CN106146624B - 定点共价交联的天然n肽类的hiv-1抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药领域，涉及定点共价交联的天然N肽类的HIV‑1抑制剂。具体地，本发明涉及式I,II所示的化合物、其衍生物、立体异构体、或无生理毒性的盐，含有上述化合物的药物组合物，以及上述化合物在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗HIV感染所致相关疾病尤其是艾滋病的药物中的用途。本发明的N肽抑制剂具有与目前使用药物不同的作用机制、作用方式和作用靶标，对找寻新型HIV‑1融合抑制剂药物具有重要意义。X1X2X3X4IVX5KX6X7X8IERX9IEX10X11QX12 LLQLTVWGIKX13LQARIL(Ⅰ)(X1X2X3X4I VX5KX6X7X8IERX9IEX10X11QX12LLQLTVWGIKX13LQARIL)3(Ⅱ)。

Description

定点共价交联的天然N肽类的HIV-1抑制剂
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及抗人免疫缺陷病毒(HIV)感染的多肽、其衍生物、立体异构体、或无生理毒性的盐。本发明还涉及含有上述多肽、其衍生物、立体异构体、或无生理毒性的盐的药物组合物，以及所述多肽、其衍生物、立体异构体、或无生理毒性的盐在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗HIV感染所致相关疾病尤其是获得性免疫缺陷综合征(AIDS，即艾滋病)的药物中的用途。
背景技术
艾滋病主要是由人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染所导致的致死性高的传染性疾病，其流行广，传播快。目前该病尚不能根治且缺乏有效疫苗，药物治疗仍是目前唯一有效的方法。临床上应用抗HIV-1药物，辅以高效抗逆转录病毒疗法，可以在一定程度上延长HIV感染者的生存时间和改善其生活质量。但是，由于HIV疫苗研究进展缓慢以及耐药性问题日益明显，研发新型抗HIV药物即具有新的作用机制和新的作用靶点的药物仍是当务之急。
HIV融合抑制剂(HIV fusion inhibitors)是干扰病毒进入靶细胞的新型抗HIV药物，其在感染的初始环节切断病毒的传播，这对于预防及控制HIV-1感染具有特殊意义，因而成为新机制抗HIV药物研究的热点。
Gp41是介导HIV-1病毒与靶细胞膜融合的特异性蛋白，是融合抑制剂的主要作用靶标。Gp41的胞外区存在着两个与膜融合密切相关的螺旋结构功能区，即N末端重复序列(HR1)和C末端重复序列(HR2)。在膜融合过程中，三个gp41分子中的HR2与HR1相互作用，形成一个六螺旋体核心结构(6-HB)。该gp41分子内形成的6-HB是整个融合的核心结构，其晶体结构是设计融合抑制剂的基础和基本模型。通过设计肽融合抑制剂与gp41分子相应的螺旋区序列作用，阻碍该内源性6HB的形成，从而阻断病毒和细胞的融合。
基于天然C-肽序列的融合抑制剂活性较高，IC50可达纳摩尔水平，因此已进入临床开发的融合抑制剂均为C-肽及其衍生物，典型的C-肽融合抑制剂有T20，C34，二者都来自gp41的CHR天然序列的多肽，这些C-肽类药物的作用靶标均为NHR三聚体。研究人员通过优化gp41天然序列，设计出新一代融合抑制剂，这些抑制剂大都以C34为模板。与T20相比，新抑制剂的活性和稳定性都有很大改善，其中取得良好临床结果的有T1144和西夫韦肽。虽然新开发的融合抑制剂能高效抑制已有流行T20抗性毒株，但对T20的交叉抗性还是经常出现。由于靶标相同，这些交叉抗性预期在这些新药进入临床使用后会更加明显。因此开发针对不同靶标序列，具有新颖结构和作用机制的融合抑制剂应是将来这类药物研发的重点。
基于天然NHR序列产生的N肽融合抑制剂是另一个发展方向。从上述三个gp41分子内折叠形成6HB的结构和机制中可知，CHR和NHR互为配基，二者具备特异性相互作用的特质，形成6HB并放出能量，驱动完成病毒与细胞的融合。迄今，虽然N-肽融合抑制剂尚无品种进入临床研究，但首个报道的融合抑制剂DP107就是N-肽。从另一侧面表明其研究问题更多，难度更大。N-肽的活性一般在微摩尔水平，比对应的C-肽低约1000倍。据6HB晶体结构和作用机制推断，N-肽融合抑制剂通过两种方式抑制gp41分子内6HB形成，进而阻断HIV与细胞的融合过程：1)外源性N肽三聚体与gp41中CHR作用，形成异源6HB，使得gp41不能分子内折叠，中断融合；2)单链N肽嵌合在NHR中，形成杂合三聚体，抑制gp41分子内6HB形成。前者应是其主要作用方式，且活性更高，二者相差1到3个数量级。但问题是N肽片段本身难以形成活性构象的稳定三聚体(N3螺旋)，同时其表面含有较多的疏水残基，在生理条件下容易聚集而失活。因此，N-肽融合抑制剂的研究主要是如何稳定其三聚体和改善理化性能。从研发药物角度来看，CHR和NHR则可互为靶标，N-肽融合抑制剂以gp41中CHR为靶标，与前两种融合抑制剂完全不同，是避免或减缓与现有药物产生交叉抗药性的现实途径，尽管也有诱导抗药性研究。
也有提高N肽抑制活性的相关研究，一般的方法是将天然的N肽片段与能形成稳定三螺旋结构的辅助多肽缀合，或使用二硫键连接上述设计的缀合N肽，形成不可逆三聚体N肽，这样可以提高N肽抑制剂活性，但上述方法也有自身的缺陷：单链的N肽活性较低，易于聚集而沉淀；缀合辅助多肽，使得缀合后N肽序列冗长；二硫键交联虽然可以提高N肽活性，但交联反应位点和反应专一性不可控，以上都限制了N肽抑制剂的发展。
发明内容
本发明以天然N肽(NHR)序列为模板，设计合成了一系列具有新结构的N肽融合抑制剂，通过测定设计的N肽在溶液中的聚集状态和稳定性，筛选出能够形成较稳定的三螺旋结构的N肽，并且选择适当的位点，进行化学修饰，引进酰基转移反应的官能团，最后在适当的反应条件下，发生化学交联，得到定点共价交联的N肽三聚体，由此完成了本发明。
本发明第一方面涉及式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐，
X1X2X3X4IVX5KX6X7X8IERX9IEX10X11QX12LLQLTVWGIKX13LQARI L(Ⅰ)
(X1X2X3X4IVX5KX6X7X8IERX9IEX10X11QX12LLQLTVWGIKX13LQARI L)3(Ⅱ)
其中，X1和X2各自独立地选自L型氨基酸或缺失，
X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12和X13各自独立地选自L型氨基酸，
其中式Ⅱ所示的化合物为三个式Ⅰ所示的化合物通过两两共价交联形成的三聚体。
在本发明的实施方案中，X1和X2共同存在或共同缺失。
在本发明的实施方案中，其中所述的共价交联是指一个式Ⅰ化合物中的X5和X6之间的赖氨酸与另一个式Ⅰ化合物中的X8和X9之间的谷氨酸共价交联，优选地，所述共价交联是指形成酰胺键；也就是说，当式Ⅰ化合物为36肽(或38肽)时，一个式Ⅰ化合物的第6位(或第8位)赖氨酸与另一个式Ⅰ化合物中的第11位(或第13位)谷氨酸之间共价交联，这样使得三个式I化合物分子之间两两交联，形成共价交联，例如形成酰胺键。
在本发明的实施方案中，其中所述L型氨基酸选自甘氨酸(Gly)，丙氨酸(Ala)，亮氨酸(Leu),异亮氨酸(Ile),谷氨酸(Glu),谷氨酰胺(Gln),天冬氨酸(Asp)，天冬酰胺(Asn),缬氨酸(Val),赖氨酸(Lys),丝氨酸(Ser),苏氨酸(Thr),精氨酸(Arg),组氨酸(His),色氨酸(Trp),酪氨酸(Tyr)。
在本发明的一个实施方案中，X1选自亮氨酸(Leu)和赖氨酸(Lys)，或者X1缺失。
在本发明的一个实施方案中，X2选自异亮氨酸(Ile)、丙氨酸(Ala)和亮氨酸(Leu)，或者X2缺失。
在本发明的一个实施方案中，X3选自丝氨酸(Ser)、谷氨酰胺(Gln)和谷氨酸(Glu)。
在本发明的一个实施方案中，X4选自甘氨酸(Gly)、谷氨酸(Glu)和赖氨酸(Lys)。
在本发明的一个实施方案中，X5选自谷氨酰胺(Gln)，赖氨酸(Lys)、谷氨酸(Glu)和精氨酸(Arg)。
在本发明的一个实施方案中，X6选自异亮氨酸(Ile)和谷氨酰胺(Gln)。
在本发明的一个实施方案中，X7选自组氨酸(His)和天冬酰胺(Asn)。
在本发明的一个实施方案中，X8选自组氨酸(His)和天冬酰胺(Asn)。
在本发明的一个实施方案中，X9选自丙氨酸(Ala)和谷氨酸(Glu)。
在本发明的一个实施方案中，X10选自丙氨酸(Ala)、赖氨酸(Lys)和谷氨酸(Glu)。
在本发明的一个实施方案中，X11选自异亮氨酸(Ile)和谷氨酰胺(Gln)。
在本发明的一个实施方案中，X12选自组氨酸(His)和赖氨酸(Lys)。
在本发明的一个实施方案中，X13选自谷氨酰胺(Gln)和谷氨酸(Glu)。
在本发明的实施方案中，其中所述式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物的N端还连接有C1-6烷基酰基(例如乙酰基)、寡肽序列或亲脂性基团，或通过连接臂连接其他类的小分子(例如，化合物多肽N端的氨基可以通过和丁二酸反应，使得末端为羧基，进而可以连接可以和羧基反应的其他基团)，
C末端连接有羧基衍生物(例如酰胺基)、寡肽序列、亲脂性基团或胆固醇；
优选地，所述式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物的N末端乙酰化，和/或C末端酰胺化。
在本发明中，所述寡肽序列是指含有1-10个氨基酸残基的寡肽序列，例如EEE、KKK、GQAV、GEEE等。
在本发明中，所述亲脂性基团是指含有3-20个碳原子的脂肪酸链，优选含有8-16个碳原子的脂肪酸链。
在本发明的具体实施方案中，所述式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐选自以下化合物：
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本发明第二方面涉及药物组合物，其含有至少一种权利要求本发明第一方面任一项的式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐；任选地，其还含有药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明还涉及本发明第一方面任一项的式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐或者第二方面任一项的药物组合物在制备用于预防和/或治疗和/或辅助治疗HIV感染相关疾病(特别是艾滋病)的药物中的用途。
在本发明的实施方案中，其中所述的HIV为HIV-1型病毒。
本发明还涉及预防和/或治疗和/或辅助治疗HIV感染相关疾病(特别是艾滋病)的方法，所述方法包括给有需要的受试者有效量的本发明第一方面任一项的式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐或者第二方面任一项的药物组合物的步骤。
本发明还涉及本发明第一方面任一项的式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐或者第二方面任一项的药物组合物在制备用于抑制HIV与细胞融合的药物中的用途。
在本发明的实施方案中，其中所述的HIV为HIV-1型病毒。
本发明还涉及一种在体内或体外抑制HIV与细胞融合的方法，所述方法包括使用有效量的本发明第一方面任一项的式Ⅰ或式Ⅱ所示的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐或者第二方面任一项的药物组合物的步骤。
在本发明的实施方案中，其中所述的HIV为HIV-1型病毒。
本发明还涉及核酸分子，其编码本发明第一方面任一项的式Ⅰ所示的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐。
本发明还涉及重组载体，其含有本发明任一项的核酸分子。
在本发明中，所述载体例如为原核表达载体或真核表达载体。
本发明还涉及重组细胞，其含有本发明任一项的重组载体。
在本发明中，所述细胞例如为原核细胞(例如大肠杆菌)或真核细胞(例如酵母细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞)。
HIV-1病毒的Gp41的胞外区存在着两个与膜融合密切相关的螺旋结构功能区，即N末端重复序列(HR1)和C末端重复序列(HR2)。在膜融合过程中，三个gp41分子中的HR2与HR1相互作用，形成一个六螺旋体核心结构(6-HB)。在6-HB核心结构中，3个N肽(即N末端重复序列的36肽，N36)形成位于中心的三聚体复合螺旋核，也称为N螺旋三聚体，或简称三聚体。
本发明的式Ⅰ化合物为N肽衍生物，因此在本发明中的有些地方也称为N肽。本发明的式Ⅰ化合物在溶液中可自然聚集形成三聚体，为了增加三聚体的稳定性和活性，本发明进一步在这三条多肽之间增加了共价交联，形成了更加稳定和具有更高活性的三聚体化合物，即式Ⅱ化合物。
在本发明的实施方案中，其中所述的共价交联是指一个式Ⅰ化合物中的X5和X6之间的赖氨酸与另一个式Ⅰ化合物中的X8和X9之间的谷氨酸共价交联，优选地，所述共价交联是指形成酰胺键；也就是说，当式Ⅰ化合物为36肽(或38肽)时，一个式Ⅰ化合物的第6位(或第8位)赖氨酸与另一个式Ⅰ化合物中的第11位(或第13位)谷氨酸之间共价交联，例如形成酰胺键。在本发明的具体实施方案中，两条式Ⅰ化合物的多肽之间可以形成一个酰胺键，因此在形成的三聚体中，三条式Ⅰ化合物的多肽之间可以形成三个酰胺键，由此达到稳定三聚体的目的。
本发明式Ⅱ化合物的合成采用如下方法：
将式Ⅰ化合物的第11位(36肽时)或第13位(38肽时)谷氨酸进行硫脂修饰，然后溶解在反应溶液中，则其能形成三聚体结构，此时设计的赖氨酸和硫脂修饰的谷氨酸发生反应，即形成多肽之间的酰胺键，即，在硫脂修饰的式Ⅰ形成的三聚体结构中，式Ⅰ化合物为36肽(或38肽)时，一个式Ⅰ化合物的第6位(或第8位)赖氨酸与另一个式Ⅰ化合物中的第11位(或第13位)谷氨酸之间形成酰胺键。如图1所示，在式Ⅰ化合物形成的三聚体结构中，由于第6位(或第8位)赖氨酸与另一个式Ⅰ化合物中的第11位(或第13位)谷氨酸分别位于多肽的g和e位，在空间方向和空间距离上都较为合适，有利于形成共价键，而其余位置的氨基酸由于空间距离和空间方向不合适，因此不会参与到共价键的形成，就是说，其余位置的氨基酸由于空间距离和空间方向的不合适而不会影响共价键的形成。
在本发明中，式Ⅰ或式Ⅱ中的Z和B分别是指多肽的N末端基团和C末端基团；其中Z可以为NH2，或者其它的多肽N端的保护基团，例如C1-6烷基酰胺基，如AcNH，或者bpy-βA等；其中B可以为COOH，或者其它的多肽C端的保护基团，例如羧基衍生物，如CONH2等。
在本发明的实施方案中，X1和X2可以同时存在或同时缺失；当X1和X2同时存在时，本发明第一方面任一项的化合物为38肽，当X1和X2同时缺失时，本发明第一方面任一项的化合物为36肽。
本发明中使用的术语“无生理毒性的盐”意指在制药上可接受的并且具有母体化合物的所需药理学活性的本发明化合物的盐。这类盐包括：与无机酸或与有机酸形成的酸加成的盐，所述的无机酸诸如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等；所述的有机酸诸如乙酸，丙酸，己酸，环戊丙酸，乙醇酸，丙酮酸，乳酸，丙二酸，琥珀酸，苹果酸，马来酸，富马酸，酒石酸，柠檬酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，萘磺酸，樟脑磺酸，葡庚糖酸，葡糖酸，谷氨酸，羟基萘甲酸，水杨酸，硬脂酸，粘康酸等；或在母体化合物上存在的酸性质子被金属离子，例如碱金属离子或碱土金属离子取代时形成的盐；或与有机碱形成的配位化合物，所述的有机碱诸如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，N-甲基葡糖胺等。
在本发明中，术语“有效量”包括可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。
在本发明中，术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明任一项所述的抗菌肽、其衍生物、或其可药用盐或者本发明任一项所述的药物组合物以治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，例如人、狗、猴、牛、马等。
在本发明中，术语“疾病和/或病症”是指所述受试者的一种身体状态，该身体状态与本发明所述疾病和/或病症有关。
在本发明中，术语“C1-6烷基酰胺基”是指C1-6烷基-CO-NH，所述C1-6烷基是指含有1-6个碳原子的直链或支链一价饱和烃基，例如为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。
在本发明中，除特别注明外，氨基酸是指L型氨基酸。
在本发明中，当未特别注明时，所述式Ⅰ或式Ⅱ化合物(即多肽)的N末端为NH2，C末端为COOH；本发明的式Ⅰ或式Ⅱ化合物的N末端或C末端还可连接有其它不影响交联反应的基团，当特别说明N末端或C末端基团时，是指该基团在NH2或COOH的基础上进行修饰后得到的基团，例如当N末端为乙酰基(Ac)时，该化合物N末端的基团为AcNH，在序列中表示为Ac，当C末端为酰胺基时，该化合物C末端的基团为CONH2，在序列中表示为NH2。
在本发明中，式Ⅱ化合物的N末端和C末端与其中单肽的式Ⅰ化合物的N末端和C末端一致。
在本发明中，通常药物组合物含有0.1－90重量％的本发明任一项所述的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐或者本发明的药物组合物可以以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明的多肽、其衍生物、或其可药用盐与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明的多肽、其衍生物、或其可药用盐制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐或者本发明的药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体活性成分，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。
本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。
可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性成分的量能有效针对具体患者，并且组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体活性成分的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，活性成分的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
当用于上述治疗和/或预防或辅助治疗时，治疗和/或预防有效量的本发明的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，可以以含有本发明的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。但应认识到，本发明的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐或者本发明的药物组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体活性成分的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体活性成分的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体活性成分组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，活性成分的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明的化合物、其衍生物、立体异构体或无生理毒性的盐用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001－1000mg/kg体重/天，例如介于0.01－100mg/kg体重/天，例如介于0.01－10mg/kg体重/天。
本发明基于全新的设计思路和研究方法，设计出了新颖的N肽序列，并且通过共价交联显著提高了N肽的抑制活性。本发明的N肽抑制剂具有与目前使用药物不同的作用机制、作用方式和作用靶标，对找寻新型HIV-1融合抑制剂药物具有重要意义。
附图说明
图1三条式Ⅰ化合物多肽形成的三聚体螺旋结构(式Ⅱ化合物)的横截面示意图，其中各单肽形成螺旋结构，成七重复序列，每连续的7个氨基酸残基形成2个循环，7个残基分别用a,b,c,d,e,f,g代表，其中g代表赖氨酸，e代表谷氨酸，各单肽之间形成酰胺键。
图2实施例8样品配制图
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在本发明中使用的缩写具有下面的含义：
AIDS(Acquired Immure Deficiency Syndrome) 艾滋病，获得性免疫缺陷综合征
Ala(Alanine，A) 丙氨酸
Asn(Asparagine，N) 天冬酰胺
DCM(Dichloromethane) 二氯甲烷
DMF(N,N-Dimethyl malonate) 二甲基甲酰胺
Env(Envelope glycoprotein) 包膜糖蛋白
Fmoc(Fluorenylmethoxycarbonyl) 芴甲氧羰基
Gln(Glutamine，Q) 谷氨酰胺
Glu(Glutamic acid，E) 谷氨酸
His(Histidine,H) 组氨酸
HBTU 2-(1H-1-羟基苯并三唑)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸
HoBt(1-Hydroxylbenzotriazole anhydrous) 1-羟基苯并三氮唑
6-HB(six-helix bundle) 六螺旋体
HR1(N-terminal heptad repeat，NHR) N末端重复序列
HR2(C-terminal heptad repeat，CHR) C末端重复序列
HIV(Human Immunodeficiency Virus)) 人免疫缺陷病毒
HIV-1 人免疫缺陷病毒Ⅰ型
HPLC(High performance liquid chromatography) 高效液相色谱
TFA(trifluoroacetic acid) 三氟乙酸
Ile(Isoleucine，I) 异亮氨酸
Leu(Leucine，L) 亮氨酸
Lys(Lysine,K) 赖氨酸
Ser(Serine,S) 丝氨酸
Thr(Threonie，T) 苏氨酸
Tyr(Tyrosine，Y) 酪氨酸
Arg(Arginine，R) 精氨酸
Gly(Glycine，G) 甘氨酸
Val(Valine,V) 缬氨酸
Trp(Tryptophan，W) 色氨酸
Asp(Aspartic acid，D) 天冬氨酸
MALDI-TOF-MS 基质辅助激光解析飞行时间质谱
实施例所用固相合成载体Rink酰胺树脂为天津南开合成责任有限公司产品；HBTU、HOBT、DIEA、EDC盐酸盐以及Fmoc保护的天然氨基酸为上海吉尔生化公司以及成都诚诺新技术有限责任公司产品。三氟乙酸(TFA)为北京博迈杰科技有限公司产品；；DMF、DCM为北京博迈杰科技有限公司产品；色谱纯乙腈为Fisher公司产品。其它试剂如无说明均为国产分析纯产品。
实施例1：多肽1的制备
多肽1合成采用标准的Fmoc固相方法。选用Rink Amide树脂，肽链由C端向N端延长。缩合剂为HBTU/HOBt/DIEA。脱保护剂为哌啶/DMF溶液。利用CS Bio多肽合成仪合成肽序列,最后多肽的N端用乙酸酐试剂乙酸化封端。裂解剂为三氟乙酸/乙二硫醇/间甲酚(TFA/EDT/m-cresol)，粗肽用水溶解后冻干保存。用中压液相色谱法或高压液相色谱法(HPLC)进行分离纯化，纯肽含量>95％，并且用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)确定肽序列分子量。
合成条件如下：
保护氨基酸：0.25M的DMF溶液，
活化剂：0.2M HBTU/HOBt的DMF溶液，
活化碱：0.4M DIEA的DMF溶液，
脱保护剂：20％v/v哌啶的DMF溶液，
封闭试剂：20％v/v乙酸酐的DMF溶液。
称取Rink Amide树脂0.53g(0.23mmol)置入CEM微波多肽合成仪反应器中，然后将氨基酸，活化剂，活化碱，脱保护试剂，封闭试剂按上述浓度配置好后，用CS Bio自动多肽合成仪进行合成。完成后肽树脂用DMF洗涤3遍后用无水甲醇收缩，室温真空干燥，得肽树脂约1.95g。
裂解液(体积百分比)：三氟乙酸：乙二硫醇：间甲酚：水＝87.5：5：5：2.5。
肽树脂的裂解：称取CS Bio自动多肽合成仪合成好的肽树脂1.95g，放入500ml茄形瓶中，冰浴，电磁搅拌。按1克肽树脂加入10ml的量配制裂解液。TFA需预先冰浴降温30min或者预先存放于冰箱中使用；将配制好的裂解液加入到冰浴条件下的肽树脂中，电磁搅拌，树脂变橙红色，冰浴条件下反应30min，然后，撤冰浴，室温再继续搅拌反应200min，反应完成。剧烈搅拌下向反应器中加入冷乙醚500ml，析出白色沉淀，继续搅拌60min；用G4的砂芯抽虑漏斗滤出析出物，用冷乙醚反复洗涤3遍，晾干。加入10％乙酸水溶液150ml，乙腈5ml使固体充分溶解，抽虑，滤液冻干粗肽867mg。
所得的粗肽用中压或高压色谱进行纯化。色谱柱为C8柱，洗脱剂为乙腈，水及少量乙酸。具体操作步骤：称取粗肽867mg，加水20ml，乙腈5ml使固体完全溶解，经0.25μm孔径的滤膜过滤后上样。色谱柱预先用15％乙腈/水/0.1％冰乙酸溶液200ml平衡。上样后继续用15％乙腈/水/0.1％冰乙酸溶液200ml冲洗，高效液相检测洗脱液成分。根据液相检测结果逐渐升高乙腈含量，直至所纯化的多肽主峰被洗脱出来。合并洗脱液，旋转蒸发去除大部分溶剂，冻干得纯的N肽，HPLC检测含量大于80％。
反相制备液相二次纯化N肽，具体方法如下：将中压纯化后的N肽，用2ml乙腈和8ml纯水溶解，经0.25μm孔径的滤膜过滤后上样。反相制备液相先用20％B相平衡5min，上样后，按照洗脱梯度逐渐升高B相的含量，直至所纯化的多肽主峰被洗脱出来。将HPLC检测含量大于95％的洗脱液合并，旋转蒸发去除大部分溶剂，冻干得纯的N肽。
实施例2：其它未交联多肽的制备
其它未交联的单体N肽的制备方法与实施例1中多肽1的制备方法相同。
实施例3：多肽6的制备
多肽6的肽序列的合成同多肽1，但是在树脂接氨基酸时，将需要位点修饰的E(从N端计算第13位或第11位)换成E(OAll，O-烯丙基)。序列在树脂上合成完毕后，不裂解，做以下进一步化学修饰。
在树脂上，脱出多肽序列中E(OAll)的侧链保护基OAll。
将合成完毕的多肽树脂，转移入50ml茄形瓶，并称量0.26g四(三苯基膦)钯(Pd(PPh3)4),0.31g5,5-二甲基环己二酮溶于8ml无水四氢呋喃和二氯甲烷混合溶剂(v/v＝1/1)中，加入到茄形瓶内，避光反应6h。在多肽反应器内，DCM,DMF洗涤3次，之后用50ml 0.5％DIEA/DMF溶液洗涤5次，50ml 0.5％铜试剂/DMF溶液洗涤5次，最后用DMF，DCM，MeOH洗涤2次，抽干。
在树脂上，脱出侧链保护基后的多肽侧链硫酯化。
在多肽反应器内，加入脱出侧链保护基后的多肽树脂，并将275ul苄硫醇，315mgHOBt，450mgEDC盐酸盐溶于5mlDMF/5mlDCM溶剂中后加入到反应器内，分别反应6h和12h两次后，最后用DMF，DCM，MeOH洗涤2次，抽干。
之后按照多肽1的方法裂解，纯化的方法，得到纯肽，HPLC检测纯度大于90％。
纯化后的硫酯修饰的N肽溶解在反应溶剂中(20％ACN/30％PBS/50％H2O,浓度约在1mg/ml),在37℃下反应40h，HPLC检测反应至完全，之后再反向制备高效液相的纯化条件下，纯化得到目标N肽，纯度大于95％。
本发明中的单链N肽可形成三聚体(N3螺旋)结构，为了增加三聚体结构的稳定性，我们将一条单链N肽的第13位或第11位谷氨酸分别与另一条单链N肽的第8位或第6位赖氨酸通过酰胺键共价交联，由此形成稳定的三螺旋结构。
实施例4：除多肽8外，其它交联多肽(6,10,12等交联多肽)的制备
方法与实施例3的多肽6相同。
实施例5：多肽7的制备
在CS Bio合成仪器上合到βA后，不使用乙酸酐乙酰化，而是和bpy反应(与氨基酸反应相同)，反应后，按照实施例1的方法处理，得到纯肽。
实施例6：多肽8的制备
在CS Bio合成仪器上合到βA后，不使用乙酸酐乙酰化，而是和bpy反应(与氨基酸反应相同)，反应后，按照实施例3的方法处理，得到纯肽。
上述各多肽的分子量见表1。
表1多肽的分子量
编号 序列 分子量 序列号
1 Ac-SGIVQKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4165 SEQ ID NO：1
2 (Ac-SGIVQKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12441 (SEQ ID NO：1)<sub>3</sub>
3 (Ac-SGIVQKIEEIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12531 (SEQ ID NO：2)<sub>3</sub>
4 (Ac-SGIVQKINNIERAIEEQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12612 (SEQ ID NO：3)<sub>3</sub>
5 Ac-LISGIVQKIHHIERAIEAIQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4422 SEQ ID NO：4
6 (Ac-LISGIVQKIHHIERAIEAIQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 13212 (SEQ ID NO：4)<sub>3</sub>
7 bpy-βA-LISGIVQKIHHIERAIEAIQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4634 SEQ ID NO：5
8 (bpy-βA-LISGIVQKIHHIERAIEAIQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 13848 (SEQ ID NO：5)<sub>3</sub>
9 Ac-LIEEIVKKIHHIERAIEAIQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4528 SEQ ID NO：6
10 (Ac-LIEEIVKKIHHIERAIEAIQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12530 (SEQ ID NO：6)<sub>3</sub>
11 Ac-KIEEIVKKIHHIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4557 SEQ ID NO：7
12 (Ac-KIEEIVKKIHHIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 13617 (SEQ ID NO：7)<sub>3</sub>
13 Ac-KAEEIVKKQHHIEREIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4588 SEQ ID NO：8
14 (Ac-KAEEIVKKQHHIEREIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 13710 (SEQ ID NO：8)<sub>3</sub>
15 Ac-KLEEIVKKQHHIEREIEKQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4688 SEQ ID NO：9
16 (Ac-KLEEIVKKQHHIEREIEKQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 14010 (SEQ ID NO：9)<sub>3</sub>
17 Ac-SEIVKKIHHIERAIEAIQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4259 SEQ ID NO：10
18 (Ac-SEIVKKIHHIERAIEAIQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12723 (SEQ ID NO：10)<sub>3</sub>
19 Ac-SEIVKKIHHIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4274 SEQ ID NO：11
20 (Ac-SEIVKKIHHIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12768 (SEQ ID NO：11)<sub>3</sub>
21 Ac-SKIVEKIHHIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4274 SEQ ID NO：12
22 (Ac-SKIVEKIHHIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12768 (SEQ ID NO：12)<sub>3</sub>
23 Ac-SEIVRKIHHIERAIEAIQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4287 SEQ ID NO：13
24 (Ac-SEIVRKIHHIERAIEAIQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12807 (SEQ ID NO：13)<sub>3</sub>
25 Ac-SEIVKRIHHIERAIEAIQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4287 SEQ ID NO：14
26 Ac-SEIVKKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4228 SEQ ID NO：15
27 (Ac-SEIVKKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12630 (SEQ ID NO：15)<sub>3</sub>
28 Ac-SKIVEKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4228 SEQ ID NO：16
29 (Ac-SKIVEKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12630 (SEQ ID NO：16)<sub>3</sub>
30 Ac-SEIVRKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4256 SEQ ID NO：17
31 (Ac-SEIVRKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12714 (SEQ ID NO：17)<sub>3</sub>
32 Ac-SEIVKRINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4256 SEQ ID NO：18
33 Ac-SEIVKKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4237 SEQ ID NO：19
34 (Ac-SEIVKKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12657 (SEQ ID NO：19)<sub>3</sub>
35 Ac-SEIVQKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4237 SEQ ID NO：20
36 (Ac-SEIVQKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12657 (SEQ ID NO：20)<sub>3</sub>
37 Ac-KAHHIVKKQEELLRAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4514 SEQ ID NO：21
38 Ac-KAHHIEKKQEELLRAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4544 SEQ ID NO：22
39 Ac-SHAVKKQEELLRAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4223 SEQ ID NO：23
40 Ac-SGAVKKQEELERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub> 4159 SEQ ID NO：24
41 (Ac-SGIVQKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKELQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12444 (SEQ ID NO：25)<sub>3</sub>
42 (Ac-SGIVQKIEEIERAIEEQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12705 (SEQ ID NO：26)<sub>3</sub>
43 (Ac-SGIVQKIEEIERAIEEQQHLLQLTVWGIKELQARIL-NH<sub>2</sub>)<sub>3</sub> 12708 (SEQ ID NO：27)<sub>3</sub>
实施例7：N肽的α螺旋度的表征：
1.N肽溶液的配置
称取约1mg纯肽，溶解在700μlddH2O中，震荡，离心，取上清液后在nanodrop2000仪器上标定N肽溶液的浓度。以缓冲液PBS(pH＝7.2)为稀释剂，配置N肽溶液10μM，500μl。
2.测定N肽溶液的螺旋度
将配制好的N肽溶液加入到比色皿内，在圆二色光谱仪器中测定其螺旋吸收值(已扣除空白对照吸收值)，并按照以下公式，换算成螺旋度：
Figure BDA0000707056420000181
其中浓度(c)指N肽溶液的浓度值，路径(L)指参比池长度，残基数(N)指测量N肽的酰胺键数。
各N肽的螺旋度值见表2。
实施例8：化合物抑制HIV-1介导的细胞-细胞融合活性评价(IC50)
细胞-细胞融合实验：
1.TZM-bl细胞和HL2/3细胞的复苏/冻存
将细胞冻存管从液氮中取出，37℃水浴迅速升温，取出细胞冻存液(1ml)，加至15ml离心管，并加入1ml培养基，离心(800rpm，10min)，除去培养基，重新加入1ml新鲜培养基，并轻吹使细胞均匀悬浮，将细胞悬浮液全部转移至含有15ml培养基的75cm2培养瓶中，在37℃、5％CO2下培养。
消化细胞并计数后，离心，弃上清，加冻存液轻吹使细胞均匀悬浮(100万/ml)，分装至冻存管(1ml/管)，分别置于4℃(30min)、-20℃(2h)、-80℃(12h)、-196℃保存。
2.传代培养
取出细胞培养瓶，倒去培养基，加入2ml消化液，轻晃使其在细胞表面平铺均匀，倒去消化液，重新加入2ml消化液，铺匀，37℃消化2min，加入4ml培养基终止消化，取出所有液体，离心，弃上清，加4ml培养基并轻吹使细胞均匀悬浮，取10μl计数，取40-50万细胞置于75cm2培养瓶中传代培养。
3.融合实验
A.取TZM-bl细胞(由美国NIH AIDS Research and Reference Reagent Program提供)悬浮液稀释至50万/ml，铺入96孔细胞培养板，50μl/孔，培养24h。
B.配样品：取待测化合物，先估计化合物的IC50值，以这个估计的值为基础，乘以两个4，再乘以6得到待测化合物的配制浓度，例如：估计样品的IC50为10nM，则样品的配制浓度为10*4*4*6＝960nM，以此浓度为基础，在96孔板上第(1-10)列依次将待测化合物稀释四倍，11列和12列为空白溶剂(空白溶剂即只含培养基，不含待测样品，其中11列为阳性对照，为无样品抑制剂条件下以1:3浓度混合的TZM-bl细胞和HL2/3细胞；12列为阴性对照，为单一TZM-bl细胞的化学发光信号)；DMSO含量≤6％。
样品配制说明(图2)：每个96孔样品板(每行12孔，共8行；Costar3799，CorningIncorporation，USA)配制4个样品，每个样品重复1次，如图2所示，以第一行为例将选定浓度的样品放置第S1孔，序列稀释4倍(即后一个孔的样品浓度是前一个孔的1/4)，按此稀释10个浓度梯度。最后两个孔作为对照只含有培养基，其中第11孔含有靶细胞和效应细胞为100％融合对照(阳性对照)，第12孔只含靶细胞为无融合背景对照(阴性对照)。
C.取HL2/3细胞(由美国NIH AIDS Research and Reference Reagent Program提供)悬浮液稀释至100万/ml，加入细胞板的(1-11)×(A-H)，50μl/孔，第12×(A-H)补加50μl/孔培养基。
D.立即取步骤B中的20μl/孔样品加入细胞板，培养6h。
E.去除细胞板中每孔中的培养基(120μl/孔)，以PBS洗2次，150μl/次。
加入稀释后的裂解液(1×)，50μl/孔，裂解5min；其中稀释后的裂解液(1×)即将Luciferase试剂盒(Promega，USA)中(5×)的裂解液用水稀释，根据用量新鲜配制。
F.取20μl/孔细胞裂解液铺在96孔磷光板上。
G.将融化后的LA缓冲液(Luciferase Assay Buffer，Promega Cooperation,USA)加入LA底物(Luciferase Assay Substrate，Promega Cooperation,USA)中混匀，加40μl/孔于96孔磷光板中。
H.立即在酶标仪上检测发光。实验的阴性对照为单一TZM-bl细胞的化学发光信号，用Min表示；阳性对照为无样品抑制剂条件下以1:3浓度混合的TZM-bl细胞和HL2/3细胞，用Max表示；测定值为某一样品在某一浓度下的信号值，用X示；细胞融合率＝(X-Min)/(Max-Min)*100％。
按照上述方法，活性测定结果见下面的表2。
表2
Figure BDA0000707056420000201
Figure BDA0000707056420000211
注：1.螺旋度值是在222nm处的测量值，Uni：deg*m2dmol-1，100％α螺旋度的数值为-33000。
2.T20,C34是C肽融合抑制剂，作为细胞融合活性实验对照。其中，T20是已上市药物，C34是实验室中活性较好且稳定的融合抑制剂。
表中的数据表明，交联后的N肽活性得到了明显提高，最好的活性达到了低纳摩尔(nM)水平。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
Figure IDA0000707056510000011
Figure IDA0000707056510000021
Figure IDA0000707056510000031
Figure IDA0000707056510000041
Figure IDA0000707056510000051
Figure IDA0000707056510000061
Figure IDA0000707056510000071
Figure IDA0000707056510000081
Figure IDA0000707056510000091
Figure IDA0000707056510000101

Claims (9)

1.化合物或其无生理毒性的盐，其中所述化合物选自：
(2)(Ac-SGIVQKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(3)(Ac-SGIVQKIEEIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(4)(Ac-SGIVQKINNIERAIEEQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(12)(Ac-KIEEIVKKIHHIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(14)(Ac-KAEEIVKKQHHIEREIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(16)(Ac-KLEEIVKKQHHIEREIEKQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(20)(Ac-SEIVKKIHHIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(22)(Ac-SKIVEKIHHIERA IEAQQKL LQLTVWG IKQLQAR IL-NH2)3
(24)(Ac-SEIVRKIHHIERAIEAIQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(27)(Ac-SEIVKKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(29)(Ac-SKIVEKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(31)(Ac-SEIVRKINNIERAIEAQQKLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(34)(Ac-SEIVKKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(36)(Ac-SEIVQKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(41)(Ac-SGIVQKINNIERAIEAQQHLLQLTVWGIKELQARIL-NH2)3
(42)(Ac-SGIVQKIEEIERAIEEQQHLLQLTVWGIKQLQARIL-NH2)3
(43)(Ac-SGIVQKIEEIERAIEEQQHLLQLTVWGIKELQARIL-NH2)3，
其中所述化合物为三个括号内所示化合物通过两两共价交联形成的三聚体，
化合物(12)、(14)、(16)中，所述共价交联是在一个括号内所示化合物的第8位赖氨酸与另一个括号内所示化合物的第13位谷氨酸之间共价交联，形成酰胺键，
化合物(2)-(4)、(20)、(22)、(24)、(27)、(29)、(31)、(34)、(36)、(41)-(43)中，所述共价交联是在一个括号内所示化合物的第6位赖氨酸与另一个括号内所示化合物的第11位谷氨酸之间共价交联，形成酰胺键。
2.药物组合物，其含有至少一种权利要求1所述的化合物或其无生理毒性的盐。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其还含有药学上可接受的载体或赋形剂。
4.权利要求1所述的化合物或其无生理毒性的盐或者权利要求2所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗和/或辅助治疗HIV感染相关疾病的药物中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述HIV感染相关疾病是艾滋病。
6.权利要求1所述的化合物或其无生理毒性的盐或者权利要求2所述的药物组合物在制备用于抑制HIV与细胞融合的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述HIV为HIV-1。
8.一种在体外非治疗目的抑制HIV与细胞融合的方法，所述方法包括使用有效量的权利要求1所述的化合物或其无生理毒性的盐或者权利要求2所述的药物组合物的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述HIV为HIV-1。
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