结合至连接第一化学结构域和第二化学结构域的结构域。
可以使用本领域中已知的方法来合成DART。用于合成DART的示例性方法在本文的实施例部分进行了描述。参见实施例2至10。
在一些实施方式中，DART可选自于在表1A和表1B中所示的分子。
表1A：示例性DART列表1
Figure BDA0001122120050000281
Figure BDA0001122120050000291
Figure BDA0001122120050000301
Figure BDA0001122120050000311
Figure BDA0001122120050000321
Figure BDA0001122120050000331
表2A：示例性DART列表-2
Figure BDA0001122120050000341
Figure BDA0001122120050000351
Figure BDA0001122120050000361
本发明还提供了包含DART作为API的制剂。制剂的各种特征将在下文中进行更详细地描述。
抗生素(非DART)
本发明还想到了不为DART的化合物。因此，本发明还提供了包含不是DART的抗生素药剂的制剂，即，包含非DART抗生素药剂作为API的制剂。例如，本发明描述了8-氯氟喹诺酮用于治疗痤疮病症、特别是由痤疮丙酸杆菌的抗性形式引起的痤疮病症的用途。它是C8位被氯取代的氟喹诺酮的子类。因此，在一些实施方式中，本公开文本提供了包含8-氯氟喹诺酮作为API的制剂。示例性8-氯氟喹诺酮类包括但不限于贝西沙星、西他沙星和克林沙星。在一些实施方式中，所述制剂包含贝西沙星。
Figure BDA0001122120050000371
不希望受理论的束缚，抗生素药剂(例如贝西沙星)的微粉化可影响其生物活性。例如，微粉化可以增强抗生素药剂的生物活性或增强其在所期望位点的滞留。此外，微粉化还可影响抗生素药剂在制剂中的量和稳定性。此外，微粉化还可以允许对包含微粉化贝西沙星的制剂的性质进行优化。因此，非限制性地，在制剂中的API(例如抗生素药剂)可处于颗粒、粉末、悬浮液、分散体、乳剂、脂质体、胶束、小球、溶液、囊泡、聚集体等形式。
在一些实施方式中，API(例如但不限于贝西沙星或DART)可被微粉化，即，形成颗粒状。
通常，微粉化的API的尺寸范围为约0.2μm至约15μm。在一些实施方式中，微粉化的API的尺寸范围为约1μm至约10μm。在一些实施方式中，微粉化的API的尺寸范围为约1.5μm至约9μm。在一些实施方式中，微粉化的API的尺寸范围为约2μm至约8μm。
在一些实施方式中，API处于颗粒形式，并且包含位于其表面上的表面改性剂。通常，表面改性剂是可以改变所考虑的颗粒的表面(如通过涂布)从而协助将整个颗粒附着在特定表面的分子。通常，表面改性不涉及化学键合变化或建立任何化学键。表面改性剂仅在物理上与颗粒相关联。
表面改性剂可以选自于由脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合所组成的组。表面改性剂可在颗粒表面上形成涂布层。非限制性地，颗粒可以部分或完全地被表面改性剂涂布。
对一些非限制性示例性的包含微粉化的抗生素药剂(例如贝西沙星)的制剂在实施例18-20中进行了描述，并示于表18中。
在一些实施方式中，制剂可以是喷雾制剂。示例性非限制性的喷雾制剂在实施例23和表19中进行了描述。在一些实施方式中，制剂可处于洁面剂的形式。示例性非限制性的洁面剂在实施例24和表20中进行了描述。在一些实施方式中，制剂可处于皂条的形式。示例性非限制性的皂条制剂在实施例25和表21中进行了描述。在一些实施方式中，制剂可处于沐浴露的形式。示例性非限制性的沐浴露制剂在实施例26和表22中进行了描述。在一些实施方式中，制剂可处于洗剂的形式。示例性非限制性的洗剂制剂在实施例27和表23中进行了描述。
已知表面活性剂通过降低界面张力来增溶疏水性物质。因此，在一些实施方式中，在形成该制剂之前可用表面活性剂对抗生素药剂进行增溶。除了表面活性剂以外，助溶剂或助表面活性剂还可以通过增加疏水性分子的润湿性或降低疏水性分子的界面张力来帮助增溶水难溶性化合物。一些示例性的表面活性剂和助表面活性剂可包括但不限于月桂基硫酸钠、吐温80、吐温20、司盘20以及它们的任意组合。用于使抗生素药剂(例如贝西沙星)增溶的示例性助溶剂可包括单辛酸丙二醇酯和二乙二醇单乙醚。对于使抗生素药剂增溶的经得起检验的其它表面活性剂、助表面活性剂和助溶剂在本公开文本的其它地方进行了描述。不希望受到理论的束缚，使抗生素药剂(例如贝西沙星)增溶可提供符合FDA处方准则以及对非活性赋形剂或成分的限制的制剂。包含增溶的API(例如，诸如贝西沙星的抗生素药剂)的非限制性示例性制剂在实施例28、31和33中进行了描述，并示于表24、27以及30-32中。
经由常规方法制备载药(悬浮形式)凝胶通常会导致药物暴露于大范围pH条件下，在某些情况下这可能导致药物溶解然后发生再沉淀。这种溶解-再沉淀现象在大多数情况下导致原始粒径、杂质分布或晶体结构等发生变化。为了规避这个问题，本发明人已经使用了本发明的方法制备了不同的悬浮载药制剂。因此，在一些实施方式中，该制剂处于具有可忽略的或最小的药物溶解-再沉淀的悬浮凝胶形式。在悬浮药物制剂中，API颗粒分散在载体介质(例如但不限于甘油)中，并加工获得所期望的制剂。示例性悬浮凝胶制剂在实施例24、26、28、29、30、31和32中进行了描述，并示于表25、27、29、33、34、37和38中。示例性悬浮载药乳膏制剂在实施例30和32以及表26和28中进行了描述。
除了各种组分以外，所述制剂还可以包含一种或多种粘度改性剂。在一些实施方式中，粘度改性剂是聚合物。示例性的聚合粘度改性剂包括但不限于卡波普(carbopol)、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素和透明质酸钠。在一些其它实施方式中，粘度改性剂是非聚合的粘度改性剂或胶凝剂。另外的示例性粘度改性剂在本公开文本的其它地方进行了描述。包含各种粘度改性剂的示例性制剂在实施例33和表29-32中进行描述。
根据已公布的文献，在卡波普和氟喹诺酮之间可能存在一些物理和/或化学相互作用。为此，可能需要制备不含卡波普或类似卡波普的聚合物的制剂，以避免在产品贮存期间的任何不相容问题。因此，在一些实施方式中，制剂基本上不含粘度改性剂。基本上不含粘度改性剂的示例性制剂在实施例32和表28中进行了描述。
在一些实施方式中，API可以涂布有选自于由脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合所组成的组的分子。非限制性地，API可以部分或完全被涂布分子涂布。包含涂布的或未涂布的API的示例性制剂在实施例46以及表52和53中进行了描述。
值得注意的是，在下文中更详细地讨论的各种制剂特征适用于本文所述的包含抗生素药剂(例如贝西沙星)的制剂。
组合
在一些实施方式中，制剂包含两种以上抗生素药剂。例如，制剂可包含两种以上不同的抗痤疮剂。在一些实施方式中，制剂包含单独的8-氯氟喹诺酮或其与另一种抗痤疮剂的组合。示例性的8-氯氟喹诺酮包括但不限于贝西沙星、西他沙星和克林沙星。在一些实施方式中，制剂包含贝西沙星。在一些实施方式中，制剂包含贝西沙星和阿达帕林。
非限制性地，两种以上抗生素药剂可处于相同的形式或不同的形式。例如，第一抗生素药剂和第二抗生素药剂可以独立地被微粉化、悬浮、或增溶而用于API。因此，在一些实施方式中，第一抗生素药剂和第二抗生素药剂被微粉化。在一些实施方式中，第一抗生素药剂被微粉化，第二抗生素药剂被增溶。在一些实施方式中，第一抗生素药剂被微粉化，第二抗生素药剂被悬浮于制剂中。在一些实施方式中，第一抗生素药剂被增溶，第二抗生素药剂被微粉化。在一些实施方式中，第一抗生素药剂和第二抗生素药剂均被增溶。在一些实施方式中，第一抗生素药剂被增溶，第二抗生素药剂被悬浮。在一些实施方式中，第一抗生素药剂被悬浮，第二抗生素药剂被微粉化。在一些实施方式中，第一抗生素药剂被悬浮，第二抗生素药剂被增溶。在一些实施方式中，第一抗生素药剂和第二抗生素药剂均被悬浮。
在一些实施方式中，制剂包含贝西沙星和阿达帕林，其中，贝西沙星被增溶，阿达帕林被悬浮。在其它一些实施方式中，制剂包含贝西沙星和阿达帕林，其中，贝西沙星和阿达帕林均被增溶。同时包含贝西沙星和阿达帕林的示例性制剂在实施例18、23-27和31以及表18-23和27中进行了描述。
值得注意的是，在下文中更详细地讨论的各种制剂特征适用于本文所述的包含两种以上抗生素药剂的制剂。
适用于DART、非DART和组合API的特征
此外，如http://thescienceofacne.com/antibiotic-susceptibility-of-propionibacterium-acnes/)中所述，‘治疗痤疮的第二个主要限制是抗生素非均匀地分散在身体的不同组织。许多抗生素不能有效地在毛囊和/或皮脂腺中积聚，因此不能有效地到达造成痤疮的细菌。即使在基于实验室的测试中细菌对特定的抗生素是高度敏感的，如果该抗生素无法以足够的浓度到达感染位点，那么这并不是有效的治疗。其结果是，在痤疮治疗中使用的口服抗生素和外用抗生素的有效性存在主要差别。’这种情况延伸至皮肤的所有细菌性疾病。需要开发独特的最佳局部制剂，并在后面进行描述。
皮肤，例如微裂纹、汗液或分泌毛孔和毛囊可以充当用于特定尺寸的载药体的储库。可使用漏斗部输送来增强活性剂(例如抗真菌制剂和抗细菌制剂)的效力。载药体可以增强活性剂在皮脂填充的毛囊上的输送，并且还展现出此类载药体对亲脂性微生物细胞壁/细胞膜的致融合力(fusogenecity)。这使得载药体维持在皮肤上，随后由载药体缓慢并连续地释放DART或抗细菌剂。示例性的载药体包括但不限于微粒、纳米粒、囊泡、脂质体、乳剂、小球和溶液。
除了API(例如DART和/或其它抗菌剂)以外，载药体可进一步包含一种或多种其它组分。例如，载药体可进一步包含选自于由脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合所组成的组的化合物。API(例如DART或其它抗菌剂)可存在于载药体的芯中，并且其它组分可围绕芯形成涂布层。非限制性地，涂布层可以是功能性或非功能性的涂布层。功能性涂布层是指赋予载药体一种或多种期望性质的涂布层，例如，增强在作用位点处的靶向作用或停留、增加API活性或其本身具有期望活性。
在一些实施方式中，DART和/或其它抗细菌剂可成型为颗粒。除了API(例如DART和/或其它抗细菌剂)以外，该颗粒可以进一步包含选自于由脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白以及它们的任意组合所组成的组中的化合物。API(例如DART或其它抗细菌剂)可存在于颗粒的芯中，其它组分可在芯上形成涂布层。
在一些实施方式中，颗粒包含位于其表面上的表面改性剂。通常，表面改性剂是可以改变所考虑的颗粒的表面(如通过涂布)从而协助将整个颗粒附着在特定表面的分子。通常，表面改性不涉及化学键合变化或建立任何化学键。表面改性剂仅在物理上与颗粒相关联。
表面改性剂可以选自于由脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合所组成的组。表面改性剂可在颗粒表面上形成涂布层。非限制性地，颗粒可以部分或完全地被表面改性剂涂布。
在一些实施方式中，本文所公开的载药体和制剂可进一步包含活性剂，即，除了DART和/或抗菌剂以外的活性剂。本文所使用的术语“活性剂”是指具有特定期望活性的化合物或组合物。例如，活性剂可以是治疗性化合物。非限制性地，活性剂可选自于由以下物质所组成的组：有机或无机小分子、糖精(saccharines)、寡糖、多糖、肽；蛋白质、肽类似物和衍生物、肽模拟物、核酸、核酸类似物和衍生物、抗体、抗体的抗原结合片段、脂、由生物材料制成的提取物、天然存在的或合成的组合物以及它们的任意组合。
在一些实施方式中，活性剂可选自于由以下试剂所组成的组：抗真菌剂、抗细菌剂、抗微生物剂、抗痤疮剂、抗氧化剂、清凉剂、舒缓剂(soothing agent)、伤口愈合剂、抗炎剂、穿透促进剂(penetration enhancers)、渗透促进剂(permeation enhancers)、抗氧化剂、抗老化剂、抗皱剂、皮肤增白剂或漂白剂、紫外(UV)线吸收剂或散射剂、皮肤脱色剂、再生剂、疤痕愈合剂、染料或着色剂、除臭剂、芳香剂、角质层分离剂以及它们的任意组合。在一些实施方式中，活性剂可以是角质层分离剂。
在一些实施方式中，活性剂是抗炎剂。本文所使用的术语“抗炎剂”是指可以用于治疗炎症或炎症相关疾病或疾患的化合物(包括其类似物、衍生物、前药和药学上的盐)。示例性抗炎剂包括但不限于已知的甾体抗炎药和非甾体抗炎药(NSAID)。示例性的甾体抗炎剂包括但不限于：21-乙酰氧基孕烯醇酮、阿氯米松、阿尔孕酮、安西奈德、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、氯泼尼松、氯倍他索、氯倍他松(clobetansone)、氯可托龙、氯泼尼醇、皮质酮、可的松、可的伐唑、地夫可特、地奈德、去羟米松、地塞米松、二氟拉松、二氟可龙、二氟泼尼酯、甘草次酸、氟扎可特、氟氯奈德、氟米松、氟尼缩松、氟轻松醋酸酯(fluocinoloneacetonide)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟考丁酯、氟可龙、氟米龙、醋酸氟培龙、醋酸氟泼尼定、氟泼尼龙、氟氢缩松、丙酸氟替卡松、福莫可他、哈西奈德、丙酸卤贝他索、卤米松、醋酸卤泼尼松、氢可他酯、氢化可的松、依碳酸氯替泼诺、马泼尼酮、甲羟松、甲泼尼松、甲泼尼龙、糠酸莫米松(mometasone furcate)、帕拉米松(paramethosone)、泼尼卡松、泼尼松龙、泼尼松龙25-二乙基氨基乙酸酯、强的松龙磷酸钠、泼尼松、泼尼松龙戊酸酯(prednival)、泼尼立定、利美索龙、替可的松、曲安西龙、曲安奈德、苯曲安缩松、曲安西龙(triamcinolone hexacetonide)、上述物质的衍生物及其混合物。示例性的非甾体抗炎剂包括但不限于：COX抑制剂(COX-1或COX非特异性抑制剂)和选择性COX-2抑制剂。示例性的COX抑制剂包括但不限于：水杨酸衍生物，例如阿斯匹林、水杨酸钠、三水杨酸胆碱镁、水杨酸盐/酯、二氟尼柳、柳氮磺吡啶和奥沙拉秦；对氨基苯酚衍生物，例如对乙酰氨基酚；吲哚和茚乙酸，例如茚甲新和舒林酸；杂芳基乙酸，例如托美丁、双氯芬酸和酮咯酸；芳基丙酸，例如布洛芬、萘普生、氟比洛芬、酮洛芬、非诺洛芬和奥沙普秦；邻氨基苯甲酸(灭酸)类，例如甲芬那酸和美洛昔康；烯醇酸，例如昔康类(吡罗昔康、美洛昔康)；烷酮，例如萘丁美酮；它们的衍生物和它们的混合物。示例性的COX-2抑制剂包括但不限于：二芳基取代的呋喃酮，例如罗非昔布；二芳基取代的吡唑，例如塞来昔布；吲哚乙酸类，例如依托度酸；以及磺酰苯胺类，例如尼美舒利；它们的衍生物和它们的混合物。
在一些实施方式中，活性剂是抗老化剂。本文所使用的术语“抗老化剂”是指抑制或减少老化迹象(例如皱纹、细纹和光损伤的其它表现)的化合物或组合物。抗老化剂的实例包括但不限于：类黄酮，例如槲皮素、橙皮苷、槲皮苷、芸香苷、柑橘黄酮和表儿茶素；CoQ10；无机防晒剂，例如二氧化钛和氧化锌；有机防晒剂，例如辛基甲基肉桂酸酯及其衍生物；类视黄醇；维生素，例如维生素E、维生素A、维生素C(抗坏血酸)、维生素B、以及它们的衍生物(例如维生素E乙酸酯、维生素C棕榈酸酯等)；包括α-羟基酸的抗氧化剂，例如乙醇酸、柠檬酸、乳酸、苹果酸、扁桃酸、抗坏血酸、α-羟基丁酸、α-羟基异丁酸、α-羟基异己酸、阿卓乳酸(atrrolactic acid)、α-羟基异戊酸、丙酮酸乙酯、半乳糖醛酸、glucopehtonic酸、glucopheptono 1,4-内酯、葡糖酸、葡糖酸内酯、葡糖醛酸、葡糖醛酸内酯(glucurronolactone)、乙醇酸、丙酮酸异丙酯、丙酮酸甲酯、粘酸、丙酮酸、糖酸、糖酸1,4-内酯、酒石酸和丙醇二酸；β-羟基酸，例如β-羟基丁酸、β-苯基乳酸、β-苯基丙酮酸；植物提取物，例如绿茶、大豆、奶蓟、海藻、芦荟、当归、苦橙、咖啡、黄连、柚子、hoellen、金银花、薏仁、紫草、桑椹、白芍、葛藤(puerarua)、大米、红花和它们的混合物。
在一些实施方式中，活性剂是紫外(UV)线吸收剂或散射剂。紫外线吸收剂包括例如苯甲酸体系的紫外吸收剂，例如对氨基苯甲酸(以下简称为PABA)、PABA单甘油酯、N,N-二丙氧基PABA乙酯、N,N-二乙氧基PABA乙酯、N,N-二甲基PABA乙酯、N,N-二甲基PABA丁酯和N,N-二甲基PABA甲酯等；邻氨基苯甲酸体系的紫外吸收剂，例如N-乙酰邻氨基苯甲酸高薄荷酯等；水杨酸体系的紫外吸收剂，例如水杨酸戊酯、水杨酸薄荷酯、水杨酸高薄荷酯、水杨酸辛酯、水杨酸苯酯、水杨酸苄酯、水杨酸对异丙醇苯基酯等；肉桂酸体系的紫外吸收剂，例如肉桂酸辛酯、4-异丙基肉桂酸乙酯、2,5-二异丙基肉桂酸甲酯、2,4-二异丙基肉桂酸乙酯、2,4-二异丙基肉桂酸甲酯、对甲氧基肉桂酸丙酯、对甲氧基肉桂酸异丙酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、对甲氧基肉桂酸辛酯(对甲氧基肉桂酸2-乙基己酯)、对甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、对甲氧基肉桂酸环己酯、α氰基-β-苯基肉桂酸乙酯、α-氰基-β-苯基肉桂酸2-乙基己酯、甘油单-2-乙基己酰基-二对甲氧基肉桂酸酯、双(三甲基硅氧烷)甲硅烷基异戊基三甲氧基肉桂酸甲酯等；3-(4'-甲基亚苄基)-d,l-樟脑；3-亚苄基-d,l-樟脑；尿刊酸、尿刊酸乙酯；2-苯基-5-甲基苯并噁唑；2,2'-羟基-5-甲基苯基苯并三唑；2-(2'-羟基-5'-叔辛基苯基)苯并三唑；2-(2'-羟基-5'-甲基苯基)苯并三唑；二苄基吖嗪(dibenzaladine)；二茴香酰基甲烷(dianisoylmethane)、4-甲氧基-4'-叔丁基二苯甲酰基甲烷；5-(3,3-二甲基-2-亚降冰片基)-3-戊烷-2-酮；二吗啉代哒嗪酮；以及它们的组合。紫外线散射剂包括例如粉末、例如氧化钛、微粒氧化钛、氧化锌、微粒氧化锌、氧化铁、微粒氧化铁和氧化铈等。
在一些实施方式中，活性剂是抗皱剂，例如皮肤病学抗皱剂。抗皱剂包括但不限于黄酮类，例如槲皮素、橙皮苷、槲皮苷、芸香苷、柑橘黄酮和表儿茶素；CoQ10；维生素C；包括C2-C30α-羟基酸的羟基酸，例如乙醇酸、乳酸、2-羟基丁酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、α-羟基乙酸、羟基辛酸等；包括水杨酸和多羟基酸的β-羟基酸，包括葡萄糖酸内酯(G4)；以及这些酸的混合物。进一步地，抗皱剂包括视黄酸和γ-亚麻酸。
在一些实施方式中，活性剂是皮肤增白剂或漂白剂。皮肤增白剂和漂白剂包括：过氧化氢、过氧化锌、过氧化钠、氢醌、4-异丙基儿茶酚、氢醌单苄基醚、曲酸；乳酸；抗坏血酸和衍生物，例如抗坏血酸磷酸镁；熊果苷；和甘草。免晒美黑活性物包括：二羟基丙酮(DHA)；甘油醛；酪氨酸和酪氨酸衍生物，例如苹果酰酪氨酸(malyltyrosine)、酪氨酸硫苷(tyrosine glucosinate)和乙基酪氨酸；磷酸-DOPA、吲哚及其衍生物；以及它们的混合物。其它皮肤增白剂包括糖胺，例如葡糖胺、N-乙酰葡糖胺、氨基葡萄糖硫酸盐、甘露糖胺、N-乙酰甘露糖胺、半乳糖胺、N-乙酰半乳糖胺、它们的异构体(如立体异构体)和它们的盐(例如盐酸盐)；以及N-酰基氨基酸化合物，例如N-酰基苯丙氨酸、N-酰基酪氨酸、它们的异构体(包括它们的D和L异构体)、盐、衍生物以及上述物质的混合物。合适的N-酰基氨基酸的实例为N-十一碳烯酰基-L-苯丙氨酸。
在一些实施方式中，活性剂是皮肤脱色剂。合适的脱色剂的实例包括但不限于：大豆提取物；大豆异黄酮；类视黄醇类，例如视黄醇；曲酸；曲酸二棕榈酸酯；氢醌；熊果苷；氨甲环酸(transexamic acid)；维生素，例如烟酸和维生素C；壬二酸；亚麻酸和亚油酸；placertia；甘草；和例如甘菊和绿茶的提取物；以及它们的盐和前药。
在一些实施方式中，活性剂是抗氧化剂。本文所使用的术语“抗氧化剂”是指能够减缓、降低、抑制或防止其它分子氧化的任何分子。抗氧化剂的实例包括但不限于亲水性抗氧化剂、亲脂性抗氧化剂以及它们的混合物。亲水性抗氧化剂的非限制性实例包括螯合剂(例如，金属螯合剂)，例如乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸盐、乙二醇四乙酸(EGTA)、1,2-双(邻氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)、二乙三胺五乙酸(DTPA)、2,3-二巯基-1-丙磺酸(DMPS)、二巯基琥珀酸(DMSA)、α-硫辛酸、水杨醛异烟酰腙(SIH)、己基硫乙基胺盐酸盐(HTA)、去铁胺、它们的盐以及它们的混合物。其它亲水性抗氧化剂包括抗坏血酸(维生素C)、半胱氨酸、谷胱甘肽、二氢硫辛酸、2-巯基乙磺酸、2-巯基苯并咪唑磺酸、6-羟基-2,5,7,8-四甲基色满-2-羧酸、偏亚硫酸氢钠、它们的盐以及上述物质的混合物。亲脂性抗氧化剂的非限制性实例包括：维生素E异构体，例如α-、β-、γ-、和δ-生育酚以及α-、β-、γ-、和δ-生育三烯酚；多酚，例如2-叔丁基-4-甲基苯酚、2-叔丁基-5-甲基苯酚和2-叔丁基-6-甲基苯酚；丁基化羟基苯甲醚(BHA)，例如2-叔丁基-4-羟基苯甲醚和3-叔丁基-4-羟基茴香醚；丁基羟基甲苯(BHT)；叔丁基氢醌(TBHQ)；抗坏血酸棕榈酸酯；没食子酸正丙酯；以及它们的盐；和上述物质的混合物。本领域的技术人员将理解的是，抗氧化剂可以基于它们的作用机制被分为主抗氧化剂、辅抗氧化剂或金属螯合剂。主抗氧化剂猝灭通常为氧化途径来源的自由基，而辅抗氧化剂通过分解过氧化物而发挥作用，所述过氧化物为氧化途径的活性中间体。金属螯合剂通过隔离促进自由基形成的痕量金属而发挥作用。在一些实施方式中，抗氧化剂为白藜芦醇。
在一些实施方式中，活性剂是伤口愈合剂。本文所使用的术语“伤口愈合剂”是指有效用于促进自然伤口经数天、数周或数月愈合过程的活性剂。示例性伤口愈合剂包括但不限于蛋白质生长因子、血管内皮生长因子、抗增生剂、抗微生物剂和抗炎剂。
在一些实施方式中，活性剂是舒缓剂。本文所使用的术语“舒缓剂”是指例如通过舒缓瘙痒感觉而有助于降低皮肤和/或头皮不适的分子。示例性的舒缓剂包括但不限于芦荟、鳄梨油、绿茶提取物、啤酒花提取物、甘菊提取物、胶质燕麦片、炉甘石、黄瓜提取物、棕榈油酸钠(sodium palmate)、棕榈仁油酸钠、乳油木(即乳木果油)、椒薄荷(即薄荷)叶油、丝胶、吡哆醇(维生素B6的一种形式)、棕榈酸视黄酯和/或其它形式的维生素A、醋酸生育酚和/或其它形式的维生素E、月桂酸月桂酯、透明质酸、库拉索芦荟叶汁粉、尤特普甘蓝(即阿萨依莓)果提取物、核黄素(即维生素B2)、盐酸硫胺和/或其它形式的维生素B1和/或它们的任意组合。
在一些实施方式中，活性剂是清凉剂。本文所使用的术语“清凉剂”是指在应用中提供清凉感的分子。一些示例性的清凉剂包括但不限于：WS-3、WS-23、薄荷醇、3-取代-P-薄荷烷、N-取代-P-薄荷烷-3-羧酰胺、异胡薄荷醇、3-(1-薄荷氧基)丙烷-1,2-二醇、3-(1-薄荷氧基)-2-甲基丙烷-1,2-二醇、对薄荷烷-2,3-二醇、对薄荷烷-3,8-二醇、6-异丙基-9-甲基-1,4-二氧杂螺[4,5]癸烷-2-甲醇、琥珀酸薄荷酯和其碱土金属盐、三甲基环己醇、N-乙基-2-异丙基-5-甲基环己烷甲酰胺、日本薄荷油、薄荷油、薄荷酮、薄荷酮甘油缩酮、乳酸薄荷酯、3-(1-薄荷氧基)乙-1-醇、3-(1-薄荷氧基)丙-1-醇、3-(1-薄荷氧基)丁-1-醇、1-薄荷基乙酸N-乙基酰胺、1-薄荷基-4-羟基戊酸酯、1-薄荷基-3-羟基丁酸酯、N,2,3-三甲基-2-(1-甲基乙基)-丁酰胺、正乙基-t-2-c-6壬二烯酰胺、N,N-二甲基薄荷琥珀酰胺、薄荷基吡咯烷酮羧酸酯等。
在一些实施方式中，活性剂为着色剂。本文所使用的术语“着色剂”是指可用于产生期望颜色的任何物质。通常，依据适当的政府机构和/或法案(诸如食品和药品管理局(FDA)/联邦食品药品和化妆品法案(FD&C)或欧盟的类似机构)，批准此类着色剂用于人类消费。例如，着色剂可以是食品级染料或色淀(lake)。“染料”是水溶性化合物，其可作为粉末、颗粒、液体或其它特殊用途的形式获得。“色淀”是染料的非水溶性形式。示例性着色剂包括但不限于FD&C蓝1号(亮蓝)、FD&C蓝2号(靛蓝)、FD&C绿3号(固绿)、FD&C红3号(赤藓红)、FD&C红40号(诱惑红)、FD&C黄5号(酒石黄)、FD&C黄6号(日落黄)、胭脂树提取物、花青素、野樱莓/红果、甜菜汁、甜菜粉末、β-胡萝卜素、β-apo-8-胡萝卜醛、黑醋栗、焦糖、角黄素、饴糖、药用碳、胭脂红、胭脂红/β-胡萝卜素、胭脂蓝(carmine blue)、胭脂红酸、胡萝卜、胡萝卜油、叶绿素、叶绿酸、胭脂虫提取物、铜叶绿素、铜叶绿酸、姜黄素、姜黄素/铜-叶绿酸、接骨木果、葡萄、葡萄皮提取物、木槿、叶黄素、混合类胡萝卜素、红辣椒、红辣椒提取物、辣椒红素、核黄素、藏红花、菠菜、荨麻、二氧化钛、姜黄以及它们的组合。根据本发明优选的着色剂为FD&C蓝1号(亮蓝)、FD&C蓝2号(靛蓝)、FD&C绿3号(固绿)、FD&C红3号(赤藓红)、FD&C红40号(诱惑红)、FD&C黄5号(酒石黄)、FD&C黄6号(日落黄)以及它们的任意组合。
在一些实施方式中，活性剂为香料。示例性的香料包括但不限于：2,4-二甲基-3-环己烯-1-甲醛；异环柠檬醛；薄荷酮；异薄荷酮；
Figure BDA0001122120050000481
(2,2-二甲基-6-亚甲基-1-环己烷羧酸甲酯)；橙花酮；松油醇；二氢松油醇；乙酸萜烯酯；乙酸二氢萜品酯；双戊烯；桉油精；己酸盐/酯；玫瑰醚；
Figure BDA0001122120050000482
((S)-1,8-对薄荷二烯-7-醇)；1-对薄荷烯-4-醇；乙酸(1RS,3RS,4SR)-3-对薄荷酯；(1R,2S,4R)-4,6,6-三甲基-二环[3,1,1]庚-2-醇；
Figure BDA0001122120050000483
(四氢-4-甲基-2-苯基-2H-吡喃)；乙酸环己酯；乙酸环烷酯；Fructalate(1,4-环己烷二乙基二羧酸酯)；
Figure BDA0001122120050000484
((3ARS,6SR,7ASR)-全氢化-3,6-二甲基-苯并[B]呋喃-2-酮)；Natactone((6R)-全氢化-3,6-二甲基-苯并[B]呋喃-2-酮)；2,4,6-三甲基-4-苯基-1,3-二噁烷；2,4,6-三甲基-3-环己烯-1-甲醛；(E)-3-甲基-5-(2,2,3-三甲基-3-环戊烯-1-基)-4-戊烯-2-醇；(1'R,E)-2-乙基-4-(2',2',3'-三甲基-3'-环戊烯-1'-基)-2-丁烯-1-醇；
Figure BDA0001122120050000485
((1'R,E)-3,3-二甲基-5-(2',2',3'-三甲基-3'-环戊烯-1'-基)-4-戊烯-2-醇)；2-庚基环戊酮(fleuramone)；
Figure BDA0001122120050000486
((1R)-顺-3-氧-2-戊基-1-环戊烷乙酸甲酯)；Veloutone(2,2,5-三甲基-5-戊基-1-环戊酮)；
Figure BDA0001122120050000487
(3,3-二甲基-5-(2,2,3-三甲基-3-环戊烯-1-基)-4-戊烯-2-醇)；3-甲基-5-(2,2,3-三甲基-3-环戊烯-1-基)-2-戊醇；大马酮(damascones)；
Figure BDA0001122120050000488
(1-(5,5-二甲基-1-环己烯-1-基)-4-戊烯-1-酮)；nectalactone((1'R)-2-[2-(4'-甲基-3'-环己烯-1'-基)丙基]环戊酮)；α-紫罗兰酮；β-紫罗兰酮；大马烯酮(damascenone)；
Figure BDA0001122120050000489
(1-(5,5-二甲基-1-环己烯-1-基)-4-戊烯-1-酮和1-(3,3-二甲基-1-环己烯-1-基)-4-戊烯-1-酮的混合物)；
Figure BDA00011221200500004810
β(1-(2,6,6-三甲基-1-环己烯-1-基)-2-丁烯-1-酮)；
Figure BDA00011221200500004811
((1S,1'R)-[1-(3',3'-二甲基-1'-环己基)乙氧羰基]甲基丙酸酯)；2-叔丁基-1-环己基乙酸酯；
Figure BDA0001122120050000491
(1-(2,2,3,6-四甲基环己基)-3-己醇)；反-1-(2,2,6-三甲基-1-环己基)-3-己醇；(E)-3-甲基-4-(2,6,6-三甲基-2-环己烯-1-基)-3-丁烯-2-酮；萜烯基异丁酸酯；
Figure BDA0001122120050000492
(4-(1,1-二甲基乙基)-1-环己基乙酸酯)；8-甲氧基-1-对薄荷烯；
Figure BDA0001122120050000493
((1S,1'R)-2-[1-(3',3'-二甲基-1'-环己基)乙氧基]-2-甲基丙基丙酸酯)；对叔丁基环己酮；薄荷烯硫醇；1-甲基-4-(4-甲基-3-戊烯基)-3-环己烯-1-甲醛；环己基丙酸烯丙酯；水杨酸环己酯；甲基柏木酮；Verdylate；vetyverol；vetyverone；1-(八氢-2,3,8,8-四甲基-2-萘基)-1-乙酮；(5RS,9RS,10SR)-2,6,9,10-四甲基-1-氧杂螺[4.5]癸-3,6-二烯和(5RS,9SR,10RS)-异构体；6-乙基-2,10,10-三甲基-1-氧杂螺[4.5]癸-3,6-二烯；1,2,3,5,6,7-六氢-1,1,2,3,3-五甲基-4-茚酮；
Figure BDA0001122120050000494
(3-(3,3-二甲基-5-茚满基)丙醛和3-(1,1-二甲基-5-茚满基)丙醛的混合物)；
Figure BDA0001122120050000495
(3',4-二甲基-三环[6.2.1.0(2,7)]十一碳-4-烯-9-螺-2'-环氧乙烷)；9/10-亚乙基-3-氧杂三环[6.2.1.0(2,7)]十一烷；
Figure BDA0001122120050000496
(全氢化-5,5,8A-三甲基-2-萘基乙酸酯)；octalynol；
Figure BDA0001122120050000497
(十二氢-3a,6,6,9a-四甲基-萘并[2,1-b]呋喃)；三环[5.2.1.0(2,6)]癸-3-烯-8-基乙酸酯和三环[5.2.1.0(2,6)]癸-4-烯-8-基乙酸酯以及三环[5.2.1.0(2,6)]癸-3-烯-8-基丙酸酯和三环[5.2.1.0(2,6)]癸-4-烯-8-基丙酸酯；樟脑；冰片；乙酸异冰片酯；8-异丙基-6-甲基-二环[2.2.2]辛-5-烯-2-甲醛；camphopinene；柏木甲醚(8-甲氧基-2,6,6,8-四甲基-三环[5.3.1.0(1,5)]十一烷)；柏木烯；柏木烯醇；柏木醇；
Figure BDA0001122120050000498
(9-亚乙基-3-氧杂三环[6.2.1.0(2,7)]十一碳-4-酮和10-亚乙基-3-氧杂三环[6.2.1.0(2,7)]十一碳-4-酮的混合物；3-甲氧基-7,7-二甲基-10-亚甲基-二环[4.3.1]癸烷；
Figure BDA0001122120050000499
(三甲基-13-氧杂二环[10.1.0]十三碳-4,8-二烯)；Ambrettolide LG((E)-9-十六碳-16-交酯)；
Figure BDA00011221200500004910
(十五烯内酯)；麝香烯酮(3-甲基-(4/5)-环十五烯酮)；麝香酮；
Figure BDA00011221200500004911
(十五内酯)；
Figure BDA00011221200500004912
(环十五烷酮)；(1-乙氧基乙氧基)环十二烷；Astrotone；
Figure BDA00011221200500004913
松香油等。
在一些实施方式中，活性剂是抗真菌剂。示例性的抗真菌剂在本文的其它地方进行了描述。本文所使用的术语“真菌”包括不含叶绿素的各种载有孢子的有核生物体。实例包括酵母菌、霉菌(mildew)、霉(mold)、锈菌和蘑菇。真菌的实例包括但不限于烟曲霉(Aspergillus fumigates)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)、白色念珠菌(Candida albicans)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、吉利盟念珠菌(Candida guilliermondii)、克柔念珠菌(Candida krusei)、葡萄牙念珠菌(Candidalusitaniae)、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、热带念珠菌(Candidatropicalis)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、东方伊萨酵母(Issatchenkiaorientalis)、球孢子菌(Coccidioides)、副球孢子菌(Paracoccidioides)、组织胞浆菌(Histoplasma)、芽生菌(Blastomyces)、红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)和粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)。在一些实施方式中，真菌是马拉色菌属(例如，秕糠马拉色菌(M.furfur)、厚皮马拉色菌(M.pachydermatis)、球形马拉色菌(M.globosa)、限制性马色拉菌(M.restricta)、斯洛菲马拉色菌(M.slooffiae)、合轴马拉色菌(M.sympodialis)、纳纳马拉色菌(M.nana)、大和马拉色菌(M.yamatoensis)、皮肤马拉色菌(M.dermatis)和钝形马拉色菌(M.obtuse))。在一个实施方式中，真菌是红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)。
在一些实施方式中，活性剂是抗细菌剂。示例性的抗细菌剂在本公开本文的其它地方进行了描述。
在一些实施方式中，活性剂是抗瘢痕形成剂。本文所使用的术语“抗瘢痕形成剂”是指抑制纤维化或瘢痕形成的任何试剂。有用的抗瘢痕形成剂可以抑制纤维化过程的一个或多个方面。例如，在某些实施方式中，抗瘢痕形成剂抑制炎症；抑制细胞中胶原蛋白的产生或者释放；和/或作为抗感染剂或抗真菌剂。在一些实施方式中，抗瘢痕形成剂选自于由(-)-牛蒡苷元6所组成的组。如权利要求1或权利要求2所述的装置，其中，所述抗瘢痕形成剂选自于：血管生成抑制剂、5-HT抑制剂、β1整联蛋白拮抗剂、β-微管蛋白抑制剂、选自于利塞膦酸盐及其类似物或衍生物的二膦酸盐化合物、在丙型肝炎中的酶生成阻断剂、骨矿化促进剂、Bruton酪氨酸激酶抑制剂、钙调磷酸酶抑制剂、钙通道阻滞剂、钙调蛋白激酶II抑制剂、半胱天冬酶3抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、组织蛋白酶K抑制剂、组织蛋白酶L抑制剂、CB1/CB2受体激动剂、CC趋化因子受体拮抗剂、CD40拮抗剂、细胞周期抑制剂、细胞周期抑制剂、趋化因子受体拮抗剂、糜酶抑制剂、凝血因子、胶原酶拮抗剂、cual整合蛋白抑制剂、CXCR拮抗剂、环GMP激动剂、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂、环氧合酶1抑制剂、多巴胺D2受体拮抗剂、DHFR抑制剂、利尿剂、DNA烷基化试剂、DNA甲基化抑制剂、DNA甲基化促进剂、DNA甲基化促进剂、DNA合成抑制剂、DNA拓扑异构酶抑制剂、多巴胺拮抗剂、法尼基转移酶抑制剂、farnexyl转移酶抑制剂、纤维蛋白原拮抗剂、G蛋白激动剂、糖基化抑制剂、热休克蛋白90拮抗剂、组胺受体拮抗剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、JAK2抑制剂、JAK3酶抑制剂、JNK抑制剂、激酶抑制剂、驱动蛋白拮抗剂、白三烯抑制剂和拮抗剂、赖氨酰水解酶抑制剂、MAP激酶抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、微管抑制剂、微管抑制剂、毒蕈碱受体抑制剂、神经激肽拮抗剂、一氧化氮激动剂、一氧化氮合酶抑制剂、NO合酶抑制剂、去甲肾上腺素再摄取抑制剂、NSAID剂、p38MAP激酶抑制剂、棕榈酰蛋白硫酯酶抑制剂、PDGF受体激酶抑制剂、肽基甘氨酸α-羟基化单加氧酶抑制剂、肽基脯氨酰顺/反异构酶抑制剂、肽基脯氨酰顺/反异构酶抑制剂、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)激动剂、杀虫剂(pesticide)、磷酸酶抑制剂、磷酸二酯酶抑制剂、PKC抑制剂、PKC抑制剂、血小板活化因子拮抗剂、血小板聚集抑制剂、多形核中性粒细胞抑制剂、脯氨酰羟化酶抑制剂、前列腺素抑制剂、蛋白合成抑制剂、蛋白酪氨酸激酶抑制剂、嘌呤受体P2X拮抗剂、丙酮酸脱氢酶活化剂、Raf激酶抑制剂、RAR/RXT拮抗剂、还原剂、视黄酸受体拮抗剂、视黄酸受体拮抗剂、选择性血清素再摄取抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、血清素受体抑制剂、脱落酶抑制剂、钠通道抑制剂、类固醇、类固醇、溶基质蛋白酶抑制剂、超氧阴离子生成剂、TACE抑制剂、端粒酶抑制剂、TGFβ抑制剂、血栓素A2受体抑制剂、TNF-α拮抗剂、Toll样受体抑制剂、类胰蛋白酶抑制剂、微管蛋白拮抗剂、肿瘤坏死因子拮抗剂、酪氨酸激酶抑制剂、VEGF抑制剂、维生素D受体激动剂、氨苄青霉素钠盐、乙酰胆碱酯酶抑制剂、肌动蛋白聚合和稳定促进剂、腺苷酸环化酶激动剂、ALK-5受体拮抗剂、α-肾上腺素能受体拮抗剂、雄激素抑制剂、麻醉剂化合物、血管紧张素II受体激动剂、抗生素(选自于由芹菜素、抗凝血剂、止吐剂、抗炎化合物、抗代谢物和抗肿瘤剂所组成的组)、抗微生物剂、抗微生物剂、抗肿瘤剂、抗氧化剂、抗增殖剂、抗精神病化合物、抗痉挛剂、抗血栓剂、抗病毒剂、细胞凋亡活化剂、细胞凋亡活化剂、细胞凋亡拮抗剂、芳香酶抑制剂、AXOR12激动剂、弹性蛋白酶抑制剂、elF-2a抑制剂、伸长因子-1α抑制剂、内皮生长因子拮抗剂、内皮细胞生长因子受体激酶抑制剂、内毒素拮抗剂、埃坡霉素和微管蛋白结合剂、雌激素激动剂、雌激素受体拮抗剂、FGF抑制剂、FGF受体激酶抑制剂、FLT-3激酶抑制剂、FXR拮抗剂、HMGCoA还原酶抑制剂、HMGCoA还原酶抑制剂、ICAM抑制剂、IL、IL-2抑制剂、免疫抑制剂、III型受体酪氨酸激酶的抑制剂、肌苷单磷酸盐抑制剂、白介素拮抗剂、细胞内钙通量抑制剂、细胞内钙通量抑制剂、细胞内钙流入抑制剂、甲硫氨酸氨基肽酶2型的不可逆酶抑制剂、同功酶选择性δ蛋白激酶C抑制剂、MCP-CCR2抑制剂、MEK1/MEK2抑制剂、MIF抑制剂、mTOR抑制剂、mTOR激酶抑制剂、NFκB抑制剂、鸟氨酸脱羧酶抑制剂、S-腺苷基-L-高半胱氨酸水解酶抑制剂、SDF-1拮抗剂、SRC抑制剂、Syk激酶抑制剂、α葡萄糖苷酶抑制剂、
Figure BDA0001122120050000521
拮抗剂、以及选自于Bay 11-7085的免疫调节剂、和IRAK拮抗剂、ICE、咪唑克生盐酸盐、蛋白激酶B抑制剂、蛋白激酶C刺激剂、嘌呤核苷类似物、嘌呤霉素、ErbB1和ErbB2的可逆抑制剂、核糖核苷三磷酸还原酶抑制剂、它们的任意组合。在一些实施方式中，抗瘢痕形成剂可选自于：ZD-6474、AP-23573、synthadotin、S-0885、阿普立定、伊沙匹隆、IDN-5390、SB-2723005、ABT-518、考布他汀、乙酸阿奈可他、SB-715992、西罗莫司脂化物、阿达木单抗、芥酸磷酸胆碱、alphastatin、依那西普、humicade、吉非替尼、异维甲酸、根赤壳菌素、氯倍他索丙酸盐、高三尖杉酯碱、曲古菌素A、布雷菲德菌素A、毒胡萝卜素、多拉司他汀、西立伐他汀、jasplakinolide、除莠霉素A、吡非尼酮、长春瑞滨、17-DMAG、他克莫司、氯替泼诺、胡桃醌、泼尼松龙、嘌呤霉素、3-BAABE、克拉屈滨、甘露糖-6-磷酸、5-氮杂胞苷、Ly333531(鲁伯斯塔)和辛伐他汀。
在一些实施方式中，活性剂是皮肤再生剂。一些皮肤再生试剂可充当抗瘢痕形成剂。
在一些实施方式中，载药体包含另外的抗痤疮剂。在一些实施方式中，所述另外的抗痤疮剂可以选自于由以下试剂所组成的组：阿维A、阿达帕林、阿利维甲酸、α-羟基酸或β-羟基酸、抗生素、抗微生物肽、抗生素药剂、壬二酸、过氧化苯甲酰、贝沙罗汀、胆盐、生物膜抑制剂、克林霉素、红霉素、依曲替酯、乙醇酸、异维甲酸、角质层分离剂、乳酸、硫辛酸、N-乙酰半胱氨酸、天然抗痤疮剂、羟甲辛吡酮、苯氧乙醇、苯氧丙醇、丙酮酸、间苯二酚、视黄酸、类视黄醇、水杨酸、sebostats、磺胺醋酰钠、螺内酯、硫、含硫的D-氨基酸或L-氨基酸、他扎罗汀、茶树油、维甲酸、三氯生、脲以及它们的任意组合。
本文所公开的载药体可包含任意量的API(例如，DART或其它试剂)。例如，所述载药体可包含约0.01％至约99％(w/w)的API。例如，所述颗粒可以包含约0.01％至约20％(w/w)之间的API。在一些实施方式中，API占载药体总重量的大于1％(w/w)、大于5％(w/w)、大于10％(w/w)、大于15％(w/w)、大于20％(w/w)、大于25％(w/w)、大于30％(w/w)、大于35％(w/w)、大于40％(w/w)、大于45％(w/w)、大于50％(w/w)、大于55％(w/w)、大于60％(w/w)、大于65％(w/w)、大于70％(w/w)、大于75％(w/w)、大于80％(w/w)、大于85％(w/w)、大于90％(w/w)、或大于95％(w/w)。在一些实施方式中，API在载药体中的含量可为约75％至约97％(w/w)。在其它一些实施方式中，API在载药体中的含量可为约3％至约25％(w/w)。
在本文所公开的载药体或制剂中使用的脂可选自于由以下物质组成的组：脂肪酸；脂肪醇；甘油脂(例如单甘油酯；甘油二酯和甘油三酯)；磷脂；甘油磷脂；鞘脂；甾醇脂；异戊烯醇脂；糖脂；聚酮化合物以及它们的任意组合。在一些实施方式中，脂可以选自于由以下物质组成的组：1,3-丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯；10-十一碳烯酸；1-三十二烷醇；1-二十七烷醇；1-二十九烷醇；2-乙基己醇；雄烷；花生酸；花生四烯酸；花生醇；山嵛酸；山嵛醇；Capmul MCM C10；癸酸；癸醇；辛醇；辛酸；饱和脂肪醇C12-C18的辛酸酯/癸酸酯；辛酸/癸酸甘油三酯；辛酸/癸酸甘油三酯；神经酰胺磷酰胆碱(鞘磷脂，SPH)；神经酰胺磷酰乙醇胺(鞘磷脂，Cer-PE)；神经酰胺磷酰甘油；蜡塑酸；蜡酸；蜡酸；蜡醇；鲸蜡硬脂醇；鲸蜡醇聚醚-10；鲸蜡醇；胆烷；胆甾烷；胆固醇；顺-11-二十碳烯酸；顺-11-十八碳烯酸；顺-13-二十二碳烯酸；二十八烷醇(cluytyl alcohol)；辅酶Q10(CoQ10)；二高-γ-亚麻酸；十二碳六烯酸；卵磷脂；二十碳五烯酸；二十碳烯酸；反油酸；反式十八烯亚麻醇(elaidolinolenylalcohol)；反式十八烯亚麻醇；反油醇；芥酸；芥醇；雌烷；二硬脂酸乙二醇酯(EGDS)；格地酸；格地醇；二硬脂酸甘油酯(I型)EP(Precirol ATO 5)；甘油三辛酸酯/癸酸酯；甘油三辛酸酯/癸酸酯(
Figure BDA0001122120050000541
355EP/NF)；甘油单辛酸酯(Capmul MCM C8EP)；甘油三乙酸酯；甘油三辛酸酯；甘油三辛酸酯/癸酸酯/月桂酸酯；甘油三辛酸酯/三癸酸酯；甘油三棕榈酸酯(三棕榈精)；三十一烷酸；二十一烷醇；二十一烷酸；二十七烷酸；十七烷酸；十七烷醇；三十六烷酸；异硬脂酸；异硬脂醇；虫漆蜡酸(lacceroic acid)；月桂酸；月桂醇；二十四烷酸；二十四烷醇；反式亚麻酸(Linoelaidic acid)；亚油酸；亚麻醇；亚麻醇；十七烷酸；米德(mead)；蜂花酸；蜂花醇；褐煤酸；褐煤醇；蜂蜡醇(myricyl alcohol)；肉豆蔻酸；肉豆蔻油酸；肉豆蔻醇；新癸酸；新庚酸；新壬酸；神经酸；二十九烷酸；十九烷醇；十九烷酸；十九烷酸；油酸；油醇；棕榈酸；棕榈油酸；棕榈油醇；壬酸；壬醇；二十五烷酸；十五烷醇；十五烷酸；磷脂酸(磷脂酸盐/酯，PA)；磷脂酰胆碱(卵磷脂，PC)；磷脂酰乙醇胺(脑磷脂，PE)；磷脂酰肌醇(PI)；磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)；磷脂酰肌醇磷酸(PIP)；磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)；磷脂酰丝氨酸(PS)；聚甘油-6-二硬脂酸酯；孕烷；丙二醇二癸酸酯；丙二醇二辛癸酸酯；丙二醇二辛癸酸酯；三十三烷酸；蓖麻油酸(recinoleaic acid)；蓖麻油醇；十六碳烯酸(sapienicacid)；大豆卵磷脂；硬脂酸；十八碳四烯酸；硬脂醇；二十三烷酸；十三烷醇；十三烷酸；三油酸甘油酯；十一烷醇；十一烯酸；十一烷酸；异油酸；α-亚麻酸；γ-亚麻酸；下述物质的脂肪酸盐，该物质包括10-十一碳烯酸、阿达帕林、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、丁酸、癸酸、辛酸、蜡酸、顺-11-二十碳烯酸、顺-11-十八碳烯酸、顺-13-二十二碳烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、反油酸、芥酸、二十一烷酸、二十七烷酸、十七烷酸、异硬脂酸、月桂酸、二十四烷酸、反式亚麻酸、亚油酸、褐煤酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻油酸、新癸酸、新庚酸、新壬酸、十九烷酸、油酸、棕榈酸、棕榈油酸、壬酸、二十五烷酸、十五烷酸、蓖麻油酸(如蓖麻油酸锌)、十六碳烯酸、硬脂酸、二十三烷酸、十三烷酸、十一碳烯酸、十一烷酸、异油酸、戊酸、α-亚麻酸、或γ-亚麻酸；石蜡；以及它们的任意组合。在一些实施方式中，脂可以是包含11个碳以下的脂肪酸。例如，该脂肪酸可以包含6、7、8、9、10或11个碳。
不希望受理论的束缚，相信脂肪酸盐可以在颗粒中使用，以增强抗细菌活性(例如抗痤疮活性)并在包含所述载药体的组合物中提供稳定性。因此，在一些实施方式中，所述脂为脂肪酸盐。非限制性地，脂肪酸盐可以选自于由锌盐、钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、铜盐、钙盐、镁盐、锶盐、锰盐和它们的组合所组成的组。载药体可以包含任何量的脂组分。例如，载药体可包含约0.01％至约99％(w/w)之间的脂组分。在一些实施方式中，脂组分占载药体总重量的大于0.1％(w/w)、大于0.5％(w/w)、大于1％(w/w)、大于2％(w/w)、大于3％(w/w)、大于4％(w/w)、大于5％(w/w)、大于6％(w/w)、大于7％(w/w)、大于8％(w/w)、大于9％(w/w)、大于10％(w/w)、大于11％(w/w)、大于12％(w/w)、大于13％(w/w)、大于14％(w/w)、大于15％(w/w)、大于16％(w/w)、大于17％(w/w)、大于18％(w/w)、大于19％(w/w)、大于20％(w/w)、大于25％(w/w)、大于30％(w/w)、大于35％(w/w)、大于40％(w/w)、大于45％(w/w)或大于50％(w/w)。通常，载药体中脂组分的含量范围为约2％-25％(w/w)。
活性剂(例如，DART或其它抗细菌剂)与涂布层的总脂组分之比可以是任意所期望的比值。例如，活性剂与总脂组分之比的范围可以为约100:1至约1:100。在一些实施方式中，活性剂与总脂成分的比的范围可为约75:1至约1:75、约50:1至约1:50、约25:1至约1:25、约20:1至约1:20、约15:1至约1:15、约5:1至约1:5、或约25:1至约1:5。在一些实施方式中，活性剂与总脂组分之比为约30:1、约25:1、约20:1、约15:1、约10:1、约5:1或约1:1。该比值可以基于重量、质量或摩尔量。
涂布层的厚度范围可以为纳米至毫米。例如，涂布层的厚度范围可以为约1nm至约5000nm、约5nm至约2500nm、约10nm至约2000nm、约50nm至约1500nm、约20nm至从约1000nm、约1nm至约1000nm、约1nm至约500nm、约1nm至约250nm、约1nm至约200nm、约1nm至约150nm、约1nm至约100nm、约2nm至约50nm或约5nm至约25nm。
在一些实施方式中，载药体可包含两种以上(例如，1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种以上)的脂，即，载体可包含第一脂和第二脂。例如，涂布层可包含不同于第一酯的第二脂。
在本文所公开的载药体或制剂中所使用的示例性蛋白质可包括但不限于：肌动蛋白、白蛋白、苋菜蛋白、铵水解动物蛋白、动物蛋白、大麦蛋白、巴西坚果蛋白、酪蛋白、胶原蛋白、水解的胶原蛋白、贝壳硬蛋白、玉米蛋白、棉籽蛋白、弹性蛋白、伸展蛋白、丝素蛋白、纤连蛋白、鱼蛋白、鳕鱼蛋白、明胶、谷蛋白、糖蛋白、榛子蛋白、血红蛋白、火麻仁蛋白、蜂蜜蛋白、水解肌动蛋白、水解苋菜蛋白、水解动物蛋白、水解大麦蛋白、水解巴西坚果蛋白、水解贝壳硬蛋白、水解玉米蛋白、水解棉籽蛋白、水解弹性蛋白、水解伸展蛋白、水解丝素蛋白、水解纤连蛋白、水解鱼蛋白、水解鳕鱼蛋白、水解鳕鱼蛋白、水解明胶、水解头发角蛋白、水解榛子、水解榛子蛋白、水解血红蛋白、水解火麻仁蛋白、水解蜂蜜蛋白、水解角蛋白、水解羽扇豆蛋白、水解欧亚槭蛋白、水解牛奶蛋白、水解燕麦蛋白、水解豌豆蛋白、水解马铃薯蛋白、水解网硬蛋白、水解蜂王浆蛋白、水解丝胶蛋白、水解血清蛋白、水解芝麻蛋白、水解大豆蛋白、水解豆奶蛋白、水解脊髓蛋白、水解海绵硬蛋白、水解甜杏仁蛋白、水解植物蛋白、水解小麦谷蛋白、水解小麦蛋白、水解乳清蛋白、水解酵母蛋白、水解酸奶蛋白质、水解玉米醇溶蛋白、整合素、水解霍霍巴蛋白HP、角蛋白、羽扇豆蛋白、欧亚槭蛋白、MEA水解胶原蛋白、MEA水解蚕丝、牛奶蛋白、肌球蛋白、燕麦蛋白、豌豆蛋白、聚赖氨酸、马铃薯蛋白、网硬蛋白、季铵化米蛋白(Rice Quat)、蜂王浆蛋白、丝胶蛋白、血清蛋白、芝麻蛋白、蚕丝粉、钠水解酪蛋白、大豆蛋白、豆米肽、豆奶蛋白、脊髓蛋白、海绵硬蛋白、甜杏仁蛋白、植物蛋白、小麦谷蛋白、乳清蛋白、酵母蛋白、酸奶蛋白、玉米蛋白、以及锌水解胶原蛋白。
在一些实施方式中，蛋白质是白蛋白。白蛋白可以是天然存在的白蛋白、白蛋白相关的蛋白质或其变体，例如天然的或工程化的变体。变体包括多态性、片段(例如结构域和子结构域、片段和/或融合蛋白)。白蛋白可以包含由任何来源获得的白蛋白蛋白质序列。已知许多蛋白质存在于白蛋白家族中。因此，白蛋白可以包含由以下来源的血清白蛋白之一衍生的白蛋白序列：非洲爪蛙(例如参见Swissprot登记号P08759-1)、牛(例如参见Swissprot登记号P02769-1)、猫(例如参见Swissprot登记号P49064-1)、鸡(例如参见Swissprot登记号P19121-1)、鸡卵清蛋白(例如参见Swissprot登记号P01012-1)、眼镜蛇ALB(例如参见Swissprot登记号Q91134-1)、狗(例如参见Swissprot登记号P49822-1)、驴(例如参见Swissprot登记号QSXLE4-1)、欧洲水蛙(例如参见Swissprot登记号Q9YGH6-1)、血吸虫(例如参见Swissprot登记号AAL08579和Q95VB7-1)、长爪沙鼠(例如参见Swissprot登记号O35090-1和JC5838)、山羊(例如参见Swissprot登记号B3VHM9-1，可作为商品编号A2514或A4164获得自Sigma公司)、豚鼠(例如参见Swissprot登记号Q6WDN9-1)、仓鼠(参见DeMarco等，2007，International Journal for Parasitology，37(11)：1201-1208)、马(例如参见Swissprot登记号P35747-1)、人(例如参见Swissprot登记号P02768-1)、澳大利亚肺鱼(例如参见Swissprot登记号P83517)、猕猴(恒河猴)(例如参见Swissprot登记号Q28522-)、小鼠(例如参见Swissprot登记号P07724-1)、北美牛蛙(例如参见Swissprot登记号P21847-1)、猪(例如参见Swissprot登记号P08835-1)、鸽子(例如，Khan等，2002,1112，J.Biol.Macromol，30(3-4)，171-8中所定义的)、兔(例如参见Swissprot登记号P49065-1)、大鼠(例如参见Swissprot登记号P02770-1)、蝾螈(例如参见Swissprot登记号Q8UW05-1)、鲑鱼ALB1(例如参见Swissprot登记号P21848-1)、鲑鱼ALB2(例如参见Swissprot登记号Q03156-1)、海七鳃鳗(例如参见Swissprot登记号Q91274-1和O42279-1)、绵羊(例如参见Swissprot登记号P14639-1)、苏门答腊猩猩(例如参见Swissprot登记号Q5NVH5-1)、大蜥蜴(例如参见Swissprot登记号Q8JIA9-1)、火鸡卵清蛋白(例如参见Swissprot登记号O73860-1)、热带爪蟾(例如参见Swissprot登记号Q6D.I95-1)，并且所述白蛋白包括如本文定义的它们的变体和片段。许多天然存在的白蛋白的突变形式是已知的。在Peters(1996，AllAbout Albumin:Biochemistry,Genetics and Medical Applications，Academic Press,Inc.，San Diego，California，p.170-181)中描述了多种，通过引用将其内容并入本文。术语白蛋白还包括白蛋白变体，例如基因工程化的形式、突变形式和片段等，其具有一个或多个结合位点，所述结合位点类似于对如上所定义的一个或多个白蛋白而言唯一的结合位点。在本发明的上下文中所考虑的类似结合位点是能够彼此竞争而结合于完全相同的配体结构的结构。在一个实施方式中，白蛋白是牛血清白蛋白、卵白蛋白、水解乳清蛋白或乳白蛋白，包括其变体和片段。在一个实施方式中，蛋白质是卵白蛋白。
载药体可包含约0.01％至约99％(w/w)之间的蛋白质。在一些实施方式中，蛋白质组分占载药体总重量的大于0.1％(w/w)、大于0.5％(w/w)、大于1％(w/w)、大于2％(w/w)、大于3％(w/w)、大于4％(w/w)、大于5％(w/w)、大于6％(w/w)、大于7％(w/w)、大于8％(w/w)、大于9％(w/w)、大于10％(w/w)、大于11％(w/w)、大于12％(w/w)、大于13％(w/w)、大于14％(w/w)、大于15％(w/w)、大于16％(w/w)、大于17％(w/w)、大于18％(w/w)、大于19％(w/w)、大于20％(w/w)、大于25％(w/w)、大于30％(w/w)、大于35％(w/w)、大于40％(w/w)、大于45％(w/w)或大于50％(w/w)。通常，在载药体中蛋白质组分的含量范围为约1％-25％(w/w)、约0.1％-10％(w/w)、约0.5％-5％(w/w)或约1％-1.5％(w/w)。
活性剂(例如DART或其它抗细菌剂)与蛋白质组分之比可以是任意所期望的比值。例如，活性剂与蛋白质组分之比的范围可以为约100:1至约1:100。在一些实施方式中，活性剂与蛋白质组分之比的范围可以为约100:1至约1:1、约90:1至约10:1、约85:1至约15:1、约80:1至约25:1或75:1至约50:1。在一些实施方式中，活性剂与蛋白质组分之比为约75:1。该比值可以基于重量、质量或摩尔量。
一般而言，可以在本文所公开的载药体或制剂中使用任何阳离子分子。本文所用的术语“阳离子分子”是指带有净正电荷的分子。在一些实施方式中，阳离子分子是多胺。示例性阳离子分子包括但不限于腐胺(丁烷-1,4-二胺)、尸胺(戊烷-1,5-二胺)、亚精胺、精胺、cyclen(1,4,7,10-四氯杂环十二烷)、环拉胺(1,4,8,11-四氮杂环十四烷)、线性聚乙烯亚胺(聚(亚氨基乙烯))、去甲精胺、对苯二胺(1,4-二氨基苯)、二乙三胺(N-(2-氨基乙基)-1,2-乙二胺)、热精胺、三(2-氨基乙基)胺、六亚甲基二胺、β-赖氨酸(3,6-二氨基己酸)、间苯二胺(1,3-二氨基苯)、二氨基丙烷(1,2-二氨基丙烷)、乙二胺二氢碘酸盐和聚胺D 400(聚氧亚烷基胺D 400)。
载药体可包含约0.01％至约99％(w/w)的阳离子分子。在一些实施方式中，阳离子分子占载药体总重量的大于0.1％(w/w)、大于0.5％(w/w)、大于1％(w/w)、大于2％(w/w)、大于3％(w/w)、大于4％(w/w)、大于5％(w/w)、大于6％(w/w)、大于7％(w/w)、大于8％(w/w)、大于9％(w/w)、大于10％(w/w)、大于11％(w/w)、大于12％(w/w)、大于13％(w/w)、大于14％(w/w)、大于15％(w/w)、大于16％(w/w)、大于17％(w/w)、大于18％(w/w)、大于19％(w/w)、大于20％(w/w)、大于25％(w/w)、大于30％(w/w)、大于35％(w/w)、大于40％(w/w)、大于45％(w/w)或大于50％(w/w)。通常，阳离子分子在载药体中的含量范围为约1％-25％(w/w)、约0.1％-10％(w/w)、约0.5％-5％(w/w)或约1％-1.5％(w/w)。
活性剂(例如DART或其它抗细菌剂)与蛋白质组分之比可以是任意所期望的比值。例如，活性剂与蛋白质组分之比的范围可以为约100:1至约1:100。在一些实施方式中，活性剂与蛋白质之比的范围可以为约100:1至约1:1、约90:1至约10:1、约85:1至约15:1、约80:1至约25:1或75:1至约50:1。在一些实施方式中，活性剂与蛋白质组分之比为约75:1。该比值可以基于重量、质量或摩尔量。
一般而言，在本文所公开的载药体或制剂中可以使用任何碳水化合物分子。在一些实施方式中，碳水化合物是多糖。示例性多糖包括：纤维素衍生物，例如羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羧甲基纤维素；糖胺聚糖，例如透明质酸、硫酸软骨素、壳多糖和脱乙酰壳多糖；淀粉衍生物，例如淀粉/羟乙基淀粉；琼脂糖；和藻酸盐/酯以及它们的组合。在一些实施方式中，碳水化合物可以选自于由脱乙酰壳多糖及其衍生物、藻酸盐/酯及其衍生物、支链淀粉及其衍生物所组成的组。
载药体可包含约0.01％至约99％(w/w)的碳水化合物。在一些实施方式中，碳水化合物占载药体总重量的大于0.1％(w/w)、大于0.5％(w/w)、大于1％(w/w)、大于2％(w/w)、大于3％(w/w)、大于4％(w/w)、大于5％(w/w)、大于6％(w/w)、大于7％(w/w)、大于8％(w/w)、大于9％(w/w)、大于10％(w/w)、大于11％(w/w)、大于12％(w/w)、大于13％(w/w)、大于14％(w/w)、大于15％(w/w)、大于16％(w/w)、大于17％(w/w)、大于18％(w/w)、大于19％(w/w)、大于20％(w/w)、大于25％(w/w)、大于30％(w/w)、大于35％(w/w)、大于40％(w/w)、大于45％(w/w)或大于50％(w/w)。通常，载药体中碳水化合物的含量范围为约1％-25％(w/w)、约0.1％-10％(w/w)、约0.5％-5％(w/w)或约1％-1.5％(w/w)。
活性剂(例如DART或其它抗细菌剂)与碳水化合物之比可以是任意所期望的比值。例如，活性剂与碳水化合物之比的范围可以为约100:1至约1:100。在一些实施方式中，活性剂与碳水化合物之比的范围可以为约100:1至约1:1、约90:1至约10:1、约85:1至约15:1、约80:1至约25:1、或75:1至约50:1。在一些实施方式中，活性剂与碳水化合物之比为约75:1。该比值可以基于重量、质量或摩尔量。
在一些实施方式中，载药体还包含赋形剂。在一些实施方式中，赋形剂是润湿剂。非限制性地，润湿剂可以选自烷基硫酸盐，例如月桂基硫酸钠、硬脂基硫酸钠、油基硫酸钠和十六烷基硫酸钠；烷基芳基磺酸盐，例如十二烷基苯磺酸钠；以及二烷基磺基琥珀酸钠，例如双(2-乙基己基)磺基琥珀酸钠；最优选月桂基硫酸钠。药学上可接受的润湿剂的其它实例包括氯化苄乙氧铵、氯化十六烷基吡啶、多库酯钠、泊洛沙姆、聚山梨醇酯和脱水山梨醇酯。
在一些实施方式中，赋形剂是稳定剂，例如表面稳定剂。合适的表面稳定剂可优选选自于已知的有机和无机药用赋形剂。这种赋形剂包括各种聚合物、低分子量低聚物、天然产物和具有高和低的亲水亲油平衡值(HLB)的表面活性剂。优选的表面稳定剂包括非离子表面活性剂和离子表面活性剂。两种以上表面稳定剂可以组合使用。表面稳定剂的代表性实例包括多库酯钠、氯化十六烷基吡啶、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、葡聚糖、甘油、阿拉伯树胶、胆固醇、黄芪胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘油酯、鲸蜡硬脂醇、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚(例如聚乙二醇醚，如聚西托醇1000)、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(例如，可商购的
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诸如例如吐温
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和吐温
Figure BDA0001122120050000612
(ICI特种化学品))、聚乙二醇(例如Carbowaxs
Figure BDA0001122120050000613
和
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以及卡波普
Figure BDA0001122120050000615
(Union Carbide))、十二烷基三甲基溴化铵、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶体二氧化硅、磷酸盐/酯、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钙、羟丙基纤维素(例如HPC、HPC-SL和HPC-L)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、非结晶纤维素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、与环氧乙烷和甲醛形成的4-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯酚聚合物(也称为泰洛沙泊、superione和Triton)、泊洛沙姆(例如泊洛沙姆
Figure BDA0001122120050000616
和
Figure BDA0001122120050000617
环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚物)、泊洛沙胺(例如Tetronic
Figure BDA0001122120050000618
也称为泊洛沙胺
Figure BDA0001122120050000619
由环氧丙烷和环氧乙烷向乙二胺顺序加成得到的四官能嵌段共聚物(BASF Wyandotte公司，Parsippany，N.J))、带电荷的磷脂(例如二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油、磺琥辛酯(DOSS))、Tetronic
Figure BDA00011221200500006110
(T-1508)(BASF Wyandotte公司)、磺基琥珀酸钠二烷基酯(例如Aerosol
Figure BDA00011221200500006111
磺基琥珀酸钠的二辛酯(American Cyanamid))、
Figure BDA00011221200500006112
(月桂基硫酸钠(杜邦))、Tritons
Figure BDA00011221200500006113
(烷基芳基聚醚磺酸酯(Rohm and Haas))、Crodestas
Figure BDA00011221200500006114
(蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物(Croda Inc.))、对异壬基苯氧基聚(缩水甘油)(也称为
Figure BDA00011221200500006115
或Surfactant
Figure BDA00011221200500006116
(Olin Chemicals，Stamford，CT))、Crodestas
Figure BDA00011221200500006117
(Croda,Inc.)、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺、正癸基β-D-吡喃葡萄糖苷、正癸基β-D-吡喃麦芽糖苷、正十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷、正十二烷基β-D-麦芽糖苷、庚酰基-N-甲基葡糖酰胺、正庚基β-D-吡喃葡萄糖苷、正庚基β-D-硫代葡萄糖苷、正己基β-D-吡喃葡萄糖苷、壬酰基-N-甲基葡糖酰胺、正壬基β-D-吡喃葡萄糖苷、辛酰基-N-甲基葡糖酰胺、正辛基β-D-吡喃葡萄糖苷、辛基β-D-硫代吡喃葡萄糖苷等。这些表面稳定剂中的大多数是已知的药物赋形剂，并在美国药学协会和英国药学会(药学出版社，1986)联合出版的药用赋形剂手册中进行了详细描述，通过引用将其内容并入本文。在一个实施方式中，赋形剂是多库酯钠。
一般而言，载药体的平均直径为约5nm至约20,000nm。在一些实施方式中，载药体的平均直径为约5nm至约5,000nm。在一些实施方式中，载药体的平均直径为约50nm至约2500nm。在一些实施方式中，载药体的平均直径为约100nm至约2000nm。在一些实施方式中，载药体的平均直径为约150nm至约1700nm。在一些实施方式中，载药体的平均直径为约200nm至约1500nm。在一些实施方式中，载药体的平均直径为约260nm。在一个实施方式中，载药体的平均直径为约30nm至约150nm。在一些实施方式中，载药体的平均直径为约100nm至约1000nm、约200nm至约800nm、约200nm至约700nm或约300nm至约700nm。
一般而言，本文公开的载药体可以处于任何形状或形式，例如球形、棒状、椭圆形、圆柱形、胶囊或圆盘。
在一些实施方式中，载药体可以是微米级的，并且尺寸为约1μm至约1000μm。在一些实施方式中，载药体可以是纳米级的，并且尺寸为约0.1nm至约1000nm。在一些实施方式中，载药体是微米颗粒或纳米颗粒。本文所使用的术语“微米颗粒”是指颗粒尺寸为约1μm至约1000μm的颗粒。本文所使用的术语“纳米颗粒”是指颗粒尺寸为约0.1nm至约1000nm的颗粒。
本领域普通技术人员将理解的是，颗粒通常表现为围绕指定“尺寸”的尺寸分布。除非另有说明，本文所使用的术语“载药体尺寸”和“颗粒尺寸”是指载药体或颗粒的尺寸分布模式，即，在尺寸分布中最经常出现的值。用于测量载药体或颗粒尺寸的方法对于本领域技术人员而言是公知的，例如，通过动态光散射(例如光相关光谱、激光衍射、低角度激光光散射(LALLS)和中角度激光光散射(MALLS))、光遮蔽法(例如Coulter分析法)或其它技术(例如流变学、以及光显微术或电子显微术)。
在一些实施方式中，载药体可以是基本上球形的。“基本上球形的”意指载药体横截面的最长与最短垂直轴之比小于或等于约1.5。对于基本上球形的而言，对称线并非必需。此外，载药体可以具有表面纹理，例如相对于载药体的总尺寸非常小的线或凹陷或突起，并且仍然是基本上球形的。在一些实施方式中，载药体的最长轴和最短轴之间的长度比小于或等于约1.5、小于或等于约1.45、小于或等于约1.4、小于或等于约1.35、小于或等于约1.30、小于或等于约1.25、小于或等于约1.20、小于或等于约1.15、小于或等于约1.1。不希望受理论的束缚，将基本上为球形的载药体的表面接触最小化，其使得载药体在储存时不希望的团聚作用最小化。许多晶体或片具有可使得表面接触面积大的平坦表面，其可通过离子或非离子相互作用而发生团聚。球性使得以小得多的面积进行接触。
在一些实施方式中，载药体具有基本上相同的颗粒尺寸。具有宽泛的尺寸分布的载药体(其中同时具有相对较大和相对较小的载药体)使得较小的载药体填充在载药体之间的空隙中，从而从而创造新的接触表面。宽泛的尺寸分布可以通过创造许多结合团聚的接触机会而导致更大的球形。本文所述的载药体在窄的尺寸分布之内，从而最大限度地降低接触团聚的机会。“窄的尺寸分布”是指小球形颗粒第90百分位的体积直径与第10百分位的体积直径之比小于或等于5的颗粒尺寸分布。在一些实施方式中，小球形颗粒第90百分位的体积直径与第10百分位的体积直径之比小于或等于4.5、小于或等于4、小于或等于3.5、小于或等于3、小于或等于2.5、小于或等于2、小于或等于1.5、小于或等于1.45、小于或等于1.40、小于或等于1.35、小于或等于1.3、小于大于或等于1.25、小于或等于1.20、小于或等于1.15或者小于或等于1.1。
几何标准偏差(GSD)也可以用于指示窄的尺寸分布。GSD计算包含确定累计小于15.9％和84.1％的有效截止直径(ECD)。GSD等于小于84.17％的ECD与小于15.9％的ECD二者比值的平方根。当GSD<2.5时，GSD具有窄的尺寸分布。在一些实施方式中，GSD小于2、小于1.75或小于1.5。在一个实施方式中，GSD小于1.8。
尽管以涂布颗粒的角度对载药体进行了讨论，但有至少八种类型的载药体可以与活性剂以及一种或多种另外的组分进行配制。不同类型的载药体可以是如下类型：(1)包含由活性剂形成的芯的载药体，所述芯吸收/吸附有另外的组分，或者另外的组分在载药体芯上形成一个或多个涂布层；(2)包含活性剂和另外的组分的总体上均匀的混合物的载药体；(3)包含芯的载药体，所述芯含有活性剂和另外的组分的总体上均匀的混合物，并且另外的组分在载药体芯上形成一个或多个涂布层；(4)包含芯的载药体，所述芯由另外的组分形成，并且活性成分在载药体芯上形成一个或多个涂布层；(5)包含芯的载药体，所述芯含有活性剂和另外的组分的总体上均匀的混合物，并且活性剂在载药体芯上形成一个或多个涂布层；(6)包含芯的载药体，所述芯为活性剂和另外的组分以外的材料，并且活性剂和另外的组分的混合物在载药体芯上形成一个或多个涂布层；(7)包含芯的载药体，所述芯含有活性剂和另外的组分的总体上均匀的混合物，并且活性剂和另外的组分以外的材料在载药体芯上形成一个或多个涂布层；(8)包含活性剂的脂质体；(9)乳剂，例如油/水/油乳剂或水/油/水乳剂；(10)胶束；(11)小球；(12)悬浮液；(13)分散体；(14)囊泡；(15)聚集体；以及(16)包含(1)-(15)中任意载药体，并且还包含一层或多层除了活性剂和另外的组分以外的材料的载药体。在载药体(16)中，另外的层可以是最外层、芯上的第一层、穿插在(1)-(15)中所述的层之间的中间层、或它们的任意组合。非限制性地，涂布层可以包含除了上面所指出组分以外的其它组分。例如，上面指出的涂布组分可与其它分子或组合物混合，以形成涂布层。这可用于在指定的组分自身不能形成涂布层的情况。在一些实施方式中，颗粒包含含有活性剂的芯，并且另外的组分在芯上形成一个或多个(例如，1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个以上)涂布层。
在一些实施方式中，载药体可处于脂质体的形式。本文中使用的脂质体是具有含脂膜的结构，该膜包封含水的内部。脂质体可以具有一个或多个脂膜。寡层囊泡、大囊泡和多层囊泡具有多个通常为同心的膜层。具有若干个非同心的膜的脂质体(即，数个较小的囊泡包含在较大囊泡中)被称为多泡囊泡。
脂质体可进一步包含一种或多种另外的脂和/或其它组分(诸如甾醇，例如胆固醇)。另外的脂可出于多种目的包含在脂质体组合物中，从而例如防止脂氧化、稳定双层、减少形成过程中的聚集、或将配体附着至脂质体表面。可以存在任意数量的另外的脂和/或其它组分，包括两亲性脂、中性脂、阳离子脂、阴离子脂和可编程融合脂。这样的脂和/或组分可以单独使用或组合使用。除了脂以外，脂质体可以包含本公开文本中所述的一种或多种添加剂。
脂质体组合物可通过多种本领域已知的方法来制备。参见例如：美国专利号4,235,871；4,737,323；4,897,355和5,171,678；公开的国际申请WO 96/14057和WO 96/37194；Felgner，P.L等，Proc.Natl.Acad.Sci.，美国(1987)8：7413-7417；Bangham等，M.Mol.Biol.(1965)23：238；Olson等，Biochim.Biophys.Acta(1979)557：9；Szoka等，Proc.Natl.Acad.Sci.(1978)75：4194；Mayhew等，Biochim.Biophys.Acta(1984)775：169；Kim等，Biochim.Biophys.Acta(1983)728：339；以及Fukunaga等，Endocrinol.(1984)115：757。
在一些实施方式中，载药体可以是胶束。本文所使用的“胶束”是分子组件的特定类型，其中，两亲性分子排列为球形结构，从而使得分子上的所有疏水部分向内，留下亲水部分与周围的水相接触。相反的排列。
在一些实施方式中，载药体可以是乳剂。本文所使用的“乳剂”是一种液体以液滴形式分散在另一液体中的非均相体系。乳剂往往是包含两种不混溶的液相深入混合并分散在彼此之中的两相体系。在乳剂式软膏基质和霜剂的情况下，乳剂中的任一相可以是半固体或固体。活性剂可以作为溶液存在于水相或油相中，或其本身作为分散相。
在一些实施方式中，载药体可以被配制成微乳剂。本文所使用的“微乳剂”是指水、油和两亲物的体系，该体系为单一的光学各向同性和热力学稳定的液体溶液。微乳剂还包括两种不相溶液体的热力学稳定、各向同性清晰的分散体，所述分散体由表面活性分子的界面膜保持稳定。
经由皮肤、口腔及肠胃外途径的乳剂制剂的应用及其制造方法已经在文献中进行了综述，例如参见Idson，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman、Rieger和Banker编辑，1988，Marcel Dekker,Inc.，New York，N.Y.，第1册，第199页；Rosoff，inPharmaceutical Dosage Forms，Lieberman、Rieger和Banker编辑，1988，Marcel Dekker,Inc.，New York，N.Y.，第1册，第245页；以及Block，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman、Rieger和Banker编辑，1988，Marcel Dekker,Inc.，New York，N.Y.，第1册，第335页，通过引用将其内容整体并入本文。
可使用本领域中公知的方法和仪器来制造载药体。例如，可以使用微量沉淀、包封、解聚、解聚和包封的混合、均质化、解聚和热均质化的混合或它们的任意组合来制备载药体。在一些实施方式中，制备颗粒的过程包括选择所需尺寸的颗粒的步骤。
适用于DART、非DART和组合API的制剂特征
本公开文本提供了包含DART的组合物或制剂。本公开文本还提供了包含抗细菌剂作为API的组合物或制剂，其中，所述抗细菌剂不是DART分子。在一些实施方式中，制剂包含两种以上不同的API，例如两种不同的DART、两种不同的非DART的抗细菌剂、或者DART分子和非DART的抗细菌剂。在一些实施方式中，DART或抗细菌剂被配制为载药体用于API。非限制性地，可以制备制剂或组合物，用于通过本领域已知的任何适当的途径来给药，所述途径包括但不限于局部(包括口腔和舌下)和口服或肠胃外途径(包括静脉内、肌内、皮下、经皮、气道(气溶胶)、肺、鼻和直肠给药)。给药的示例性模式包括但不限于局部、注射、输注、滴注、吸入或摄取。“注射”包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、心室内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、淋巴结内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、脑内、脊髓、和脑池内(intracissternal)的注射和输注。在一些实施方式中，制剂可以处于口服剂型、注射剂、气雾剂或吸入剂的形式。
在一些实施方式中，制剂可以包含两种以上(例如，两种、三种、四种、五种以上)不同的抗细菌剂作为API。例如，制剂可包含两种不同的抗痤疮剂作为API。在一些实施方式中，制剂包含8-氯贝西沙星和另一种抗痤疮剂作为API。在一个实施方式中，制剂包含贝西沙星和阿达帕林作为API。
本文所公开的制剂可以包含几种类型的化妆品上可接受的局部溶媒，包括但不限于溶液、胶体悬浮液、分散体、乳剂(微乳剂、纳米乳剂、多重和非水性乳剂)、水凝胶和囊泡(脂质体、niosomes、novasomes)。合适的化妆品上可接受的局部溶媒的组分和配制方法在本领域中是公知的并且在以下文献中进行了描述，例如美国专利号6,797,697、美国专利申请号2005/0142094和2005/0008604、国际专利申请公开号2006/029818和2000/062743，通过引用将所有这些内容并入本文。本领域技术人员将明了用于制备这些各种产品形式的各种方法。
在一些实施方式中，制剂可以处于霜剂、油剂、洗剂、精华素、凝胶、防晒霜、指甲油、软膏剂、泡沫剂、喷雾剂、气雾剂、粉剂、棒状剂、溶液剂、悬浮剂、分散剂、糊剂、剥离剂和浸渍织物(如“抹布”或纸巾)的形式。一般而言，组合物包含有效量的活性剂。本文所使用的术语“有效量”是含有达到期望改善所必需的活性剂的制剂的量。在一些实施方式中，制剂为局部制剂。
在一些实施方式中，制剂可处于选自于由以下组成的组的形式：洗剂、霜剂、凝胶剂、乳胶剂、油剂、精华素、粉剂、喷雾剂、软膏剂、溶液剂、悬浮剂、分散剂、糊剂、泡沫剂、剥离剂、薄膜剂、面膜剂、贴剂、棒状剂、滚珠剂、清洁洗液、洁面固态棒、糊剂、泡沫剂、粉剂、剃须膏、浸渍织物(例如“抹布”或纸巾)等。
在一些实施方式中，制剂为抗细菌制剂。在一些实施方式中，组合物是处于护肤组合物形式的抗细菌组合物。本文所定义的术语“护肤组合物”是指局部施用于皮肤，从而有益于、改善或增强皮肤状况，或者治疗患有感染或疾病状况的皮肤的材料。此类护肤组合物包含基质，例如皂基、化妆品基质、药物基质、霜剂基质、润肤剂基质和它们的组合，以及本领域中已知的其它基质。
非限制性地，制剂可以包含任何所需量的API。例如，制剂可以包含约0.01％至约99％(w/w或w/v)的API。在一些实施方式中，制剂可以包含约0.1％至约75％(w/w或w/v)、约1％至约50％(w/w或w/v)、约1.5％至约40％(w/w或w/v)的API。在一些实施方式中，制剂可以包含约2.5％、约3％、约3.5％、约4％、约4.5％、约5％、约7.5％、约10％、约12.5％、约15％、约17.5％、约20％、约22.5％、或约25％(w/w或w/v)的API。
在一些实施方式中，除了API以外，制剂可以包含一种或多种锌化合物。不希望受理论的束缚，锌化合物可有助于抑制皮脂分泌、减轻痤疮炎症。示例性的锌化合物包括但不限于乙酸锌、蛋氨酸锌、吡咯烷酮羧酸锌、硫化锌、葡萄糖酸锌、吡啶羧酸锌、硫酸锌、柠檬酸锌等。非限制性地，制剂可以包含任何所期望的量的锌化合物。例如，制剂可以包含约0.01％至约99％(w/w或w/v)的锌化合物。在一些实施方式中，制剂可以包含约0.1％至约75％(w/w或w/v)、约1％至约50％(w/w或w/v)、约1.5％至约40％(w/w或w/v)、约2％至约25％(w/w或w/v)或约2.5％至约25％(w/w或w/v)的锌化合物。在一些实施方式中，制剂可以包含约2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、7.5％、10％、12.5％、15％、17.5％、20％、22.5％或25％(w/w或w/v)的锌化合物。
在一些实施方式中，制剂可进一步包含一种或多种赋形剂。非限制性地，赋形剂可以选自于由以下试剂所组成的组：乳化剂、防腐剂、表面活性剂、油、脂、蜡、稳定剂、流变改性剂或增稠剂(胶凝剂)、润肤剂、保湿剂、调理剂、香料/香精、增效剂、防腐剂、遮光剂、抗氧化剂、清凉剂、成膜剂、磨砂剂、去角质剂、着色剂、pH调节剂、溶剂、溶媒、穿透促进剂、渗透促进剂、珠光剂以及它们的任意组合。在制剂中的赋形剂的量的范围可为约5％至99.99％(w/w或w/v)。在一些实施方式中，制剂包含一种或多种GRAS成分。
一般而言，旨在用于制剂的pH值的范围一般为约pH 2至约pH10、约pH 3至约pH 9、约pH 4至约pH 8、或约pH 5.0至约pH 7.5、或约pH 5至约pH 6.5。可以使用的合适的pH调节剂包括一种或多种有机或无机的酸和碱，包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、磷酸盐缓冲液、柠檬酸、醋酸、富马酸、盐酸、苹果酸、硝酸、磷酸、丙酸、硫酸、酒石酸和三乙胺等。
通常，用于护肤组合物的化妆品上可接受的介质包括水和其它溶剂(包括但不限于矿物油和脂肪醇)。化妆品上可接受的介质占组合物重量的约10％至约99.99％、优选占组合物重量的约50％至约99％，并且在不存在其它添加剂的情况下，可以形成组成上的平衡。
本文所使用的术语“化妆品上可接受的介质”是指用于治疗皮肤、毛发和/或指甲，并且含有本领域技术人员用于配制皮肤治疗产品的一种或多种成分的制剂。化妆品上可接受的介质可以处于任何合适的形式(即，液体、霜剂、乳剂、凝胶、增稠洗剂或粉末)，通常含有水，并且可以包含化妆品上可接受的溶剂和/或一种或多种表面活性剂。
制剂可包含一种或多种常规功能性化妆品或皮肤病学的添加剂或佐剂，只要它们不与在最终产品中所期望的温和性、性能或美学特征冲突。CTFA(The Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Association，现被称为Personal Care Products Council)International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook，第十一版(2006)和McCutcheon's Functional Materials，北美和国际版，MC Publishing Co.(2007)描述了各种各样的护肤组合物中常用的化妆品和药物成分，其适合于本发明的组合物中使用。本发明的组合物可含有广泛的另外的任选组分。所加入的成分的总浓度通常小于总组合物重量的约20％、优选小于总组合物重量的约5％、并且最优选小于总组合物重量的约3％。此类组分包括但不限于表面活性剂、润肤剂、保湿剂、稳定剂、成膜物质、香料、着色剂、螯合剂、防腐剂、抗氧化剂、pH调节剂、抗生素药剂、防水剂、干燥感调节剂、维生素、植物提取物、羟基酸(例如α-羟基酸和β-羟基酸)和免晒美黑剂。
制剂可包含一种或多种以下基本化妆品原料，包括但不限于烃、酯、脂肪醇、脂肪酸、乳化剂、保湿剂、粘度改性剂以及硅酮类材料。制剂可以含有宽泛范围的此类基本组分。所添加的成分的总浓度通常小于总制剂重量的50％、优选小于20％、并且最优选小于10％。本领域技术人员将会明了使用这些基本组分以获得所期望的产品形式的各种浓度和组合。
可以使用的合适的脂包括一种或多种烃、脂肪醇、脂肪酸、甘油酯、或脂肪酸与C1-C36链烷醇的酯。烃可包括石蜡或凡士林。脂肪醇可以包括癸醇、十二烷醇、十四烷醇、十六烷醇或十八烷醇。脂肪酸可包括C6-C24链烷酸，例如己酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、十四烷酸、十六烷酸、十八烷酸、不饱和脂肪酸(例如油酸和亚油酸)。甘油酯可以包括：橄榄油；蓖麻油；芝麻油；辛酸/癸酸甘油三酯；或棕榈酸和/或硬脂酸的甘油单酯、二酯和三酯。脂肪酸酯可以包含C1-C36链烷醇，例如蜂蜡、巴西棕榈蜡、棕榈酸十六烷酯、羊毛脂、肉豆蔻酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、油酸癸酯、油酸乙酯和C6-C12链烷酸酯等。
合适的烃包括但不限于矿物油、异十六烷、角鲨烷、氢化聚异丁烯、凡士林、石蜡、微晶蜡和聚乙烯。合适的油可包括下述物质中的一种或多种：杏仁油、杏籽油、琉璃苣油、芥花油、椰子油、玉米油、棉花籽油、鱼油、霍霍巴豆油、猪油、亚麻子油、煮沸澳洲坚果油、矿物油、橄榄油、花生油、红花油、芝麻油、大豆油、角鲨烷、葵花籽油、甘油三辛酸酯(1,2,3-三辛酰基甘油)和小麦胚芽油等。所使用的油的优选量的范围为组合物的约5％至约25％(w/w)、并且更优选的范围为组合物的约5％至约20％(w/w)。
可以使用的合适的酯包括但不限于棕榈酸异丙酯、硬脂酸辛酯、辛酸/癸酸甘油三酯、植物蜡(Canelilla、Caranauba)、菜油(天然甘油酯)和植物油(霍霍巴油)。
可以使用的合适的脂肪醇包括但不限于肉豆蔻醇、鲸蜡醇、硬脂醇、异硬脂醇和二十二烷醇。
可以使用的合适的乳化剂包括但不限于阴离子乳化剂(TEA/K硬脂酸酯(三乙醇胺/硬脂酸钾)、月桂基硬脂酸钠、鲸蜡硬脂硫酸钠和蜂蜡/硼砂)、非离子乳化剂(甘油二硬脂酸酯、PEG(聚乙二醇)-100硬脂酸酯、聚山梨醇酯20、硬脂醇聚醚2和硬脂醇聚醚20)和阳离子乳化剂(二硬脂基二甲基氯化铵、山嵛基苄基二甲基氯化铵和司吡氯铵)、聚合物乳化剂(丙烯酸酯/C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物、聚丙烯酰胺、聚季铵盐-37、丙二醇、二辛酸酯/二癸酸酯和PPG-1十三烷醇聚醚-6)、以及基于硅酮的材料(烷基改性的聚二甲基硅酮共聚醇)、聚甘油酯和乙氧基化的二脂肪酸酯。其它合适的乳化剂/表面活性剂可以包括一种或多种离子聚山梨酯表面活性剂、
Figure BDA0001122120050000701
20、
Figure BDA0001122120050000702
40、
Figure BDA0001122120050000703
60、
Figure BDA0001122120050000704
80、壬基酚聚乙二醇醚、烷基酚-羟基聚氧乙烯、聚(氧-1,2-乙二基)、α-(4-壬基酚)-ω-羟基、支链的(即
Figure BDA0001122120050000705
NP-40表面活性剂)、壬基酚聚乙二醇醚混合物(即
Figure BDA0001122120050000706
NP-70(70％AQ)表面活性剂)、苯氧基聚乙氧基乙醇以及它们的聚合物(例如
Figure BDA0001122120050000707
)、不同等级的苄泽(Brij)、十二烷基硫酸钠等。所使用的乳化剂/表面活性剂的优选量为组合物的约0.1％至约10％(w/w)。
所使用的示例性的湿润剂包括但不限于丙二醇、山梨醇、丁二醇、丁二醇、己二醇、乙酰胺MEA(乙酰乙醇胺)、蜂蜜和PCA钠(2-吡咯烷酮羧酸钠)、山梨醇和三醋精等。
可在本发明的组合物中使用的粘度改性剂包括但不限于黄原胶、硅酸铝镁、纤维素胶和氢化蓖麻油。
可以使用的合适的增稠剂包括下述物质中的一种或多种：纤维素聚合物、卡波姆聚合物、卡波姆衍生物、纤维素衍生物、聚乙烯醇、泊洛沙姆和多糖等。
可以使用的合适的润肤剂包括下述物质中的一种或多种：辛酸/癸酸甘油三酯、蓖麻油、鲸蜡硬脂醇-20、鲸蜡硬脂醇-30、鲸蜡硬脂醇、鲸蜡醇聚醚20、鲸蜡硬脂醇、鲸蜡醇、鲸蜡硬脂醇、可可脂、己二酸二异丙酯、甘油、单油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、羊毛脂、羊毛脂醇、氢化羊毛脂、液体石蜡、亚油酸、矿物油、油酸、白凡士林、聚乙二醇、聚氧乙烯乙二醇脂肪醇醚、聚氧丙烯15硬脂基醚、硬脂酸丙二醇酯、角鲨烷、硬脂醇聚醚-2或-100、硬脂酸、硬脂醇和脲等。
可以使用的合适的防腐剂包括下述物质中的一种或多种：苯氧乙醇、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、丙二醇、山梨酸盐/酯、脲衍生物(例如二唑烷基脲)等。
可以使用的合适的螯合剂包括下述物质中的一种或多种：EDTA二钠、依地酸三钠、依地酸四钠、二亚乙基胺五乙酸盐等。
在一些实施方式中，制剂包含一种或多种醇，如C1-C12醇、二醇和三醇、甘油、甲醇、乙醇、丙醇、辛醇等。
在一些实施方式中，制剂包含一种或多种渗透促进剂。示例性的渗透促进剂包括：阴离子表面活性剂，例如月桂基硫酸钠和月桂酸钠；阳离子表面活性剂，例如十六烷基吡啶鎓氯化物；非离子表面活性剂，例如泊洛沙姆、苄泽、司盘、卖泽(Myrj)和吐温；胆盐；甘氨脱氧胆酸钠；甘胆酸钠、牛磺脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、氮酮
Figure BDA0001122120050000711
脂肪酸，例如油酸和辛酸；环糊精，例如α-、β-、γ-环糊精、甲基化β-环糊精；螯合剂，例如EDTA、柠檬酸钠和聚丙烯酸盐/酯；聚合物，例如脱乙酰壳多糖、三甲基壳聚糖以及阳离子氨基酸，例如聚-L-精氨酸和L-赖氨酸。苄泽为可商购自许多供应商的非离子聚氧乙烯族的商品名。司盘为可商购自许多供应商的脱水山梨醇表面活性剂族(例如脱水山梨醇三油酸酯(司盘85)和脱水山梨醇三硬脂酸酯(司盘65)等)的商品名。卖泽为可商购自许多供应商的聚乙氧化脂肪酸族的商品名，例如聚氧乙烯单硬脂酸酯(卖泽49)等。吐温为可商购自许多供应商的聚氧乙烯山梨醇或聚山梨酸酯表面活性剂族(例如聚氧乙烯山梨醇三油酸酯(吐温85)和聚山梨酸酯80(吐温80))的商品名。氮酮为L-十二烷基六氢-2H-氮杂
Figure BDA0001122120050000721
-2-酮的商品名。
在一些实施方式中，制剂包含一种或多种穿透促进剂。示例性的穿透促进剂包括但不限于脂肪酸、胆盐、螯合剂、表面活性剂和非表面活性剂。示例性的穿透促进剂包括二甲亚砜；肉豆蔻酸异丙酯；癸醇、十一烷醇或十二烷醇；丙二醇；聚乙二醇；C9、C10、C11、C12或C12-15脂肪醇；氮酮；烷基吡咯烷酮；二乙氧基乙二醇(Transcutol)；卵磷脂等。表面活性剂也可以被用作穿透促进剂。
本文所公开的制剂可进一步包含已知在个人护理产品中使用的一种或多种任选组分，条件是该任选组分在物理和化学上与本文所述的基本组分相容，或者不会过度地损害产品的稳定性、美观或性能。此类任选组分的个体浓度范围可以为组合物重量的约0.001％至约10％。
在组合物中使用的任选组分的非限制性实例包括沉积助剂、阳离子聚合物、非离子聚合物、分散颗粒剂、调理剂(硅酮和有机调理油)、湿润剂、悬浮化剂、另外的抗头皮屑活性物质、粘度改性剂、染料、非挥发性溶剂或稀释剂(水溶性和水不溶性的)、珠光助剂、另外的表面活性剂或非离子助表面活性剂、灭虱剂(pediculocide)、pH调节剂、香料、防腐剂、螯合剂、蛋白质、皮肤活性剂、防晒剂、紫外吸收剂、维生素、抗氧化剂、防腐剂、填料、表面活性剂、UVA和/或UVB防晒剂、香精、增粘剂、湿润剂、阴离子聚合物、非离子聚合物、两性聚合物、粘度稳定剂/泡沫稳定剂、遮光剂/珠光剂、隔离剂、稳定剂、湿润剂、抗静电剂、抗冻剂、缓冲剂、染料和颜料。这些佐剂在化妆品领域中是公知的，并且在许多出版物中进行了描述，例如参见Harry's Book of Cosmeticology，第8版，Martin Rieger编辑，ChemicalPublishing，New York(2000)。
本文所公开的组合物还可以包含沉积助剂。包含沉积助剂有效地增强组合物组分的沉积。沉积助剂可包含增强组合物组分沉积在头发、头皮或皮肤上的任何材料。在一些实施方式中，沉积助剂为阳离子聚合物。在组合物中沉积助剂的浓度应足以有效地增强组分的沉积，并且通常为组合物重量的约0.05％至约5％、优选约0.075％至约2.5％、更优选约0.1％至约1.0％。
本文所公开的组合物可包含阳离子聚合物。在组合物中阳离子聚合物的浓度通常为组合物重量的约0.05％至约3％、优选约0.075％至约2.0％、更优选约0.1％至约1.0％。优选的阳离子聚合物的阳离子电荷密度为约0.9meq/gm、优选至少约1.2meq/gm、更优选至少约1.5meq/gin。此类合适的阳离子聚合物的平均分子量通常在约10,000至1000万之间、优选在约50,000至约500万之间、更优选在约100,000至约300万之间。
用于组合物中的合适的阳离子聚合物包含含有诸如季铵或阳离子质子化氨基部分的阳离子含氮部分。阳离子质子化的胺可以是伯胺、仲胺或叔胺(优选仲胺或叔胺)，这取决于具体的物种和组合物所选定的pH。任何阴离子抗衡离子可用于相应的阳离子聚合物，只要该聚合物在组合物中或组合物的凝聚层相中保持可溶于水，并且只要该抗衡离子在物理和化学上与组合物的基本组分相容，或者不会过度地损害产品的性能、稳定性和美观性。此类抗衡离子的非限制性实例包括卤素离子(例如氯离子、氟离子、溴离子、碘离子)、硫酸根和甲基硫酸根。阳离子聚合物的非限制性实例在CTFA化妆品成分词典，第3版，由Estrin、Crosley和Haynes编辑(The Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Association,Inc.，Washington,D.C，(1982))中进行了描述。
合适的阳离子聚合物的非限制性实例包括具有阳离子质子化胺或季铵官能团的乙烯基单体同水溶性间隔单体(例如丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺、烷基和二烷基丙烯酰胺、烷基和二烷基甲基丙烯酰胺、丙烯酸烷基酯、甲基丙烯酸烷基酯、乙烯基己内酯或乙烯基吡咯烷酮)的共聚物。
用于纳入本发明组合物的阳离子聚合物中的合适的阳离子质子化氨基和季铵单体包括：用二烷基氨基烷基丙烯酸酯、二烷基氨基烷基甲基丙烯酸酯、单烷基氨基烷基丙烯酸酯、单烷基氨基烷基甲基丙烯酸酯、三烷基甲基丙烯酰氧基烷基铵盐取代的乙烯基化合物；以及具有环状阳离子含氮环(例如吡啶鎓、咪唑鎓和季铵化吡咯烷酮)的乙烯基季铵单体，例如烷基乙烯基咪唑鎓、烷基乙烯基吡啶鎓、烷基乙烯基吡咯烷酮盐。
在组合物中使用的其它合适的阳离子聚合物包括1-乙烯基-2-吡咯烷酮和1-乙烯基-3-甲基咪唑盐(例如，氯化物盐)的共聚物(由Cosmetic,Toiletry,and FragranceAssociation(“CTFA”)在业界被称为聚季铵盐-16)；1-乙烯基-2-吡咯烷酮和二甲基氨基乙基-甲基丙烯酸酯的共聚物(由CTFA在业界被称为聚季铵盐-11)；含有聚合物的阳离子二烯丙基季铵盐，包括例如二甲基二烯丙基氯化铵均聚物、丙烯酰胺和二甲基二烯丙基氯化铵的共聚物(由CTFA在业界分别被称为聚季铵盐-6和聚季铵盐7)；丙烯酸的两性共聚物，包括丙烯酸和二甲基二烯丙基氯化铵的共聚物(由CTFA在业界被称为聚季铵盐-22)、丙烯酸与二甲基二烯丙基氯化铵和丙烯酰胺的三元共聚物(由CTFA在业界被称为聚季铵盐-39)、以及丙烯酸与甲基丙烯酰胺基丙基三甲基氯化铵和丙烯酸甲酯的三元共聚物(由CTFA在业界被称为聚季铵盐-47)。
在组合物中使用的其它合适的阳离子聚合物包括多糖聚合物，例如阳离子纤维素衍生物和阳离子淀粉衍生物。优选的阳离子纤维素聚合物为与三甲基铵取代的环氧化物反应的羟乙基纤维素的盐，在业界(CTFA)被称为聚季铵盐-10，并且以它们的聚合物LR、JR和KG系列聚合物可购于Amerchol Corp.(Edison,N.J.，USA)。阳离子纤维素的其它合适类型包括与月桂基二甲基铵取代的环氧化物反应的羟乙基纤维素的聚合季铵盐，在业界(CTFA)被称为聚季铵盐-24。这些材料可以商品名Polymer LM-200购于Amerchol Corp.。
其它合适的阳离子聚合物包括阳离子瓜耳胶及其衍生物，例如瓜耳羟丙基三甲基氯化铵，其具体实例包括商购自Rhone-Poulenc Incorporated的Jaguar系列和商购自Hercules,Inc.的Aqualon Division的N-Hance系列。其它合适的阳离子聚合物包括含季氮的纤维素醚，其一些实例在美国专利号3,962,418中进行了描述。其它合适的阳离子聚合物包括醚化纤维素、瓜耳和淀粉的共聚物，其一些实例在美国专利号3,958,581中进行了描述。当使用时，本文的阳离子聚合物在组合物中是可溶的，或者可溶于组合物中的复合凝聚相，该复合凝聚相由上文所述的阳离子聚合物同阴离子、两性和/或两性离子的去污表面活性剂组分形成。阳离子聚合物的复合凝聚物还可以由组合物中的其它带电物质形成。
分子量大于约1000的聚亚烷基二醇在本文中是有用的。本文中有用的聚乙二醇聚合物为：PEG-2M(也称为Polyox
Figure BDA0001122120050000751
N-10，作为PEG-2,000购自Union Carbide)；PEG-5M(也称为Polyox
Figure BDA0001122120050000752
N-35和Polyox
Figure BDA0001122120050000753
N-80，作为PEG-5000和聚乙二醇300,000购自Union Carbide)；PEG-7M(也称为Polyox
Figure BDA0001122120050000754
N-750，购自Union Carbide)；PEG-9M(也称为Polyox
Figure BDA0001122120050000755
N-3333，购自Union Carbide)；以及PEG-14M(也称为Polyox
Figure BDA0001122120050000756
N-3000，购自Union Carbide)。
组合物还可包含分散的颗粒。组合物可包含至少0.025％(重量)的分散颗粒，更优选至少0.05％、还更优选至少0.1％、甚至更优选至少0.25％、以及还更优选至少0.5％(重量)的分散颗粒。在一些实施方式中，优选掺入不超过约20％(重量)的分散颗粒，更优选不超过约10％、还更优选不超过5％、甚至更优选不超过3％、并还更优选不超过2％(重量)的分散颗粒。
调理剂包括用于为皮肤给予特定的调理益处的任何材料。在本发明的组合物中有用的调理剂通常包含水不溶性的、水可分散的、非挥发性的液体，该液体形成乳化的液体颗粒，或在阴离子去污表面活性剂组分(上文所述)中通过表面活性剂胶束得以增溶。在组合物中使用的合适的调理剂是：通常表征为硅酮类(例如硅油、阳离子硅酮、硅酮胶、高折射硅酮和硅酮树脂)、有机调理油(例如烃油、聚烯烃和脂肪酯)或它们的组合的调理剂；或者在本文含水表面活性剂基质中形成液体、分散颗粒的调理剂。
组合物的调理剂可以是不溶性硅酮调理剂。硅酮调理剂颗粒可包含挥发性硅酮、非挥发性硅酮或它们的组合。优选非挥发性硅酮调理剂。如果存在挥发性硅酮，通常以非挥发性硅酮材料成分(例如硅酮胶和树脂)的市售形式将它们附带作为溶剂或载体使用。硅酮调理剂颗粒可包含硅酮流体调理剂，也可以包含其它成分(例如硅酮树脂)，以改善硅酮流体的沉积效率或增强毛发的光泽度。
硅酮调理剂的浓度通常为组合物重量的约0.01％至约10％、优选约0.1％至约8％、更优选约0.1％至约5％、更优选约0.2％至约3％。合适的硅酮调理剂以及用于硅酮的任选悬浮化剂的非限制性实例在美国再颁专利号34,584、美国专利号5,104,646和美国专利号5,106,609中进行了描述。用于本发明的组合物中的硅酮调理剂的粘度优选(在25℃下测定)为约20厘沲(“csk”)至约2,000,000csk、更优选约1,000csk至约1,800,000csk、甚至更优选约50,000csk至约1,500,000csk、更优选约100,000csk至约1,500,000csk。
分散的硅酮调理剂颗粒的体积平均粒径范围通常为约0.01μm至约50μm。对于施用于毛发的小颗粒，体积平均粒径通常为约0.01μm至约41μm、优选约0.01μm至约2μm、更优选约0.01μm至约0.51μm。对于施用于毛发的较大颗粒，体积平均粒径通常为约5μm至约125μm、优选约10μm至约90μm、更优选约15μm至约70μm、更优选约20μm至约50μm。
在Encyclopedia of Polymer Science and Engineering，第15卷，2d ed.，第204-308页，John Wiley&Sons,Inc.(1989)中发现有关硅酮的背景材料，包括讨论硅酮流体、胶和树脂以及硅酮的制备。
硅酮流体包括硅油，硅油是粘度为(在25℃下测定)小于1,000,000csk、优选约5csk至约1,000,000csk、更优选约100csk至约600,000csk的可流动硅酮材料。用于本发明的组合物中的合适的硅油包括聚烷基硅氧烷、聚芳基硅氧烷、聚烷基芳基硅氧烷、聚醚硅氧烷共聚物以及它们的混合物。也可使用具有毛发调理性质的其它不溶性、非挥发性硅酮流体。
适用于组合物的其它硅酮流体是不溶性硅酮胶。这些胶是粘度大于或等于1,000,000csk(在25℃下测量)的聚有机硅氧烷材料。在下述文献中对硅酮胶进行了描述：美国专利号4,152,416；Noll和Walter，Chemistry and Technology of Silicones，New York：Academic Press(1968)；以及General Electric Silicone Rubber Product Data SheetsSE 30、SE 33、SE 54和SE 76。用于本发明的硅酮胶的具体非限制性的实例包括聚二甲基硅氧烷、(聚二甲基硅氧烷)(甲基乙烯基硅氧烷)共聚物、(聚二甲基硅氧烷)(二苯基硅氧烷)(甲基乙烯基硅氧烷)共聚物以及它们的混合物。
适合于在本发明的组合物中使用的其它非挥发性、不溶性硅酮流体调理剂是被称为“高折射率硅酮”的试剂，其折射率为至少约1.46、优选至少约1.48、更优选至少约1.52、更优选至少约1.55。聚硅氧烷流体的折射率一般小于约1.70、通常小于约1.60。在上下文中，聚硅氧烷“流体”包括油和胶。
适于在本发明组合物中使用的硅酮流体公开于美国专利号2,826,551、美国专利号3,964,500、美国专利号4,364,837、英国专利号849,433以及Silicon Compounds，Petrarch Systems,Inc.(1984)。
硅酮树脂可以包括在本发明组合物的硅酮调理剂中。这些树脂是高度交联的聚合硅氧烷体系。在制造硅酮树脂的过程中，通过向三官能和四官能硅烷掺入单官能或二官能硅烷、或同时掺入二者而引入交联。
根据本领域普通技术人员已知的速记命名法系统(称为“MDTQ”命名法)，可以方便地识别硅酮材料、特别是硅酮树脂。在该系统中，根据构成硅酮的各种硅氧烷单体单元的存在，对硅酮进行描述。简单来说，符号M代表单官能单元(CH3)3SiO05；D代表二官能单元(CH3)2SiO；T代表三官能单元(CH3)SiO15；以及Q代表季-或四官能单元SiO2。单元符号的角标符号(例如M'、D'、T和Q')代表除甲基以外的取代基，并且必须在每次出现被专门定义。
用于本发明组合物中的优选的硅酮树脂包括但不限于MQ、MT、MTQ、MDT和MDTQ树脂。甲基是优选的硅酮取代基。尤其优选的硅酮树脂是MQ树脂，其中，M:Q的比为约0.5:1.0至约1.5:1.0，并且硅酮树脂的平均分子量为约1000至约10,000。
本发明组合物还可以包含组合物重量的约0.05％至约3％的调理组分，优选约0.08％至约1.5％、更优选约0.1％至约1％的至少一种有机调理油单独或与其它调理剂(例如硅酮(如上所述))组合作为调理剂。
用于在本发明的组合物中用作调理剂的合适的有机调理油包括但不限于具有至少约10个碳原子的烃油，例如环状烃、直链脂族烃(饱和或不饱和的)以及支链脂族烃(饱和或不饱和的)，包括聚合物和它们的混合物。直链烃油优选为约C至约C19。支链烃油(包括烃聚合物)一般含有超过19个碳原子。
这些烃油的的具体非限制性实例包括石蜡油、矿物油、饱和和不饱和的十二烷、饱和和不饱和的十三烷、饱和和不饱和的十四烷、饱和和不饱和的十五烷、饱和和不饱和十六烷、聚丁烯、聚癸烯以及它们的混合物。也可以使用这些化合物的支链异构体以及更高链长度的烃，其实例包括高度支化的、饱和或不饱和的烷烃，例如全甲基取代的异构体，例如十六烷和二十烷的全甲基取代的异构体，例如购自Permethyl公司的2,2,4,4,6,6,8,8-二甲基-10-甲基十一烷和2,2,4,4,6,6-二甲基-8-甲基壬烷。烃聚合物(例如聚丁烯和聚癸烯)是优选的。优选的烃聚合物是聚丁烯，例如异丁烯和丁烯的共聚物。这种类型的可商购材料是来自Amoco Chemical Corporation的L-14聚丁烯。
在本发明的组合物中使用的有机调理油还可包括液体聚烯烃、更优选液体聚α-烯烃、更优选氢化液体聚α-烯烃。通过C4至C14烯烃单体、优选约C6至约C12烯烃单体的聚合来制备在本文中使用的聚烯烃。
在制备本文的聚烯烃液体中使用的烯烃单体的非限制性实例包括乙烯、丙烯、1-丁烯、1-戊烯、1-己烯、1-辛烯、1-癸烯、1-十二碳烯、1-十四碳烯、支链异构体(例如4-甲基-1-戊烯)以及它们的混合物。还适合于制备聚烯烃液体的是包含炼油厂原料或流出物的烯烃。优选的氢化α-烯烃单体包括但不限于1-己烯至1-十六烯、1-辛烯至1-十四烯以及它们的混合物。
在本发明的组合物中用作调理剂的其它合适的有机调理油包括但不限于具有至少10个碳原子的脂族酯。这些脂肪族酯包括具有衍生自脂肪酸或醇的烃基链的酯(例如单酯、多元醇酯、以及二羧酸酯和三羧酸酯)。此处，脂肪族酯的烃基自由基可以包括或具有键合至其它相容官能团、例如酰胺和烷氧基部分的共价键(例如乙氧基或醚键等)。
优选的脂族酯的具体实例包括但不限于：异硬脂酸异丙酯、月桂酸己酯、月桂酸异己酯、棕榈酸异己酯、棕榈酸异丙酯、油酸癸酯、油酸异癸酯、硬脂酸十六烷酯、硬脂酸癸酯、己二酸二己基癸酯、乳酸月桂基酯、乳酸肉豆蔻基酯、乳酸鲸蜡基酯、硬脂酸油基酯、油酸油基酯、肉豆蔻酸油基酯、乙酸月桂基酯、丙酸鲸蜡基酯和己二酸油基酯。
在本发明的组合物中使用的其它脂族酯为通式R'COOR的一元羧酸酯，其中，R'和R为烷基或烯基基团，并且R'和R中的碳原子数的总和为至少10、优选为至少22。
适合于在本发明组合物中使用的其它脂族酸酯为羧酸的二烷基、三烷基和烯基酯，例如二羧酸的C4至C8酯(例如琥珀酸、戊二酸和己二酸的C1至C22的酯、优选C1至C6的酯)。羧酸的二烷基、三烷基和烯基酯的具体非限制性实例包括硬脂酰硬脂酸异鲸蜡基酯、己二酸二异丙酯和柠檬酸三硬脂基酯。在一些实施方式中，组合物包含具有另外的抗痤疮和/抗炎性质的月桂酸和琥珀酸中至少一种的酯。
适合于本发明的组合物中使用的其它脂族酯为已知的多元醇酯。此类多元醇酯包括亚烷基二醇酯，例如单脂肪酸和二脂肪酸的乙二醇酯、单脂肪酸和二脂肪酸的二乙二醇酯、单脂肪酸和二脂肪酸的聚乙二醇酯、单脂肪酸和二脂肪酸丙二醇酯、单油酸聚丙二醇酯、单硬脂酸聚丙二醇2000酯、单硬脂酸乙氧基化丙二醇酯、单脂肪酸和二脂肪酸的甘油酯、聚脂肪酸聚甘油酯、单硬脂酸乙氧基化甘油酯、单硬脂酸1,3-丁二醇酯、二硬脂酸1,3-丁烯乙二醇酯、多羟基脂肪酸聚氧乙烯酯、脂肪酸脱水山梨醇酯和脂肪酸聚氧乙烯脱水山梨醇酯。
还适于本发明的组合物中使用的其它脂族酯是甘油酯，包括但不限于甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯，优选甘油二酯和甘油三酯，更优选甘油三酯。在本文所述的组合物中使用时，甘油酯优选甘油和长链羧酸(例如C10-C22羧酸)的单酯、二酯和三酯。各种这些类型的材料可获得自植物和动物脂肪和油，例如蓖麻油、红花油、棉籽油、玉米油、橄榄油、鱼肝油、杏仁油、鳄梨油、棕榈油、芝麻油、羊毛脂油和大豆油。合成油包括但不限于三油精和三硬脂精甘油二月桂酸酯。
适于在本发明的组合物中使用的其它脂族酯是水不溶性的合成脂族酯。
在本发明的组合物中使用的合适的合成脂族酯的具体非限制性实例包括P-43(三羟甲基丙烷的C8-C10三酯)、MCP-684(3,3-二羟乙基-1,5-戊二醇的四酯)、MCP 121(己二酸的C8-C10二酯)，所有这些酯均可购自Mobil Chemical Company。
还适于在本发明的组合物中使用的是由Procter&Gamble公司在美国专利号5,674,478和5,750,122中所述的调理剂。还适于在本文中使用的是在以下文献中描述的调理剂：美国专利号4,529,586(Clairol)、美国专利号4,507,280(Clairol)、美国专利号4,663,158(Clairol)、美国专利号4,197,865(L'Oreal)、美国专利号4,217,914(L'Oreal)、美国专利号4,381,919(L'Oreal)以及美国专利号4,422,853(L'Oreal)。
组合物可含有湿润剂。湿润剂可以选自于由多元醇、水溶性烷氧基化非离子聚合物以及它们的混合物所组成的组。当在本文中使用时，湿润剂优选以组合物重量的约0.1％至约20％、更优选约0.5％至约5％的水平使用。
本文有用的多元醇包括甘油、山梨醇、丙二醇、丁二醇、己二醇、乙氧基化葡萄糖、1,2-己二醇、己三醇、二丙二醇、赤藓醇、海藻糖、双甘油、木糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、磷酸钠腺苷、乳酸钠、吡咯烷酮碳酸盐、葡糖胺、环糊精以及它们的混合物。
本文中有用的水溶性烷氧基化非离子聚合物包括分子量直至约1000的聚乙二醇和聚丙二醇，例如CTFA名称为PEG-200、PEG-400、PEG-600、PEG-1000的聚合物以及它们的混合物。
本发明的组合物可进一步包含用于使处于分散形式的水不溶性材料悬浮在组合物中或用于改进组合物粘度的有效浓度的悬浮化剂。按组合物重量计，该浓度范围为约0.1％至约10％、优选约0.3％至约5.0％。
合适的悬浮化剂包括结晶悬浮化剂，其可以被分类为酰基衍生物、长链胺氧化物或它们的组合。这些悬浮化剂在美国专利号4,741,855中进行了描述。
组合物还可以含有维生素和氨基酸，例如：水溶性维生素，例如维生素B1、B2、B6、B12、C、泛酸、泛基乙基醚、泛醇、生物素以及它们的衍生物；水溶性氨基酸，例如天冬酰胺、丙氨酸、色氨酸、谷氨酸和它们的盐；水不溶性维生素，例如维生素A、D、E和它们的衍生物；水不溶性氨基酸，例如酪氨酸、色胺和它们的盐。
本文所公开的制剂还可含有色素材料，例如亚硝基化合物、单偶氮化合物、重氮化合物、类胡萝卜素、三苯甲烷、三芳基甲烷、呫吨、喹啉、噁嗪、吖嗪、蒽醌、靛类、硫靛类、喹吖啶酮、酞菁、植物色素以及包含水溶性染料组分的天然色素。本发明的组合物还可以含有螯合剂。
在一个实施方式中，制剂是保湿霜/凝胶基底。例如，制剂包含至少一种保湿剂。通常，制剂可包含约0.01％(重量)至约50％(重量)的保湿剂，以在使用时赋予保湿益处。应该注意的是，干燥是已知抗痤疮局部用产品首要关心的问题之一。示例性保湿剂包括但不限于：N-乙酰乙醇胺、芦荟凝胶、精氨酸PCA、壳聚糖PCA、铜PCA、玉米甘油酯、二甲基咪唑烷酮、果糖、葡糖胺、葡萄糖、葡萄糖谷氨酸酯、葡糖醛酸、谷氨酸、甘油聚醚-7、甘油聚醚-12、甘油聚醚-20、甘油聚醚-26、甘油、蜂蜜、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、水解玉米淀粉、乳酰胺MEA、乳酸、乳糖赖氨酸PCA、甘露醇、甲基谷氨酸聚醚-10、甲基谷氨酸聚醚-20、PCA、PEG-2乳酰胺、PEG-10丙二醇、聚氨基酸、多糖、聚氨基糖缩合物、PCA钾、丙二醇、柠檬酸丙二醇酯、糖水解物、异构糖、天门冬氨酸钠、乳酸钠、PCA钠、山梨醇、TEA-乳酸酯、TEA-PCA、脲、木糖醇、泛醇、凡士林、矿物油、羊毛脂、羊毛脂醇、生育酚、生育酚酯、烷基聚二甲基硅氧烷、植物油、氢化植物油、脂肪酸酯、蜂蜡、水解角蛋白、羟乙基脲、羧酸酰胺、粘多糖和季铵化氮保湿剂。季氮保湿剂的实例包括但不限于羟丙基双羟基乙基二甲基氯化铵(可作为COLATMMoist 200获得自Colonial Chemicals,Inc.)、在美国专利号6,869,977中描述的保湿剂(通过引用将其内容并入本文)、在美国专利号6,475,965和6,265,364中描述的胆碱盐(通过引用将两者的内容并入本文)、肉毒碱以及它们的组合。保湿剂可以任何所期望的量存在于制剂中，以赋予期望水平的保湿作用。在一些实施方式中，保湿剂可以0至约5的量存在。在另一实施方式中，季氮保湿剂按重量计以约0.1％至约1％的量存在。在另一实施方式中，保湿剂按重量计以约1％的量存在。
在一些实施方式中，制剂包含乙醇酸、乳酸、硫、水杨酸和间苯二酚中的至少一种。
一些示例性制剂在表2-5中进行了描述。
表2：一些示例性霜剂制剂
Figure BDA0001122120050000821
表3：一些示例性乳胶剂制剂
Figure BDA0001122120050000831
表4：一些示例性凝胶剂制剂
Figure BDA0001122120050000832
表5：一些示例性洗剂制剂
Figure BDA0001122120050000841
不希望受理论的束缚，与本领域中已知的制剂相比，本文所公开的制剂在皮肤上的浓度vs时间图上的曲线下面积可以增加至少1.2倍。此外，与直接施用抗生素相比，该制剂可多杀死至少20％的痤疮丙酸杆菌。
本文所公开的制剂提供了制剂技术的进步(尺寸优化、表面改性和制剂革新)，通过增强向目标部位(皮脂腺)的渗透和递送，以改善特异性和效力；改善留着率，以呈现持续的作用；或者易于进入生物膜包裹的细菌。
本发明还提供了本文所公开的DART和制剂在治疗或预防受试者中至少一种细菌感染病症的用途。该方法通常包括向对其有需要的受试者给予本文所公开的DART或制剂。在一些实施方式中，该方法用于在受试者中对痤疮病症进行治疗。
术语“痤疮”包括毛囊皮脂腺滤泡和/或皮肤腺的炎性疾病，并且其特征通常在于丘疹、脓疱、囊肿、结节、粉刺、其它瑕疵或皮肤损伤。本文所使用的术语“痤疮”包括所有已知类型的痤疮。可以用本发明的组合物进行治疗的一些类型的痤疮例如：寻常痤疮、粉刺痤疮、丘疹性痤疮、月经前痤疮、青春期前痤疮、中毒性痤疮(acne venenata)、化妆品痤疮、发膏剂痤疮、去污剂痤疮、剥脱性痤疮、革兰氏阴性痤疮、须部假性毛囊炎、毛囊炎、口周皮炎、化脓性汗腺炎、囊肿性痤疮、萎缩性痤疮、溴痤疮、氯痤疮、聚合性痤疮、去污剂痤疮、流行性痤疮、夏季痤疮、暴发性痤疮、卤素痤疮、硬结性痤疮、碘痤疮、瘢痕痤疮、力学痤疮、丘疹性痤疮、发膏剂痤疮、月经前痤疮、脓疱性痤疮、坏血病性痤疮、腺病性痤疮、荨麻疹性痤疮、痘样痤疮、中毒性痤疮、丙酸痤疮、剥脱性痤疮、革兰氏阴性痤疮、类固醇痤疮、结节囊性痤疮和酒渣鼻。
不希望受理论的束缚，贝西沙星的微粉化可对其生物活性产生影响。例如，微粉化可以增强贝西沙星的生物活性或促进其保留在所期望的部位。此外，微粉化还可影响贝西沙星在制剂中的稳定性和量。此外，微粉化还可以允许优化包含微粉化贝西沙星的制剂的性质。
还可以通过一个或多个编号的段落对本文所公开的各种方面的实施方式进行描述：
1.一种制剂，所述制剂包含抗痤疮剂和至少一种载体或赋形剂，其中，所述抗痤疮剂处于包含所述抗痤疮剂和至少一种另外的化合物的载药体的形式，所述另外的化合物选自于由脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合所组成的组。
2.如段落1所述的制剂，其中，所述载药体是涂布的或未涂布的。
3.如段落1或2所述的制剂，其中，所述载药体的尺寸为约5nm至约20μm。
4.如段落1或3所述的制剂，其中，所述载药体的尺寸为约5nm至约5μm。
5.如前述段落任一段所述的制剂，所述制剂进一步包含位于所述载药体表面上的表面改性剂。
6.如段落1-5中任一段所述的制剂，其中，所述表面改性剂选自于由以下化合物所组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
7.如段落1-6中任一段所述的制剂，其中，所述载体或赋形剂选自于由以下试剂所组成的组：乳化剂、防腐剂、表面活性剂、油、脂、蜡、稳定剂、流变改性剂或增稠剂(胶凝剂)、润肤剂、保湿剂、调理剂、香料/香精、增效剂、防腐剂、遮光剂、抗氧化剂、清凉剂、成膜剂、磨砂剂、去角质剂、着色剂、pH调节剂、溶剂、溶媒、穿透促进剂、珠光剂以及它们的任意组合。
8.如段落1-4中任一段所述的制剂，其中，所述载药体的表面基本上不含表面改性剂。
9.如段落1-8中任一段所述的制剂，所述制剂包含约0.1％至约50％(w/w或w/v)的所述载体或赋形剂。
10.如段落1-9中任一段所述的制剂，其中，所述制剂被配制为用于局部、口服或肠胃外给药。
11.如段落1-10中任一段所述的制剂，其中，所述制剂是口服剂型、注射剂、气雾剂或吸入剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、乳胶剂、油剂、精华素、粉剂、喷雾剂、软膏剂、溶液剂、悬浮剂、分散剂、糊剂、泡沫剂、剥离剂、薄膜剂、面膜剂、贴剂、棒状剂、滚珠剂、浸渍织物(例如“抹布”或纸巾)或它们的任意组合。
12.如段落1-11中任一段所述的制剂，所述制剂还包含第二抗痤疮剂。
13.如段落1-12中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂选自于由以下化合物所组成的组：8-氯氟喹诺酮、阿维A、阿达帕林、阿利维甲酸、α-羟基酸或β-羟基酸、抗生素、抗微生物肽、抗微生物剂、壬二酸、过氧化苯甲酰、贝沙罗汀、胆盐、生物膜抑制剂、克林霉素、红霉素、依曲替酯、乙醇酸、异维甲酸、角质层分离剂、乳酸、硫辛酸、N-乙酰半胱氨酸、天然抗痤疮剂、羟甲辛吡酮、苯氧乙醇、苯氧丙醇、丙酮酸、间苯二酚、视黄酸、类视黄醇、水杨酸、sebostats、磺胺醋酰钠、螺内酯、硫、含硫的D-或L-氨基酸、他扎罗汀、茶树油、维甲酸、三氯生、脲以及它们的任意组合。
14.如段落1-13中任一段所述的制剂，其中，所述制剂包含单独的8-氯氟喹诺酮、或8-氯氟喹诺酮与另一种抗痤疮剂的组合。
15.如段落1-14中任一段所述的制剂，其中，所述制剂包含贝西沙星和阿达帕林。
16.如段落1-14中任一段所述的制剂，其中，所述制剂包含8-氯氟喹诺酮和抗炎剂。
17.如段落1-14中任一段所述的制剂，其中，所述制剂包含8-氯氟喹诺酮和视黄酸或类视黄醇。
18.如段落1-17中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂处于包含第二抗痤疮剂和至少一种另外的化合物的载药体的形式，所述另外的化合物选自于由以下化合物所组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
19.如段落1-18中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体的尺寸为约5nm至约50μm。
20.如段落1-19中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体的尺寸为约100nm至约25μm。
21.如段落1-20中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体包含位于其表面上的表面改性剂。
22.如段落1-21中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体的表面改性剂选自于由以下化合物所组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
23.如段落1-20中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体的表面基本上不含表面改性剂。
24.如段落1-23中任一段所述的制剂，所述制剂还包含另外的活性剂。
25.如段落1-24中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂是抗炎剂、穿透促进剂、抗氧化剂、抗老化剂、抗皱剂、皮肤增白剂或漂白剂、紫外(UV)线吸收剂或散射剂、皮肤脱色剂、皮肤再生剂、疤痕愈合剂或它们的任意组合。
26.如段落1-25中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂处于载药体的形式，所述载药体包含选自于由以下化合物组成的组的化合物：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
27.如段落1-26中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的尺寸为约5nm至约100μm。
28.如段落1-27中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的尺寸为约100nm至约25μm。
29.如段落1-28中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体包含位于其表面上的表面改性剂。
30.如段落1-29中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的表面改性剂选自于由以下物质所组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
31.如段落1-30中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的表面基本上不含表面改性剂。
32.如段落1-31中任一段所述的制剂，其中，所述制剂还包含锌化合物。
33.一种制剂，所述制剂包含抗细菌剂和至少一种载体或赋形剂，其中，所述抗细菌剂处于包含所述抗细菌剂和至少一种另外的化合物的载药体的形式，所述另外的化合物选自于由以下化合物所组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
34.如段落33所述的制剂，其中，所述载药体的尺寸为约5nm至约100μm。
35.如段落33或34所述的制剂，其中，所述载药体的尺寸为约100nm至约25μm。
36.如段落33-35中任一段所述的制剂，所述制剂还包含位于所述载药体表面上的表面改性剂。
37.如段落33-36中任一段所述的制剂，其中，所述表面改性剂选自于由以下物质所组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
38.如段落33-37中任一段所述的制剂，其中，所述载药体的表面基本上不含表面改性剂。
39.如段落33-38中任一段所述的制剂，其中，所述载体或赋形剂选自于由以下试剂所组成的组：乳化剂、防腐剂、表面活性剂、油、脂、蜡、稳定剂、流变改性剂或增稠剂(胶凝剂)、润肤剂、保湿剂、调理剂、香料/香精、增效剂、防腐剂、遮光剂、抗氧化剂、清凉剂、成膜剂、磨砂剂、去角质剂、着色剂、pH调节剂、溶剂、溶媒、穿透促进剂、珠光剂以及它们的任意组合。
40.如段落33-39中任一段所述的制剂，其中，所述制剂包含约5％至约99％(w/w或w/v)的所述载体或赋形剂。
41.如段落33-40中任一段所述的制剂，其中，所述制剂被配制用于局部给药、口服给药或肠胃外给药。
42.如段落33-41中任一段所述的制剂，其中，所述制剂为口服剂型、注射剂、气雾剂或吸入剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、乳胶剂、油剂、精华素、粉剂、喷雾剂、软膏剂、溶液剂、悬浮剂、分散剂、糊剂、泡沫剂、剥离剂、薄膜剂、面膜剂、贴剂、棒状剂、滚珠剂、浸渍织物(例如“抹布”或纸巾)或它们的任意组合。
43.如段落33-42中任一段所述的制剂，所述制剂还包含第二抗细菌剂。
44.如段落33-43中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗细菌剂处于载药体的形式。
45.如段落33-44中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗细菌剂载药体还包含选自于由以下化合物组成的组的化合物：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
46.如段落33-45中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗细菌剂载药体的尺寸为约5nm至约100μm。
47.如段落33-46中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗细菌剂载药体的尺寸为约100nm至约25μm。
48.如段落33-47中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗细菌剂载药体包含位于其表面上的表面改性剂。
49.如段落33-48中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗细菌剂载药体的表面改性剂选自于由以下化合物所组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
50.如段落33-47中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗细菌剂载药体的表面基本上不含表面改性剂。
51.如段落33-50中任一段所述的制剂，所述制剂还包含另外的活性剂。
52.如段落33-51中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂为抗炎剂、穿透促进剂、渗透促进剂、抗氧化剂、抗老化剂、抗皱剂、皮肤增白剂或漂白剂、紫外(UV)线吸收剂或散射剂、皮肤脱色剂、皮肤再生剂、疤痕愈合剂或它们的任意组合。
53.如段落33-52中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂处于载药体的形式。
54.如段落33-53中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体还包含选自于由以下化合物组成的组的化合物：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
55.如段落33-54中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的尺寸为约5nm至约100μm。
56.如段落33-55中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的尺寸为约100nm至约25μm。
57.如段落33-56中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体包含位于其表面上的表面改性剂。
58.如段落33-57中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的表面改性剂选自于由以下化合物所组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
59.如段落33-56中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的表面基本上不含表面改性剂。
60.如段落33-59中任一段所述的制剂，其中，所述制剂还包含锌化合物。
61.如段落33-60中任一段所述的制剂，其中，所述制剂还包含保湿剂。
62.一种具有两种截然不同的抗细菌作用机制的双效合理疗法(DART)分子。
63.一种DART分子，所述DART分子具有：β-内酰胺环和喹诺酮核；或喹诺酮核和硝基杂环；或β-内酰胺环和硝基杂环。
64.如段落62所述的分子，其中，所述分子抑制DNA促旋酶或拓扑异构酶IV以及转肽酶介导的肽聚糖交联。
65.如段落62或63所述的分子，其中，所述分子抑制异戊二烯基焦磷酸酯和转肽酶介导的肽聚糖交联。
66.如段落62-64中任一段所述的分子，其中，所述分子抑制异戊二烯基焦磷酸酯和拓扑异构酶IV的DNA促旋酶。
67.如段落62-65中任一段所述的分子，其中，所述分子抑制叶酸合成和拓扑异构酶IV的DNA促旋酶。
68.如段落62-66中任一段所述的分子，其中，所述分子抑制叶酸合成和转肽酶介导的肽聚糖交联。
69.如段落62-67中任一段所述的分子，其中，所述分子抑制DNA促旋酶或拓扑异构酶IV和细菌中的30S亚基。
70.如段落62-68中任一段所述的分子，其中，所述分子抑制DNA促旋酶或拓扑异构酶IV和细菌中的50S亚基。
71.如段落62-69中任一段所述的分子，其中，所述分子抑制转肽酶介导的肽聚糖交联和细菌中的30S亚基或50S亚基。
72.如段落62-70中任一段所述的分子，其中，所述分子抑制叶酸合成和细菌中的30S亚基或50S亚基。
73.如段落62-71任一段所述的分子，其中，所述分子抑制异戊二烯基焦磷酸酯和细菌中的30S亚基或50S亚基。
74.一种具有两种截然不同的抗痤疮作用机制的双效合理疗法(DART)分子。
75.如段落73所述的分子，其中，所述分子对至少两个不同的靶标进行调节。
76.如段落73或74所述的分子，其中，第一机制是抗细菌作用，第二作用机制是抑制角化细胞的增殖和分化。
77.如段落73-75中任一项所述的分子，其中，第一机制是抗细菌作用，第二作用机制是抗炎。
78.一种双效合理疗法(DART)分子，所述分子包含两个化学结构域，每个所述化学结构域结合至靶细胞中截然不同的活性位点，其中，所述两个化学结构域通过第三结构域结合在一起。
79.如段落77所述的分子，其中，所述第三结构域为接头。
80.如段落77或78所述的分子，其中，所述第三结构域为可断裂的接头。
81.如段落77或78所述的分子，其中，所述第三结构域为不可断裂的接头。
82.如段落77-80中任一段所述的分子，其中，所述第三结构域为11-羟基十一碳烯酸、1,10-癸二醇、1,3-丙二醇、1,5-戊二醇、10-羟基癸烯酸、琥珀酸、乳酸、3-羟基丙酸或它们的任意组合。
83.如段落77-81中任一段所述的分子，其中，所述第三结构域增加了所述两个化学结构域中的至少一个的活性。
84.如段落77-82中任一段所述的分子，其中，所述第三结构域具有抗细菌活性或抗炎活性。
85.如段落62-83中任一段所述的分子，其中，所述分子处于载药体的形式。
86.如段落62-84中任一段所述的分子，其中，所述载药体的尺寸为约5μm至约100μm。
87.如段落62-85中任一段所述的分子，其中，所述载药体的尺寸为约100nm至约25μm。
88.如段落62-86中任一段所述的分子，其中，所述载药体还包含选自于由以下化合物组成的组的化合物：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
89.如段落62-87中任一段所述的分子，其中，所述载药体还包含另外的活性剂。
90.如段落88所述的分子，其中，所述另外的活性剂为抗炎剂、角质层分离剂、穿透促进剂、抗氧化剂、抗老化剂、抗皱剂、皮肤增白剂或漂白剂、紫外(UV)线吸收剂或散射剂、皮肤脱色剂、皮肤再生剂、疤痕愈合剂或它们的任意组合。
91.如段落62-89中任一段所述的分子，其中，所述载药体的表面基本上不含表面改性剂。
92.如段落62-90中任一段所述的分子，其中，所述载药体还包含另外的抗痤疮剂。
93.如段落62-91中任一段所述的分子，其中，所述第二抗痤疮剂选自于由以下化合物组成的组：阿维A、阿达帕林、阿利维甲酸、α-羟基酸或β-羟基酸、抗生素、抗微生物肽、抗微生物剂、壬二酸、过氧化苯甲酰、贝沙罗汀、胆盐、生物膜抑制剂、克林霉素、红霉素、依曲替酯、乙醇酸、异维甲酸、角质层分离剂、乳酸、硫辛酸、N-乙酰半胱氨酸、天然抗痤疮剂、羟甲辛吡酮、苯氧乙醇、苯氧丙醇、丙酮酸、间苯二酚、视黄酸、类视黄醇、水杨酸、sebostats、磺胺醋酰钠、螺内酯、硫、含硫的D-氨基酸或L-氨基酸、他扎罗汀、茶树油、维甲酸、三氯生、脲以及它们的任意组合。
94.如段落62-92中任一段所述的分子，其中，所述载药体还包含位于其表面上的表面改性剂。
95.如段落62-93中任一段所述的分子，其中，所述表面改性剂为选自于由以下化合物组成的组的化合物：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
96.一种包含如段落62-94中任一段所述的双效合理疗法分子和至少一种载体或赋形剂的制剂。
97.如段落95所述的制剂，其中，所述载体或赋形剂选自于由以下试剂组成的组：乳化剂、防腐剂、表面活性剂、油、脂、蜡、稳定剂、流变改性剂或增稠剂(胶凝剂)、润肤剂、保湿剂、调理剂、香料/香精、增效剂、防腐剂、遮光剂、抗氧化剂、清凉剂、成膜剂、磨砂剂、去角质剂、着色剂、pH调节剂、溶剂、溶媒、穿透促进剂、渗透促进剂、珠光剂、以及它们的任意组合。
98.如段落95或96所述的制剂，所述制剂包含约5％至约99％(w/w或w/v)的所述载体或赋形剂。
99.如段落95-97中任一段所述的制剂，其中，所述制剂被配制用于局部给药、口服给药或肠胃外给药。
100.如段落95-98中任一段所述的制剂，其中，所述制剂为口服剂型、注射剂、气雾剂或吸入剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、乳胶剂、油剂、精华素、粉剂、喷雾剂、软膏剂、溶液剂、悬浮剂、分散剂、糊剂、泡沫剂、剥离剂、薄膜剂、面膜剂、贴剂、棒状剂、滚珠剂、浸渍织物(例如“抹布”或纸巾)或它们的任意组合。
101.如段落95-99中任一段所述的制剂，所述制剂还包含第二抗痤疮剂。
102.如段落95-100中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗细菌剂选自于由以下试剂组成的组：阿维A、阿达帕林、阿利维甲酸、α-羟基酸或β-羟基酸、抗生素、抗微生物肽、抗微生物剂、壬二酸、过氧化苯甲酰、贝沙罗汀、胆盐、生物膜抑制剂、克林霉素、红霉素、依曲替酯、乙醇酸、异维甲酸、角质层分离剂、乳酸、硫辛酸、N-乙酰半胱氨酸、天然抗痤疮剂、羟甲辛吡酮、苯氧乙醇、苯氧丙醇、丙酮酸、间苯二酚、视黄酸、类视黄醇、水杨酸、sebostats、磺胺醋酰钠、螺内酯、硫、含硫的D-氨基酸或L-氨基酸、他扎罗汀、茶树油、维甲酸、三氯生、脲以及它们的任意组合。
103.如段落95-101中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂处于载药体的形式。
104.如段落95-102中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体还包含选自于由以下化合物组成的组的化合物：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
105.如段落95-103中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体的尺寸为约5nm至约100μm。
106.如段落94-103中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体的尺寸为约100nm至约25μm。
107.如段落95-105中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体包含位于其表面上的表面改性剂。
108.如段落95-106中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂载药体的表面改性剂选自于由以下化合物组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
109.如段落95-105中任一段所述的制剂，其中，所述第二抗痤疮剂的表面基本上不含表面改性剂。
110.如段落95-108中任一段所述的制剂，所述制剂还包含另外的活性剂。
111.如段落95-109中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂为抗炎剂、穿透促进剂、抗氧化剂、抗老化剂、抗皱剂、皮肤增白剂或漂白剂、紫外(UV)线吸收剂或散射剂、皮肤脱色剂、皮肤再生剂、疤痕愈合剂或它们的任意组合。
112.如段落95-110中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂处于载药体的形式。
113.如段落95-111中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体还包含选自于由以下化合物组成的组的化合物：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
114.如段落95-112中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的尺寸为约5nm至约100μm。
115.如段落95-113中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的尺寸为约100nm至约25μm。
116.如段落95-114中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体包含位于其表面上的表面改性剂。
117.如段落95-115中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的表面改性剂选自于由以下物质组成的组：脂、油、聚合物、肽、蛋白质、碳水化合物、糖脂、磷脂、脂蛋白、阳离子分子以及它们的任意组合。
118.如段落95-114中任一段所述的制剂，其中，所述另外的活性剂载药体的表面基本上不含表面改性剂。
119.如段落95-117中任一段所述的制剂，其中，所述制剂还包含锌化合物。
120.一种用于对受试者的痤疮病症进行治疗的方法，所述方法包括给予治疗有效量的如段落1-61和95-118中任一段所述的制剂。
121.如段落119所述的方法，其中，所述痤疮病症是由抗生素敏感的细菌菌株引起的。
122.如段落119或120所述的方法，其中，所述痤疮病症是由抗生素抗性细菌引起的。
123.如段落119-121中任一段所述的方法，其中，所述痤疮病症是由克林霉素、四环素、多西环素或红霉素抗性痤疮丙酸杆菌引起的。
124.任何段落119-122中任一段所述的方法，其中，所述痤疮病症是由克林霉素、四环素、多西环素或红霉素耐受的痤疮丙酸杆菌引起的。
125.一种对受试者中的细菌感染进行治疗的方法，所述方法包括给予治疗有效量的如段落1-61和95-118中任一段所述的制剂。
126.如段落124所述的方法，其中，所述感染是由病原体引起的，所述病原体选自于由以下病原体组成的组：汉赛巴尔通体(Bartonella henselae)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)、胎儿弯曲菌(Campylobacterfetus)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)、鹦鹉热衣原体(Chylamydia psittaci)、Simkania negevensis、大肠杆菌(Escherichia coli)(例如O157:H7和K88)、埃立克次体(Ehrlichia chafeensis)、肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、流感嗜血杆菌(Haemophilius influenzae)、杜克雷嗜血杆菌(Haemophilius ducreyi)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、百日咳杆菌(Bordetella pertussis)、伯纳特氏立克次氏体(Coxiella burnetii)、解脲支原体(Ureaplasma urealyticum)、生殖支原体(Mycoplasmagenitalium)、Trichomatis vaginalis、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)、非洲分枝杆菌(Mycobacterium africanum)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、亚洲分枝杆菌(Mycobacterium asiaticum)、鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium)、隐藏分枝杆菌(Mycobacterium celatum)、龟分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)、偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)、日内瓦分枝杆菌(Mycobacterium genavense)、嗜血分枝杆菌(Mycobacterium haemophilum)、胞内分枝杆菌(Mycobacterium intracellulare)、堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、玛尔魔分枝杆菌(Mycobacterium malmoense)、海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)、瘰疬分枝杆菌(Mycobacterium scrofulaceum)、猿分枝杆菌(Mycobacterium simiae)、斯氏分枝杆菌(Mycobacterium szulgai)、溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)、蟾分枝杆菌(Mycobacterium xenopi)、白喉棒状杆菌(Corynebacterium diptheriae)、马红球菌(Rhodococcus equi)、埃氏立克次体(Rickettsia aeschlimannii)、非洲立克次体(Rickettsia africae)、康诺尔立克次体(Rickettsia conorii)、溶血隐秘杆菌(Arcanobacterium haemolyticum)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、单核胞增生李斯特菌(Lysteria monocytogenes)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)、痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitides)、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)、牛链球菌(Streptococcus bovis)、溶血性链球菌(Streptococcus hemolyticus)、变形链球菌(Streptococcus mutans)、酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、肺炎葡萄球菌(Staphylococcus pneumoniae)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)、梅毒螺旋体(Treponema pallidum)、念珠菌(Candida)、隐球菌(Cryptcooccus)、隐孢子虫(Cryptosporidium)、贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)、微孢子虫(Microsporidia)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、须毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)、环孢子虫(Cyclospora cayetanensis)、海伦脑炎微孢子虫(Encephalitozoon hellem)、家兔脑胞内原虫(Encephalitozoon cuniculi)，还有其它细菌、古生菌、原生动物和真菌。
127.如段落124或125所述的方法，其中，所述感染是由抗生素抗性的细菌菌株引起的。
128.如段落124或125所述的方法，其中，所述感染是由抗生素敏感的细菌菌株引起的。
129.如段落124-127中任一段所述的方法，其中，所述制剂以单剂量或多剂量一次或每日给予所述受试者。
某些选定的定义
为了方便起见，将在本文说明书、实施例和所附的权利要求中使用的某些术语在此进行收集。除非另有说明或在上下文中暗示，下列术语和短语包含以下提供的含义。除非另有明确的说明或从上下文清楚地看出，否则，以下术语和短语不排除其所属领域中已获得的该术语或短语的含义。提供定义以有助于对具体实施方式进行描述，并非旨在限制所要求保护的发明，因为本发明的范围仅由权利要求书进行限定。此外，除非上下文另有要求，单数术语应当包含复数并且复数术语应当包含单数。
除非另有定义，本文中使用的所有技术术语和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。虽然任何已知的方法、设备和材料均可以在本发明的实践或测试中使用，但就这一点而言，在本文中仍对这些方法、设备和材料进行了描述。
本文所使用的术语“本文”是指在整个公开文本，因此并不意味着限定于本公开文本的特定区域或子区域。
本文所使用的术语“包括/包含”涉及组合物、方法及其各自的组成部分，所述组成部分对所述方法或组合物是必要的，并且仍然对未指定的要素保持开放，无论该未指定的要素是否必要。
除非上下文另有明确说明，单数术语“a/an/the”包含复数个对象。类似地，除非上下文另有明确说明，词语“或”旨在包含“和”。
除了在操作实施例中或另有指示的地方，本文所用的表示成分或反应条件的量的全部数值在所有情况下都应该被理解为被术语“约”修饰。与百分比相连使用的术语“约”可意味着所提及的值的±5％、±4％、±3％、±2.5％、±2％、±1.5％、±1％或者±0.5％。
虽然与本文所述的方法和材料类似或等同的方法和材料均可以在本公开的实践或测试中使用，但下面对合适的方法和材料进行了描述。术语“包含”意味着“含有”。缩写“e.g.”来自拉丁语exempli gratia，并且在本文中用于表示非限制性实例。因此，缩写“e.g.”是术语“例如”的同义词。
本文所使用的术语“减少、降低或抑制(decrease/reduced/reduction/decrease/inhibit)”通常都意味着统计学上显著量的降低。然而，为避免任何疑义，“减少、降低或抑制”意味着与参考水平相比降低至少10％，例如与参考水平相比降低至少约20％、或至少约30％、或至少约40％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％或者直至并包括100％降低(例如，与参考实例相比不存在的水平)，或与参考水平相比10％-100％之间的任意降低量。
在本文中所使用术语“增加、增强或激活(increased/increase/enhance/active)”通常均意味着统计学上显著量的增加；为避免任何疑义，术语“增加、增强或激活”意味着与参考水平相比增加至少10％，例如与参考水平相比增加至少约20％、或至少约30％、或至少约40％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％或直至并包括100％增加，或与参考水平相比10％-100％之间的任意增加量，或者与参考水平相比增加或至少约2倍、或至少约3倍、或至少约4倍、或至少约5倍或至少约10倍，或者与参考水平相比在2倍-10倍之间的任意增加量或更高的增加量。
术语“统计学上显著”或“显著”是指统计显著性，并且通常意味着偏离参考水平至少两个标准偏差(2SD)。该术语指的是表明存在差异的统计学证据。将其定义为当零假设事实上为真时，作出拒绝零假设的决策的几率。
本文所使用的术语“球”是指球形或准球形的球状物、球或物质的其它形状的颗粒(例如处于双相悬浮液或乳剂形式)。固体材料细分的颗粒也包含在术语“球”的含义中。
还通过以下实施例对本公开文本进行阐释，以下实施例不应被解释为限制性的。实施例仅是说明性的，并不旨在以任何方式限制本文所述的任何方面。以下实施例不以任何方式对本发明进行限制。
实施例
实施例1：抗生素针对痤疮丙酸杆菌菌株的筛选表明在克林霉素敏感的菌株和无响应的菌株中响应均是不可预知的。
实施例2-15和表6-15对一些示例性DART分子、它们的合成、制剂和用途进行了描述。
实施例2：表1A的DART分子9的合成
Figure BDA0001122120050001011
步骤1，2的合成：向处于二氯甲烷(10ml)和二甲基甲酰胺(1ml)的混合物的1(1g，2.33mmol)的溶液中加入N,N-二环己基碳二亚胺(0.627g，3.041mmol)，随后在冰冷条件下缓慢加入N-羟基苯并三唑(0.316g，2.33mmol)，并在室温下搅拌2小时，获得浑浊的悬浮液。向该混浊溶液中加入戊二醇(0.85ml，8.18mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶(0.284g，2.33mmol)。最终的反应混合物在室温下搅拌16小时。过滤白色沉淀物，并用乙酸乙酯萃取。滤液用盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥并蒸发，得到粗物质。粗产物通过快速柱色谱纯化，用1％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到纯的化合物2(0.9g，收率80％)。
步骤2，DART 9的合成：向处于二氯甲烷(10ml)和二甲基甲酰胺(1ml)的混合物的3(0.72g，1.55mmol)的溶液中加入二环己基碳二亚胺(0.415g，2.05mmol)，随后在室温下加入N-羟基苯并三唑(0.209g，1.55mmol)，得到浑浊的悬浮液。将反应混合物在室温下搅拌3小时，并将化合物2(0.79g，1.55mmol)加入至该混浊的溶液中，随后加入4-二甲氨基吡啶(0.189g，1.55mmol)。将最终的溶液在室温下搅拌16小时。过滤沉淀物，并将滤液用乙酸乙酯萃取。用盐水溶液洗涤有机层，用硫酸钠干燥，得到粗产物。粗产物通过快速柱色谱法纯化，以50％-60％的分离收率获得最终产物(9)。
实施例2：表1A的DART分子87的合成
Figure BDA0001122120050001021
步骤1，4的合成：将11-溴十一烷酸(1.33g，5.04mmol)与甲醇(0.1ml)预混合，在0-5℃下加入至1(1g，2.52mmol)、碳酸钾(0.243g，1.764mmol)和磷酸氢二钾(0.175g，1mmol)在N,N-二甲基乙酰胺(15ml)的搅拌混合物中。将反应混合物在0℃下搅拌5小时，并用乙酸乙酯(50ml)萃取。用3％碳酸氢钠水溶液(10ml)、随后是盐水溶液(10ml)对最终的溶液进行洗涤。蒸发出有机溶剂，得到粗物质，最后通过快速柱色谱纯化。化合物用1％-3％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到纯的化合物4(1.2g，收率82％)。
步骤2，DART 87的合成：向处于二氯甲烷(10ml)和二甲基甲酰胺(1ml)的化合物4(1g，1.72mmol)的溶液中加入二环己基碳二亚胺(0.461g，2.23mmol)，随后在室温下加入N-羟基苯并三唑(0.232g，1.72mmol)，得到浑浊的悬浮液。将反应混合物在室温下搅拌1小时。向该混浊的溶液中加入5(0.67g，1.72mmol)，接着加入DMAP(0.210g，1.72mmol)，将反应混合物在室温下搅拌16小时。将悬浮液过滤，用盐水溶液洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并蒸发，得到粗物质。最后的粗产物通过快速柱色谱进行纯化，用2％-5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，以60％-65％的分离收率得到纯的化合物87。
实施例3：表1B的DART分子90的合成
根据以下方案合成溴-乙酸1-氯甲基-2-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-乙基酯(II)。
Figure BDA0001122120050001031
注：方案中的化合物1对应于表1B中的化合物90
向1-氯-3-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-丙烷-2-醇(I)(0.79g，3.6mmol)的二氯甲烷(10ml)的搅拌溶液中加入二环己基碳二亚胺(DCC)(0.9g，4.31mmol)，接着在室温下加入溴乙酸(0.5g，3.6mmol)和DMAP(0.44g，3.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过过滤除去沉淀并蒸发有机层，得到粗品，将粗品通过快速柱色谱法纯化。最终的化合物用1％-2％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱。化合物不经进一步表征用于下一步骤。
7-{4-[1-氯甲基-2-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-乙氧基羰基甲基]-哌嗪-1-基}-6-氟-1-甲基-4-氧代-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(1)的合成：向6-氟-1-甲基-4-氧代-7-哌嗪-1-基-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(III)(0.071g，0.2mmol)的二甲基甲酰胺(10ml)搅拌溶液中加入碳酸钾(0.04g，0.3mmol)，随后加入化合物(II)(0.1g，0.3mmol)，将反应混合物在室温下搅拌3小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水洗涤两次，最后用硫酸钠干燥，得到粗物质。粗产物通过快速柱色谱法纯化，用3％-5％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱，以30％的分离收率得到纯的化合物(1)，即，表1的化合物90。
1H-NMR(400MHz,DMSO)ppm:2.19(3H,d,J＝6.4Hz,CH3),2.57(3H,s,CH3),2.7(4H,m,2×CH2),3.1-3.3(2H,s,COCH2),3.32(4H,m,2×CH2),3.77-3.90(2H,ddd,J1＝3.6Hz,J2＝12.4Hz,J3＝35.2Hz,CH2Cl),4.40-4.56(1H,dd,J1＝9.6Hz,J2＝14Hz CHN),4.76(1H,d,J＝14Hz,CHN),5.44(1H,d,J＝5.6Hz CHOCO),6.0-6.11(1H,q,J1＝6Hz,J2＝12.4Hz,CHSN),,6.4(1H,d,J1＝6.8Hz Ar-H),7.8(1H,d,J＝14Hz,Ar-H),8.04(1H,s,Ar-H).ESI-MS(m/z):609(M+H)+.
实施例4：表1B的DART分子91的合成
根据以下方案合成2-甲基-5-硝基-1-环氧乙烷基甲基-1H-咪唑(IV)。
Figure BDA0001122120050001041
注：方案中的化合物2对应于表1B的化合物91
在0℃下，向1-氯-3-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-丙烷-2-醇(I)(0.5g，2.27mmol)的二氯甲烷(8ml)搅拌溶液中加入20％氢氧化钠(4ml)。将反应混合物在0℃下搅拌3小时。3小时后，将反应混合物用二氯甲烷萃取两次，将有机层合并，用盐水洗涤，最后用硫酸钠干燥，以90％的分离收率得到纯的产物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm:2.517(3H,s,CH3),2.52(1H,m,CH2),2.88(1H,m,CH2),3.38(1H,m,CH),4.17-4.23(1H,dd,J1＝6Hz,J2＝15.2HzCH2),4.85-4.89(1H,,d,J＝14.8CH2).
6-氟-7-{4-[2-羟基-3-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-丙基]-哌嗪-1-基}-1-甲基-4-氧代-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(2)的合成：向6-氟-1-甲基-4-氧代-7-哌嗪-1-基-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(III)(0.2g，0.57mmol)的丙酮(15ml)搅拌溶液中加入溶于水(5ml)的碳酸钾(0.11g，0.19mmol)，随后加入环氧奥硝唑(II)(0.15g，0.82mmol)。将反应混合物在50℃下加热20小时。完成后，蒸发反应混合物，并用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机层用硫酸钠干燥并蒸发，得到粗物质。将粗物质通过柱色谱法进行纯化，用10％-12％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱，以25％-30％的分离收率得到纯的化合物(2)，即，表1的化合物91。1H-NMR(400MHz,DMSO)δppm:2.12(3H,d,J＝6.4Hz,CH3),2.46(3H,s,CH3),2.58-2.60(2H,t,J＝5.6Hz CH2N),2.66(4H,m,2×CH2),3.2(4H,m,2x CH2),3.9-4.1(2H,m,2×CH2N),4.63(1H,d,J＝14Hz,CHOH),5.15(1H,d,J＝5.2Hz-OH),6.39(1H,d,J＝6.4Hz,CHSN)6.93(1H,d,J＝7.2Hz,Ar-H),7.79(1H,d,J＝14Hz,Ar-H),8.04(1H,s,Ar-H).ESI-MS(m/z):532.95(M+H).
实施例5：表1B的DART分子94的合成
Figure BDA0001122120050001051
注：化合物5的方案对应于表1B的化合物94
6-氟-1-甲基-7-[4-(5-甲基-2-氧代-[1,3]二氧-4-基甲基)-哌嗪-1-基]-4-氧代-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸1-氯甲基-2-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-乙基酯(5)的合成：向6-氟-1-甲基-7-[4-(5-甲基-2-氧代-[1,3]二氧环戊烯-4-基甲基)-哌嗪-1-基]-4-氧代-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(V)(0.5g，1.08mmol)的DMF(20ml)搅拌溶液中加入DCC(0.3g，1.41mmol)和HOBt(0.146g，1.083mmol)，随后在室温下加入1-氯-3-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-丙烷-2-醇(I)(0.285g，1.3mmol)和DMAP(0.13g，1.08mmol)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过过滤除去沉淀并蒸发有机层，得到粗物质。最后，通过快速柱色谱法进行纯化，用2％-4％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱，以60％的分离收率得到纯的化合物(5)，即，表1的化合物94。1H-NMR(400MHz,DMSO)δppm:2.03(3H,d,J＝5.6Hz,CH3),2.12(3H,s,CH3),2.5(3H,s,CH3),2.62(4H,m,2×CH2),3.22(4H,m,2x CH2),3.95-4.06(2H,m,CH2Cl),4.49-4.52(1H,t,J＝10Hz,CHN)4.77(1H,d,J＝13.2Hz,CHN),,5.63(1H,d,J＝4.4Hz,CHOCO),6.15(1H,m,CHSN),6.78(1H,d,J＝7.2,Ar-H),7.68(1H,d,J＝14,Ar-H),7.9(1H,s,Ar-H).
实施例6：表1B的DART分子116的合成
Figure BDA0001122120050001061
4-溴-1,2-环氧丁烷(I)的合成：将3-氯过苯甲酸(纯度55％-75％，1.60g，9.25mmol)在10ml二氯甲烷中的溶液滴加至4-溴-1-丁烯(0.5g，3.7mmol)的20ml二氯甲烷搅拌溶液中。加入后，将混合物在25℃下搅拌16小时，以沉淀3-氯苯甲酸。最后将反应混合物蒸发，以在真空下干燥，溶解于乙酸乙酯中，先用4％连二硫酸钠洗涤，接着用饱和碳酸氢钠和水洗涤。最后，有机层用硫酸钠干燥，真空蒸发至干，以90％的分离收率获得最终化合物(I)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm:2.10(m,2H,CH2)2.58(s,1H,OCHa)2.82(,1H,m,OCHb),3.09(m,1H,CH)3.55(t,J＝6.4,2H,CH2-Br).
4-溴-1-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-丁烷-2-醇(II)的合成：在0℃下，向2-甲基-5-硝基-1H-咪唑(0.8g，6.3mmol)的无水乙酸乙酯搅拌溶液中加入无水氯化铝(1.67g，12.5mmol)，并搅拌15分钟以溶解2-甲基-5-硝基-1H-咪唑。将4-溴-1,2-环氧丁烷(I)(1.9g，12.5mmol)逐滴加入到反应混合物中之后，反应混合物在0℃下继续反应5小时。将反应混合物缓慢加入到冰水中，通过加入浓HCl将pH调节至1。将有机层分离，用饱和碳酸氢钠随后用水洗涤。使用氨水将第一次分离得到的水层pH调节至7.4，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在真空下蒸发，得到粗化合物。将粗品通过快速柱色谱法纯化，用2％-3％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱，以50％的分离收率得到纯的化合物(II)。ESI-MS(m/z):277(M)+
6-氟-7-{4-[3-羟基-4-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-丁基]-哌嗪-1-基}-1-甲基-4-氧代-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(116)的合成：向6-氟-1-甲基-4-氧代-7-哌嗪-1-基-4H-2-硫杂-8b-氮杂环丁[a]萘-3-羧酸(III)(3g，8.6mmol)的DMF(30ml)搅拌溶液中加入碳酸钾(1.20g，8.6mmol)，随后加入化合物(II)(2g，7.2mmol)，将反应混合物在室温下搅拌16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水洗涤两次，最后用硫酸钠干燥，得到粗物质。粗产物通过快速柱色谱法纯化，用3％-5％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱，以20％的分离收率得到纯的化合物(116)。1H-NMR(400MHz,DMSO)δppm:1.61-1.68(2H,m,CH2),2.12(3H,d,J＝6Hz,CH3),2.46(3H,s,CH3),2.57(4H,m,2×CH2),3.2(4H,m,2×CH2),3.8-4.1(2H,m,2×CH2N),4.44(1H,m,CHOH),5.2(1H,bs,CHOH),6.4(1H,q,J1＝5.6Hz,J2＝11.6Hz,CHSN)6.91(1H,d,J＝7,Ar-H),7.78(1H,d,J＝13.6Hz,Ar-H),8.04(1H,s,Ar-H).ESI-MS(m/z):547.08(M+H)+.
实施例7：表1B的DART分子113的合成
Figure BDA0001122120050001071
7-{4-[2-十二烷酰氧基-3-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-丙基]-哌嗪-1-基}-6-氟-1-甲基-4-氧代-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(113)的合成：
向91(0.5g，0.94mmol)的二甲基甲酰胺(15ml)溶液中加入N,N-二环己基碳二亚胺(0.29g，1.41mmol)，随后在冰冷条件下缓慢加入N-羟基苯并三唑(0.13g，0.94mmol)，在室温下搅拌10分钟，得到浑浊的悬浮液。向该混浊溶液中加入月桂酸(0.28g，1.5mmol)，接着加入4-二甲基氨基吡啶(0.115g，0.94mmol)。最终的反应混合物在室温下搅拌16小时。过滤白色沉淀物，并用乙酸乙酯萃取。将滤液用水和盐水溶液洗涤，经硫酸钠干燥，蒸发得到粗物质。粗产物通过快速柱色谱法纯化，用2％-3％甲醇/二氯甲烷洗脱，以35％的分离收率得到纯的化合物113。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm:0.86(3H,t,J＝6Hz,CH3),1.05-1.38(18H,m,-CH2),1.48-1.70(4H,m,-CH2),1.90-1.93(2H,d,J＝11.6Hz,CH3),2.16-2.22(3H,m,CH3),2.53(3H,s,CH3),2.58-2.69(2H,m,CH2N),2.69-2.87(4H,m,2×CH2),3.2-3.4(4H,m,2×CH2),4.1-4.25(2H,m,2×CH2N),5.0(1H,s,CHOH),6.09(1H,d,J＝5.2Hz,CHSN),6.41(1H,d,J＝6.8Hz Ar-H),7.92(1H,d,J＝14.8Hz,Ar-H),8.04(1H,s,Ar-H).ESI-MS(m/z):715.2(M+H).
实施例8：表1B的DART分子115的合成
Figure BDA0001122120050001081
2-(4-溴丁基)-环氧乙烷(I)的合成：将3-氯过苯甲酸(纯度55-75％，4.54g，18.39mmol)的20ml二氯甲烷溶液逐滴加入6-溴-1-己烯(2g，12.26mmol)的20ml二氯甲烷搅拌溶液中。加入后，将混合物在25℃下搅拌16小时，以沉淀3-氯苯甲酸。最后将反应混合物真空蒸发至干，溶解于乙酸乙酯中，用4％连二硫酸钠洗涤，接着用饱和碳酸氢钠和水洗涤。最后，有机层用硫酸钠干燥，蒸发并在真空下干燥，以90％的分离收率获得最终化合物(I)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm:1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm:1.48-1.6(6H,m,CH2)2.47(1H,d,J＝2.4,OCH)2.75(t,J＝4,1H,OCHb),2.91(bs,1H,OCHa)3.41(t,J＝6.4,2H,CH2-Br).
6-溴-1-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)–己烷-2-醇(II)的合成：在0℃下，向2-甲基-5-硝基-1H-咪唑(0.7g，5.5mmol)的无水乙酸乙酯搅拌溶液中加入无水氯化铝(1.46g，11mmol)，并搅拌15分钟以溶解2-甲基-5-硝基-1H-咪唑。在将6-溴-1,2-环氧己烷(I)(1.96g，11.02mmol)逐滴加入至反应混合物中之后，在0℃下继续反应5小时。将反应混合物缓慢加入冰水中，并加入浓HCl将pH调节至1。将有机层分离，用饱和碳酸氢钠洗涤，随后用水洗涤。将从第一次分离得到的水层利用氨水将调节至pH7.4，并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥并在真空下蒸发，得到粗化合物。粗产物通过快速柱色谱法纯化，用2％-3％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱，以50％的分离收率得到纯的化合物(II)。ESI-MS(m/z):305.95(M+H)
6-氟-7-{4-[5-羟基-6-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-己基]-哌嗪-1-基}-1-甲基-4-氧代-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(115)的合成：向6-氟-1-甲基-4-氧代-7-哌嗪-1-基-4H-2-硫杂-8β-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(III)(1.10g，3.16mmol)的二甲基甲酰胺(30ml)搅拌溶液中加入碳酸钾(0.43g，3.16mmol)，随后加入化合物(II)(0.85g，2.63mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水洗涤两次，最后用硫酸钠干燥，得到粗物质。粗产物通过快速柱色谱法纯化，用3％-5％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱，以20％的分离收率得到纯的化合物(115)。1H-NMR(400MHz,DMSO)δppm:1.61-1.68(6H,m,CH2),2.1(3H,d,J＝6Hz,CH3),2.44(3H,s,CH3),2.54(4H,m,2×CH2),3.2(4H,m,2×CH2),3.9-4.1(2H,m,2×CH2N),4.38(1H,d,J＝14,CHOH),5.2(1H,d,J＝4.4,OH),6.38(1H,d,J＝5.6Hz,CHSN)6.9(1H,d,J＝6.8,Ar-H),7.78(1H,d,J＝14Hz,Ar-H),8.02(1H,s,Ar-H).ESI-MS(m/z):575(M+H)实施例9：表1B的DART分子119的合成
Figure BDA0001122120050001091
2-(2-甲基-5-硝基-1H-咪唑-1-基)乙基4-甲基苯磺酸酯(I)的合成：在0℃下，向2-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-乙醇(4g，16.86mmol)的二氯甲烷(50ml)搅拌溶液中加入三乙胺(7.3ml)、4-甲苯磺酰氯(6.42g，33.72mmol)，随后加入4-二甲氨基吡啶(0.2g，1.68mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3小时。完成后，用水、5％盐酸、饱和NaHCO3和水洗涤反应混合物。将有机层经硫酸钠干燥并蒸发，得到粗物质。粗产物通过快速柱色谱法纯化，用2％-3％甲醇/二氯甲烷洗脱，以90％的分离收率得到纯的化合物。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm:2.45(3H,s,Ar-CH3),2.51(3H,s,-CH3),4.37(2H,d,J＝4.8Hz,CH2),4.54(2H,d,J＝4.8Hz,CH2),7.29(2H,d,J＝8.4Hz,ArH),7.60(2H,d,J＝8.4Hz,ArH),7.81(1H,s,ArH).
6-氟-1-甲基-7-{4-[2-(2-甲基-5-硝基咪唑-1-基)-乙基]-哌嗪-1-基}-4-氧代-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(119)的合成：向6-氟-1-甲基-4-氧代-7-哌嗪-1-基-4H-2-硫杂-8b-氮杂-环丁[a]萘-3-羧酸(II)(5.16g，14.76mmol)的二甲基甲酰胺(100ml)搅拌溶液中加入碳酸钾(2.03g，14.76mmol)，随后加入化合物(I)(2g，7.2mmol)，并将反应混合物在90℃下加热16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水洗涤两次，最后用硫酸钠干燥，得到粗物质。粗产物通过快速柱色谱法纯化，用4％-5％甲醇/二氯甲烷混合物洗脱，以20％的分离收率得到纯的化合物(119)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm:2.12(3H,d,J＝6.4Hz,CH3),2.52(3H,s,CH3),2.64(4H,m,2×CH2),2.72(2H,t,J＝6Hz,CH2),3.11-3.18(4H,m,2×CH2),4.43-4.49(2H,m,CH2N),5.8-5.9(1H,q,J1＝6.4Hz,J2＝12.8Hz,CHSN),6.3(1H,d,J＝6.8Hz,Ar-H),7.92(1H,s,Ar-H),7.95(1H,s,Ar-H).ESI-MS(m/z):503(M+H)
实施例10：克林霉素敏感和抗性痤疮丙酸杆菌的抗微生物剂敏感性
通过如下微量发酵液(broth)稀释法对痤疮丙酸杆菌的抗微生物剂敏感性进行测定。
方法：在37℃厌氧条件下，将痤疮丙酸杆菌(MTCC 1951和CCARM 9010)在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养48小时。对于MIC测试，将BHI发酵液(100μl)加入至所有96孔中，并将100μl含有不同浓度的头孢菌素、头孢西丁、普卢利沙星、那氟沙星、罗红霉素、克林霉素和贝西沙星的发酵液加入至各行的第一孔(1A到1H)，对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。对于细菌接种，将痤疮丙酸杆菌培养物浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108)，并进一步稀释(用无菌BHI发酵液稀释100倍)。将稀释的痤疮丙酸杆菌悬浮液(100μl)加入至除了无菌对照孔(96孔板的第12列)以外的每个孔中。将接种板在37℃厌氧条件下温育72小时。温育后，通过加入Alamar蓝染料来测定MIC。
结果：对克林霉素敏感的痤疮丙酸杆菌菌株的MIC结果表明，该菌株易受所有抗生素感染(图1A)。有趣的是，克林霉素抗性菌株还对大环内酯、罗红霉素具有抗性(图1B)。
实施例11：化合物90、91、94、113、115和116在克林霉素敏感(MTCC 1951)和克林霉素无响应(CCARM 9010)痤疮丙酸杆菌菌株和实验室金黄色葡萄球菌菌株中的最小抑制浓度(MIC)和剂量响应曲线的测定。
材料：脑心浸液发酵液、痤疮丙酸杆菌菌株(MTCC 1951和CCARM 9010)、金黄色葡萄球菌MTCC 6908、96孔板、高压灭菌器、温育器、具有厌氧气体包的厌氧箱、读板仪(595nm)、Alamar蓝。
方法：在37℃厌氧条件下，将痤疮丙酸杆菌在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养48小时。对于MIC测试，将BHI发酵液(100μl)加入至所有96孔中，并将100μl含有药物的发酵液加入至各行的第一孔(1A至1H)，对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。对于细菌接种，将痤疮丙酸杆菌培养物浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108细胞/ml)，并进一步稀释(用无菌BHI发酵液稀释100倍)。除了无菌对照孔(96孔板的第12列)，将稀释的痤疮丙酸杆菌悬浮液(100μl)加入至每个孔中。
对痤疮丙酸杆菌而言，将板在37℃厌氧条件下温育48小时；对金黄色葡萄球菌而言，将板在37℃厌氧条件下温育24小时。在Bio-Rad读板仪下，读取板在595nm处的光密度，以生成剂量-响应曲线。通过加入Alamar蓝染料对测试化合物的MIC进行记录。
结果：表6和图1C和图1D示出了在敏感和抗性痤疮丙酸杆菌菌株中不同化合物的MIC和剂量响应曲线。结果表明，与所有其它化合物相比，化合物91在两种细菌菌株(克林霉素敏感和抗性痤疮丙酸杆菌)中均显示出更低的MIC值和更快的细菌杀灭曲线。与之不同，对于两种痤疮丙酸杆菌菌株，化合物115和116(仅与化合物91略有不同)展现出比化合物91获得的MIC值的两倍还要高的MIC值。类似地，化合物113和94几乎未示出对痤疮丙酸杆菌的任何活性，这可表明游离羰基和羧基在化合物活性更优方面的重要性和参与程度。有趣的是，在图1C和图1D的剂量响应曲线中观察到，发现化合物90在克林霉素敏感痤疮丙酸杆菌中无活性，但在克林霉素无响应痤疮丙酸杆菌菌株中示出了有前途的活性。
在金黄色葡萄球菌菌株的存在下，所有化合物90、91、115和116具有类似活性，但化合物113示出了最小活性，这可能是由于结合靶蛋白过程中所涉及的空间限制(表6)。
结论：化合物91是强效抗痤疮剂，并且是对治疗克林霉素敏感菌株有效的药物。在克林霉素抗性痤疮丙酸杆菌菌株方面，它也示出了比在敏感菌株中更好的最高活性。同样也反映在剂量响应曲线中(图1C和图1D)。在这两种菌株中，以非常低的浓度，所有痤疮丙酸杆菌细菌均被杀死，表明它克服了抗生素无响应的所有机制，即，可以克服耐受(引言中所述)和抗性相关的机制。这表明化合物91的结构是独特的，其示出了比所有其它化合物均更高的针对敏感和抗性痤疮丙酸杆菌菌株的生物效力。结构相关分子的广泛变化也强调了不可能仅由于结构相似而对效力进行预测的事实。类似地，化合物91针对金黄色葡萄球菌比针对痤疮丙酸杆菌更高的MIC值证明了化合物91对特定细菌菌株的特异性，并且在细菌物种中看到的结果不能被随便移至另一种致病细菌。
化合物90、91、94、113、115和116的纯度和生物活性(来自表1A和表1B)
通过HPLC对上述所有DART分子的纯度进行评估，并在痤疮丙酸杆菌敏感菌株和抗性菌株以及金黄色葡萄球菌敏感菌株中对它们的生物活性进行评价。结果示于表6中。
表6：化合物的HPLC纯度和针对克林霉素敏感和抗性痤疮丙酸杆菌菌株以及实验室金黄色葡萄球菌菌株的MIC值
Figure BDA0001122120050001121
实施例12：使用大肠杆菌DNA促旋酶的化合物90、91、94、113、115和116的DNA促旋酶活性测定。
材料：DNA促旋酶测定试剂盒(Topogen Inc.)、蛋白酶K、氯仿、异戊醇、不同的测试化合物、琼脂糖凝胶电泳系统。
方法：根据制造商的方案，使用带有松弛pHOT1大肠杆菌质粒DNA的DNA促旋酶测定试剂盒(Topogen Inc.)对DNA超螺旋活性进行测定。标准反应混合物(20μl)含有35mMTris-HCl(pH 7.5)、24mM KCl、4mM MgCl2、2mM二硫苏糖醇、1.8mM精胺、1mM ATP、6.5％甘油、0.1mg/ml牛血清白蛋白(BSA)、10μg/ml松弛pHOT1质粒DNA和1U DNA促旋酶。在不同浓度的所选化合物/氟喹诺酮的存在下，将反应混合物在37℃下温育1小时。通过加入1/5体积的上样染料(4μl)、随后加入蛋白酶K(50μg/ml)终止反应，并在37℃下再温育半小时。将20μl氯仿/异戊醇(24:1)加入至各管中并短暂地涡旋。此后，分离出蓝色水相，用1％琼脂糖凝胶电泳进行分析。将凝胶用溴化乙锭染色半小时，并用水脱色15分钟。然后将该凝胶在透照器中可视化并拍照。
结果：化合物抑制DNA促旋酶的超螺旋活性：首先选择具有最好MIC值的化合物91评估其对DNA螺旋酶活性的影响。在五个不同的浓度中(范围为0.25μm至5μm)，观察超螺旋带的强度(图2A)。相对于未处理的对照(100％)，在化合物91的存在下，超螺旋带减少(在0.25μM处接近约54.3％，直至在5μM化合物91的存在下约2％)(图2B)。
此外，分别在两种浓度1μM和2.5μM下对所有化合物90、91、94、113、115和116进行测试，以检查它们对DNA促旋酶活性的作用。图3A显示，所有的化合物均能够抑制DNA促旋酶的超螺旋活性。然而，化合物91和116相对于其它化合物，在这方面高度强效，示出了化合物91和116之间的微小结构差异不影响促旋酶的结合亲和力。但在剂量响应曲线中观察到化合物91比化合物116具有更高的细菌杀灭效力(图1C和图1D)，证明了化合物91可能具有相对于其它化合物截然不同的模式。
当将化合物91与已知的氟喹诺酮那氟沙星相比时，前者在两个测试浓度下均显示出比那氟沙星更好的对DNA促旋酶的DNA超螺旋作用的抑制效力(图3B)。
结论：由DNA促旋酶活性测定中获得的结果表明，化合物91在结合DNA促旋酶和抑制其作用方面最为强效。因此，抑制细菌生长的机制是通过阻碍DNA促旋酶的功能，从而防止重要的细胞功能，并最终导致细胞死亡。该化合物示出了相比于已知的氟喹诺酮、那氟沙星更好的抗菌效力和结合亲和力。这些结果与由MIC数据和剂量响应曲线获得的结果是一致的。
实施例13：化合物91相比于其它已知氟喹诺酮的防突变浓度(MPC)
材料：脑心浸液发酵液、痤疮丙酸杆菌MTCC 1951、培养皿、高压灭菌器、温育器、具有厌氧气体包的厌氧箱。
方法：在37℃厌氧条件下，将痤疮丙酸杆菌在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养48小时。将含有48小时痤疮丙酸杆菌培养基的3至4个培养皿在无菌磷酸盐缓冲盐水PBS(pH 7.2)中加以悬浮，并将浊度调节至在600nm处光密度为1(109细胞/ml)。将50ml这种培养物悬浮液以4000rpm离心分离40分钟。弃去上清液，并将沉淀物再悬浮于250μl无菌PBS中。将50μl这些细胞悬浮液(1010个细胞)散布在含有各种浓度抗生素(在MIC范围周围)的板上。将板在37℃下温育48小时，并且将使得不发生生长的药物最低浓度作为其MPC。如果在更高抗生素浓度的板中观察到薄膜，则将薄膜在不含药物的板上进一步再次培养。然后，将在不含药物的板上得到的生长在含有药物的板上进行传代培养(在薄膜发生分离的浓度下)。如果在温育周期结束时在这些板上未观察到生长，则相同浓度被证实为所述化合物的MPC。
结果：表7示出了化合物91与其它已知氟喹诺酮和克林霉素针对痤疮丙酸杆菌的MPC值、以及MPC与MIC的比。MPC/MIC比值表明化合物91防止针对痤疮丙酸杆菌抗性发展的活性比已知抗痤疮的抗生素那氟沙星、新一代氟喹诺酮尤利沙星高几乎3倍，并且是克林霉素的2倍。发现贝西沙星和化合物91的MPC/MIC比值接近。这得出结论：贝西沙星和化合物91均是用于治疗和预防痤疮丙酸杆菌的有效分子，并且理想地用于防止针对病原体的抗性发展。
结论：不同于MIC测试(通常使用大约104-105cfu/ml的接种量)，MPC的计算需要大的接种量(约109-1010cfu/ml)。选择这样高的接种量是为了确保在易感细菌群落内存在第一步抗性突变体。此外，化合物91的MPC/MIC只有1.5[SC1]，而那氟沙星的MPC/MIC几乎为8。抗生素分子的MIC和MPC之间的窗口越窄，在体内环境中突变体选择性生长的机会越小。这意味着化合物91会比其它已知的抗痤疮剂在防止目标微生物抗性发展方面更为有效。
表7：化合物91的防突变浓度(MPC)和MPC/MIC比值以及与已知的氟喹诺酮和林可酰胺的比较
分子 MIC(μg/ml) MPC(μg/ml) MPC/MIC
克林霉素 0.02 0.13 6.5
化合物91 0.2 0.3-0.6 1.5-3
贝西沙星 0.5 2 4
尤利沙星 0.13 1.2 9.2
那氟沙星 0.13 1.2 9.2
实施例14：与其它市售制剂相比，化合物91的局部用凝胶制剂的抑制区(ZOI)
材料：脑心浸液发酵液、金黄色葡萄球菌MTCC 6908、痤疮丙酸杆菌菌株(MTCC1951和CCARM 9010)、96孔板、高压灭菌器、温育器、具有厌氧气体包的厌氧箱、读板仪(595nm)、Alamar蓝。
方法：对于ZOI测试，将100μl细菌悬浮液(0.5McFarland标准当量)铺展在BHA板上。将测试样品(制剂)基于溶解度溶解于水/溶剂中。向无菌盘(6mm)中载入10μl测试样品(具有各种浓度的化合物)，并置于含有细菌培养物的板上。对于痤疮丙酸杆菌而言，将板在37℃厌氧条件下温育48小时；对于金黄色葡萄球菌而言，将板在37℃厌氧条件下温育24小时；随后进行它们的ZOI测量。
结果：不同测试样品的ZOI(以cm为单位测量)如下所示：痤疮丙酸杆菌1951(敏感，表8)；痤疮丙酸杆菌9010(抗性，表9)以及金黄色葡萄球菌(敏感，表10)。化合物91的制剂针对两种细菌菌株均示出了细菌杀灭曲线，表明化合物91在存在于制剂中的其它赋形剂的存在下仍保留其活性。有趣的是，如在DNA促旋酶测定(图2A和图3A)以及图1C和图1D中可见的剂量响应曲线所支持的，ZOI数据显示，在低药物浓度(1μg-2μg)下，相比于敏感痤疮丙酸杆菌，对抗性痤疮丙酸杆菌具有更快的细菌杀灭作用。化合物91在金黄色葡萄球菌菌株的情况下也有效，ZOI结果支持了如表6中所示的MIC值。
结论：化合物91的制剂具有抗某些革兰氏阳性细菌菌株的活性。在克林霉素敏感和克林霉素无响应痤疮丙酸杆菌的情况下，该制剂保持了化合物91的活性，并且在克林霉素无响应痤疮丙酸杆菌中更为有效，支持了药物特异性生物活性的事实。
表8-10：与克林霉素敏感的痤疮丙酸杆菌1951(A)、克林霉素无响应的痤疮丙酸杆菌9010(B)以及实验室金黄色葡萄球菌菌株(B)相比，化合物91的局部用凝胶制剂的抑制区(ZOI)
表8
Figure BDA0001122120050001161
表9
Figure BDA0001122120050001162
表10
Figure BDA0001122120050001163
实施例15：在由痤疮丙酸杆菌刺激的THP-1细胞中化合物91的抗炎潜力的测定
本文中，我们选择化合物91进行抗炎测定，因为它表现出更低的MIC和有效的促旋酶结合作用以及更快的细菌杀灭曲线。在由痤疮丙酸杆菌(ATCC 6919)刺激的THP-1细胞中，对化合物91的抗炎活性进行了研究。
方法：炎症刺激物的制备：在PBS中制备痤疮丙酸杆菌培养物悬浮液，并通过使用比浊器对细胞密度进行测量，将悬浮液中的细胞数调整为约5×108CFU/ml。然后，将细菌悬浮液在80℃下热灭活30min，并储存于-80℃直至进一步使用。
研究THP-1细胞中炎症反应的ELISA：将细胞接种以96孔模式(每孔2×105个THP-1细胞)接种在含有10％FBS的培养基中。使用3McFarland当量的热灭活痤疮丙酸杆菌对细胞进行刺激，以诱导炎性细胞因子。用PBS对在对照孔中的细胞进行处理。用痤疮丙酸杆菌诱导一小时后，将测试试剂以待测试的适当浓度(化合物91为25μg/ml)加入至诱导细胞中。将板在37℃下温育24小时。24小时之后，将板离心以沉淀细胞并收集上清液。使用R&D系统试剂盒，按照制造商的说明书通过ELISA对由此获得的细胞培养物上清液中的各个细胞因子(IL-1α、IL-1β、IL-6和IL-8)的细胞因子水平进行分析。
结果：在痤疮丙酸杆菌诱导的THP-1细胞中，化合物91通过减少IL-6而发挥抗炎作用：使用25μg/ml的化合物91对热灭活痤疮丙酸杆菌诱导的THP-1细胞进行处理，随后在在培养物上清液中对IL-1α、IL-1β、IL-6和IL-8的水平进行分析。在测试浓度下，化合物91使得痤疮丙酸杆菌诱导的IL-6水平的显著减少(近60％)(图4A和表11)。将已知的抗炎剂地塞米松用作阳性对照，其示出了IL-6水平降低近100％。当用25μg/ml化合物91进行处理时(数据未示出)，THP-1细胞示出了90％的活力。化合物91对痤疮丙酸杆菌诱导的THP-1细胞中的IL-8水平不起作用(图4B)。图5A和图5B示出的结果显示，化合物91对痤疮丙酸杆菌诱导的IL-1α和IL-1β水平影响不大(如表11所示，降低约20％-25％)。这些结果表明，化合物91在特定针对于痤疮丙酸杆菌诱导的炎症的情形中为有效的抗炎剂。
结论：由THP-1细胞中DNA促旋酶活性测定(无细胞体系)和抗炎测定所获得的结果表明，化合物91具有双重作用模式。除了诱导来自氮杂环部分的DNA损伤之外，还通过靶向细菌DNA促旋酶介导了抗细菌作用机制之一，同时其抗炎性质由其对哺乳动物细胞中炎性介体的作用而显现。在痤疮的情况下，这种双重作用模式可在病灶部位有助于减少细菌种群以及消炎，从而提供更快的愈合和更好的患者顺应性。
表11：认为痤疮丙酸杆菌诱导的细胞中细胞因子的形成为100％的条件下，化合物91降低由痤疮丙酸杆菌诱导的不同细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-6和IL-8在THP-1细胞中的释放的百分比
细胞因子 地塞米松(25μg/ml) 化合物91(25μg/ml)
1L-1α 64.73％ 20.49％
1L-1β 53.83％ 27.51％
1L-6 99.54％ 56.76％
1L-8 58.78％ 14.65％
实施例16：有效DART分子91的局部用制剂
制备有效DART化合物91的霜剂和凝胶制剂，其中活性物的浓度通常的范围为约0.5wt％至约3wt％或者为0.5wt％至2wt％、或最优选1.0wt％至1.5wt％。将制剂保持在通常pH值范围pH 4.0-8.0、或优选pH 4.0-6.5、或最优选pH 5.0-6.0条件下。活性物的浓度足以降低、治疗或预防靶标组织处由痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌或其它相关厌氧革兰氏阳性菌引起的皮肤感染和炎症。
基于化合物91在不同溶剂(例如二甲基异山梨醇、二乙二醇单乙醚、PEG 400、丙二醇、苯甲醇和pH 4.0的乙酸盐缓冲液)中完全或部分溶解的溶解度曲线，采用三种不同的制剂策略以获得改善的药物动力学/药效学曲线、高的皮肤穿透性能和更好的药物沉积特性。这些应导致更快地减少细菌数量以及更快降低宿主免疫应答(例如炎症)。此类起效快的有效制剂将最终允许减少剂量和治疗持续时间，从而确保更好的患者依从性。这些制剂将不限于对由痤疮丙酸杆菌(敏感和抗性菌株)引起的感染进行治疗，还对由革兰氏阳性厌氧细菌的不同族(例如葡萄球菌属、链球菌属和其它菌属(敏感和抗性菌株))引起的红斑痤疮或特应性皮炎或脓疱病、或皮肤和皮肤结构感染或其它皮肤细菌感染进行治疗。更重要的是，该制剂应很好地抵抗抗性细菌，并防止抗性的任何进一步发展。
组合物实施例1：使用羟乙基纤维素(HEC)作为胶凝剂，pH为5.0-5.5的处于凝胶制剂形式的部分悬浮API(化合物91)的局部用制剂(表12)
表12
Figure BDA0001122120050001191
制备方法：
1.在搅拌速度维持在100-150rpm的条件下，将羟乙基纤维素分批加入至测量过体积的水中，使该混合物在80-100rpm下溶胀1小时(B相)；
2.在另外一个容器中，将聚乙二醇400、丙二醇和二乙二醇单乙醚混合在一起，并在400rpm下将化合物91分批加入至混合物中，持续约40-45分钟以得到均一的分散体(A相)；
3.将药物分散体(A相)缓慢地转移至B相中，并使其在约50-100rpm下搅拌约30分钟，形成均匀的混合物；
4.最后，将苯甲醇加入至最终的混合物中，并在50-100rpm下再混合30分钟，得到白色至浅黄色的凝胶制剂；
5.使用柠檬酸溶液使凝胶最终的pH保持在5.0至5.5。
组合物实施例2：使用卡波普980作为胶凝剂，pH为5.0-5.5的处于凝胶制剂形式的部分悬浮API(化合物91)的局部用制剂(表13)
表13
Figure BDA0001122120050001201
制备方法：
1.在100-150rpm的搅拌下，将胶凝剂卡波普980分批加入至测量过体积的水中；
2.通过加入三乙醇胺溶液将凝胶混合物的pH调节至5.5，使卡波普980在水中溶胀(B相)；
3.在另外一个容器中，将聚乙二醇、丙二醇和二乙二醇单乙醚混合在一起，并在400rpm的搅拌下将化合物91分批加入至混合物中，持续约40-45分钟以得到均一的分散体(A相)；
4.将该药物分散体(A相)缓慢地转移至B相中，并使其在约50-100rpm下搅拌约30分钟；
5.最后，将苯甲醇加入至最终的混合物中，并在50-100rpm下再搅拌30分钟，得到白色至浅黄色的凝胶制剂；
6.制备凝胶之后，对pH进行测量，并且使最终的pH保持在5.0至5.5。
组合物实施例3：使用没食子酸丙酯作为抗氧化剂、EDTA作为缓冲剂/螯合剂，pH为5.0-5.5的处于凝胶制剂形式的部分悬浮API(化合物91)的局部用制剂(表14)
表14
Figure BDA0001122120050001211
制备方法：
1.在搅拌速度维持在100-150rpm的条件下，将羟乙基纤维素分批加入至测量过体积的水中，使其在80-100rpm下溶胀1小时(B相)；
2.在另外一个容器中，将聚乙二醇400、丙二醇和二乙二醇单乙醚混合在一起，并在400rpm下将化合物91分批加入至混合物中，持续约40-45分钟以得到均一的分散体(A相)；
3.将药物分散体(A相)缓慢地加入至B相中，并使其在约50-100rpm下搅拌约30分钟；
4.最后，将无水乙二胺四乙酸、苯甲醇和没食子酸丙酯加入至最终的混合物中，并在50-100rpm下搅拌30分钟，得到白色至浅黄色的凝胶制剂；
5.使用柠檬酸溶液使所制备的凝胶最终的pH保持在5.0至5.5。
组合物实施例4：使用羟乙基纤维素(HEC)作为胶凝剂，pH为5.0-5.5的处于凝胶制剂形式的完全悬浮API(化合物91)的局部用制剂(表15)
表15
Figure BDA0001122120050001221
制备方法：
1.在搅拌速度维持在100-150rpm的条件下，将羟乙基纤维素分批加入至测量过体积的水中；使混合物在80-100rpm下溶胀1小时(B相)；
2.在另外一个容器中，配制甘油水溶液，并在400rpm下将化合物91加入至混合物中，得到均一的分散体(A相)；
3.将药物分散体(A相)缓慢地加入至B相中，并使其在约50-100rpm下搅拌约30分钟，得到均匀的混合物；
4.最后，将对羟基苯甲酸丙酯加入至最终的混合物中，并在50-100rpm下再混合30分钟，得到白色至浅黄色的凝胶制剂；
5.使用柠檬酸溶液将凝胶最终的pH保持在5.0至5.5。
组合物实施例5：pH为5.0-5.5的处于霜剂制剂形式的部分悬浮API(化合物91)的局部用制剂(表16)
表16
Figure BDA0001122120050001222
制备方法：
1.在搅拌速度维持在500rpm的条件下，将羟乙基纤维素分批加入至测量过体积的水中，并在50℃-55℃下加热(B相)；
2.在另外一个容器中，将PEG-2硬脂基醚、PEG-20硬脂基醚和鲸蜡硬脂醇在50℃-55℃下加热，在400rpm搅拌下将环戊硅氧烷和异山梨醇二甲醚加入至混合物中，在400rpm搅拌下将化合物91分批加入至最终的混合物中，持续约5-10min，在50℃下得到均一的分散体(A相)；
3.将药物分散体(A相)缓慢地加入至B相中，并使其在约300-400rpm下搅拌约20-30分钟，直至温度达到40℃；
4.最后，将乙二胺四乙酸二水合物和苯甲醇加入至最终的混合物中，并在400rpm下再混合约30分钟，得到白色至浅黄色的霜剂制剂；
5.使用柠檬酸溶液使霜剂制剂最终的pH保持在5.0至5.5。
组合物实施例6：pH为5.0-5.5的处于霜剂制剂形式的部分悬浮API(化合物91)的局部用制剂(表17)
表17
Figure BDA0001122120050001231
制备方法：
1.在100-150rpm搅拌下，将胶凝剂卡波普980分批加入至测量过体积的水中；
2.使用三乙醇胺溶液将凝胶混合物的pH调节至5.5，使得卡波普980在水中溶胀，并在50℃-55℃下加热(B相)；
3.在另外一个容器中，在将搅拌速度维持在400-500rpm条件下，加入PEG-20脱水山梨醇单月桂酸酯、脱水山梨醇单月桂酸酯、鲸蜡硬脂醇、环戊硅氧烷和异山梨醇二甲醚，并在50℃-55℃下加热，在400rpm搅拌下将化合物91分批加入至该最终的混合物中，持续约5-10min，在50℃下得到均一的分散体(A相)；
4.在50℃-55℃、将搅拌速度维持在400rpm条件下，将药物分散体(A相)缓慢地转移至B相中，并在20-30分钟内冷却至40℃；
5.最后，将苯甲醇加入至最终的混合物中，并使其冷却至室温，最终得到白色至浅黄色的霜剂制剂。
实施例17：通过使用微发酵液稀释法对不同化合物和它们的制剂针对痤疮丙酸杆菌菌株的最小抑制浓度(MIC)的测定
材料：脑心浸液发酵液、痤疮丙酸杆菌菌株(MTCC和CCARM)、96孔板、高压灭菌器、温育器、厌氧箱厌氧气体包、读板仪(600nm)、Alamar蓝。
方法：在37℃厌氧条件下，将痤疮丙酸杆菌(MTCC 3297、MTCC 1951和CCARM 9010)在脑心浸液(BHI)发酵液中培养48-72小时。用合适的溶剂对测试化合物/制剂进行初步稀释，并进一步用BHI发酵液稀释，以获得所需的浓度。将不同浓度的样品(100μl)(通过连续稀释制备)加入至96孔板中。将100μl痤疮丙酸杆菌的BHI发酵液培养物加入至孔中(将培养物浊度调节为0.5McFarland标准(约1.5×108)，并用无菌BHI发酵液进一步稀释100倍)。此外，分别使用100μl的痤疮丙酸杆菌BHI发酵液培养物和纯BHI发酵液建立生长对照和无菌对照。
将板在37℃厌氧条件下温育48-72小时。在Bio-Rad板读数器下读取板在595nm的光密度，以生成剂量响应曲线。通过加入Alamar蓝染料对测试化合物的MIC进行记录。
实施例18-22和表18-23对包含单独的API(例如，贝西沙星)、或与阿达帕林组合的API的一些示例性新型制剂进行了描述。
实施例18：微粉化贝西沙星颗粒分散体(D1)
制备：将贝西沙星分散在表面活性剂溶液(泊洛沙姆407的2％的水溶液)中。将所得悬浮液在约800bar下通过高压均质机。将输出的分散体收集在烧杯中，并循环10次，得到适当尺寸颗粒(颗粒尺寸范围为2μm至8μm)的分散体。通过MasterSizer(MalvernInstruments)对尺寸分布进行测定，平均颗粒尺寸为4.1μm[Dv(10)-0.8μm，Dv(90)-8.9μm]。
实施例19：载有单独的贝西沙星以及其与阿达帕林组合的凝胶/霜剂制剂的制备
根据表18所示的组成，配制含有贝西沙星的凝胶和/霜剂制剂。这些凝胶制剂的外观为灰白色至浅黄色，pH值为5-5.5、粘度约5000mPa.s。制剂以三种不同的形式包含相当于1％(w/w)的贝西沙星：(1)微粉化悬浮的盐酸贝西沙星(表18，GL1、GL2)；(2)完全增溶的盐酸贝西沙星(表18，GL4)以及(3)悬浮在霜剂中未经尺寸调整的贝西沙星颗粒(CM1)。除了单独的贝西沙星制剂以外，将贝西沙星与阿达帕林(0.1％)组合(表18，GL1)，为痤疮患者提供抗痤疮和角质层分离活性。
表18：组合物GL1、GL2、GL3、GL4和CM1的凝胶和/霜剂制剂
Figure BDA0001122120050001261
制备方法：
(1)将尿囊素加热至50℃完全溶解，冷却至室温；
(2)将卡波普加入至上述混合物中，并使其溶胀1-2小时；
(3)将微粉化的贝西沙星和阿达帕林粉末的分散体加入至溶胀卡波普混合物中，并使其在400rpm下搅拌30分钟；
(4)然后，加入甘油、丙二醇、PEG 400、泊洛沙姆407，随后加入溶解在水中的EDTA二钠，然后将苯氧乙醇加入至上述搅拌的混合物中，加入所有成分后，使混合物搅拌30分钟；
(5)用三乙醇胺中和上述混合物，并使其以800rpm搅拌2-3小时。实施例20：载有盐酸贝西沙星的霜剂制剂(CM1)的制备
根据表18所示的组成，配制含有悬浮的贝西沙星颗粒的霜剂制剂。该凝胶制剂的外观为灰白色至浅黄色，pH值为5-5.5、粘度为3060mPa.s。
步骤：
1.A部分：将贝西沙星分散在主容器的甘油和去离子水中，并加热至70℃；
2.B部分：在另外一个容器中将鲸蜡醇、轻质液体石蜡、环戊硅氧烷、硬脂醇聚醚2和硬脂醇聚醚21加热至70℃；
3.在70℃连续混合下，将A部分加入B部分，并使其混合15分钟，在混合下将该批料冷却至45℃；
4.C部分：将卡波普单独在水中溶胀2小时；
5.将C部分加入至A/B部分，并混匀20min。
实施例21：内部贝西沙星凝胶(1％)及其与阿达帕林的组合(0.1％)的最小抑制浓度
方法：通过针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951(对克林霉素敏感的菌株)的微发酵液稀释法对测试凝胶(表18，GL1和GL2)的最小抑制浓度进行测定。按照生产商的指示制备BHI发酵液和BHI琼脂培养基，并在121℃下高压灭菌15分钟。在37℃厌氧条件下，使痤疮丙酸杆菌培养物生长在脑心浸液琼脂(BHIA)中，持续48小时。对于MIC测定试验，将凝胶溶解于溶剂中，并进一步用BHI发酵液稀释。然后，用100μL含有不同浓度的药物的BHI发酵液填充96孔板，以获得0.06μg/ml、0.13μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml和2μg/ml不同道(第1道至第6道)的最终浓度。将96孔板的剩余道用作生长对照和无菌对照。最后，将痤疮丙酸杆菌培养物悬浮液(约1.5×106)加入除了无菌对照孔以外的所有孔中，并将板在37℃厌氧条件下温育48-72h。在72小时结束时，将Alamar蓝溶液(20μL)加入至孔中，并在37℃下温育2小时。对板在细菌抑制方面进行可视化，并确定测试样品的MIC值。对单独含有贝西沙星的凝胶制剂、与阿达帕林组合的贝西沙星的凝胶制剂、以及它们的安慰剂进行分析，用于MIC测定，并将结果示于图6中。
结果：最小抑制浓度(MIC)测定表明，在两种制剂(GL1和GL2)中贝西沙星的MIC值被认为是近似在0.13μg/ml至0.25μg/ml的范围内(图6)。
实施例22：仅含有贝西沙星的凝胶、及其含有阿达帕林的组合凝胶对痤疮丙酸杆菌的剂量响应曲线(使用抑制区)
采用琼脂扩散法进行抑制区(ZOI)测定。采用ZOI来评估仅由贝西沙星组成的制剂以及其与阿达帕林的组合组成的制剂(表1，GL1和GL2)抑制所研究微生物的生长的效力。在不同API浓度下测定的ZOI值可以用于推导剂量-响应曲线(DRC)，用于不同制剂的效力比较。
方法：将痤疮丙酸杆菌在适当条件下培养在脑心浸液(BHI)发酵液中(37℃，48小时)，以获得所期望的CFU计数，待用于对板进行接种。将100μl 0.5McFarland当量的细菌悬浮液铺展在TSA板中。向无菌盘(6mm)装入不同浓度的凝胶制剂(等价于0.12μg/ml、0.25μg/ml、0.5μg/ml和1μg/ml不同贝西沙星浓度)和/或对照(每个100μL)，然后，将盘放置在铺展的板的上方。此后，将处理过的板在37℃下温育24小时。24小时后读取读数，使用抑制区研究对两种不同API的结合对抗痤疮活性的作用进行测量。
结果：ZOI测定结果表明，从它们的抑制区明显看出两种制剂具有相似的抗痤疮活性。存在于凝胶制剂中的阿达帕林不影响存在于制剂中的贝西沙星的抗痤疮活性(图7)。
实施例23：含有单独的贝西沙星的凝、及其含有阿达帕林的组合凝胶针对痤疮丙酸杆菌的时间杀菌动力学评价
已经通过使用贝西沙星凝胶(表18，GL2)和其与阿达帕林组合凝胶(表18，GL1)的抗痤疮剂的体外时间-杀菌动力学，对两者的活性比较进行了证明。采用时间杀菌测定法来评估单独或组合的抗生素药剂的效力。
方法：将痤疮丙酸杆菌以1.3×108个细胞/ml的接种浓度悬浮在脑心浸液发酵液(BHI发酵液)中。从新鲜的生长(3-7日龄)板中提取细胞，并将细胞悬浮液旋涡振荡以尽可能去除细胞团块。然后，向培养基补充具有适当浓度的凝胶制剂(等价于1μg/ml和10μg/ml的API)的反应混合物。在37℃厌氧条件下，将培养物在试管旋转器中温育2小时、8小时和24小时。在每个时间点，用培养基连续稀释小份(50μL)痤疮丙酸杆菌培养物，并将其置于脑心浸液琼脂板上。在37℃下，将该板在CO2温育箱中温育3天。对有活力的菌落进行计数并转换为CFU/ml。使用单独的西沙星凝胶及其与阿达帕林浓度组合的时间杀菌研究的结果绘制于图8中。
结果：时间杀菌测定结果表明，两种制剂均具有类似的抗痤疮丙酸杆菌杀菌动力学。在凝胶制剂中阿达帕林的存在并未影响存在于制剂中的贝西沙星的杀菌活性。两种制剂在两种不同浓度(1μg/ml和10μg/ml)具有浓度依赖型杀菌动力学(图8)。安慰剂凝胶中尚未观察到痤疮丙酸杆菌的杀菌作用，这表明安慰剂凝胶不具有任何抗细菌活性。
实施例24：含有贝西沙星的凝胶对克林霉素抗性痤疮丙酸杆菌的体内时间杀菌动力学
在使用贝西沙星凝胶和安慰剂凝胶的抗痤疮剂的体内时间-杀菌测定中，已经在小鼠模型中进行了活性比较。采用该测定法来测定含有抗微生物药剂的制剂杀灭感染活动物的病原体的效力。
方法：使克林霉素抗性痤疮丙酸杆菌细胞生长在脑心浸液发酵液(BHI发酵液)中，直至细胞达到生长的对数期晚期(late log phase)。将细胞洗涤两次并以最终接种浓度2×107细胞/ml再悬浮在BHI发酵液中。将细胞悬浮液涡旋，通过30G针尽可能去除细胞团块。借助于Hamilton注射器(真皮内注射)，将10μl痤疮丙酸杆菌培养物注射至麻醉的8-10周龄小鼠的右耳(背面)。30分钟后，将约15mg的1％贝西沙星或安慰剂凝胶制剂施用于小鼠右耳(背面)并借助于抹刀(spatula)适当涂抹。24小时后，将小鼠处死并取下耳朵(0小时，已经在注射痤疮丙酸杆菌的同一天取得对照小鼠的耳朵)，并置于微离心管中。将1ml BHI发酵液加入每个试管中，然后采用机械均质机对耳朵进行均化。将50μl来自各管的耳朵匀浆置于连续稀释后的BHA板(含有0.5μg/ml两性霉素-B)上。用培养基连续稀释小份(50μL)痤疮丙酸杆菌培养物，并将其置于脑心浸液琼脂板上。在37℃下，将该板在CO2温育箱中温育3天。对有活力的菌落进行计数并转换为CFU/ml。使用贝西沙星凝胶及安慰剂凝胶的体内时间杀菌研究的结果绘制于图9中。
结果：体内时间杀菌测定结果表明，贝西沙星凝胶制剂在第一个24小时内具有能够清除几乎1.5log CFU(约95％)的克林霉素抗性痤疮丙酸杆菌接种物的能力。甚至在安慰剂处理的小鼠中观察到一些名义上的(nominal)灭菌作用，这可能在很大程度上归因于宿主的免疫能力。它进一步证明了我们的主张：不仅在体外，而且在动物感染模型中，我们的局部制剂均是非常有效的，并且能够以足够的量穿透感染部位并清除克林霉素抗性感染。
实施例25：单独载有盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星的喷雾制剂以及其与阿达帕林的组合喷雾制剂的制备
根据表19所示的组成，配制含有盐酸贝西沙星、克林沙星、西他沙星的喷雾制剂、以及其与阿达帕林和水杨酸的组合喷雾制剂。这些制剂的pH为4.7-5.5。在不同的制剂中，制剂包含等价于1％(w/w)的活性物(盐酸贝西沙星、克林沙星和西他沙星)(表19，S5、S3和S2)。除了独立的(stand alone)制剂以外，抗微生物药剂还与角质层分离剂(例如阿达帕林(0.1％))组合，以同时为痤疮患者提供抗痤疮和角质层分离活性(表19，S1、S4和S6)。
制备方法：
(1)将水加入至主混合容器中，随后加入氢氧化钠溶液、PEG 1450、甲基葡糖醇聚醚-20和甘油，以便于混合；
(2)在单独的容器中，将盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星加入异丙醇、丙二醇、二乙二醇单乙醚和乙醇混合物中，并混合；将该容器的所有内容物加入至主容器中并混合；
(3)将阿达帕林溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮中，加入至主混合容器并混合；
(4)加入水杨酸、苯氧乙醇和氢氧化钠以将pH调节至5.0；
(5)将香料加入至搅拌混合物中，连续搅拌直至均匀混合。
Figure BDA0001122120050001311
实施例26：单独载有盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星的洁面制剂、以及其与阿达帕林的组合洁面制剂的制备
根据表20所示的组成，配制含有贝西沙星、克林沙星、西他沙星的洁面制剂、以及其与阿达帕林或水杨酸的组合洁面制剂。这些洁面制剂的pH为4.7-6，并且粘度为约1500-5000mPa.s。在不同的制剂中，制剂包含等价于1％(w/w)的活性物(盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星)(表20，FW5、FW3和FW2)。除了独立的制剂以外，抗微生物药剂还与角质层分离剂(例如阿达帕林(0.1％))组合，以同时为痤疮患者提供抗痤疮和角质层分离活性(表20，FW1、FW4和FW6)。
制备方法：
(1)在主混合容器中加入水；然后在低速(70-80rpm)混合下缓慢加入卡波普aquaSF-1；
(2)在相同的容器中，在搅拌的同时，加入C14-C16烯烃磺酸钠(40％)和十二烷基醚硫酸钠(28.6％)；
(3)用氢氧化钠中和混合物，将pH调节至6.5-7.0，稍微提高混合速度以确保均匀混合；
(5)然后，在连续搅拌下将椰油酰胺丙基甜菜碱加入至上述混合物中，随后缓慢加入EDTA二钠和甘油；
(6)将盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星以及阿达帕林加入至上述搅拌主容器中；
(7)将阿达帕林溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮中，加入至主混合容器并混合；
(8)然后，将水杨酸、丙二醇和PEG-7甘油椰油酸酯加入至连续搅拌的主容器中；
(8)最后，通过加入柠檬酸将pH值调节至5.5。
Figure BDA0001122120050001321
实施例27：单独载有盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星的皂条以及其与阿达帕林的组合皂条的制备
根据表21所示的组成，配制含有贝西沙星、克林沙星或西他沙星的皂条。该皂条包含等价于1％(w/w)的盐酸贝西沙星(表21，SB5)、等价于1％(w/w)的克林沙星(表21，SB3)、等价于1％(w/w)的西他沙星(表21，SB2)。除了仅包含贝西沙星的制剂以外，贝西沙星与阿达帕林(0.1％)(表21，SB1)和水杨酸(表21，SB6)组合，以同时为痤疮患者提供抗痤疮和角质层分离活性。类似地，另一种制剂含有克林沙星与阿达帕林的组合。
制备方法：
(1)将棕榈酸钠与其余成分在混合器中混合；
(2)使物块通过滚碎机(roller mill)和压条机，随后在35℃-40℃的温度下驻留(billeting)并压模。
Figure BDA0001122120050001331
实施例28：单独含有盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星的沐浴露以及其与阿达帕林的组合沐浴露的制备
制备方法：根据表22所示的组成，配制含有贝西沙星、克林沙星或西他沙星以及阿达帕林或水杨酸的沐浴露。该沐浴露制剂包含等价于1％(w/w)的贝西沙星(表22，BW5)、等价于1％(w/w)的西他沙星(表22，BW2)、等价于1％(w/w)的克林沙星(表22，BW3)。除了仅包含贝西沙星的制剂以外，贝西沙星与阿达帕林(0.1％)和水杨酸(2％)组合(表22，BW1、BW6)，以同时为痤疮患者提供抗痤疮和角质层分离活性。类似地，另一种制剂含有克林沙星与阿达帕林的组合(表22，BW4)。
表22：组合物BW1、BW2、BW3、BW4、BW5和BW6的沐浴露
Figure BDA0001122120050001341
制备方法：
(1)在主混合容器中，将EDTA二钠溶解在水中；
(2)将卡波普aqua SF-1加入至主容器中；
(3)然后将其搅拌10分钟，随后加入十二烷基硫酸铵；
(4)然后，在连续搅拌下将丙二醇、盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星加入至上述混合物中；
(5)将阿达帕林溶解在N-甲基2-吡咯烷酮中，加入至主混合容器，并随后将其混合；
(6)在搅拌的同时将其余成分加入至上述混合物中；
(7)最后，用三乙醇胺进行中和，将pH调节至5.5-6.0。
实施例29：单独载有盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星的洗剂制剂以及其与阿达帕林的组合洗剂制剂的制备
根据表23所示的组成，配制含有贝西沙星的洗剂制剂。这些洗剂的pH为4.7-5.5，粘度为约2500-6000mPa.s。洗剂包含等价于1％(w/w)的贝西沙星(表23，L5)、等价于1％(w/w)的西他沙星(表23，L2)和等价于1％(w/w)的克林沙星(表23，L3)。除了仅包含贝西沙星的制剂以外，贝西沙星与阿达帕林(0.1％)(表23，L1)和水杨酸(表23，L6)组合，以同时为痤疮患者提供抗痤疮和角质层分离活性。类似地，另一种制剂含有克林沙星与阿达帕林的组合(表23，L4)。
Figure BDA0001122120050001351
制备方法：
(1)在主混合容器中，将EDTA二钠溶解在水中；当它充分溶解时，将混合速度设定为100rpm；
(2)然后，将卡波普aqua SF-1缓慢地分散在水中，继续搅拌直至完全混合；
(3)将该混合物加热至70℃；
(4)在另一个烧杯中加入熔融凡士林、环甲硅油、聚山梨醇酯60、脱水山梨醇硬脂酸酯、鲸蜡醇，并把它加入上述混合物中；搅拌速度保持在200rpm；
(5)在200rpm的恒定搅拌下，使混合物在35℃-40℃下冷却；
(6)达到35℃-40℃后，将生育酚醋酸酯加入至上述混合物中；
(7)将盐酸贝西沙星、克林沙星或西他沙星通过分散在水中加入至上述混合物；
(8)将阿达帕林溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮中，加入至主混合容器，并随后以250rpm将其混合；
(9)将水杨酸溶解在乙醇、丙二醇和甘油中，并将其加入至主混合容器中；
(10)在250rpm恒定搅拌下，将苯氧乙醇加入至上述混合物；
(11)用氢氧化钠中和整个混合物并混合30分钟。
实施例28和表24对包含增溶的API(例如盐酸贝西沙星)的一些示例性制剂进行了描述。
实施例30：用于盐酸贝西沙星增溶的方法
已知表面活性剂通过降低界面张力而使疏水性物质增溶。除了表面活性剂以外，助溶剂或助表面活性剂还通过提高润湿性质或降低疏水性分子的界面张力来帮助水难溶性化合物增溶。在本专利中，已在运载溶媒中使用表面活性剂(例如十二烷基硫酸钠、吐温80、吐温20和司盘80)以及助溶剂/助表面活性剂使贝西沙星增溶。十二烷基硫酸钠的存在极大地提高了盐酸贝西沙星的水溶解度，并用于局部制剂(表24，SC1、SC2和SC5)的制备。助溶剂(例如丙二醇单辛酸酯和二乙二醇单乙醚)已用于霜剂制剂(表24，SC3和SC4)的制备。
Figure BDA0001122120050001371
实施例31和32、表25和26对包含悬浮的API的一些示例性制剂进行了描述。
实施例31：药物的溶解-再沉淀作用最小的悬浮载药凝胶制剂的制备
经由常规方法的载药(悬浮形式)凝胶的制备通常会导致药物暴露于宽的pH条件下，这在某些情况下可能导致药物溶解，然后再沉淀。在大多数情况下，溶解-再沉淀现象导致原始颗粒尺寸、杂质分布或晶体结构等的改变。作为实例，盐酸贝西沙星(其显示pH依赖性溶解度)展现了该溶解-再沉淀现象，其中，4.5以下的pH使药物以显著和可变的程度溶解。然后，随pH值的升高(制剂制备过程中)，溶解的贝西沙星发生再沉淀，这可能导致在一个或多个不期望的变化。
为了规避这个问题，已采用改进后的方法来制备不同的悬浮载药制剂。下面的表25和制备方法对具有可忽略的或最小的药物增溶再沉淀作用的凝胶组成和制备进行了详细描述。这些凝胶制剂的外观为灰白色，pH值为约5.0-6.0，由粘度计(RheolabQC，C-LTD80/QC，Anton Paar)测量的粘度为约3000mPa.s至约5500mPa.s。该制剂用于对抗敏感和抗性痤疮病症。
表25：组合物GL5、GL6和GL7的盐酸贝西沙星悬浮凝胶制剂
Figure BDA0001122120050001381
A相：纯化水、无水乙二胺四乙酸二钠、尿囊素、C型卡波姆均聚物
B相：纯化水、透明质酸钠
C相：苯氧乙醇、氢氧化钠溶液
D相：甘油、盐酸贝西沙星(等价于贝西沙星)、纯化水、氢氧化钠溶液
E相：聚乙二醇400、二乙二醇单乙醚
F相：氢氧化钠溶液
制备方法：
1)在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠和尿囊素溶解在水中；然后加入C型卡波姆均聚物和透明质酸钠，并使其在200rpm下溶胀60分钟；然后，将苯氧乙醇加入至卡波姆混合物，然后，用氢氧化钠溶液将混合物的pH升至6.0；
2)在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星在300rpm连续混合下分散10分钟；
3)将氢氧化钠的稀溶液逐滴加入至该单独的容器中以将pH调节至5.5；
4)将上述混合物中的内容物加入至主混合容器中，以200rpm搅拌2小时；
5)最后，将聚乙二醇和二乙二醇单乙醚加入至主混合容器中，并另外混合20分钟；
6)获得白色至浅黄色凝胶。
实施例32：避免药物再沉淀的悬浮载药霜剂制剂的制备
类似地，根据表25所示的组成，以最少的溶解-再沉淀作用制备含有悬浮贝西沙星的霜剂制剂。这些霜剂制剂的外观为灰白色，pH值约5.0-6.0，粘度为约3000mPa.s至约4000mPa.s(由粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量)。然后对制剂进行针对痤疮敏感和抗性菌株的测试。
表26：组合物CM2、CM3和CM4的盐酸贝西沙星悬浮霜剂制剂
Figure BDA0001122120050001391
A相：环甲硅油、司盘80、鲸蜡醇、硬脂醇、轻质液体石蜡、硬脂醇聚醚2、硬脂醇聚醚21
B相：甘油、盐酸贝西沙星(等价于贝西沙星)、纯化水、氢氧化钠溶液
C相：丁羟甲苯、苯氧乙醇、卡波普980(2％)
制备方法：
1.在主混合容器内，将贝西沙星分散于甘油和水中，在300rpm下连续混合10分钟；
2.将氢氧化钠的稀溶液逐滴加入至主混合容器中，以将pH调节至约5.5，加热至70℃；
3.在单独的容器中，将环甲硅油、司盘80、鲸蜡醇、硬脂醇、轻质液体石蜡、硬脂醇聚醚2和硬脂醇聚醚21一起加热至70℃；
4.在70℃、200rpm连续混合下，将加热的油相混合物加入至主混合容器中，并使其混合15分钟；
5.在混合下使主混合容器的内容物空气冷却至45℃；
6.使卡波普在水中溶胀2小时，用氢氧化钠溶液将其pH调节至约5.5-6，然后加入至主混合容器中并混合；
7.将剩余组分丁羟甲苯和苯氧乙醇加入至主混合容器中并混合20分钟；
8.如果需要的话，用氢氧化钠将霜剂的pH调节至约5.5-6.0。
实施例33：含有活性物组合(可溶性抗微生物药剂和悬浮的角质层分离剂)的制剂的制备
根据表27中所示的组成，制备含有可溶性盐酸贝西沙星和悬浮阿达帕林的组合的凝胶制剂。这些凝胶制剂的外观为浅黄色，pH值为约4.5，粘度为3000mPa.s至5000mPa.s(由粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量)。已经制备了含有等价于1-2％(w/w)的可溶性贝西沙星和等价于0.1％(w/w)的部分或完全悬浮阿达帕林的制剂，从而为受敏感和抗性痤疮影响的患者提供抗痤疮、角质层分离和抗炎作用。
表27：组合物SL1、SL2和SL3的含有盐酸贝西沙星(可溶性)和阿达帕林(悬浮)的凝胶制剂
Figure BDA0001122120050001411
A相：纯化水、尿囊素、乙二胺四乙酸二钠二水合物、羟乙基纤维素
B相：纯化水、透明质酸钠
C相：纯化水、甘油、盐酸贝西沙星(等价于贝西沙星)、阿达帕林、泊洛沙姆、聚乙二醇400、二乙二醇单乙醚、苯氧乙醇。
制备方法：
1.在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠二水合物和尿囊素溶解于水，以400rpm搅拌约10分钟；
2.在非常高的转速(约400-500rpm)下，将羟乙基纤维素(HEC)分批加入至主混合容器中；
3.在约100-150rpm的搅拌下，使HEC溶胀1小时；
4.在单独的容器中，加入透明质酸钠并使其溶胀15-30分钟，随后加入至主混合容器中；
5.在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星分散于水中，用玻璃棒混合；然后，将二乙二醇单乙醚和聚乙二醇400加入至贝西沙星分散体中并混合，将该分散体加入至主混合容器中，并使其在约100-150rpm的转速下搅拌约5分钟；
6.然后，将苯氧乙醇加入至主混合容器中，并在100-150rpm的转速下混合直至任何聚合物结块完全消失，得到透明凝胶；
7.将阿达帕林分散于泊洛沙姆的水溶液中，并加入至主混合容器，从而获得含有可溶性贝西沙星和悬浮阿达帕林的白色至浅黄色不透明凝胶。
实施例34和表28对基本上不含增稠聚合物的一些示例性制剂进行了描述。
实施例34：不使用聚合物作为粘度改性剂的悬浮载药霜剂制剂的制备
根据已公布的文献，卡波姆和氟喹诺酮之间可能存在某些物理和/或化学相互作用。为此，可能需要制备不含卡波姆或卡波姆类聚合物的制剂，以避免产品贮存期间的任何不相容问题。为了实现这个目的，已经制备了不使用卡波姆或任何其它聚合物的替代性霜剂。在表28中给出了霜剂制剂的组成和方法。
表28：组合物CM5的盐酸贝西沙星悬浮霜剂制剂
成分 组成(％w/w)
贝西沙星 1
丁羟甲苯 0.1
鲸蜡醇 2
环戊硅氧烷 5
甘油 5
矿物油 3
苯氧乙醇 0.7
聚氧乙烯2硬脂基醚 2
聚氧乙烯21硬脂基醚 2
硬脂醇 2
氢氧化钠 适量至pH>5.5
纯化水 适量至100.0
A相：鲸蜡醇、硬脂醇、矿物油、环戊硅氧烷、聚氧乙烯2硬脂基醚、聚氧乙烯21硬脂基醚
B相：甘油、贝西沙星
C相：氢氧化钠、纯化水
D相：丁羟甲苯、苯氧乙醇
相E：氢氧化钠
制备方法
1)B相：将甘油和API在主混合容器中混合在一起；
2)C相：将氢氧化钠和水混合在一起，并在主混合容器中缓慢加入至B相，将内容物加热至60℃-65℃；
3)A相：将赋形剂混合在一起并在60-65℃下加热，随后在约600rpm的转速连续顶置搅拌下加入至该主混合容器；
4)然后，使主混合容器的内容物冷却至约40℃；
5)将D相内容物加入至该混合物中，并混合15分钟；
6)最后用E相将制剂的pH调节至5.5-6.0。
实施例35和表29-32对包含不同的聚合或非聚合的粘度改性剂或胶凝剂的一些示例性制剂进行了描述。
实施例35：不同的聚合物对含有增溶的盐酸贝西沙星制剂的粘度调节用途
制备凝胶制剂的目的是使其具有可接受的粘度，同时使活性药物仍然处于可溶形式。当需要用于使药物增溶或使增溶的药物保持稳定的pH落在对于局部用产品而言约5.0至约7.0的正常范围之外时，这变得具有挑战性。例如，当pH被调节至低于5.0、例如4.0-4.5的范围时，当然在适当选择赋形剂的情况下，盐酸贝西沙星进入溶液。在该pH范围内，发现并没有许多聚合物能够为凝胶制剂提供可接受的粘度(而不影响凝胶感官参数)。
使用不同的聚合物(以及它们的不同等级)(如卡波姆、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、透明质酸钠以及其它聚合物来制备具有可接受粘度的凝胶，其中，期望活性药物处于溶解状态。
根据表25给出的组成和方法，尝试使用卡波姆制备含有可溶性盐酸贝西沙星的凝胶制剂。尽管药物可在pH 4.5下增溶，以所需量使用的卡波姆无法赋予制剂可接受的粘度。所得制剂的粘度为约1000-1800mPa.s(由粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)，Anton Paar测量)。
表29：使用卡波姆的组合物SL4制备的盐酸贝西沙星增溶的凝胶制剂
Figure BDA0001122120050001441
制备方法：
1)A相：将甘油和贝西沙星在单独的容器中混合在一起；
2)B相：在主混合容器内，将尿囊素和EDTA在200rpm搅拌下溶解在水中，然后将卡波姆缓慢洒在上面并使其溶胀45分钟；
3)将透明质酸钠洒入上述混合物中，使其溶胀15分钟，随后加入苯氧乙醇并混合；
5)在200rpm连续搅拌下，将A相转移至主混合容器中，并混合30分钟；
6)将聚乙二醇400和二乙二醇单乙醚加入至主混合容器中，并以150rpm混合15分钟。
羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素被广泛用于口服和局部用药物制剂，并且可以得到能够提供宽的粘度范围的多种不同等级。使用羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素作为粘度改性剂制备含有增溶的贝西沙星的制剂(表30)。虽然使用两种聚合物均观察到约3000mPa.s(由粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量)的可接受粘度，但感官上是不能接受的。
表30：使用羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素的组合物SL5和SL6制备的盐酸贝西沙星增溶的凝胶制剂
Figure BDA0001122120050001451
制备方法：
1)A相：将甘油和盐酸贝西沙星在单独的容器中混合在一起；
2)B相：在主混合容器中，将尿囊素和乙二胺四乙酸二钠二水合物在200rpm搅拌下溶解于水中，然后将羟丙基纤维素或羟丙基甲基纤维素缓慢撒在上面，并使其溶胀45分钟；
3)将透明质酸钠洒入上述混合物中，使其溶胀15分钟，随后加入苯氧乙醇；
5)在200rpm连续搅拌下，将A相缓慢加入主混合容器中，并混合30分钟；
6)将聚乙二醇400和二乙二醇单乙醚加入至主混合容器中，并以150rpm混合15分钟。
羟乙基纤维素是在口服和局部药物制剂中另一种广泛使用的赋形剂，并且可获得多种不同粘度等级。使用羟乙基纤维素作为粘度改性剂制备含有增溶的盐酸贝西沙星的制剂(表31)。使用这种聚合物时，在pH值约4.5条件下，制得的凝胶可以展现出良好的感官以及其它参数(如可接受的粘度和可溶性药物)。
表31：使用羟乙基纤维素的组合物SL7、SL8和SL9制备的盐酸贝西沙星增溶的凝胶制剂
Figure BDA0001122120050001461
A相：纯化水、尿囊素、乙二胺四乙酸二钠二水合物(EDTA)、羟乙基纤维素
B相：纯化水、透明质酸钠
C相：纯化水、甘油、盐酸贝西沙星、聚乙二醇400、二乙二醇单乙醚、苯氧乙醇
制备方法
1)在主混合容器中，将EDTA和尿囊素在400rpm下溶解于水中，持续10分钟；
2)然后，在非常高的速度(约400-500rpm)下将羟乙基纤维素撒入主混合容器，并使其在100-150rpm下溶胀1小时；
3)在单独的容器中，取透明质酸钠使其溶胀15-30分钟，然后加入至主混合容器；
4)在另一个容器中，将甘油和盐酸贝西沙星分散于水中，用玻璃棒混合；向该分散体中加入二乙二醇单乙醚和聚乙二醇400并混合；
5)将上述分散体加入至主混合容器中，并使其在100-150rpm下搅拌5分钟；
6)最后，将苯氧乙醇加入至主混合容器中，并在100-150rpm下混合直至聚合物结块(如果有的话)消失，得到澄清凝胶。
实施例36：制备载有不同浓度悬浮盐酸贝西沙星的凝胶制剂，以观察对含有羟乙基纤维素的制剂的粘度的影响[13]
根据表32所示的组成，使用羟乙基纤维素作为增稠剂配制含有不同浓度盐酸贝西沙星的凝胶制剂。
表32：使用羟乙基纤维素的组合物GL09、GL10、GL11、GL12和GL13的含有不同浓度悬浮盐酸贝西沙星的凝胶制剂
Figure BDA0001122120050001471
A相：纯化水、乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、尿囊素、羟乙基纤维素
B相：纯化水、透明质酸钠
C相：苯氧乙醇、氢氧化钠溶液
D相：甘油、盐酸贝西沙星(等价于贝西沙星)、纯化水、氢氧化钠溶液
E相：聚乙二醇400、二乙二醇单乙醚
F相：氢氧化钠溶液
制备方法：
1)在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠和尿囊素溶解在水中，然后将羟乙基纤维素分批加入至主混合容器中，同时使用顶置搅拌器以100rpm搅拌；使胶凝剂在100rpm下溶胀30分钟，得到适当的水合作用；
2)将水合透明质酸钠加入至主混合容器中并混合；然后将苯氧乙醇加入至该混合物中；然后用氢氧化钠溶液使混合物的pH升至6.0；
3)在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星在300rpm连续混合下分散10分钟；
4)将氢氧化钠稀溶液逐滴加入至单独的容器中以将pH调节至5.5；
5)将上述混合物中的内容物加入至主混合容器，在200rpm下搅拌2小时；
6)最后，将聚乙二醇和二乙二醇单乙醚加入至主混合容器中并另外混合20分钟；
7)获得白色至浅黄色凝胶。
结果：在基于羟乙基纤维素的凝胶中未观察到粘度下降。发现盐酸贝西沙星(等价于贝西沙星)浓度高达4％(w/w)的凝胶具有可接受的一致性和感官特性。凝胶组合物的粘度结果在表33中给出。
表33：在不同浓度的盐酸贝西沙星下凝胶组合物的粘度
Figure BDA0001122120050001481
实施例37：制备载有不同浓度悬浮盐酸贝西沙星的凝胶制剂，以观察对含有卡波姆的制剂的粘度的影响
根据表34所示的组成，配制含有不同浓度盐酸贝西沙星的凝胶制剂。用卡波姆配制这些制剂以观察盐酸贝西沙星的浓度对粘度的影响。
表34：使用卡波姆的组合物GL14、GL15、GL16和GL17的含有不同浓度悬浮盐酸贝西沙星的凝胶制剂
Figure BDA0001122120050001491
A相：纯化水、无水乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、尿囊素、C型卡波姆均聚物
B相：纯化水、透明质酸钠
C相：苯氧乙醇、氢氧化钠溶液
D相：甘油、盐酸贝西沙星(等价于贝西沙星)、纯化水、氢氧化钠溶液
E相：聚乙二醇400、二乙二醇单乙醚
F相：氢氧化钠溶液
制备方法：
1)在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠和尿囊素溶解在水中；然后加入C型卡波姆均聚物和透明质酸钠并使其在200rpm下溶胀60分钟；然后将苯氧乙醇加入至卡波姆混合物中；然后用氢氧化钠溶液将混合物的pH升高至6.0；
2)在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星在300rpm连续混合下分散10分钟；
3)将氢氧化钠稀溶液逐滴加入至单独的容器中以将pH调节至5.5；
4)将上述混合物中的内容物加入至主混合容器，在200rpm下搅拌2小时；
5)最后，将聚乙二醇和二乙二醇单乙醚加入至主混合容器中并进一步混合20分钟；
6)获得白色至浅黄色凝胶。
结果：尽管约3000mPa.s的最低粘度可被认为是可接受的，但将盐酸贝西沙星加入凝胶制剂导致其粘度以浓度依赖性的方式下降。然而，对于理想的流动性(从管中)以及施用在皮肤上(由患者进行)而言，粘度大于3000mPa.s将是不可接受的。凝胶组合物的粘度结果在表35中给出。
表35：具有不同浓度盐酸贝西沙星的凝胶组合物的粘度
Figure BDA0001122120050001501
*通过粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量
实施例38：含有悬浮那氟沙星、普卢利沙星、尤利沙星、盐酸贝西沙星的凝胶制剂以及与阿达帕林的组合凝胶制剂的制备；使用羟乙基纤维素作为增稠剂而制备
根据表36所示的组成，配制单独包含悬浮那氟沙星、普卢利沙星、尤利沙星、贝西沙星的凝胶制剂以及其与阿达帕林的组合凝胶制剂。这些制剂的pH为5.5-6，粘度为约4000-6000mPa.s。
表36：载有那氟沙星、普卢利沙星、尤利沙星的凝胶制剂以及与阿达帕林组合的凝胶制剂(组合物GA1、GA2、GA3、GA4和GA5)
Figure BDA0001122120050001511
A相：纯化水、乙二胺四乙酸二钠二水合物、尿囊素、羟乙基纤维素
B相：纯化水、透明质酸钠
C相：甘油、盐酸贝西沙星(等价于贝西沙星)、那氟沙星、普卢利沙星、尤利沙星、纯化水、氢氧化钠溶液
D相：纯化水、泊洛沙姆407、阿达帕林
E相：聚乙二醇400、二乙二醇单乙醚
F相：苯氧乙醇
G相：柠檬酸溶液、氢氧化钠溶液
制备方法：
下面提及制备凝胶的分步过程：
1)在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠和尿囊素溶解在水中，然后加入羟乙基纤维素和透明质酸钠，并使其在100rpm下溶胀60分钟；
2)然后将苯氧乙醇加入至以上混合物中；然后用氢氧化钠溶液使混合物的pH升至6.0；
3)在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星在300rpm连续搅拌下分散10分钟；
4)将氢氧化钠稀溶液中逐滴加入至单独的容器中以将pH调节至5.5；
5)将上述混合物的内容物加入至主混合容器，以200rpm搅拌2小时；
6)在单独的容器中，将阿达帕林分散于泊洛沙姆407的水溶液中；将该阿达帕林分散体转移至主混合容器；
7)最后，将聚乙二醇和二乙二醇单乙醚加入至主混合容器中并进一步混合20分钟；
8)获得白色至浅黄色凝胶。
实施例39：含有悬浮盐酸贝西沙星和阿达帕林组合的凝胶制剂的制备；使用卡波姆作为流变改性剂而制备
根据表37所示的组成，制备含有悬浮贝西沙星与阿达帕林组合的凝胶制剂。该制剂的pH为5.5-6，在25s-1的剪切速率下粘度为约4063mPa.s。
表37：组合物GL19的载有与阿达帕林组合的悬浮盐酸贝西沙星的凝胶制剂
Figure BDA0001122120050001521
A相：纯化水、乙二胺四乙酸二钠二水合物、尿囊素、C型卡波姆均聚物
B相：纯化水、透明质酸钠
C相：氢氧化钠溶液
D相：甘油、盐酸贝西沙星(等价于贝西沙星)、纯化水、氢氧化钠溶液
E相：纯化水、泊洛沙姆407、阿达帕林
F相：聚乙二醇400、二乙二醇单乙醚
g相：苯氧乙醇
H相：氢氧化钠溶液
制备方法：
1)在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠和尿囊素溶解在水中；然后加入卡波姆和透明质酸钠，并使其在100rpm下溶胀120分钟；
2)然后将苯氧乙醇加入至以上混合物，然后用氢氧化钠溶液使混合物的pH升至6.0；
3)在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星在300rpm连续混合下分散10分钟；
4)将氢氧化钠稀溶液中逐滴加入至单独的容器中以将pH调节至5.5；
5)将上述混合物的内容物加入主混合容器，在200rpm下搅拌2小时；
6)在单独的容器中，将阿达帕林分散于泊洛沙姆407的水溶液中；将该阿达帕林分散体转移至主混合容器；
7)最后，将聚乙二醇和二乙二醇单乙醚加入至主混合容器中并进一步混合20分钟；
8)获得白色至浅黄色凝胶。
实施例40：含有盐酸贝西沙星的凝胶制剂
根据表38所示的组成，使用卡波姆作为胶凝剂制备含有盐酸贝西沙星的凝胶制剂。获得具有可接受的粘度(3500-15000m.Pa.s)和pH值范围(5.5-6.0)的凝胶制剂。
表38
Figure BDA0001122120050001541
制备方法：
1)在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠、尿囊素和泊洛沙姆溶解在水中，随后使用顶置搅拌器在200rpm搅拌下加入卡波姆；使胶凝剂在200rpm下溶胀2小时；
2)将苯氧乙醇或对羟基苯甲酸酯加入至上述混合物；然后使用三乙醇胺溶液将混合物的pH升至5.5-6.0；
3)在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星在500rpm连续搅拌分散20分钟；逐滴加入三乙醇胺的稀溶液以将pH调节至5.5-6.0；
4)将上述混合物的内容物加入至主混合容器，在200rpm下搅拌2小时；
5)最后，将聚乙二醇、丙二醇和二乙二醇单乙醚加入至主混合容器，并在200rpm下进一步混合20分钟；
6)如果需要的话，使用三乙醇胺进一步将混合物的pH值调节至5.5-6.0，将混合物搅拌2小时，以获得白色至浅黄色凝胶。
实施例41：具有羟乙基纤维素和透明质酸钠作为胶凝剂的含盐酸贝西沙星的凝胶制剂
根据表39所示的组成，使用羟乙基纤维素和透明质酸钠作为胶凝剂制备含有盐酸贝西沙星的凝胶制剂。获得了具有可接受的粘度(3500-15000m.Pa.s)和pH值范围(5.5-7.0)的凝胶制剂。
表39
Figure BDA0001122120050001551
制备方法：
1)在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠溶解于水中，然后加入羟乙基纤维素(HEC)，同时使用顶置搅拌器以200rpm搅拌，使HEC在200rpm下溶胀2小时；
2)在单独的容器中，使透明质酸钠在搅拌下在水中溶胀1小时；在两种增稠剂溶胀完成之后，将溶胀的透明质酸钠加入至主混合容器；
3)将苯氧乙醇和二乙二醇单乙醚加入至上述混合物；然后使用氢氧化钠溶液将混合物的pH升至5.5-6.0；
4)在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星在500rpm连续搅拌下分散20分钟；逐滴加入氢氧化钠的稀溶液以将pH调节至5.5-6.0；
5)将上述混合物的内容物加入至主混合容器，在200rpm下搅拌2小时；
6)最后，将聚乙二醇加入至主混合容器，在200rpm搅拌速度下进一步混合20分钟；
7)如果需要的话，使用氢氧化钠溶液将混合物的pH值进一步调节至5.5-7.0，将混合物搅拌2小时，以获得白色至浅黄色凝胶。
实施例42：用卡波姆、羟乙基纤维素和透明质酸钠的不同组合作为胶凝剂的含有盐酸贝西沙星的凝胶制剂
根据表40所示的组成，使用卡波姆、羟乙基纤维素和透明质酸钠的不同组合作为胶凝剂制备含有盐酸贝西沙星的凝胶制剂。获得了具有可接受的粘度(3500-15000m.Pa.s)和pH值范围(5.5-7.0)的凝胶制剂。
表40
Figure BDA0001122120050001561
制备方法：
1)在主混合容器中，将乙二胺四乙酸二钠溶解在水中，随后加入卡波姆和/或羟乙基纤维素(HEC)，使用顶置搅拌器以200rpm搅拌；使得卡波姆和HEC在200rpm下溶胀2小时；
2)在单独的容器中，使透明质酸钠在搅拌下在水中溶胀1小时；两种增稠剂溶胀完成之后，将溶胀的透明质酸钠加入至主混合容器；
3)将苯氧乙醇和二乙二醇单乙醚加入至上述混合物；然后使用氢氧化钠溶液将混合物的pH升至5.5-6.0；
4)在单独的容器中，将甘油和盐酸贝西沙星在500rpm连续搅拌下分散20分钟；逐滴加入氢氧化钠的稀溶液以将pH调节至5.5-6.0；
5)将上述混合物的内容物加入至主混合容器，在200rpm下搅拌2小时；
6)最后，将聚乙二醇加入至主混合容器，在200rpm的搅拌速度下进一步搅拌20分钟；
7)如果需要的话，使用氢氧化钠溶液进一步将混合物的pH值调节至5.5-7.0，使混合物搅拌2小时，以获得白色至浅黄色凝胶。
实施例43：使用卡波姆制备的盐酸贝西沙星悬浮凝胶(GL15)的稳定性研究
将盐酸贝西沙星悬浮凝胶置于层压管中，并在加速条件(40℃±2℃，75％RH±5％)下进行稳定性研究。在初始时间(T0)、2周(T2w)和一个月(T1m)时对这些凝胶的物理外观、pH值、粘度、测定和含量均匀度进行了评价。
结果：结果表明，凝胶在测试持续时间内稳定。结果在下面的表41中示出。
表41：在加速稳定性条件下盐酸贝西沙星凝胶样品(GL15)的稳定性评价
Figure BDA0001122120050001571
*通过粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量
实施例44：使用羟乙基纤维素制备的盐酸贝西沙星悬浮凝胶(GL10)的稳定性研究
将盐酸贝西沙星悬浮凝胶置于层压管中，并在加速条件(40℃±2℃，75％RH±5％)下进行稳定性研究。在初始时间(T0)、2周(T2w)和一个月(T1m)时对这些凝胶的物理外观、pH值、粘度、测定和含量均匀度进行了评价。
结果：结果表明，凝胶在测试持续时间内稳定。结果在下面的表42中示出。
表42：在加速稳定性条件下盐酸贝西沙星凝胶样品(GL10)的稳定性评价
Figure BDA0001122120050001581
*通过粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量
实施例45：使用卡波姆制备的盐酸贝西沙星悬浮霜剂(CM02)的稳定性研究
将盐酸贝西沙星悬浮霜剂置于层压管中，并在加速条件(40℃±2℃，75％RH±5％)下进行稳定性研究。在初始时间(T0)和一个月(T1m)时对这些霜剂的物理外观、pH值、粘度、测定和含量均匀度进行了评价。
结果：结果表明，霜剂在测试持续时间内稳定。结果在下面的表43中示出。
表43：在加速稳定性条件下盐酸贝西沙星霜剂样品(CM02)的稳定性评价
Figure BDA0001122120050001591
*通过粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量
实施例46：不使用聚合物制备的盐酸贝西沙星悬浮霜剂(CM05)的稳定性研究
将盐酸贝西沙星悬浮霜剂置于层压管中，并在加速条件(40℃±2℃，75％RH±5％)下进行稳定性研究。在初始时间(T0)和一个月(T1m)时对这些霜剂的物理外观、pH值、粘度、测定和含量均匀度进行了评价。
结果：结果表明，霜剂在测试持续时间内稳定。结果在下面的表44中示出。
表44：在加速稳定性条件下盐酸贝西沙星霜剂样品(CM05)的稳定性评价
Figure BDA0001122120050001592
*通过粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量
实施例47：使用羟乙基纤维素制备的盐酸贝西沙星可溶凝胶(SL7)的稳定性研究
将盐酸贝西沙星悬浮霜剂置于层压管中，并在加速条件(40℃±2℃，75％RH±5％)下进行稳定性研究。在初始时间(T0)和一个月(T1m)时对这些霜剂的物理外观、pH值、粘度、测定和含量均匀度进行了评价。
结果：结果表明，凝胶在测试持续时间内稳定。结果在下面的表45中示出。
表45：在加速稳定性条件下盐酸贝西沙星可溶凝胶样品(SL07)的稳定性评价
Figure BDA0001122120050001601
*通过粘度计(RheolabQC，C-LTD 80/QC)Anton Paar测量
实施例48：通过时间杀菌试验测定贝西沙星(API)针对抗生素无响应痤疮丙酸杆菌的抗细菌效力
步骤：将痤疮丙酸杆菌(CCARM 9010)水性悬浮液(0.5McFarland标准当量)以2000rpm离心20分钟，将沉淀物再悬浮于脑心浸液(BHI)发酵液。将所得痤疮丙酸杆菌悬浮液保存过夜(16h)，在37℃下厌氧箱中温育。在二甲亚砜(DMSO)中制备盐酸贝西沙星(1mg/ml)的原液，进一步用BHI发酵液将其稀释，获得盐酸贝西沙星工作原液(25μg/ml)。通过将900μl痤疮丙酸杆菌0.5McFarland标准培养物(温育16小时后)加入至100μl盐酸贝西沙星工作原液(25μg/ml)来制备反应混合物，在反应混合物中盐酸贝西沙星的最终浓度为2.5μg/ml。将反应混合物(1ml)在37℃下、在两组厌氧箱中温育24h：(1)具有2.5μg/ml盐酸贝西沙星的痤疮丙酸杆菌的管；以及(2)不含盐酸贝西沙星的发酵液对照。在预定的时间点(1h、6h和24h)，收集细胞并置于连续稀释后的脑心浸液琼脂板上，一式两份。使板在37℃厌氧箱中生长3天。温育后，对板进行计数，以测定菌落形成单元(CFU)，并计算log减少。在类似的实验装置中，使用水代替DMSO作为溶剂，并且还对溶剂对时间杀菌动力学的影响进行了研究。
结果：盐酸贝西沙星样品(在水和DMSO中制备的1mg/ml原液)在所有测试时间点表现出相似的针对痤疮丙酸杆菌(CCARM 9010)的时间杀菌动力学(表46和图12)
表46：盐酸贝西沙星针对痤疮丙酸杆菌的时间杀菌动力学，以2.5μg/ml的浓度在1h、6h和24h进行研究
Figure BDA0001122120050001611
实施例49：分离自痤疮患者的痤疮丙酸杆菌(临床分离物)的抗微生物敏感性
通过以下微量发酵液稀释法测定痤疮丙酸杆菌分离物对各种抗生素的抗微生物敏感性。
方法：将痤疮丙酸杆菌在37℃厌氧条件下在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养48小时。对于MIC测定试验，将BHI发酵液(100μl)加入至所有96个孔中，并将100μl含有药物的发酵液加入至第一孔(1A至1H)，并对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。对于细菌接种，将痤疮丙酸杆菌培养物的浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108)，并进行进一步稀释(用100倍无菌BHI发酵液)。将稀释的痤疮丙酸杆菌悬浮液(100μl)加入至除了无菌对照孔(96孔板的第12列)以外的每个孔中。将接种板在37℃厌氧条件下温育72小时。温育之后，通过加入Alamar蓝染料来对MIC进行测定。
结果：对克林霉素和红霉素敏感的痤疮丙酸杆菌临床分离物的MIC结果表明，所有菌株(克林霉素和红霉素敏感的)对克林霉素、红霉素、米诺环素和贝西沙星是敏感的(表47)。有趣的是，在克林霉素无响应的临床痤疮丙酸杆菌分离物中，观察到对克林霉素和红霉素的敏感性存在很大差异。发现所有抗生素无响应的临床分离物均对贝西沙星敏感(表48)。
表47：痤疮丙酸杆菌临床分离物(对克林霉素和红霉素敏感)针对克林霉素、红霉素、米诺环素和贝西沙星的抗微生物敏感性
Figure BDA0001122120050001621
表48：痤疮丙酸杆菌临床分离物(克林霉素抗性)针对克林霉素、红霉素、四环素和贝西沙星的抗微生物敏感性
Figure BDA0001122120050001631
结论：在表45-46中给出的结果MIC显示，从志愿者V3和V21分离的痤疮丙酸杆菌均对克林霉素和红霉素具有抗性，但对贝西沙星敏感。实施例50：贝西沙星不同凝胶和霜剂制剂的体内药物动力学曲线的比较
局部用抗微生物制剂的药物动力学(PK)曲线从两个角度来讲是重要的。首先，它确定了制剂是否能够在一段长的时间内在相关皮肤层中递送上述MIC水平浓度的抗微生物药剂杀以灭病原体。其次，PK研究确定了活性物向体循环的穿透作用是否已经越过了可允许的界限。更好地保留在皮肤层而在血液中穿透作用低的制剂是理想的。
方法：将8-10周龄的Sprague Dawley大鼠根据它们的体重随机分为三组。使用将完全悬浮的1％贝西沙星凝胶(VLN-F19/BSF/GL/068)、完全可溶的1％贝西沙星凝胶(VLN-F21/BSF/GL/001A)和完全悬浮的1％贝西沙星凝胶(VLN-F20/BSF/CR/004)用于比较目的。以50mg/25cm2的单次皮肤剂量(在施用前一天，在动物的背侧剪除5×5cm2毛发)局部施用测试制剂对动物(每个时间点/制剂4只)进行处理。施用之后等待2分钟使其干燥。然后，用非吸收性外科胶带(TegadermTM)覆盖施用区域。在给药前(0h)、给药后0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、12h和24h从眶后丛采集血液。在每个时间点结束时，将动物安乐死，除去并收集TegadermTM。然后，用水浸渍棉球轻轻地擦拭处理过的区域，以从顶层或角质层有效地提取药物。最后，对皮肤的施药区域进行切除。以既定的提取过程，从皮肤样品中提取贝西沙星。通过LC-MS/MS对皮肤和血浆样品进行分析，以了解在每种基质的浓度并使用所获得的数据来计算Cmax、Tmax、t1/2、AUC。使用不同的贝西沙星凝胶制剂的PK研究结果绘制在图13中。
结果：比较的PK数据表明，完全悬浮、完全可溶的贝西沙星凝胶制剂甚至在施用24小时后，均能够在皮肤中递送并保留比贝西沙星MIC浓度更高的浓度。它们的Cmax值与贝西沙星针对痤疮丙酸杆菌的防突变浓度(MPC)相同。虽然完全可溶的制剂表现出比完全悬浮制剂更高的保留曲线，但它们均表现出低的血浆穿透水平(低于检测限)。这些数据表明，所有三种制剂在本质上是持续释放的。因此，本文开发的独特制剂可以在感染部位穿透足够的量，而不危及主体安全。
实施例51：盐酸贝西沙星制剂针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951(敏感菌株)的生物学评价(最小抑制浓度、抑制测定区和时间杀菌测定)
通过各种抗微生物敏感性方法测试贝西沙星制剂针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951的抗细菌活性。对下列样品进行分析：
表49：针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951测试的盐酸贝西沙星制剂
Figure BDA0001122120050001641
过程：在37℃厌氧条件下，将痤疮丙酸杆菌在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养48小时。(1)最小抑制浓度(MIC)：对于MIC，将BHI发酵液(100μl)加入至所有96孔中，并将100μl包含药物的发酵液加入至第一孔(1A至1H)中。对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。
对于细菌接种，将痤疮丙酸杆菌培养物的浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108)，并用无菌BHI发酵液进一步稀释至100倍。将稀释的痤疮丙酸杆菌悬浮液(100μl)加入至除了无菌对照孔(96孔板的第12列)以外的每个孔。将接种板在37℃厌氧条件下温育72小时。温育之后，通过加入Alamar蓝染料来确定MIC。(2)抑制区(ZOI)：对于ZOI测试，用100μl痤疮丙酸杆菌悬浮液(0.5McFarland标准当量)铺展BHA板。将测试样品(药物/制剂)基于溶解度溶解于水/溶剂。将10μl试验样品(各种药物浓度的试验样品)载入无菌盘(6mm)，并置于含有痤疮丙酸杆菌培养物的板上。然后，将板在37℃下温育48小时，随后进行它们的ZOI测量。(3)时间杀菌动力学(TK)：对于TK测试，将痤疮丙酸杆菌(CCARM 9010)水性悬浮液(0.5McFarland标准当量)以2000rpm离心20分钟，将沉淀物再悬浮于脑心浸液(BHI)发酵液。将所得痤疮丙酸杆菌悬浮液保持在37℃厌氧箱中进行过夜(16小时)温育。在二甲亚砜(DMSO)中制备盐酸贝西沙星原液(1mg/ml)，进一步用BHI发酵液对其进行稀释，得到盐酸贝西沙星工作原液(25μg/ml)。然后，通过加入900μl痤疮丙酸杆菌0.5McFarland标准当量培养物(温育16h之后)和100μl盐酸贝西沙星工作原液(25μg/ml)来制备反应混合物，以获得最终盐酸贝西沙星浓度2.5μg/ml的反应混合物。将反应混合物(1ml)在37℃厌氧箱((1)具有痤疮丙酸杆菌和2.5μg/ml盐酸贝西沙星的管和(2)不含盐酸贝西沙星的发酵液对照)中温育24小时。在预定的时间点(0h、2h、8h和24h)，在脑心浸液琼脂板连续稀释后收集细胞，一式两份进行铺板。使板在37℃厌氧箱中生长3天。温育后，对板进行计数，以测定菌落形成单位(CFU)，并计算log减少。
结果：浓度-效力-时间曲线(表49-50，图10)表明，盐酸贝西沙星凝胶和霜剂制剂(表49)针对痤疮丙酸杆菌具有不同的抗细菌活性，这表明制剂可调控活性剂的最终抗痤疮效力。对于测试的各种贝西沙星制剂，针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951的MIC值在0.13-0.25μg/ml范围内(表50)。抑制测定带结果显示，所有贝西沙星制剂(霜剂和凝胶)针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951具有抗细菌活性。在三种不同的测试制剂中，发现GL/020的ZOI较优(表51)。时间杀菌动力学结果表明，全部三种制剂(GL/020、CR/003、CR/029C)显示出在所有的时间点针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951具有相似的活性。此外，在盐酸贝西沙星浓度1μg/ml和10μg/ml之间的所有三种制剂中均观察到灭菌动力学的剂量依赖性差别(表52和图10)。
表50：最小抑制浓度(MIC)
Figure BDA0001122120050001661
表51：盐酸贝西沙星凝胶和霜剂制剂针对痤疮丙酸杆菌的抑制区(ZOI)
Figure BDA0001122120050001662
表52：盐酸贝西沙星凝胶和霜剂制剂针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951的时间杀菌动力学(TK)
Figure BDA0001122120050001671
实施例52：盐酸贝西沙星(API和制剂)针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908和痤疮丙酸杆菌MTCC 1951的生物学评价(最小抑制浓度、抑制测定带和时间杀菌测定)
对贝西沙星API和含有贝西沙星的制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的抗细菌活性进行了测定。使用下列样品用于这项研究。
表53：用于测定针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的抗细菌活性的示例性制剂
序号 样品 内容
1 BZM-1 未改性的贝西沙星
2 BZM-2 硬脂酸涂布的未改性的贝西沙星
3 BZM-3 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
4 BZM-4 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
5 BZM-5 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
6 BZM-6 安慰剂凝胶
7 BSD-6 硬脂酸涂布的贝西沙星纳米颗粒
8 BSD-7 硬脂酸涂布的贝西沙星纳米颗粒
9 BSD-8 硬脂酸涂布的贝西沙星纳米颗粒
10 BSD-9 未改性的贝西沙星
11 BSD-10 硬脂酸涂布的未改性的贝西沙星
12 BGB-1 未改性的贝西沙星
13 BGB-2 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
14 BGB-3 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
15 BGB-4 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
16 BGB-5 未涂布的改性的贝西沙星
17 BGB-6 月桂酸涂布的改性的贝西沙星
18 BSD-1 月桂酸涂布的贝西沙星纳米颗粒
19 BSD-2 月桂酸涂布的贝西沙星纳米颗粒
20 BSD-3 未涂布的贝西沙星纳米颗粒
21 BSD-4 未涂布的贝西沙星纳米颗粒
22 BSD-5 未涂布的贝西沙星纳米颗粒
表54：用于测定针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的抗细菌活性的示例性制剂
样品编码 内容
BTK-1 未改性的贝西沙星
BTK-2 硬脂酸涂布的未改性的贝西沙星
BTK-3 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
BTK-4 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
BTK-5 硬脂酸涂布的改性的贝西沙星
BTK-6 安慰剂凝胶
过程：(1)最小抑制浓度(MIC)：在37℃下，使金黄色葡萄球菌MTCC 6908在胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)中生长24小时。在96孔板中，将100μl胰蛋白胨大豆发酵液(TSB)加入至所有孔中，然后将100μl含有药物的发酵液加入至第一孔(1A至1H)。对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。将金黄色葡萄球菌MTCC 6908培养物的浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108)并用无菌TSA发酵液进一步稀释100倍。将金黄色葡萄球菌MTCC 6908悬浮液(100μl)加入至除了无菌对照以外的每个孔中。将板在37℃下温育24小时。温育之后，通过加入Alamar蓝染料来确定MIC。(2)抑制区(ZOI)：在37℃下，使金黄色葡萄球菌MTCC 6908在胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)中生长24小时。用100μl 0.5McFarland标准当量细菌悬浮液铺展BHA板。将测试样品(药物/制剂)根据溶解度溶解于水/溶剂。将10μl试验样品(各种药物浓度的试验样品)载入无菌盘(6mm)，并且置于所铺展的板上。将板在37℃下温育24小时，随后进行ZOI测量。(3)时间杀菌测定：在无菌水中制备0.5McFarland标准当量金黄色葡萄球菌培养物。使贝西沙星凝胶在胰蛋白胨大豆发酵液(TSB)中稀释以获得25μg/ml的最终浓度。然后，将900μl对金黄色葡萄球菌0.5McFarland标准当量培养物和100μl稀释贝西沙星凝胶混合，以获得2.5μg/ml的最终贝西沙星浓度。将总反应混合物(1ml)在37℃下培养在试管旋转器中。暴露2h和6h后，将细菌悬浮液置于胰蛋白胨大豆琼脂板上，并在37℃下温育24小时。
结果示于表55-56及图11中。如表55所示，MIC结果表明，除安慰剂凝胶(BZM 6)以外，所有制剂(BZM1-BZM5和BGB1-BGB6)的MIC相似。此外，月桂酸涂布的BSF(BSD1-BSD5)和未改性的BSF(BSD-9)API在MIC测定中示出了相似的效力，但硬脂酸涂布的API(BSD6-BSD10)具有较低的抗细菌效力。
如表56所示，抑制区(ZOI)结果表明，除了安慰剂凝胶(BZM 6)以外，所有制剂(BZM1-BZM5)具有相似的MIC。基于未改性的贝西沙星或硬脂酸(SA)涂布的贝西沙星API的凝胶之间没有差别。然而，相对于未改性的BSF API(BSD 9)分散体，硬脂酸涂布的API(BSD-6、BSD-7、BSD-8和BSD-10)分散体表现出较低抗细菌效力或无抗细菌效力。
如表57和图11所示，时间杀菌结果表明，含有未改性的BSF或改性的BSF的制剂具有相似的抗细菌灭菌效力。安慰剂和生长对照均未示出不良的抑制生长模式。
表55：MIC结果
Figure BDA0001122120050001701
表56：抑制区
Figure BDA0001122120050001711
表57：时间杀菌
Figure BDA0001122120050001721
实施例53：载有盐酸贝西沙星的制剂(可溶性盐酸贝西沙星凝胶、悬浮盐酸贝西沙星凝胶和悬盐酸贝西沙星霜剂)针对痤疮丙酸杆菌的不同菌株[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(抗性菌株)]的最小抑制浓度的测定
对含有盐酸贝西沙星的凝胶和霜剂制剂对痤疮丙酸杆菌的两种菌株[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(抗性菌株)]的最小抑制浓度进行测定。使用下列样品用于这项研究。
表58：用于测定针对痤疮丙酸杆菌[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(抗性菌株)]的最小抑制浓度(MIC)的示例性制剂
Figure BDA0001122120050001722
最小抑制浓度(MIC)的过程：在37℃厌氧条件下，将痤疮丙酸杆菌在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养48小时。对于MIC测试，将BHI发酵液(100μl)加入至所有96个孔中，将100μl含有药物的发酵液加入至第一孔(1A至1H)，并对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。对于细菌接种物，将痤疮丙酸杆菌培养物浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108)，并用无菌BHI发酵液进一步稀释(100倍)。将稀释的痤疮丙酸杆菌悬浮液(100μl)加入至除了无菌对照孔(96孔板的第12列)之外的每个孔中。使接种板在37℃厌氧条件下温育72小时。温育之后，通过加入Alamar蓝染料来确定MIC。
结果：所有贝西沙星制剂示出了相似的MIC值(0.13-0.25μg/ml)。结果示于表59中。
表59：凝胶和霜剂制剂针对痤疮丙酸杆菌[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(抗性菌株)]的MIC结果
Figure BDA0001122120050001731
实施例54：载有盐酸贝西沙星/阿达帕林/组合的凝胶制剂针对痤疮丙酸杆菌[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(克林霉素无响应菌株)]的最小抑制浓度(MIC)的测定
对含有盐酸贝西沙星或阿达帕林或它们的组合的凝胶制剂针对痤疮丙酸杆菌[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(抗性菌株)]的最小抑制浓度进行测定。使用下列样品用于这项研究。
表60：用于测定针对痤疮丙酸杆菌[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(抗性菌株)]的最小抑制浓度(MIC)的示例性制剂
Figure BDA0001122120050001741
最小抑制浓度(MIC)的过程：在37℃厌氧条件下，将痤疮丙酸杆菌在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养48小时。对于MIC测试，将BHI发酵液(100μl)加入至所有96个孔中，将100μl含有药物的发酵液加入至第一孔(1A至1H)，并对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。对于细菌接种，将痤疮丙酸杆菌培养物的浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108)，并用无菌BHI发酵液进一步稀释(100倍)。将稀释的痤疮丙酸杆菌悬浮液(100μl)加入至除了无菌对照孔(96孔板的第12列)以外的每个孔中。使接种板在37℃厌氧条件下温育72小时。温育之后，通过加入Alamar蓝染料来确定MIC。
结果：除了仅含有阿达帕林的凝胶以外的所有制剂均示出了相似的针对痤疮丙酸杆菌[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(抗性菌株)]的MIC(0.13μg/ml)。结果示于表61中。
表61：凝胶制剂针对痤疮丙酸杆菌[MTCC 1951(敏感菌株)、CCARM 9010(抗性菌株)的MIC结果
Figure BDA0001122120050001751
实施例55：载有盐酸贝西沙星的凝胶和霜剂制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的最小抑制浓度(MIC)的测定
对含有盐酸贝西沙星的凝胶和霜剂制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC6908的最小抑制浓度进行测定。用于该研究的样品与表58中提到的样品是相同的。
最小抑制浓度(MIC)的过程：在37℃厌氧条件下，将金黄色葡萄球菌在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养24小时。对于MIC测试，将BHI发酵液(100μl)加入至所有96个孔中，将100μl含有药物的发酵液加入至第一孔(1A至1H)，并对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。对于细菌接种，将金黄色葡萄球菌培养物的浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108)，并用无菌BHI发酵液进一步稀释(100倍)。将稀释的金黄色葡萄球菌悬浮液(100μl)加入至除了无菌对照孔(96孔板的第12列)以外的每个孔中。使接种板在37℃厌氧条件下温育24小时。温育之后，通过加入Alamar蓝染料来确定MIC。
结果：所有制剂均示出了相似的针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的MIC(0.25μg/ml)。结果示于表62中。
表62：凝胶和霜剂制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的MIC结果
Figure BDA0001122120050001761
实施例56：载有盐酸贝西沙星/阿达帕林/组合的凝胶制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的最小抑制浓度(MIC)的测定
对含有盐酸贝西沙星或阿达帕林或它们的组合的凝胶制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的最小抑制浓度进行测定。用于该研究的样品与如表60中给出的样品是相同的。
最小抑制浓度(MIC)的过程：在37℃厌氧条件下，将金黄色葡萄球菌在脑心浸液琼脂(BHIA)中培养24小时。对于MIC测试，将BHI发酵液(100μl)加入至所有96个孔中，将100μl含有药物的发酵液加入至第一孔(1A至1H)，并对直至10个孔(96孔板的第1列至第10列)进行连续(双倍)稀释。对于细菌接种，将金黄色葡萄球菌培养物的浊度调节至0.5McFarland标准(约1.5×108)，并用无菌BHI发酵液进一步稀释(100倍)。将稀释的金黄色葡萄球菌悬浮液(100μl)加入至除了无菌对照孔(96孔板的第12列)以外的每个孔中。使接种板在37℃厌氧条件下温育24小时。温育之后，通过加入Alamar蓝染料来确定MIC。
结果：除了仅含有阿达帕林的凝胶以外的所有制剂均示出了相似的针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的MIC(0.25μg/ml)。结果示于表63中。
表63：凝胶制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的MIC结果
Figure BDA0001122120050001771
实施例57：载有盐酸贝西沙的凝胶和霜剂制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的体外时间-杀菌动力学研究
在体外对含有盐酸贝西沙星的凝胶和霜剂制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的时间杀菌动力学进行研究。使用下列样品用于这项研究。
表64：用于针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的体外时间杀菌动力学研究的示例性制剂(凝胶和霜剂)
Figure BDA0001122120050001772
体外时间-杀菌测定的过程：将贝西沙星制剂稀释于水中，配制1mg/ml的原液，并在BHI发酵液中进一步稀释至100μg/ml的最终浓度。将金黄色葡萄球菌MTCC 6908(900μl)0.5McFarland标准当量培养物和100μl稀释的贝西沙星(100μg/ml)的混合，以获得最终贝西沙星浓度10μg/ml的反应混合物。使总反应混合物(1ml)在37℃温育箱中培养。在温育1h、3h和6h后，连续稀释后将细胞铺板在脑心浸液琼脂板上。对于每个样品同一管读取两个读数。使细胞于37℃在温育箱中生长16h-24h。
结果：除了安慰剂以外的所有贝西沙星制剂示出了相似的针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的抗细菌效力(在6h降低约2log)。结果示于表65中。
表65：凝胶和霜剂制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的体外时间-杀菌测定结果
Figure BDA0001122120050001781
实施例58：载有盐酸贝西沙星/阿达帕林/两者组合的凝胶制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的体外时间-杀菌动力学研究
对含有盐酸贝西沙星或阿达帕林或两者组合的凝胶制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908进行时间杀菌动力学研究。将下列样品用于这项研究。
表66：用于测定针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的抗细菌活性的示例性制剂
Figure BDA0001122120050001791
体外时间-杀菌测定的过程：将贝西沙星制剂稀释于水中，配制1mg/ml的原液，并在BHI发酵液中进一步稀释至100μg/ml的最终浓度。将金黄色葡萄球菌MTCC 6908(900μl)0.5McFarland标准当量培养物和100μl稀释的贝西沙星(100μg/ml)混合，以获得最终贝西沙星浓度10μg/ml的反应混合物。使总反应混合物(1ml)在37℃温育箱中温育。在温育1h、3h和6h后，连续稀释后将细胞铺板在脑心浸液琼脂板上。对于每个样品同一管读取两个读数。使细胞于37℃在温育箱中生长16h-24h。
结果：除了安慰剂以外的所有贝西沙星-阿达帕林制剂示出了相似的针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的抗细菌效力(在6h降低约2log)。结果示于表67中。
表67：凝胶制剂针对金黄色葡萄球菌MTCC 6908的体外时间-杀菌测定结果
Figure BDA0001122120050001801
实施例59：载有盐酸贝西沙星的凝胶和霜剂制剂针对丙酸痤疮杆菌CCARM 9010的体外时间-杀菌动力学研究
对含有盐酸贝西沙星的凝胶制剂针对丙酸痤疮杆菌CCARM 9010进行体外时间杀菌动力学研究。在该研究中使用的样品与表64中提及的相同。
体外时间-杀菌测定的过程：在无菌水中制备0.5McFarland标准当量的痤疮丙酸杆菌(CCARM 9010)培养物。将制备的培养物以2000rpm离心20分钟，然后除去上清液并加入相似量的脑心浸液(BHI)发酵液。使BHI发酵液中的痤疮丙酸杆菌培养物在37℃厌氧箱中保持温育过夜(16h)。将贝西沙星粉末在水和DMSO中稀释以制备1mg/ml的原液，然后将两者进一步在BHI发酵液中稀释至100μg/ml的最终浓度。将900μl的痤疮丙酸杆菌0.5McFarland培养物(温育16小时后)和100μl稀释的贝西沙星(100μg/ml)混合，以获得最终贝西沙星浓度10μg/ml的反应混合物。使总反应混合物(1ml)在37℃厌氧箱中温育。在温育2h、8h和24h后，连续稀释后将细胞铺板在脑心浸液琼脂板上。使细胞在37℃的厌氧箱内生长3天。
结果：除了安慰剂以外的所有贝西沙星制剂均示出了相似的针对痤疮丙酸杆菌CCARM 9010的抗细菌效力(在24h降低约2log)。结果示于表68中。
表68：凝胶和霜剂制剂针对痤疮丙酸杆菌CCARM 9010的体外时间-杀菌测定结果
Figure BDA0001122120050001811
实施例60：载有盐酸贝西沙星的凝胶和霜剂制剂针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951的体外时间杀菌动力学研究
对含有盐酸贝西沙星或阿达帕林或两者组合的凝胶和霜剂制剂针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951进行体外时间杀菌动力学研究。在该研究中使用的样品与在表64中所写的是相同的。
结果：除了安慰剂以外的所有贝西沙星制剂均示出了相似的针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951的抗细菌效力(在24h减少约2log)。结果示于表69中。
表69：凝胶和霜剂制剂针对痤疮丙酸杆菌MTCC 1951的时间杀菌测定结果
Figure BDA0001122120050001812
实施例61：在由痤疮丙酸杆菌(ATCC 6919)刺激的THP-1细胞中盐酸贝西沙星、阿达帕林的抗炎潜能的测定
在由痤疮丙酸杆菌(ATCC 6919)刺激的THP-1细胞中对盐酸贝西沙星和阿达帕林的抗炎活性进行研究。
过程：
炎症刺激物的制备：在PBS中制备痤疮丙酸杆菌培养物悬浮液，并通过使用比浊器对细胞密度进行测量，将悬浮液中的细胞数调整为约5×108CFU/ml。然后，将细菌悬浮液在80℃下热灭活30min，并储存于-80℃直至进一步使用。
研究THP-1细胞中炎症反应的ELISA：将细胞以96孔模式(每孔2×105个THP-1细胞)接种在含有10％FBS的培养基中。使用3McFarland当量的热灭活痤疮丙酸杆菌对细胞进行刺激，以诱导炎性细胞因子。用PBS对在对照孔中的细胞进行处理。用痤疮丙酸杆菌诱导一小时后，将测试试剂以适当浓度(贝西沙星为10μg/ml和30μg/ml，阿达帕林为0.04μg/ml和0.4μg/ml)加入至诱导细胞中。将板在37℃下温育24小时。24小时之后，将板离心以沉淀细胞并收集上清液。使用R&D系统试剂盒，按照制造商的说明书通过ELISA对由此获得的细胞培养物上清液中的各细胞因子(IL-6和IL-8)的细胞因子水平进行分析。
结果
贝西沙星抑制了由痤疮丙酸杆菌诱导THP-1细胞中分泌的IL-6：为了研究贝西沙星响应于痤疮丙酸杆菌的抗炎作用，将THP-1细胞暴露于热灭活痤疮丙酸杆菌中，随后用10μg/ml或30μg/ml的盐酸贝西沙星进行处理。然后用比色ELISA对培养物上清液的IL-6或IL-8的水平进行测试。在图14A中呈现的数据清楚地示出，盐酸贝西沙星使得由痤疮丙酸杆菌诱导的IL-6水平以剂量依赖性的方式显著降低。然而，它对IL-8水平未示出相似的作用(图14B)。每个测试条件的细胞活力与未经处理的细胞(数据未显示)相比在80％以上。用作阳性对照的已知抗炎剂地塞米松示出了IL-6水平接近100％的降低。
阿达帕林和贝西沙星的组合示出了对由痤疮丙酸杆菌诱导的THP-1细胞中IL-6分泌的额外抑制作用：对阿达帕林和盐酸贝西沙星的组合对由THP-1细胞分泌的细胞因子的作用进行了研究。出于该目的，用死痤疮丙酸杆菌对THP-1细胞进行诱导，并单独用贝西沙星(10μg/ml)、单独用阿达帕林(0.04μg/ml或0.4μg/ml)、或用前述浓度的盐酸贝西沙星和阿达帕林的组合进行处理。图15A所汇总的结果表明，在测试浓度下，盐酸贝西沙星和阿达帕林均通过降低痤疮丙酸杆菌诱导的IL-6而赋予个体抗炎作用。此外，当与盐酸贝西沙星和阿达帕林的单独作用相比较时，我们观察到两者同时存在时针对IL-6减少具有额外作用。相比于未处理的对照，单独的10μg/ml盐酸贝西沙星导致IL-6水平降低大约40％。当与0.04μg/ml和0.4μg/ml阿达帕林组合时，IL-6的减少分别上升至70％和80％。然而，在痤疮丙酸杆菌诱导的IL-8水平中并未观察到这些作用(图15B)。
结果示于表70和表71以及图14和图15中。
表70：在如图14所示的THP-1细胞中盐酸贝西沙星对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞因子(IL-6、IL-8)释放的作用结果
Figure BDA0001122120050001831
推论：药物处理后，痤疮丙酸杆菌诱导的IL-6水平显著降低。然而，IL-8水平未降低。
表71：在如图15所示的THP-1细胞中，盐酸贝西沙星和/或阿达帕林对痤疮丙酸杆菌诱导的细胞因子(IL-6、IL-8)释放的作用结果
Figure BDA0001122120050001841
推论：
1.盐酸贝西沙星通过降低THP-1细胞中痤疮丙酸杆菌诱导的IL-6水平而发挥抗炎作用。
2.加入阿达帕林连同盐酸贝西沙星增加了IL-6水平的降低程度，并相比于单独的贝西沙星提供了增强的抗炎作用。
为了所有目的，在此以引用的方式将在说明书和实施例中标明的所有专利与其它出版物明确地并入本文。这些出版物仅仅由于它们的公开早于本申请的申请日而提供。在这一方面不应当视作承认本发明人没有权利借助于先前的发明或因为任何其它原因而将公开的内容提前。所有关于这些文件的日期的声明或这些文件的内容的表述是基于申请人可得的信息，并且不构成关于这些文件的日期或这些文件的内容的正确性的任何承认。
尽管本文已详细地描述和记载了优选的实施方式，但是相关领域的技术人员显然可以进行各种修改、添加和替换等而不背离本发明的精神，因此认为这些方案落入随后的权利要求书中所定义的本发明的范围。此外，对于那些没有指明的内容，本领域普通技术人员将会理解的是，可对本文所描述和说明的多种实施方式中的任一个进行进一步修改，以纳入在本文公开的任何其它实施方式中示出的特征。应当注意的是，在基于本公开上述内容而不脱离本发明的精神和范围的前提下，所述变化和修改是可能的。
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Claims (10)

1.一种制剂，所述制剂具有下述组成：
Figure FDA0003000698060000011
2.一种制剂，所述制剂具有下述组成：
Figure FDA0003000698060000012
3.如权利要求1或2所述的制剂，其中，所述制剂进一步包含阿达帕林。
4.一种制剂，所述制剂选自如下表所示的制剂GL27、GL28、GL29、GL30和GL31：
Figure FDA0003000698060000021
5.如权利要求4所述的制剂，其中，所述制剂选自制剂GL27、制剂GL28和制剂GL31。
6.如权利要求4所述的制剂，其中，所述制剂进一步包含阿达帕林。
7.有效量的如权利要求1-6中任一项所述的制剂在制备用于治疗与炎症有关的痤疮的药物中的用途，其中，所述痤疮是由细菌引起的，所述细菌不响应于治疗剂量的包含克林霉素、红霉素、多西环素、米诺环素或四环素的治疗方案。
8.有效量的如权利要求1-6中任一项所述的制剂在制备用于治疗痤疮的药物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其中，所述痤疮是由细菌引起的，所述细菌不响应于治疗剂量的包含克林霉素、红霉素、多西环素、米诺环素或四环素的治疗方案。
10.有效量的如权利要求1-6中任一项所述的制剂在制备用于治疗痤疮的药物中的用途，其中，所述痤疮是由不响应于治疗剂量的克林霉素、米诺环素、四环素或红霉素的痤疮丙酸杆菌引起的。
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